CN106367368A - 一种生防性复合微生物菌液、生物有机肥及生产方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种生防性复合微生物菌液，所述生防性复合微生物菌液包括枯草芽孢杆菌LVLE14菌液和解淀粉芽孢杆菌LVLE15菌液。同时提供了用复合微生物菌液生产生物有机肥，并提供了生物有机肥的生产方法。本发明的生防性复合肥料，对于炭疽病有突出的防治效果，施用后兼有防病和肥效功效，可提高作物抗病性，以及对肥料的吸收和利用率，保持作物生长健壮，反过来也能促进生防菌的繁殖提高作物抗病能力，并有助于形成良好的农业生态体系。本发明的生防性生物有机肥，对炭疽病有突出的抑制效果，具有较大的推广意义。

Description

一种生防性复合微生物菌液、生物有机肥及生产方法
技术领域
本发明涉及一种能防除多种作物病害复合微生物菌液，具体涉及这种生防性菌液、生物肥料以及生产方法。
背景技术
目前我国防治病害基本上是采用化学农药，化学农药防治以其毒性强、防治效果好、成本低而普遍受农民欢迎。我国每年生产的农药约250多种，加工制剂500多种，原药生产80多万吨，位居世界第2位。农药年用量为80-100万吨，居世界首位。但是大量使用化学农药，一是对环境造成了农药污染，二是带来了农产品农药残留问题，对人类健康造成了威胁。为减少化学农药的使用，近年来农业防治、生物绿色防治在国内外逐步兴起。
开发生物农药及具有生防特性的微生物菌肥已经成为一种国际化的趋势。世界各国已在采取实际步骤减少化学农药的使用，如美国EPA在90年就宣布撤消91种化学农药的登记。生物农药的开发和应用得到广泛的关注和重视，目前已成为国际上农药工作领域新的研发热点。关于土传病害的生物防治国外20年代开始研究，如1921年C.Hartley报道可以用十几种常见土壤腐生真菌和细菌防治树苗的腐霉根腐病。40、50年代开发利用拮抗性放线菌及所产生的抗生素，60年代转向寻找其他拮抗微生物和生防技术研究。国际上报道的应用于土传病害的生防因子很多，包括真菌、细菌、病毒噬菌体和防线菌等，其中部分产品用于商品化生产，且在病虫害综合防治和农业可持续发展中发挥着越来越重要的作用。目前，世界上生物农药的产值每年都在10-20％的速度在增长。减少化学合成农药的使用，发展生物农药已成为一种趋势和方向可以预见。
国内生物农药的开发以农用抗生素为主，代表性产品包括井岗霉素、灭瘟素、多抗霉素，春雷霉素，有效霉素和灭粉霉素等用来防治真菌病害，链霉素、青霉素和土霉素等用来防治细菌病害；目前开发成功的生物活体农药还有亚宝、力宝、蜡质芽孢杆菌、增产菌(植物生 长调节剂)、K84、E26、假单胞杆菌和荧光假单孢等细菌制剂，用于土传病害的防治。其中中国农业大学开发的抗根癌菌剂K84目前已注册登记，产品为2百万cfu/毫升放射土壤杆菌湿粉，对核果类(桃、李、樱桃、杏等)等根癌病效果达100％；对仁果类和林木、花卉根癌病有较好效果。云南农大开发的芽孢杆菌菌剂目前也已注册登记，产品为10亿/g芽孢杆菌WP(百抗)，对水稻纹枯病具有良好防效。其它部分科研成果也已应用于生产实践(尤其是无公害食品生产基地)，并取得了良好的生态，社会和经济效益。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题在于提供一种具有良好生防效果的复合微生物菌液，尤其是对黄瓜病害具有良好的生防效果的菌株。本发明要解决的另一个技术问题，是利用该菌株生产生物肥料，质量符合农业部《生物有机肥》(NY/T798-2015)的要求。本发明还提供该肥料的生产方法。
