CN105198509A - 棉花专用生物有机肥及其制备方法 - Google Patents

棉花专用生物有机肥及其制备方法 Download PDF

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CN105198509A CN201510738797.XA CN201510738797A CN105198509A CN 105198509 A CN105198509 A CN 105198509A CN 201510738797 A CN201510738797 A CN 201510738797A CN 105198509 A CN105198509 A CN 105198509A
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丰来
谭石勇
谭武贵
徐滔明
罗志威
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Abstract

本发明提供了一种棉花专用生物有机肥及其制备方法；包括以下原料：复合菌剂10-25份、载体75-90份组成；所述复合菌剂含有枯草芽孢杆菌2.5-15亿cfu/g、里氏木霉0.5-4.0亿cfu/g和刺孢吸水链霉菌0.5-4.0亿cfu/g。所述载体为豆粕饼、菜籽饼、芝麻饼、朴树叶经过微生物堆腐发酵而成。所述生物有机肥中含有防治棉花红蜘蛛的朴树叶、预防土传病害功能菌株、改善土壤生态环境菌株等，所用基质为发酵处理后的混合饼肥。本发明提供的棉花专用生物有机肥为粉状，作为底肥使用，为棉花提供生长所需营养，能有效改良土壤，预防作物土传病害侵染，防治棉花红蜘蛛，可明显提高棉花的质量和产量。

Description

棉花专用生物有机肥及其制备方法
技术领域
本发明涉及有机肥领域，具体涉及一种棉花专用生物有机肥及其制备方法。
背景技术
我国是农业大国，农业生产关乎国家的发展。棉花是我国重要的经济作物，为纺织业提供主要的原材料。棉花种植效益高，适应我国大部分的气候条件与地域环境，棉花种植广泛分布于我国各地。为了保证棉花产量和控制棉花病虫害，种植户在种植棉花过程中使用大量的化肥与农药，这些化学产品的使用，为农业生产带来了严重的后果。长年使用化肥的农田，土壤出现严重的板结、酸化现象，土壤中养分、水份更加容易流失；化学农药的使用，导致棉花病虫害抗药性现象明显。
生物有机肥是一种能够给作物提供多种有机无机养分和改善土壤环境的一类肥料。生物有机肥具有提高农产品质量、对环境无污染、对人畜无危害等特点。随着绿色环保生产意识的加强，以及国家对生物有机肥产业的支持，各种功能型专用有机肥产品也日益增多。通过将特定的微生物、植物源成分加入到有机肥料中，生产出既能为作物提供营养成分、又能为作物提高抗病虫害能力的产品，是当前许多致力于农用生物产品开发企业的研究重点。
发明内容
本发明的目的是提供一种能够有效防止红蜘蛛对棉花生长过程中的影响，减少农药和化肥施用、且促进棉花的生长和提高棉花品质的棉花专用生物有机肥。
本发明还提供所述棉花专用生物有机肥的制备方法及应用。
为了实现本发明目的，本发明的一种棉花专用生物有机肥包括复合菌剂10-25重量份、载体75-90重量份；其中，所述复合菌剂中含有枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)2.5-15亿cfu/g、里氏木霉(Trichodermaharzianum)0.5-4.0亿cfu/g、刺孢吸水链霉菌(Streptomyceshygrospinosus)0.5-4.0亿cfu/g；所述载体为豆粕饼、菜籽饼、芝麻饼、朴树叶经过微生物堆腐发酵而成，优选经干燥过筛处理，为粉状物；其中优选朴树叶在所述载体的添加量为0.5％-2％。
优选地，所述棉花专用生物有机肥包括复合菌剂15-20重量份、载体80-85重量份；其中，所述复合菌剂中含有枯草芽孢杆菌5-12亿cfu/g、里氏木霉1-3.2亿cfu/g、刺孢吸水链霉菌1-3.2亿cfu/g；所述载体为豆粕饼、菜籽饼、芝麻饼、朴树叶经过微生物堆腐发酵而成，优选经干燥过筛处理，为粉状物；其中优选朴树叶在所述载体的添加量为0.8％-1.6％。
