KR101065262B1 - 항진균 물질과 식물 생장조절 물질을 동시에 생산하는신규한 바실러스 서브틸리스 ｅｂ-045(ｋａｃｃ-91355ｐ)및 그의 배양물을 포함한 식물병 방제제 - Google Patents

Abstract

본 발명은 항진균 물질과 식물 생장조절 물질을 동시에 생산하는 신규한 바실러스 서브틸리스 EB-045(KACC-91355P) 및 이를 이용한 식물병 방제제에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 다양한 식물병원균에 특이적인 항균 활성과 식물성장 조절물질을 동시에 생산하는 능력을 가지는 신규한 바실러스 속 미생물과 이를 배양하여 얻은 배양액 및 이를 포함하는 식물병원균 방제용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 사용된 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) EB-045(KACC-91355P)는 우리나라 전통 발효식품에서 분리된 식품용 미생물이므로 인간과 가축에 대해 이미 무독성과 안전성이 입증된 균주이며 또한 이를 이용하여 얻어진 조성물은 다양한 작물의 병원성 미생물에 대하여 광범위한 항균활성과 아울러 식물의 생장조절 작용을 보여주고 있다. 이에 본 발명은 친환경 농업에 관심이 고조되고 있는 시대적 요구에 부응한 친환경 미생물 농약 및 미생물 비료로서 안심하고 사용이 가능한 미생물 제제를 제공한다.

바실러스 서브틸리스, 식물병원균, 미생물비료, 미생물농약, 친환경 미생물복합 비드

Description

항진균 물질과 식물 생장조절 물질을 동시에 생산하는 신규한 바실러스 서브틸리스 ＥＢ-045(ＫＡＣＣ-91355Ｐ) 및 그의 배양물을 포함한 식물병 방제제{The novel antifungal and growth promoting bacteria Bacillus subtilis EB-045 (KACC- 91355P) and the bio-pesticides containing its' fermented broth}

본 발명은 다양한 식물병원균에 특이적인 항균 활성과 식물성장 조절물질을 동시에 생산하는 능력을 가지는 신규한 바실러스 속 미생물 및 이를 포함하는 식물병 방제제에 관한 것이다.

과거 우리나라의 농업정책은 식량 자급을 위해 다비(多肥)에 의한 최대 수확을 추구하는 것이 목표였으나 오늘날의 농정 기본방향은 저비용에 의한 적정 생산과 소비자가 선호하는 고품질의 농산물을 생산하는 쪽으로 점차 전환되고 있다. 지금까지 다수확을 달성하기 위하여 화학농약과 화학비료를 장기간 사용함으로써 식량생산성이 크게 증가된 것은 사실이지만 이들 화학물질의 남용에 따른 토양 생산성 감소, 작물 수량 감소, 품질저하 및 생태계 파괴 등 심각한 피해가 속출하고 있는바 세계적으로 화학비료 및 화학농약 사용에 따른 규제가 점점 더 강화되고 있는 실정이다.

따라서 소비자가 선호하는 고품질 농산물의 생산성을 증가시키기 위하여 화학적 방법이 아닌 환경 친화적인 새로운 방법이 필요하게 되었고, 그 중에서도 미생물비료 및 미생물농약 등 생물학적 방법의 개발이 시급해졌다. 즉, 앞으로 우리가 지향해야 할 농업은 환경 친화적이고, 부가가치가 높은 무공해 농산물을 생산하는 영농 시스템으로서, 이에 부응할 수 있는 경쟁력 있는 새로운 형태의 생물학적 조절법이 필연적으로 연구개발 되어야 한다.

최근 유엔환경개발회의(UNCED)는 각국의 화학농약 사용량을 25%씩 줄이도록 권장하고 있으며, 우리나라도 2010년까지 화학비료는 40%, 화학농약은 50%까지 사용량을 감축시키겠다고 발표한 바 있다. 현재, 우리나라의 화학비료 사용량은 선진국에 비하여 최고 223배나 높다. 환경부가 취합한 경제협력개발기구(OECD) 회원국의 98년 비료 사용량 통계를 보면, 한국의 질소와 인 사용량은 km2당 22.3톤과 10.6톤이었다. 이것은 OECD 회원국의 평균 2.1톤과 0.9톤에 비해 10.6배와 11.8배 많은 것이다.