本发明的技术方案是，一种生防性复合微生物菌液，所述生防性复合微生物菌液包括枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)LVLE14菌液和解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamylolique faciens)LVLE15菌液；所述复合微生物菌液中枯草芽孢杆菌LVLE14和解淀粉芽孢杆菌LVLE15的质量比为2-10:1-2。这两种菌液分别是枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)LVLE14和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylolique faciens)发酵生产得到的。
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)LVLE14，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期是2016年6月20日，保藏编号是CGMCC No.12639。
解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylolique faciens)LVLE15，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期是2016年6月20日，保藏编号是CGMCC No.12640。
优选的是，所述复合微生物菌液中枯草芽孢杆菌LVLE14和解淀粉芽孢杆菌LVLE15的质量比为3-8:1。
根据本发明的生防性复合微生物菌液，优选的是，所述枯草芽孢杆菌LVLE14菌液发酵生产的发酵条件为：pH6.5-7.5，培养温度为20-40℃，起始转速100-200rpm，通气量为0.5-1vvm，培养35-40小时，发酵中后期行成芽孢，芽孢率高达95％以上，发酵液中的有效活菌数在100亿个/ml以上；
优选的是，所述解淀粉芽孢杆菌LVLE15菌液发酵生产的发酵条件为：pH为6.5-8.0，培养温度为30-45℃，起始转速120-200rpm，通气量为0.5-1vvm，培养35-45小时，发酵中后期行成芽孢，芽孢率高达93％以上，发酵液中的有效活菌数在150亿个/ml以上。
即上述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)LVLE14菌液的有效活菌数在100亿个/ml以上，解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylolique faciens)LVLE15的有效活菌数在150亿个/ml以上。
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)LVLE14特性：芽孢0.6-0.9×1.0-1.5微米，椭圆到柱状，无荚膜，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，革兰氏阳性，最适宜温度30-40℃，pH6.5-7.5。
解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylolique faciens)LVLE15特性：菌体杆状，大小0.3-2.2×1.2-7.0微米。革兰氏染色阳性，最适宜生长温度25-35℃，pH中性。
优选的是，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)LVLE14菌株发酵培养基配方：可溶性淀粉20-40g、黄豆粉5-30g、蔗糖1-10g、蛋白胨2-8g、豆粕1-6g、K2HPO4 1-5g、MgSO40.2-3g、泡敌0.1-2g，补水至1000毫升。
优选的是，解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylolique faciens)LVLE15菌株发酵培养基配方为玉米粉20-30g、豆饼粉20-30g、尿素0.2-2g、蔗糖1-5g、K2HPO40.5-2.5g、MgSO40.1-0.6g、MnSO40.05-0.5g、泡敌0.1-0.5g，pH 7.2，然后稀释到1000ml。