更优选地，所述棉花专用生物有机肥包括复合菌剂16重量份、载体84重量份；所述复合菌剂中含有枯草芽孢杆菌10.0亿cfu/g、里氏木霉2.5亿cfu/g、刺孢吸水链霉菌2.5亿cfu/g；所述载体为豆粕饼、菜籽饼、芝麻饼、朴树叶经过微生物堆腐发酵而成，优选经干燥过筛处理，为粉状物；其中优选朴树叶在所述载体的添加量为1％。
前述载体是由豆粕饼、菜籽饼、芝麻饼按比例混合，经过微生物堆腐发酵而成；其中，优选地，所述堆腐发酵所需微生物(发酵剂)包括枯草芽孢杆菌、里氏木霉；进一步优选地，所述发酵剂中枯草芽孢杆菌、里氏木霉两种微生物的活菌数比为8:1，总菌数为200亿/g，添加量为2.5kg/吨干物料；优选地，所述豆粕饼、菜籽饼、芝麻饼的重量比为1:1:1。
具体地，前述载体的制备方法包括：
将朴树叶用粉碎机粉碎，优选细度为过20目筛90％以上；将豆粕饼、菜籽饼、芝麻饼按配比混匀，然后按配比加入朴树叶、微生物(发酵剂)，混合均匀，调节水分至50％-60％，堆高1.0-1.5米，堆沤20-30天；
发酵初始时覆盖薄膜，待发酵堆中心温度在50℃以上时撤去薄膜，当发酵堆中心温度超过65℃时用翻堆机翻堆，发酵前10天适当补水，使得发酵堆水分维持50％-60％；如此反复操作，待发酵堆颜色变咖啡色或黑色，同时发酵堆温度降至30℃，水含量在30％以下结束发酵，将发酵好的物质烘干、破碎、过筛，即得载体。
优选地，本发明所述棉花专用生物有机肥为粉剂。
本发明所述重量份可以是μg、mg、g、kg等本领域公知的重量单位，也可以是其倍数，如1/10、1/100、10倍、100倍等。
所述复合菌剂的制备方法，包括如下步骤：
I.枯草芽孢杆菌混合孢子粉的制备：将枯草芽孢杆菌原始菌种在无菌条件下依次进行斜面培养、摇床培养、发酵罐培养后，将得到的发酵液与玉米淀粉混合，经过浓缩干燥制备成枯草芽孢杆菌孢子粉；
II.里氏木霉孢子粉的制备：将里氏木霉原始菌种在无菌条件下分别依次进行斜面培养、摇床培养、发酵罐培养、固体发酵产孢后，将得到的完全产孢的孢子-基质混合物浸在清水中制成孢子悬浮液，从而得到里氏木霉孢子悬浮液，然后将得到的里氏木霉孢子悬浮液浓缩干燥制备成里氏木霉孢子粉；
III.刺孢吸水链霉菌菌粉的制备：将刺孢吸水链霉菌原始菌种在无菌条件下依次进行斜面培养、摇床培养、发酵罐培养后，将得到的发酵液与玉米淀粉混合，经过浓缩干燥制备成刺孢吸水链霉菌菌粉；
Ⅳ.将上述制得的枯草芽孢杆菌混合孢子粉、里氏木霉孢子粉、刺孢吸水链霉菌菌粉按比例混合，即得复合菌剂。
上述复合菌剂的制备步骤I、II、III具体包括：
I.枯草芽孢杆菌混合孢子粉的制备：
a.斜面培养：将枯草芽孢杆菌原始菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在35±2℃条件下培养36-48小时；
b.摇床培养：将步骤a培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，在pH6.5-7.0、35℃条件下，140-160r/min摇床培养12-18小时；
c.发酵罐培养：将步骤b培养的菌种在无菌条件下接种于液体发酵培养基中，在pH7.5-8.0、罐压0.5kg、35℃、通风量1:0.8-1.1条件下，培养48-56小时后，活菌数大于1.0×109cfu/mL，80％菌体成为芽孢时下罐，得到发酵液；
d.将步骤c中得到的发酵液按等重量比混合玉米淀粉，经过浓缩干燥制备成枯草芽孢杆菌混合孢子粉；
其中，步骤a中使用的斜面培养基的配方如下：葡萄糖15g、鱼蛋白胨5g、酵母膏5g、琼脂15g和水1000mL；步骤b中使用的种子培养基配方如下：葡萄糖10g、牛肉膏5g、酵母粉5g、淀粉10g、豆饼粉5g、KH2PO40.5g、MgSO40.2g和水1000mL；步骤c中使用的液体发酵培养基配方如下：玉米粉26kg、豆饼粉16kg、硫酸铵4kg、葡萄糖8kg、酵母粉2.5kg、蛋白胨1.7kg和消泡剂50mL，加水至600L；
II.里氏木霉孢子粉的制备：
e.将里氏木霉原始菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在28±2℃条件下培养48小时；
f.摇床培养：将步骤e培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，在pH6.5-6.8、30℃条件下，160-200r/min摇床培养24小时；