화학비료와 화학농약의 사용량을 대폭 감축하면서도 농업생산력을 유지하기 위해서는 대체 농약 및 비료의 개발이 불가피한 바, 미생물비료 및 미생물농약이 화학비료와 화학농약을 대체할 유일한 대안이라고 할 수 있다.

최근, 우리나라에서도 화학농약을 대체할 수 있는 저독성 또는 무독성의 환경진환적인 생물농약의 개발이 활발히 수행되고 있다. 식물 병원성균에 대한 항진균 활성을 보이는 미생물종 및 미생물 방제제는 이미 다수 공개되어 있으나 인간과 가축에 무해한지 여부가 확실히 증명되지 않은 채 사용되고 있거나 심지어 식중독 을 유발할 가능성이 있는 균주가 미생물제제로 사용되고 있는 실정이다.

종래에는 대한민국 등록특허 10-0431617, 0431614, 0431613 및 0431595 에서는 바실러스 서브틸리스 이비엠 3, 이비엠13, 이비엠31, 이비엠99 균주를 각각 이용하여 고추탄저균과 고추역병, 문고병 입고병, 도열병, 사과곰팡이병 등 다양한 식물병원균에 대한 항균활성을 가지는 미생물농약의 제조방법에 대해 기술하고 있다. 그리고 등록특허10-0535912는 바실러스 아밀로리퀴페이션서 케이티지비0202 균을 참나무 잎에서 분리하여 배양하고 그 배양액에서 부탄올 추출물을 얻음으로서 식물병원균에 효과적인 방제방법을 제공하고 있으며 등록특허 10-0522714에서는 바실러스 서브틸리스 KS03균주에서 항균물질을 분리하여 탄저병 방제효과를 확인하고 있다. 또한, 등록특허 10-0574346에서는 고추 뿌리에서 분리한 바실러스 서브틸리스 EB072 균주를 사용하여 화이트 카본이나 카올린 등 담체를 이용하여 식물방제용 미생물제제를 제조하고 있으며 그 외 등록특허 10-0346313, 10-0755465, 10-0634402 및 0737862 등에서는 송진, 천연유기황, 커큐민, 주박 등을 이용한 식물방제제의 제조방법이 제안되어 있다.

상기와 같이 미생물방제제로서 널리 사용되고 있는 바실러스 속의 미생물 중에는 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)처럼 다양한 항균활성과 발효능력 외에 인체에 설사와 구토 등 식중독 증상을 일으키는 균들도 일부 있을 수 있기 때문에 사전에 사용 균주의 안전성을 확인할 필요가 있다. 또한, 실험실 수준에서 항균효과가 확인되었더라도 현장 적용실험에서는 다른 결과가 나올 수 있으므로 현장 포장실험 결과도 충분히 확보하여야 한다. 그러나 상기 발명들에 사용된 균주들은 모 두 인축에 대한 안전성의 여부가 확보되지 않았으며, 적용 대상이 되는 식물병원성미생물에 대한 항균 활성 자료와 현장적용 실험결과의 부재, 그리고 배양액에서의 항균활성 측정 자료도 다소 부족한 편이다. 또한 대부분 단순히 항균력에 의한 방제 효과만으로 미생물제제로 이용되고 있거나 항균력이 있는 천연 추출물질이나 천연담체 등에 고정화하는 방법으로 제제화하는 수준에 머무르고 있는 실정으로 아직까지는 항균 활성과 아울러 식물성장 촉진효과를 같이 보여 주는 미생물을 이용하여 미생물제제를 생산하는 선행기술은 보고되고 있지 않다. 또한, 다양한 식물 병원성 곰팡이균에 광범위한 항균활성과 아울러 식물생장촉진 물질을 함께 분비함으로써 미생물 농약 및 미생물비료 기능을 같이 수행할 수 있는 안전성이 검정된 미생물제제의 개발은 아직 전무한 실정이다.

