CN117089458A - 一种自动化细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装的装置及方法 - Google Patents

一种自动化细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装的装置及方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种自动化细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装的装置和方法,所述装置包含一次性封闭无菌液路、一次性离心装置、细胞分选装置、控制平台,控制程序。其中一次性封闭无菌液路为细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装提供封闭无菌环境以及传输通道。本发明的一次性离心装置用于和旋转机构连接,以控制程序所需转速进行旋转,用于对细胞培养、基因编辑过程中样品进行离心。细胞分选装置具有细胞传感器,对流经的细胞进行筛选。控制平台支撑方法有序进行,并为方法的进行提供支持和支撑。控制程序实现细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装方法自动化有序进行。本发明避免了传统方式引起的实验周期长,效果差,准确性低等缺点。

Description

一种自动化细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装的装置及 方法
技术领域
本发明涉及生命科学领域,尤其涉及一种自动化细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装的装置及方法。
背景技术
基因编辑和分选一直是生命科学技术领域研究的重点,对于进行基因治疗以及改变由于突变基因引起的相关疾病的预防和治疗起到重要作用。在基因编辑分选中操作者会按照规定的流程进行规定操作,但是由于操作过程中,操作者有时会出现细胞污染、细胞活性降低等其他影响实验进程和实验结果精准性的问题,以及在细胞分选过程中分选精准度不够导致分选结果失败,会导致整个实验过程延长和失效。
相关技术中,在细胞培养、基因编辑、以及细胞分选和分装过程中,主要是通过人工的方式进行,该方式虽然是目前细胞培养、基因编辑、以及细胞分选和分装的主流,但是操作效率和分选精度均比较低。
发明内容
本发明提供一种自动化细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装的方法,用以解决现有技术中实验效率和准确性低,避免了传统方式引起的实验周期长,效果差,准确性低等缺点。
本发明提供一种自动化细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装的装置,其特征在于,所述装置包括:至少9个液袋,每个液袋中分别包含细胞培养和基因编辑所需物料,该9个液袋中每个都分别具有1至9号夹管阀,所述夹管阀与控制中心相连;所述1至7号夹管阀并联到气泡传感器A上,8号和9号夹管阀并联到气泡传感器B上;气泡传感器A的一路经过11号夹管阀、蠕动泵、15号夹管阀、热交换器与一次性离心装置的上端进液口相连;气泡传感器A的另一路通过11号夹管阀、蠕动泵、16号夹管阀、热交换器气泡传感器C与一次性离心装置的上端进液口相连; 用以向一次性离心装置注入液体;还包含两条清洗液路,一条为气泡传感器A、10号夹管阀、蠕动泵、14号夹管阀,此路为用清洗液袋里的液体清洗该液路,然后排液至废液袋。另外一条为气泡传感器A、11号夹管阀、蠕动泵、13号夹管阀,此路为用清洗液袋里的液体清洗该液路,然后排液至废液袋;气泡传感器B经过蠕动泵、16号夹管阀、气泡传感器C与一次性离心装置的上端进液口相连,用以向一次性离心装置注入液体。气泡传感器B也会经过12号夹管阀、蠕动泵反转、19号夹管阀、与一次性离心装置的下端出液口相连,用以将一次性离心装置中的液体排出至9号液袋;9号液袋中的液体通过气泡传感器B流经细胞分选装置经过控制程序进行分选,分选后的液体排至无菌袋和废液袋。
在本发明的一个优选实施方式中,其特征在于,9个液袋分别用于:1号清洗液袋,用以对管路和一次性离心装置清洗,2号培养基液袋,用以给细胞培养提供营养和环境支持,3号胰酶液袋,用以将贴壁的细胞洗脱用,方便细胞培养后的提取,4号转染液袋,用于对培养后的细胞进行转染编辑,其他5-7号液袋为备用液袋,8号样本液袋,用于存放待培养或者转染细胞,9号终产品袋,用于存放培养或者转染后的细胞产品。
在本发明的另一方面,还涉及一种自动化细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装的方法,其特征在于包括如下步骤:
创建用户控制程序,控制程序控制样本液路的8和15号夹管阀打开,蠕动泵打开规定时间,样本液袋的样本会经过8号夹管阀到达蠕动泵,经过15号夹管阀以及经过热交换装置后,样本会加热至预定温度,再经过一次性离心装置的上端进液口进入内部入口,最后到达一次性离心装置内部;细胞培养所需的培养基,会经过2号夹管阀、11号夹管阀、蠕动泵、16号夹管阀,再经过一次性离心装置的上端进液口进入内部入口,最后到达一次性离心装置内部;清洗液路所需的清洗液,会经过1号夹管阀,10或11号夹管阀、蠕动泵、14或13号夹管阀进入废液袋,也会经过1号夹管阀、11号夹管阀、蠕动泵、16号夹管阀,再经过一次性离心装置的上端进液口进入内部入口,最后到达一次性离心装置内部;此过程中一次性离心装置会在控制程序规定时间进行离心操作;气体发生装置在控制程序规定的时间向一次性离心装置供气;细胞培养过程中伴随排废和样品排出,当气泡传感器感 C知到气泡时,一次性离心装置和相应夹管阀以及蠕动泵会在程序控制的时间内停止运行;上述一次性无菌液路、夹管阀、蠕动泵、热交换器、气体发生器、气泡传感器、一次性离心装置会在控制程序的控制下自动运行,相互配合,直至细胞培养完成; 细胞培养完成后,控制程序控制转染试剂液路打开,具体为打开4号夹管阀、打开11号夹管阀以及经过蠕动泵、打开15号夹管阀、经过热交换装置经过热交换装置后,转染试剂样品会加热至预定温度,再经过一次性离心装置的上端进液口进入内部入口,最后到达一次性离心装置内部。
在本发明的一个优选实施方式中,所述一次性离心装置用于和旋转机构连接,所述一次性离心装置以控制程序所需转速进行旋转,用于对所述一次性离心装置中细胞培养、基因编辑过程中样品进行离心。
在本发明的一个优选实施方式中,所述细胞分选装置具有细胞传感器,利用说述的细胞分选装置中的细胞传感器对流经的细胞进行筛选。
在本发明的一个优选实施方式中,所述控制平台接收控制程序指令,确保方法有序进行,并为方法的施行提供支持和支撑。
在本发明的一个优选实施方式中,所述控制程序包含多条控制指令,说书控制程序可以实现细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装方法自动化进行。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的一次性无菌液路上,设置有过滤器、闭路器、取样器、分路器、储液袋、热转换器以及多条分路。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的过滤器可以存在于所述一次性无菌液路上,也可以存在于所述一次性无菌液路上的分路上。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的闭路器可以存在于所述一次性无菌液路上,也可以存在于所述一次性无菌液路上的分路上。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的取样器可以存在于所述一次性无菌液路上,也可以存在于所述一次性无菌液路上的分路上。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的取样器上,设置有过滤器、闭路器、储液袋。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的分路器可以存在于所述一次性无菌液路上,也可以存在于所述一次性无菌液路上的分路上。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的分路器可以是三通分路器,也可以是四通分路器。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的储液袋可以存在于所述一次性无菌液路上,也可以存在于所述一次性无菌液路上的分路上。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的储液袋可以是各种样本储液袋,也可以是中间产品储液袋,也可以是最终产品储液袋。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的多条分路可以存在于所述一次性无菌液路上,也可以存在于所述一次性无菌液路上的分路上。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的一次性无菌液路上以及多条分路上的末端设置有闭路管。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的闭路管在末端预留有闭路长度,正常状态下保持关闭状态,使用时拆掉闭路管即可使用此液路。以此来实现在一次性液路和分路上实现闭环无菌。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的热交换器中包含导热铝板、往复排列的较长液路。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的导热铝板用于和热源贴合,将热量穿导致热交换器。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的往复排列的较长液路受热交换器中热量影响,会将流经此路的液体加热至适当温度。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的一次性离心装置上部设置有进液口和出液口,用于进液和出液。
