KR20090105726A - 고추의 세균성점무늬병과 탄저병을 방제하는 바실러스메가테리움 22-5 균주 - Google Patents

고추의 세균성점무늬병과 탄저병을 방제하는 바실러스메가테리움 22-5 균주 Download PDF

Info

Publication number
KR20090105726A
KR20090105726A KR1020080031352A KR20080031352A KR20090105726A KR 20090105726 A KR20090105726 A KR 20090105726A KR 1020080031352 A KR1020080031352 A KR 1020080031352A KR 20080031352 A KR20080031352 A KR 20080031352A KR 20090105726 A KR20090105726 A KR 20090105726A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
pepper
bacillus megaterium
strain
anthrax
disease
Prior art date
Application number
KR1020080031352A
Other languages
English (en)
Inventor
김흥태
연초롱
류충민
김주형
신명욱
김선보
김명기
양정욱
김혜령
장호선
이수민
Original Assignee
충북대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 충북대학교 산학협력단 filed Critical 충북대학교 산학협력단
Priority to KR1020080031352A priority Critical patent/KR20090105726A/ko
Publication of KR20090105726A publication Critical patent/KR20090105726A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

본 발명은 고추 병해에 대해 방제 효과를 갖는 바실러스 메가테리움 22-5 균주, 상기 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 고추 병해 방제용 미생물 제제, 상기 미생물 제제를 제조하는 방법, 및 상기 균주를 이용하여 고추의 병해를 방제하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 바실러스 메가테리움 22-5 균주를 고추에 유묘 침지처리, 토양 관주처리, 지상부에 경엽처리하면 고추의 세균성점무늬병과 탄저병의 발생을 억제할 수 있기 때문에, 고추의 세균성점무늬병과 탄저병을 환경친화적으로 방제하는데 유용하게 활용될 수 있다.
바실러스 메가테리움, 고추, 세균성점무늬병, 탄저병, 미생물제제

