CN112358991B - 一种类芽孢杆菌cl01及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种类芽孢杆菌CL01及其应用，所述类芽孢杆菌CL01已于2020年6月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏编号为CGMCCNo.20161。该菌株抑菌谱广，抑菌能力强，不仅对梨炭疽病菌、梨黑斑病菌、梨轮纹病菌、梨腐烂病菌等梨树上常见病原真菌具有强抑制作用，同时对水稻纹枯病菌、番茄灰霉病菌、油菜菌核病菌、马铃薯晚疫病菌等植物病原菌具有强拮抗作用。利用本发明菌株制备的生防菌剂对梨树上的果实和叶部真菌病害均表现出较高的生防效果。可以替代或减少化学农药使用，提高食品和生态环境安全，具有较好的经济和社会效益，在植物病害的生物防治中具有非常广泛的应用前景。

Description

一种类芽孢杆菌CL01及其应用

技术领域

本发明属于微生物农药技术领域，具体涉及一种类芽孢杆菌CL01及其应用。

背景技术

梨果产业是我国最主要的水果产业之一，在农业经济中占有重要地位，我国梨产量约占世界总产量的2/3，出口量占世界总出口量的1/6。梨真菌病害的发生及危害是限制我国梨产业健康发展的重要因子之一。危害梨的病害主要是真菌性病害，不但在生产期危害枝、茎、叶、果实，而且在果实成熟采摘期及储运期间有真菌引起的果实腐烂更为严重，已成为不容忽视的减产因素。梨树为多年生作物，病原真菌能够以分生孢子和菌丝体的形式在果园中越冬，逐年累积、循环发病，造成田间存在丰富的病原菌，特别是梨炭疽病、梨黑斑病、梨轮纹病、梨腐烂病等真菌病害的发生危害日益严重，导致树势衰退，产量下降，且大幅降低了梨果的商品率，造成了巨大的经济损失。

由于缺乏高品质的广谱抗病品种，目前梨树病害的防治主要依赖化学农药。但是，化学农药的长期不合理使用导致病原菌抗药性逐渐增强，施用剂量盲目增加，防治效果不理想。在日趋严格的农药残留检测标准下，化学农药的残留不仅降低了梨果的经济价值，给果农带来损失，而且残留的农药对食品安全和生态环境也构成了严重的威胁。此外，由于开发安全、高效化学杀菌剂的成本高昂，投资风险巨大，近年来，登记用于防治梨树真菌病害的新型化学杀菌剂很少。目前在梨树上登记施用的杀菌剂主要是防治梨树黑星病，防治靶标单一，防病谱不能有效覆盖为害梨树的主要真菌病害。

近年来，微生物杀菌剂因具有相对安全、无残留、环境友好等优点已经越来越被重视，成为国际绿色农药发展的重点。芽孢杆菌(Bacillus spp.)和类芽孢杆菌(Paenibacillus spp.)，广泛分布于土壤、植物表面、水体、农业废弃物等各种生境中，具有广谱的抗菌活性和较强的逆境适应性，被认为是最具有应用开发潜力的有益微生物之一。根据中国农药信息网的农药登记数据，目前我国已登记的有效成分包含芽孢杆菌和类芽孢杆菌的杀菌剂已达138个。但是通常来源不同的菌株在生物学特性、抗菌谱等方面存在明显差异，具有菌株特异性。发掘能够对梨常见真菌病害具有与防治效果的生防菌株对于开发新的微生物杀菌剂具有重要的意义和价值。

发明内容

本发明的目的是提供一株对梨主要病原真菌具有显著拮抗效果的类芽孢杆菌及其在防治梨真菌病害中的应用。本发明所提供的类芽孢杆菌菌株CL01具有生长速度快、拮抗活性强、生防效果好、抑菌谱广、生态安全等特点。

为解决上述问题，本发明采取以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一株类芽孢杆菌(Paenibacillus ottowii)CL01，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏日期为2020年6月28日，菌种保藏编号为CGMCC No.20161。所述类芽孢杆菌CL01分离自梨树根际土壤，基于实施例1所述的形态特征、生理生化特征和分子鉴定结果，我们将CL01鉴定为类芽孢杆菌(Paenibacillusottowii)。