상기의 문제를 해결하기 위하여 인간과 가축에 무해성이 입증된 균주를 사용하여 식물병 방제제를 제조하고자 한다. 따라서 본 발명은 화학농약의 오남용으로 인한 환경오염, 병원균들의 내성 획득, 인간과 가축에 대한 독성문제 등을 해결하고 동시에 화학 비료의 남용으로 인한 토양의 척박화를 방지하기 위해 우리나라 전통적인 발효식품 제조에 오랫동안 사용되어온 식품용 미생물을 사용하여 친환경의 무독성 농약 및 비료 효과를 동시에 제공하는 미생물 및 그 제제를 생산하는 방법을 제공하고자 하였다.

본 발명은 식물병원성 미생물에 대한 항균활성 및 식물생장촉진 효과를 동시에 가지는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) EB-045(기탁번호 KACC-91355P)에 관한 것이다. 상기 바실러스 서브틸리스는 유효성분으로서 식물생장촉진 호르몬의 배양물을 포함하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 목적을 달성하기 위하여 전통장류 및 발효식품 제조에 널리 이용되어 왔거나 정상균총상으로 존재해 왔던 식품용 미생물들로부터 다양한 식물 병원성균에 광범위한 항균활성을 가지는 바실러스 속 미생물을 분리하였다. 보다 상세하게는 전통 메주와 청국장으로부터 분리한 20여 종의 바실러스균 중에서 1차로 항균활성이 우수한 7종류(EB-041, EB-042, EB-043, EB-045, EB-051, EB-053, EB-057)를 분리하였으며 그 중에서 다양한 효소 활성과 암모니아화 능력 그리고 식물성장 촉진 효과가 있는 인돌 아세트산(indol acetic acid)을 분비하는 균주를 선별한 후, 하기 서열번호 1에 나타낸 바와 같이 16s rDNA를 분석하여 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) EB-045로 명명하였고, 한국농업미생물자원센터(Korea Agricultural Culture Collection; KACC)에 기탁하여 기탁번호 KACC-91355P를 부여받았다.

바실러스 서브틸리스 EB-045는 PDA배지에서 30℃로 5일 ~ 7일간 배양하여 다양한 식물병원성 미생물 즉, 잿빛곰팜이균(보트리티스 시네리아, Botrytis cinerea), 고추탄저균(콜레토트리쿰 글로에오스포리오이데스, Colletotrichum gloeosporioides), 시들음병균(푸사리움 옥시스포룸, Fusarium oxysporum), 모잘록병균(피티움 울티뭄, Pythium ultimum), 줄기썩음병(라이족토니아 솔라니, Rhizoctonia solani), 균핵균(스클레로티니아 스클레로티오룸, Sclerotinia sclerotiorum) 등에 대하여 항균활성 여부를 검증하였고 아울러, 다양한 효소생산 능력 및 생리학적 활성에 대한 조사도 병행하였다.

먼저 전분 분해능은 1% 수용성전분을 포함한 LB배지에 그람 염색시약(Gram's iodine) 용액을 페트리 전체에 도포하여 투명환(clear zone) 형성여부로 아밀라아제(Amylase) 생성능을 판단하였고 지방산 분해능의 조사를 위한 리파아제(Lipase)의 분비능은 1% 트리뷰트린(Tributyrin)을 함유한 LB배지에서 콜로니 주변 크리스탈 물질 형성(powder-like zone) 여부와 1% 트윈(Tween) 20을 포함한 LB배지에서 투명환 형성여부로 판단하였다. 또한, 섬유소 분해효소인 셀룰라아제(Cellulase)는 0.5% CMC를 포함한 LB배지에서 콩고레드(Congo red-1mg/ml)를 페트리 디쉬 전체에 도포한 후, 콩고레드를 제거하고 1몰 NaCl로 표면 세척 후 연노랑색의 투명환 생성여부로 판단하였으며 펙티나아제(Pectinase)는 0.5% 펙틴을 포함한 LB배지에 0.1% 루테늄 레드(ruthenium red)를 페트리 전체에 도포한 후, 증류수로 세척하고 펙틴 분해효소를 처리하여 투명환과 펙틴- 메틸-에스테라제 형성(dark), 펙틴미분해(red)로 판단하였다.