Description

고추의 세균성점무늬병과 탄저병을 방제하는 바실러스 메가테리움 22-5 균주{Bacillus megaterium isolate 22-5 controlling bacterial spot and anthracnose of red-pepper}
본 발명은 고추 병해에 대해 방제 효과를 갖는 바실러스 메가테리움 22-5 균주, 상기 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 고추 병해 방제용 미생물 제제, 상기 미생물 제제를 제조하는 방법, 및 상기 균주를 이용하여 고추의 병해를 방제하는 방법에 관한 것이다.
작물에서 발생하는 중요한 병을 방제하기 위해서는 살균제를 사용하는 화학적 방법, 농사의 기술을 사용하거나 저항성 품종을 사용하는 경종적 방법, 미생물이나 천연물 등을 사용하는 생물적 방법 등을 들 수 있다 (Katan, J., Crop Protect., 19, 725-731, 2000). 이들 방법 중에서 살균제를 사용하는 화학적 방법은 포장에서 가장 많이 사용되고 있으며, 실질적으로 방제 효과도 우수하다. 그러나 매년 방제효과가 우수한 살균제를 계속하여 사용하거나, 과다한 남용 등은 포장에서 살균제에 내성을 지닌 병원균이 출현하거나, 농산물과 환경에서의 농약 잔류 문제를 야기하기도 한다.
화학적 방제법의 문제점을 해결하기 위하여 많은 연구자들에 의해서 시도되어 온 방법 중의 하나가 미생물을 이용하는 생물적 방제법이다 (양현숙 등, 식물병연구, 8, 234-238, 2002; 및 황지영 등, 식물병연구, 12, 254-259, 2006). 이처럼 미생물을 이용하는 생물적 방제법은 최근 들어 많은 소비자들의 식품 안전성에 대한 인식이 높아지고 친환경농산물에 대한 선호도가 급증하면서 작물의 병을 방제하기 위한 화학적 방제법의 대안으로 연구되고 있다. 특히 바실러스속의 미생물은 여러 가지 식물병에 대해서 병 방제 효과가 온실과 포장에서 확인되어 보고되어 있다. 바실러스 메가테리움 (Bacillus megaterium)과 바실러스 리케니포미스 (Bacillus licheniformis)는 들깨의 잿빛곰팡이병에 대해서 방제 효과가 있다고 보고되어 있다 (Son et al., Plant Pathol. J., 18, 36-42, 2002). 또한 상추 균핵병에 대해서는 바실러스 스테로써모필러스 (Bacillus stearothermophilus)뿐만 아니라 다른 속인 브레비바실러스 브레비스 (Brevibacillus brevis)가 우수한 효과를 보였다 (황지영 등, 식물병연구, 12, 254-259, 2006).
하지만 보고된 대부분의 바실러스속과 페니바실러스속에 속하는 미생물은 토양 전염성 병인 오이 모잘록병, 인삼 역병, 잔디 브라운팻취병 등의 방제에 효과가 있다고 알려져 있다 (양현숙 등, 식물병연구, 8, 234-238, 2002; Bae et al., Plant Pathol. J., 20, 63-66, 2004; 및 Kim et al., Plant Pathol. J., 21, 328-333, 2005).
고추의 중요한 병으로는 토양 전염성 병인 역병을 비롯하여, 지상부에서 발생하는 탄저병, 흰가루병, 세균성점무늬병 등이 고추의 생산을 위협하는 식물병으로 알려져 있다. 고추는 재배 기간이 길뿐만 아니라 기상의 변화에 따라서 병 발생 양상이 매우 달라지기 때문에 방제가 어려워서 재배 기간 중에 살균제의 처리가 매우 빈번한 작물 중에 하나이다. 따라서 친환경 청결고추를 생산하기 위해서는 병 방제 효과가 우수한 미생물을 선발하여 병 방제를 위해서 사용하는 것이 중요하다. 고추의 병을 방제하기 위해서 개발된 미생물은 대부분 고추 역병을 방제하기 위한 목적으로 개발되었다. Shen 등은 쎄라티아 플리무티카 (Serratia plymuthica)가 고추 역병의 방제에 효과가 있다고 보고하였다 (Shen et al., Plant Pathol . J., 21, 64-67, 2005). 그러나 고추의 지상부 병에 대한 방제 효과가 우수한 미생물의 보고는 매우 적은 실정이다.
고추 재배 시에 발생하는 식물병을 살균제를 사용하지 않고 환경친화적으로 방제하기 위하여, 세균성점무늬병과 탄저병에 대해서 실험실과 온실, 그리고 고추 재배 포장에서 방제 효과가 우수한 바실러스속 미생물을 선발한 후, 그 미생물을 16s rDNA 염기서열 분석을 통하여 동정하고자 하였다.