第二方面，本发明还提供了由第一方面所述的类芽孢杆菌CL01制备的发酵产物，本发明所述的发酵产物可以为本领域常规的任何一种发酵后的产物形式，例如包括但不限于具体可以是含有菌株的发酵液、发酵液无菌滤液、发酵液抑菌活性物质粗提物等。在本发明的一些实施例中，本发明所述的发酵液抑菌活性物质粗提物是指将发酵液与正丁醇按照体积比(0.8～1.2)：1混匀，摇动萃取，取有机层，干燥后即得发酵液抑菌活性物质粗提物。

本发明还提供含有所述类芽孢杆菌CL01的菌悬液，可以是离心获得的菌体按照本领域常规方法和常规试剂重悬获得的溶液。

在一些实施例中，本发明还提供一种生防菌剂，所述的生防菌剂包括类芽孢杆菌CL01或含有其的菌悬液或其制备的发酵产物，辅以本领域允许的助剂。

本发明提供的菌株CL01可以按照本领域常规的方法进行发酵，在一些具体的实施例中，本发明提供一种具体的优选的摇瓶发酵培养基，包括：牛肉膏2.5～3.5g/L、蛋白胨4.5～5.5g/L、蔗糖9～11g/L、酵母提取物0.5～1.5g/L，初始pH为5.8～7.5，优选初始pH为5.8～6.2。为维持发酵液中活菌数量，降低紫外线对其产生的杀伤作用，延长液体制剂贮藏期，使液体制剂均匀、稀释，还可考虑在液体制剂中加入紫外防护剂、防腐剂、表面活性剂等本领域常规的助剂。

