CN101892173B

CN101892173B - 一株在草莓连作病害中起生防作用的枯草芽孢杆菌及其应用

Info

Publication number: CN101892173B
Application number: CN2010100344398A
Authority: CN
Inventors: 张潞生
Original assignee: China Agricultural University
Current assignee: China Agricultural University
Priority date: 2010-01-20
Filing date: 2010-01-20
Publication date: 2012-04-18
Anticipated expiration: 2030-01-20
Also published as: CN101892173A

Abstract

本发明公开了一株在草莓连作病害中起生防作用的枯草芽孢杆菌及其应用。该枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ZLS-01，其保藏编号为CGMCCNo.3513。实验证明，本发明菌株对病原真菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)或立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)具有拮抗作用，可抑制病害。本发明菌剂，可增加土壤中优势菌的数量，对预防和抑制土传病害起到了积极作用；本发明菌剂能降低土壤pH值，使其趋向于中性，pH值从8.2下降到7.1，使土壤酸碱缓冲能力增强；增强土壤的透气性、透水性、保水性和保肥性；还使土壤有机质逐年提高，从2.80％上升到3.20％，增高土壤肥力；使草莓根际土壤碱解氮、速效磷和速效钾都显著增加。本发明菌剂能抑制草莓重茬病害，保障草莓产量。

Description

一株在草莓连作病害中起生防作用的枯草芽孢杆菌及其应用

技术领域

本发明涉及一株在草莓连作病害中起生防作用的枯草芽孢杆菌及其应用。

背景技术

连作病害导致包括草莓在内的许多农作物植株生长发育不良、根部病害严重、产量和品质下降，减产高达50％～90％。以往人们在克服连作病害时曾采用栽培、物理、化学和微生物制剂等多种方法，其中以溴甲烷等化学药物处理土壤最为普遍。但是化学药物的毒性对人类健康造成严重威胁，禁止使用已成必然。栽培和物理的如：轮作、晒土、土壤熏蒸或闷蒸消毒等方法可以达到一定的效果，但存在实际困难和弊病，例如由于中国耕地缺少的实际情况，生产中农民采用轮作、晒土困难；土壤熏蒸或闷蒸消毒破坏了土壤理化性状，杀死病害菌的同时也杀死有益生防菌，引起土壤理化性状的恶化，破坏了农作物赖以生存的土壤生态环境。在连作病害防治方面目前备受人们青睐的是微生物连作防治剂，原因是其副作用小，成本较低，安全有效，符合农产品安全生产的要求。

中国各省(市、区)均有草莓栽培，主要集中在河北、山东、辽宁、江苏等地。据农业部统计，2006年中国草莓栽培面积(7.93万hm²)和产量(187.6万t)均居世界首位。保护地草莓由于淡季上市，加上近年草莓果实品质明显提高，个大形美，香甜可口，色泽艳丽，价格高销量大。因此，目前中国各地草莓发展势头有增无减。2012年第七届世界草莓大会将在中国北京召开，这更进一步促进了中国草莓产业的扩增和升级。从全球许多草莓种植地区的经验可以看出，草莓连作病害是草莓大面积生产地区的发展克星，如果不加以有效的控制对草莓生产可以形成毁灭性的打击。草莓连作病害一直是世界草莓生产中亟待解决的问题，这一问题在中国更为严重。世界草莓主要种植区一般采用一年一栽制，而我国由于耕地数量限制，以及设施栽培广泛使用，造成很多产区不能进行规范化轮作，从而导致草莓连作病害。草莓连作病害是由多种病原真菌单独或复合侵染引起的，主要病害种类为草莓枯萎病和黑根腐病等，主要病原菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和立枯丝核菌(Rhizoctonia spp.)。如何在草莓连作病害防治中既保证草莓产品质量安全，同时又不破坏土壤生态环境，是一急需解决的问题。

连作是指一年内或连年在同一块田地上连续种植同一种作物的种植方式。

发明内容

本发明的一个目的是提供一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。

本发明所提供的菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ZLS-01，其保藏编号为CGMCC No.3513。

该菌株已于2009年12月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No.3513。

本发明的另一个目的是提供一种生物菌剂。

本发明所提供的生物菌剂，其活性成分为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ZLS-01CGMCC No.3513。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ZLS-01CGMCC No.3513或所述生物菌剂在拮抗病原真菌中的应用也属于本发明的保护范围。