g.发酵罐培养：将步骤f培养的菌种在无菌条件下分别接种于液体发酵培养基，在pH6.5-6.8、罐压0.5kg、27-28℃、通风量为1:0.6-0.8，在培养48小时后，菌丝体占总体积的20％时终止发酵，进行固体发酵产孢；
h.固体发酵产孢：将步骤g经过发酵罐培养后的菌丝体接种到固体发酵培养基上，培养144-168小时，待里氏木霉90％产孢时停止发酵；
i.将步骤h中完全产孢的孢子-基质混合物浸在清水中制成孢子悬浮液，从而得到里氏木霉孢子悬浮液；
j.将上述步骤i中得到的里氏木霉孢子悬浮液浓缩干燥制成孢子粉；
其中，步骤e中使用的斜面培养基的配方如下：葡萄糖20g、土豆汁200g、琼脂20g和水1000mL，pH自然；步骤f中使用的种子培养基配方如下：白糖20g、酵母膏0.5g、淀粉20g、磷酸二氢钾0.5g、硫酸镁0.2g、氯化钠0.2g和水1000mL；步骤g中使用的液体发酵培养基配方如下：淀粉12kg、豆饼粉1.2kg、玉米粉3kg、白糖12kg、酵母膏0.3kg、硫酸镁0.12kg、氯化钠0.12kg、消泡剂50mL，加水至600L；步骤h中的固体发酵培养基配方如下：棉籽壳、玉米粉和麸皮按5:2:13重量比混合组成的固体料中加入水，即得固体发酵培养基，固体料与水的重量比为1:0.6；
III.刺孢吸水链霉菌菌粉的制备：
k.在无菌条件下，将刺孢吸水链霉菌菌种接种于斜面培养基上，于28℃下培养5-6天；
l.摇床培养：将步骤k培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，在28℃条件下，220r/min摇床培养24小时；
m.发酵罐培养：在无菌条件下，将步骤l培养的菌种接入液体发酵培养基中，在初始pH7.5、罐压0.5kg、28℃、通风量1:0.5-1，培养48小时后，放罐收集发酵液，加玉米淀粉经浓缩干燥后制得孢子粉；
其中，步骤k中使用的斜面培养基的配方如下：可溶性淀粉20g、KNO31g、NaCl0.5g、K2HPO40.5g、MgSO40.5g、FeSO40.1g、琼脂粉18g和蒸馏水1000mL，pH7.2-7.4；步骤l、m中使用的培养基配方如下：玉米淀粉20g、豆粉10g、NaCl0.5g、K2HPO40.5g、(NH4)2SO45g、CaCO33g、消泡剂0.5g和蒸馏水1000mL，pH7.5。
本发明还提供上述棉花专用生物有机肥的制备方法，包括如下步骤：
(1)载体的制备
(2)复合菌剂的制备
(3)棉花专用有机肥的制备：将所述载体与复合菌剂按比例混合均匀，即得棉花专用有机肥。
前述枯草芽孢杆菌的保藏编号为ACCC11025、里氏木霉的保藏编号为ACCC330449、刺孢吸水链霉菌的保藏编号为ACCC40015；均可由ACCC购得。
ACCC代表中国农业微生物菌种保藏管理中心。
本发明还提供所述棉花专用有机肥在棉花种植中的应用。
所述棉花专用有机肥施用方法：
①可作为专用基肥，每亩用量50-200kg；也可作为辅助基肥使用，每亩用量10-20kg，可沟施、穴施、地面撒施；
②特别适宜作基肥；
③施用本品后要及时灌水，肥效更佳；
④施用本品后要及时覆土或耕地，勿使本品暴露于阳光下；
⑤严禁与杀菌剂直接混合使用；
⑥存放于阴凉干燥处。
所述棉花专用有机肥具有吸水保湿，增加土壤肥力，协助作物吸收营养，且有杀灭棉花红蜘蛛，提高棉花防病抗逆能力，减少棉花病害发生的功效，可显著提高棉花品质和产量。
本发明具有以下优点：
(一)本发明的棉花专用有机肥中，微生物种类搭配合理，里氏木霉和刺孢吸水链霉菌组合能抑制真菌性致病菌，枯草芽孢杆菌能在棉花根部繁殖形成优势菌落抑制病原体的繁殖，能很好地改善连茬种植引起的土壤环境恶化的情况。另外，本发明采用了发酵腐熟后的豆粕饼、菜籽饼、芝麻饼为主要载体，对废弃物进行了回收及有效利用，能产生很好的经济效益，通过微生物发酵腐熟后的三粕混合物能释放出可供棉花吸收的氮、磷、钾，作为基肥施用能保证棉花生长的所需营养物质，长期使用能很好地改善土壤品质。
(二)本发明的有效菌制备方法先进科学，简便可行，孢子数含量高，存活时间长，能在土壤中快速繁殖，形成优势菌落，促进棉花的健康生长。
具体实施方式