상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 고추 병해에 대해 방제 효과를 갖는 신규 바실러스 메가테리움 22-5 균주를 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 고추 병해 방제용 미생물 제제를 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 미생물 제제를 제조하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 균주를 이용하여 고추의 병해를 방제하는 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 바실러스 메가테리움 22-5 균주를 고추 유묘를 재배하는 시기부터 토양 관주와 유묘 침지 처리하고, 본답에 정식하고 토양 관주 또는 경엽 분무 처리함으로써, 고추 생산에 큰 영향을 주는 탄저병과 최근 들어 문제가 되기 시작하는 세균성점무늬병을 효과적으로 방제할 수 있기 때문에, 유해물질의 잔류가 없는 친환경적 고추 생산이 가능할 것으로 생각한다. 또한 고추 재배 포장에서 탄 저병과 세균성점무늬병의 방제에 사용되는 살균제의 처리 횟수를 감소시킬 수 있어, 농민의 생산 비용을 감축하여 농가 순수익을 높일 수 있으며, 소비자들의 건강을 보호할 수 있을 것으로 기대한다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 고추 병해에 대해 방제 효과를 갖는 바실러스 메가테리움 22-5 균주 (기탁번호 KACC91371P)를 제공한다. 구체적으로, 본 발명에서는 고추를 이용한 실험실, 온실, 포장 등에서 세균성점무늬병과 탄저병에 대하여 우수한 효과를 보이는 바실러스 메가테리움 22-5를 제공한다.
바실러스 메가테리움을 이용한 식물병의 방제 예는 들깨 잿빛곰팡이병과 벼 잎집무늬마름병이 보고되어 있으며, 벼에 피해를 주는 선충인 멜로이도지네 그라미니콜라 (Meloidogyne graminicola)의 방제에 효과적임이 보고되어 있다. 하지만 본 발명의 균주인 바실러스 메가테리움 22-5 균주는 기존의 식물병 방제에 사용하는 미생물과는 다르게, 고추의 지상부에서 세균에 의해서 발생하는 세균성점무늬병 및 진균에 의한 탄저병에 대해 효과가 우수한 균주이다.
본 발명에서는 바실러스 메가테리움 22-5 균주를 토양에 관주 처리하거나 유묘를 침지 처리하였을 때, 세균성점무늬병의 발생을 억제하는 효과를 얻었다. 또한 동 미생물을 수확한 고추 열매에 분무처리하고 탄저병균을 열매에 접종하였을 때에도 탄저병의 발생을 억제하였다.
또한 본 발명에서는 고추 열매에 미생물을 직접 처리하지 않고, 고추를 재배하면서 토양 관주 처리, 유묘의 침지 처리, 그리고 열매에 경엽 분무처리를 3회하 고 탄저병균을 접종하였을 때에도 탄저병을 방제할 수 있었다. 뿐만 아니라 고추의 유묘를 본밭에 정식하기 전에 유묘를 바실러스 메가테리움 22-5 균주의 현탁액에 침지 처리하여 정식한 후에, 본 포장에서 동 미생물의 현탁액을 토양에 2회 관주 처리, 고추의 열매를 포함한 지상부에 경엽분무처리를 1회 실시하는 총 4회 처리에서도 탄저병을 방제할 수 있었다.
본 발명은 또한, 본 발명의 바실러스 메가테리움 22-5 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 고추 병해 방제용 미생물 제제를 제공한다. 상기 고추 병해는 세균성점무늬병 또는 탄저병일 수 있다.
본 발명은 또한, 본 발명의 바실러스 메가테리움 22-5 균주를 배양하는 단계를 포함하는 미생물 제제를 제조하는 방법을 제공한다. 바실러스 메가테리움 균주를 배양하는 조건 및 방법은 당업계에 공지된 방법을 이용할 수 있으며, 특별히 제한되지는 않는다.
본 발명의 미생물제제는 여러 가지 형태로 제조될 수 있으며, 구체적으로 수화제, 액제 또는 유제의 형태로 제조될 수 있다. 또한, 본 발명의 미생물제제는 상기 미생물제제의 조성에 더하여 부형제(excipient), 희석제(diluent), 규조토, 제올라이트, 화이트카본 등의 광물질 담체(carrier), 각종 첨가제 또는 계면활성제를 첨가할 수 있다.
본 발명은 또한, 본 발명의 바실러스 메가테리움 22-5 균주 또는 이의 배양액을 고추의 유묘에 침지 처리, 토양 관주 처리 또는 지상부에 경엽 처리하는 단계를 포함하는 고추의 병해를 방제하는 방법을 제공한다. 상기 고추 병해는 세균성 점무늬병 또는 탄저병일 수 있다. 본 발명의 균주를 침지 처리, 토양 관주 처리, 또는 경엽 처리하는 방법은 당업계에 공지된 통상적인 방법을 이용할 수 있으며, 특별히 제한되는 것은 아니다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1 : 본 발명의 신규한 바실러스 메가테리움 22-5 균주의 분리