根在本发明的一个优选实施方式中,所述的一次性离心装置内部设置有进口和出口,用于和进液口和出液口连接。
根在本发明的一个优选实施方式中,所述的一次性离心装置内部设置的出口,位于离心杯的下部偏边缘位置,用于在离心状态下液体流出。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的一次性离心装置内部设置的进口,位于离心杯的上部偏边缘位置,用于从进液口流进的物质由此口进入离心杯。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的从进液口流进的物质,所述物质不局限于液体,也包含气体。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的一次性离心装置中部位置设置中心轴,所述一次性离心装置旋转以此轴为中心旋转。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的细胞分选装置还包含细胞传感器、信号放大器、信号处理器。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的细胞传感器内部有细胞流道,细胞流通均由此流道通过。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的细胞流道两端设置有两接口,用于和所述一次性无菌液路连通,实现细胞的流通。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的细胞传感器内部还包含检测电路,所述检测电路可以根据细胞状态和数量转换为电信号。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的检测电路还包含信号输入和信号输出,所述检测电路根据细胞状态和数量转换为电信号传输由信号输出接口传出。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的信号放大器设置有输入口和输出口,输入口用于于接收信号,输出口用于传输放大后的信号。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的信号放大器内部有信号放大电路,用于对接收的信号进行放大处理。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的信号处理器包含信号输入和输出口,用于接收信号和传输处理后的信号。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的信号处理器内部包含信号处理电路,用于对接收的信号进行处理,处理后的信号可以作为判定细胞特征的信息。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的控制平台包含框架、夹管阀、蠕动泵、气泡传感器、热管理器、气体发生器、旋转机构。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的框架用于将一次性无菌液路、一次性离心装置,细胞分选装置架设于固定位置。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的框架还包含挂架,用于将一次性液路架设于固定位置。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的夹管阀用于一次性无菌液路或者一次性无菌液路的分支的开关控制。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的蠕动泵用于一次性无菌液路或者一次性无菌液路的分支的动力供给,以此来实现液路流通。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的气泡传感器可以检测放置于其内部液路有无气泡,来辅助所述的一种自动化细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装的方法进行液路传输
在本发明的一个优选实施方式中,所述的热管理器可以控制发热体的温度,满足液路中液体温度需求。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的气体发生器可以产生某种气体,并可以持续以规定压力提供气体。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的旋转机构用于和所述一次性离心装置连接,用于细胞培养和基因编辑中所需离心需求。