将上述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)LVLE14菌液和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylolique faciens)LVLE15菌液分别吸附后混合，得到生防性复合微生物菌剂，所述生物有机肥包括2-10％的生防性复合微生物菌剂和固体有机原料。2-10％的生防性复合微生物菌剂是占肥料总重量的质量比。
优选的是，所述固体有机原料的有机质含量为30％以上。
优选的是，所述固体有机原料选自氨基酸生产过程的水解渣或者食用油生产过程的油渣。
本发明还提供了一种生防性生物有机肥的生产方法，
将固体有机原料的pH控制在5.0-8.0，粉碎；将权利要求1所述枯草芽孢杆菌LVLE14和解淀粉芽孢杆菌LVLE15分别发酵生产，所得菌液按照2-10:1-2混合后，用吸附介质吸附，得到生防性复合微生物菌剂，将复合微生物菌剂按照2％-10％质量比加入到固体粉状有机原料中，得到固体生物有机肥；
或者，将固体有机原料的pH控制在5.0-8.0，粉碎；将权利要求1所述枯草芽孢杆菌LVLE14和解淀粉芽孢杆菌LVLE15分别发酵生产，所得菌液分别用吸附介质吸附后，按照枯草芽孢杆菌LVLE14：解淀粉芽孢杆菌LVLE15为2-10:1-2的质量比混合，得到生防性复合微生物菌剂，将复合微生物菌剂按照2％-10％质量比加入到固体粉状有机原料中，得到固体生物有机肥。
当菌液先单独吸附后复合时，所述复合微生物菌剂中枯草芽孢杆菌LVLE14和解淀粉芽孢杆菌LVLE15的质量比为2-10:1-2。
优选的是，所述复合微生物菌剂中枯草芽孢杆菌LVLE14和解淀粉芽孢杆菌LVLE15的质量比为3-8:1。菌液与吸附介质的质量比一般控制在1：2-6。
优选的是，所述生物有机肥中还可以加入氮、磷、钾肥料的一种或一种以上。也可以根据土壤和作物需要，加入微量元素肥料。
本发明还提供了上述生防性复合微生物菌液在抑制作物病害尤其是抑制炭疽病上的应用。
并提供了上述生防性生物有机肥在抑制作物病害尤其是抑制炭疽病上以及增加肥效的应用。
优选几种原料的主要成分：
酵母废液：购自安琪酵母股份有限公司。主要成分如下：
表1：酵母浓缩液主要营养成分表
水解渣来源于味精厂、赖氨酸厂等氨基酸的生产过程。经过处理后的水解渣的基本性状如下：
表2：处理后水解渣(粉状)的基本性状
油渣来自于上海鲲鹏环保科技有限公司，主要成分如下：
表3：油渣主要营养成分表
本发明的有益效果
本发明是一种具有生物防治功能的生物有机肥及其生产方法，利用富含有机质的原料作物肥料的原料，再与拮抗菌的发酵液混合后制成复合微生物，该产品与目前市场上的产品相比具有如下优点：
1)肥料产品中富含拮抗菌，而且是复合型的生防拮抗菌，其生防效果非常显著，肥料中该菌株的含量高达1亿个/g/ml以上，施入土壤后能形成优势菌群，并在土壤中存活下来。
2)本发明选择的有机原料优选有机质含量较高，而且养分含量较高的，基本不需要添加无机养分。
3)本发明产品对两种菌复合后，对于炭疽病的防效达到了88.3％，比单独使用两菌的防效明显增强。两株菌分别对炭疽病不具有很好的抑菌效果，而通过比例复配到一起后对炭疽病具有极其显著的抑制效果。其原因可能在于，枯草芽孢杆菌的代谢物为解淀粉芽孢杆菌的繁殖提供了一些必要的促生长因子，从而促进解淀粉芽孢杆菌快速繁殖并产生大量的拮抗物质，然后通过这类物质导致炭疽病的病菌不能正常的生长。
4)生防性生物有机肥施用后兼有防病和肥效功效，可提高作物抗病性，以及对肥料的吸收和利用率，保持作物生长健壮，反过来也能促进生防菌的繁殖提高作物抗病能力，并有助于形成良好的农业生态体系。
5)在减少化肥用量的同时能减少农药用量，降低农药残留与污染，对于可持续农业和绿色食品生产的发展及人民生活质量的提高具有重要作用。
具体实施方式
枯草芽孢杆菌菌株分离过程
1.土样采集和处理
