CN115369026A - 一种全自动全封闭细胞制备工作站及细胞处理方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种全自动全封闭细胞制备工作站及细胞处理方法,该工作站包括:离心培养单元,包括微流换热器和离心杯;液路单元,包括泵组件、阀组件以及管路;细胞数字化单元,包括安装于离心杯下方的显微镜;主机控制单元,包括电机、废液槽和离心仓,并与泵组件、阀组件以及微流换热器连接;框架固定安装于所述主机控制单元的顶部,用于悬挂液袋;壳体,密封罩设于主机控制单元和框架的顶部。上述工作站具有质量稳定、生产安全、节约成本、效率高的特点,可显著改善现有技术中细胞生物活性低的不足,并解决现有技术中易污染、质控难、成本高、效率低的问题。
Description
技术领域
本发明涉及细胞技术领域,特别涉及一种全自动全封闭细胞制备工作站及细胞处理方法。
背景技术
细胞治疗方法是一种将细胞类药物注入患者体内以治疗疾病的治疗手段,然而,细胞类药物生产过程制备环节多、工艺复杂,而复杂的工艺操作和细胞离体环境对细胞生物活性的影响十分显著。
现有CAR-T细胞疗法的细胞制备流程为:T细胞肿瘤免疫疗法通过从患者或者捐献者外周血分离获得特定亚群的T细胞,进一步激活、基因修饰获得CAR-T细胞,扩增培养从而到达治疗级别的细胞数,再经过洗涤浓缩回输患者体内进行治疗。所以,从分离收集T细胞,到激活修饰再到扩增细胞、回输病人体内是复杂的流程,传统人工制备方法面临以下四大挑战:第一是环境挑战,制备过程污染的可能性很大;第二是人为差异,每个操作人员的偏好会导致产品参差不齐,产生差异性;第三是作为高度个性化产品,每个患者即一个生产批次,与传统制药工艺有较大差异;第四,血液肿瘤患者病情进展极快,需要尽量缩短制备时间及时回输,并提高成功率。因此,CAR-T细胞生产过程的标准化、自动化以及安全性、无菌性、纯度等质量控制是客观评价缓解率的先决条件。
并且CAR-T细胞疗法的细胞制备成本较高,主要原因包括以下三点:第一点是CAR-T作为高度个性化的药品,一个患者对应一个批次,制备操作需要多名高端技术人员进行无菌精准操作,人力成本极高;第二点是为了保证洁净度、纯度和制备结果的安全性,需要建设大面积专业化无菌操作区间,专业化的清洁人员需要定期进行维护,运营成本极高;第三是转染CAR慢病毒的稳定性和安全性对CAR-T细胞产品制备的质量和使用安全性影响很大,优质的慢病毒采购成本高达5-10万元,而自制慢病毒又难以解决稳定性的问题。
因此,现有细胞制备技术存在易污染、质控难、成本高、效率低的问题,使得目前的细胞制备工艺无法满足商业应用的需求。
发明内容
本发明提供了一种全自动全封闭细胞制备工作站及细胞处理方法,该细胞制备工作站具有质量稳定、生产安全、节约成本、效率高的特点,可显著改善现有技术中细胞生物活性低的不足,并解决现有技术中易污染、质控难、成本高、效率低的问题。
为达到上述目的,本发明提供以下技术方案:
本发明提供了一种全自动全封闭细胞制备工作站,该细胞制备工作站包括:
离心培养单元,包括微流换热器和具有离心腔的离心杯,用于进行第一细胞离心处理、提取初产品溶液、浓缩处理、转染处理和培养;所述离心杯安装于离心仓内,包括进液流道和出液流道;所述微流换热器用于在培养过程中将所述离心杯保持在培养温度范围;
液路单元,包括泵组件、阀组件以及管路,用于对所述离心杯供液和抽液,以及收获至存储袋;所述泵组件和所述阀组件处于所述管路路径中;
细胞数字化单元,包括安装于所述离心杯下方的显微镜,用于对所述离心杯内的细胞的计数、分裂和扩增进行监控;
主机控制单元,包括电机、废液槽和所述离心仓,并与所述泵组件、所述阀组件、以及微流换热器连接,并对所述电机、所述泵组件、所述阀组件、以及所述微流换热器进行控制;所述电机与所述离心杯传动连接,用于驱动所述离心杯转动;所述废液槽用于收集清洗后和排废后的溶液;
框架,固定安装于所述主机控制单元的顶部,用于悬挂装有分离液的分离液袋、装有待分离液的样本液袋、装有清洗液的清洗液袋、装有转染试剂的转染试剂袋、初产品袋和存储袋;所述清洗液用于细胞分离过程中的清洗;
壳体,密封罩设于所述主机控制单元和所述框架的顶部。
更进一步地,所述离心杯还包括推液板,所述推液板从离心杯的中心沿半径方向延伸,并且所述推液板中远离轴心的端部与所述离心杯的内壁之间具有间隙。
更进一步地,所述离心杯还包括杯体和杯盖;
所述推液板固定连接于所述杯体和/或所述杯盖;
所述杯盖密封连接于所述杯体的顶部,在所述杯盖和所述杯体之间形成离心腔;
所述推液板沿所述杯体的周向分布于所述离心腔内,所述推液板中邻近轴心的另一端部与所述杯体的轴心之间具有间隙;
所述进液流道和所述出液流道均连通所述杯体外部和所述离心腔;所述进液流道具有设置于所述杯体外部的第一进液口和/或设置于所述杯体的内侧壁底部的第二进液口;所述出液流道具有设置于所述离心腔的顶部的第一出液口和/或设置于所述杯体侧壁顶部的第二出液口。
更进一步地,所述杯体的侧壁与底壁之间形成5°~50°的倒角。
更进一步地,所述微流换热器包括:
控温模块,用于调节培养过程中所述离心仓内所述离心杯的环境温度,通过风扇向上通风口和下通风口吹风以传递调节环境温度所产生的热量;
上通风口,安装于所述离心杯上方,用于将所述控温模块产生的热量通风传递至所述离心杯上方;
下通风口,安装于所述离心杯下方,用于将所述控温模块产生的热量通风传递至所述离心杯下方。
另外,本发明还提供了一种采用全自动全封闭细胞制备工作站的细胞处理方法,该细胞处理方法包括:
将分离液和待分离液经管路流进离心杯中,并通过所述离心杯进行第一细胞离心处理,在第一细胞离心处理过程中对所述管路进行清洗;
在清洗所述管路之后,从所述离心杯中提取初产品溶液,并对初产品溶液进行浓缩处理,得到浓缩溶液;
将转染试剂袋中的转染试剂经管路流进离心杯后,与所述浓缩溶液进行转染处理,得到转染后产物;
通过微流换热器培养所述离心杯中的转染后产物,并监控细胞的分裂和扩增;
