JP2005503153A5

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Publication number: JP2005503153A5
Application number: JP2003523617A
Authority: JP
Filing date: 2002-08-27
Publication date: 2006-01-05

Claims

a) SEQ ID NO: 2、4、6、9、19、21、25、37、39、41、43、46、48、50、52又は59もしくはその相補鎖を含む、又はSEQ ID NO: 2、4、6、9、19、21、25、37、39、41、43、46、48、50、52又は59のいずれか1つの相補鎖と低ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズしかつαアミラーゼ、プルラナーゼ、αグルコシダーゼ、グルコース異性化酵素又はグルコアミラーゼ活性をもつポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む単離ポリヌクレオチド、又はb) SEQ ID NO: 10、13、14、15、16、18、20、24、26、27、28、29、30、33、34、35、36、38、40、42、44、45、47、49又は51もしくはその酵素活性断片を含むポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド。
第1ポリペプチドと第2ペプチドとを含む融合ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドであって、該第1ポリペプチドがαアミラーゼ、プルラナーゼ、αグルコシダーゼ、グルコース異性化酵素又はグルコアミラーゼ活性をもつことを特徴とする請求項1に記載の単離ポリヌクレオチド。
第2ペプチドはシグナル配列ペプチドを含む請求項2に記載の単離ポリヌクレオチド。
シグナル配列ペプチドは第1ポリペプチドをターゲットたる植物の液胞、小胞体、葉緑体、デンプン粒、種子又は細胞壁に導く請求項3に記載の単離ポリヌクレオチド。
シグナル配列はwaxy由来のN末端シグナル配列、γゼイン由来のN末端シグナル配列、デンプン結合ドメイン、又はC末端デンプン結合ドメインである請求項3に記載の単離ポリヌクレオチド。
a) SEQ ID NO: 2、4、6、9、19、21、25、37、39、41、43、46、48、50、52もしくは59又はその相補鎖を含む、又はSEQ ID NO: 2、4、6、9、19、21、25、37、39、41、43、46、48、50、52もしくは59のいずれか1つの相補鎖と低ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズしかつαアミラーゼ、プルラナーゼ、αグルコシダーゼ、グルコース異性化酵素又はグルコアミラーゼ活性をもつポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチド又はb) SEQ ID NO: 3、5、10、13、14、15、16、18、20、24、26、27、28、29、30、33、34、35、36、38、40、42、44、45、47、49もしくは51又はその酵素活性断片を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含んで成る発現カセット。
プロモーターに作動可能に連結された請求項6に記載の発現カセット。
プロモーターは誘導性プロモーター、組織特異的プロモーターまたは内乳特異的プロモーターである請求項7に記載の発現カセット。
内乳特異的プロモーターはトウモロコシγゼインプロモーター又はトウモロコシADP-gppプロモーターである請求項8に記載の発現カセット。
プロモーターはSEQ ID NO: 11又はSEQ ID NO: 12を含む請求項9に記載の発現カセット。
ポリヌクレオチドはプロモーターに対してセンス方向に配向している請求項6に記載の発現カセット。