以下实施例对用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。
实施例1棉花专用生物有机肥及其制备方法
棉花专用有机肥含以下重量份计的原料：
载体84份；
复合菌剂16份。
所述复合菌剂中有效活菌总含量为15亿cfu/g，构成如下：
枯草芽孢杆菌10.0亿cfu/g
里氏木霉2.5亿cfu/g
刺孢吸水链霉菌2.5亿cfu/g。
所述载体为豆粕饼、菜籽饼、芝麻饼、朴树叶经过微生物堆腐发酵，干燥过筛处理的粉状物；其中朴树叶在所述载体的添加量为1％(指重量)。
上述棉花专用有机肥的制备方法，包括如下步骤：
(1)载体的制备
将朴树叶用粉碎机粉碎，细度为过20目筛90％以上。将豆粕饼、菜籽饼、芝麻饼按1:1:1的重量比混匀，然后按配比加入朴树叶、微生物(发酵剂)，混合均匀，调节水分至55％，堆高1.5米，堆沤28天；
其中，所述微生物(发酵剂)中枯草芽孢杆菌、里氏木霉两种微生物的活菌数比为8:1，总菌数为200亿/g，添加量为2.5kg/吨干物料；
发酵初始时覆盖薄膜，待发酵堆中心温度在50℃以上时撤去薄膜，当发酵堆中心温度超过65℃时用翻堆机翻堆，发酵前10天适当补水，使得发酵堆水分维持50％-60％；如此反复操作，待发酵堆颜色变咖啡色或黑色，同时发酵堆温度降至30℃，水含量在30％以下结束发酵，将发酵好的物质烘干、破碎、过筛，即得载体。
(2)复合菌剂的制备
I.枯草芽孢杆菌混合孢子粉的制备：将枯草芽孢杆菌原始菌种在无菌条件下依次进行斜面培养、摇床培养、发酵罐培养后，将得到的发酵液与玉米淀粉混合，经过浓缩干燥制备成枯草芽孢杆菌孢子粉；
II.里氏木霉孢子粉的制备：将里氏木霉原始菌种在无菌条件下分别依次进行斜面培养、摇床培养、发酵罐培养、固体发酵产孢后，将得到的完全产孢的孢子-基质混合物浸在清水中制成孢子悬浮液，从而得到里氏木霉孢子悬浮液，然后将得到的里氏木霉孢子悬浮液浓缩干燥制备成里氏木霉孢子粉；
III.刺孢吸水链霉菌菌粉的制备：将刺孢吸水链霉菌原始菌种在无菌条件下依次进行斜面培养、摇床培养、发酵罐培养后，将得到的发酵液与玉米淀粉混合，经过浓缩干燥制备成刺孢吸水链霉菌菌粉；
Ⅳ.将上述制得的枯草芽孢杆菌混合孢子粉、里氏木霉孢子粉、刺孢吸水链霉菌菌粉按比例混合，即得复合菌剂。
(3)棉花专用有机肥的制备：
将所得的载体与复合菌剂按比例混合均匀，即得棉花专用有机肥。
步骤中I、II、III具体为：
I.枯草芽孢杆菌混合孢子粉的制备：
a.斜面培养：将枯草芽孢杆菌原始菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在35±2℃条件下培养40小时；
b.摇床培养：将步骤a培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，在pH7.0、35℃条件下，160r/min摇床培养18小时；
c.发酵罐培养：将步骤b培养的菌种在无菌条件下接种于液体发酵培养基中，在pH7.5、罐压0.5kg、35℃、通风量1:0.8-1.1条件下，培养50小时后，活菌数大于1.0×109cfu/mL，80％菌体成为芽孢时下罐，得到发酵液；
d.将步骤c中得到的发酵液按等重量比混合玉米淀粉，经过浓缩干燥制备成、枯草芽孢杆菌混合孢子粉；
其中，步骤a中使用的斜面培养基的配方如下：葡萄糖15g、鱼蛋白胨5g、酵母膏5g、琼脂15g和水1000mL；步骤b中使用的种子培养基配方如下：葡萄糖10g、牛肉膏5g、酵母粉5g、淀粉10g、豆饼粉5g、KH2PO40.5g、MgSO40.2g和水1000mL；步骤c中使用的液体发酵培养基配方如下：玉米粉26kg、豆饼粉16kg、硫酸铵4kg、葡萄糖8kg、酵母粉2.5kg、蛋白胨1.7kg和消泡剂50mL，加水至600L；
II.里氏木霉孢子粉的制备：
e.将里氏木霉原始菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在28±2℃条件下培养48小时；
f.摇床培养：将步骤e培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，在pH6.8、30℃条件下，180r/min摇床培养24小时；