在本发明的一个优选实施方式中,所述的控制程序包含多种指令,指令以用户需求的方式进行组合,以此来完成用户所需求的完整实验。
本发明另一方面还涉及一种自动化细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装的方法,其特征在于,包含以下步骤:
细胞经一次性无菌液路进入一次性离心杯,经过由控制程序控制的培养过程实现细胞增殖:
细胞增殖后,在一次性无菌液路和一次性离心杯中,经过由控制程序控制的基因编辑过程,实现基因编辑;
基因编辑完成后,细胞由一次性液路流经细胞分选装置,细胞分选装置根据流经的细胞类型以及数量,产生与之相匹配的信号;
控制平台和控制程序接受到信号后,控制相应液路的开关阀来实现控制目标细胞流向目标细胞储存袋;
最终实现细胞分选,以完成细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装的整个方法过程。
根据一种自动化细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装的方法,细胞经一次性无菌液路流入一次性离心装置,控制程序控制硬件向一次性离心装置中注入细胞培养所需物质,并控制一次性离心装置在程序所需时间进行离心操作,来实现细胞培养,细胞培养完成后,基因编辑所需物质经由一次性无菌液路流入一次性离心装置,控制程序控制硬件向一次性离心装置中注入基因编辑所需物质,并控制一次性离心装置在程序所需时间进行离心操作,来实现基因编辑,基因编辑完成后,控制程序控制硬件将细胞经由一次性无菌液路流向细胞分装装置,细胞分选装置根据流经的细胞类型和数量,产生与之匹配的信号,控制平台和控制程序接收到信号后,控制相应液路的开关阀来实现控制目标细胞流向目标细胞储存袋,最终实现细胞分选,以完成自动化细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装的整个方法过程。
采用本发明的装置或者方法进行的细胞培养,细胞培养活性好,无污染风险,培养成功率高,避免了由于人为原因造成的细胞培养失败,细胞活性低,实验失败。按照此方法进行的细胞转染,细胞转染率高,避免了由于人为原因造成的细胞转染失败,转染率低,实验失败。按照此方法进行的细胞分选和分装,细胞分选成功率高,细胞分装无污染,细胞分选和分装后活性好,为后续细胞研究和培养提供准确,健康的细胞样本。
附图说明
图1:自动化细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装的装置示意图;
图2:自动化细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装的方法流程示意图。
具体实施方式
为使本方法的目的、技术方案、优点能够更加清楚,下面对本方法中技术方案进行清楚、完整的描述,显然,所描述的实施例使本方法一部分实施例,而不是全部实施例,基于本方法中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下获得的所有其他实施例,都属于本方法保护的范围。
下面将对本方法的实施例进行描述,应当理解的是,以下描述仅是本发明的示意性实施方式,并未对本发明构成任何限定。
本发明的自动化细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装的装置具有9个液袋,每个液袋中分别包含细胞培养和基因编辑所需物料,该9个液袋中每个都分别具有1至9号夹管阀,所述夹管阀与控制中心相连;所述1至7号夹管阀并联到气泡传感器A上,8和9号夹管阀并联到气泡传感器B上;气泡传感器A的一路经过11号夹管阀、蠕动泵、15号夹管阀、热交换器与一次性离心装置的上端进液口相连;气泡传感器A的另一路通过11号夹管阀、蠕动泵、16号夹管阀、气泡传感器C与一次性离心装置的上端进液口相连;用以向一次性离心装置注入液体。除以上功能外,还包含两条清洗液路,一条为气泡传感器A、10号夹管阀、蠕动泵、14号夹管阀,此路为用清洗液袋里的液体清洗该液路,然后排液至废液袋。另外一条为气泡传感器A、11号夹管阀、蠕动泵、13号夹管阀,此路为用清洗液袋里的液体清洗该液路,然后排液至废液袋。
气泡传感器B经过蠕动泵、16号夹管阀、气泡传感器C与一次性离心装置的上端进液口相连,用以向一次性离心装置注入液体。气泡传感器B也会经过12号夹管阀、蠕动泵反转、19号夹管阀、与一次性离心装置的下端出液口相连,用以将一次性离心装置中的液体排出至9号液袋。
9号液袋中的液体通过气泡传感器B流经细胞分选装置经过控制程序进行分选,分选后的液体排至无菌袋和废液袋。