a)のポリヌクレオチドは該ポリヌクレオチドによってコードされたポリペプチドに作動可能に連結されたシグナル配列をさらにコードする請求項6に記載の発現カセット。
シグナル配列は作動可能に連結されたポリペプチドをそのターゲットたる植物の液胞、小胞体、葉緑体、デンプン粒、種子又は細胞壁へと導く請求項12に記載の発現カセット。
シグナル配列はwaxy由来のN末端シグナル配列、γゼイン由来のN末端シグナル配列又はデンプン結合ドメインである請求項13に記載の発現カセット。
b)のポリヌクレオチドは組織特異的プロモーターに作動可能に連結されている請求項6に記載の発現カセット。
組織特異的プロモーターはZea mays γゼインプロモーター又はZea mays ADP-gppプロモーターである請求項15に記載の発現カセット。
請求項6に記載の発現カセットを含むベクター。
請求項6に記載の発現カセットを含む細胞。
アグロバクテリウム(Agrobacterium)、単子葉植物細胞、双子葉植物細胞、ユリ綱植物(Liliopsida)細胞、キビ亜科植物(Panicoideae)細胞、トウモロコシ(maize)細胞、及び禾穀類植物(cereal)細胞からなる群より選択される請求項18に記載の細胞。
トウモロコシ細胞である請求項19に記載の細胞。
請求項17に記載のベクターで安定的に形質転換した植物。
a)SEQ ID NO: 1、10、13、14、15、16、33もしくは35のいずれのアミノ酸配列をもつ又はSEQ ID NO: 2もしくは9のいずれかを含むポリヌクレオチドでコードされたαアミラーゼ;
b)SEQ ID NO: 24もしくは34のいずれのアミノ酸配列をもつ又はSEQ ID NO: 4もしくは25のいずれかを含むポリヌクレオチドでコードされたプルラナーゼ;
c)SEQ ID NO: 26もしくは27のいずれのアミノ酸配列をもつ又はSEQ ID NO: 6を含むポリヌクレオチドでコードされたαグルコシダーゼ;
d) SEQ ID NO: 18、20、28、29、30、38、40、42もしくは44のいずれのアミノ酸配列をもつ又はSEQ ID NO: 19、21、37、39、41もしくは43のいずれかを含むポリヌクレオチドでコードされたグルコース異性化酵素;あるいは
e)SEQ ID NO: 45、47もしくは49のいずれのアミノ酸配列をもつ又はSEQ ID NO: 46、48、50もしくは59のいずれかを含むポリヌクレオチドでコードされたグルコースアミラーゼ；
を含む、ベクターで安定的に形質転換した植物。
αアミラーゼ、プルラナーゼ、αグルコシダーゼ、グルコース異性化酵素又はグルコースアミラーゼは超好熱性である請求項22に記載の植物。
請求項21又は22に記載の植物に由来する種子、果実又は穀粒。
1以上の加工用(processing)酵素をコードするプロモーター配列に作動可能に連結された組換えポリヌクレオチドでゲノムを補強した形質転換植物であって、該ポリヌクレオチドの配列が該植物中での発現のために最適化されていることを特徴とする形質転換植物。
単子葉植物、双子葉植物、禾穀類植物又は商業栽培植物である請求項25に記載の植物。
単子葉植物はトウモロコシである請求項26に記載の植物。
加工用酵素がαアミラーゼ、グルコアミラーゼ、グルコース異性化酵素、グルカナーゼ、βアミラーゼ、αグルコシダーゼ、イソアミラーゼ、プルラナーゼ、ネオプルラナーゼ、イソプルラナーゼ、アミロプルラナーゼ、セルラーゼ、エキソ-1,4-βセロビオヒドロラーゼ、エキソ-1,3-β-D-グルカナーゼ、βグルコシダーゼ、エンドグルカナーゼ、Lアラビナーゼ、αアラビノシダーゼ、ガラクタナーゼ、ガラクトシダーゼ、マンナナーゼ、マンノシダーゼ、キシラナーゼ、キシロシダーゼ、プロテアーゼ、グルカナーゼ、キシラナーゼ、エステラーゼ、フィターゼ及びリパーゼからなる群より選択される請求項25に記載の植物。
加工用酵素はαアミラーゼ、グルコアミラーゼ、グルコース異性化酵素、βアミラーゼ、αグルコシダーゼ、イソアミラーゼ、プルラナーゼ、ネオプルラナーゼ、イソプルラナーゼ及びアミロプルラナーゼからなる群より選択されるデンプン加工酵素である請求項28に記載の植物。