g.发酵罐培养：将步骤f培养的菌种在无菌条件下分别接种于液体发酵培养基，在pH6.8、罐压0.5kg、28℃、通风量为1:0.6-0.8，在培养48小时后，菌丝体占总体积的20％时终止发酵，进行固体发酵产孢；
h.固体发酵产孢：将步骤g经过发酵罐培养后的菌丝体接种到固体发酵培养基上，培养144-168小时，待里氏木霉90％产孢时停止发酵；
i.将步骤h中完全产孢的孢子-基质混合物浸在清水中制成孢子悬浮液，从而得到里氏木霉孢子悬浮液；
j.将上述步骤i中得到的里氏木霉孢子悬浮液浓缩干燥制成孢子粉；
其中，步骤e中使用的斜面培养基的配方如下：葡萄糖20g、土豆汁200g、琼脂20g和水1000mL，pH自然；步骤f中使用的种子培养基配方如下：白糖20g、酵母膏0.5g、淀粉20g、磷酸二氢钾0.5g、硫酸镁0.2g、氯化钠0.2g和水1000mL；步骤g中使用的液体发酵培养基配方如下：淀粉12kg、豆饼粉1.2kg、玉米粉3kg、白糖12kg、酵母膏0.3kg、硫酸镁0.12kg、氯化钠0.12kg、消泡剂50mL，加水至600L；步骤h中的固体发酵培养基配方如下：棉籽壳、玉米粉和麸皮按5:2:13重量比混合组成的固体料中加入水，即得固体发酵培养基，固体料与水的重量比为1:0.6；
III.刺孢吸水链霉菌菌粉的制备：
k.在无菌条件下，将刺孢吸水链霉菌菌种接种于斜面培养基上，于28℃下培养6天；
l.摇床培养：将步骤k培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，在28℃条件下，220r/min摇床培养24小时；
m.发酵罐培养：在无菌条件下，将步骤l培养的菌种接入液体发酵培养基中，在初始pH7.5、罐压0.5kg、28℃、通风量1:0.5-1，培养48小时后，放罐收集发酵液，加玉米淀粉经浓缩干燥后制得孢子粉；
其中，步骤k中使用的斜面培养基的配方如下：可溶性淀粉20g、KNO31g、NaCl0.5g、K2HPO40.5g、MgSO40.5g、FeSO40.1g、琼脂粉18g和蒸馏水1000mL，pH7.2-7.4；步骤l、m中使用的培养基配方如下：玉米淀粉20g、豆粉10g、NaCl0.5g、K2HPO40.5g、(NH4)2SO45g、CaCO33g、消泡剂0.5g和蒸馏水1000mL，pH7.5。
实施例2棉花专用生物有机肥及其制备方法
棉花专用有机肥含以下重量份计的原料：
载体80份；
复合菌剂20份。
所述复合菌剂中有效活菌总含量为18.4亿cfu/g，构成如下：
枯草芽孢杆菌12.0亿cfu/g；
里氏木霉3.2亿cfu/g；
刺孢吸水链霉菌3.2亿cfu/g；
所述载体为豆粕饼、菜籽饼、芝麻饼、朴树叶经过微生物堆腐发酵，干燥过筛处理的粉状物；其中朴树叶在所述载体的添加量为0.8％(指重量)。
该棉花专用有机肥的制备方法同实施列1。
实施例3棉花专用生物有机肥及其制备方法
棉花专用有机肥含以下重量份计的原料：
载体90份；
复合菌剂10份
所述复合菌剂中有效活菌总含量为9.2亿cfu/g，构成如下：
枯草芽孢杆菌6.0亿cfu/g；
里氏木霉1.6亿cfu/g；
刺孢吸水链霉菌1.6亿cfu/g。
所述载体为豆粕饼、菜籽饼、芝麻饼、朴树叶经过微生物堆腐发酵，干燥过筛处理的粉状物；其中朴树叶在所述载体的添加量为2％(指重量)。
该棉花专用有机肥的制备方法同实施列1。
实施例4棉花专用生物有机肥及其制备方法
棉花专用有机肥含以下重量份计的原料：
载体75份；
复合菌剂25份。
所述复合菌剂中有效活菌总含量为23亿cfu/g，构成如下：
枯草芽孢杆菌15.0亿cfu/g；
里氏木霉4亿cfu/g；
刺孢吸水链霉菌4亿cfu/g。
所述载体为豆粕饼、菜籽饼、芝麻饼、朴树叶经过微生物堆腐发酵，干燥过筛处理的粉状物；其中朴树叶在所述载体的添加量为1.5％(指重量)。
该棉花专用有机肥的制备方法同实施列1。
实施例1棉花专用生物有机肥田间试验
1.试验目的：
验证棉花专用生物有机肥促进棉花生长及提升棉花品质的显著效果、抗病和防红蜘蛛的能力。
2.试验材料：
植株：供试品种为湘杂棉20号。
肥料：实施例1中制备的棉花专用生物有机肥、专用基肥、专用追肥、提苗肥、硫酸钾、生物饼肥。
试验点:位于湖南省浏阳市洞阳镇试验基地，供试土壤主要农化特性见表1，前茬作物为油菜。
3.试验设计
