JP2006204263A

JP2006204263A - 培養容器および培養方法

Info

Publication number: JP2006204263A
Application number: JP2005024140A
Authority: JP
Inventors: Hiroki Hibino; 浩樹日比野; Yoshiko Masuda; 芳子増田
Original assignee: Olympus Corp
Current assignee: Olympus Corp
Priority date: 2005-01-31
Filing date: 2005-01-31
Publication date: 2006-08-10

Abstract

【課題】微生物感染に関する管理をより容易に行うことができるとともに、細胞の効率的な培養を可能とする。
【解決手段】培地Ｂを貯留する容器本体２と、該容器本体２の開口部３に着脱可能に取り付けられ開口部３を密封するキャップ４とを備え、容器本体２が、細胞Ａを接着させる材質からなる接着面２ａと、貯留された培地Ｂに接触する位置に設けられ、ガスＧの透過を許容し、微生物の通過を遮断するガス透過性膜７とを備える培養容器１を提供する。
【選択図】図２

Description

本発明は、培養容器および培養方法に関するものである。

従来、細胞の培養は、ポリスチレン製の底面を有し、上方に開口する開放式のシャーレ状の培養容器あるいはマイクロプレート内に貯留した培地内に細胞を投入し、ＣＯ_２インキュベータ内に配置することにより行われている（例えば、非特許文献１参照。）。
また、ガス透過性の２つの膜の間に培養チェンバーを形成してなる細胞培養装置も知られている（例えば、特許文献１参照。）。
芝良昭、他２名、"Growth and Morphology of Anchorage-Dependent Animal Cells in a Liquid/Liquid InterfaceSystem"、BIOTECHNOLOGYAND BIOENGINEERING、５７巻、ＮＯ．５、 1９９８年３月５日、ｐ．５８３−５８６特表２００２−５３９７８３号公報

しかしながら、シャーレ状の培養容器あるいはマイクロプレートのような開放式の培養容器は、ＣＯ_２インキュベータ内に収容することによって、温度、湿度およびＣＯ_２濃度等の培養条件を一定に維持することができるものの、ＣＯ_２インキュベータ内外における細胞への微生物感染等を回避するためには、より慎重に管理する必要がある。また、同一のＣＯ_２インキュベータ内に異なる複数の検体を同時に収容して培養する場合に、検体間におけるクロスコンタミネーション等を回避するために、管理を厳重に行う必要がある。

また、２つの膜間に培養チェンバーを形成した特許文献１の細胞培養装置の場合には、膜の表面に細胞を付着させて増殖させることが困難であるため、細胞を効率よく増殖させることが困難であるという問題がある。

この発明は、上述した事情に鑑みてなされたものであって、微生物感染に関する管理をより容易に行うことができるとともに、細胞を効率的に培養することができる培養容器および培養方法を提供することを目的としている。

上記目的を達成するために、本発明は以下の手段を提供する。
本発明は、培地を貯留する容器本体と、該容器本体の開口部に着脱可能に取り付けられ開口部を密封するキャップとを備え、前記容器本体が、細胞を接着させる材質からなる接着面と、貯留された培地に接触する位置に設けられ、ガスの透過を許容し、微生物の通過を遮断するガス透過性膜とを備える培養容器を提供する。

本発明によれば、容器本体内に培地および細胞を収容して、開口部をキャップにより閉塞することにより、容器本体内部が密閉される。細胞は、容器本体に設けられた接着面に接着して成長する。また、培地内には、容器本体に設けられ培地に接触するガス透過性膜を介して、ＣＯ_２ガスを供給される。したがって、細胞と培地を収容した培養容器をＣＯ_２インキュベータ内に収容することにより、温度、湿度およびＣＯ_２濃度において、適正な培養条件に維持することができ、また、容器本体を密封することによって、容器本体内の細胞における微生物感染やクロスコンタミネーションの問題をより容易に回避することが可能となる。

上記発明においては、前記容器本体の開口部が、容器本体の底面に対向する上部に、上方に向けて開口していることとしてもよい。
このように構成することで、上方に開口する開口部から、例えば、ピペットを上下方向に挿入ことができ、ピペットの先端を容器本体内の培地に接触させて、培地を吸引し、外部に排出することができる。この場合に、ピペットの姿勢を鉛直方向に維持したまま培地を吸引できるので、ピペットの先端から培地がこぼれることが防止される。

