JP2005517393A - ウイルスの保存のための組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、ウイルスの保存のための組成物に関する。本発明は、更にウイルスの保存のための組成物を調製するための方法にも関する。
遺伝子治療は、遺伝子物質の細胞への移植及び治療目的のためのその物質のこれらの細胞内での発現を広く表す。目的は、所望するタンパク質を適当な量で、そして適切な場所で生産することである。治療的な核酸を細胞に放出するための各種の方法が開発されているが、これらの方法の多くは、標的細胞への治療的核酸の比較的効率の悪い移植によって制約されている。ウイルスは感受性のある細胞に感染することが非常に効率的であるために、ウイルスは、いまや治療的核酸を遺伝子治療の目的で細胞に移植するための有用なベヒクルとして認識されている。
本明細書を通して、本発明の種々の面を記載する目的のために、文書について引用することがありえる。然しながら、本明細書中に引用されるどのような参考文献も、従来技術を構成するものであることを容認するものではない。具体的には、本明細書におけるどのような文書について言及することが、オーストラリア又は他のどの国においての当該技術における一般的技術常識の一部を構成するものであることを容認するものではない、ことは理解されるべきある。参考文献の考察はこれらの著者が主張するものを記述するものであり、本出願人は、本明細書中に引用するいずれもの文書の正確さ及び適切さに反論する権利を留保する。
本発明は、ウイルスの保存のための組成物を提供し、組成物は、ウイルス、脂質及び凍結保護物質を含む。
本発明の状況において、組成物中のウイルスの活性が、脂質及び凍結保護物質を組成物中に含めることによって保存することができることが判明した。
vitroでパッケージされた又は合成のウイルスのいずれのウイルスをも意味すると理解すべきである。
先に記述したように、本発明の組成物は、ウイルス粒子の改良された保存を提供する。好ましくは、ウイルス粒子は、ヒトアデノウイルスのようなマストアデノウイルス及びヒツジアデノウイルスのようなアタデノウイルスを含むアデノウイルス;ヘルペスウイルス;ワクシニア、ニワトリポックス、ブタポックス及びヒツジポックスを含むポックスウイルス;パポーバウイルス;オルトヘパドナウイルス;アデノ随伴ウイルスを含むパルボウイルス;ビルナウイルス;レオウイルス;フラビウイルス;ポリオウイルスを含むピコルナウイルス;シンドビスウイルス及びセムリキ森林熱ウイルスを含むトガウイルス;フィロウイルス;パラミクソウイルス;ラブドウイルス;アレナウイルス;ブニヤウイルス;オルトミクソウイルス;レンチウイルスを含むレトロウイルスからなる群の一つ又はそれより多くから選択される。更に好ましくは、ウイルス粒子は、ウイルスのアデノウイルス科から誘導される。更に好ましくは、ウイルスは、アタデノウイルスである。最も好ましくは、ウイルスは、ヒツジアタデノウイルスである。
合成ウイルスは、タンパク質及び/又は脂質の外被でパッケージされたいずれもの核酸を意味すると理解されるべきである。
この一般式において、Xは、親水性部分を表し、Yは、スペーサー基(存在することも又は存在しないこともできる)を表し、そしてR1、R2及びR3は、脂肪酸のアシル基である。好ましくは、スペーサー基Yが、分子中に存在する。最も好ましくは、スペーサー基は、1ないし30個の炭素−炭素共有単結合に相当する鎖長を有する。
ウイルスを保存するために、組成物中の脂質の濃度は、好ましくは0.1μMないし1mMの範囲である。更に好ましくは、脂質の濃度は、1μMないし500μMである。最も好ましい態様において、脂質の濃度は、5μMないし100μMである。
認識されるものであるように、本発明による方法は、上記で詳細に考察したような組成物と同じ好ましい特徴を具体化するものである。
以下に、上記の本発明の一般的な理論を具体化する実施例についての言及が行われる。然しながら、以下の説明が、上記の説明の一般性を制約するものではないことは理解されるべきである。
ウイルスの保存のための組成物の調製
CsClで精製したOAdV623ウイルスを、ポリエチレン試験管中の、10mMのトリス、8.5%のスクロース、2%のPEG緩衝液を含有するpH8の緩衝液中に、最終濃度の2倍で懸濁した。CS087は、冷凍乾燥した固体として供給され、これを最初にエタノール中に溶解し、そして次いでエタノールを除去して、フィルムを生成した。フィルムを、ポリスチレン試験管内の、10mMのトリス、8.5%のスクロース、2%のポリエチレングリコール400を含有するpH8.0の緩衝液中に、最終濃度の2倍で分散した。
−80℃における各種のウイルス組成物の貯蔵安定性
−80℃で貯蔵された各種のOAdV623組成物(概略6×108VP/ml)の安定性を、14日、1ヶ月又は2ヶ月間の貯蔵後の細胞不活性化の程度を決定することによって評価した。細胞の不活性化は、pH8及びpH6で貯蔵された組成物に対して決定した。
