JP2003534388A - エチレンジシステイン（ｅｃ）−薬物結合体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、一般的意味として、エチレンジシステイン（ＥＣ）でキレート化された^９９ｍＴｃを利用する新しい標識ストラテジーを提供する。ＥＣは、種々のリガンドと結合体化し、そして組織特異的疾患のための画像化剤として使用するための^９９ｍＴｃとキレート化する。本発明の薬物結合体はまた、診断ツールとして、または哺乳動物の身体内の特定の部位に医薬を送達するためのツールとして使用され得る。組織特異的疾患の画像化において使用するためのキットもまた、提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の背景） 政府は、本発明の権利を所有しない。

【０００２】 （１．発明の分野） 本発明は、一般に、標識、放射画像化（ｒａｄｉｏｉｍａｇｉｎｇ）および化
学合成の分野に関する。より詳細には、本発明は、標的化リガンドを放射画像化
するための戦略に関する。本発明は、さらに、腫瘍の画像化および組織特異的障
害の画像化において、これらの放射性標識したリガンドを使用する方法に関する
。

【０００３】 （２．関連技術の説明） シンチグラフ腫瘍画像化の改善は、さらなる腫瘍特異的放射性医薬品の開発に
よって、広範囲にわたって決定される。より高い腫瘍特異性に起因して、放射性
標識したリガンドおよび放射性標識した抗体は、腫瘍のシンチグラグ検出の新し
い時代を開き、そして広範囲の前臨床試験の開発および評価を受けている（Ｍａ
ｔｈｉａｓら、１９９６、１９９７ａ、１９９７ｂ）。放射性核種画像化様式（
陽子射出放出断層撮影、ＰＥＴ；単一光子放射型コンピュータ断層撮影、ＳＰＥ
ＣＴ）は、放射性核種標識された放射性トレーサーの位置および密度をマッピン
グする診断用断層画像化技術である。ＣＴおよびＭＲＩは、腫瘍の位置および範
囲に関するかなりの解剖的な情報を提供するが、これらの画像化様式は、浮腫、
放射線壊死、グレーディング（ｇｒａｄｉｎｇ）または神経膠症由来の侵襲性損
傷を十分に区別し得ない。ＰＥＴおよびＳＰＥＣＴは、代謝活性を測定すること
によって、腫瘍を局在化および特徴付けするために使用され得る。

【０００４】 新しい腫瘍低酸素剤の開発は、一次性損傷および転移性損傷を検出するため、
ならびに放射線応答性および再発までの時間を予測するために、臨床的に所望さ
れている。現代の画像化様式のどれも、低酸素症を正確に測定しない。なぜなら
ば、この腫瘍低酸素症の診断は、病理学的試験を必要とするからである。処置さ
れる各腫瘍において、少なくとも低酸素症のベースラインを知ることなく、低酸
素腫瘍のための治療の成果を予測することは、しばしば困難である。Ｅｐｐｅｎ
ｄｏｒｆポーラログラフ酸素微小電極は、腫瘍中の酸素電圧を測定し得るが、こ
の技術は、侵襲性であり、かつ熟練した操作者を必要とする。さらに、この技術
は、アクセス可能な腫瘍（例えば、頭部および首（頚部））でのみ使用され得、
そして複数の読み取りが必要とされる。従って、腫瘍低酸素症を測定するための
正確かつ容易な方法は、患者選択のために有用である。しかし、正常な組織に対
する腫瘍の取込み比は、使用される放射性医薬品に依存して変化する。従って、
新しい放射性医薬品を臨床的な実施に導入する場合に、低酸素症の標準的なＥｐ
ｐｅｎｄｏｒｆ金電極測定を用いて、正常組織に対する腫瘍の取込み比を補正す
ることが合理的である。

