CN102586130B

CN102586130B - 能防治葡萄炭疽病的生防菌株、菌剂及其应用

Info

Publication number: CN102586130B
Application number: CN201110243189.3A
Authority: CN
Inventors: 赵奎华; 刘长远; 梁春浩; 白元俊; 王辉; 关天舒; 李柏宏; 黄玉茜; 臧超群; 刘丽
Original assignee: Liaoning Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Liaoning Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2011-01-14
Filing date: 2011-08-23
Publication date: 2015-01-07
Anticipated expiration: 2031-08-23
Also published as: CN102586130A

Abstract

能防治葡萄炭疽病的生防菌株、菌剂及其应用，其特点是该生防菌株为枯草芽孢杆菌GS8菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理中心，保藏号为CGMCC.No：4525；其生防菌剂中的活性成分为枯草芽孢杆菌GS8；其制备方法；枯草芽孢杆菌GS8菌株由培养基活化培养，pH7，蒸馏水1000ml，温度25～30℃；将蔗糖、牛肉膏、氯化铵、硫酸镁和水配成母液，将母液按装液量为10％，发酵温度28℃，接种量2％，pH值7，振荡发酵培养，调整枯草芽孢杆菌GS8在培养液中的菌数，即制备成能防治葡萄炭疽病的生防菌剂。本发明安全可靠，不会使植物产生抗药性，无剧毒性，在发酵、生产加工及使用过程中均不产生有害物质。

Description

能防治葡萄炭疽病的生防菌株、菌剂及其应用

技术领域

本发明涉及一种生防菌株、菌剂及其应用，特别是涉及一种能防治葡萄炭疽病的生防菌株、菌剂及其应用，属于有益生防菌株制成的生防菌剂技术领域。

背景技术

葡萄炭疽病[Colletotrichum.gloeosporioides(Penz.)Sacc.]也称晚腐病，1891年，在美国首次对该病进行了报道，该病在我国大多数葡萄栽培地区均有发生。由于葡萄连年种植，病原菌菌源增加，炭疽病逐年加重，目前已成为了葡萄生产上的重要病害。每年造成的产量损失达15％以上，严重地方达40％以上。目前防治该病的主要措施是化学防治，由于有些生产者长期使用化学农药，盲目打药，任意加大农药使用量，随意增加农药使用次数，更有甚者使用高毒、高残留农药，导致该病抗药性增强，葡萄品质下降，果品污染，影响葡萄产品在国内、国际市场竞争力，危害消费者健康。这已成为葡萄可持续生产的严重障碍。

利用有益生防防治病害已有相当长的历史，Hartely(1921)首次利用有益生防防治猝倒病，Kerr(1973)利用放射土壤杆菌(Agrobacterium radiobacterK84)成功防治植物根瘤病。美国AgraQuest公司用枯草芽孢杆菌QST713菌株开发出活菌制剂杀菌剂Serenade TM，并于2000年通过环保局(EPA)的登记，用于防治多种作物的白粉病、霜霉病、灰霉病等病害。枯草芽孢杆菌MBI600在英国的MicroBio Group Ltd.、日本的Idemistu Kosan Co.，Ltd.等均已获得注册登记，并进行产业化生产，用于防治叶部病害(灰霉病、白粉病)和根部病害(枯萎病、根腐病、黑斑病等)。枯草芽孢杆菌FZB24在德国、美国等国家进行了注册，并在德国Bayer公司投入生产，用于防治番茄晚疫病、灰霉病和小麦白粉病，还可以作为增产促进剂。澳大利亚开发的B.SubtilisA-B对麦类和胡萝卜立枯病等具有良好的防治和增产作用。此外，L.R.Cavaglieri等从玉米根围分离获得的生防菌株B.Subtilis RC8和RC11对玉米轮状镰刀菌(Fusariumverticillioides)具有强烈的抑制作用。