酵素はαアミラーゼ、グルコアミラーゼ、グルコース異性化酵素、グルコース異性化酵素、αグルコシダーゼ及びプルラナーゼより選択される請求項29に記載の植物。
酵素はプロテアーゼ、グルカナーゼ、キシラナーゼ、エステラーゼ、フィターゼ及びリパーゼからなる群より選択される非デンプン分解酵素である請求項28に記載の植物。
酵素は超好熱性である請求項29又は31に記載の植物。
酵素は植物の液胞、小胞体、葉緑体、デンプン粒、種子又は細胞壁に蓄積する請求項25に記載の植物。
非超好熱性酵素を含む第2の組換えポリヌクレオチドで植物ゲノムをさらに補強することを特徴とする請求項25に記載の植物。
プロモーターとシグナル配列とに作動可能に連結されたSEQ ID NO: 2、9又は52をもつ組換えポリヌクレオチドでゲノムを補強した形質転換植物。
請求項25又は35に記載の形質転換植物の産物。
種子、果実又は穀粒である請求項36に記載の産物。
加工用酵素、デンプン又は糖である請求項36に記載の産物。
プロテアーゼ、グルカナーゼ又はエステラーゼである1以上の加工用酵素を含むデンプン組成物。
酵素は超好熱性である請求項39に記載のデンプン組成物。
αアミラーゼ、プルラナーゼ、αグルコシダーゼ、グルコアミラーゼ又はグルコース異性化酵素である1以上の加工用酵素を含む穀粒。
酵素は好熱性である請求項41に記載の穀粒。
デンプン粒を調製する方法であって、
a) 1以上の非デンプン加工酵素を含む穀粒を、該1以上の酵素を活性化するような条件下で処理してデンプン粒と非デンプン分解生成物とを含む混合物を得るステップであって、該穀粒が該1以上の酵素をコードする発現カセットでゲノムを補強した形質転換植物に由来することを特徴とするステップ; 及び
b) 該混合物からデンプン粒を分離するステップ
を含む方法。
酵素はプロテアーゼ、グルカナーゼ、キシラナーゼ、フィターゼ又はエステラーゼである請求項43に記載の方法。
酵素は超好熱性である請求項44項に記載の方法。
穀粒は引き割り穀粒である請求項43に記載の方法。
穀粒を低水分条件下、高水分条件下又は亜硫酸で処理する請求項43に記載の方法。
混合物から非デンプン生成物を分離するステップをさらに含む請求項43に記載の方法。
ハイパースイートコーンを生産する方法であって、1以上の非デンプン分解又はデンプン異性化酵素をコードする発現カセットでゲノムを補強し、該発現カセットが内乳中で発現するようにした形質転換トウモロコシ又はその部分を、該1以上の酵素を活性化するような条件下で処理し、もってトウモロコシ中の多糖を糖に変換させてハイパースイートコーンを産み出すようにするステップを含む方法。
発現カセットは酵素をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む請求項49に記載の方法。
プロモーターは構成的プロモーター、種子特異的プロモーター又は内乳特異的プロモーターである請求項50に記載の方法。
酵素は超好熱性であるである請求項50に記載の方法。
酵素はαアミラーゼであるである請求項52に記載の方法。
発現カセットは1以上の酵素に作動可能に連結されたシグナル配列をコードするポリヌクレオチドをさらに含む請求項49に記載の方法。
シグナル配列は超好熱性酵素をアポプラスト又は小胞体に導く請求項54に記載の方法。
超好熱性αアミラーゼはSEQ ID NO: 10、13、14、15、16、33又は35のいずれかのアミノ酸配列、又はαアミラーゼ活性をもつその酵素活性断片を含む52に記載の方法。
発現カセットはSEQ ID NO: 2、9又は52のいずれか、又はその相補鎖、又はSEQ ID NO: 2、9又は52のいずれかと低ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズしかつαアミラーゼ活性をもつポリペプチドをコードするポリヌクレオチドより選択されるポリヌクレオチドを含む請求項49に記載の方法。