从上海、嘉善、平湖等地黄瓜种植区疫病发生严重的田地，利用五点采样法从生长健康黄瓜根际采取土样。采样时铲去表层5cm土层，取新鲜土样500g，用保鲜袋保存。称取土样10g加入装有90mL无菌水的三角瓶中(内装玻璃珠若干)，30℃、120r/min振荡30min，静置后获得土壤悬液。
2.生防细菌的筛选
将土壤悬液稀释成10-4、10-5、10-6浓度，吸取不同稀释度的土壤悬液100μL涂布于NA培养基上，置于30℃培养48小时，挑取颜色、形态等不同的细菌单菌落并纯化、保存。采用平板对峙法测定分离到的细菌对黄瓜白粉病的抑菌活性。将黄瓜白粉病在PDA平板上活化，用打孔器在菌落边缘打取直径6mm菌块，接种到PDA平板中央。培养1天后在距离黄瓜白粉病菌块2cm处的4个对接点接种待测细菌，28℃培养，3-5天后观察抑菌结果，每个处理设3个重复。选取抑菌效果好的菌株并编号LVLE-14。
3.拮抗菌株的鉴定
3.1菌株生理生化实验：将筛选到的抑菌效果的菌株进行菌落形态观察、显微镜形态观察、革兰氏染色、芽孢染色、水解淀粉试验、甲基红试验(M.R)、V.P试验、柠檬酸盐试验、接触酶反应试验、明胶液化试验、运动性试验等主要形态和生理生化指标鉴定。初步鉴定LVLE-14为枯草芽孢杆菌属。
3.2菌株的的16S rDNA序列分析鉴定
通过对细菌进行16S rDNA测序和比较分析，结果表明，LVLE-14的16S rDNA与枯草芽孢杆菌的16S rDNA序列同源性达99％。比对结果与细胞分类法得到的鉴定结果一致。
解淀粉芽孢杆菌菌株分离过程
1.土样采集和处理
从上海、嘉善、平湖等地黄瓜种植区疫病发生严重的田地，利用五点采样法从生长健康黄瓜根际采取土样。采样时铲去表层5cm土层，取新鲜土样500g，用保鲜袋保存。称取土样10g加入装有90mL无菌水的三角瓶中(内装玻璃珠若干)，30℃、120r/min振荡30min，静置后获得土壤悬液。
2.生防细菌的筛选
将土壤悬液稀释成10-4、10-5、10-6浓度，吸取不同稀释度的土壤悬液100μL涂布于NA培养基上，置于30℃培养48小时，挑取颜色、形态等不同的细菌单菌落并纯化、保存。采用平板对峙法测定分离到的细菌对黄瓜白粉病的抑菌活性。将黄瓜白粉病在PDA平板上活化，用打孔器在菌落边缘打取直径6mm菌块，接种到PDA平板中央。培养1天后在距离黄瓜白粉病菌块2cm处的4个对接点接种待测细菌，28℃培养，3-5天后观察抑菌结果，每个处理设3个重复。选取抑菌效果好的菌株并编号LVLE-15。
3.拮抗菌株的鉴定
3.1菌株生理生化实验：将筛选到的抑菌效果的菌株进行菌落形态观察、显微镜形态观察、革兰氏染色、芽孢染色、水解淀粉试验、甲基红试验(M.R)、V.P试验、柠檬酸盐试验、接触酶反应试验、明胶液化试验、运动性试验等主要形态和生理生化指标鉴定。初步鉴定LVLE-15为解淀粉芽孢杆菌属。
3.2菌株的的16S rDNA序列分析鉴定
通过对细菌进行16S rDNA测序和比较分析，结果表明，LVLE-15的16S rDNA与解淀粉芽孢杆菌的16S rDNA具有高度的同源性，同源性达99％。比对结果与细胞分类法得到的鉴定结果一致。
实施例1
1、微生物菌液：枯草芽孢杆菌LVLE14，菌株发酵培养基配方为可溶性淀粉30g、黄豆粉15g、蔗糖5g、蛋白胨5g、豆粕3g、K2HPO43g、MgSO41g、泡敌0.5g，补水至1000毫升。微生物菌液中有效活菌数为9.8×109个/毫升。
解淀粉芽孢杆菌LVLE15：菌株发酵培养基配方为玉米粉25g、豆饼粉25g、尿素1g、蔗糖3g、K2HPO41.2g、MgSO4 0.3g、MnSO40.2、泡敌0.3g，pH 7.2。微生物菌液中有效活菌数为1.49×1010个/毫升。
发酵后的菌液按枯草芽孢杆菌LVLE14与解淀粉芽孢杆菌LVLE15质量比3:1混合。
将混合后的菌液用稻壳粉吸附，菌液与稻壳粉的比例为1:3.5，得到复合菌剂。混合后复合菌剂的有效活菌数为2.4×109个/克以上，水分保持在30％以内。