식물생장에 영향을 미치는 여러 요소들도 탐색하였는데 우선적으로 암모니아화 작용(Ammonification)은 농작물 뿌리 주변의 미생물에 의해 유기태 질소가 무기태 질소로 전환되는 과정으로 식물이 직접 흡수하여 이용할 수 있는 유효질소원으로 식물의 생육촉진 효과를 나타내는데 유용하게 이용될 수 있으며, 또한 유해 곰팡이의 생육을 억제할 수 있으므로 그 효능은 펩톤수(1% peptone, 0.5% NaCl, pH 7)를 함유한 시험관에 균주 접종 후 배양하여 네슬러시약(Nessler's reagent) 0.5ml을 첨가하고 진한 노랑색과 갈색이 나타나면 암모니아 형성이 일어난 것으로 판정하였다. 그 결과는 하기 도 3에 나타낸 바와 같다.

토양에서 암모니아화 작용은 일반적인 세균, 방선균, 사상균 등 여러 종류의 미생물에 의하여 일어날 수 있지만, 주요한 미생물은 세균과 곰팡이이며, 이 작용은 주로 40 ~ 60℃에서 왕성하게 일어난다. 암모니아화 작용을 받아 생성된 암모니아태 질소는 식물이 직접 흡수 이용할 수 있는 유효태로서 주로 토양의 콜로이드에 흡착되어 쉽게 용탈되지 않는다.

아울러, 천연 옥신(Auxin)으로 알려진 인돌-아세트산(IAA; indole-3-acetic acid)의 생성여부도 조사하였는데 옥신은 대표적인 식물생장 호르몬으로서, 식물의 신장을 촉진시키는 작용 외에 뿌리 신장, 과실 형성 등을 촉진시키는 유용하게 이용될 수 있으므로 그 효능은 킹스 비(King's B) 배지에 트립토판(tryptophane)을 첨가한 시험관에 균주 접종 후 배양하여 살코우스키시약(Salkowski's reagent) 4ml을 첨가하고 530nm에서 최대 흡광도 빨간색이 나타나면 인돌-아세트산 형성이 일어난 것으로 판정하였다. 인돌-아세트산(IAA: indole-3-acetic acid)는 트립토판(Tryptophane)을 전구물질로 하여 생합성 되므로 킹스 비((King's B)배지에 트립토판(Tryptophane)을 첨가하여 인돌-아세트산(IAA) 생성능을 확인할 수 있다.

이에 본 발명에서는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) EB-045(기탁번호 KACC-91355P)의 배양체 및 그의 배양물을 포함한 식물병 방제제를 제공하고자 한다. 상기 식물병 방제제는 비드 형태인 것을 특징으로 한다. 본 발명은 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) EB-045 균주의 다양한 식물병원균에 대한 항균활성과 생리활성 촉진물질의 분비능력을 활용하여 미생물 농약과 미생물 비료의 효과를 동시에 발휘할 수 있도록 미생물 및 그의 배양액을 포함하는 식물병 방제제를 제조하였다.

본 발명은 다양한 식물병원성 진균에 대한 길항능과 식물생장촉진 물질의 분비능력을 동시에 가지고 있으며 오랫동안 인축에 무해한 것으로 증명된 전통 발효 미생물을 선별하여 그 미생물의 생리생화학적 특성 및 생리활성 메커니즘을 규명하여 미생물 농약과 미생물 비료로서의 이용가능성을 실제 현장적용 실험을 통하여 확인하였다. 또한 자연환경 조건하에서 그 능력을 확대 유지할 수 있는 방법을 모 색, 선별된 균주의 효율성을 검정함으로서 환경 친화적인 미생물 농약 및 토착 미생물 비료로서의 기능을 할 수 있는 친환경 미생물 농약 비료 복합제제 개발을 가능하게 하였다.

이하, 본 발명을 구체적인 실시예 보다 더 상세히 설명하고자 한다. 하지만, 본 발명은 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 사상과 범위 내에서 여러 가지 변형 또는 수정할 수 있음은 이 분야에서 당업자에게 명백한 것이다.