加水分解デンプン生成物の溶液を調製する方法であって、
a)デンプン粒と1以上の加工用酵素とを含む植物部分を、該1以上の酵素を活性化するような条件下で処理し、もって該デンプン粒を加工して加水分解デンプン生成物を含む水溶液を形成させるようにするステップであって、該植物部分が該1以上のデンプン加工酵素をコードする発現カセットでゲノムを補強した形質転換植物に由来することを特徴とするステップ; 及び
b)該加水分解デンプン生成物を含む水溶液を回収するステップ
を含む方法。
加水分解デンプン生成物はデキストリン、マルトオリゴ糖、糖及び/又はそれらの混合物を含む請求項58に記載の方法。
酵素はαアミラーゼ、αグルコシダーゼ、グルコアミラーゼ、プルラナーゼ、アミロプルラナーゼ、グルコース異性化酵素、βアミラーゼ、イソアミラーゼ、ネオプルラナーゼ、イソプルラナーゼ、又はそれらの任意の組み合わせである請求項58に記載の方法。
1以上の加工用酵素は超好熱性である請求項58又は60に記載の方法。
非超好熱性のデンプン加工酵素をコードする発現カセットで植物部分のゲノムをさらに補強する請求項58に記載の方法。
非超好熱性のデンプン加工酵素はアミラーゼ、グルコアミラーゼ、αグルコシダーゼ、プルラナーゼ、グルコース異性化酵素又はそれらの組み合わせからなる群より選択される請求項62に記載の方法。
1以上の加工用酵素は内乳中で発現する請求項58に記載の方法。
植物部分は穀粒である又はトウモロコシ、コムギ、オオムギ、ライムギ、オートムギ、サトウキビもしくはイネに由来する請求項58に記載の方法。
1以上の加工用酵素はプロモーターに、また該酵素をターゲットのデンプン粒又は小胞体へと、もしくは細胞壁へと導くシグナル配列に、作動可能に連結される請求項58に記載の方法。
加水分解デンプン生成物を単離する又は発酵させるステップをさらに含む請求項58に記載の方法。
超好熱性αアミラーゼはSEQ ID NO: 1、10、13、14、15、16、33又は35のいずれかのアミノ酸配列もしくはαアミラーゼ活性をもつその活性断片を含む請求項61に記載の方法。
発現カセットはSEQ ID NO: 2、9、46又は52のいずれかのポリヌクレオチド、又はその相補鎖、又はSEQ ID NO: 2、9、46又は52のいずれかと低ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズしかつαアミラーゼ活性をもつポリペプチドをコードするポリヌクレオチドより選択されるポリヌクレオチドを含む請求項61に記載の方法。
非超好熱性のデンプン加工酵素で植物部分を処理するステップをさらに含む請求項60に記載の方法。
植物細胞中に存在する1以上のデンプン加工酵素を含む形質転換植物部分であって、該1以上のデンプン加工酵素をコードする発現カセットでゲノムを補強した形質転換植物に由来することを特徴とする植物部分。
酵素はαアミラーゼ、グルコアミラーゼ、グルコース異性化酵素、βアミラーゼ、αグルコシダーゼ、イソアミラーゼ、プルラナーゼ、ネオプルラナーゼ、イソプルラナーゼ及びアミロプルラナーゼからなる群より選択されるデンプン加工酵素である請求項71に記載の植物部分。
酵素は超好熱性である請求項71に記載の植物部分。
植物はトウモロコシである請求項71に記載の植物部分。
植物細胞壁又は細胞中に存在する1以上の非デンプン加工酵素を含む形質転換植物部分であって、該1以上の非デンプン加工酵素又は1以上の非デンプン多糖加工酵素をコードする発現カセットでゲノムを補強した形質転換植物に由来することを特徴とする植物部分。
酵素は超好熱性である請求項75に記載の植物部分。
非デンプン加工酵素はプロテアーゼ、グルカナーゼ、キシラナーゼ、エステラーゼ、フィターゼ及びリパーゼからなる群より選択される請求項75に記載の植物部分。
穂、種子、果実、穀粒、茎、籾殻又はバガスである請求項71又は75に記載の植物部分。
a)SEQ ID NO: 1、10、13、14、15、16、33もしくは35のいずれかのアミノ酸配列をもつ又はSEQ ID NO: 2、9、46もしくは52のいずれかを含むポリヌクレオチドでコードされたαアミラーゼ;