对培养后的产物进行收获处理,获得多个存储待存溶液的存储袋。
更进一步地,所述对初产品溶液进行浓缩处理,得到浓缩溶液,包括:
将提取的初产品溶液经管路抽至初产品袋中;
将提取后剩余离心杯中的溶液进行排废处理,并清洗所述离心杯;
将所述初产品袋中的所述初产品溶液经管路流进清洗后的离心杯,并进行第二细胞离心处理,得到所述浓缩溶液。
更进一步地,所述与所述浓缩溶液进行转染处理,得到转染后产物,包括:
对离心杯中的所述转染试剂和所述浓缩溶液进行摇匀,在摇匀过程中进行管路清洗和排空,令所述转染试剂和所述浓缩溶液充分转染;
在排空后静置处理,得到转染后产物。
更进一步地,所述通过微流换热器培养所述离心杯中的转染后产物,并监控细胞的分裂和扩增,包括:
通过所述微流换热器令所述离心杯的温度达到培养温度范围内,并通过细胞计数单元对所述离心杯进行定时的细胞计数,得到每次计数的计数结果;
根据各所述计数结果,分析离心杯中的细胞的分裂和扩增状态;
在预设培养时间后,检测到分裂和扩增状态为合格时,确定完成转染后产物的培养。
更进一步地,所述对培养后的产物进行收获处理,获得多个存储待存溶液的存储袋,包括:
向培养后的产物注入冻存液,并令所述离心杯的温度达到存储温度范围内,摇匀得到所述待存溶液;
将所述待存溶液分装至多个所述存储袋中。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
1、本发明的细胞制备工作站包括离心培养单元、液路单元、细胞数字化单元、主机控制单元、框架以及壳体;离心培养单元包括微流换热器和离心杯,离心杯包括进液流道和出液流道,液路单元包括泵组件、阀组件以及管路,细胞数字化单元包括显微镜,主机控制单元包括电机、废液槽和离心仓,框架用于悬挂分离液袋、样本液袋、清洗液袋、转染试剂袋、初产品袋和存储袋,由于电机与离心杯传动连接,并且离心杯的进液流道和出液流道通过液路单元与液袋连通,通过离心杯可以实现第一细胞离心处理、提取初产品溶液、浓缩处理、转染处理和培养,因此,采用上述细胞制备工作站能够实现全自动、全封闭的细胞制备,达到一站式细胞制备的全流程,使得细胞制备工作站具有质量稳定、生产安全、节约成本、效率高的特点,可显著改善现有技术中细胞生物活性低的不足,并解决现有技术中易污染、质控难、成本高、效率低的问题。
2、本发明的细胞制备工作站在离心杯内设置有推液板,在电机驱动离心杯转动时,推液板用以增加液体离心的推动力,推液板先推动附近的液体,附近的液体继续推动远处的液体,使得内层液体的切应力更低,细胞受到的剪切与摩擦小,从而提高细胞的活性;同时,推液板与离心杯的内壁之间具有间隙,通过间隙可以平衡推液板两侧液体的压力,从而使液面平滑,更容易分离,减少分离所需时间;因此,通过设置于离心杯内的推液板能够提高离心分层的效率,还能显著减小离心过程中离心杯内的流体剪切力,使得细胞制备工作站具有低损伤、高通量、高效率、高回收率、无菌的特点,可显著改善现有技术中细胞生物活性低的不足,并满足全自动、全封闭细胞分离的需求。
3、本发明的细胞处理方法,通过全自动全封闭细胞制备工作站完成第一细胞离心处理、提取初产品溶液、浓缩处理、转染处理和培养等各步骤的操作,通过各步骤的合理安排以及上述细胞制备工作站的配合,不仅使细胞制备过程实现全自动、全封闭处理,达到无菌环境的要求,而且一站式完成细胞分离、转染、培养和收获,减少了过程中细胞液的中转和运输,从而提高了细胞的生物活性、降低了细胞制备成本。
附图说明
图1为本发明全自动全封闭细胞制备工作站的立体结构示意图;
图2为图1中全自动全封闭细胞制备工作站的主视图;
图3为图1中离心杯的整体结构示意图;
图4为图3中离心杯的剖视图;
图5为本发明全自动全封闭细胞制备工作站的液路单元原理示意图;
图6为本发明细胞处理方法的流程图。
其中,1-离心培养单元,2-液路单元,3-细胞数字化单元,4-主机控制单元,5-框架,6-壳体,7-离心杯,8-进液流道,9-出液流道,10-泵组件,11-推液板,12-微流换热器,13-控制面板,14-触控显示屏,15-杯体,16-杯盖,17-第一进液口,18-第二进液口,19-第一出液口,20-第二出液口,21-倒角,22-废液袋,23-清洗液袋,24-培养基液袋,25-备用液袋,26-存储袋,27-初产品袋,28-分离液袋,29-样本液袋,30-第一气泡传感器,31-第二气泡传感器,32-第三气泡传感器,33-第一管路,34-第一端口,35-第二管路,36-第二端口,37-第一密封圈,38-第二密封圈,39-轴承,40-转染试剂袋,41-显示开关,42-挂钩,43-第一控制阀,44-第二控制阀,45-第三控制阀,46-第四控制阀,47-第五控制阀,48-第六控制阀,49-第七控制阀,50-第八控制阀,51-第九控制阀,52-第十控制阀,53-第十一控制阀,54-第十二控制阀,55-第十三控制阀,56-控制按钮,57-第三管路,58-第一支路管路,59-第二支路管路,60-第四支路管路,61-第五支路管路,62-第六支路管路,63-第七支路管路64-第十四控制阀,65-第十五控制阀,66-第三支路管路
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例一
如图1和图2结构所示,本实施例提供了一种全自动全封闭细胞制备工作站,该细胞制备工作站包括离心培养单元1、液路单元2、细胞数字化单元3、主机控制单元4、框架5、以及壳体6;
如图1、图2、图3和图4结构所示,离心培养单元1,包括微流换热器12和具有离心腔的离心杯7,用于进行第一细胞离心处理、提取初产品溶液、浓缩处理、转染处理和培养;离心杯7安装于主机控制单元4的离心仓内,包括进液流道8和出液流道9;进液流道8为用于流进离心杯7的通道;出液流道9为用于从离心杯7中抽取溶液的通道;微流换热器12用于在细胞培养过程中将离心杯7保持在培养温度范围内,培养温度范围可以为36~38℃;