所述病原真菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)或立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ZLS-01CGMCC No.3513或所述生物菌剂在植物连作中的应用也属于本发明的保护范围。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ZLS-01CGMCC No.3513或所述生物菌剂在防治植物连作病害中的应用也属于本发明的保护范围。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ZLS-01CGMCC No.3513或所述生物菌剂在改善植物连作土壤中菌群结构中的应用也属于本发明的保护范围。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ZLS-01CGMCC No.3513或所述生物菌剂在改善植物连作土壤微生态环境中的应用也属于本发明的保护范围。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ZLS-01CGMCC No.3513或所述生物菌剂在增加植物连作土壤中利于植物生长的细菌数目和利于植物生长的放线菌数目中的应用也属于本发明的保护范围。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ZLS-01CGMCC No.3513或所述生物菌剂在降低植物连作土壤的pH值、降低植物连作土壤的土壤容重和/或增加植物连作土壤中的有机质含量中的应用也属于本发明的保护范围。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ZLS-01CGMCC No.3513或所述生物菌剂在增加植物连作土壤中的碱解氮、速效磷和/或速效钾中的应用也属于本发明的保护范围。

上述任一所述的应用中，所述植物为草莓。

上述任一所述的应用中，所述连作土壤为相同植物连作2茬或2茬以上的土壤，具体可为相同植物连作2茬或3茬的土壤。

实验证明，本发明菌株对病原真菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)或立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)具有拮抗作用，可抑制病害。本发明菌剂，可增加土壤中优势菌(益生微生物种群)的数量，对预防和抑制草莓连作病害起到了积极作用；本发明菌剂与基肥混合使用后能降低土壤pH值，使其趋向于中性，pH值从8.2下降到7.1，使土壤酸碱缓冲能力增强；增强土壤的透气性、透水性、保水性和保肥性；还使土壤有机质逐年提高，从2.80％上升到3.20％，增高土壤肥力；使草莓根际土壤碱解氮、速磷和速钾都显著增加。本发明菌剂能抑制草莓连作病害，保障草莓产量。另外，本发明菌副作用小、成本较低、对造成草莓连作病害的病原菌真对性强、安全有效，与其它生防菌有很好的协同作用，对土壤环境有天生适应性，稳定性好，符合当前发展绿色有机果品的需求，具有广阔的应用前景。

附图说明

图1为ZLS-01菌株的16S rDNA序列BLAST相似度分析结果

图2为基于16S rDNA序列的ZLS-01菌种系统发育树

图3为ZLS-01菌株对病原真菌Rhizoctonia solani和Fusarium oxysporum的拮抗图。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从生物公司购买。

实施例1、菌的分离与鉴定

一、菌的分离

采用五点法，在草莓生产田取草莓根际土壤放于灭菌的铝盒内带回实验室。称取20g土样加入无菌水90毫升，吸取上清液制成稀释10^-1，10^-2，10^-3，10^-4，10^-5土壤溶液。选取10^-3，10^-4，10^-5三个稀释液，每个梯度吸取0.1毫升溶液涂板、倒置于人工培养箱中370℃下培养。将具不同表型的细菌用接种针在平板培养基上进行划线，然后37℃下培养。细菌分离培养基为：牛肉膏5g/L、蛋白胨10g/L、NaCl5g/L、琼脂粉10g/L、pH 7.2。采用对峙法将病原真菌(尖孢镰刀菌或立枯丝核菌)的琼脂块接入平板一侧，在另一侧距离病原真菌3cm处用划线法接入分离的细菌菌株，置于28℃下培养3~5天，筛选分离对病原真菌生长有抑制作用的菌株。筛选得到对病原真菌具有抑制作用的菌株，命名为ZLS-01。

二、菌的鉴定

(一)菌体特征

ZLS-01菌株划线培养，菌落形态直接观察和显微镜检。将待检菌落挑入0.5ml的无菌稀释液内充分混匀后，再取此稀释液进行有关生理生化试验，具体操作按照东秀珠等，2001，《常见细菌鉴定手册》中的方法进行。

结果：单个细胞0.72×2.3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.79×1.35微米，椭圆，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，浅白色。以孢子形式存在时耐高温、耐酸碱。产生抗菌类的多肽物质。