2、取样。氨基酸生产过程中产生的水解渣，取自河南莲花味精股份有限责任公司；
3、pH调理：将大块水解渣敲碎成粉末或小颗粒，与粉状石灰按水解渣：石灰＝4：1混合，用链条粉碎机粉碎后堆放8-12小时，让其充分反应；
4、倒翻：用铲车或人工翻堆，让反应后的物料温度冷却达到常温；
5、粉碎：对冷却到常温的水解渣进行测定，基本性质见表4，重金属含量远远低于生物有机肥的行业标准，没有进行测定；
6、配料。在搅拌机中加入缓慢加入粉状水解渣，以及按重量比4％的比例加入制备好的复合微生物菌剂。
7、混合。搅拌机搅拌3-5分钟，使料充分混合均匀。
8、粉碎。通过粉碎机使物料的细度达到60-80目。
9、包装、计量、入库。
实施例2
1、固体微生物菌剂的制备：将枯草芽孢杆菌LVLE14发酵后的菌液用草炭按菌液：草炭1:4吸附，将生防性解淀粉芽孢杆菌LVLE15发酵后的菌液用草炭按菌液：草炭＝1：4的比例进行吸附；两种菌剂4:1混合，混合后复合菌剂的有效活菌数量达3.4×109个/克以上，水分保持在30％以内。
2、取样。氨基酸生产过程中产生的水解渣，取自河南莲花味精股份有限责任公司；
3、pH调理：将大块水解渣敲碎成粉末或小颗粒，与粉状石灰按水解渣：石灰＝4：1混合，用链条粉碎机粉碎后堆放8-12小时，让其充分反应；
4、倒翻：用铲车或人工翻堆，让反应后的物料温度冷却达到常温；
5、粉碎：对冷却到常温的水解渣进行测定，基本性质见表4，重金属含量远远低于生物有机肥的行业标准，没有进行测定；
表4：处理后水解渣的基本性状
6、配料。在搅拌机中加入缓慢加入粉状水解渣，以及按重量比8％的比例加入制备好的复合微生物菌剂。
7、混合。搅拌机搅拌3-5分钟，使料充分混合均匀。
8、粉碎。通过粉碎机使物料的细度达到60-80目。
9、包装、计量、入库。
实施例3
1、固体微生物菌剂的制备：将枯草芽孢杆菌LVLE14发酵后的菌液用草炭按菌液：草炭1:4吸附，将生防性解淀粉芽孢杆菌LVLE15发酵后的菌液用草炭按菌液：草炭＝1：5的比例进行吸附，两种菌剂2:1混合，混合后复合菌剂的有效活菌数量达2.5×109个/克以上，水分保持在30％以内。
2、取样。色拉油生产过程中吸附产生的油渣，取自上海鲲鹏环保科技有限公司；
3、pH调理：将大块油渣敲碎成粉末或小颗粒，与粉状石灰按水解渣：石灰＝4：1混合，用链条粉碎机粉碎后堆放8-12小时，让其充分反应；
4、倒翻：用铲车或人工翻堆，让反应后的物料温度冷却达到常温；
5、粉碎：对冷却到常温的水解渣进行测定，基本性质见表4，重金属含量远远低于生物有机肥的行业标准(见表1)，没有进行测定；
表4：处理后油渣的基本性状
6、配料。在搅拌机中加入缓慢加入粉状油渣，以及按重量比7％的比例加入制备好的复合微生物菌剂。
7、混合。搅拌机搅拌3-5分钟，使料充分混合均匀。
8、粉碎。通过粉碎机使物料的细度达到60-80目。
9、包装、计量、入库。
实施例4
1、固体微生物菌剂的制备：将枯草芽孢杆菌LVLE14发酵后的菌液用草炭按菌液：草炭1:4吸附，将生防性解淀粉芽孢杆菌LVLE15发酵后的菌液用草炭按菌液：草炭＝1：3的比例进行吸附，两种菌剂3:1混合，混合后复合菌剂的有效活菌数量达3.8×109个/克以上，水分保持在30％以内。
2、将氨基酸生产过程中的水解渣处理粉碎(同实施例2)；
3、在搅拌机中加入缓慢加入粉状水解渣，以及按重量比6％的比例加入制备好的复合微生物菌剂。
其他同实施例2。
表5：不同原料生产的生物有机肥产品质量检测结果
试验例
1实验菌株
1.1芽孢杆菌
解淀粉芽孢杆菌LVLE15和枯草芽孢杆菌LVLE14
1.2病原真菌
炭疽病
2.实验方法
2.1菌株活化
筛选细菌经NA平板活化后备用，病原真菌PDA平板经过活化后备用。
2.2芽孢过滤液的制备
接种芽孢到NB培养基中28℃、200rpm培养48h，常温、5000g离心5min得上清。再经过0.22um过滤器过滤除菌备用。枯草芽孢杆菌LVLE14与解淀粉芽孢杆菌LVLE15的比例是3：1.