如图5结构所示,液路单元2包括泵组件10、阀组件以及管路,用于对离心杯7供液和抽液,以及收获至存储袋26;泵组件10和阀组件安装于管路路径中;管路采用无菌导管;泵组件10可以为蠕动泵;液路单元还可以包括无菌取样装置(图中未示出),无菌取样装置可以通过无菌导管连接于泵组件10与离心杯7之间的第二支路管路59中,通过增设的无菌取样装置便于提取离心杯7中的样品进行质检;泵组件10的第一端口34和第二端口36均与废液袋22连通;泵组件10的第一端口34与离心杯7的第二出液口20连通;
细胞数字化单元3,包括安装于离心杯7下方的显微镜,用于对离心杯7内的细胞的计数、分离和扩增进行监控;如图1和图2结构所示,细胞数字化单元3安装于离心杯7的底部;
主机控制单元4包括电机(图中未示出)、废液槽和离心仓,并与泵组件10、阀组件以及微流换热器12连接,并对电机、泵组件10、阀组件以及微流换热器12进行控制;电机与离心杯7传动连接,用于驱动离心杯7转动以实现第一细胞离心处理和第二细胞离心处理;废液槽用于收集清洗后和排废后的溶液;主机控制单元4为整个细胞制备工作站的基础,废液槽可以直接容置废液,也可以在废液槽内放置用于容置废液的废液袋22;废液槽设置有开口,便于取放废液袋22或废液;离心仓用于容置离心杯7;
框架5固定安装于主机控制单元4的顶部,用于悬挂装有分离液的分离液袋28、装有待分离液的样本液袋29、装有清洗液的清洗液袋23、装有转染试剂的转染试剂袋40、初产品袋27和存储袋26;清洗液用于细胞分离过程中的清洗;框架5主要用于悬挂液袋,可以由竖直的支撑杆和固定连接于支撑杆顶部的横梁构成;支撑杆的底端固定安装于主机控制单元4的顶部;在框架5和主机控制单元4之间形成液袋的悬挂空间。液袋除上述分离液袋28、样本液袋29、清洗液袋23、初产品袋27、存储袋26、转染试剂袋40外,还可以包括废液袋22、培养基液袋24、备用液袋25以及中产品袋(图中未示出);在实际生产过程中,初产品袋27在完成容置初产品的任务后还可以用作中产品袋;
壳体6,密封罩设于主机控制单元4和框架5的顶部,用于将离心杯7和挂设于框架5上的各个液袋进行密封罩设,形成密闭空间;壳体6设置有可以打开的仓盖,通过开启仓盖便于取放离心杯7。
上述细胞制备工作站包括离心培养单元1、液路单元2、细胞数字化单元3、主机控制单元4、框架5、以及壳体6,离心培养单元1包括微流换热器12和离心杯7,离心杯7包括进液流道8和出液流道9,液路单元包括泵组件10、阀组件以及多个管路,主机控制单元4包括电机、废液槽和离心仓,框架5用于悬挂装有分离液的分离液袋28、装有待分离液的样本液袋29、装有清洗液的清洗液袋23、装有转染试剂的转染试剂袋40、初产品袋27和存储袋26,转染试剂袋40的转染试剂中含有慢病毒,由于电机与离心杯7传动连接,并且离心杯7的进液流道8和出液流道9通过液路单元与各液袋连通,通过离心杯7可以实现第一细胞离心处理、提取初产品溶液、浓缩处理、转染处理和培养,因此,采用上述结构的细胞制备工作站能够实现全自动、全封闭的细胞制备,达到一站式细胞制备的全流程,使得细胞制备工作站具有质量稳定、生产安全、节约成本、效率高的特点,可显著改善现有技术中细胞生物活性低的不足,并解决现有技术中易污染、质控难、成本高、效率低的问题。
一种优选的实施方式中,离心杯7还包括推液板11,推液板11从离心杯7的中心沿半径方向延伸,并且推液板11中远离轴心的端部与离心杯7的内壁之间具有间隙。
上述细胞制备工作站中,在离心杯7内设置有推液板11,在电机驱动离心杯7转动时,推液板11用以增加液体离心的推动力,推液板11先推动附近的液体,附近的液体继续推动远处的液体,使得内层液体的切应力更低,细胞受到的剪切与摩擦小,从而提高细胞的活性;同时,推液板11的端部与离心杯7的内壁之间具有间隙,通过间隙可以平衡推液板11两侧液体的压力,从而使液面平滑,更容易分离,减少分离所需时间;因此,通过在离心杯7内增设的推液板11,上述细胞制备工作站不仅能够提高离心分层的效率,还能显著减小离心过程中离心杯7内的流体剪切力,使得细胞制备工作站具有低损伤、高通量、高效率、高回收率、无菌的特点,可显著改善现有技术中细胞生物活性低的不足,并满足全自动、全封闭细胞分离的需求。
更进一步地,离心杯7还包括杯体15和杯盖16;杯盖16密封连接于杯体15的顶部,在杯盖16和杯体15之间形成容置液体的离心腔;推液板11可以设置有两个,并且两个推液板11沿杯体15的周向分布于离心腔内,均沿杯体15的径向延伸,推液板11中远离轴心的端部与离心杯7的内壁之间具有间隙、推液板11中邻近轴心的另一端部与杯体15的轴心之间具有间隙;推液板11可以固定连接于杯体15和/或杯盖16;进液流道8和出液流道9均连通杯体15外部和离心腔;进液流道8具有设置于杯体15外部的第一进液口17和设置于杯体15的内侧壁底部的第二进液口18;出液流道9具有设置于离心腔的顶部的第一出液口19和设置于杯体15侧壁顶部的第二出液口20;杯体15的侧壁与底壁之间形成有5°~50°的倒角21,倒角优选20°,通过倒角21的设置便于出液,使得离心杯7内残留液体的体积少于0.2ml;离心杯7还可以包括安装于杯体15底部的旋转适配器、安装于进液流道8与杯盖16之间的第一密封圈37、安装于出液流道9与杯盖16之间的第二密封圈38、以及安装于出液流道9与杯盖16之间的轴承39;旋转适配器传动连接于离心杯7与电机之间;杯盖16设置有中心孔;部分出液流道9同心套设于进液流道8的外周侧且穿过中心孔;第一密封圈37、第二密封圈38以及轴承39均安装于中心孔内;通过第一密封圈37和第二密封圈38可以使进液通道和出液通道之间密封隔离,通过轴承39可以使进液通道和出液通道与杯盖16之间发生相对转动。