본 발명을 위한 균주의 분리는 전라북도와 충청남도 일대의 고추밭에서 세균성점무늬병과 탄저병의 병징이 관찰되지 않는 고추의 뿌리에서 내생포자를 생성하는 세균을 분리하였다. 30여 곳에서 채취한 고추 뿌리에서 토양을 제거하고, 250 ㎖ 삼각 플라스크에 멸균수 100 ㎖을 넣고 고추 뿌리와 같이 30분간 진탕하였다. 그람 음성균과 곰팡이 포자를 제거하기 위하여 진탕한 고추의 뿌리를 막자와 막자 사발로 마쇄하였다. 마쇄한 고추 뿌리의 즙액은 멸균된 튜브에 넣고 80℃의 Water bath에서 1시간 동안 열처리하여 내생포자를 형성하는 그람 양성균만을 분리하였다. 열처리한 고추 뿌리 즙액을 멸균수에 적당하게 희석하여 TSA(tryptic soy broth agar) 배지 (Casein 17.0 g, Soybean meal 3.0 g, Dextrose 2.5 g, Sodium chloride 5.0 g, Dipotassium phosphate 2.5 g, Agar 15.0 g, 증류수 1.0 ℓ)에 도말하였다. 30℃의 TSA 배지에서 2일 동안 배양하여 자란 다양한 미생물들을 균이 지닌 색이나 형태적으로 다른 균주들을 한 균주씩 분리하여 TSA 배지에 다시 계대 배양을 함으로써 순수 분리하였다. 분리된 균주를 다시 계대 배양하여 444개 균주를 분리하였고, 각각의 균주는 30% 글리세롤이 함유된 바이알에 넣은 후 -80℃에서 보관하였다.
따라서, 본 발명자들은 상기 바실러스 메가테리움 22-5 균주를 한국농업미생물자원센터(KACC)에 2008년 4월 3일자로 기탁하였다 (기탁번호: KACC91371P).
실시예 2: 본 발명에 따른 바실러스 메가테리움 22-5 균주의 세균성점무늬병에 대한 방제 효과
본 발명에 따른 바실러스 메가테리움 22-5 균주를 NA(nutrient agar) 배지(Beef extract 1.0 g, Peptone 5.0 g, Sodium chloride 5.0 g, Yeast extract 2.0 g, agar 15.0 g, 증류수 1.0 ℓ)에 접종하여 28℃의 배양기에서 150 rpm으로 2일간 진탕배양한 후 수확하여 사용하였다. 고추 유묘를 이식하기 직전에 바실러스 메가테리움 22-5 균주의 현탁액에 유묘를 1시간 동안 침지 처리하고, 새로운 폿트로 이식하였다. 이식한 고추는 온실에서 2주간 더 재배한 후에 28℃의 NA 배지에서 2일간 150 rpm으로 진탕배양한 병원균 현탁액(OD600 = 0.585)을 분무하여 접종하였다. 접종한 고추는 28℃의 습실상에 보관하며 발병을 유도하였으며 접종하고 10일 후에 발병도와 방제 효과를 조사하여 하기 표 1에 나타내었으며, 방제 효과는 하기 식 1에 의해서 계산하였다.
[식 1]
Figure 112008024388344-PAT00001
처리 발병도 (%) 방제가 (%)
증류수 50.0 -
바실러스 메가테리움 22-5의 현탁액 16.7 66.7
그 결과, 상기 표 1에서 보는 것과 같이 바실러스 메가테리움 22-5 균주를 토양에 관주 처리한 고추에서는 무처리구의 고추와 비교하여 세균성점무늬병이 66.7% 억제되었다.
실시예 3: 수확한 열매에서 본 발명에 따른 바실러스 메가테리움 22-5 균주의 탄저병에 대한 방제 효과
본 발명에 따른 바실러스 메가테리움 22-5 균주의 탄저병에 대한 방제 효과를 수확한 고추 열매를 가지고 실험하였다. 온실에서 재배한 고추(품종: 녹광)의 열매를 수확하여 세척한 후 실험에 사용하였다. 상기와 동일한 방법으로 배양한 바실러스 메가테리움 22-5를, 세척한 고추 열매에 탄저병균을 접종하기 2일 전, 12시간 후, 2일 후에 각각 분무처리하였다. 탄저병균의 접종을 위해서 포장에서 단포자 분리한 탄저병균인 콜레토트리쿰 아쿠타툼 (Colletotrichum aqudatum) JC24를 25℃의 PDA (Potato dextrose agar)에서 10일간 배양하여 분생포자를 수확하였다. 수확한 탄저병균의 포자 현탁액 농도는 1 x 106 개/㎖로 조절하여, 고추 열매에 상처를 내지 않고서 분무접종하였다. 접종한 열매는 암 상태의 25℃에서 2일 동안만 습실 처리하고, 동일한 조건에서 습실을 제거하고 계속 보관하며 발병을 유도하였다. 병원균을 접종하고 10일 후에 열매에서의 발병도와 방제 효과를 조사하여 하기 표 2에 나타내었다. 방제 효과는 상기 식 1을 이용하여 계산하였다.
처리 시기 처리 발병도 (%) 방제 효과 (%)