[실시예 1] 미생물의 분리 및 동정

전통장류 및 발효식품 제조에 널리 이용되어 왔거나 정상균총상으로 존재해 왔던 식품용 미생물들로부터 다양한 식물 병원성균에 광범위한 항균활성을 가지는 바실러스 속 미생물 분리를 위하여 80℃에서 10분간 열처리한 시료를 계단 희석하여 pH 7로 조정된 육즙한천평판배지(nutrient agar plate)에 도말하여 30℃에서 2-3일 배양한 후, 형성된 단일 집락을 순수분리 하였다. 분리된 균주들을 potato dextrose agar plate에 접종하여 대치배양에 의하여 Botrytis cinerea, Colletotrichum gloeosporioides, Fusarium oxysporum, Pythium ultimum, Rhizoctonia solani, Sclerotinia sclerotiorum의 생육을 억제하는 균주를 선별하고, 그 중 생육 저지대가 가장 큰 균주를 선정 분리하였다.

분리균주의 동정을 위해 생리학적 특성 조사를 실시하였으며 Cowan and Steel's manual for the identification of medical bacteria, Bergey's manual systematic bacteriology 및 API kit를 이용한 하기 신규 바실러스 속 미생물의 상 세한 생리적 및 생화학적 특징은 하기 표 1에 나타낸 바와 같다.

이상의 생리적 특성을 지닌 본 발명의 분리균을 바실러스 속으로 동정하고 바실러스 서브틸리스 EB-045로 명명하였다.

상기 바실러스 서브틸리스 EB-045는 한국농업미생물자원센터(Korea Agricultural Culture Collection; KACC)에 기탁하여 기탁번호 KACC-91355P를 부여받았다.

[실시예 2] 항진균능 실험 : 대치배양

주요 식물 평원성균인 잿빛곰팡이균(Botrytis cinerea), 고추탄저균(Colletotrichum gloeosporioides), 시들음병균(Fusarium oxysporum), 모잘록병균Pythium ultimum), 줄기썩음병(Rhizoctonia solani), 균핵균(Sclerotinia sclerotiorum)을 대상균주로 사용하였다. PDA 평판배지 중앙에 상기 대상균주 접종, 모서리에 바실러스 서브틸리스(B. subtilis) EB-045를 접종하여 25℃에서 24 ~ 48시간 배양하여 균사 생육 저지대 확인을 하였으며 결과는 하기 도 1a ~ 1f에 나타내었다.

[실시예 3] 항진균능 실험 : 페이퍼 디스크(paper disk)법

대상균주는 고추탄저균(Colletotrichum gloeosporioides)을 사용하였으며 사용배지는 아래 표 2와 같았다.

배양방법은 NB배지에서 30℃, 200rpm에서 18시간 배양한 전배양액 2%를 본 배양액(50ml/250ml 플라스크)에 접종하였다. 30℃, 200rpm에서 48시간 배양 후, 시 료 채취하여 14,000rpm에서 10분간 원심 분리하여 배양 상등액을 0.45㎛ 여과지로 제균하였다. PDA배지에 고추탄저균 포자 현탁액 100㎕를 도말하고 멸균된 여지에 제균된 배양상등액 100㎕를 적하하여 PDA배지에 둔 다음 25℃에서 배양하면서 저지대를 관찰하였고 그 결과는 하기 도 2와 같았다.

[ 실시예 4] 암모니아화 ( Ammonification ) 능력 조사

사용배지는 펩톤수(1% peptone, 0.5% NaCl, pH 7)를 사용하였으며 균주 접종 후, 30℃에서 200rpm으로 24시간 배양하였다. 네슬러 시약(Nessler's reagent) 0.5ml을 첨가하여 결과를 관찰 하였다. 그 결과, 하기 도 3a와 같이 옅은 노란색은 소량의 암모니아 생산으로, 진한 노랑에서 갈색은 최대 암모니아 생성으로 판단하였다.

[실시예 5] 인돌-아세트산 (IAA; indole-3-acetic acid) 생산능 테스트

사용배지는 하기 표 3의 킹스 비(King's B) 배지에 0.1% 및 0.02% 엘-트립토판(L-tryptophane)을 첨가하여 사용하였다.