(二)16SrDNA全序列

采用细菌16SrDNA的通用性引物(16SF 5’AGTTTGATCCTGGCTCAG 3’，16SR 5’GGTTACCTTGTTACGACTT 3’)，以ZLS-01菌株的总DNA为模板进行PCR扩增，PCR反应体系为50μl，其中10×扩增缓冲液10μl，4种dNTP混合物各200μmol/L，正反引物各20pmol/L，模板DNA 50ng，Pfu聚合酶1.5u，Mg²⁺2mmol/L。PCR反应程序为：94℃2.5min，94℃45sec，52℃1min，72℃1.5min，进行35个循环，72℃延伸5min，最后4℃保存。扩增出的16S rDNA在1％琼脂糖凝胶上电泳分离，DNA胶回收试剂盒分离纯化后克隆至pGEM-T载体上，转化Escherichia coli DH5α感受态细胞，在氨苄抗性平板上进行蓝白斑筛选。将阳性克隆进行测序，测序结果在NCBI上通过BLAST进行同源性比较分析。结果，得到的16SrDNA全序列如序列表中序列1所示。

以序列1所示序列与Genbank中其它相似性高、同属芽孢杆菌不同种的参照模式菌株进行16SrDNA序列相似性多重序列比对，同时构建系统发育树，结果如图1和图2所示。相似性多重序列比对结果表明本发明菌株的16SrDNA序列与多株枯草芽孢杆菌的模式菌株的16SrDNA序列相似性很高，达99％(图1所示)。系统发育树结果表明本发明菌株与枯草芽孢杆菌聚在了一小支(图2所示)，与枯草芽孢杆菌同源性最强。说明本发明菌株属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。

综合上述鉴定结果，表明该菌株ZLS-01为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的一株新菌株，该菌株已于2009年12月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No.3513。

实施例2、菌的应用

一、菌株ZLS-01对病原真菌的拮抗作用

实验方法：将ZLS-01菌株接种于NB培养基，220r/min、37℃振荡培养24h；拮抗活性测定采用平板对峙培养法，将待测病原真菌从斜面培养基中转入PDA平板预培养4天，转接至新的PDA培养平板正中央，同时在真菌接种处的三个方向各3.0cm处接入活化培养24h的ZLS-01菌株菌液100μl，28℃暗培养，直至出现拮抗现象，测定抑菌带宽。

NB培养基：由牛肉膏、蛋白胨、NaCl和水组成；牛肉膏在NB培养基中的浓度为5g/L，蛋白胨在NB培养基中的浓度为10g/L，NaCl在NB培养基中的浓度为5g/L；NB培养基的pH为7.2。牛肉膏、蛋白胨均购自北京盛旭生物公司。

拮抗带宽度的统计方法：直尺测定拮抗带宽度。

试验设3次重复。结果如图3和表1所示。图3中，A.ZLS-01和Rhizoctoniasolani；B.ZLS-01和Fusarium oxysporum。培养皿中央为病原真菌，外侧为细菌。

平板对峙培养结果显示，ZLS-01菌株对供试病原真菌表现出拮抗作用，其拮抗带宽度见表1。本发明菌株ZLS-01对病原真菌的平板抑制作用表明，菌株向菌落周围的培养基中分泌释放出了某种拮抗物质，从而明显抑制了病原菌丝的生长和发育。

表1，ZLS-01对病原真菌Fusarium oxysporum和Rhizoctonia solani的拮抗活性

病原真菌	抑菌带(mm)
		尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum	3.7
立枯丝核菌Rhizoctonia solani	10.2

二、在草莓连作栽培中使用菌株ZLS-01

(一)方法

草莓品种为红颜。草莓生产基地为中国农业大学果树试验基地、昌平北流果园和昌平天翼草莓生产基地。

本实验中种植草莓的方法为大棚设施栽培，每年9月份定植，陆续收获至次年的4、5月份。

2005年前，未使用本发明菌，草莓设施栽培的每个周期中的各个栽培过程如下：每年9月份进行种草莓田地的整理、土壤消毒、肥料的使用，目的是增加土壤肥力，减少土壤有害生物。而后起垄、覆盖塑料薄膜、定植草莓。草莓定植后每年9月份至次年的4、5月份进行生产田间管理，植株整理、疏花疏果、陆续收获、病虫害综合防治等。