在本发明的一些实施例中，本发明所述的发酵液，菌体浓度为1.5×10⁹～1.5×10¹⁰cfu/mL。

第三方面，本发明还提供了所述类芽孢杆菌CL01、或其菌悬液或其发酵产物或所述的生防菌剂在防治植物病害中的应用。

在一些实施例中，本发明所述的植物病害为梨的真菌病害，在一些更具体的实施例中，梨的真菌病害为梨炭疽病菌、梨黑斑病菌、梨轮纹病菌或梨腐烂病菌引起的病害。

在一些实施例中，本发明所述的植物病害为水稻病害，在一些更具体的实施例中，水稻病害为水稻纹枯病菌引起的病害。

在一些实施例中，本发明所述的植物病害为马铃薯病害，在一些更具体的实施例中，马铃薯病害为马铃薯晚疫病菌引起的病害。

在一些实施例中，本发明所述的植物病害为番茄病害，在一些更具体的实施例中，番茄病害为番茄灰霉病菌引起的病害。

在一些实施例中，本发明所述的植物病害为油菜病害，在一些更具体的实施例中，油菜病害为油菜菌核病菌引起的病害。

本发明利用菌株CL01的发酵液进行了平板对峙试验、分生孢子萌发试验、室内果实接种试验和田间防效试验，CL01发酵液均表现出良好的拮抗作用和防治效果。

本发明用于防控时可以选用有效量的浓度进行，例如在一种实施例中，当用于梨的真菌病害时所用发酵液可以为1.5×10⁶～1.5×10⁹cfu/mL。

第四方面，本发明还提供了所述类芽孢杆菌CL01、或其菌悬液或其发酵产物或所述的生防菌剂在拮抗植物病菌中的应用。

在一些实施例中，本发明所述的植物病菌为梨的病害真菌，在一些更具体的实施例中，梨的病害真菌为梨炭疽病菌、梨黑斑病菌、梨轮纹病菌或梨腐烂病菌。

在一些实施例中，本发明所述的植物病菌为水稻病菌，在一些更具体的实施例中，水稻病菌为水稻纹枯病菌。

在一些实施例中，本发明所述的植物病菌为马铃薯病菌，在一些更具体的实施例中，马铃薯病菌为马铃薯晚疫病菌。

在一些实施例中，本发明所述的植物病菌为番茄病菌，在一些更具体的实施例中，番茄病菌为番茄灰霉病菌。

在一些实施例中，本发明所述的植物病菌为油菜病菌，在一些更具体的实施例中，油菜病菌为油菜菌核病菌。

本发明有以下几方面的优点：

本发明提供的类芽孢杆菌CL01是一株新发现的类芽孢杆菌生防资源，对梨主要病原真菌均具有较高的拮抗活性，利用本发明菌株制备的生防菌剂处理梨果实和叶片后对梨主要病原真菌均表现较好的生防效果，可以用于防治梨主要真菌病害。本发明的生防菌株CL01还对其他作物的常见病原菌如水稻纹枯病菌、马铃薯晚疫病菌、番茄灰霉病菌、油菜菌核病菌具有较好的拮抗活性，抑菌谱广、抑菌活性持久。此外，本发明的类芽孢杆菌CL01菌株分离自健康梨树根际土壤，无生态毒性、安全性高、抑菌谱广、抑菌活性稳定且培养简单。本发明菌剂可以替代或减少化学农药使用，提高食品和生态环境安全，具有较好的经济和社会效益，在植物病害的生物防治中具有非常广泛的应用前景。

附图说明

图1为本发明类芽孢杆菌CL01的菌落、菌体形态以及革兰氏染色结果；

图2为类芽孢杆菌CL01基于16S rDNA序列构建的系统发育树分析；

图3为类芽孢杆菌CL01在不同初始pH值的NB培养基中的生长情况；

图4为类芽孢杆菌CL01对植物病原真菌的平板拮抗效果；

图5为类芽孢杆菌CL01对果生炭疽菌孢子萌发的抑制效果；

图6为类芽孢杆菌CL01发酵液和抑菌活性物质粗提物对梨炭疽病斑扩展的抑制效果。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步的详细说明，但本发明绝非仅限于这些实施例。以下实施例仅用于阐述本发明，不能理解为对本发明范围的限制。凡在本发明的实质和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包括在本发明的保护范围之内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

如无特殊说明，本发明所采用的各种材料和试剂均能通过商业方式获得。同样，所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

如无特殊说明，本发明实施例所用的病菌梨炭疽病菌、梨黑斑病菌、梨轮纹病菌、梨腐烂病菌、水稻纹枯病菌、马铃薯晚疫病菌、番茄灰霉病菌、油菜菌核病菌均为本研究室保存菌株，其他单位或个人可以向本研究室索取以上8个病原菌菌株。

实施例1类芽孢杆菌CL01的分离与鉴定

一、类芽孢杆菌CL01的分离

从江苏省句容市梨真菌病害发病严重的梨园中的健康梨树根际土壤采集土样，将10g土样放入装有无菌水和灭菌玻璃珠的50mL三角瓶中，200rpm/min振荡30min；取振荡后的悬液做系列梯度稀释，10³、10⁴倍稀释的菌悬液各吸取200μL均匀涂布在NA培养基平板上，置28℃培养48h后，选取菌落形态不同的单菌落用划线转接的方法进行纯化，将纯化后的菌株转接到NA斜面培养基上，4℃保存备用，拮抗效果好的菌株进一步用20％的甘油作为保护剂，悬浮后冻存于-70℃超低温冰箱中。将分离纯化所得的菌株，其中一个拮抗效果较好的菌株命名为CL01。

二、类芽孢杆菌CL01的鉴定

1)形态特征观察和生理生化特征测定

参考《伯杰氏系统细菌学手册》(Garrity,2001)和《一般细菌学常用鉴定方法》(东秀珠等，2001)，按照常规方法进行。

类芽孢杆菌CL01的形态学特征如下：在NA平板上形成圆形乳白色菌落，菌落表面隆起、边缘整齐，中间乳白色边缘半透明，挑起有粘性(图1A)。CL01菌体为杆状，革兰氏染色不定(gram variable)(图1B)，长3-6μm，宽0.6-0.8μm，周生鞭毛(图1C)。