10mMのトリス
10mMのマレイン酸水素ナトリウム
8.5%のスクロース
50μMのCS087
2%(容積/容積)のポリエチレングリコール400(PEG400)
0.005%(容積/容積)のポリソルベート80(PS80)。
全ての組成物を、トリス又はマレイン酸緩衝液で所望するpHに緩衝した。
−20℃における各種のウイルス組成物の貯蔵安定性
−20℃で貯蔵された各種のOAdV623組成物(概略6×108VP/ml)の安定性を、14日、1ヶ月又は3ヶ月間の貯蔵後の細胞の不活性化の程度を決定することによって評価した。細胞の不活性化は、pH8及びpH6で貯蔵された製剤に対して決定した。
10mMのトリス
10mMのマレイン酸水素ナトリウム
8.5%のスクロース
50μMのCS087
2%(容積/容積)のポリエチレングリコール400(PEG400)
0.005%(容積/容積)のポリソルベート80(PS80)。
全ての組成物を、トリス又はマレイン酸緩衝液で所望するpHに緩衝した。
多数回の冷凍−解凍サイクル(−80℃から25℃へ)後の各種のウイルス組成物の保存
各種のOAdV623組成物(1×1010VP/ml)の、多数回の冷凍−解凍サイクル後に保存される能力を、1、2又は3回の冷凍−解凍サイクルへの暴露後の細胞の不活性化の程度を決定することによって評価した。それぞれのサイクルにおいて、ウイルスを−80℃に1時間以上で冷凍し、そして25℃で30分間で解凍した。細胞の不活性化を、10mMのトリス、8.5%のスクロース、50μMのCS087及び2%又は4%のいずれかのポリエチレングリコール400(pH8)中に処方されたウイルスに対して決定した。
10mMのトリス
8.5%のスクロース
50μMのCS087
2%又は4%(容積/容積)のポリエチレングリコール400(PEG400)。
全ての組成物を、トリス又はマレイン酸緩衝液で所望するpHに緩衝した。
多数回の冷凍−解凍サイクル(−80℃から20℃へ)における各種のウイルス組成物の保存
各種のOAdV623組成物(概略9.6×1011VP/ml)の、多数回の冷凍−解凍サイクル後に保存される能力を、1又は3回の冷凍−解凍サイクルへの暴露後の細胞の不活性化の程度を決定することによって評価した。それぞれのサイクルにおいて、ウイルスを−80℃で少なくとも1時間冷凍し、そして20℃で40分間で解凍した。細胞の不活性化を、10μMのCS087を伴う又は伴わない、10mMのトリス、8.5%のスクロース及び0.5%のポリエチレングリコール400中にpH8で処方されたウイルスについて決定した。
10mMのトリス
8.5%のスクロース
10μMのCS087
0.5%(容積/容積)のポリエチレングリコール400(PEG400)。
全ての組成物を、トリス又はマレイン酸緩衝液で所望するpHに緩衝した。
(a)トリス/スクロース/PEG400中のOAdV623
Claims (78)
- ウイルスの保存のための組成物であって、ウイルス、脂質及び凍結保護物質を含む、前記組成物。
- 前記脂質が、カチオン性脂質、アニオン性脂質、両性イオン性脂質、非イオン性脂質又はこれらの脂質のいずれかの組合せである、請求項1に記載の組成物。
- 前記脂質が、カチオン性脂質である、請求項2に記載の組成物。
- 前記カチオン性脂質が、1又は2以上のアミノ残基を含む親水性部分を有する、請求項3に記載の組成物。
- 前記1又は2以上のアミノ残基がアミノ酸から誘導される、請求項4に記載の組成物。
- 前記1又は2以上のアミノ酸が、リシン、アルギニン又はヒスチジンである、請求項5に記載の組成物。
- 前記カチオン性脂質が、ポリカチオン性脂質である、請求項3ないし6のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記ポリカチオン性脂質が、三つのリシンアミノ酸を含む親水性部分を有する、請求項7に記載の組成物。
- 前記脂質が、1又は2以上の疎水性基を含む疎水性部分を有する、請求項1ないし8のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記1又は2以上の疎水性基が、アシル、アルキル又はアルコキシ基を含む、請求項9に記載の組成物。
- 前記アシル基が、3ないし24個の炭素原子の長さの炭素鎖を有する、請求項10に記載の組成物。
- 前記アシル基が、ラウリン酸基である、請求項11に記載の組成物。
- 前記脂質が、三つの疎水性基を含む疎水性部分を有する、請求項9ないし12のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記脂質が、親水性部分及び疎水性部分間に更にスペーサー基を有する、請求項9ないし13のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記スペーサー基が、1ないし30個の炭素−炭素共有単結合に相当する鎖長を有する、請求項14に記載の組成物。