【０００５】 ［^１８Ｆ］ＦＭＩＳＯは、頭部および頚部の腫瘍、心筋梗塞、炎症および脳虚
血を診断するために使用されている（Ｍａｒｔｉｎら、１９９２；Ｙｅｈら、１
９９４；Ｙｅｔら、１９９６；Ｌｉｕら、１９９４）。正常組織に対する腫瘍の
取込み比は、腫瘍低酸素症を評価するためのベースラインとして使用された（Ｙ
ｅｈら、１９９６）。［^１８Ｆ］ＦＭＩＳＯを使用する腫瘍低酸素症は明確に実
証されたが、新しい画像化剤を臨床的な実施に導入することは、容易に利用可能
であることおよび同位体の費用などのいくつかの他の因子に依存する。［^１８Ｆ
］ＦＤＧを使用する腫瘍代謝性画像化は明確に実証されたが、分子画像化剤を臨
床的な実施に導入することは、容易に利用可能であることおよび同位体の費用な
どのいくつかの他の因子に依存する。［^１８Ｆ］フルオロデオキシグルコース（
ＦＤＧ）は、腫瘍、心筋梗塞、および神経学的疾患を診断するために使用されて
いる。さらに、ＰＥＴ放射性合成は、ポジトロン同位体の半減期が短いので、迅
速でなければならない。^１８Ｆ化学もまた、複雑である。この^１８Ｆ化学は、異
なる分子において再現不可能である。従って、種々の薬物に結合体化し得るキレ
ート剤を開発することが、理想的である。好ましい同位体は、低い費用（^１８Ｆ
の＄５０／ｍＣｉに対して＄０．２１／ｍＣｉ）および低いエネルギー（^１８Ｆ
の５７１Ｋｅｖに対して１４０Ｋｅｖ）に起因して^９９ｍＴｃである。^９９ｍＴ
ｃは、^９９Ｍｏ発生器から容易に得られる。望ましい物理学的特性およびかなり
低い値段に起因して、^９９ｍＴｃは、放射性医薬品を標識するのに好ましい。

【０００６】 いくつかの化合物は、窒素キレート剤および硫黄キレート剤を使用して、^{９９ ｍ} Ｔｃで標識されている（Ｂｌｏｎｄｅａｕら、１９６７；Ｄａｖｉｓｏｎら、
１９８０）。ビス−アミノエタンチオール四座配位子リガンド（これはまた、ジ
アミノジチオール化合物とも呼ばれる）は、２個のチオール硫酸原子および２個
のアミン窒素原子に対するオキソテクネチウム基の効率的な結合に基づいて、非
常に安定なＴｃ（Ｖ）Ｏ錯体を形成することで公知である。^９９ｍＴｃ−Ｌ，Ｌ
−エチレンジシステイン（^９９ｍＴｃ−ＥＣ）は、Ｎ_２Ｓ_２キレートの最近、か
つ有用な例である。ＥＣは、放射性化学的に高い純度および安定性を有する、^{９ ９ｍ} Ｔｃで容易におよび効率的に標識され得、そして活性な管状輸送体によって
腎臓を介して排出される（Ｓｕｒｍａら、１９９４；Ｖａｎ Ｎｅｒｏｍら、１
９９０、１９９３；Ｖｅｒｂｒｕｇｇｅｎら、１９９０、１９９２）。他のＥＣ
の適用は、ＰＥＴ用のガリウム−６８（ポジトロン放出、ｔ１／２＝６８分）お
よびガドリニウム、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）用の鉄もしくはマンガンでキレー
ト化される。^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシンおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキ
シグルコースが開発され、そして腫瘍の特徴付けにおけるそれらの潜在的な使用
が評価された。

【０００７】 （発明の要旨） 本発明は、画像化用に組織を標的化するための新しい放射性標識の戦略を提供
することによって、先行技術のこれらの欠点および他の欠点を克服する。本発明
は、放射性標識した組織特異的リガンド、ならびにこの放射性標識したリガンド
を作製するための方法および組織特異的疾患を画像化するためにこの放射性標識
したリガンドを使用するための方法を提供する。

【０００８】 本発明は、組織特異的疾患画像化のための組成物を提供する。本発明のこの画
像化組成物は、一般に、エチレンジシステインおよび酸アーム（ａｃｉｄ ａｒ
ｍ）の一方または両方上のエチレンジシステインに結合体化された組織特異的リ
ガンドでキレート化された放射性核種標識を含む。このエチレンジシステインは
、放射性核種標識を有するＮ_２Ｓ_２キレートを形成する。当然、このキレート化
した化合物は、放射性核種とキレート化号物との間にイオン結合を含む。用語「
ＥＣ−組織特異的リガンド結合体」、「ＥＣ−誘導体」および「ＥＣ−薬物結合
体」は、標識されていないエチレンジシステイン−組織特異的リガンド化合物を
いうために、本明細書中で交換可能に使用される。本明細書中で使用される場合
、用語「結合体」は、共有結合した化合物をいう。