类芽孢杆菌CL01的生理生化特征：测定结果见表1。

表1：类芽孢杆菌CL01的生理生化特征

测试项目	结果	测试项目	结果
				接触酶试验	+	氧化酶试验	-
淀粉水解	+	甲基红	-
				V-P试验	+	明胶液化	+
硝酸盐还原	+	硫化氢试验	-
				柠檬酸盐利用	+	吲哚试验	-
1％NaCl	+	2％NaCl	+
				5％NaCl	-	10％NaCl	-

注：“+”为阳性反应；“-”为阴性反应。

2)类芽孢杆菌CL01的分子鉴定

取NA培养基上的CL01单菌落，用NB液体培养基180r/min、28℃条件下振荡培养12h，离心收集菌体。使用细菌基因组DNA提取试剂盒(购自北京天根生化科技有限公司货号：DP302-02)按照操作说明书提取菌株CL01的基因组DNA。采用16S rDNA通用引物27F：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′和1492R：5′-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′扩增CL01的16S rDNA序列。PCR反应体系(50μL)：ddH₂O 21μL，2×Es Taq MasterMix(Dye)25μL，27F和1492R引物各1μL，模板2μL。PCR反应程序为：94℃预变性4min；94℃变性1min，50℃退火1min，72℃复性1min，重复35个循环，72℃下延伸10min。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测无误后送至测序公司测序。CL01的16S rDNA基因序列如SEQ ID NO.1所示。测序所的序列在GenBank中进行BLASTA序列比对分析，菌株CL01的序列与类芽孢杆菌Paenibacillus ottowii模式菌株MS2379^T的16S rDNA基因序列一致性达到99.35％。选取比对结果中相似性高的标准菌株的序列，使用MEGA 7.0.26软件构建系统发育树，如图2所示，CL01与类芽孢杆菌P.ottowii亲缘关系最近，聚成一个分支。

基于上述菌落形态、菌体形态、理化实验分析和分子鉴定结果，生防菌株CL01属于类芽孢杆菌(Paenibacillus ottowii)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏日期为2020年6月28日，菌种保藏编号为CGMCC No.20161。

实施例2：类芽孢杆菌CL01最适生长pH值的测定。

取出保存在-70℃超低温冰箱甘油管中的CL01菌株，划线接种到NA固体平板上，28℃条件下培养24h；利用灭菌牙签挑取CL01单菌落接种到含有50mL NB液体培养基的250mL锥形瓶中，180r/min、28℃条件下培养16h，作为种子液；将种子液按照1％(v/v)的比例分别接种到初始pH值为3.0、4.0、5.0、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、9.0的50mL NB液体培养基中，180r/min、28℃条件下培养20h后紫外可见分光光度计测定细菌悬浮液不同初始pH值下在600nm波长处的光密度值。结果如图3所示，CL01在初始pH值为在4.0～9.0之间的范围内都能够生长，初始pH值范围在6.0～7.5之间时在600nm波长处具有较高的的光密度值，在中性偏酸的初始pH值条件下菌株CL01生长的较好，当初始pH值为6.0时，菌液在600nm波长处的光密度值最大，可见菌株CL01的最适生长pH值为6.0。

实施例3：基于类芽孢杆菌CL01的微生物菌剂的制备

用于防治梨主要真菌病害的微生物菌剂包括类芽孢杆菌CL01的发酵液、发酵液滤液和发酵液抑菌活性物质粗提物，制备步骤如下：

1)活化菌株：取本发明类芽孢杆菌CL01的甘油菌种，划线接种至NA培养基平板上，在28℃条件下培养24h；

2)制备种子液：挑取一个NA平板上的类芽孢杆菌CL01单菌落接种NB液体培养基中，28℃下振荡培养16～24h，振荡频率为150r/min～200r/min；

3)制备发酵液：按体积比为2％的接种量将步骤2)中制备的菌株CL01种子液接种于NB液体培养液中，装料量为200～400mL/1000mL，培养基初始pH值为6.2-6.8，发酵温度为28℃，振荡频率为150～180r/min，发酵时间为48-72h，经平板涂布法计数，制得的CL01发酵液中菌体浓度大于1.15×10¹⁰cfu/mL。为维持发酵液中活菌数量，降低紫外线对其产生的杀伤作用，延长液体制剂贮藏期，使液体制剂均匀、稀释，可考虑在液体制剂中加入紫外防护剂、防腐剂、表面活性剂等本领域常规的助剂；

