JP2007530032A - 拮抗作用を有する枯草菌株を用いた植物病の防除方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 本発明による新規な枯草菌(Bacillus subtilis)EB120菌株は、オオムギうどん粉病、キュウリうどん粉病、トウガラシ炭疽病、イネいもち病、トマト灰色かび病、トマト疫病、及び小麦赤さび病を含む多様な植物病の防除のための強い拮抗作用を有するので、植物病の生物学的な防除に有用である。
【選択図】 図1
Description
新鮮なトウガラシの葉5gを0.1%トゥイーン(Tween)20が添加された2%NAOClに10秒間浸漬させてトウガラシの葉の表面を滅菌した。このように滅菌した葉に45mlの滅菌水を加えた後、乳棒と乳鉢ですって1mlを取り、蒸留水を用いて1:10、1:100及び1:1000にそれぞれ希釈した。各希釈液200μlを40μg/mlのシクロヘキシミド(cycloheximide)を含むトリプシン大豆寒天培地(tryptic soy agar medium)に散布した後、30℃でバクテリアコロニーが形成するまで培養した。培地からコロニーを取って新鮮な栄養寒天培地(nutrient agar medium)に接種し、3〜4回継代培養してバクテリアの菌株の単一コロニーを分離した。
実施例1で分離された細菌の菌株の同定は菌株の形態学的及び生化学的特性、並びに16S rDNA塩基配列解釈を用いて行った。
前記分離された菌株は、トリプシン大豆寒天培地上で薄く広がって育ち、単一コロニーの場合は小さな雪花状に形成される(図1)。前記分離された菌株はグラム染色反応及び水酸化カリウム(KOH)テストにおいて陽性反応を示すことから枯草菌属に属することがわかり、カタラーゼ(catalase)テスト及びオキシダーゼ(oxidase)テストにおいて陽性反応を示し、また内生胞子を形成し、澱粉及びカゼイン(casein)を加水分解した。
16S rDNAの塩基配列解釈の結果、分離された菌株が枯草菌の配列と99%の配列相同性を有する配列番号1の塩基配列を有することが分かった。
枯草菌EB120菌株(以下、“EB120”と称する)のトマト灰色かび病、トマト疫病、キュウリ炭疽病及びオオムギうどん粉病に対する防除活性を調べるために、EB120で対象植物を処理し、24時間後に植物病原菌を接種した。
EB120の防除活性物質の生産のための最適培地を選別するために、色々な培養培地を用いた培養実験を下記のように行った。
EB120をトリプシン大豆液体培地に接種した後、3日間30℃にて150rpmで振湯培養した。これを、蒸留水を用いて1:10、1:25、1:50、1:100及び1:200の比率で希釈した。各希釈溶液に250μg/mlのトゥイーン20を添加した後、7葉期のキュウリの葉面を噴霧処理した。
EB120が生産する物質の防除活性を測定するために、EB120培養液、これの酢酸エチル及びブタノール抽出物における植物病に対する防除効果を下記のように実験した。
EB120が生産する物質の温度に対する安定性を調査するために、培養上澄液とこれのブタノール抽出物を様々な温度、すなわち4℃、常温、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、100℃、及び121℃で予め処理した後、病原菌を接種することにより病原菌株の菌糸伸張阻害程度を調査した。
Claims (6)
- 植物病に対して拮抗作用を有する枯草菌(Bacillus subtilis)EB120菌株(KCTC 10578BP)の生物学的純粋培養液。
- 枯草菌 EB120菌株(KCTC 10578BP)又はこれから由来した物質を有効成分として含むことを特徴とする植物病防除用の微生物製剤。
- 前記物質が、枯草菌EB120菌株の培養液全体と、前記培養液のブタノール抽出物と、枯草菌EB120菌株の胞子、からなる群から選択されることを特徴とする請求項2記載の植物病防除用の微生物製剤。
- 前記植物病が、オオムギうどん粉病、キュウリうどん粉病、トウガラシ炭疽病、イネいもち病、トマト灰色かび病、トマト疫病、及び小麦赤さび病からなる群から選択されることを特徴とする請求項2記載の植物病防除用の微生物製剤。
- 枯草菌 EB120菌株(KCTC 10578BP)又は請求項2の微生物製剤を効果的な量で植物に適用する段階を含むことを特徴とする植物病の防除方法。
- 前記植物病が、オオムギうどん粉病、キュウリうどん粉病、トウガラシ炭疽病、イネいもち病、トマト灰色かび病、トマト疫病、及び小麦赤さび病からなる群から選択されることを特徴とする請求項5記載の植物病の防除方法。
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