탄저병균 접종 2일 전 증류수 40.0 -
바실러스 메가테리움 22-5의 현탁액 12.0 70.0
탄저병균 접종 12시간 후 증류수 88.0 -
바실러스 메가테리움 22-5의 현탁액 4.0 95.5
탄저병균 접종 2일 후 증류수 44.0 -
바실러스 메가테리움 22-5의 현탁액 16.0 63.6
표 2에서 보는 것과 같이, 탄저병균을 접종하기 12시간 후, 즉 탄저병균이 고추 열매를 침입하여 들어가기 전에 바실러스 메가테리움 22-5를 처리하였을 때에는, 고추 열매에서 발생하는 탄저병의 발병도가 증류수만을 처리한 무처리구와 비교하여 95.5% 억제되었다. 탄저병균을 접종하기 2일 전과 2일 후에 선발 미생물을 처리하였을 때에는 발병도가 각각 12.0과 16.0%로, 증류수만을 처리한 무처리구에서의 발병도인 40.0과 44.0%와 비교하여 탄저병이 70.0과 63.6% 방제되었다.
실시예 4: 본 발명에 따른 바실러스 메가테리움 22-5 균주의 고추 성체식물에서의 탄저병에 대한 방제 효과
본 발명에 따른 바실러스 메가테리움 22-5 균주의 탄저병 방제 효과를 온실에서 재배한 고추(품종: 녹광)의 성체식물을 사용하여 실험하였다. 선발한 미생물의 현탁액은 2엽기의 녹광 고추 유묘에 토양관주 처리하였으며, 파종하고 22일 후에 6엽기의 유묘를 묘판에서 대형 폿트로 이식하면서 미생물의 현탁액에 30분간 침지하여 처리하였다. 대형 폿트에서 고추를 재배하면서 개화기(파종하고 37일 후)와 열매가 달리기 시작할 때(파종하고 67일 후), 고추 열매가 홍고추가 되었을 때(파종하고 97일 후)에 폿트당 미생물 배양액을 100 ㎖씩 경엽 처리하였다. 최종적으로 파종하고 120일 후에 경엽처리하여 총 6회 처리하였다. 탄저병균은 미생물을 6차 처리한 후에 분무 접종하였다. 탄저병균의 접종을 위해서 상기한 방법과 동일하게 탄저병균인 콜레토트리쿰 아쿠타툼 (Colletotrichum aqudatum) JC24를 25℃의 PDA에서 10일간 배양하고 분생포자를 수확하여, 포자 현탁액 농도는 1 x 106 개/㎖로 조절하였다. 고추 열매에 상처를 내지 않고서 분무접종하고, 접종한 고추의 성체는 온실에서 2일 동안만 습실 처리하였다. 발병 정도는 병원균을 접종하고 10일 후에, 전체 열매 중에서 발병된 열매의 수를 조사하여 발병과율을 구하였으며, 증류수를 처리한 무처리구의 발병과율과 비교하여 방제 효과를 계산하였다. 바실러스 메가테리움 22-5의 고추 성체식물에서의 탄저병에 대한 방제 효과는 표 3에서 보여주고 있다.
처리 발병과율 (%) 방제가 (%)
무처리(증류수만 처리) 40.0 -
바실러스 메가테리움 22-5의 현탁액 0 100
상기 표 3에서 보는 것과 같이, 바실러스 메가테리움 22-5의 배양 현탁액을 온실에서 고추를 재배하며 지속적으로 총 6회 처리하고 탄저병균을 접종하였을 때에는 전혀 탄저병이 발생하지 않았으며, 100%의 방제 효과를 나타낸 반면, 미생물의 배양 현탁액 대신 증류수를 처리한 경우에는 40%의 발병과율을 보였다.
실시예 5: 본 발명에 따른 바실러스 메가테리움 22-5 균주를 고추 재배 본 포장에 적용 처리하였을 때의 탄저병 방제 효과
본 발명에 따른 바실러스 메가테리움 22-5 균주의 포장에서의 방제 효과를 검정하기 위하여 포장 설계는 난괴법 3 반복으로 수행하였다. 바실러스 메가테리움 22-5를 NA 배지에 접종하여 28℃의 진탕배양기에서 150 rpm으로 2일간 진탕배양한 후 수확하였다. 고추 유묘(품종: 청풍명월)는 정식(2007년 5월 11일)하기 직전에 준비한 미생물의 현탁액에 1시간 동안 침지 처리하였다. 선발한 미생물은 유묘 침지 처리를 포함하여 포장에서 총 4회 처리하였는데, 2차와 3차 처리는 6월 22일과 7월 13일에 정식한 고추에 주당 30 ㎖씩 토양에 관주 처리하였다. 미생물의 4차 처리는 7월 26일에 주당 1 ℓ씩 지상부에 분무처리하였다. 고추 탄저병에 대한 조사는 8월 22일부터 시작하여 8월 31일과 9월 10일에 총 3회 조사하였다. 본 발명에 따른 바실러스 메가테리움 22-5의 고추 포장에서의 탄저병 방제 효과는 표 4에서 보여주고 있다.
처리 1차 조사 (2007. 8. 22) 2차 조사 (2007. 8. 31) 3차 조사 (2007. 9. 10)
발병과율 (%) 방제효과 (%) 발병과율 (%) 방제효과 (%) 발병과율 (%) 방제효과 (%)
무처리(증류수만 처리) 2.8 - 8.5 - 15.2 -
바실러스 메가테리움 22-5의 현탁액 0.2 94.1 0.5 93.7 7.5 50.5