国内科技人员利用有益生防防治植物病害的研究成果也有很多，例如；

公开号为cn1491563的发明专利申请给出的《一种防治恶性杂草水花生的菌株、菌剂及应用》，其特点是给出的菌株WNJ01，属于一种镰刀菌，Fusariumspp.，保藏号：CGMCC No.0922；该菌株具有寄生专化性强、环境安全、对水花生地上地下部分都有较好防除效果的特点；菌剂对所测试的作物均不致病。

公开号为cn1557164的发明专利申请给出的一种《多功能生防菌剂及其制备方法》，其特点是以作物根际土壤中分离出的木霉菌(Trichodermaharzianum)厚垣孢子为主要成分，以少量矿质营养元素为增效剂，以轻质碳酸钙及硅藻土为载体的多功能生防菌剂及其制备方法。该菌剂主要用于防治由镰孢菌、腐霉菌、轮枝菌、丝核菌等病原真菌引起的多种作物土传病害，同时具有提高植物自身抗性、增加产量的多重功能。

公开号为cn 1568709的发明专利申请给出的一种《防治温室蔬菜疫病的复合菌剂》，其特点是包括环状芽孢杆菌，短小芽孢杆菌，蜡状押宝杆菌，枯草芽孢杆菌，粘质沙雷氏菌，荧光假单胞菌。将以上各菌按1∶0.4～0.5∶0.2～0.3∶0.2～0.3∶0.2～0.3∶0.2～0.3比例混合后用PDA培养液33℃200rpm摇36小时，然后7000rpm离心，取湿菌与本实验室的菌体保藏液按1∶40(g/ml)配成菌剂，成品中活菌总浓度为1×10⁹～1×10¹⁴cfu/ml。该菌剂由使用时可以做成堆肥使用，也可稀释后在移栽时灌根使用。对蔬菜疫病的平均防效可达75％以上，同时该菌剂可蔬菜增产45％以上。

公开号为cn 101818125A的发明专利申请给出的《一种发根根瘤菌菌株、菌剂及其作为防治番茄青枯病的育苗基质的应用》，其特点是提供一种利用病原菌拮抗微生物防治番茄青枯病的菌株，即发根根瘤菌(Rhizobiumrhizogenes)5-3-2，其保藏编号为CGMCC？NO.3333。以及由发根根瘤菌5-3-2菌株制成的菌剂和发根根瘤菌5-3-2菌株在防治番茄青枯病中的应用，尤其是作为防治番茄青枯病的育苗基质中的应用。从自然界定向分离选育出发根根瘤菌5-3-2，先通过培养繁殖后，制成该菌剂产品，利用食用菌栽培后的菇渣通过发酵腐熟后与其他基材按一定比例配制成育苗基质，将生防菌剂直接与育苗基质有机的结合起来。

我国利用枯草芽孢杆菌防治植物病害的应用研究也达到了世界先进水平，现已成功开发病投入生产的商品制剂有亚宝、百抗、麦丰宁、纹曲宁等产品。其中，江苏省农业科学院植保所开发出枯草芽孢杆菌B-916，该菌剂对水稻白叶枯病菌有良好的防效。南京农业大学开发的生防菌B3对小麦纹枯病田间防治达到50～80％。云南农业大学和中国农业大学共同研制的生防农药“百抗”已在农业部登记注册，其有效成分是枯草芽孢杆菌B908，对水稻纹枯病防效达70％以上。另外，由陈延熙等研制的增产菌已在全国10多个省、市的50余种作物中推广使用，主要用于防治水稻稻瘟病、小麦纹枯病和油菜菌核病等，田间增产率达10～50％。

目前，葡萄炭疽病防治仅依靠化学农药，不仅对浆果和环境造成严重污染，而且威胁到食品安全。利用生防菌剂防治葡萄炭疽病研究方面尚属空白，因此，人们亟待能有一种能防治葡萄炭疽病的生防菌株、菌剂出现。