在上述各种细胞制备工作站的基础上,液路单元2还包括液路切换装置,液路切换装置用于将待存溶液进行封闭式切换及分装至多个存储袋26中;液路单元2还包括第一气泡传感器30、第二气泡传感器31以及第三气泡传感器32;通过第一气泡传感器30、第二气泡传感器31以及第三气泡传感器32用于监控液路单元2中管路的流向。第一气泡传感器30安装于清洗液袋23、培养基液袋24、备用液袋25、转染试剂袋40、以及存储袋26相连的管路中;第二气泡传感器31安装于与初产品袋27、中产品袋、分离液袋28以及样本液袋29相连的管路中;第三气泡传感器32安装于与离心杯7的第一进液口17相连的管路中。
为了精确控制离心杯7内的液体温度、进液和出液质量,上述细胞制备工作站包括安装于框架5的称重单元;微流换热器12包括控温模块、上通风口以及下通风口;微流换热器12安装于离心仓内;控温模块可以为温度调节器;微流换热器12可以采用半导体热电致冷器件,可实现仓内4℃~40℃范围的温度控制,控制误差小于1℃;控温模块还用于调节培养过程中离心仓内离心杯7的环境温度,通过风扇向上通风口和下通风口吹风以传递调节环境温度所产生的热量,以保证细胞的生物活性;上通风口安装于离心杯7的上方,用于将温度调节器产生的热量通风传递至离心杯7上方;下通风口安装于离心杯7下方,用于将温度调节器产生的热量通风传递至离心杯7下方;通过上通风口往离心杯7上方吹风和下通风口往离心杯7下方吹风,能够加快热量传导至离心杯7内部,以调节离心杯7杯内的温度,而且通过上下吹风能够形成气流让整个离心仓内封闭的环境温度达到快速一致化的效果;通过称重单元可以实现对框架5上的液袋重量进行实时监测,对进出样进行重量的监控,测量误差小于1g。
如图1所示,主机控制单元4可以包括控制面板13和触控显示屏14,通过控制面板13和触控显示屏14可以实现输入输出控制和显示;控制面板13上设置有用于控制泵组件10、阀组件以及微流换热器12的控制按钮56;控制面板13和触控显示屏14均与称重单元、控温模块、电机、泵组件10、微流换热器12以及阀组件信号连接。如图1结构所示,在主机控制单元4的侧面还设置有用于控制触控显示屏14的显示开关41。为了方便液袋的悬挂,在框架5的顶部还设置有多个挂钩42。主机控制单元4能够通过控制程序和触控显示屏14独立控制每一个单元运行及其工艺参数,如:进出样的体积、路径,电机的离心速度、加速度、时间,混匀速度、强度等。
为了方便说明,如图2所示,阀组件可以包括第一控制阀43、第二控制阀44、第三控制阀45、第四控制阀46、第五控制阀47、第六控制阀48、第七控制阀49、第八控制阀50、第九控制阀51、第十控制阀52、第十一控制阀53、第十二控制阀54、第十三控制阀55、第十四控制阀64以及第十五控制阀65;管路包括第一管路33、第二管路35以及第三管路57;其中:
第一管路33用于将离心杯7与初产品袋27、离心杯7与分离液袋28、离心杯7与样本液袋29连通,在初产品袋27与第一管路33之间设置有第五控制阀47;在分离液袋28与第一管路33之间设置有第六控制阀48;在样本液袋29与第一管路33之间设置有第七控制阀49;第一管路33通过第一支路管路58、第二支路管路59以及第三支路管路66与离心杯7连通,第一支路管路58、第二支路管路59、以及第三支路管路66的部分重合,即,第一支路管路58、第二支路管路59、以及第三支路管路66在泵组件10的两端重合,合并为同一段主管路;第一支路管路58中安装有第十三控制阀55,用于连通泵组件10与离心杯7的第一出液口19;第二支路管路59与第三支路管路66并联,均用于连通离心杯7的第一进液口17和泵组件10,第二支路管路59中安装有第十控制阀52,第三支路管路66中安装有第十五控制阀65;
第二管路35用于将泵组件10与清洗液袋23、泵组件10与培养基液袋24、泵组件10与备用液袋25、泵组件10与存储袋26、以及泵组件10与转染试剂袋40连通,在清洗液袋23与第二管路35之间安装有第一控制阀43,在培养基液袋24与第二管路35之间安装有第二控制阀44,在备用液袋25与第二管路35之间安装有第三控制阀45,在存储袋26与第二管路35之间安装有第四控制阀46,在转染试剂袋40与第二管路35之间安装有第十四控制阀64,;第二管路35还包括第四支路管路60和第五支路管路61,其中,第四支路管路60用于连通泵组件10的第一端口34与清洗液袋23、培养基液袋24、备用液袋25、存储袋26以及转染试剂袋40,第四支路管路60中安装有第八控制阀50;第五支路管路61用于连通泵组件10的第二端口36与清洗液袋23、培养基液袋24、备用液袋25、存储袋26以及转染试剂袋40,第五支路管路61中安装有第九控制阀51;
第三管路57用于将泵组件10与废液袋22连通,第三管路57可以包括第六支路管路62和第七支路管路63,其中,第六支路管路62的一端和第七支路管路63的一端均连通废液袋22,第六支路管路62的另一端与泵组件10的第一端口34连通,第七支路管路63的另一端与泵组件10的第二端口36连通,并在第六支路管路62中安装有第十一控制阀53,在第七支路管路63中安装有第十二控制阀54。
实施例二
本实施例提供了一种采用全自动全封闭细胞制备工作站的细胞处理方法,如图5所示,该细胞处理方法包括以下步骤:
步骤S10,将分离液和待分离液经管路流进离心杯7中,并通过离心杯7进行第一细胞离心处理,在第一细胞离心处理过程中对管路进行清洗;在将分离液和待分离液经管路流进离心杯中,并通过离心杯7进行第一细胞离心处理,具体包括:
将分离液经第一管路33流进离心杯7中,以第一转速旋转离心杯7,并维持第一预定时间;第一管路33包括第一支路管路58和第二支路管路59,第一支路管路58和第二支路管路59部分重合;将待分离液经第二支路管路59流进离心杯7中,以第二转速旋转离心杯,并维持第二预定时间。
步骤S20,在清洗管路之后,从离心杯7中提取初产品溶液,并对初产品溶液进行浓缩处理,得到浓缩溶液。
可理解地,浓缩处理为将初产品溶液在离心杯7中单独进行离心从而提取出更高的细胞密度(单位容量内的细胞个数)的处理过程。
在一实施方式中,步骤S20中,即对初产品溶液进行浓缩处理,得到浓缩溶液,包括:
将提取的初产品溶液经管路抽至初产品袋27中;
将提取后剩余离心杯7中的溶液进行排废处理,并清洗离心杯7;
将初产品袋27中的初产品溶液经管路流进清洗后的离心杯7,并进行第二细胞离心处理,得到所述浓缩溶液。
在一实施方式中,在将提取的初产品溶液经管路抽至初产品袋27中,包括:
将离心杯7的转速维持在第三转速,通过阀组件和泵组件10从离心杯7中的出液流道9抽取出初产品溶液,并经第一支路管路58流至初产品袋27中;
可理解地,将初产品袋27中的初产品溶液经第二支路管路59流进清洗后的离心杯7中,并通过阀组件和泵组件10,将清洗液流进初产品袋27中进行溶液清洗处理,并将溶液清洗后的溶液经第二支路管路59流进离心杯7;将预设容量的清洗液流进离心杯7之后,对离心杯7进行所述第二细胞离心处理,以及排出废液,得到浓缩溶液。第二细胞离心处理为通过不同转速,通过出液流道排出废液的处理过程。
步骤S30,将转染试剂袋40中的转染试剂经管路流进离心杯7后,与浓缩溶液进行转染处理,得到转染后产物;通过阀组件和泵组件10,使转染试剂袋40中的转染试剂经过第二管路35和第二支路管路59流进离心杯7中,在通过电机驱动离心杯7转动实现摇匀,在摇匀过程中,电机的转速可以保持500rpm,持续240s。
在一实施方式中,步骤S30中,即与浓缩溶液进行转染处理,得到转染后产物,包括:
对离心杯7中的转染试剂和浓缩溶液进行摇匀,在摇匀过程中进行管路清洗和排空,令转染试剂和浓缩溶液充分转染,转染试剂是一种高效的慢病毒的聚合物,常称为病毒液,可以为多聚阳离子物质,它可以与核酸(包括质粒、siRNA、寡聚核苷酸)相互作用形成一种复合物将核酸转运到真核细胞内,摇匀为离心杯7顺时针和逆时针来回旋转,转速较慢达到人工摇匀效果,管路清洗和排空过程为通过生理盐水的清洗液沿着转染试剂流过的绝大部分路径进行清洗,并清洗后通过泵组件10的转动将该路径中的液体排空至离心杯7中,以充分让转染试剂和浓缩溶液进行转染。
其中,转染处理为将外源性基因导入细胞内的一种专门技术处理过程,外源性基因可以为慢病毒。
在排空后静置处理,得到转染后产物,静置处理为静置20分钟或者30分钟。
步骤S40,通过微流换热器培养离心杯7中的转染后产物,并监控细胞的分裂和扩增;通过微流换热器12让离心杯7保持在预设温度,如37℃,对离心杯7中的转染后产物进行培养,让离心杯7中的细胞进行分裂和扩增,时间为10d~14d,在这个时间段中,通过细胞数字化单元3进行细胞的计数、分裂和扩增的监控,其中,细胞数字化单元3可以通过显微镜等细胞计数单元采集的数据进行分析,活率为细胞的存活率,粒径为细胞的颗粒径长。
在一实施例中,所述步骤S40中,即通过微流换热器12培养离心杯7中的转染后产物,并监控细胞的分裂和扩增,包括:
通过微流换热器12令所述离心杯7的温度达到培养温度范围内,并通过细胞计数单元对离心杯7进行定时的细胞计数,得到每次计数的计数结果。
可理解地,培养温度范围可以根据需求设定,比如36~38℃,通过微流换热器12中的控温模块进行加热,释放出热量,然后通过风扇将释放出的热量通往上通风口和下通风口,然后传导至离心杯7的上方和下方,从而令离心杯7的温度达到培养温度范围内,细胞计数的过程为:通过显微镜对焦离心杯7的底部,自下而上移动预设距离,对某一区域进行图像采集,或者自下而上的扫描,对采集或扫描的图像进行三维模型的构建,可以构建出该区域作为面积和预设距离作为高度的空间,计算出体积,并根据构建的三维模型进行细胞数量的计数,其计数方法可以为对采集的图像进行细胞边缘修复,统计封闭的三维细胞进行计数,然后通过该空间与所述离心杯7中的液体体积的比例,以及该空间的计数,推算出所述离心杯中的液体体积的细胞数,从而得到每次计数的计数结果,计数结果体现了离心杯7中的液体体积的细胞数。
根据各计数结果,分析离心杯7中的细胞的分裂和扩增状态。
可理解地,根据每次计数结果,能够得到离心杯7中的细胞的数量、活率和粒径,活率为细胞的存活率,存活率为活的细胞占总细胞数的占比,活率的计算方法可以根据细胞分裂前的数量(当前计数结果的前一次计数结果),以及细胞分裂后的数量的比例(当前计数结果),通过细胞分裂模型的模拟演变,推算出死细胞的数量,然后确定出活率;粒径为细胞的颗粒径长,可以通过对细胞的大小进行测量,通过细胞数量、活率和粒径可以体现细胞的分裂和扩增状态,在细胞数量、活率和粒径均在合格范围内,即每次的细胞数量、活率和粒径能够在细胞培养的趋势范围内,确定分裂和扩增状态为合格,细胞分裂模型为细胞随着时间而分裂演变的模型,通过历史细胞分裂的数据进行统计可以构建细胞分裂模型。
在一实施方式中,在细胞的分裂和扩增状态不合格时,及时发出预警提示。
在预设培养时间后,检测到分裂和扩增状态为合格时,确定完成转染后产物的培养。
可理解地,预设培养时间可以为10天~14天,检测到细胞数量、活率和粒径均在合格范围内时,确定完成培养阶段。
步骤S50,对培养后的产物进行收获处理,获得多个存储待存溶液的存储袋26中;在对培养后的产物进行收获处理前,还包括:通过清洗液袋23中的清洗溶液对离心杯7中的培养产物进行清洗和浓缩,收获处理过程为:向培养后的产物注入冻存液,并通过微流换热器12令离心杯7的温度达到存储温度范围内,摇匀得到待存溶液,通过细胞计数单元对待存溶液进行细胞计数;具体细胞计数方法为:通过显微镜对焦离心杯7的底部,自下而上移动预设距离,对某一区域进行图像采集,或者自下而上的扫描,对采集或扫描的图像进行三维模型的构建,可以构建出该区域作为面积和预设距离作为高度的空间,计算出体积,并根据构建的三维模型进行细胞数量的计数,其计数方法可以为对采集的图像进行细胞边缘修复,统计封闭的三维细胞进行计数,其过程可以运用三维图像处理技术,不限于二值图像的转换,通过细胞计数单元不断计算注入冻存液过程中的细胞密度,直至达到所需的细胞密度的时候,停止注入冻存液,冻存液为用于冻存细胞液的液体,能够保证细胞的活性和冻存环境;将待存溶液分装至多个存储袋26中,在将待存溶液分装至多个存储袋26中时,具体包括:通过液路切换装置将待存溶液进行封闭式切换及分装至多个存储袋26中。