균주 접종 후, 30℃에서 200rpm으로 1 ~ 3일 배양하면서 균체 생육도 및 IAA 생산량 측정과 균체 생육도를 660nm에서 측정하였다. 인돌아세트산 생산량은 시료 1ml에 살코우스키시약(Salkowski's reagent) 4ml을 혼합 후, 30분간 실온 방치한 후, 530nm에서 측정하였다. 분석결과는 표 4과 도 3b에 나타내었다.

[실시예 6] 효소 생산능력 조사

1) 아밀라아제(Amylase) : 사용배지는 1% 수용성전분(Soluble starch) 함유 LB 평판배지에서 균주 접종 후, 30℃에서 200rpm으로 48시간 배양하였다. 그람 염색시약(Gram's iodine)을 평판배지 전체에 30초간 도포하여 투명환 형성 여부로 결과를 관찰 하였다.

2) 셀룰라아제(Cellulase) : 사용배지는 0.5% 카복시메칠셀룰로스(Carboxymethylcellulose) 함유 LB 평판배지를 사용하였다. 균주 접종하여 30℃에서 200rpm으로 48시간 배양한 후, 콩고레드(Congo red, 1mg/ml)를 평판배지 전체에 15분간 도포하고 여분의 콩고레드를 따라낸 후, 1몰 NaCl로 표면을 15분간 세척하고 투명환 또는 노란색 형성 여부로 결과를 관찰 하였다.

3) 펙티나아제(Pectinase) : 사용배지는 0.5% 펙틴함유 LB 평판배지를 사용하였고 균주 접종 후, 30℃에서 200rpm으로 48시간 배양하였다. 0.02% 루테늄 레드(ruthenium red)를 평판배지 전체에 1시간 동안 도포한 후 증류수로 표면을 조심스럽게 세척한 후, 투명환 형성을 관찰 하였다.

4) 리파아제(Lipase) : 사용배지는 1% 트리뷰트린(Tributyrin)이 함유된 LB 평판배지였으며 균주 접종 후, 30℃에서 200rpm으로 48시간 배양 후, 콜로니 주변 크리스탈(또는 파우더) 물질 형성을 관찰 하였다.

5) 프로테아제(Protease) : 사용배지는 3% 탈지분유(skim milk) 함유 LB 평판배지를 사용하였고 균주 접종 후, 30℃에서 200rpm으로 48시간 배양 후, 투명환 형성을 관찰 하였다.

상기 실시예의 결과는 도 4a ~4e에 나타내었다.

[실시예 7] 친환경 미생물복합비드의 제조

알길산소다(sodium alginate)를 증류수에 녹여 3.5% 용액을 제조하고 pH를 4 로 조절한 후 바실러스 서브틸리스 EB-045의 배양액을 동량 혼합하였다. 2시간 동안 잘 교반된 혼합액을 10%의 탄산칼슘 용액에 분무하여 직경 1mm의 구형의 비드(bead)를 제조하였다. 이 비드는 새로운 탄산칼슘 용액에서 세척 후 점증제, 보조제 등과 혼합하여 액상제품에 직접사용하거나 분말 제품에 사용하기 위해 40℃ 사이에서 저온건조 하였다. 친환경 미생물복합비드 제조 결과는 도 5에 나타내었다.

[실시예 8] 야외재배실험

실시예 6에서 제조된 미생물복합비드를 이용한 야외재배실험은 대상작물로 열무(품종 : 신젠타 “무시로”)를 선정하여 60일간 재배실험을 실시하였다. 재배방법은 농가 하우스에서 원예용 상토인 (주)토비테크의‘메리트’와 마사토를 1:1로 섞어서 75cm× 40cm× 45cm 원예용 포트에 각각 대조구와 실험구를 배치하였고 각 처리구당 열무는 500개체 이상, 그리고 대조구를 제외한 실험구 포트에는 20g의 미생물복합비드를 파종 후 살포하였다. 재배기간 동안 시험제 이외에 다른 농약이나 비료는 전혀 처리하지 않았다. 토양 수분공급은 필요할 때마다 지하수로 공급하였다. 결과분석은 각 처리구에서 육안으로 평균적인 개체를 20포기씩 수확하여 지상부 무게, 엽 폭, 엽 장, 잎 수, 지하부 무게를 각각 측정하였다. 분석결과는 하기 표 5에 나타내었다.