また、本発明は、培地を貯留する容器本体と、該容器本体の開口部に着脱可能に取り付けられ開口部を密封するキャップとを備え、前記容器本体が、細胞を接着させる材質からなる接着面を備え、前記キャップに、ガスの透過を許容し、微生物の通過を遮断するフィルタが備えられるとともに、開口部に取り付けられた状態で、フィルタの上方を覆うように設けられるカバー部材が備えられている培養容器を提供する。

本発明によれば、培地および細胞を容器本体に収容した状態で、容器本体の開口部をキャップにより密封することにより、容器本体内への微生物の侵入が禁止されるとともに、フィルタを介して容器本体内にＣＯ_２ガスが供給される。容器本体には、細胞を接着させる接着面が備えられているので、容器本体内の細胞は接着面に接着して成長する。
したがって、細胞と培地を収容した培養容器をＣＯ_２インキュベータ内に収容することにより、温度、湿度およびＣＯ_２濃度において、適正な培養条件に維持することができ、また、容器本体を密封することによって、容器本体内の細胞における微生物感染やクロスコンタミネーションの問題をより容易に回避することが可能となる。

また、本発明は、貯留された培地内に細胞を投入して培養する培養容器内に所定濃度のＣＯ_２ガスを封入して密封するステップと、密封された培養容器を恒温槽内に収容して、細胞を培養するステップとを備える培養方法を提供する。
本発明によれば、培養容器内にＣＯ_２ガスが封入されるので、所定期間にわたって、ＣＯ２濃度に関して適正な培養条件に維持される。この状態で培養容器を密封して恒温槽内に収容することにより、温度に関しても適正な培養条件を維持することができる。この場合に、培養容器が密封されているので、恒温槽内における培養中に、微生物等が培養容器内に侵入することを防止でき、また、他の異なる検体を恒温槽内に同時に収容しても、クロスコンタミネーションが発生することを防止できる。

また、本発明は、ＣＯ_２ガス供給口と、ＣＯ_２ガス排出口とを備える密封された培養容器内に、所定の培地と細胞とを投入し、密封された培養容器を恒温槽内に収容して、ＣＯ_２ガスを培養容器内に流通させながら細胞を培養する培養方法を提供する。
この発明によれば、密封された培養容器内に所定の培地と細胞とを収容してＣＯ_２ガス供給口からＣＯ_２を供給し、ＣＯ_２ガス排出口からＣＯ_２ガスを排出することにより、ＣＯ_２ガスを培養容器内に流通させて、培養容器内のＣＯ_２濃度に関して適正な培養条件を維持する。この状態で培養容器を恒温槽内に収容することにより、温度に関しても適正な培養条件を維持することができる。培養容器内にはＣＯ_２ガスが流通させられるのみで、他の微生物や他検体が混入することが防止される。

本発明に係る培養容器および培養方法によれば、細胞を培養する培養容器が密封されるので、培養中に培養容器内部に微生物や他検体が混入する不都合を防止して、細胞の健全な増殖を図ることができるという効果を奏する。

以下、本発明の第１の実施形態に係る培養容器１について、図１〜図４を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る培養容器１は、図１に示されるように、所定の培地を貯留可能な容器本体２と、該容器本体２に設けられた開口部３を密封可能に取り付けられるキャップ４と、容器本体２とキャップ４との間に挟まれるシール部材５とを備えている。

容器本体２は、例えば、ポリスチレンにより構成され、その内表面に疎水化処理が施されている。特に、容器本体２の底面には、細胞が接着して成長するための平坦な接着面２ａが備えられている。また、容器本体２の上面には、容器壁を貫通して窓部６が形成されている。

この窓部６は、ガス透過性膜７によって閉塞されている。ガス透過性膜７は、容器本体２外部からのガスの通過を許容する一方、微生物等の通過を禁止する膜であって、十分に小さい孔径の貫通孔（図示略）を複数有する透過膜である。ガス透過性膜７は、容器本体２内の観察を可能とするために光学的に透明な生体適合性の材質、例えば、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリカーボネート等の高分子材料により構成されている。

容器本体２の上部には、容器本体２が水平面に載置されたときに、鉛直上方に向かって延びるネック部８が設けられ、その先端に容器本体２内外を連通する開口部３が設けられている。また、開口部３は、容器本体２が水平面に載置されたときに、前記窓部５よりも高くなる位置に設けられている。