4)制备发酵液滤液：将上述步骤(3)制备得到的CL01发酵液在6000r/min下离心离心10min～15min，取上清，利用细菌过滤器过滤，得到无菌发酵滤液；

5)制备发酵液滤液活性物质粗提物：将上述步骤(3)制备得到的CL01发酵液与正丁醇按照体积比为1:1进行混匀，摇动萃取30min。离心或者分液漏斗静止分层后吸取有机相层，利用旋转蒸发仪蒸干有机相，称重后加入甲醇进行溶解得到抑菌活性物质浓度为50mg/mL的粗提物。

实施例4：类芽孢杆菌CL01的抑菌谱测定

采用平板对峙法测定CL01对菌株CL01发酵液对植物病原菌的拮抗效果。将梨炭疽病菌、梨黑斑病菌、梨轮纹病菌、梨腐烂病菌、水稻纹枯病菌、马铃薯晚疫病菌、番茄灰霉病菌、油菜菌核病菌分别接种于PDA上进行活化，置于28℃培养箱倒置培养3天后备用。用直径为5mm的打孔器在植物病原菌菌落边缘处打取菌饼，接种于新的PDA平板中央。用移液器吸取实施例3所述方法制备的CL01发酵液滴加在接种菌饼的3个侧面距培养皿边缘为培养皿直径的1/4处，然后将培养皿放入28℃培养箱中。培养4天后，拍照观察抑菌效果并测量抑菌带宽度。抑菌效果如图4A所示，抑菌带宽如图4B所示。类芽孢杆菌CL01对梨树四种病原真菌均具有较好的拮抗效果，抑菌带宽均在6mm以上。此外，CL01还对其他作物常见病原菌水稻纹枯病菌、马铃薯晚疫病菌、番茄灰霉病菌、油菜菌核病菌表现出拮抗活性，抑菌带宽也都在4mm以上。说明菌株CL01具有抑菌活性强、抑菌谱广的优点。

实施例5：类芽孢杆菌CL01对梨炭疽病菌分生孢子萌发的抑制作用

用PDA摇培梨炭疽病菌的菌饼诱导其产生分生孢子。摇培3天后用无菌滤布过滤，离心收集分生孢子备用。将分生孢子和CL01菌体加入M3S培养基中，分生孢子浓度调为2×10⁵个/mL，吸取15μL分生孢子悬浮液滴加在载玻片上，再吸取如实施例3所述方法制备的CL01发酵液15μL滴加入孢子悬浮液液滴吹吸混匀后将载玻片放入铺有吸水滤纸的保鲜盒中，于28℃保湿培养。以不加生防菌和加入无生防作用的大肠杆菌(Escherichia coli)的分生孢子悬浮液作为两组对照。分别在孵育后4h，8h，12h，24h用光学显微镜观察拍照并统计孢子萌发率。如图5所示，与对照相比CL01发酵液处理后的分生孢子不仅萌发率显著下降，而且少数能够萌发的分生孢子萌发后形成的芽管的生长也明显受到了抑制。试验结果说明菌株CL01能够有效的抑制梨炭疽病菌分生孢子的萌发，分生孢子是梨炭疽病病害循环中的初侵染源和再侵染源，分生孢子随风雨扩散传播，容易引发病害传播和流行。本发明所述的菌株CL01能够有效抑制分生孢子的萌发，能够减少梨炭疽病的再发生和循环流行。