【０００９】 エチレンジシステインは、ビス−アミノエタンチオール（ＢＡＴ）四座配位子
である（これはまた、ジアミノジチオール（ＤＡＤＴ）化合物としても公知であ
る）。このような化合物は、２個のチオール硫酸原子および２個のアミン窒素原
子に対するオキソテクネチウム基の効率的な結合に基づいて、非常に安定なＴｃ
（Ｖ）Ｏ錯体を形成することで公知である。この^９９ｍＴｃ標識化ジエチルエス
テル（^９９ｍＴｃ−Ｌ，Ｌ−ＥＣＤ）は、脳内物質（ｂｒａｉｎ ａｇｅｎｔ）
として公知である。^９９ｍＴｃ−Ｌ，Ｌ−エチレンジシステイン（^９９ｍＴｃ−
Ｌ，Ｌ−ＥＣ）は、最も極性のある代謝物であり、尿中に迅速かつ効率的に排出
されることが発見された。従って、^９９ｍＴｃ−Ｌ，Ｌ−ＥＣは、腎機能剤とし
て使用されてきた（Ｖｅｒｂｒｕｇｇｅｎら、１９９２）。

【００１０】 組織特異的リガンドは、哺乳動物または患者の体内に導入された場合、組織の
特定の型に特異的に結合する化合物である。本発明の組成物は、実質的に任意の
公知の組織特異的化合物を含み得ることが、想定される。好ましくは、本発明と
組み合わせて使用される組織特異的リガンドには、抗癌剤、ＤＮＡトポイソメラ
ーゼインヒビター、抗代謝剤、腫瘍マーカー、ホレート（ｆｏｌａｔｅ）レセプ
ター標的化リガンド、腫瘍アポトーシス細胞標的化リガンド、腫瘍低酸素症標的
化リガンド、ＤＮＡインターカレーター（ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｏｒ）、レセプ
ターマーカー、ペプチド、ヌクレオチド、器官特異的リガンド、抗菌剤（例えば
、抗生物質もしくは抗真菌剤）、グルタメートペンタペプチド、またはグルコー
スを模倣する薬剤がある。このグルコースを模倣する薬剤はまた、「糖（ｓｕｇ
ａｒ）」とも呼ばれ得る。

【００１１】 好ましい抗癌剤としては、メトトレキセート、ドキソルビシン、タモキシフェ
ン、パクリタキセル、トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、ＬＨＲＨ、マイトマ
イシンＣ、エトポシド、トムデックス（ｔｏｍｕｄｅｘ）、ポドフィロトキシン
、ミトザントロン、カプトセシン（ｃａｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、コルヒチン、エ
ンドスタチン（ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）、フルダラビンおよびゲムシタビンが挙
げられる。好ましい腫瘍マーカーとしては、ＰＳＡ、ＥＲ、ＰＲ、ＡＦＰ、ＣＡ
−１２５、ＣＡ−１９９、ＣＥＡ、インターフェロン、ＢＲＣＡ１、シトキサン
（ｃｙｔｏｘａｎ）、ｐ５３、ＶＥＧＦ、インテグリン、エンドスタチン、ＨＥ
Ｒ−２／ｎｅｕ、アンチセンスマーカーまたはモノクローナル抗体が挙げられる
。任意の他の公知の腫瘍マーカーまたは任意のモノクローナル抗体が本発明と組
み合わせた使用に効果的であることを想定する。好ましいホレートレセプター標
的化リガンドとしては、ホレート、メトトレキセートおよびトムデクスが挙げら
れる。好ましい腫瘍アポトーシス細胞標的化リガンドまたは腫瘍低酸素症標的化
リガンドとしては、アネキシンＶ、コルヒチン、ニトロイミダゾール、マイトマ
イシンまたはメトロニダゾルが挙げられる。好ましい抗菌剤としては、グラム陽
性細菌およびグラム陰性細菌に対して、アンピシリン、アモキシリン、ペニシリ
ン、セファロスポリン、クリダマイシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオ
マイシン、ピマリシン（ｎａｔａｍｙｃｉｎ）、ナフシリン、リファンピン、テ
トラサイクリン、バンコマイシン、ブレオマイシン、およびドキシサイクリン、
ならびに真菌に対して、アンホテリシンＢ、アマンタジン、ナイスタチン、ケト
コナゾール、ポリミキシン（ｐｏｌｙｍｙｃｉｎ）、アシクロビル、およびガン
シクロビルが挙げられる。グルコースまたは糖を模倣する好ましい薬剤としては
、ネオマイシン、カナマイシン、ゲンタマイシン、プロマイシン（ｐａｒｏｍｙ
ｃｉｎ）、アミカシン、トブラマイシン、ネチルマイシン、リボスタマイシン、
シソマイシン、ミクロマイシン、リビドマイシン、ジベカシン（ｄｉｂｅｋａｃ
ｉｎ）、イセパマイシン（ｉｓｅｐａｍｉｃｉｎ）、アストロマイシン、アミノ
グリコシド、グルコースまたはグルコサミンが挙げられる。