본 발명에 따른 바실러스 메가테리움 22-5 균주의 현탁액을 4회 처리한 고추에서는 탄저병이 발생한 열매의 비율(발병과율)이 각 조사 시기마다 0.2, 0.5, 7.5%이었으며, 동일한 시기의 무처리구에서의 발병과율은 2.8, 8.5, 15.2%이었다. 각 조사 시기마다 바실러스 메가테리움 22-5 균주의 방제 효과는 94.1, 93.7, 50.5%로 우수하였다.
실시예 6: 16s rDNA의 염기서열 분석을 통한 바실러스 메가테리움 22-5 균주의 동정
본 발명에 따른 22-5 균주를 동정하기 위해서 16s rDNA의 염기서열을 분석하였다. 염색체 DNA를 추출하기 위해, 0.5 - 1.0 g의 균체를 micro-tube에 넣고 500 ㎕ TE 버퍼 [25 mM Tris, 25 mM EDTA (pH8.0)]를 첨가한 다음에 냉동실에서 20분, 실온에서 40분씩 총 2회 처리한 후, 2 ㎕ 라이소자임 (10 mg/㎕)과 2 ㎕ RNase A (50 ㎍/㎕)를 넣고 37℃에서 30분간 반응시켰다. 여기에 다시 5 M NaCl 50 ㎕와 10% SDS 120 ㎕를 넣고 65℃에서 30분간 반응시킨 후, 5 M 포타슘 아세테이트 240 ㎕를 첨가하여 4℃에서 20분간 정치시킨 다음, 1,3000 rpm으로 5분간 원심분리하여 얻은 상징액을 새로운 micro-tube에 옮겼다. 여기에 차가운 이소프로판올을 1 mL씩 첨가하고 다시 1,3000 rpm에서 5분간 원심분리하였다. 상징액은 다시 버리고, 차가운 70% 에탄올 1 mL을 첨가하고 1,3000 rpm으로 5분간 원심분리하였다. 상징액을 제거한 침전물인 염색체 DNA는 공기 중에서 충분히 건조시킨 후, 30 ㎕의 3차 증류수에 용해시켰다. PCR을 통하여 16s rDNA를 증폭하기 위해서 2종류의 universal 프라이머인 fD1; 5'-AGA GTT TGA TCC TGGG-3' (서열번호 1)과 rp2; 5'-ACG GCT ACC TTG TTA CGA CTT-3' (서열번호 2)를 사용하였다 (Weisburg et al., J. Bacteriol. 173, 697-703, 1991). PCR 반응액은 2 ㎕/30 ㎕ 주형 DNA, 프라이머 fD1 1 ㎕ (10 nmole), rp2 1 ㎕ (10 nmole)에 3차 증류수를 넣어 premix의 최종 부피를 20 ㎕로 조절한 후, 첫 번째 단계로 95℃에서 10분 동안 변성하고, 두 번째 단계로 95℃에서 30초간 변성, 55℃에서 30초 어닐링, 72℃에서 1분간 신장한 후 이를 다시 30회 반복하였다. 마지막으로 72℃에서 10분간 신장한 후, 4℃로 냉각시켜 반응을 종료하였다. 증폭된 DNA는 아가로스 겔 전기영동을 수행한 후에 에티디움 브로마이드로 염색하고, UV 하에서 확인하였다. 증폭된 16S rDNA는 0.8% 아가로스 겔로부터 QIAquick® Gel Extraction kit(QIAGEN, Hilden, Germany)를 사용하여 정제한 후, 염기서열을 판독하였다. 16S rDNA의 염기서열 분석에는 소프트웨어 DNASTAR와 NCBI(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)의 BLAST 네트워크 서비스를 이용하였다. Phylogenetic tree는 소프트웨어 MEGA 3.1에서 neighbor-joining treeing algorithm을 사용하여 작성하였으며, bootstrap value(%)로 계통간의 유전적 거리 차이를 표시하였다.
도 1에서와 같이 16s rDNA의 염기서열 분석을 통해서 22-5 균주는 바실러스 메가테리움으로 동정되었다.
도 1은 고추 세균성점무늬병과 탄저병에 대한 방제효과가 우수한 바실러스속 미생물을 동정하기 위하여 16s rDNA 염기서열을 이용하여 그린 계통분류학적인 분석 결과이다.
<110> Chungbuk National University Industry-Academic Cooperation Foundation <120> Bacillus megaterium isolate 22-5 controlling bacterial spot and anthracnose of red-pepper <130> PN08051 <160> 2 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> fD1 primer <400> 1 agagtttgat cctggg 16 <210> 2 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rp2 primer <400> 2 acggctacct tgttacgact t 21