b)SEQ ID NO: 5、26もしくは27のいずれかのアミノ酸配列をもつ又はSEQ ID NO: 6を含むポリヌクレオチドでコードされたαグルコシダーゼ;
c)SEQ ID NO: 28、29、30、38、40、42もしくは44のいずれかのアミノ酸配列をもつ又はSEQ ID NO: 19、21、37、39、41もしくは43のいずれかを含むポリヌクレオチドでコードされたグルコース異性化酵素;
d) SEQ ID NO: 45、47もしくは49のいずれかのアミノ酸配列をもつ又はSEQ ID NO: 46、48、50もしくは59のいずれかを含むポリヌクレオチドでコードされたグルコアミラーゼ;あるいは
e)SEQ ID NO: 4もしくは25のいずれかを含むポリヌクレオチドでコードされたプルラナーゼ;
を含む形質転換植物部分。
請求項71又は79に記載の形質転換植物部分中のデンプンを変換する方法であって、該植物部分に含まれるデンプン加工酵素を活性化するステップを含む方法。
細胞壁又は植物部分の細胞において1以上の非デンプン加工酵素を含む形質転換植物部分からオリゴ糖及び／又は糖を製造するための方法であって、
a)前記植物部分を、該1以上の酵素を活性化するような条件下で処理し、もって非デンプン多糖を消化してオリゴ糖及び/又は糖を含む水溶液を形成させるようにするステップであって、該植物部分が該1以上の非デンプン多糖加工酵素をコードする発現カセットでゲノムを補強した形質転換植物に由来することを特徴とするステップ; 及び
b)該オリゴ糖及び/又は糖を含む水溶液を回収するステップ
を含む方法。
非デンプン多糖加工酵素は超好熱性である請求項81に記載の方法。
1以上の加工用酵素を含む形質転換種子からアミノ酸及び脂肪酸を製造する方法であって、
a)1以上のプロテアーゼ又はリパーゼを含む形質転換種子を、該1以上の酵素を活性化するような条件下で処理し、もってアミノ酸と脂肪酸とを含む水性混合物を生じさせるようにするステップであって、該種子が該1以上の酵素をコードする発現カセットでゲノムを補強した形質転換植物に由来することを特徴とするステップ; 及び
b)該水性混合物を回収するステップ
を含む方法。
アミノ酸、脂肪酸又はその両方が単離される請求項83に記載の方法。
1以上のプロテアーゼ又はリパーゼは超好熱性である請求項83に記載の方法。
エタノール調製方法であって、
a)1以上の多糖加工酵素又は非デンプン加工酵素を含む植物部分を、該1以上の酵素を活性化するような条件下で処理し、もって多糖又は非デンプン多糖を消化してオリゴ糖又は発酵性糖を形成させるようにするステップであって、該植物部分が該1以上の多糖加工酵素をコードする発現カセットでゲノムを補強した形質転換植物に由来することを特徴とするステップ; 及び
b)該発酵性糖を該発酵性糖又はオリゴ糖のエタノールへの変換を促進するような条件下でインキュベートするステップ
を含む方法。
植物部分は穀粒、果実、種子、茎、木、野菜又は根である又はオートムギ、オオムギ、コムギ、液果、ブドウ、ライムギ、トウモロコシ、イネ、ジャガイモ、テンサイ、サトウキビ、パイナップル、草及び樹木からなる群より選択される植物に由来する請求項86に記載の方法。
多糖加工酵素はαアミラーゼ、グルコアミラーゼ、αグルコシダーゼ、グルコース異性化酵素、プルラナーゼ又はそれらの組み合わせである請求項86に記載の方法。
多糖加工酵素は超好熱性である請求項86又は88に記載の方法。
多糖加工酵素は中温性である請求項86に記載の方法。
多糖加工酵素は超好熱性である請求項86に記載の方法。
エタノール調製方法であって、
a) αアミラーゼ、グルコアミラーゼ、αグルコシダーゼ、グルコース異性化酵素、プルラナーゼ又はそれらの組み合わせからなる群より選択される1以上の酵素を含む植物部分を、該1以上の酵素を活性化しもって多糖を消化して発酵性糖を形成させるような長さの時間及び条件の下で熱により処理するステップであって、該植物部分が該1以上の酵素をコードする発現カセットでゲノムを補強した形質転換植物に由来することを特徴とするステップ; 及び