ネック部８には、その外面に雄ネジ９が形成されている。また、キャップ４には、ネック部８の雄ネジ９に締結される雌ネジ１０が設けられている。キャップ４の雌ネジ１０をネック部８の雄ネジ９に締結していくと、キャップ４によって開口部３が気密状態に閉塞されるようになっている。また、ネック部８の雄ネジ９に締結されているキャップ４を緩めていくと、容器本体２内部の気密状態が解除されるようになっている。

このように構成された本実施形態に係る培養容器１の作用について、以下に説明する。
本実施形態に係る培養容器１を用いて細胞Ａを培養するには、図２に示されるように、容器本体２内に所定の培地Ｂと培養すべき細胞Ａとを投入する。このとき、培地Ｂは、ネック部８の途中位置まで達するように投入する。これにより、培地Ｂが容器本体２上面の窓部６に設けられたガス透過性膜７に接触するようになる。

この状態で、ネック部８に設けられた雄ネジ９にキャップ４の雌ネジ１０を締結し、キャップ４とネック部８の先端との間でシール部材５を圧縮することによってネック部８先端の開口部３を気密状態に閉塞する。これにより、容器本体２内部には、ガス透過性膜７を介したガスＧの透過のみが許容され、他の物質、例えば、微生物や他の検体の侵入が禁止される。

このようにして密封された細胞Ａおよび培地Ｂ入りの培養容器１は、ＣＯ_２インキュベータ（図示略）内に収容されることで、細胞Ａの培養が開始される。ＣＯ_２インキュベータ内部は、ＣＯ_２濃度５％、温度３７℃に維持されている。
したがって、ＣＯ_２インキュベータ内部のＣＯ_２ガスは、ガス透過性膜７を介して容器本体２内部の培地Ｂ内に取り込まれる。また、培養容器１全体が３７℃に加温されることで、細胞Ａおよび培地Ｂも３７℃の温度に維持されることになる。

すなわち、本実施形態に係る培養容器１によれば、キャップ４によって開口部３を密封した状態でも、容器本体２内部におけるＣＯ_２濃度および温度に関して、適正な培養条件を維持することができる。また、容器本体２の接着面２ａが、ポリスチレンにより構成され、疎水処理が施されているので、接着性の細胞Ａが付着し易い環境が整えられている。したがって、細胞Ａは接着面２ａに接着して効率的に増殖することができる。

この場合において、本実施形態に係る培養容器１によれば、ＣＯ_２インキュベータ内に配されているときに、容器本体２内部にはＣＯ_２ガスの供給のみが許容され、他の物質の侵入が禁止されているので、仮に、ＣＯ_２インキュベータ内に、微生物等の他の物質が存在したとしても、それらの物質が培養容器１内に侵入することがない。したがって、より容易に微生物感染等の不都合の発生を防止することができる。

また、他の異なる細胞ＡをＣＯ_２インキュベータ内に収容して同時に培養することとしても、さらには、他の細胞Ａの培養容器１が破損する等して、他の細胞Ａやそれを含む培地Ｂが培養容器１の上方から降りかかったとしても、本実施形態に係る培養容器１はキャップ４によって密封されているので、それらの細胞Ａが容器本体２内部に侵入することがなく、いわゆるクロスコンタミネーションの発生を防止することができる。

また、本実施形態に係る培養容器１は、開口部３が容器本体２の上部に鉛直上方に向かって設けられているので、培地Ｂの交換等を行う際に、図３に示されるように、ピペット先端に取り付けたチップ１１の先端を鉛直上方から開口部３に挿入して、内部の培地Ｂを吸引することができる。特に、自動機により、チップ１１の移動および吸引動作を行わせる場合に、鉛直上方から、容器本体２内にチップ１１の先端を挿入して吸引し、容器本体２内から鉛直上方に抜き出すことにより、自動機の動作を簡易にすることができるとともに、チップ１１の先端からの液だれ等の問題の発生を低減することができるという利点がある。

なお、培地Ｂの吸引の際に、図４に示されるように容器本体２を傾斜させて培地Ｂを底面の一カ所に偏らせることで、吸引し易さを向上し、残り少なくなった培地Ｂをも余すことなく吸引することができる。
また、本実施形態においては、容器本体２の上部に窓部６を設け、この窓部６を閉塞するようにガス透過性膜７を設けることとしたが、これに代えて、あるいは、これとともに、容器本体２の側壁に窓部６を設け、この窓部６を閉塞するガス透過性膜７を設けることにしてもよい。細胞Ａが接着する接着面２ａとしては容器本体２の底面が適しているため、底面以外の容器壁に窓部６を設けて、ガス透過性膜７によりＣＯ_２ガスの容器本体２内への供給を可能にすることが好ましい。