在一实施方式中,步骤S50中,即对培养后的产物进行收获处理,获得多个存储待存溶液的存储袋,具体包括:
向培养后的产物注入冻存液,并令离心杯7的温度达到存储温度范围内,摇匀得到待存溶液。
可理解地,冻存液用于冻存细胞液的液体,通过微流换热器12调节冷却的热量向离心仓传导,以降低离心杯7的温度,从而达到到存储温度范围内,并在过程中顺时针和逆时针的来回摇匀,以避免细胞的沉淀和凝结,从而获得待存溶液。
将待存溶液分装至多个存储袋26中。
可理解地,当需要对多个存储袋26进行分装时,可以通过切换装置实现多个存储袋26的依次切换和分装。切换装置可以为含有三通阀的控制设备、或者通过热封及插接的控制设备,如:存储袋26可以通过无菌接管机连接至第四控制阀46上方的管路。
上述细胞处理方法通过细胞制备工作站完成第一细胞离心处理、提取初产品溶液、浓缩处理、转染处理和培养等各步骤,通过各步骤的合理安排以及上述细胞制备工作站的配合,不仅使细胞分离过程实现全自动、全封闭处理,达到无菌环境的要求,而且一站式完成细胞分离、转染、培养和收获,减少了过程中细胞液的中转和运输,从而提高了细胞的生物活性、降低了细胞制备成本。
上述细胞处理方法的具体操作过程可以采用以下步骤:
第一步,安装离心杯7、液袋以及无菌导管,将离心杯7安装于底座1的离心仓内,将液袋悬挂于框架5,并通过无菌导管连接离心杯7、泵组件10、液袋以及气泡传感器,关闭各个控制阀,保持各控制阀处于常闭状态,使各无菌导管处于断开状态;
第二步,进样,开启泵组件10、第六控制阀48和第十三控制阀55,使分离液袋28中的80~100ml的分离液通过第六控制阀48、第一管路33、泵组件10、第一支路管路58、第十三控制阀55以及出液流道9进入离心杯7内,关闭泵组件10、第六控制阀48和第十三控制阀55,电机驱动离心杯7以第一转速进行离心旋转,保持第一预定时间,第一转速可以为2500~2800rpm之间的值,第一预定时间可以为10s;开启泵组件10、第七控制阀49、第十控制阀52,进细胞样品溶液,将样本液袋29中的25ml~120ml细胞样品通过第七控制阀49、第一管路33、泵组件10、第二支路管路59、第十控制阀52、进液流道8进入离心杯7,关闭泵组件10、第七控制阀49、第十控制阀52,离心杯7保持第一转速,离心第二预定时间,第二预定时间可以为200~300s之间的一个值;
第三步,清洗液路单元,开启泵组件10、第一控制阀43、第八控制阀50和第七控制阀49,使清洗液袋23中的15~20ml细胞清洗液通过第一控制阀43、第二管路35、第四支路管路60、第八控制阀50、泵组件10、第一管路33、第七控制阀49进入样本液袋29,关闭泵组件10、第一控制阀43、第八控制阀50和第七控制阀49;打开泵组件10、第一控制阀43、第九控制阀51和第十控制阀52,使清洗液袋23中的20~30ml细胞清洗液通过第一控制阀43、第二管路35、第五支路管路61、第九控制阀51、泵组件10、第十控制阀52、进液流道8进入离心杯7,关闭泵组件10、第一控制阀43、第九控制阀51和第十控制阀52;打开泵组件10、第一控制阀43、第九控制阀51和第十一控制阀53,使清洗液袋23中的10~20ml细胞清洗液通过第一控制阀43、第二管路35、第五支路管路61、第九控制阀51、泵组件10、第六支路管路62、第十一控制阀53进入废液袋22,关闭泵组件10、第一控制阀43、第九控制阀51和第十一控制阀53;打开泵组件10、第一控制阀43、第九控制阀51和第十二控制阀54,使清洗液袋23中的20~30ml细胞清洗液通过第一控制阀43、第二管路35、第五支路管路61、第九控制阀51、泵组件10、第七支路管路63、第十二控制阀54进入废液袋22,关闭泵组件10、第一控制阀43、第九控制阀51和第十二控制阀54;
第四步,初产品出样,将电机的第一转速降至第二转速,第二转速可以为1500~2000rpm范围内的值,第一转速和第二转速可以相同,也可以不相同;保持第二预定时间的同时开始出样,打开第十控制阀52和第五控制阀47,并控制泵组件10反转,将离心杯7中80~100ml的PBMC(Peripheral blood mononuclear cell,外周血单个核细胞)溶液通过进液流道8、第二支路管路59、第十控制阀52、第一管路33、泵组件10、第五控制阀47出样至初产品袋27,关闭泵组件10、第十控制阀52和第五控制阀47,并使离心杯7停止转动;
第五步,清洗离心杯7和液路单元,打开泵组件10、第十控制阀52和第十二控制阀54,将离心杯7中的废液通过进液流道8、第二支路管路59、第十控制阀52、第一管路33、泵组件10、第七支路管路63、第十二控制阀54全部导入废液袋22,关闭泵组件10、第十控制阀52和第十二控制阀54;打开泵组件10、第一控制阀43、第八控制阀50和第十二控制阀54,将管路中的废液全部导入废液袋22,关闭泵组件10、第一控制阀43、第八控制阀50和第十二控制阀54;清洗离心杯7,打开泵组件10、第一控制阀43、第九控制阀51和第十控制阀52,使清洗液袋23中的150~200ml细胞清洗液通过第一控制阀43、第二管路35、第五支路管路61、第九控制阀51、泵组件10、第二支路管路59、第十控制阀52、进液流道8进入离心杯7,关闭泵组件10、第一控制阀43、第九控制阀51和第十控制阀52;清洗离心杯7的出液流道9,打开泵组件10、第一控制阀43、第九控制阀51和第十三控制阀55,将清洗液袋23中的30~50ml细胞清洗液通过第一控制阀43、第二管路35、第五支路管路61、第九控制阀51、泵组件10、第一管路33、第十三控制阀55、第一支路管路58、出液流道9进入离心杯7,关闭泵组件10、第一控制阀43、第九控制阀51和第十三控制阀55;打开泵组件10、第十控制阀52和第十二控制阀54,将离心杯7中的溶液通过进液通道7、第二支路管路59、第十控制阀52、第一管路33、第七支路管路63、第十二控制阀54全部排至废液袋22,关闭泵组件10、第十控制阀52和第十二控制阀54;打开泵组件10、第一控制阀43、第九控制阀51和第十一控制阀53,将清洗液袋23中的10~20ml细胞清洗液排入废液袋22,关闭第九控制阀51和第十一控制阀53,打开第八控制阀50和第十二控制阀54,将清洗液袋23中的20~30ml细胞清洗液排入废液袋22,关闭泵组件10、第一控制阀43、第八控制阀50和第十二控制阀54;
