CN111893050B - 一株库德里阿兹威毕赤酵母及其在农产品产后病害防治中的应用 - Google Patents

一株库德里阿兹威毕赤酵母及其在农产品产后病害防治中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一株库德里阿兹威毕赤酵母及其在农产品产后病害防治中的应用，属于微生物防治技术领域。经研究发现，其对黄曲霉、青霉、禾谷镰刀菌和大肠杆菌等均具有良好的拮抗作用，其生物安全度高，与生防细菌相比较，不产生抗生素，对环境的负面影响较小；与有丝真菌类生防菌相比，不产生致敏孢子；同时生长要求简单，非常适合大规模发酵生产，不会给环境及生态造成压力，表明该菌株在农产品产后病害的生物防治领域具有广阔的应用前景。

Description

一株库德里阿兹威毕赤酵母及其在农产品产后病害防治中的 应用
技术领域
本发明属于微生物防治技术领域，具体涉及一株库德里阿兹威毕赤酵母及其在农产品产后病害防治中的应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
农产品产后储藏、流通过程中因病菌侵染导致的腐烂损失巨大，是全球关注问题。据报道，在发达国家有10％-30％的新鲜农产品由于病害导致腐烂，而在缺乏贮运冷藏设备的发展中国家，采后腐烂率则高达40％-50％。研究表明，农产品腐烂主要受到病原微生物的侵染，如青霉属(Penicillium spp.)、曲霉属(Aspergillus spp.)、镰刀菌属(Fusariumspp.)等。
目前最常用的控制农产品产后后腐烂的方法是低温和化学杀菌剂处理。近年来虽然冷藏技术在我国得到了广泛的发展和应用，但是在低温条件下仍有相当数量的致病菌可以生长从而引起腐烂。化学杀菌剂虽然防治病害可以起到立竿见影的效果，但是在杀死病原菌的同时化学杀菌剂残留会对人体健康造成影响，对环境造成污染。美国科学院的一份报告显示，在用于处理食品的杀菌剂中，60％有致癌风险。
根据调查，国内应用于农产品产后病害防治的化学药剂主要是SO2和噻苯咪唑(Thiabendazole)；而SO2的广泛使用常常会带来环境污染，而且在常距离运输和长期的农产品贮藏中，其杀菌效果会随时间而迅速丧失；噻苯咪唑虽然对农产品产后真菌病害有较好的防治效果，但对病原细菌没有效果，而且其使用后残效期较长，不易降解，会影响一些高端农产品的对外出口，更重要的是，噻苯咪唑的大范围应用容易使得一些病原菌产生抗药性。因此，亟需开发和应用新型农产品产后病害杀菌剂。
从国内外文献中可知当前以有效微生物取代化学杀菌剂用于农产品产后病害的防治已显示出巨大的应用前景，生物杀菌剂相对于化学农药而言有着天然优势，避免了化学农药的药物残留、环境污染、植物抗药性等问题，而且低毒、环保、长效且自然界生态兼容性好。目前，国内生物农药开发主要集中在Bt杀虫剂、农用抗生素、细菌源生防制剂等几个方面，防治对象多集中于大田作物病害。但是针对农产品产后病害，尤其是农产品产后病害防治方面，生防应用研究进行的相对较少，且目前国内还没有能够用于农产品产后病害防治的生防菌剂产品。与大田作物病害生防菌剂以及土传病害生防菌剂的研发不同，对于农产品产后病害生防菌菌剂的开发和应用有着更高的安全要求，因为不同于大田作物，农产品采摘或者收获之后不需要加工或者仅经过简单加工，就被食用。较之产抗生素类细菌和有丝真菌类生防菌，以类酵母菌或酵母菌为主体开发的杀菌剂在防治农产品产后病害上，显得更为安全、环保。
发明内容
基于上述现有技术的不足，本发明提供一株库德里阿兹威毕赤酵母及其在农产品产后病害防治中的应用，经研究发现，其对黄曲霉、青霉、禾谷镰刀菌和大肠杆菌等均具有良好的拮抗作用，从而为农产品产后生物防治提供了新的菌种资源，因此具有良好的实际应用之价值。
为实现上述技术目的，本发明涉及以下技术方案：
本发明的一个方面，提供一株库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)F，该菌株已于2020年6月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，其生物保藏号为CGMCC No.20007。
所述库德里阿兹威毕赤酵母F的代谢物也属于本发明的保护范围。
本发明的第二个方面，提供一种微生物菌剂，其含有库德里阿兹威毕赤酵母F和/或含库德里阿兹威毕赤酵母F的代谢物。
上述微生物菌剂具体可以是病原菌抑制剂或病害抑制剂。
上述病原菌抑制剂的活性成分可以是库德里阿兹威毕赤酵母F和/或库德里阿兹威毕赤酵母F的代谢物，上述病原菌抑制剂的活性成分还可含有其他生物成分或非生物成分，上述病原菌抑制剂的其他活性成分本领域技术人员可根据对病原菌的抑制效果确定。
上述病害抑制剂的活性成分可以是库德里阿兹威毕赤酵母F和/或库德里阿兹威毕赤酵母F的代谢物，上述病害抑制剂的活性成分还可含有其他生物成分或非生物成分，上述病害抑制剂的其他活性成分本领域技术人员可根据对病害的抑制效果确定。