3.1实验分5组，每组种植面积20m2，每组做3个重复实验。种植密度为1.65万株/hm2。病虫防治等均按大田生产要求进行管理，栽培管理参照长江流域棉花生产技术规程NY/T1292-2007。
实验组A：每组分别取实施例1中制备的棉花专用生物有机肥0.5kg加适量基肥(生物菌肥200kg/亩,氯化钾5kg/亩,尿素3kg/亩、硼砂0.5kg/亩、磷酸钙10kg/亩)混匀做基肥施用。0.5kg分4次与其他追肥同施，其他常规施肥量(现蕾初期施，亩施尿素5公斤，叶面喷施钾肥。初花期亩施磷酸钙10千克，饼肥10～15千克；盛花肥在初花肥后20天左右追肥，亩施尿素5千克，磷酸钙6千克，适时喷施氯化钾；第三次施肥为盖顶肥，亩施磷酸钙5千克)正常施用。
实验组B：每组分别取实施例1中制备的棉花专用生物有机肥0.5kg，剩余0.5kg菌肥做追肥使用，其他施肥量参照实验组A施肥量的80％施用。
实验组C:每组分别取供试灭菌处理的实施例1中制备的棉花专用生物有机肥500g加适量基肥，剩余0.5kg灭菌处理后做追肥使用，施肥同实验组A。
实验组D:常规施肥，参照实验组A进行。
实验组E:不施加任何肥料。
3.2试验实施：
按3.1执行，并做好田间管理、记录、分析和计产工作。
3.2.1田间管理：
各试验组播种、施肥、浇水、除草、病虫害防治均在1天内完成，将人为误差降低到最小程度。
a、施肥管理：按当地施肥水平和施肥方法进行，根据天气和土壤水分情况，适量浇水，做好抗旱准备；
b、病虫害防治：以防为主，做好播种前统一处理。
c、化调管理：使营养生长与生殖生长相协调。
d、打顶：根据当地情况适时打顶。
e、收花：棉花吐絮后5-7天，及时采收。
3.2.2试验记录
a)供试棉花的品种；
b)注明试验地点、试验时间、方法设计、小区面积、小区排列、重复次数(采用图表的形式)；
c)试验地地形、土壤质地、土壤类型、前茬作物种类；
d)施肥时间、方法、数量及次数等；
e)试验期间的降水量及灌水量；
f)病虫害防治情况及其它农事活动等；
g)作物的生长状况田间调查，包括移苗成活率、长势、生育期。及病虫发生情况等。
3.2.3收获和计产
3.2.4作物农艺性状、土壤肥力和病害发生等记录
3.3效果评价
作物农艺性状及产量对比情况见表2。
进行棉花专用生物有机肥处理与其它各处理间的产量差异分析。增产差异显著水平的试验点数达到总数的2/3以上者，判定该产品有增产效果。
3.3.4抗逆性效果评价
抗逆性包括抑制病虫害发生(病情及发病率记录)、抗旱、克服连作障碍等方面。抗逆性指标比对照应提高20％以上的效果明显。病情情况见表3。
3.3.4土壤改良效果评价
测定土壤中的微生物种群与数量、有机质、速效磷、速效钾、速效氮、pH等指标。测定时间为移栽施用前、然后是每月取土壤样一次进行测定直至棉花采收结束。
3.3.5安全指标评价
对试验作物以及土壤进行农药残留、重金属等有毒有害物质含量的测定，以评价棉花专用生物有机肥对其是否具有降解和转化功能。
附录A(规范性附录)
基质无菌检验方法
A.1取样
从基质样品中随机取样。
A.2样品检验
A.2.1培养基配制
按照NY/T1114-2006中的要求配制A1、A9、A11、A13四种培养基。
A.2.2菌悬液的制备
称取样品10g(精确到0.01g)，加入带玻璃珠的100mL的无菌水中，在200r/min摇床中充分振荡30min，制成菌悬液。
A.2.3加样及培养
取0.1mL菌悬液分别加入到制备好的四种固体培养基平板上，并用无菌涂布棒将菌悬液均匀地涂布于培养基表面，设3个重复，于适宜温度条件下培养2d-7d。并以无菌水作空白对照。
A.2.4灭菌效果鉴定
空白对照无菌落出现，而其它培养平板上菌落总数≤5个，则该样品可用作基质试验。反之，须重新灭菌。空白对照有菌落出现，须重做无菌检验。
4.试验结果
试验严格按照试验方案进行，移栽后无死苗现象，成活后长势除E处理外均表现正常。试验结果如表2、表3所示，试验证明该产品能有效提高棉花亩产值，减少棉花病虫害的发生，提高棉花品质。
表1供试土壤的主要农化性状
表2各处理农艺性状及产量
表3各处理对棉花大田病害发生的影响