发明内容

本发明的目的就在于针对至今还没有一种能防治葡萄炭疽病的生防菌株、菌剂的现状，而给出了一种能防治葡萄炭疽病的生防菌株和菌剂。本发明的生防菌株来源于葡萄植株表面，对植物本身、环境及人都是安全的，不会使人和植物产生抗药性，也不会像一部分农药那样有剧毒性，且其在发酵、生产加工及使用过程中均不产生有害物质，无毒副作用。

本发明给出的这种能防治葡萄炭疽病的生防菌株，其特点是来源于葡萄植株表面的枯草芽孢杆菌GS8菌株，该枯草芽孢杆菌GS8保藏于中国微生物菌种保藏管理中心，保藏号为CGMCC.No：4525，保藏日期2011年1月5日。

上述枯草芽孢杆菌GS8菌株从葡萄果粒表面分离获得，在NA培养基上菌落扁平，略粗糙，呈圆形或近似圆形，稍带光泽，乳白色，不产色素。革兰氏染色显示菌体呈杆状，被染成红色，呈阴性。经16S rDNA序列测定及同源性序列分析，确定其为枯草芽孢杆菌。

本发明给出的这种能防治葡萄炭疽病的生防菌剂，其特点是所述生防菌剂中的活性成分为枯草芽孢杆菌GS8，其中枯草芽孢杆菌GS8在所述生防菌剂中的菌数至少为5.0×10⁸cfu/ml。

本发明给出的这种能防治葡萄炭疽病的生防菌剂的制备方法，其特点是；

1.菌种制备，枯草芽孢杆菌GS8菌株，由C培养基活化培养，C培养基成分：蔗糖15g，牛肉膏10g，氯化铵2g，硫酸镁0.2g，琼脂18g，pH7，蒸馏水1000ml，温度25～30℃。

2.将蔗糖1.5％，牛肉膏1％，氯化铵0.2％，硫酸镁0.02％，其余为水，配成母液，将母液按装液量为10％，发酵温度28℃，接种量2％，pH值7；150r/min振荡发酵培养96h，调整枯草芽孢杆菌GS8在培养液中的菌数为5.0×10⁸cfu/ml以上，即制备成能防治葡萄炭疽病的生防菌剂。

本发明给出的这种能防治葡萄炭疽病的生防菌剂的用途，其特点是将含有枯草芽孢杆菌GS8的生防菌剂稀释200～600倍后防治葡萄炭疽病。

本发明与现有技术相比，其有益效果是：

本发明的生防菌株枯草芽孢杆菌GS8来源于葡萄植株表面，对植物本身、环境及人都是安全的，不会使人和植物产生抗药性，也不会像一部分农药那样有剧毒性，且其在发酵、生产加工及使用过程中均不产生有害物质，无毒副作用。

本发明的生防制剂对预防和治疗葡萄炭疽病有良好的防治效果。在刺伤离体果葡萄炭疽病菌防治试验中，本发明的生防制剂防治效果达到了76.9％，在喷雾离体果炭疽病防治试验中，本发明的生防制剂防治效果达到了100％，在田间试验中，本发明的生防制剂稀释200倍液防治效果达到了73.34％，相当于50％多菌灵WP600倍和福美双WP700倍两种化学药剂的防治效果，应用前景广阔。

具体实施方案

下面结合具体实例对本发明的技术方案做详细介绍：

实施例1

1、菌种制备

枯草芽孢杆菌GS8菌株，由C培养基活化培养，C培养基成分：蔗糖15g，牛肉膏10g，氯化铵2g，硫酸镁0.2g，琼脂18g，pH7，蒸馏水1000ml，温度25～30℃。

2、将蔗糖1.5％，牛肉膏1％，氯化铵0.2％，硫酸镁0.02％，其余为水，配成母液，将母液按装液量为10％，发酵温度28℃，接种量2％，pH值7；150r/min振荡发酵培养96h，调整枯草芽孢杆菌GS8在培养液中的菌数为5.0×10⁸cfu/ml以上，即制备成能防治葡萄炭疽病的生防菌剂。