本发明的第三个方面，上述库德里阿兹威毕赤酵母F和/或库德里阿兹威毕赤酵母F的代谢物在如下1)-4)中全部或部分中的应用也是本发明保护的范围：
1)在抑制病原菌中的应用；
2)在制备病原菌抑制剂中的应用；
3)在制备病害抑制剂中的应用；
4)在抑制病害中的应用。
上文中，所述病原菌可以为下述全部或部分病原菌：黄曲霉(Aspergillusflavus)、灰绿青霉(Penicillium glaucum)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)和大肠杆菌(Escherichia coli)。
上文中，所述病害可以为下述全部或部分病害：黄曲霉病、青霉病、禾谷镰刀菌病和大肠杆菌引起的病害。
所述病害可以是农产品病害，所述农产品具体可以是粮食、水果或蔬菜，例如小麦、大麦、玉米、花生、大豆、葡萄、柑橘、西瓜、西红柿、茄子、萝卜、豇豆、白菜等。
本发明的第四个方面，提供一种生物农药，所述生物农药其活性成分包括上述库德里阿兹威毕赤酵母F、上述库德里阿兹威毕赤酵母F的代谢物和/或上述微生物菌剂。
本发明的第五个方面，提供一种农产品产后杀菌剂或保鲜剂，所述农产品杀菌剂或保鲜剂其活性成分包括上述库德里阿兹威毕赤酵母F、上述库德里阿兹威毕赤酵母F的代谢物和/或上述微生物菌剂。
本发明的第六个方面，提供一种农产品产后病害防治的方法，所述方法包括向农产品施用上述库德里阿兹威毕赤酵母F、上述库德里阿兹威毕赤酵母F的代谢物、上述微生物菌剂、上述生物农药和/或上述农产品产后杀菌剂或保鲜剂。
所述农产品具体可以是粮食、水果或蔬菜，例如小麦、大麦、玉米、花生、大豆、葡萄、柑橘、西瓜、西红柿、茄子、萝卜、豇豆、白菜等。
上述一个或多个技术方案的有益技术效果：
上述技术方案中使用的库德里阿兹威毕赤酵母作为生物杀菌抑菌剂具有独特的优势，其生物安全度高，与生防细菌相比较，不产生抗生素，对环境的负面影响较小；与有丝真菌类生防菌相比，不产生致敏孢子；同时生长要求简单，非常适合大规模发酵生产，不会给环境及生态造成压力，表明该菌株在农产品产后病害的生物防治领域具有广阔的应用前景。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为本发明实施例中库德里阿兹威毕赤酵母F平板和镜检图。
图2为本发明实施例中库德里阿兹威毕赤酵母F基因序列系统发育树图。
图3为本发明实施例中库德里阿兹威毕赤酵母F发酵上清液对大肠杆菌抑菌活性测定图，其中(A)为对照CK；(B)为库德里阿兹威毕赤酵母F；
图4为本发明实施例中库德里阿兹威毕赤酵母F发酵上清液对黄曲霉抑菌活性测定图，其中(A)为对照CK；(B)为库德里阿兹威毕赤酵母F；
图5为本发明实施例中库德里阿兹威毕赤酵母F发酵上清液对灰绿青霉抑菌活性测定图，其中(A)为对照CK；(B)为库德里阿兹威毕赤酵母F；
图6为本发明实施例中库德里阿兹威毕赤酵母F发酵上清液对禾谷镰刀菌抑菌活性测定图，其中(A)为对照CK；(B)为库德里阿兹威毕赤酵母F。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本发明使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
本发明的一个具体实施方式中，提供一株库德里阿兹威毕赤酵母(Pichiakudriavzevii)F，该菌株已于2020年6月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，其生物保藏号为CGMCC No.20007。
本发明的又一具体实施方式中，所述库德里阿兹威毕赤酵母F的代谢物也属于本发明的保护范围。
本发明的又一具体实施方式中，所述库德里阿兹威毕赤酵母F的代谢物可以从库德里阿兹威毕赤酵母的发酵液中获得。库德里阿兹威毕赤酵母的代谢产物具体可按照如下方法制备：将所述库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)F接种于液体发酵培养基中进行发酵培养，除去液体培养物(发酵液)中的库德里阿兹威毕赤酵母(Pichiakudriavzevii)F即得到库德里阿兹威毕赤酵母F的代谢物。
其中，所述液体发酵培养基优选为YPD培养基；
所述YPD培养基(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨20，酵母膏10，115℃灭菌20min。
发酵培养条件具体为：在28～33℃(优选为30℃)培养36～72h(优选为48h)，转速：120-180rpm(优选为150rpm)。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种微生物菌剂，其含有所述库德里阿兹威毕赤酵母F和/或含库德里阿兹威毕赤酵母F的代谢物。
本发明的又一具体实施方式中，上述微生物菌剂具体可以是病原菌抑制剂或病害抑制剂。