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种棉花专用生物有机肥，其特征在于，包括复合菌剂10-25重量份、载体75-90重量份；其中，所述复合菌剂中含有枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)2.5-15亿cfu/g、里氏木霉(Trichodermaharzianum)0.5-4.0亿cfu/g、刺孢吸水链霉菌(Streptomyceshygrospinosus)0.5-4.0亿cfu/g；所述载体为豆粕饼、菜籽饼、芝麻饼、朴树叶经过微生物堆腐发酵、干燥过筛处理的粉状物；其中优选朴树叶在所述载体的添加量为0.5％-2％。
2.根据权利要求1所述的棉花专用生物有机肥，其特征在于，包括复合菌剂15-20重量份、载体80-85重量份；其中，所述复合菌剂中含有枯草芽孢杆菌5-12亿cfu/g、里氏木霉1-3.2亿cfu/g、刺孢吸水链霉菌1-3.2亿cfu/g；其中优选朴树叶在所述载体的添加量为0.8％-1.6％。
3.根据权利要求1所述的棉花专用生物有机肥，其特征在于，包括复合菌剂16重量份、载体84重量份；所述复合菌剂中含有枯草芽孢杆菌10.0亿cfu/g、里氏木霉2.5亿cfu/g、刺孢吸水链霉菌2.5亿cfu/g；其中优选朴树叶在所述载体的添加量为1％。
4.根据权利要求1-3任一项所述的棉花专用生物有机肥，其特征在于，所述载体是由豆粕饼、菜籽饼、芝麻饼按重量比例1:1:1混合，经过微生物堆腐发酵而成；其中，优选地，所述堆腐发酵所需微生物包括枯草芽孢杆菌、里氏木霉；进一步优选地，所述发酵剂中枯草芽孢杆菌、里氏木霉两种微生物的活菌数比为8:1，总菌数为200亿/g，添加量为2.5kg/吨干物料。
5.根据权利要求4所述的棉花专用生物有机肥，其特征在于，所述载体的制备方法包括：将朴树叶用粉碎机粉碎，优选细度为过20目筛90％以上；将豆粕饼、菜籽饼、芝麻饼按配比混匀，然后按配比加入朴树叶、微生物，混合均匀，调节水分至50％-60％，堆高1.0-1.5米，堆沤20-30天；
发酵初始时覆盖薄膜，待发酵堆中心温度在50℃以上时撤去薄膜，当发酵堆中心温度超过65℃时用翻堆机翻堆，发酵前10天适当补水，使得发酵堆水分维持50％-60％；如此反复操作，待发酵堆颜色变咖啡色或黑色，同时发酵堆温度降至30℃，水含量在30％以下结束发酵，将发酵好的物质烘干、破碎、过筛，即得载体。
6.根据权利要求1-5任一项所述的棉花专用生物有机肥，其特征在于，所述复合菌剂的制备方法，包括如下步骤：
I.枯草芽孢杆菌混合孢子粉的制备：将枯草芽孢杆菌原始菌种在无菌条件下依次进行斜面培养、摇床培养、发酵罐培养后，将得到的发酵液与玉米淀粉混合，经过浓缩干燥制备成枯草芽孢杆菌孢子粉；
II.里氏木霉孢子粉的制备：将里氏木霉原始菌种在无菌条件下分别依次进行斜面培养、摇床培养、发酵罐培养、固体发酵产孢后，将得到的完全产孢的孢子-基质混合物浸在清水中制成孢子悬浮液，从而得到里氏木霉孢子悬浮液，然后将得到的里氏木霉孢子悬浮液浓缩干燥制备成里氏木霉孢子粉；
III.刺孢吸水链霉菌菌粉的制备：将刺孢吸水链霉菌原始菌种在无菌条件下依次进行斜面培养、摇床培养、发酵罐培养后，将得到的发酵液与玉米淀粉混合，经过浓缩干燥制备成刺孢吸水链霉菌菌粉；
Ⅳ.将上述制得的枯草芽孢杆菌混合孢子粉、里氏木霉孢子粉、刺孢吸水链霉菌菌粉按比例混合，即得复合菌剂。
7.根据权利要求6所述的棉花专用生物有机肥，其特征在于，所述复合菌剂的制备步骤I、II、III具体包括：
I.枯草芽孢杆菌混合孢子粉的制备：
a.斜面培养：将枯草芽孢杆菌原始菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在35±2℃条件下培养36-48小时；
b.摇床培养：将步骤a培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，在pH6.5-7.0、35℃条件下，140-160r/min摇床培养12-18小时；
c.发酵罐培养：将步骤b培养的菌种在无菌条件下接种于液体发酵培养基中，在pH7.5-8.0、罐压0.5kg、35℃、通风量1:0.8-1.1条件下，培养48-56小时后，活菌数大于1.0×109cfu/mL，80％菌体成为芽孢时下罐，得到发酵液；
d.将步骤c中得到的发酵液按等重量比混合玉米淀粉，经过浓缩干燥制备成枯草芽孢杆菌混合孢子粉；