b)該発酵性糖を該発酵性糖のエタノールへの変換を促進するような条件下でインキュベートするステップ
を含む方法。
1以上の酵素は超好熱性である請求項92に記載の方法。
αアミラーゼはSEQ ID NO: 1、5、10、13、14、15、16、24、26、27、28、29、30、33、34、35、38、40、42、44もしくは45のいずれかのアミノ酸配列をもつか又はSEQ ID NO: 2、4、6、9、19、21、25、37、39、41、43、46、48もしくは50のいずれかを含むポリヌクレオチドでコードされる請求項92に記載の方法。
エタノール調製方法であって、
a) αアミラーゼ、グルコアミラーゼ、αグルコシダーゼ、グルコース異性化酵素、プルラナーゼ又はそれらの組み合わせからなる群より選択される1以上の酵素を含む植物部分を、該1以上の酵素を活性化するような条件下で処理し、もって多糖を消化して発酵性糖を形成させるようにするステップであって、該植物部分が該1以上の酵素をコードする発現カセットでゲノムを補強した形質転換植物に由来することを特徴とするステップ; 及び
b)該発酵性糖を該発酵性糖のエタノールへの変換を促進するような条件下でインキュベートするステップ
を含む方法。
1以上の酵素は超好熱性である請求項95に記載の方法。
追加の甘味料を添加することなく甘味性増強デンプン質食品を生産する方法であって、
a) 1以上のデンプン加工酵素を含む植物部分を、該1以上の酵素を活性化するような条件下で処理し、もって該植物部分中のデンプン粒を糖へと加工して甘味性増強生成物を形成させるステップであって、該植物部分が該1以上の酵素をコードする発現カセットでゲノムを補強した形質転換植物に由来することを特徴とするステップ; 及び
b)該甘味性増強生成物をデンプン質食品へと加工するステップ
を含む方法。
デンプン質食品は甘味性増強生成物と水から形成される、又は麦芽、香料、ビタミン、ミネラル、色素剤又はそれらの任意の組み合わせを含む請求項97に記載の方法。
1以上の酵素は超好熱性である請求項97に記載の方法。
酵素はαアミラーゼ、αグルコシダーゼ、グルコアミラーゼ、プルラナーゼ、グルコース異性化酵素又はそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される請求項97に記載の方法。
植物はダイズ、ライムギ、オートムギ、オオムギ、コムギ、トウモロコシ、イネ及びサトウキビからなる群より選択される請求項97に記載の方法。
デンプン質食品はシリアル食品、朝食用加工食品、インスタント食品又は焼成食品である請求項97に記載の方法。
加工は焼く、煮る・ゆでる、加熱する、蒸す、放電又はそれらの任意の組み合わせである請求項97に記載の方法。
甘味料を添加しない含デンプン製品の甘味性増強方法であって、
a) 1以上のデンプン加工酵素を含むデンプンを、該1以上の酵素を活性化するような条件下で処理し、もって該デンプンを消化して糖を形成し甘味性増強デンプンを形成させるようにするステップであって、該デンプンが該1以上の酵素をコードする発現カセットでゲノムを補強した形質転換植物に由来することを特徴とするステップ;及び
b)該甘味性増強デンプンを製品に加えて含甘味性増強デンプン製品を生産するステップ
を含む方法。
形質転換植物はトウモロコシ、ダイズ、ライムギ、オートムギ、オオムギ、コムギ、イネ及びサトウキビからなる群より選択される請求項104に記載の方法。
1以上の酵素は超好熱性である請求項104に記載の方法。
1以上の酵素はαアミラーゼ、αグルコシダーゼ、グルコアミラーゼ、プルラナーゼ、グルコース異性化酵素又はそれらの任意の組み合わせである請求項104に記載の方法。
含多糖果実又は野菜の甘味性増強方法であって、1以上の多糖加工酵素を含む果実又は野菜を、該1以上の酵素を活性化するような条件下で処理し、もって果実又は野菜中の多糖を加工し糖を形成させて甘味性増強果実又は野菜を生成させるステップであって、該果実又は野菜が該1以上の多糖加工酵素をコードする発現カセットでゲノムを補強した形質転換植物に由来することを特徴とするステップを含む方法。