实施例6：类芽孢杆菌CL01的发酵液和抑菌活性物质粗提物对梨炭疽病斑在果实上扩展的抑制作用

取新鲜的香梨，用水冲洗干净，用70％酒精进行表面消毒后创伤接种梨炭疽病菌分生孢子液，放置过夜后将实施例3所述方法制备的发酵液和抑菌活性物质粗提物分别用小喷壶均匀喷施在果实表面，然后继续放入盛水保湿的保鲜盒中室温条件下放置5天，观察病斑扩展大小并测量病斑直径。CL01发酵液处理组以喷施等体积无菌水作为对照，抑菌活性物质粗提物处理组以喷施等体积甲醇作为对照。试验结果如图6所示，无菌水和甲醇对照组处理后的果实上梨炭疽病斑直径均在2cm左右，而CL01发酵液处理后的果实上梨炭疽病斑的大小为1.3cm左右，而用CL01的抑菌活性物质粗提物处理后的果实梨炭疽病斑大小仅为0.8cm左右。试验结果说明类芽孢杆菌CL01的发酵液和抑菌活性物质粗提物均能够有效的抑制梨炭疽病斑在果实上的扩展。

实施例7：类芽孢杆菌CL01发酵液对梨主要真菌病害的田间防治

在江苏省句容市选取一个六年生翠冠梨园，在梨真菌病害高发的5月中旬至六月中旬开展田间试验。划定实验小区，实施例3制备的CL01发酵液稀释100倍处理组、稀释150倍处理组和清水对照组，每组处理5棵梨树，采用叶面喷雾的方式进行，每周喷施1次，连续喷施4次。在最后一次喷施结束后第10天，调查梨真菌病害在叶片上的发病情况。试验结果如表2所示，使用CL01发酵液处理后的梨树梨炭疽病和梨黑斑病的病情指数均显著低于清水对照组。CL01发酵液100倍稀释液对梨炭疽病的防效可达到72.3％；对梨黑斑病的防效可达到65.8％。CL01发酵液150倍稀释液对梨炭疽病的防效可达到60.3％；对梨黑斑病的防效可达到57.7％。试验结果说明类芽孢杆菌CL01发酵液制备的生防菌剂对梨真菌病害表现出了较好田间防效，可以用于防治梨真菌病害。

表2 CL01生防菌剂防控梨梨炭疽病和梨黑斑病的田间试验结果

序列表

<110> 江苏省农业科学院

<120> 一种类芽孢杆菌CL01及其应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1377

<212> DNA

<213> 类芽孢杆菌(Paenibacillus ottowii)

<400> 1

gaagcttgct tctaacgaac ctagcggcgg acgggtgagt aacacgtagg caacctgccc 60

acaagacagg gataactacc ggaaacggta gctaataccc gatacatcct tttcctgcat 120

gggagaagga ggaaagacgg agcaatctgt cacttgtgga tgggcctgcg gcgcattagc 180

tagttggtgg ggtaaaggcc taccaaggcg acgatgcgta gccgacctga gagggtgatc 240

ggccacactg ggactgagac acggcccaga ctcctacggg aggcagcagt agggaatctt 300

ccgcaatggg cgaaagcctg acggagcaac gccgcgtgag tgatgaaggt tttcggatcg 360

taaagctctg ttgccaggga agaacgtctt gtagagtaac tgctacaaga gtgacggtac 420

ctgagaagaa agccccggct aactacgtgc cagcagccgc ggtaatacgt agggggcaag 480

cgttgtccgg aattattggg cgtaaagcgc gcgcaggcgg ctctttaagt ctggtgttta 540

atcccgaggc tcaacttcgg gtcgcactgg aaactgggga gcttgagtgc agaagaggag 600

agtggaattc cacgtgtagc ggtgaaatgc gtagagatgt ggaggaacac cagtggcgaa 660

ggcgactctc tgggctgtaa ctgacgctga ggcgcgaaag cgtggggagc aaacaggatt 720

agataccctg gtagtccacg ccgtaaacga tgaatgctag gtgttagggg tttcgatacc 780

cttggtgccg aagttaacac attaagcatt ccgcctgggg agtacggtcg caagactgaa 840

actcaaagga attgacgggg acccgcacaa gcagtggagt atgtggttta attcgaagca 900

acgcgaagaa ccttaccagg tcttgacatc cctctgaccg ctgtagagat atggctttcc 960

ttcgggacag aggagacagg tggtgcatgg ttgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg 1020