其中，步骤a中使用的斜面培养基的配方如下：葡萄糖15g、鱼蛋白胨5g、酵母膏5g、琼脂15g和水1000mL；步骤b中使用的种子培养基配方如下：葡萄糖10g、牛肉膏5g、酵母粉5g、淀粉10g、豆饼粉5g、KH2PO40.5g、MgSO40.2g和水1000mL；步骤c中使用的液体发酵培养基配方如下：玉米粉26kg、豆饼粉16kg、硫酸铵4kg、葡萄糖8kg、酵母粉2.5kg、蛋白胨1.7kg和消泡剂50mL，加水至600L；
II.里氏木霉孢子粉的制备：
e.将里氏木霉原始菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在28±2℃条件下培养48小时；
f.摇床培养：将步骤e培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，在pH6.5-6.8、30℃条件下，160-200r/min摇床培养24小时；
g.发酵罐培养：将步骤f培养的菌种在无菌条件下分别接种于液体发酵培养基，在pH6.5-6.8、罐压0.5kg、27-28℃、通风量为1:0.6-0.8，在培养48小时后，菌丝体占总体积的20％时终止发酵，进行固体发酵产孢；
h.固体发酵产孢：将步骤g经过发酵罐培养后的菌丝体接种到固体发酵培养基上，培养144-168小时，待里氏木霉90％产孢时停止发酵；
i.将步骤h中完全产孢的孢子-基质混合物浸在清水中制成孢子悬浮液，从而得到里氏木霉孢子悬浮液；
j.将上述步骤i中得到的里氏木霉孢子悬浮液浓缩干燥制成孢子粉；
其中，步骤e中使用的斜面培养基的配方如下：葡萄糖20g、土豆汁200g、琼脂20g和水1000mL，pH自然；步骤f中使用的种子培养基配方如下：白糖20g、酵母膏0.5g、淀粉20g、磷酸二氢钾0.5g、硫酸镁0.2g、氯化钠0.2g和水1000mL；步骤g中使用的液体发酵培养基配方如下：淀粉12kg、豆饼粉1.2kg、玉米粉3kg、白糖12kg、酵母膏0.3kg、硫酸镁0.12kg、氯化钠0.12kg、消泡剂50mL，加水至600L；步骤h中的固体发酵培养基配方如下：棉籽壳、玉米粉和麸皮按5:2:13重量比混合组成的固体料中加入水，即得固体发酵培养基，固体料与水的重量比为1:0.6；
III.刺孢吸水链霉菌菌粉的制备：
k.在无菌条件下，将刺孢吸水链霉菌菌种接种于斜面培养基上，于28℃下培养5-6天；
l.摇床培养：将步骤k培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，在28℃条件下，220r/min摇床培养24小时；
m.发酵罐培养：在无菌条件下，将步骤l培养的菌种接入液体发酵培养基中，在初始pH7.5、罐压0.5kg、28℃、通风量1:0.5-1，培养48小时后，放罐收集发酵液，加玉米淀粉经浓缩干燥后制得孢子粉；
其中，步骤k中使用的斜面培养基的配方如下：可溶性淀粉20g、KNO31g、NaCl0.5g、K2HPO40.5g、MgSO40.5g、FeSO40.1g、琼脂粉18g和蒸馏水1000mL，pH7.2-7.4；步骤l、m中使用的培养基配方如下：玉米淀粉20g、豆粉10g、NaCl0.5g、K2HPO40.5g、(NH4)2SO45g、CaCO33g、消泡剂0.5g和蒸馏水1000mL，pH7.5。
8.根据权利要求1-7任一项所述的棉花专用生物有机肥，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为ACCC11025、里氏木霉的保藏编号为ACCC330449、刺孢吸水链霉菌的保藏编号为ACCC40015。
9.权利要求1-8任一项所述棉花专用生物有机肥的制备方法，包括如下步骤：
(1)载体的制备
(2)复合菌剂的制备
(3)棉花专用有机肥的制备：将所述载体与复合菌剂按比例混合均匀，即得棉花专用有机肥。
10.权利要求1-8任一项所述的棉花专用生物有机肥或权利要求9所述方法制备的棉花专用生物有机肥在棉花种植中的应用；
优选地，所述棉花专用有机肥作为基肥施用，每亩用量50-200kg；
或作为辅助基肥使用，每亩用量10-20kg。
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