次に、本発明の第２の実施形態に係る培養容器２０について、図５を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る培養容器２０は、図５に示されるように、培地Ｂを貯留する容器本体２１と、該容器本体２１の開口部２２に着脱可能に取り付けられるキャップ２３とを備えている。

本実施形態においても、容器本体２１はポリスチレンにより構成され、その内面には疎水処理が施されている。これにより、投入された細胞Ａは容器本体２１内面の接着面２１ａに接着して効率的に増殖することができるようになっている。本実施形態において容器本体２１には窓部が設けられておらず、全体的に、ほぼ一様な厚さを有する容器壁によって構成されている。

容器本体２１の上部には、第１の実施形態と同様に、鉛直上方に向かって延びるネック部２４と、その先端に上向きに開口する開口部２２とが設けられている。ネック部２４の外周面に雄ネジ２５が形成されている点も第１の実施形態に係る培養容器１と同様である。

キャップ２３は、図５に示されるように、前記ネック部２４の雄ネジ２５に締結される雌ネジ２６を有する。また、キャップ２３には、気体の通過を許容し、微生物等の物質の通過を禁止するフィルタ２７が設けられている。また、フィルタ２７の外部には、フィルタ２７全体を覆うカバー部材２８が設けられている。カバー部材２８は、フィルタ２７との間に隙間をあけて設けられており、フィルタ２７を介した気体の流通を許容しつつ、キャップ２３の上方から降りかかる物質が、フィルタ２７に付着しないように防護するようになっている。

このように構成された本実施形態に係る培養容器２０の作用について以下に説明する。
本実施形態に係る培養容器２０を用いて細胞Ａを培養するには、容器本体２１内に所定の培地Ｂと培養すべき細胞Ａとを投入する。このとき、培地Ｂは、ネック部２４に到達しない十分に低い液位に設定する。これにより、培地Ｂがキャップ２３のフィルタ２７に接触しないようにすることができる。

この状態で、ネック部２４に設けられた雄ネジ２５にキャップ２３の雌ネジ２６を締結し、キャップ２３とネック部２４との間においてシール部材２９を圧縮することによってネック部２４先端の開口部２２を気密状態に閉塞する。これにより、容器本体２１内部には、フィルタ２７を介したガスの透過のみが許容され、他の物質、例えば、微生物や他の検体の侵入が禁止される。また、フィルタ２７は、カバー部材２８によって覆われているので、培養容器２０の上方から何らかの液体等が降りかかっても、これらの液体がフィルタ２７に直接付着してしまうことが防止される。これにより、フィルタ２７の通気性を維持し、容器本体２１内へのガス供給が阻害されてしまうのを防止することができる。

このようにして密封された細胞Ａおよび培地Ｂ入りの培養容器２０がＣＯ_２インキュベータ（図示略）内に収容されることで、細胞Ａの培養が開始される。ＣＯ_２インキュベータ内部は、ＣＯ_２濃度５％、温度３７℃に維持されている。
したがって、ＣＯ_２インキュベータ内部のＣＯ_２ガスは、カバー部材２８とフィルタ２７との隙間からフィルタ２７を介して容器本体２１内部の培地Ｂ内に取り込まれる。また、培養容器２０全体が３７℃に加温されることで、細胞Ａおよび培地Ｂも３７℃の温度に維持されることになる。

すなわち、本実施形態に係る培養容器２０によれば、キャップ２３によって開口部２２を密封した状態でも、培養容器２０内部におけるＣＯ_２濃度および温度に関して、適正な培養条件を維持することができる。また、容器本体２１の接着面２１ａが、ポリスチレンにより構成され、疎水処理が施されているので、接着性の細胞Ａが付着し易い環境が整えられている。したがって、細胞Ａは接着面２１ａに接着して効率的に増殖することができる。

なお、本実施形態においても、開口部２２が容器本体２１の上部に鉛直上方に向かって設けられているので、特に、自動機により、チップの移動および吸引動作を行わせる場合に、鉛直上方から、容器本体２１内にチップの先端を挿入して吸引等することができ、自動機の動作を簡易にすることができるとともに、チップの先端からの液だれ等の問題の発生を低減することができるという利点がある。