室内离体防治葡萄炭疽病效果评价

利用离体果进行室内防效试验，设计4个不同处理。

处理1：先喷布炭疽菌悬浮液，24h后喷布枯草芽孢杆菌GS8菌悬液；

处理2：先喷布枯草芽孢杆菌GS8菌悬液，24h后喷布炭疽病菌悬浮液；

处理3：先针刺处理，喷布枯草芽孢杆菌GS8菌悬液，24h后喷布炭疽菌悬浮液；

处理4：先针刺处理，喷布炭疽菌悬浮液，24h后喷枯草芽孢杆菌GS8菌悬液。

另设2个处理对照。

5d后调查发病情况，结果见表1～2，处理1和处理3防效不明显，处理2和处理4控病效果显著，其中处理4防效可达到100％。

表1有益生防对葡萄炭疽病的防控效果

Table 1 The control effect of Biocontrol bacterial strains against grapeanthracnose

表2有益生防对葡萄炭疽病的防控效果

Table 2 The control effect of Biocontrol bacterial strains against grapeanthracnose

田间防治葡萄炭疽病的效果评价

利用本生防菌剂进行防治葡萄炭疽病的田间防效试验，调查结果见表3。生枯草芽孢杆菌GS8菌悬液对葡萄炭疽病均有较好的防治效果，中期防治效果平均达72.46％～77.68％，末期防治效果平均达67.41％～74.34％。在末期防治效果中，多菌灵对葡萄炭疽病的防效最高，生枯草芽孢杆菌GS8菌悬液稀释200倍与其相当；生枯草芽孢杆菌GS8菌悬液稀释200倍和400倍后防治效果与化学药剂福美双防效相当；生枯草芽孢杆菌GS8菌悬液稀释600倍则显著低于两种化学药剂。试验证明，生枯草芽孢杆菌GS8菌悬液是防治葡萄炭疽病较好的生防制剂。综合考虑，生枯草芽孢杆菌GS8菌悬液稀释200～600倍是生枯草芽孢杆菌GS8菌悬液防治葡萄炭疽病的适宜浓度。

表3不同处理防治葡萄炭疽病的效果分析

Table 3 The control effect of C.coniella on different treatments in field

Claims

1.一种能防治葡萄炭疽病的生防菌株，其特征在于所述生防菌株为来源于葡萄植株表面的枯草芽孢杆菌GS8菌株，该枯草芽孢杆菌GS8保藏于中国微生物菌种保藏管理中心，保藏号为CGMCC.No：4525，保藏日期2011年1月5日。

2.一种能防治葡萄炭疽病的生防菌剂，其特征在于所述生防菌剂中的活性成分为枯草芽孢杆菌GS8，其中枯草芽孢杆菌GS8在所述生防菌剂中的菌数至少为5.0×10⁸cfu/ml。

3.权利要求2所述能防治葡萄炭疽病的生防菌剂的制备方法，其特征在于

(1)菌种制备，枯草芽孢杆菌GS8菌株，由C培养基活化培养，C培养基成分：蔗糖15g，牛肉膏10g，氯化铵2g，硫酸镁0.2g，琼脂18g，pH7，蒸馏水1000ml，温度25～30℃；

(2)将蔗糖1.5％，牛肉膏1％，氯化铵0.2％，硫酸镁0.02％，其余为水，配成母液，将母液按装液量为10％，发酵温度28℃，接种量2％，pH值7；150r/min振荡发酵培养96h，调整枯草芽孢杆菌GS8在培养液中的菌数为5.0×10⁸cfu/ml以上，即制备成能防治葡萄炭疽病的生防菌剂。

4.权利要求3所述能防治葡萄炭疽病的生防菌剂的用途，其特征在于将含有枯草芽孢杆菌GS8的生防菌剂稀释200～600倍后防治葡萄炭疽病。