gttaagtccc gcaacgagcg caacccttat gcttagttgc cagcaggtca agctgggcac 1080

tctaagcaga ctgccggtga caaaccggag gaaggtgggg atgacgtcaa atcatcatgc 1140

cccttatgac ctgggctaca cacgtactac aatggccggt acaacgggaa gcgaaggagc 1200

gatctggagc gaatcctaga aaagccggtc tcagttcgga ttgcaggctg caactcgcct 1260

gcatgaagtc ggaattgcta gtaatcgcgg atcagcatgc cgcggtgaat acgttcccgg 1320

gtcttgtaca caccgcccgt cacaccacga gagtttacaa cacccgaagt cggtggg 1377

Claims (19)

1.一种类芽孢杆菌（Paenibacillus ottowii）CL01，其特征在于，菌种保藏编号为CGMCC No.20161。

2.一种如权利要求1所述的类芽孢杆菌CL01的发酵产物。

3.包含权利要求1所述的类芽孢杆菌CL01的发酵液、菌悬液或无菌发酵滤液。

4.权利要求1所述的类芽孢杆菌CL01的发酵液抑菌活性物质粗提物，所述粗提物为将发酵液与正丁醇按照体积比（0.8～1.2）：1混匀，摇动萃取，取有机层，干燥后即得发酵液抑菌活性物质粗提物。

5.一种生防菌剂，其特征在于，所述的生防菌剂包括权利要求1所述的类芽孢杆菌CL01、权利要求2所述的发酵产物、权利要求3所述的发酵液、菌悬液或无菌发酵滤液或权利要求4所述的抑菌活性物质粗提物，辅以本领域允许的助剂。

6.权利要求1所述的类芽孢杆菌CL01、权利要求2所述的发酵产物、权利要求3所述的发酵液、菌悬液或无菌发酵滤液、权利要求4所述的抑菌活性物质粗提物或权利要求5所述的生防菌剂在防治植物病害中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述植物病害选自梨的真菌病害、水稻病害、马铃薯病害、番茄病害或油菜病害。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，梨的真菌病害为梨炭疽病菌、梨黑斑病菌、梨轮纹病菌或梨腐烂病菌引起的病害。

9.权利要求7所述的应用，其特征在于，水稻病害为水稻纹枯病菌引起的病害。

10.权利要求7所述的应用，其特征在于，马铃薯病害为马铃薯晚疫病菌引起的病害。

11.权利要求7所述的应用，其特征在于，番茄病害为番茄灰霉病菌引起的病害。

12.权利要求7所述的应用，其特征在于，油菜病害为油菜菌核病菌引起的病害。

13.权利要求1所述的类芽孢杆菌CL01、权利要求2所述的发酵产物、权利要求3所述的发酵液、菌悬液或无菌发酵滤液、权利要求4所述的抑菌活性物质粗提物或权利要求5所述的生防菌剂在拮抗植物病菌中的应用。

14.根据权利要求13所述的应用，其特征在于，所述的植物病菌选自梨的真菌病害、水稻病害、马铃薯病害、番茄病害或油菜病害。

15.根据权利要求14所述的应用，其特征在于，梨的真菌病害为梨炭疽病菌、梨黑斑病菌、梨轮纹病菌或梨腐烂病菌引起的病害。

16.权利要求14所述的应用，其特征在于，水稻病害为水稻纹枯病菌引起的病害。

17.权利要求14所述的应用，其特征在于，马铃薯病害为马铃薯晚疫病菌引起的病害。

18.权利要求14所述的应用，其特征在于，番茄病害为番茄灰霉病菌引起的病害。

19.权利要求14所述的应用，其特征在于，油菜病害为油菜菌核病菌引起的病害。

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