2005年至2007年，实验组：使用本发明菌，草莓设施栽培的每个周期中的各个过程，除了肥料的使用过程与上述不同，其余过程均与上述相同。菌ZLS-01是在肥料的使用这一工作过程中基肥的使用中加以应用。具体工作过程为：将5000kg腐熟有机肥、50kg氮磷钾复合肥和80kg菌混合物(即ZLS-01菌体沉淀物和畜禽粪便的混合物，ZLS-01菌在混合物中的浓度为10¹⁰cfu/g，ZLS-01菌体沉淀物的质量为100g)混合均匀，然后向田地进行撒施，并结合翻地施入土壤。菌体沉淀物按照如下方法得到的：将ZLS-01菌株接种于NB培养基，220r/min、37℃振荡培养24h。而后8000r/min离心5min，收集沉淀，即为菌体沉淀物。

腐熟有机肥为腐熟的猪厩肥。氮磷钾复合肥购自山西省交城红星化工有限公司。

2005年至2007年，对照组：对照组所用实验地与实验组在同一个实验生产基地且土壤状况相同，不使用本发明菌、其余过程与实验组完全相同。

(二)对照组与实验组的草莓植株形态差异

2005年至2007年，实验组：应用菌ZLS-01后，田间草莓植株生长健壮，叶片大而油绿，草莓连作病害未见发生。逐步恢复和提高了草莓的产量，改善了草莓品质和风味。

2005年至2007年，对照组：没有应用菌ZLS-01的对照，田间出现连作病害，主要表现为草莓根系腐烂、植株矮化、叶片变小等病态，到膨大期果实增大缓慢、继而呈缺水状、植株萎蔫甚至死亡。产量没有得到恢复，反而进一步滑坡，有的对照产量跌到了每亩1000公斤以下。

上述差异说明：本发明菌株抑制了连作土壤中对草莓生长有害的病菌，改善了连作土壤微生态环境，提高了土壤的肥力，从而使草莓植株生长健壮，提高了对病害的抗性，保障了草莓的产量和品质。

(三)草莓产量

自2002年起至2007年连续六年对昌平天翼草莓生产基地产量跟踪记录，结果如表2，在2004-2005年产量有一个很明显的低谷，主要反映了经过连续三年种植后，由于土壤状况的恶化，导致该品种草莓重茬病害严重，产量急剧下降，经过2005年秋季应用菌ZLS-01后，到2007年，草莓产量有了明显的回升，基本与2002年的产量持平。

表2、ZLS-01微生物菌剂对草莓产量的影响

年份	2002	2003	2004	2005	2006	2007
							产量(公斤/亩)	3000	2900	2300	1800	2100	2800

上述产量结果说明：本发明菌株抑制了连作土壤中的病害菌，改善了土壤的菌群结构，从而加速有机肥转化，提高肥料利用率，使土壤环境利于草莓生长，进而恢复了草莓产量。

(四)菌株ZLS-01对土壤中微生物数量的影响

方法：2007年的9月份(草莓定植初期)、次年1月份(草莓生长中期)和次年4月份(草莓生长末期)，取草莓植株根际土壤检测其中细菌数目和放线菌数目，每次每份田地中取样5份(即5个重复)；取一年中各检测结果的平均值。

细菌、放线菌数目统计方法采用平板计数法。

结果如表3所示，表明：使用菌株ZLS-01以后，土壤中微生物数量有明显的改善：与对照相比，细菌总数增加了11.2×10⁶cfu/g-32.8×10⁶cfu/g，放线菌数量增加了9.8×10⁵cfu/g-19.0×10⁵cfu/g，细菌总数增加更为明显。在土壤中形成了良好的菌群结构，增加了益生菌群的数量，对预防和抑制土传病害起到了积极作用。一般情况下，地力衰竭、连作病害严重的土壤往往植株根际细菌、放线菌的数量呈下降趋势，致病真菌增加。说明本发明菌株增加了土壤中益生菌细菌、放线菌的数量，使其更加利于草莓生长。

表3、ZLS-01微生物菌剂对土壤有益微生物数量的增加

(五)菌株ZLS-01对土壤物理性状的影响

此实验结果是昌平天翼草莓生产基地的统计结果。

土壤容重：是指土壤在未破坏自然结构的情况下，单位容积的干土重，以g/cm³表示。

土壤物理性状测定参照中国科学院南京土壤研究所土壤物理研究室主编的《土壤物理性质测定法》(北京：科学出版社，1978.1～21)进行。土壤容重采用环刀法测定，土壤pH值采用pH仪测定，土壤有机质测定采用重铬酸钾氧化-外加热法测定。

每年的9月份(草莓定植初期)、次年1月份(草莓生长中期)和次年4月份(草莓生长末期)，取草莓植株根际土壤检测进行物理性状检测，每次每份田地中取样5份(即5个重复)；取一年中各检测结果的平均值。