2.3检测平板制备
以1:10比例添加过滤液到50℃10/9倍浓度PDA培养基中混匀倾注平板，每皿20ml。以1:10比例添加NB培养基替代发酵过滤液作为对照。
2.4病原真菌接种
用打孔器(5mm)打取病原菌碟置于相应平板中央，以对照平板上接病原菌为对照，试验设3个重复。
2.5培养观察
将培养皿置于28℃下培养，于第3天、第5天观察检测，十字交叉法测量病原菌落直径。算出平均值，计算抑菌率。
抑菌率(％)＝[(对照平均直径-实验组平均直径)/对照平均直径]×100％
3实验结果表
表：不同菌株对炭疽病的抑制效果比较
拮抗菌 抑菌率(％)
枯草芽孢杆菌LVLE14 8.7
解淀粉芽孢杆菌LVLE15 34.9
复合菌剂(枯草芽孢杆菌+解淀粉芽孢杆菌) 88.3
从以上试验效果可以看出，本发明所用的枯草芽孢杆菌LVLE14和解淀粉芽孢杆菌LVLE15对炭疽病单独的抑制率分别为8.7％和34.9％，但是复合后的防效为88.3％。
上表可以看出，本发明在进行复合试验的拮抗和抑菌试验时发现，含有枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌的复合菌剂对炭疽病具有极其显著的抑制作用。
试验例：
西瓜田间试验效果
试验处理：
A：亩施用草炭生产的生防性的生物有机肥基质120kg；
B：亩施用草炭生产的生防性生物有机肥120kg；
C：亩施用氨基酸水解渣生产的生防性生物有机肥基质120kg；
D：亩施用氨基酸水解渣生产的生防性生物有机肥120kg。
采用实施例4的肥料，肥料有效活菌数≥2×107/克，基质是将生物有机肥灭菌。小区面积20m2，设3次重复，随机区组排列。所有试验处理均作基肥，后期施肥及管理及习惯施肥相同。用新复极差法检验显著性。
表7不同处理对西瓜农艺性状的影响
从表7可以看出：用氨基酸水解渣生产的生物有机肥比用草炭生产的生物有机肥的西瓜主蔓长增加15-23cm，生理节位增加4.8-5.5cm，结瓜数增加0.03-0.17个/株，单瓜重增加0.43-0.51kg，说明氨基酸水解渣生产的生物有机肥能够比较全面的提供西瓜生长所需的养分，明显提高单瓜重量，使西瓜的植株健壮，叶片增多，使营养生长和生殖生长更趋合理。施用肥料和施用基质相比施肥处理的西瓜蔓长、生理节位和单瓜重都高于基质，这说明生物肥中的有益微生物在土壤中有很强的活性，具有明显的肥效作用。
表8不同处理对西瓜炭疽病的抑制效果
本试验是在北京郊区炭疽病发生比较严重的几个瓜菜保护地进行的防治试验，施用氨基酸水解渣生产的生物肥料的出苗率、病苗率、防治效果和增产幅度均高出利用草炭生产的生物肥料。说明氨基酸水解渣生产的生物有机肥能够显著降低西瓜炭疽病防病的发病率，显著增加西瓜的出苗率，降低病苗率，从而达到增产的目的；施用草炭生产的肥料和基质相比，肥料的出苗率、防治效果和增产幅度高于施用基质，但是增加的幅度不明显，效果不显著，说明生防菌在草炭中的作用不是很明显；施用氨基酸水解渣基质和肥料相比，肥料的出苗率、病苗率、防治效果和增产幅度均高于施用基质，说明生防菌在土壤中有很强的活性，对西瓜炭疽病防病有显著的抑制效果。
从以上试验效果可以看出：用氨基酸水解渣生产的生防性生物有机肥能显著提高生物肥料的肥效，对作物的病害有明显的防治效果，大大减少了病苗率，增产增收的同时，能够比较全面的提供西瓜生长所需的养分，明显提高单瓜重量，使西瓜的植株健壮，叶片增多，使营养生长和生殖生长更趋合理，另一方面还可起到废物利用、减少资源浪费、保护环境、节约矿产资源、减少化肥用量、降低农民负担、提高农产品品质的作用。

