JP2007222120A - 自動培養装置 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】培養環境に保持される恒温槽3内に収納された培養器1と、複数の薬品がそれぞれ貯留された複数の薬品容器5、7、9と、前記培養器1に連通された管路29を介して薬品を前記培養器1に供給する供給ポンプ35と、前記培養器1に連通された管路59を介して前記培養器1内の液体を排出する排出ポンプ61とを備えてなり、前記培養器1は、密閉して形成され、前記供給ポンプ35の吐出管路29が接続されるノズル69と、前記排出ポンプ61の吸引管路59が接続されるノズル71と、前記恒温槽3内に開口されたノズル73とが設けられ、該ノズル73の開口端に、それぞれピンチ弁87、85を介して吸気フィルター81と排気フィルター77を設けたことを特徴とする。
【選択図】図1
Description
培養開始前は、本実施形態の自動培養装置内は、γ線等で滅菌処理される。また、本実施形態の細胞回収バッグ11は、塩化ビニル等の折り曲げ可能な素材で作られているため、内部に不潔な空気が入らない状態で取り付けることができるから、高い無菌状態を維持できる。滅菌処理が終了すると、図5に示すフローチャートに従って、制御装置の制御により細胞が培養される。
培養開始の信号が出されると、培地の注入が行われる。培地の注入は、ピンチ弁21、33、85を開き、供給ポンプ35を作動させると、薬品バッグ9に貯留された培地が培養器1に注入される。この際、培養器1内の空気は、フィルター77から矢印B方向に培地の注入量に応じて排気されるから、培養器1内の圧力上昇を抑えて、円滑に培養器1内に薬品を注入することができる。また、フィルター77によって培養器1内の物質がインキュベータ3内に排出されるのを防止できる。
培地の注入が終了すると、細胞液の注入が行われる。まず、予め、細胞と培地等が懸濁状態にされた細胞液を、シリンジ41をフィルム45に穿刺して、液溜め43に注入しておく。細胞液の注入は、ピンチ弁40、85を開き、供給ポンプ35を作動させることにより、液溜め43の細胞液が培養器1に供給される。
この際、培養器1内の空気は、フィルター77により矢印B方向に排気されるので、培養器1内の圧力上昇を抑えて、円滑に細胞液を培養器1に供給できる。細胞液の注入が終了すると、供給ポンプ35を停止させ、ピンチ弁40、85を閉じる。
細胞液が注入されると、設定期間、静置して細胞を増殖させる。例えば、3日程静置して細胞を増殖させる。この設定期間は、細胞の種類等によって変更される。また、細胞の増殖速度に従って、変更してもかまわない。
3日間放置後、空気送りを実行する。本実施形態の培養器1内部は、細胞培養中は密閉状態にあり、適時、培養器1内を換気する必要がある。ピンチ弁33、85を開き、供給ポンプ35を動作させて、フィルター37を介してインキュベータ3内の空気を培養器1内に注入しつつ、フィルター77を介して培養器1内の空気をインキュベータ3内に排出する。一定時間、空気送りを行った後、供給ポンプ35を停止させ、ピンチ弁33、85を閉じる。なお、本実施形態では、空気送りは1回としているが、後述する培地交換、細胞回収以外の時間は、何回行ってもよく、また常時連続して実施しても構わない。
空気送りが終了し、設定期間の間、放置した後、培地交換を行う。培地交換は、培地中に溶出する細胞の代謝物質の排出、及び培地の栄養分補給のため、定期的に行われる。通常、ステップS3からステップS5の動作は3日〜7日おきに実施するが、この期間は、予め設定、もしくは細胞の増殖状況に応じて任意に変更できる。培地交換では、培養器1内の培地を排出した後に、新たな培地を培養器1内に注入する。
培地の交換が終了すると、培地交換回数が、予め設定した培地交換回数に達しているか否か判断される。設定値に達していればステップS7の操作が行われ、達していなければステップS4に戻る。この設定回数は、予め設定しているが、細胞の培養速度等に従って変更しても構わない。
ステップS7では、空気送りが行われるが、ステップS4と同様な操作であることから説明を省略する。
空気送りが終了すると、設定期間、静置して細胞を増殖させる。この設定期間は、細胞の種類等によって変更される場合がある。また、細胞の増殖速度に従って、変更してもかまわない。
設定期間、静置すると、培養細胞の回収が行われる。培養細胞の回収では、培養器1内部の培地の排出、薬品バッグ5に貯留された洗浄液の注入及び排出をした後、薬品バッグ7に貯留された剥離剤を培養器1に注入して培養細胞を剥離させ、細胞回収バッグ11に培養細胞を回収する。
3 インキュベータ
5、7、9 薬品バッグ
11 細胞回収バッグ
17、19、21、47 ピンチ弁
35 供給ポンプ
61 排出ポンプ
69、71、73 ノズル
37、77、81 フィルター
Claims (5)
- 培養環境に保持される恒温槽内に収納された細胞の培養器と、培養に必要な複数の薬品がそれぞれ貯留された複数の薬品容器と、前記培養器に連通された管路を介して前記各薬品容器内の薬品を前記培養器に供給する供給ポンプと、前記培養器に連通された管路を介して前記培養器内の液体を排出する排出ポンプとを備えてなり、前記培養器は、密閉して形成され、前記供給ポンプの吐出管路が接続される第1のノズルと、前記排出ポンプの吸引管路が接続される第2のノズルと、前記恒温槽内に開口された第3のノズルとが設けられ、該第3のノズルの開口端に、それぞれピンチ弁を介して吸気フィルターと排気フィルターが設けられていることを特徴とする自動培養装置。
- 前記排出ポンプの吐出管路にピンチ弁を介して前記培養器内の培養細胞が回収される細胞回収容器が連結されていることを特徴とする請求項1に記載の自動培養装置。
- 前記排出ポンプの吐出管路にピンチ弁を介して前記培養器の廃液が排出される廃液容器が連結されていることを特徴とする請求項1又は2に記載の自動培養装置。
- 前記供給ポンプを駆動する際、前記恒温槽内に設けられた前記排気フィルターのピンチ弁を開くことを特徴とする請求項1乃至3に記載の自動培養装置。
- 前記排出ポンプを駆動する際、前記恒温槽内に設けられた前記吸気フィルターのピンチ弁を開くことを特徴とする請求項1乃至3に記載の自動培養装置。
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