JP2007502124A5 - - Google Patents
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Claims (18)
- KREDポリペプチドであって、該KREDポリペプチドは、配列番号2のポリペプチドの少なくとも1.5倍のKRED活性でエチル4−クロロアセトアセテートをエチル(S)−4−クロロ−3−ヒドロキシブチレートへと変換可能であり、かつ、該KREDポリペプチドは、配列番号2のアミノ酸配列に対して少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を含む、KREDポリペプチド。
- 請求項1に記載のKREDポリペプチドであって、該KREDポリペプチドは、配列番号2のポリペプチドの約1.5倍〜約25倍のKRED活性でエチル4−クロロアセトアセテートをエチル(S)−4−クロロ−3−ヒドロキシブチレートへと変換可能であり、かつ該KREDポリペプチドは、A2V;K3E;F5LまたはF5C;N7K;E9GまたはE9K;A12V;P13L;P14A;A16GまたはA16V;T18A;K19I;N20DまたはN20S;E21K;S22NまたはS22T;Q24HまたはQ24R;V25A;N32SまたはN32D;A36T;S41G;S42N;I45L;A48T;V56A;V60I;Y64H;N65K、N65D、N65YまたはN65S;S66GまたはS66R;H67LまたはH67Q;D68GまたはD68N;G71D;E74KまたはE74G;K78R;K79R;K85R;A86V;N90D;S93NまたはS93C;D95N、D95G、D95V、D95YまたはD95E;K98R;Q99L、Q99R、またはQ99H;T100A;I101V;Q103R;I105VまたはI105T;K106RまたはK106Q;H110Y、H110CまたはH110R;V114A;A116G;I120V;K124R;D129GまたはD129N;D131GまたはD131V;D132N;K134M、K134V、K134EまたはK134R;D137NまたはD137G;Q138L;V140I;D143N;L144F;K145R;V147A;V150A;H153YまたはH153Q;H157Y;F158LまたはF158Y;R159K;E160GまたはE160V;F162YまたはF162S;E163GまたはE163K;E165D、E165GまたはE165K;K167IまたはK167R;A170S;V172I;F173C;M177VまたはM177T;H180Y;V184I;T190A;A193V;A194V;F201L;K203R;F209Y;V218I;N224S;E226K、E226GまたはE226D;S228T;D229A;V231IまたはV231A;Q223KまたはQ223R;E234GまたはE234D;T235KまたはT235A;N237Y;K238RまたはK238E;T251A;V255A;F260L;A262V;T272A;I274L;I275LまたはI275V;およびP283Rからなる群より選択される1〜20個のアミノ酸置換を有することによって配列番号2のポリペプチドとは異なる、KREDポリペプチド。
- 請求項1に記載のKREDポリペプチドであって、該KREDポリペプチドは、配列番号224、配列番号244、配列番号246、配列番号250、配列番号252、配列番号254、配列番号256、配列番号260、配列番号304、配列番号344、配列番号354、配列番号358、配列番号360、配列番号364、配列番号368、配列番号374、配列番号382、配列番号386、配列番号388、配列番号400、配列番号408、配列番号438、配列番号440、配列番号448、配列番号470、配列番号484、配列番号486、配列番号488、配列番号490、配列番号502、配列番号506、配列番号508、配列番号512、配列番号514、配列番号516、配列番号518、配列番号520、配列番号522、配列番号524、配列番号526、配列番号528、配列番号530、配列番号532、配列番号534、配列番号536、配列番号538、配列番号540、および配列番号542からなる群より選択されるアミノ酸を有する、KREDポリペプチド。
- 請求項1に記載のKREDポリペプチドであって、該ポリペプチドは、
(a)配列番号224、配列番号244、配列番号246、配列番号250、配列番号252、配列番号254、配列番号256、配列番号260、配列番号304、配列番号344、配列番号354、配列番号358、配列番号360、配列番号364、配列番号368、配列番号374、配列番号382、配列番号386、配列番号388、配列番号400、配列番号408、配列番号438、配列番号440、配列番号448、配列番号470、配列番号484、配列番号486、配列番号488、配列番号490、配列番号502、配列番号506、配列番号508、配列番号512、配列番号514、配列番号516、配列番号518、配列番号520、配列番号522、配列番号524、配列番号526、配列番号528、配列番号530、配列番号532、配列番号534、配列番号536、配列番号538、配列番号540、および配列番号542のアミノ酸配列に対して少なくとも90%同一性を有するか;
(b)(i)配列番号223、配列番号243、配列番号245、配列番号249、配列番号251、配列番号253、配列番号255、配列番号259、配列番号303、配列番号343、配列番号353、配列番号357、配列番号359、配列番号363、配列番号367、配列番号373、配列番号381、配列番号385、配列番号387、配列番号399、配列番号407、配列番号437、配列番号439、配列番号447、配列番号469、配列番号483、配列番号485、配列番号487、配列番号489、配列番号501、配列番号505、配列番号507、配列番号511、配列番号513、配列番号515、配列番号517、配列番号519、配列番号521、配列番号523、配列番号525、配列番号527、配列番号529、配列番号531、配列番号533、配列番号535、配列番号537、配列番号539、または配列番号541のヌクレオチド配列、(ii)少なくとも100ヌクレオチドの(i)の部分配列、または、(iii)(i)もしくは(ii)の相補鎖のうちのいずれかと、中程度のストリンジェンシー条件下においてハイブリダイズする核酸配列によってコードされるか;