本发明的又一具体实施方式中，上述病原菌抑制剂的活性成分可以是库德里阿兹威毕赤酵母F和/或库德里阿兹威毕赤酵母F的代谢物，上述病原菌抑制剂的活性成分还可含有其他生物成分或非生物成分，上述病原菌抑制剂的其他活性成分本领域技术人员可根据对病原菌的抑制效果确定。
本发明的又一具体实施方式中，上述病害抑制剂的活性成分可以是库德里阿兹威毕赤酵母F和/或库德里阿兹威毕赤酵母F的代谢物，上述病害抑制剂的活性成分还可含有其他生物成分或非生物成分，上述病害抑制剂的其他活性成分本领域技术人员可根据对病害的抑制效果确定。
本发明的又一具体实施方式中，上述库德里阿兹威毕赤酵母F和/或库德里阿兹威毕赤酵母F的代谢物在如下1)-4)中全部或部分中的应用也是本发明保护的范围：
1)在抑制病原菌中的应用；
2)在制备病原菌抑制剂中的应用；
3)在制备病害抑制剂中的应用；
4)在抑制病害中的应用。
本发明的又一具体实施方式中，所述病原菌可以为下述全部或部分病原菌：黄曲霉(Aspergillus flavus)、灰绿青霉(Penicillium glaucum)、禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)和大肠杆菌(Escherichia coli)。
本发明的又一具体实施方式中，所述病害可以为下述全部或部分病害：黄曲霉病、青霉病、禾谷镰刀菌病和大肠杆菌引起的病害。
所述病害可以是农产品病害，所述农产品具体可以是粮食、水果或蔬菜，例如小麦、大麦、玉米、花生、大豆、葡萄、柑橘、西瓜、西红柿、茄子、萝卜、豇豆、白菜等。
本发明的又一具体实施方式中，所述微生物菌剂中，除所述活性成分外，还含有载体。所述载体可为农药领域常用的且在生物学上是惰性的载体。
所述载体可为固体载体或液体载体；
所述固体载体可为矿物材料、植物材料或高分子化合物；所述矿物材料可为粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白碳、沸石、硅石和硅藻土中的至少一种；所述植物材料可为玉米粉、豆粉和淀粉中的至少一种；所述高分子化合物可为聚乙烯醇或/和聚二醇；
所述液体载体可为有机溶剂、植物油、矿物油或水；所述有机溶剂可为癸烷或/和十二烷。
所述菌剂的剂型可为多种剂型，如液剂、乳剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。
根据需要，所述菌剂中还可添加表面活性剂(如吐温20、吐温80等)、粘合剂、稳定剂(如抗氧化剂)、pH调节剂等。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种生物农药，所述生物农药其活性成分包括上述库德里阿兹威毕赤酵母F、上述库德里阿兹威毕赤酵母F的代谢物和/或上述微生物菌剂。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种农产品杀菌剂或保鲜剂，所述农产品杀菌剂或保鲜剂其活性成分包括上述库德里阿兹威毕赤酵母F、上述库德里阿兹威毕赤酵母F的代谢物和/或上述微生物菌剂。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种农产品病害防治的方法，所述方法包括向农产品施用上述库德里阿兹威毕赤酵母F、上述库德里阿兹威毕赤酵母F的代谢物、上述微生物菌剂、上述生物农药和/或上述杀菌剂或保鲜剂。
所述农产品具体可以是粮食、水果或蔬菜，例如小麦、大麦、玉米、花生、大豆、葡萄、柑橘、西瓜、西红柿、茄子、萝卜、豇豆、白菜等。
以下通过实施例对本发明做进一步解释说明，但不构成对本发明的限制。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中，YPD培养基(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨20，酵母膏10，115℃灭菌20min；PDA培养基(g/L)：马铃薯200，葡萄糖20，琼脂15～20，121℃灭菌20min。实施例中供试病原菌均由山东省食品发酵工业研究设计院分离保存所有。
实施例1酵母菌株的筛选和分离
取洁净三角瓶，盛以9ml生理盐水。3只洁净试管，各盛9ml的生理盐水；加塞包扎，在103kPa、121℃高压蒸汽灭菌20min，得到无菌生理盐水。取1g曲块，加入盛有9ml无菌生理盐水的三角瓶中，在旋涡均匀器上充分振摇，使样品均匀分散，即10-1的样品稀释液；将3只装9ml生理盐水的无菌试管，依次标记10-2、10-3和10-4，再用无菌移液管吸10-1的菌悬液1ml放入依次装有9ml无菌水的试管中，稀释混匀便得到10-2稀释液，如此重复依次制得10-3和10-4的稀释液。