第六步,初产品清洗,打开泵组件10、第五控制阀47和第十控制阀52,将初产品袋27中的全部样品通过第一管路33、泵组件10、第二支路管路59、第十控制阀52、进液流道8输送至离心杯7,关闭泵组件10、第五控制阀47和第十控制阀52;打开泵组件10、第一控制阀43、第八控制阀50和第五控制阀47,使清洗液袋23中的90~110ml细胞清洗液通过第一控制阀43、第二管路35、第四支路管路60、第八控制阀50、泵组件10、第一管路33、第五控制阀47进入初产品袋27,关闭泵组件10、第一控制阀43、第八控制阀50和第五控制阀47;打开泵组件10、第五控制阀47和第十控制阀52,将初产品袋27中的全部样品通过第五控制阀47、第一管路33、泵组件10、第二支路管路59、第十控制阀52、进液流道8输送至离心杯7,关闭泵组件10、第五控制阀47和第十控制阀52;打开泵组件10、第一控制阀43、第九控制阀51和第十控制阀52,将清洗液袋23中的180~200ml细胞清洗液通过第一控制阀43、第二管路35、第五支路管路61、第九控制阀51、泵组件10、第二支路管路59、第十控制阀52、进液流道8输送至离心杯7,关闭泵组件10、第一控制阀43、第九控制阀51和第十控制阀52;通过电机控制离心杯7以第一转速进行旋转,第一转速可以为2500~3000rpm,保持第三预定时间,第三预定时间可以为300s,开始第一次离心清洗;保持第一转速开始自动排废液,打开泵组件10、第十控制阀52和第十二控制阀54,将离心杯7中的溶液通过进液流道8、第二支路管路59、第十控制阀52、第一管路33、泵组件10、第七支路管路63、第十二控制阀54全部排至废液袋22,再降至第三转速并排废液,第三转速可以为1000~1500rpm,最后降至第四转速后继续排废液,第四转速可以为400~800rpm,保持第四预定时间,第四预定时间可以为320s,关闭泵组件10、第十控制阀52和第十二控制阀54;打开泵组件10、第二控制阀44、第九控制阀51和第十控制阀52,将培养基液袋24中的200~400ml培养基溶液通过第二控制阀44、第二管路35、第五支路管路61、第九控制阀51、第一管路33、泵组件10、第二支路管路59、第十控制阀52、进液流道8输送至离心杯7,关闭泵组件10、第二控制阀44、第九控制阀51和第十控制阀52;将离心杯7转速调至第一转速,保持第二预定时间,进行第二次离心清洗;
第七步,浓缩,保持离心杯7以第一转速旋转,打开泵组件10、第十控制阀52和第十二控制阀54,将离心杯7中的溶液通过进液流道8、第二支路管路59、第十控制阀52、第一管路33、泵组件10、第七支路管路63、第十二控制阀54排至废液袋22,再将离心杯7的转速降至第三转速进行排废液,最后降至第四转速继续排废液,并保持第五预定时间,第五预定时间可以为480s,当第三气泡传感器32监测到气泡后离心30~50s停止旋转;
第八步,转染,打开泵组件10、第十四控制阀64、第九控制阀51和第十控制阀52,将转染试剂袋40中的转染试剂通过第二管路35、第五支路管路61、第一管路33、以及第二支路管路59管路流进离心杯7中,关闭泵组件10、第十四控制阀64、第九控制阀51和第十控制阀52,开启电机,电机的转速为500~800rpm,持续转动200~300s,实现摇匀,进行转染处理,并在摇匀过程中对管路进行清洗;转染试剂中含有慢病毒;
第九步,培养,通过微流换热器12对离心杯7中的溶液进行热交换,让离心杯7保持在预设温度,如37℃,对离心杯7中的转染后产物进行培养,让离心杯7中的细胞进行分裂和扩增,时间为10d~14d,在这个时间段中,通过细胞数字化单元3进行细胞数量、活率、粒径的监控,其中,细胞数字化单元3可以通过显微镜等细胞计数单元采集的数据进行分析,活率为细胞的存活率,粒径为细胞的颗粒径长;
第十步,收获,通过清洗液袋23中的清洗溶液对离心杯7中的培养产物进行清洗和浓缩,通过细胞计数单元对浓缩或者收集的细胞液进行细胞计数;
第八步,制剂,打开泵组件10、第二控制阀44、第九控制阀51和第十控制阀52,将培养基液袋24中的200~300ml培养基溶液通过第二控制阀44、第二管路35、第五支路管路61、第九控制阀51、第一管路33、泵组件10、第二支路管路59、第十控制阀52、进液流道8输送至离心杯7,关闭泵组件10、第二控制阀44、第九控制阀51和第十控制阀52,使离心杯7通过正转和反转进行混匀;
第九步,分装,启动电机,使离心杯7转速升至50~80rpm范围中的值,打开泵组件10、第十控制阀52、第九控制阀51和第四控制阀46,将离心杯7中的终产品样品通过进液流道8、第二支路管路59、第十控制阀52、第一管路33、泵组件10、第四控制阀46依次输送至存储袋26中,关闭泵组件10、第十控制阀52、第九控制阀51和第四控制阀46;最后,启动第一气泡传感器30和第三气泡传感器32,自动收集剩余的待存溶液,打开泵组件10、第十控制阀52、第九控制阀51和第三控制阀45,将离心杯7中的终产品样品通过进液流道8、第二支路管路59、第十控制阀52、第一管路33、泵组件10、第三控制阀45全部装入备用液袋25中,之后关闭泵组件10、第十控制阀52、第九控制阀51和第三控制阀45。当需要对多个存储袋26进行分装时,可以通过切换装置实现多个存储袋26的依次切换和分装。切换装置可以为含有三通阀的控制设备、或者通过热封及插接的控制设备,如:存储袋26可以通过无菌接管机连接至第四控制阀46上方的管路。