- 前記脂質が、トリス−複合カチオン性脂質である、請求項1ないし15のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記脂質の濃度が、0.1μMないし1mMの範囲である、請求項1ないし18のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記脂質の濃度が、1μMないし500μMの範囲である、請求項1ないし18のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記脂質の濃度が、5μMないし100μMの範囲である、請求項1ないし18のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記脂質の濃度が、10μMである、請求項18に記載の組成物。
- 前記凍結保護物質が、ポリヒドロキシ化合物である、請求項1ないし22のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記ポリヒドロキシ化合物が、糖である、請求項23に記載の組成物。
- 前記糖が、スクロース、トレハロース、デキストロース、ラクトース、マルトース、グルコース又はこれらの糖のいずれもの組合せである、請求項24に記載の組成物。
- 前記糖が、スクロースである、請求項25に記載の組成物。
- 前記凍結保護物質の濃度が、0.1ないし20重量/容量%の範囲である、請求項1ないし26のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記凍結保護物質の濃度が、1ないし10重量/容量%の範囲である、請求項1ないし26のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記スクロースの濃度が、8.5重量/容量%である、請求項26に記載の組成物。
- 前記組成物が、更に界面活性剤を含む、請求項1ないし29のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記界面活性剤が、非イオン性界面活性剤である、請求項30に記載の組成物。
- 前記非イオン性界面活性剤が、オキシエチレン基及びヒドロキシ基を含む分子である、請求項31に記載の組成物。
- 前記非イオン性界面活性剤が、ポリソルベート80又はポリエチレングリコール400である、請求項32に記載の組成物。
- 前記界面活性剤の濃度が、0.0001%ないし10容量/容量%の範囲である、請求項30ないし33のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記ポリソルベート80の濃度が、0.0001%ないし1容量/容量%の範囲である、請求項33に記載の組成物。
- 前記ポリソルベート80の濃度が、0.005容量/容量%である、請求項33に記載の組成物。
- 前記ポリエチレングリコール400の濃度が、0.01%ないし10容量/容量%の範囲である、請求項33に記載の組成物。
- 前記ポリエチレングリコール400の濃度が、0.5容量/容量%である、請求項33に記載の組成物。
- 前記ウイルスが、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、パポーバウイルス、オルトヘパドナウイルス、パルボウイルス、ビルナウイルス、レオウイルス、フラビウイルス、ピコルナウイルス、トガウイルス、フィロウイルス、パラミクソウイルス、ラブドウイルス、アレナウイルス、ブニヤウイルス、オルトミクソウイルス、及びレトロウイルスからなる群の一つ又はそれより多くから誘導されたウイルスである、請求項1ないし38のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記ウイルスが、ウイルスのアデノウイルス科から誘導される、請求項39に記載の組成物。
- 前記ウイルスが、ヒツジアタデノウイルス(atadenovirus)である、請求項40に記載の組成物。
- 前記ウイルスが、OAdV623又はOAdV623の誘導体である、請求項41に記載の組成物。
- 前記組成物中の前記ウイルスの濃度が、1×106ないし1×1014個のウイルス粒子/mlの範囲である、請求項1ないし42のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物中の前記ウイルスの濃度が、1×108ないし5×1012個のウイルス粒子/mlの範囲である、請求項1ないし42のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物のpHが、4ないし10の範囲である、請求項1ないし44のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物のpHが、6ないし8.5の範囲である、請求項1ないし44のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記ウイルスが、貯蔵に対して安定である、請求項1ないし46のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物が、−200℃ないし0℃で貯蔵される、請求項47に記載の組成物。