도 1은 바실러스 서브틸리스 EB-045의 식물 병원균에 대한 항균활성의 결과이다.

a: 잿빛곰팡이균(Botrytis cinerea)

b: 고추탄저균(Colletotrichum gloeosporioides)

c: 토마토시들음병균/근부병균(Fusarium oxysporum)

d: 모잘록병균/입고병(Pythium ultimum)

e: 줄기썩음병균/벼문고병(Rhizictonia solani)

f: 균핵병균(Sclerotinia sclerotiorum)

도 2는 바실러스 서브틸리스 EB-045의 고추탄저균에 대한 성장 배지별 항균활성의 결과이다.

도 3은 바실러스 서브틸리스 EB-045의 식물 생장물질 분비능력의 결과이다.

a: Ammonification 생성능 - (좌측; 암모니아 생성 +), (우측; 대조구, 암모니아 생성 -)

b: Indoleacetic acid(IAA) 생성능 - (좌측 ; IAA 생성 +), (우측 : 대조구, IAA 생성 -)

도 4는 바실러스 서브틸리스 EB-045의 효소 생산능력의 결과이다.

a: Amylase

b: Carboxymethyl cellulase(CMCase)

c: Pectinase

d: Protease

e: Lipase

도 5는 친환경 미생물복합 비드 결과이다. (bar:1mm)

<110> KIM, GAP JIN <120> The novel antifungal and growth promoting bacteria Bacillus subtilis EB-045 (KACC-91355P) and the bio-pestcicdes containing its' fermented broth <160> 1 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 958 <212> DNA <213> Bacillus subtilis <400> 1 accttcggcg gctggctcct aaaaggttac ctcaccgact tcgggtgtta caaactctcg 60 tggtgtgacg ggcggtgtgt acaaggcccg ggaacgtatt caccgcggca tgctgatccg 120 cgattactag cgattccagc ttcacgcagt cgagttgcag actgcgatcc gaactgagaa 180 cagatttgtg ggattggctt aacctcgcgg tttcgctgcc ctttgttctg tccattgtag 240 cacgtgtgta gcccaggtca taaggggcat gatgatttga cgtcatcccc accttcctcc 300 ggtttgtcac cggcagtcac cttagagtgc ccaactgaat gctggcaact aagatcaagg 360 gttgcgctcg ttgcgggact taacccaaca tctcacgaca cgagctgacg acaaccatgc 420 accacctgtc actctgcccc cgaaggggac gtcctatctc taggattgtc agaggatgtc 480 aagacctggt aaggttcttc gcgttgcttc gaattaaacc acatgctcca ccgcttgtgc 540 gggcccccgt caattccttt gagtttcagt cttgcgaccg tactccccag gcggagtgct 600 taatgcgtta gctgcagcac taaggggcgg aaacccccta acacttagca ctcatcgttt 660 acggcgtgga ctaccagggt atctaatcct gttcgctccc cacgctttcg ctcctcagcg 720 tcagttacag accagagagt cgccttcgcc actggtgttc ctccacatct ctacgcattt 780 caccgctaca cgtggaattc cactctcctc ttctgcactc aagttcccca gtttccaatg 840 accctccccg gttgagccgg gggctttcac atcagactta naaccgcctg cgagcccttt 900 acgcccaata ttccggacac gctgccacct acgtattacc gcgctgctgg cacgtagt 958

Claims (3)

1. 잿빛곰팡이균(Botrytis cinerea), 고추탄저균(Colletotrichum gloeosporioides), 시들음병균(Fusarium oxysporum), 모잘록병균(Pythium ultimum), 줄기썩음병균(Rhizoctonia solani) 및 균핵균(Sclerotinia sclerotiorum)으로부터 선택되는 1종 이상의 식물병원성 미생물에 대한 항균활성, 아밀라아제, 셀룰라아제, 펙티나아제, 리파아제, 프로테아제 및 인돌 아세트산의 식물생리활성 물질의 분비능 및 암모니아생성작용(ammonification)을 동시에 가지는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) EB-045(기탁번호 KACC-91355P) 균주.
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