JP2005532779A5 - - Google Patents
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Description
懸濁物において増殖する能力を有する特定のMDCK細胞株が、商業的条件下で多数の異なるウイルスの増殖のために特に適していることが驚くべきことにこのたび見出された。従来の長期にわたる(数週間または数ヶ月の長さの)適合段階を有さない広範な種々のウイルスが、これらの細胞において迅速に複製され得る。本発明に従う方法は、培地、培地添加物、または温度のような特定の培養条件を選択することなく行われ得る。これらの細胞は、増殖することが困難であることが知られているウイルス(例えば、狂犬病ウイルス、ロタウイルス、肺炎ウイルスまたはA型肝炎ウイルス)であっても、広範な種々のウイルスの複製について問題なく適している。
Claims (28)
- 薬物または診断剤の活性成分を生成する方法であって、該方法が、以下の工程:
(a)MDCK細胞を、初代培養分離物由来のウイルスとともに無血清培地中で接着培養する工程であって、該MDCK細胞は、支持体粒子の不存在下で、接着培養および懸濁培養の両方で増殖しうるものである、工程;
(b)接着培養された該MDCK細胞において該ウイルスの種ストックを生成する工程;
(c)該ウイルスの該種ストックに該MDCK細胞を感染させる工程;および
(d)該ウイルスの増幅を可能にする条件下で商業的規模にて支持体の不存在下で懸濁培養により該MDCK細胞を培養する工程
を包含する方法であって、支持体粒子の不存在下での該MDCK細胞の懸濁培養物中での培養工程は、少なくとも30Lの容積で行われる、方法。 - 前記懸濁培養物が、50Lより多い容量を有することを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記懸濁培養物が、100Lより多い容量を有することを特徴とする、請求項2に記載の方法。
- 前記MDCK細胞が、細胞株MDCK33016に由来することを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記ウイルスが、ssDNAウイルス、dsDNAウイルス、RNA(+)ウイルス、RNA(−)ウイルスまたはdsRNAウイルスであることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記ウイルスが、アデノウイルス、オルトミクソウイルスもしくはパラミクソウイルス、レオウイルス、ピコルナウイルス、エンテロウイルス、フラビウイルス、アレナウイルス、ヘルペスウイルス、またはポックスウイルスから選択されることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記MDCK細胞が、アデノウイルス、ポリオウイルス、A型肝炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、中央ヨーロッパ脳炎ウイルス、および関連する東洋(ロシアまたは他の)形態、デング熱ウイルス、黄熱病ウイルス、C型肝炎ウイルス、風疹ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、RSウイルス、ワクシニアウイルス、インフルエンザウイルス、ロタウイルス、ラブドウイルス、肺炎ウイルス、レオウイルス、1型単純ヘルペスウイルスまたは2型単純ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、イヌアデノウイルス、エプスタイン−バーウイルス、ウシヘルペスウイルスまたはブタヘルペスウイルス、BHV−1ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、または狂犬病ウイルスに感染させられる、請求項6に記載の方法。
- 前記ウイルスが、少なくとも10kdのサイズを有する異種機能性タンパク質をコードする配列を含むウイルスゲノムを有することを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 培地が、化学的に規定された培地であることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 培地が、無タンパク質であることを特徴とする、請求項9に記載の方法。
- 前記ウイルスの増殖が、灌流系において実施されることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記ウイルスの増殖が、バッチ系において実施されることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記MDCK細胞が、前記ウイルスの増殖のために、30℃と40℃との間の温度で培養されることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記MDCK細胞が、前記ウイルスの増殖のために、35%と60%との間の酸素分圧で培養されることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 培地のpH値が、前記ウイルスの増殖のために、pH6.8とpH7.8との間に存在することを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記MDCK細胞が、10−8と10との間のMOI値で前記ウイルスに感染させられることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞が、感染後、少なくとも2〜28日間培養されることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記MDCK細胞の培養の間に、新鮮な培地、培地濃縮物または培地成分が添加されることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記ウイルスの増殖の間に、前記MDCK細胞が、培養培地の置換または新鮮な培養培地の添加を伴う無血清培地中において増殖されることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 培養培地の置換または新鮮な培養培地の添加が、前記ウイルスの増殖の間に繰り返されることを特徴とする、請求項19に記載の方法。
- 前記ウイルスまたは該ウイルスによって生成されるタンパク質が、細胞培養物から精製されることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 培養培地の少なくとも一部分が、前記ウイルスまたは前記タンパク質の精製のために、前記MDCK細胞の少なくとも一部分から分離されることを特徴とする、請求項21に記載の方法。
- 前記分離が、ディープベッドフィルターまたは分離器の手段により行われることを特徴とする、請求項22に記載の方法。
- 前記ウイルスが、前記培養物の上清または前記MDCK細胞から回収されることを特徴とする、請求項21に記載の方法。
- 前記精製が、前記ウイルスの濃縮のための超遠心分離を包含することを特徴とする、請求項24に記載の方法。
- 前記精製が、クロマトグラフィーを包含することを特徴とする、請求項21に記載の方法。
- 前記ウイルスが、精製の間に不活性であることを特徴とする、請求項21に記載の方法。
- 薬物または診断剤を生成する方法であって、ここで活性成分は、請求項1に記載の方法に従って生成され、そして適切なアジュバント、補助剤、緩衝剤、希釈剤または薬物キャリアと混合される、方法。
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