将一次性无菌液路布置到控制平台上,一次性无菌液路的连接端连接相应的液袋,9个液袋包含细胞培养和基因编辑所需物料,分别为:1号清洗液袋,用以对管路和一次性离心装置清洗,2号培养基液袋,用以给细胞培养提供营养和环境支持,3号胰酶液袋,用以将贴壁的细胞洗脱用,方便细胞培养后的提取,4号转染液袋,用于对培养后的细胞进行转染编辑,其他5-7号液袋为备用液袋,8号样本液袋,用于存放待培养或者转染细胞,9号终产品袋,用于存放培养或者转染后的细胞产品。创建用户控制程序,控制程序控制样本液路的8和15号夹管阀打开,蠕动泵打开规定时间,样本液袋的样本会经过8号夹管阀到达蠕动泵,经过15号夹管阀经过热交换装置后,样本会加热至预定温度,再经过一次性离心装置的上端进液口进入内部入口,最后到达一次性离心装置内部。细胞培养所需的培养基,会经过2号夹管阀、11号夹管阀、蠕动泵、16号夹管阀,再经过一次性离心装置的上端进液口进入内部入口,最后到达一次性离心装置内部。清洗液路所需的清洗液,会经过1号夹管阀,10或11号夹管阀、蠕动泵、14或13号夹管阀进入废液袋,也会经过1号夹管阀、11号夹管阀、蠕动泵、16号夹管阀,再经过一次性离心装置的上端进液口进入内部入口,最后到达一次性离心装置内部,具体以细胞培养标准流程为准。此过程中一次性离心装置会在控制程序规定时间进行离心操作。气体发生器由于需要从一次性离心装置内侧顶部进入,所以需要和出液通路共用液路,气体发生装置也会在控制程序规定的时间向一次性离心装置供气。细胞培养过程中也会伴随排废和样品排出,当气泡传感器感C知到气泡时,一次性离心装置和相应夹管阀以及蠕动泵会在程序控制的时间内停止运行。上述一次性无菌液路、夹管阀、蠕动泵、热交换器、气体发生器、气泡传感器、一次性离心装置会在控制程序的控制下自动运行,相互配合,直至细胞培养完成。
细胞培养完成后,控制程序控制转染试剂液路打开,具体为打开4号夹管阀、打开11号夹管阀以及经过蠕动泵、打开15号夹管阀、经过热交换装置经过热交换装置后,转染试剂会加热至预定温度,再经过一次性离心装置的上端进液口进入内部入口,最后到达一次性离心装置内部。其他基因编辑所需样品也会根据上述步骤进入一次性离心装置,其他基因编辑所需样品的进样顺序根据用户基因编辑程序的不同而采用不同的顺序,具体以基因编辑标准流程为准。此过程中一次性离心装置会在控制程序规定时间进行离心操作。气体发生器也会在控制程序规定的时间向一次性离心装置供气。基因编辑过程中也会伴随排废和样品排出,当气泡传感器感C知到气泡时,一次性离心装置和相应夹管阀以及蠕动泵会在程序控制的时间内停止运行。上述一次性无菌液路、夹管阀、蠕动泵、热交换器、气体发生器、气泡传感器、一次性离心装置会在控制程序的控制下自动运行,相互配合,直至基因编辑完成。
基因编辑完成后,控制程序会打开细胞分选进样液路,蠕动泵以及一次性离心装置开始工作,细胞会经过一次性离心装置的出液口、一次性无菌液路、12号夹管阀、蠕动泵、细胞分选装置的进样端最后进入细胞分选装置内部的细胞流道。细胞经过流道时,检测电路根据细胞电阻抗特性和荧光染料特性特征转换为电信号,电信号经过检测细胞传感器的输出端,将信号输出至信号放大器,信号放大器利用内部的信号放大电路将接收的信号进行放大处理。放大处理后的信号再经过信号放大器的输出端,输出至信号处理器。信号处理器利用内部信号处理电路处理信号,处理后的信号以可视化的方式展示出来,展现的信息代表着此细胞的特征信息。控制程序根据细胞的特征信息打开相应液路的夹管阀,具体为经转染完成的细胞,此细胞会经一次性无菌液路进入无菌袋中,未转染完成或者已经死亡的无用细胞会进入废液袋中。
需要说明的是,为了清洗不同液路设置的两个排废开关13和14号夹管阀,比如清洗10号夹管阀液路段,依次打开1、10、14号夹管阀即可,再比如,清洗11号夹管阀液路段,依次打开1、11、13号夹管阀即可。气泡传感器A和B作为液体进液或者排液结束的闭环控制,比如进转染试剂,气泡传感器感A应到从无液体至有液体再至无液体时,就代表着转染试剂液体已经完全进液,气泡传感器B原理相同。15和16号夹管阀通过共用两端的液路,可以尽量减少液路排布,防止污染产生,方便清洗液路,此外,是因为经过它们的管路都是最终通过同一进液口进入到一次性离心装置中。所以他们才共用收尾两端。
经过上述完整流程后,即完成了此方法的全部过程,按照此方法进行的细胞培养,细胞培养活性好,无污染风险,培养成功率高,避免了由于人为原因造成的细胞培养失败,细胞活性低,实验失败。按照此方法进行的细胞转染,细胞转染率高,避免了由于人为原因造成的细胞转染失败,转染率低,实验失败。按照此方法进行的细胞分选和分装,细胞分选成功率高,细胞分装无污染,细胞分选和分装后活性好,为后续细胞研究和培养提供准确,健康的细胞样本。
应说明的是:以上实施例仅用于说明本方法的技术方案,而非对其限制,尽管参照上述实施例对本方法进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解;其依然可以对上述实施例所记载的方法进行修改,或者对其中部分方法特征进行同等替换;而这些修改和替换,并不使相应技术方案的本质脱离本方法各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (9)