果実又は野菜はジャガイモ、トマト、バナナ、スカッシュ、エンドウマメ類及びインゲンマメ類からなる群より選択される請求項108に記載の方法。
1以上の酵素は超好熱性である請求項108に記載の方法。
酵素はαアミラーゼ、αグルコシダーゼ、グルコアミラーゼ、プルラナーゼ、グルコース異性化酵素又はそれらの任意の組み合わせである請求項108に記載の方法。
請求項71に記載の植物部分に由来するデンプン粒を、1以上の酵素を活性化するような条件下で処理し、もって糖を含む水溶液を形成させるようにするステップを含む、糖を含む水溶液の調製方法。
デンプン派生品回収前のウェットミリング又はドライミリングを伴わない、穀粒からデンプン派生品を調製する方法であって、
a)デンプン粒と1以上のデンプン加工酵素とを含む植物部分を、該1以上の酵素を活性化するような条件下で処理し、もってデンプン粒を加工してデキストリン又は糖を含む水溶液を形成させるようにするステップであって、該植物部分が該1以上のデンプン加工酵素をコードする発現カセットでゲノムを補強した形質転換植物に由来することを特徴とするステップ; 及び
b)該デンプン派生品を含む該水溶液を回収するステップ
を含む方法。
1以上のデンプン加工酵素は超好熱性である請求項113に記載の方法。
αアミラーゼ、グルコアミラーゼ、グルコース異性化酵素、αグルコシダーゼ及びプルラナーゼを単離する方法であって、請求項25に記載の形質転換植物を栽培するステップ及び該植物からαアミラーゼ、グルコアミラーゼ、グルコース異性化酵素、αグルコシダーゼ及びプルラナーゼを単離するステップを含む方法。
αアミラーゼ、グルコアミラーゼ、グルコース異性化酵素、αグルコシダーゼ及びプルラナーゼは超好熱性である請求項115に記載の方法。
マルトデキストリンの調製方法であって、
a) 形質転換穀粒を水と混合するステップ
b) 該混合物を加熱するステップ
c) b)で生成したデキストリンシロップから固形物を分離するステップ及び
d)マルトデキストリンを回収するステップ
を含む方法。
形質転換穀粒は1以上のデンプン加工酵素を含む請求項117に記載の方法。
デンプン加工酵素はαアミラーゼ、グルコアミラーゼ、αグルコシダーゼ及びグルコース異性化酵素である請求項118に記載の方法。
1以上のデンプン加工酵素は超好熱性である請求項119に記載の方法。
デンプン派生品回収前の穀粒の機械的破壊を伴わない、穀粒からデキストリン又は糖を調製する方法であって、
a)デンプン粒と1以上のデンプン加工酵素とを含む植物部分を、該1以上の酵素を活性化するような条件下で処理し、もってデンプン粒を加工してデキストリン又は糖を含む水溶液を形成させるようにするステップであって、該植物部分が該1以上のデンプン加工酵素をコードする発現カセットでゲノムを補強した形質転換植物に由来することを特徴とするステップ; 及び
b)デキストリン及び/又は糖を含む該水溶液を回収するステップ
を含む方法。
デンプン加工酵素はαアミラーゼ、グルコアミラーゼ、αグルコシダーゼ及びグルコース異性化酵素である請求項121に記載の方法。
発酵性糖の生産方法であって、
a)デンプン粒と1以上のデンプン加工酵素とを含む植物部分を、該1以上の酵素を活性化するような条件下で処理し、もってデンプン粒を加工してデキストリン又は糖を含む水溶液を形成させるようにするステップであって、該植物部分が該1以上のデンプン加工酵素をコードする発現カセットでゲノムを補強した形質転換植物に由来することを特徴とするステップ; 及び
b)該発酵性糖を含む該水溶液を回収するステップ
を含む方法。
デンプン加工酵素はαアミラーゼ、グルコアミラーゼ、αグルコシダーゼ及びグルコース異性化酵素である請求項123に記載の方法。
ベクターで安定的に形質転換した、超好熱性αアミラーゼを含むトウモロコシ植物体。
SEQ ID NO:1又はSEQ ID NO: 51と60%超の同一性を有するαアミラーゼ・コード化ポリヌクレオチド配列を含むベクターで安定的に形質転換したトウモロコシ植物体。