拮抗菌的筛选：取1ml无菌移液管分别吸取10-1、10-2、10-3和10-4的稀释菌悬液各0.4ml，对号接种于与之对应的2个无菌平板中，每个平皿放0.2ml，尽快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布均匀，平放于试验台上20min；然后倒置于35℃恒温箱中培养48小时，将菌落形态不同的菌种分离，分别采用平板划线法培养，至镜检为单菌落，得到纯化的菌种，将其编号，观察并记录菌落形态。以禾谷镰刀菌作为指示菌，采用平板对峙法，在培养皿中心位置点接禾谷镰刀菌，在距离中心约2.5cm处接种待筛菌株，置于28℃恒温培养箱中培养，实时观察抑菌圈的有无和大小，最终筛选出一株具有强拮抗效应的菌株，命名为菌株F。
实施例2菌株的鉴定
2.1观察菌落的形态
选取培养了54h的纯酵母培养物，对其进行形态观察，并在完全培养基平板上观察其菌落特征。
2.2观察显微结构
取一滴无菌水滴在载玻片上，用接种环挑取2.1平板上少量单菌落，均匀的涂在无菌水中，固定后，用结晶紫染色，制作临时装片，于油境下观察，并记录细胞形态、特征、大小、出芽情况。
2.3分子生物学鉴定
根据EZNA真菌基因组DNA抽提试剂盒说明书提取酵母菌总DNA以基因组DNA为模板扩增26S rDNA D1/D2区序列，以通用PCR引物：NL1(5’-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3’，SEQID NO.2)和NL4(5’-GGTCCGTTTCAAGAAAAG-3’，SEQ ID NO.3)扩增D1/D2区序列。PCR扩增条件：预变性：95℃ 5min，32个循环：94℃变性：50s；55℃退火：50s；72℃延伸：1min；总延伸：72℃10min。反应体系：(50μL)：模板DNA 2.5μL，引物NL1和NL4(20μLmol/L)各1μL，2×EasyTaqSuper Mix 23μl，ddH2O 23μl。用质量分数1％的琼脂糖凝胶电泳检测，然后送至铂尚生物技术(上海)有限公司进行测序。使用BLAST将26S rDNA测序结果在NCBI网站上做比对，根据同源性搜索结果，使用MEGA.6.0生物学软件对测试菌株和相关菌株的多个序列进行比对分析及Neighbor-Joining方法构建系统发育树。
2.3形态学鉴定
酵母在完全培养基平板上于30℃培养48h，其菌落形态特征和细胞形态见图1，如图可见，菌落成乳白色，边缘整齐，菌体成圆形，表面光滑、粘稠，在显微镜下，细胞成椭圆形，生殖方式为出芽繁殖，该特征是酵母菌的典型特征。
2.4 26S rDNA序列分析
将酵母F的26S rDNA测序结果(SEQ ID NO.3)在NCBI数据库中进行BLAST比对，结果表明，与库德里阿兹威(氏)毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)的26S rDNA序列同源性最高，相似度达到99％，使用MEGA.5.05生物学软件，利用Neighbor-Joining方法构建相似菌株间的系统发育树(图2)。可以看出，酵母F与库德里阿兹威(氏)毕赤酵母(Pichiakudriavzevii)同源性最高，鉴定为库德里阿兹威(氏)毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)。
酵母F的26S rDNA序列：
ACACCTGGCATTGCCTCAGTAGCGGCGAGTGAAGCGGCAAGAGCTCAGATTTGAAATCGTGCTTTGCGGCACGAGTTGTAGATTGCAGGTTGGAGTCTGTGTGGAAGGCGGTGTCCAAGTCCCTTGGAACAGGGCGCCCAGGAGGGTGAGAGCCCCGTGGGATGCCGGCGGAAGCAGTGAGGCCCTTCTGACGAGTCGAGTTGTTTGGGAATGCAGCTCCAAGCGGGTGGTAAATTCCATCTAAGGCTAAATACTGGCGAGAGACCGATAGCGAACAAGTACTGTGAAGGAAAGATGAAAAGCACTTTGAAAAGAGAGTGAAACAGCACGTGAAATTGTTGAAAGGGAAGGGTATTGCGCCCGACATGGGGATTGCGCACCGCTGCCTCTCGTGGGCGGCGCTCTGGGCTTTCCCTGGGCCAGCATCGGTTCTTGCTGCAGGAGAAGGGGTTCTGGAACGTGGCTCTTCGGAGTGTTATAGCCAGGGCCAGATGCTGCGTGCGGGGACCGAGGACTGCGGCCGTGTAGGTCACGGATGCTGGCAGAACGGCGCAACACCGCCCGTCTTGAAACACGGACCCAAGA(SEQ ID No.1)
生物保藏说明如下：
菌株F，分类命名：库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)，于2020年6月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，生物保藏号为CGMCC No.20007。
实施例3库德里阿兹威毕赤酵母酶活测定
将上述酵母使用YPD培养基的摇瓶在30℃，150rpm的摇床中培养54h，测定发酵液中不同酶组分酶活，检测结果见下表1。