Claims (10)

1.一种生防性复合微生物菌液，其特征在于：所述生防性复合微生物菌液包括枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)LVLE14菌液和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)LVLE15菌液；所述复合微生物菌液中枯草芽孢杆菌LVLE14和解淀粉芽孢杆菌LVLE15的质量比为2-10:1-2。
2.根据权利要求1所述的生防性复合微生物菌液，其特征在于：所述复合微生物菌液中枯草芽孢杆菌LVLE14和解淀粉芽孢杆菌LVLE15的质量比为3-8:1。
3.根据权利要求1所述的生防性复合微生物菌液，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌LVLE14菌液发酵生产的发酵条件为：pH6.5-7.5，培养温度为20-40℃，起始转速100-200rpm，通气量为0.5-1vvm，培养35-40小时，发酵中后期行成芽孢，芽孢率高达95％以上，发酵液中的有效活菌数在100亿个/ml以上。
4.根据权利要求1所述的生防性复合微生物菌液，其特征在于：所述解淀粉芽孢杆菌LVLE15菌液发酵生产的发酵条件为：pH为6.5-8.0，培养温度为30-45℃，起始转速120-200rpm，通气量为0.5-1vvm，培养35-45小时，发酵中后期行成芽孢，芽孢率高达93％以上，发酵液中的有效活菌数在150亿个/ml以上。
5.一种生防性生物有机肥，其特征在于：将权利要求1所述枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)LVLE14菌液和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylolique faciens)LVLE15菌液分别吸附后混合，得到生防性复合微生物菌剂，所述生物有机肥包括2-10％的生防性复合微生物菌剂和固体有机原料。
6.权利要求5所述生防性生物有机肥的生产方法，其特征在于：
将固体有机原料的pH控制在5.0-8.0，粉碎；将权利要求1所述枯草芽孢杆菌LVLE14和解淀粉芽孢杆菌LVLE15分别发酵生产，所得菌液按照2-10:1-2混合后，用吸附介质吸附，得到生防性复合微生物菌剂，将复合微生物菌剂按照2％-10％质量比加入到固体粉状有机原料中，得到固体生物有机肥；
或者，将固体有机原料的pH控制在5.0-8.0，粉碎；将权利要求1所述枯草芽孢杆菌LVLE14和解淀粉芽孢杆菌LVLE15分别发酵生产，所得菌液分别用吸附介质吸附后，按照枯草芽孢杆菌LVLE14：解淀粉芽孢杆菌LVLE15为2-10:1-2的质量比混合，得到生防性复合微生物菌剂，将复合微生物菌剂按照2％-10％质量比加入到固体粉状有机原料中，得到固体生物有机肥。
7.根据权利要求6所述的生防性生物有机肥的生产方法，其特征在于：所述生物有机肥中还可以加入氮、磷、钾肥料的一种或一种以上。
8.根据权利要求6所述的生防性生物有机肥的生产方法，其特征在于：所述固体有机原料的有机质含量为30％以上。
9.权利要求1所述生防性复合微生物菌液在抑制作物病害尤其是抑制炭疽病上的应用。
10.权利要求5所述生防性生物有机肥在抑制作物病害尤其是抑制炭疽病上以及增加肥效上的应用。
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