采用上述细胞制备工作站的细胞处理方法,通过离心杯7中设置推液板11的结构避免了细胞的剪切损伤,并且缩短了分离时间,提高了分离效率,从现有技术的分离时间15min缩短至5min,解决了现有技术中细胞分离效率低的问题;同时,通过离心培养单元和微流换热器的共同作用可以实现细胞的转染、培养以及收获,通过细胞数字化单元还能对细胞的数量、活率以及粒径进行监控,实现了细胞制备过程的全自动、全封闭处理,而且还提高了细胞的生物活性、降低了细胞制备成本。
显然,本领域的技术人员可以对本发明实施例进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样,倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内,则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
Claims (10)
1.一种全自动全封闭细胞制备工作站,其特征在于,包括:
离心培养单元,包括微流换热器和具有离心腔的离心杯,用于进行第一细胞离心处理、提取初产品溶液、浓缩处理、转染处理和培养;所述离心杯安装于离心仓内,包括进液流道和出液流道;所述微流换热器用于在培养过程中将所述离心杯保持在培养温度范围;
液路单元,包括泵组件、阀组件以及管路,用于对所述离心杯供液和抽液,以及收获至存储袋;所述泵组件和所述阀组件处于所述管路路径中;
细胞数字化单元,包括安装于所述离心杯下方的显微镜,用于对所述离心杯内的细胞的计数、分裂和扩增进行监控;
主机控制单元,包括电机、废液槽和所述离心仓,与所述泵组件、所述阀组件、以及所述微流换热器连接,并对所述电机、所述泵组件、所述阀组件、以及所述微流换热器进行控制;所述电机与所述离心杯传动连接,用于驱动所述离心杯转动;所述废液槽用于收集清洗后和排废后的溶液;
框架,固定安装于所述主机控制单元的顶部,用于悬挂装有分离液的分离液袋、装有待分离液的样本液袋、装有清洗液的清洗液袋、装有转染试剂的转染试剂袋、初产品袋和存储袋;所述清洗液用于细胞分离过程中的清洗;
壳体,密封罩设于所述主机控制单元和所述框架的顶部。
2.根据权利要求1所述的细胞制备工作站,其特征在于,所述离心杯还包括推液板,所述推液板从离心杯的中心沿半径方向延伸,并且所述推液板中远离轴心的端部与所述离心杯的内壁之间具有间隙。
3.根据权利要求2所述的细胞制备工作站,其特征在于,所述离心杯还包括杯体和杯盖;
所述推液板固定连接于所述杯体和/或所述杯盖;
所述杯盖密封连接于所述杯体的顶部,在所述杯盖和所述杯体之间形成离心腔;
所述推液板沿所述杯体的周向分布于所述离心腔内,所述推液板中邻近轴心的另一端部与所述杯体的轴心之间具有间隙;
所述进液流道和所述出液流道均连通所述杯体外部和所述离心腔;所述进液流道具有设置于所述杯体外部的第一进液口和/或设置于所述杯体的内侧壁底部的第二进液口;所述出液流道具有设置于所述离心腔的顶部的第一出液口和/或设置于所述杯体侧壁顶部的第二出液口。
4.根据权利要求3所述的细胞制备工作站,其特征在于,所述杯体的侧壁与底壁之间形成5°~50°的倒角。
5.根据权利要求1-4任一所述的细胞制备工作站,其特征在于,所述微流换热器包括:
控温模块,用于调节培养过程中所述离心仓内所述离心杯的环境温度,通过风扇向上通风口和下通风口吹风以传递调节环境温度所产生的热量;
上通风口,安装于所述离心杯上方,用于将所述控温模块产生的热量通风传递至所述离心杯上方;
下通风口,安装于所述离心杯下方,用于将所述控温模块产生的热量通风传递至所述离心杯下方。
6.一种采用全自动全封闭细胞制备工作站的细胞处理方法,其特征在于,包括:
将分离液和待分离液经管路流进离心杯中,并通过所述离心杯进行第一细胞离心处理,在第一细胞离心处理过程中对所述管路进行清洗;
在清洗所述管路之后,从所述离心杯中提取初产品溶液,并对初产品溶液进行浓缩处理,得到浓缩溶液;
将转染试剂袋中的转染试剂经管路流进离心杯后,与所述浓缩溶液进行转染处理,得到转染后产物;
通过微流换热器培养所述离心杯中的转染后产物,并监控细胞的分裂和扩增;
对培养后的产物进行收获处理,获得多个存储待存溶液的存储袋。
7.根据权利要求6所述的细胞处理方法,其特征在于,所述对初产品溶液进行浓缩处理,得到浓缩溶液,包括:
将提取的初产品溶液经管路抽至初产品袋中;
将提取后剩余离心杯中的溶液进行排废处理,并清洗所述离心杯;
将所述初产品袋中的所述初产品溶液经管路流进清洗后的离心杯,并进行第二细胞离心处理,得到所述浓缩溶液。
8.根据权利要求6所述的细胞处理方法,其特征在于,所述与所述浓缩溶液进行转染处理,得到转染后产物,包括:
对离心杯中的所述转染试剂和所述浓缩溶液进行摇匀,在摇匀过程中进行管路清洗和排空,令所述转染试剂和所述浓缩溶液充分转染;
在排空后静置处理,得到转染后产物。
9.根据权利要求6所述的细胞处理方法,其特征在于,所述通过微流换热器培养所述离心杯中的转染后产物,并监控细胞的分裂和扩增,包括:
通过所述微流换热器令所述离心杯的温度达到培养温度范围内,并通过细胞计数单元对所述离心杯进行定时的细胞计数,得到每次计数的计数结果;
根据各所述计数结果,分析离心杯中的细胞的分裂和扩增状态;
在预设培养时间后,检测到分裂和扩增状态为合格时,确定完成转染后产物的培养。
10.根据权利要求6所述的细胞处理方法,其特征在于,所述对培养后的产物进行收获处理,获得多个存储待存溶液的存储袋,包括:
向培养后的产物注入冻存液,并令所述离心杯的温度达到存储温度范围内,摇匀得到所述待存溶液;
将所述待存溶液分装至多个所述存储袋中。
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