表1库德里阿兹威毕赤酵母各酶活组分活性比较
名称 酶活(U/g)
中性蛋白酶 668.9
纤维素酶 3.74
普鲁兰酶 26.57
β-淀粉酶 477.68
果胶酶 120
糖化酶 181.93
脂肪酶 2.98
由上表可知，所述阿氏芽孢杆菌D1具有产中性蛋白酶、纤维素酶、普鲁兰酶、β-淀粉酶、果胶酶、糖化酶和植酸酶等多种酶活性，从而有利于拓展其应用。
实施例4库德里阿兹威毕赤酵母抑菌效果试验
将上述酵母使用YPD培养基的摇瓶在30℃，150rpm的摇床中培养54h，取发酵液离心去菌体得上清液，将上清液添加至PDA培养基中，控制上清液的添加量为10％(w/w)，然后将大肠杆菌、黄曲霉、灰绿青霉和禾谷镰刀菌点接至上述添加有上清液的PDA培养基中进行培养(培养基B)，同时设置对照组(培养基A)，试验结果见表2和图3-6。
表2
病原菌 培养基A 培养基B
大肠杆菌 长满平板 无生长
黄曲霉 菌落直径4cm 菌落直径1cm
灰绿青霉 菌落直径7cm 无生长
禾谷镰刀菌 长满平板 无生长
由表2和图3-6可知，库德里阿兹威毕赤酵母代谢产物对大肠杆菌、黄曲霉、灰绿青霉和禾谷镰刀菌具有明显的抑菌作用，表明本申请的库德里阿兹威毕赤酵母具有稳定、高效的抗菌性能。因此，本发明的库德里阿兹威毕赤酵母在农产品产后病害的生物防治领域具有广阔的应用前景。
最后应该说明的是，以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。上述虽然对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。
SEQUENCE LISTING
<110> 山东省食品发酵工业研究设计院 齐鲁工业大学
<120> 一株库德里阿兹威毕赤酵母及其在农产品产后病害防治中的应用
<130>
<160> 3
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 585
<212> DNA
<213> 库德里阿兹威毕赤酵母F 26S rDNA
<400> 1
acacctggca ttgcctcagt agcggcgagt gaagcggcaa gagctcagat ttgaaatcgt 60
gctttgcggc acgagttgta gattgcaggt tggagtctgt gtggaaggcg gtgtccaagt 120
cccttggaac agggcgccca ggagggtgag agccccgtgg gatgccggcg gaagcagtga 180
ggcccttctg acgagtcgag ttgtttggga atgcagctcc aagcgggtgg taaattccat 240
ctaaggctaa atactggcga gagaccgata gcgaacaagt actgtgaagg aaagatgaaa 300
agcactttga aaagagagtg aaacagcacg tgaaattgtt gaaagggaag ggtattgcgc 360
ccgacatggg gattgcgcac cgctgcctct cgtgggcggc gctctgggct ttccctgggc 420
cagcatcggt tcttgctgca ggagaagggg ttctggaacg tggctcttcg gagtgttata 480
gccagggcca gatgctgcgt gcggggaccg aggactgcgg ccgtgtaggt cacggatgct 540
ggcagaacgg cgcaacaccg cccgtcttga aacacggacc caaga 585
<210> 2
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 2
gcatatcaat aagcggagga aaag 24
<210> 3
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 3
ggtccgtttc aagaaaag 18

Claims (10)

1.一株库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F，该菌株已于2020年6月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其生物保藏号为CGMCC No.20007。
2.一种微生物菌剂，其特征在于，其含有权利要求1所述库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F和/或含权利要求1所述库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F的代谢物；