土壤pH值测定：2005年、2006年、2007年的平均土壤pH值分别为8.2、7.5、7.1；表明：使用菌株ZLS-013年后，土壤pH值趋向于中性，pH值从8.2下降到7.1，说明土壤酸碱缓冲能力增强。

土壤容重测定：2005年、2006年、2007年的平均土壤容重分别为1.45、1.29、1.25；表明：土壤容重呈每年递减状态，从1.45下降到1.25，说明随着大量有机肥和菌株ZLS-01的使用，土壤的透气、透水性和保水、保肥性增强。

土壤有机质含量测定：2005年、2006年、2007年的平均土壤有机质含量分别为2.80％、2.85％、3.20％；表明：随着大量有机肥和菌株ZLS-01的使用，土壤有机质逐年提高，从2.80％上升到3.20％，土壤肥力增高。

土壤物理性状的检测结果表明，本发明菌株ZLS-01改变了土壤中的菌群结构，使菌群结构利于草莓生长，改善了土壤性状，具体是降低了土壤pH值和土壤容重，提高了土壤有机质含量，增强了土壤酸碱缓冲能力，增强了土壤的透气、透水性和保水和保肥性，提高了土壤肥力，使土壤更利于植物生长发育。

(六)使用菌株ZLS-01对土壤养分含量的影响

此实验结果是昌平天翼草莓生产基地的统计结果。

土壤物理性状测定参照中国科学院南京土壤研究所土壤物理研究室主编的《土壤物理性质测定法》(北京：科学出版社，1978.1～21)进行。碱解氮测定采用碱解扩散法，速效磷测定采用0.5mol/L碳酸氢钠浸提法，速效钾测定采用1mol/L乙酸铵浸提-火焰光度法。

每年的9月份(草莓定植初期)、次年1月份(草莓生长中期)和次年4月份(草莓生长末期)，取草莓植株根际土壤检测进行养分含量检测，每次每份田地中取样5份(即5个重复)；取一年中各检测结果的平均值。

结果：

碱解氮：实验组：2005年、2006年、2007年的碱解氮含量分别为135mg/Kg、150mg/Kg、155mg/Kg。对照组：2005年、2006年、2007年碱解氮含量分别为123mg/Kg、120mg/Kg、118mg/Kg。

速效磷：实验组：2005年、2006年、2007年的速效磷含量分别为135mg/Kg、147mg/Kg、150mg/Kg。对照组：2005年、2006年、2007年速效磷含量分别为109mg/Kg、109mg/Kg、107mg/Kg。

速效钾：实验组：2005年、2006年、2007年的速效钾含量分别为90mg/Kg、97mg/Kg、112mg/Kg。对照组：2005年、2006年、2007年速效钾含量分别为79mg/Kg、79mg/Kg、76mg/Kg。

结果表明，连续三年使用菌ZLS-01，草莓根际土壤中的碱解氮、速效磷和速效钾含量都显著增加，年均分别增加了22.0％、33.0％和28.4％。其中速效磷含量增加最明显，年均增加了33.0％；土壤速效养分平均提高了27.8％。说明本发明菌株促进有利于草莓生长的菌群结构的生成，在有利菌群的作用下，土壤中的速效养分得以提高，对植物生长发育有利。

各年速效磷含量增加(％)＝(实验组中各年速效磷含量-对照组中各年速效磷含量)/各年对照组中速效磷含量；

速效磷年均增加(％)＝[2005年速效磷增加(％)+2006年速效磷增加(％)+2007年速效磷增加(％)]/3；

碱解氮和速效钾的各年含量增加及年均增加(％)与速效磷的计算公式相同。

土壤速效养分平均增加(％)＝[碱解氮年均增加(％)+速效磷年均增加(％)+速效钾年均增加(％)]/3。

序列表

<110>中国农业大学

<120>一株在草莓连作病害中起生防作用的枯草芽孢杆菌及其应用

<160>1

<210>1

<211>1612

<212>DNA

<213>枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)