1.一种自动化细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装的装置,其特征在于所述装置包括:至少9个液袋,每个液袋中分别包含细胞培养和基因编辑所需物料,该9个液袋中每个都分别具有夹管阀1至9,所述夹管阀与控制中心相连;所述1至7号夹管阀并联到气泡传感器A上,8号和9号夹管阀并联到气泡传感器B上;气泡传感器A的一路经过11号夹管阀、蠕动泵、15号夹管阀、热交换器与一次性离心装置的上端进液口相连;气泡传感器A的另一路通过11号夹管阀、蠕动泵、16号夹管阀、热交换器气泡传感器C与一次性离心装置的上端进液口相连;用以向一次性离心装置注入液体;还包含两条清洗液路,一条为气泡传感器A、10号夹管阀、蠕动泵、14号夹管阀,此路为用清洗液袋里的液体清洗该液路,然后排液至废液袋;另外一条为气泡传感器A、11号夹管阀、蠕动泵、13号夹管阀,此路为用清洗液袋里的液体清洗该液路,然后排液至废液袋;气泡传感器B经过蠕动泵、16号夹管阀、气泡传感器C与一次性离心装置的上端进液口相连,用以向一次性离心装置注入液体;气泡传感器B也会经过12号夹管阀、蠕动泵反转、19号夹管阀、与一次性离心装置的下端出液口相连,用以将一次性离心装置中的液体排出至9号液袋;9号液袋中的液体通过气泡传感器B流经细胞分选装置经过控制程序进行分选,分选后的液体排至无菌袋和废液袋。
2.根据权利要求1所述的一种自动化细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装的装置,其特征在于,9个液袋分别用于:1号清洗液袋,用以对管路和一次性离心装置清洗,2号培养基液袋,用以给细胞培养提供营养和环境支持,3号胰酶液袋,用以将贴壁的细胞洗脱用,方便细胞培养后的提取,4号转染液袋,用于对培养后的细胞进行转染编辑,其他5-7号液袋为备用液袋,8号样本液袋,用于存放待培养或者转染细胞,9号终产品袋,用于存放培养或者转染后的细胞产品。
3.一种自动化细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装的方法,其特征在于,采用权利要求1或2所述的装置进行。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,包括如下步骤:
创建用户控制程序,控制程序控制样本液路的8号和15号夹管阀打开,蠕动泵打开规定时间,样本液袋的样本会经过8号夹管阀到达蠕动泵,经过15号夹管阀以及经过热交换装置后,样本会加热至预定温度,再经过一次性离心装置的上端进液口进入内部入口,最后到达一次性离心装置内部;细胞培养所需的培养基,会经过2号夹管阀、11号夹管阀、蠕动泵、16号夹管阀,再经过一次性离心装置的上端进液口进入内部入口,最后到达一次性离心装置内部;清洗液路所需的清洗液,会经过1号夹管阀1,10号或11号夹管阀、蠕动泵、14或13号夹管阀进入废液袋,也会经过1号夹管阀、11号夹管阀、蠕动泵、16号夹管阀,再经过一次性离心装置的上端进液口进入内部入口,最后到达一次性离心装置内部;此过程中一次性离心装置会在控制程序规定时间进行离心操作;气体发生装置在控制程序规定的时间向一次性离心装置供气;细胞培养过程中伴随排废和样品排出,当气泡传感器感 C知到气泡时,一次性离心装置和相应夹管阀以及蠕动泵会在程序控制的时间内停止运行;上述一次性无菌液路、夹管阀、蠕动泵、热交换器、气体发生器、气泡传感器、一次性离心装置会在控制程序的控制下自动运行,相互配合,直至细胞培养完成; 细胞培养完成后,控制程序控制转染试剂液路打开,具体为打开4号夹管阀、打开11号夹管阀经过蠕动泵、打开15号夹管阀、经过热交换装置经过热交换装置后,转染试剂样品会加热至预定温度,再经过一次性离心装置的上端进液口进入内部入口,最后到达一次性离心装置内部。
5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述的一次性离心装置中部位置设置中心轴,所述一次性离心装置旋转以此轴为中心旋转。
6.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述的细胞分选装置还包含细胞传感器、信号放大器、信号处理器。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述的细胞传感器内部有细胞流道,细胞流通均由此流道通过。
8.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述的热管理器可以控制发热体的温度,满足液路中液体温度需求。
9.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,包含以下步骤:
细胞经一次性无菌液路进入一次性离心杯,经过由控制程序控制的培养过程实现细胞增殖:
细胞增殖后,在一次性无菌液路和一次性离心杯中,经过由控制程序控制的基因编辑过程,实现基因编辑;
基因编辑完成后,细胞由一次性液路流经细胞分选装置,细胞分选装置根据流经的细胞类型以及数量,产生与之相匹配的信号;