所述代谢物为：将所述库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F接种于液体发酵培养基中进行发酵培养，除去液体培养物中的库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F即得到库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F的代谢物。
3.权利要求1所述库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F和/或权利要求1所述库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F的代谢物在如下1)-4)中全部或部分中的应用：
1）在抑制病原菌中的应用；
2）在制备病原菌抑制剂中的应用；
3）在制备病害抑制剂中的应用；
4）在抑制病害中的应用；
所述代谢物为：将所述库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F接种于液体发酵培养基中进行发酵培养，除去液体培养物中的库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F即得到库德里阿兹威毕赤酵母F的代谢物；
所述病原菌为下述全部或部分病原菌：黄曲霉（Aspergillus flavus）、灰绿青霉（Penicillium glaucum）、禾谷镰刀菌（Fusarium graminearum）和大肠杆菌（Escherichia coli）；
所述病害为下述全部或部分病害：黄曲霉病、青霉病、禾谷镰刀菌病和大肠杆菌引起的病害。
4.如权利要求3所述应用，其特征在于，所述病害是农产品产后病害，所述农产品是粮食、水果或蔬菜。
5.如权利要求4所述应用，其特征在于，所述农产品为小麦、大麦、玉米、花生、大豆、葡萄、柑橘、西瓜、西红柿、茄子、萝卜、豇豆和白菜。
6.一种生物农药，其特征在于，所述生物农药其活性成分包括权利要求1所述库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F，权利要求1所述库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F的代谢物和/或权利要求2所述微生物菌剂；
所述代谢物为：将所述库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F接种于液体发酵培养基中进行发酵培养，除去液体培养物中的库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F即得到库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F的代谢物。
7.一种农产品杀菌剂或保鲜剂，其特征在于，其活性成分包括权利要求1所述库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F、权利要求1所述库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F的代谢物和/或权利要求2所述微生物菌剂；
所述代谢物为：将所述库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F接种于液体发酵培养基中进行发酵培养，除去液体培养物中的库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F即得到库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F的代谢物。
8.一种农产品病害防治的方法，其特征在于，所述方法包括向农产品施用权利要求1所述库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F、权利要求1所述库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F的代谢物、权利要求2所述微生物菌剂、权利要求6所述生物农药和/或权利要求7所述农产品杀菌剂或保鲜剂；
所述代谢物为：将所述库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F接种于液体发酵培养基中进行发酵培养，除去液体培养物中的库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F即得到库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）F的代谢物。
9.如权利要求8所述方法，其特征在于，所述农产品是粮食、水果或蔬菜。
10.如权利要求9所述方法，其特征在于，所述农产品为小麦、大麦、玉米、花生、大豆、葡萄、柑橘、西瓜、西红柿、茄子、萝卜、豇豆和白菜。
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