- 前記組成物が、−80℃ないし−20℃で貯蔵される、請求項47に記載の組成物。
- 前記組成物が、12ヶ月又はそれより長く貯蔵される、請求項1ないし49のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物が、3ヶ月又はそれより長く貯蔵される、請求項1ないし49のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物が、1週間又はそれより長く貯蔵される、請求項1ないし49のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物が、1日又はそれより長く貯蔵される、請求項1ないし49のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記ウイルスが、冷凍−解凍に対して安定である、請求項1ないし46のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記ウイルスの活性が、組成物が1回又はそれより多く冷凍−解凍された場合に、実質的に減少しない、請求項54に記載の組成物。
- ウイルスの保存のための組成物を製造する方法であって、ウイルス、脂質及び凍結保護物質を含む液体組成物を調製する工程を含む、前記方法。
- 前記脂質が、カチオン性脂質である、請求項56に記載の方法。
- 前記カチオン性脂質が、ポリカチオン性脂質である、請求項57に記載の方法。
- 前記脂質が、トリス−複合カチオン性脂質である、請求項57又は58のいずれか1項に記載の方法。
- 前記凍結保護物質が、ポリヒドロキシ化合物である、請求項56ないし61のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ポリヒドロキシ化合物が糖である、請求項62に記載の方法。
- 前記糖が、スクロース、トレハロース、デキストロース、ラクトース、マルトース、グルコース又はこれらの糖のいずれもの組合せである、請求項63に記載の方法。
- 前記組成物が、更に界面活性剤を含む、請求項55ないし64のいずれか1項に記載の方法。
- 前記界面活性剤が、非イオン性界面活性剤である、請求項65に記載の方法。
- 前記非イオン性界面活性剤が、オキシエチレン基及びヒドロキシ基を含む分子である、請求項66に記載の方法。
- 前記非イオン性界面活性剤が、ポリソルベート80又はポリエチレングリコール400である、請求項67に記載の方法。
- 前記ウイルスが、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、パポーバウイルス、オルトヘパドナウイルス、パルボウイルス、ビルナウイルス、レオウイルス、フラビウイルス、ピコルナウイルス、トガウイルス、フィロウイルス、パラミクソウイルス、ラブドウイルス、アレナウイルス、ブニャウイルス、オルトミクソウイルス、及びレトロウイルスからなる群の一つ又はそれより多くから誘導されたウイルスである、請求項56ないし69のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ウイルスが、ウイルスのアデノウイルス科から誘導される、請求項69に記載の方法。
- 前記ウイルスが、クロマトグラフィー又は遠心を含む方法によって精製される、請求項56ないし70のいずれか1項に記載の方法。
- 前記組成物が、ウイルス及び凍結保護物質を含む溶液を、脂質を含む溶液と混合することによって形成される、請求項56ないし71のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ウイルスが、貯蔵に対して安定である、請求項56ないし72のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ウイルスが、冷凍−解凍に対して安定である、請求項56ないし72のいずれか1項に記載の方法。
- ウイルスの保存のための組成物であって、ウイルス、トリス−複合カチオン性脂質、凍結保護物質及び非イオン性界面活性剤を含む、前記組成物。
- ウイルスの保存のための組成物であって、アデノウイルス、ポリカチオン性脂質、凍結保護剤、及びポリソルベート80又はポリエチレングリコール400のいずれか、或いは両方を含む、前記組成物。
- 前記組成物が冷凍された液体として貯蔵された場合、ウイルスが貯蔵に対して安定である、ウイルスの保存のための組成物であって、ウイルス、脂質及び凍結保護剤を含む、前記組成物。
- ウイルスが冷凍−解凍に対して安定であるウイルスの保存のための組成物であって、ウイルス、脂質及び凍結保護物質を含む、前記組成物。
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