Claims (7)

  1. 고추 병해에 대해 방제 효과를 갖는 바실러스 메가테리움 22-5 균주 (기탁번호 KACC91371P).
  2. 제1항에 있어서, 상기 고추 병해는 세균성점무늬병 또는 탄저병인 것을 특징으로 하는 바실러스 메가테리움 22-5 균주 (기탁번호 KACC91371P).
  3. 제1항의 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 포함하는 고추 병해 방제용 미생물 제제.
  4. 제3항에 있어서, 상기 고추 병해는 세균성점무늬병 또는 탄저병인 것을 특징으로 하는 미생물 제제.
  5. 제1항 또는 제2항의 균주를 배양하는 단계를 포함하는 미생물 제제를 제조하는 방법.
  6. 제1항의 균주 또는 이의 배양액을 고추의 유묘에 침지 처리, 토양 관주 처리 또는 지상부에 경엽 처리하는 단계를 포함하는 고추의 병해를 방제하는 방법.
  7. 제6항에 있어서, 상기 고추 병해는 세균성점무늬병 또는 탄저병인 것을 특징으로 하는 방법.
KR1020080031352A 2008-04-03 2008-04-03 고추의 세균성점무늬병과 탄저병을 방제하는 바실러스메가테리움 22-5 균주 KR20090105726A (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020080031352A KR20090105726A (ko) 2008-04-03 2008-04-03 고추의 세균성점무늬병과 탄저병을 방제하는 바실러스메가테리움 22-5 균주