控制平台和控制程序接受到信号后,控制相应液路的开关阀来实现控制目标细胞流向目标细胞储存袋;
最终实现细胞分选,以完成细胞培养、基因编辑、细胞分选和分装的整个方法过程。
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Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007222120A (ja) * 2006-02-27 2007-09-06 Hitachi Medical Corp 自動培養装置
JP2010158174A (ja) * 2009-01-06 2010-07-22 Hitachi Ltd 流路洗浄機構を有した細胞培養装置及びその制御方法
CN107287120A (zh) * 2017-08-23 2017-10-24 湖南开启时代生物科技有限责任公司 一种细胞制备给料系统
CN207130277U (zh) * 2017-08-23 2018-03-23 湖南开启时代生物科技有限责任公司 一种细胞自动培养包装系统
CN108841727A (zh) * 2018-05-31 2018-11-20 东南大学 基于微流控芯片的car-t细胞自动化制备系统
CN110945139A (zh) * 2017-05-18 2020-03-31 10X基因组学有限公司 用于分选液滴和珠的方法和系统
CN112094742A (zh) * 2020-08-21 2020-12-18 北京化工大学 细胞电穿孔转染与活细胞分选同步实现的微流控芯片
CN212688085U (zh) * 2020-04-20 2021-03-12 上海欣协生物科技有限公司 一种细胞培养仪器
CN113832028A (zh) * 2020-06-24 2021-12-24 上海医药集团生物治疗技术有限公司 一种全自动细胞培养系统及培养方法
CN115161164A (zh) * 2022-07-04 2022-10-11 深圳赛桥生物创新技术有限公司 一种低损伤、连续流的细胞收获系统及方法
CN219385102U (zh) * 2022-12-27 2023-07-21 楚天思为康基因科技(长沙)有限公司 一种细胞自动化分选系统
CN116814375A (zh) * 2023-06-19 2023-09-29 中国人民解放军南部战区总医院 一种基于基因编辑的肺癌免疫治疗系统

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007222120A (ja) * 2006-02-27 2007-09-06 Hitachi Medical Corp 自動培養装置
JP2010158174A (ja) * 2009-01-06 2010-07-22 Hitachi Ltd 流路洗浄機構を有した細胞培養装置及びその制御方法
CN110945139A (zh) * 2017-05-18 2020-03-31 10X基因组学有限公司 用于分选液滴和珠的方法和系统
CN107287120A (zh) * 2017-08-23 2017-10-24 湖南开启时代生物科技有限责任公司 一种细胞制备给料系统
CN207130277U (zh) * 2017-08-23 2018-03-23 湖南开启时代生物科技有限责任公司 一种细胞自动培养包装系统
CN108841727A (zh) * 2018-05-31 2018-11-20 东南大学 基于微流控芯片的car-t细胞自动化制备系统
CN212688085U (zh) * 2020-04-20 2021-03-12 上海欣协生物科技有限公司 一种细胞培养仪器
CN113832028A (zh) * 2020-06-24 2021-12-24 上海医药集团生物治疗技术有限公司 一种全自动细胞培养系统及培养方法
CN112094742A (zh) * 2020-08-21 2020-12-18 北京化工大学 细胞电穿孔转染与活细胞分选同步实现的微流控芯片
CN115161164A (zh) * 2022-07-04 2022-10-11 深圳赛桥生物创新技术有限公司 一种低损伤、连续流的细胞收获系统及方法
CN219385102U (zh) * 2022-12-27 2023-07-21 楚天思为康基因科技(长沙)有限公司 一种细胞自动化分选系统
CN116814375A (zh) * 2023-06-19 2023-09-29 中国人民解放军南部战区总医院 一种基于基因编辑的肺癌免疫治疗系统

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
马丁等: "生物类似药 从研发到使用", 中国医药科学技术出版社, pages: 169 - 170 *

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