(c)1〜6個のアミノ酸の置換、欠失、および/または挿入を含む、配列番号224、配列番号244、配列番号246、配列番号250、配列番号252、配列番号254、配列番号256、配列番号260、配列番号303、配列番号344、配列番号354、配列番号358、配列番号360、配列番号364、配列番号368、配列番号374、配列番号382、配列番号386、配列番号388、配列番号400、配列番号408、配列番号438、配列番号440、配列番号448、配列番号470、配列番号484、配列番号486、配列番号488、配列番号490、配列番号502、配列番号506、配列番号508、配列番号512、配列番号514、配列番号516、配列番号518、配列番号520、配列番号522、配列番号524、配列番号526、配列番号528、配列番号530、配列番号532、配列番号534、配列番号536、配列番号538、配列番号540、および配列番号542のポリペプチド改変体であるか;
(d)配列番号224、配列番号244、配列番号246、配列番号250、配列番号252、配列番号254、配列番号256、配列番号260、配列番号303、配列番号344、配列番号354、配列番号358、配列番号360、配列番号364、配列番号368、配列番号374、配列番号382、配列番号386、配列番号388、配列番号400、配列番号408、配列番号438、配列番号440、配列番号448、配列番号470、配列番号484、配列番号486、配列番号488、配列番号490、配列番号502、配列番号506、配列番号508、配列番号512、配列番号514、配列番号516、配列番号518、配列番号520、配列番号522、配列番号524、配列番号526、配列番号528、配列番号530、配列番号532、配列番号534、配列番号536、配列番号538、配列番号540、および配列番号542のポリペプチドからの少なくとも220アミノ酸残基フラグメントであるか;あるいは、
(e)50℃にてpH7で60分間インキュベーションした後に、最初のKRED活性の60%より多くを保持する、(a)、(b)、(c)または(d)のポリペプチドである;
KREDポリペプチド。 - 請求項1、2、3、16、17、または18のうちのいずれか1項に記載のKREDポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド。
- 請求項5に記載のポリヌクレオチドを含むヌクレオチド構築物であって、遺伝子発現を制御する一つ以上の異種調節配列に対して作動可能に連結されている、ヌクレオチド構築物。
- 請求項5に記載のポリヌクレオチドを含むベクターであって、該ポリヌクレオチドは、該ポリヌクレオチドによってコードされる前記KREDポリペプチドの発現の制御配列に対して作動可能に結合されており、該ベクターは、宿主細胞内で該KREDポリペプチドを発現するように該宿主細胞を形質転換し得る、ベクター。
- 前記KREDポリペプチドをコードする請求項5に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞であって、該ポリヌクレオチドは、該宿主細胞内で該KREDポリペプチドの発現のための一つ以上の制御配列に対して作動可能に連結されている、宿主細胞。
- 単離されかつ精製された、請求項1に記載のKREDポリペプチド。
- 凍結乾燥形態の請求項1に記載のKREDポリペプチド。
- 緩衝化媒体中に請求項1に記載のKREDポリペプチドを含む、組成物。
- 補因子としてNADHを用いることについて増加した特異性を有する請求項1に記載のKREDポリペプチドであって、該ポリペプチドは、アミノ酸残基E226における変異を有することによって配列番号2のポリペプチドとは異なる、KREDポリペプチド。
- 請求項12に記載のKREDポリペプチドであって、E226における変異が、E226G、E226D、またはE226Kである、KREDポリペプチド。
- 増加した熱安定性を有する請求項1に記載のKREDポリペプチドであって、該ポリペプチドは、アミノ酸残基P14、V140、V184またはA194あるいはそれらの任意の組み合わせにおける変異を有することによって配列番号2のポリペプチドとは異なる、KREDポリペプチド。
- 請求項14に記載のKREDポリペプチドであって、前記変異は、P14A、V140I、V184I、またはA194Vのうちの1つ以上である、KREDポリペプチド。
- 請求項1に記載のポリペプチドであって、該ポリペプチドは、配列番号2のポリペプチドの少なくとも9倍のKRED活性でエチル4−クロロアセトアセテートをエチル(S)−4−クロロ−3−ヒドロキシブチレートへと変換可能であり、かつ該ポリペプチドは、配列番号518、配列番号520、配列番号526、配列番号528、配列番号536、配列番号538、または配列番号540のアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
- 請求項1に記載のポリペプチドであって、該ポリペプチドは、配列番号2のポリペプチドの少なくとも13倍のKRED活性でエチル4−クロロアセトアセテートをエチル(S)−4−クロロ−3−ヒドロキシブチレートへと変換可能であり、かつ該ポリペプチドは、配列番号536または配列番号538のアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
- 請求項1に記載のポリペプチドであって、前記アミノ酸配列は、9位においてグリシン、14位においてアラニン、42位においてアスパラギン、190位においてアラニン、194位においてバリンを含む、ポリペプチド。
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