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020080031352A KR20090105726A (ko) 2008-04-03 2008-04-03 고추의 세균성점무늬병과 탄저병을 방제하는 바실러스메가테리움 22-5 균주

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20090105726A true KR20090105726A (ko) 2009-10-07

Family

ID=41535397

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020080031352A KR20090105726A (ko) 2008-04-03 2008-04-03 고추의 세균성점무늬병과 탄저병을 방제하는 바실러스메가테리움 22-5 균주

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR20090105726A (ko)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11051518B2 (en) 2016-06-27 2021-07-06 Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology Pseudozyma churashimaensis strain RGJ1 isolated from pepper plant and use thereof
KR102307028B1 (ko) 2021-05-04 2021-10-01 전라북도 순창군(농업기술센터장) 고추 탄저병을 방제하고 고추의 발아와 생육을 촉진하는 바실러스 벨레젠스 Sucnchang SRC210201 균주, 이를 이용한 고추 탄저병 방제방법, 고추 종자 발아 및 생육 촉진방법
CN117535168A (zh) * 2022-08-10 2024-02-09 河北省科学院生物研究所 巨大芽孢杆菌zlp-21及其应用

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11051518B2 (en) 2016-06-27 2021-07-06 Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology Pseudozyma churashimaensis strain RGJ1 isolated from pepper plant and use thereof
KR102307028B1 (ko) 2021-05-04 2021-10-01 전라북도 순창군(농업기술센터장) 고추 탄저병을 방제하고 고추의 발아와 생육을 촉진하는 바실러스 벨레젠스 Sucnchang SRC210201 균주, 이를 이용한 고추 탄저병 방제방법, 고추 종자 발아 및 생육 촉진방법
CN117535168A (zh) * 2022-08-10 2024-02-09 河北省科学院生物研究所 巨大芽孢杆菌zlp-21及其应用
CN117535168B (zh) * 2022-08-10 2024-05-28 河北省科学院生物研究所 巨大芽孢杆菌zlp-21及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111356761A (zh) 用于植物病原体的生物防治的方法和组合物
KR100800566B1 (ko) 크랩시엘라 옥시토카 ｃ1036 균주 및 이를 이용한 식물의생장 촉진과 식물병 방제 및 환경 스트레스에 대한 피해감소 방법
CN110423712B (zh) 一种皮尔瑞俄类芽孢杆菌及其应用
KR101456171B1 (ko) 물억새 뿌리로부터 분리한 미생물을 이용한 식물 생장 촉진방법
CN112458011B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌zjk1及其应用
KR100942228B1 (ko) 플라보박테리움 헤르시니움 이피비-씨313 균주를 이용한 식물병 방제제
CN111363691B (zh) 一株多粘类芽孢杆菌及其应用
CN117165494A (zh) 一种猕猴桃溃疡病生防菌株Wq-1及其应用
KR20090105726A (ko) 고추의 세균성점무늬병과 탄저병을 방제하는 바실러스메가테리움 22-5 균주
KR101182020B1 (ko) 토양근권세균 크라이세오박테리움 인돌로제네스 균주 ｉｓｅ１４를 포함하는 식물 탄저병 방제용 및 성숙촉진용 조성물 그리고 이를 이용한 탄저병 방제방법
KR20100132861A (ko) 식물 병원균에 대한 항균 활성을 갖는 스트렙토마이세스 속 ｂｓ０６２ 및 이를 이용한 식물병 방제제
CN109055265B (zh) 一种生防菌及其在农作物蔓枯病防治方面的应用
JP6236660B2 (ja) 植物の生育促進剤
CN115873742A (zh) 一株金黄色链霉菌及其在防治黄瓜立枯病中的应用
CN114085788A (zh) 一株雅马纳假单胞菌菌株及其应用
KR101573584B1 (ko) 토양근권세균 츠카무렐라 티로시노솔벤스 균주 yjr102을 포함하는 식물병 방제 및 식물 생장촉진용 조성물
CN112322561A (zh) 一株克雷伯氏菌及其在果树梨火疫病防治中的应用
JP2004143102A (ja) 放線菌を含む微生物製剤
KR101182103B1 (ko) 토양근권세균 플라보박테리움 균주 ｇｓｅ０９를 포함하는 식물 탄저병 방제용 및 수량증진과 성숙촉진용 조성물 그리고 이를 이용한 탄저병 방제방법
KR101953835B1 (ko) 식물의 병 저항성을 증진시키는 아스페르질루스 테레우스 균주 및 이의 용도
KR101107373B1 (ko) 토양근권세균 슈도모나스 코루가타 균주 ｃｃｒ８０을 포함하는 식물 탄저병 방제용 조성물 및 이를 이용한 탄저병 방제방법
CN114164126B (zh) 一株米根霉xerf-1及其在减轻苹果连作障碍中的应用
KR20150079323A (ko) 토양근권세균 슈도모나스 오티티디스 균주 yjr27을 포함하는 식물병 방제 및 식물 생장촉진용 조성물
CN116555068B (zh) 一株内生铜绿假单胞菌hb-10及其应用
CN112226387B (zh) 一株白色杆菌及其在防治玉米茎基腐病中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application