次に、本発明の第３の実施形態に係る培養容器３０について、図６を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る培養容器３０は、図６に示されるように、容器本体３１と、該容器本体３１の開口部３２，３３に取り付けられるキャップ３４，３５とを備えている。

容器本体３１の開口部（ＣＯ_２ガス供給口）３２，開口部（ＣＯ_２ガス排出口）３３は、容器本体３１の上部２カ所に設けられ、それぞれにキャップ３４，３５が締結されている。２つのキャップ３４，３５には、それぞれチューブ３６，３７が接続されている。一方のチューブ３６の先端にはＣＯ_２ガスボンベのようなＣＯ_２ガス供給源（図示略）が接続されている。他方のチューブ３７の先端にはフィルタ（図示略）が設けられている。フィルタは、気体の流通を許容し、他の物質の侵入を禁止するようになっている。

このように構成された本実施形態に係る培養容器３０を用いて細胞Ａを培養するには、容器本体３１内に所定の培地Ｂと培養すべき細胞Ａとを投入し、容器本体３１の開口部３２，３３をキャップ３４，３５によって閉塞する。そして、容器本体３１を３７℃の恒温槽（図示略）内に配置するとともに、ＣＯ_２ガス供給源から５％濃度のＣＯ_２ガスＧを供給する。

これにより、ＣＯ_２ガス供給源から供給されるＣＯ_２ガスＧがチューブ３６を介して一方の開口部３２から容器本体３１内に流入する。その一方で、他方の開口部３３からは、容器本体３１内の気体Ｇ′がチューブ３７およびフィルタを介して外部に排出される。これにより、容器本体３１内部がキャップ３４，３５によって密封された状態のままで、細胞Ａの培養に適したＣＯ_２濃度５％および温度３７℃に維持され、接着面３１ａに接着した細胞Ａが効率よく増殖させられることになる。

この場合において、容器本体３１内部には、ＣＯ_２ガス供給源に接続されたチューブ３６から、清浄度を管理されたＣＯ_２ガスＧが供給されるのみで、他の物質の侵入が防止される。また、他方のチューブ３７の先端にはフィルタが設けられているので、ＣＯ_２ガス供給源が作動停止された状態においても、他方のチューブ３７から外部の雰囲気が逆流して容器本体３１内に流入することが防止される。したがって、より確実に微生物感染やクロスコンタミネーションの発生を防止することができる。

なお、培地交換の際には、一方のキャップ３４（３５）を取り外して、開放された開口部３２（３３）にチップの先端を上方から挿入し、容易に吸引することができる点は、第１および第２の実施形態に係る培養容器１，２０と同様である。
また、上記実施形態においては、３７℃の恒温槽に培養容器３０を収容して細胞Ａを培養することとしたが、これに代えて、３７℃に加温したＣＯ_２ガスＧを供給することとしてもよい。このようにすることで、恒温槽内への出し入れを行うことなく温度に関しても適正な培養条件を達成することができる。

また、図７に示されるように、さらに２つの開口部３８，３９を設け、培地Ｂ供給用のチューブ４０と、廃培地Ｂ′吸引用のチューブ４１とをそれぞれ接続した培養容器３０′を採用してもよい。このようにすることで、キャップ３４，３５，４２，４３を着脱することなく、ＣＯ_２ガスＧの供給および培地Ｂの交換を行うことができる。

次に、本発明の一実施形態に係る培養方法について、図８を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る培養方法は、所定の培地Ｂおよび培養すべき細胞Ａを収容可能な容器本体５０と、該容器本体５０の開口部５１に着脱可能に取り付けられるキャップ５２とを有する培養容器５３を使用する。培養容器５３としては、フィルタ２７もガス透過性膜７も有しておらず、容器本体５０内部を十分に気密状態に密閉する構造のものでよい。