<400>1

ggggggttac gaggcagtgc aagagcatga cggcaagtgg acgattgaag agtttgatcc 60

tggctcagga cgaacgctgg cggcgtgcct aatacatgca agtcgagcgg acagatggga 120

gcttgctccc tgatgttagc ggcggacggg tgagtaacac gtgggtaacc tgcctgtaag 180

actgggataa ctccgggaaa ccggggctaa taccggatgg ttgtttgaac cgcatggttc 240

aaacataaaa ggtggctttg gctaccactt acagatggac ccgcggcgca ttagctagtt 300

ggtgaggtaa cggctcacca aggcaacgat gcgtagccga cctgagaggg tgatcggcca 360

cactgggact gagacacggc ccagactcct acgggaggca gcagtaggga atcttccgca 420

atggacgaaa gtctgacgga gcaacgccgc gtgagtgatg aaggttttcg gatcgtaaag 480

ctctgttgtt agggaagaac aagtaccgtt caaatagggc ggtaccttga cggtacctaa 540

ccagaaagcc acggctaact acgtgccagc agccgcggta atacgtaggt ggcaagcgtt 600

gtccggaatt attgggcgta aagggctcgc aggcggtttc ttaagtctga tgtgaaagcc 660

cccggctcaa ccggggaggg tcattggaaa ctggggaact tgagtgcaga agaggagagt 720

gaaattccac gtgtagcggt gaaatgcgta gagatgtgga ggaacaccag tggcgaaggc 780

gactctctgg tctgtaactg acgctgagga gcgaaagcgt ggggagcgaa caggattaga 840

taccctggta gtccacgccg taacgatgag tgctaagtgt tagggggttt ccgcccctta 900

gtgctgcagc taacgcatta agcactccgc ctggggagta cggtcgcaag actgaaactc 960

aaaggaattg acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc gaagcaacgc 1020

gaagaaccct accaggtctt gacatcctct gacaatccta gagataggac gtccccttcg 1080

ggggcagagt gacaggtggt gcatggttgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta 1140

agtcccgcaa cgagcgcaac ccttgatctt agttgccagc attcagttgg gcactctaag 1200

gtgactgccg gtgacaaacc ggaggaaggt ggggatgacg tcaaatcatc atgcccctta 1260

tgacctgggc tacacacgtg ctacaatgga cagaacaaag ggcagcgaaa ccgcgaggtt 1320

aagccaatcc cacaaatctg ttctcagttc ggatcgcagt ctgcaactcg actgcgtgaa 1380

gctggaatcg ctagtaatcg cggatcagca tgccgcggtg aatacgttcc cgggccttgt 1440

acacaccgcc cgtcacacca cgagagtttg taacacccga agtcggtgag gtaacctttt 1500

aggagccagc cgccgaaggt gggacagatg attggggtga agtcgtaaca aggtagccgt 1560

agaatctcca gaggatcgcc gggaaccgag gacgagtcgt aatcatgtca tt 1612

Claims

1.枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ZLS-01，其保藏编号为CGMCC No.3513。

2.一种生物菌剂，其活性成分为保藏编号为CGMCC No.3513、菌株名称为ZLS-01的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。

3.保藏编号为CGMCC No.3513、菌株名称为ZLS-01的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)或权利要求2所述生物菌剂在拮抗病原真菌中的应用；所述病原真菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)或立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)。

4.保藏编号为CGMCC No.3513、菌株名称为ZLS-01的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)或权利要求2所述生物菌剂在植物连作中的应用；所述植物为草莓。

5.保藏编号为CGMCC No.3513、菌株名称为ZLS-01的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)或权利要求2所述生物菌剂在防治植物连作病害中的应用；所述植物为草莓。

6.保藏编号为CGMCC No.3513、菌株名称为ZLS-01的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)或权利要求2所述生物菌剂在改善植物连作土壤中菌群结构中的应用；或保藏编号为CGMCC No.3513、菌株名称为ZLS-01的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)或权利要求2所述生物菌剂在改善植物连作土壤微生态环境中的应用；

所述植物为草莓。

7.保藏编号为CGMCC No.3513、菌株名称为ZLS-01的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)或权利要求2所述生物菌剂在增加植物连作土壤中利于植物生长的细菌数目和利于植物生长的放线菌数目中的应用；或保藏编号为CGMCC No.3513、菌株名称为ZLS-01的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)或权利要求2所述生物菌剂在降低植物连作土壤的pH值、降低植物连作土壤的土壤容重和/或增加植物连作土壤中的有机质含量中的应用；或保藏编号为CGMCC No.3513、菌株名称为ZLS-01的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)或权利要求2所述生物菌剂在增加植物连作土壤中的碱解氮、速效磷和/或速效钾中的应用；

所述植物为草莓。

8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于：所述连作土壤为连作2茬以上的土壤。