本実施形態に係る培養方法は、所定の培地Ｂと細胞Ａとが収容された培養容器５３内に濃度５％のＣＯ_２ガスを封入して密封する第１ステップと、密封された培養容器５３を恒温槽内に収容して温度３７℃に維持する第２ステップとを備えている。
第１ステップは、濃度５％のＣＯ_２ガス雰囲気を達成可能なＣＯ_２ガス室５４内に、培地Ｂと細胞Ａとを収容した培養容器５３を配置して、ＣＯ_２ガス室５４内を濃度５％のＣＯ_２ガス雰囲気に設定し、この状態で培養容器５３のキャップ５２を開いて放置することにより、容器本体５０内に濃度５％のＣＯ_２ガスを充満させる。そして、この状態でキャップ５２を閉じることにより、培養容器５３内に濃度５％のＣＯ_２ガスを閉じこめる。

ＣＯ_２ガス室５４内におけるキャップ５２の開閉は、図示しない開閉機構によって自動的に行うこととしてもよい。また、ＣＯ_２ガス室５４をグローブボックスにより構成し、キャップ５２の開閉を手動で行うことにしてもよい。

第２ステップは、ＣＯ_２ガス室５４から濃度５％のＣＯ_２ガスを閉じこめた培養容器５３を取り出して、３７℃の恒温槽５５内に配置する。
この状態で、例えば、１日〜１週間放置することにより、培養容器５３内の細胞Ａは、温度３７℃、ＣＯ_２濃度５％の適正な培養条件に維持されるので、容器本体５０内の接着面５０ａに接着して効率よく増殖させられることになる。

そして、容器本体５０内のＣＯ_２収容量に応じた適当な時間間隔で、ＣＯ_２ガス室５４に戻してキャップ５２を開閉する第１ステップと、恒温槽５５に収容して放置する第２ステップとを繰り返すことにより、細胞Ａを培養することが可能となる。

この場合において、本実施形態に係る培養方法によれば、恒温槽５５に収容して細胞Ａを培養する第２ステップにおいて、容器本体５０をキャップ５２により密閉状態に維持することができる。したがって、第２ステップにおいて、培養容器５３の外部から微生物等の物質や同時に培養される他の検体が培養容器５３内に侵入することをより確実に防止することができる。

本発明の第１の実施形態に係る培養容器を示す縦断面図である。図１の培養容器を用いて細胞を培養する状態を示す縦断面図である。図１の培養容器における培地交換を説明する縦断面図である。図１の培養容器における培地交換の他の例を説明する縦断面図である。本発明の第２の実施形態に係る培養容器を示す縦断面図である。本発明の第３の実施形態に係る培養容器を示す縦断面図である。図７の培養容器の変形例を示す縦断面図である。本発明の一実施形態に係る培養方法を説明する模式的な図である。

符号の説明

Ａ細胞
Ｂ培地
ＧＣＯ_２ガス（ガス）
１，２０，３０，３０′，５３培養容器
２，２１，３１，３１′，５０容器本体
２ａ，２１ａ，３１ａ，５０ａ接着面（底面）
３，２２，３８，３９開口部
４，２３，３４，３５，４２，４３，５２キャップ
７ガス透過性膜
２７フィルタ
２８カバー部材
３２開口部（ＣＯ_２ガス供給口）
３３開口部（ＣＯ_２ガス排出口）
５５恒温槽

Claims

培地を貯留する容器本体と、該容器本体の開口部に着脱可能に取り付けられ開口部を密封するキャップとを備え、
前記容器本体が、細胞を接着させる材質からなる接着面と、貯留された培地に接触する位置に設けられ、ガスの透過を許容し、微生物の通過を遮断するガス透過性膜とを備える培養容器。
前記容器本体の開口部が、容器本体の底面に対向する上部に、上方に向けて開口している請求項１に記載の培養容器。
培地を貯留する容器本体と、該容器本体の開口部に着脱可能に取り付けられ開口部を密封するキャップとを備え、
前記容器本体が、細胞を接着させる材質からなる接着面を備え、
前記キャップに、ガスの透過を許容し、微生物の通過を遮断するフィルタが備えられるとともに、開口部に取り付けられた状態で、フィルタの上方を覆うように設けられるカバー部材が備えられている培養容器。
貯留された培地内に細胞を投入して培養する培養容器内に所定濃度のＣＯ_２ガスを封入して密封するステップと、
密封された培養容器を恒温槽内に収容して、細胞を培養するステップとを備える培養方法。
ＣＯ_２ガス供給口と、ＣＯ_２ガス排出口とを備える密封された培養容器内に、所定の培地と細胞とを投入し、密封された培養容器を恒温槽内に収容して、ＣＯ_２ガスを培養容器内に流通させながら細胞を培養する培養方法。