【００１２】 特定の実施形態において、エチレンジシステインと組織特異的リガンドとの間
にリンカーを含むことが必要である。リンカーは、代表的に、薬物の水溶液中の
水溶性を増加させるため、および薬物の親和性の変化を最小にするために使用さ
れる。この組成物の水溶性を増加させる任意のリンカーは、実質的に、本発明と
組み合わせて使用するために想定されるが、このリンカーは、一般に、ポリアミ
ノ酸、水溶性ペプチド、または単一のアミノ酸のいずれかである。例えば、組織
特異的リガンド上の官能基、または薬物が、エストラジオール、トポテカン、パ
クリタキセルまたはラロキシフェンエトポシドのような脂肪族ＯＨまたはフェノ
ールＯＨである場合、このリンカーは、ポリグルタミン酸（ＭＷ 約７５０〜約
１５，０００）、ポリアスパラギン酸（ＭＷ 約２，０００〜約１５，０００）
、ブロモエチルアセテート、グルタミン酸、またはアスパラギン酸である得る。
この薬物の官能基は、脂肪族ＮＨ_２もしくは芳香族ＮＨ_２またはペプチド（例え
ば、ドキソルビシン、マイトマイシン Ｃ、エンドスタチン、アネキシン Ｖ、
ＬＨＲＨ、オクトレオチド，およびＶＩＰ）である場合、このリンカーは、ポリ
グルタミン酸（ＭＷ 約７５０〜約１５，０００）、ポリアスパラギン酸（ＭＷ
約２，０００〜約１５，０００）、グルタミン酸またはアスパラギン酸であり
得る。この薬物の官能基が、カルボン酸またはペプチド（例えば、メトトレキセ
ートまたは葉酸）である場合、このリンカーは、エチレンジアミン、またはリジ
ンであり得る。

【００１３】 画像化のための好ましい放射性核種は、^９９ｍＴｃであるが、他の放射性核種
が、特に治療剤としての使用のために、ＥＣ組織特異的リガンド結合体または本
発明のＥＣ薬物結合体にキレート化され得ることが想定される。例えば、他の有
用な放射性核種には、^１８８Ｒｅ、^１８６Ｒｅ、^１５３Ｓｍ、^１６６Ｈｏ、^９０ Ｙ、^８９Ｓｒ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^１１１Ｉｎ、^１５３Ｇｄ、および^５９Ｆｅ
がある。これらの組成物は、体内の特定の損傷部（例えば、乳癌、卵巣癌、前立
腺癌（例えば、^{ｌ８６／ｌ８８}Ｒｅ−ＥＣ−ホレートを使用する）ならびに頭部
および頚部の癌（例えば、^{１８６／１８８}Ｒｅ−ＥＣ−ニトロイミダゾールを使
用する））に治療放射性核種を送達するために使用される。

【００１４】 本発明の特定の実施形態としては、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−アネキシン Ｖ、^{９９ ｍ} Ｔｃ−ＥＣ−コルヒチン、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ニトロイミダゾール、^９９ｍＴ
ｃ−ＥＣ−グルタメートペンタペプチド、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−メトロニダゾル、^９９ｍ Ｔｃ−ＥＣ−ホレート、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−メトトレキセート、^９９ｍＴ
ｃ−ＥＣ−トムデクス、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシン、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−
カナマイシン、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−アミノグリコシド、（グルコサミン、ＥＣ−
デオキシグルコース）、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ゲンタマイシン、および^９９ｍＴｃ
−ＥＣ−トブラマイシンが挙げられる。

【００１５】 本発明は、さらに、画像化または治療用途のために、放射性標識したエチレン
ジシステイン薬物結合体またはエチレンジシステイン薬物誘導体を合成するため
の方法を提供する。この方法は、組織特異的リガンドを得る工程、このリガンド
をエチレンジシステイン（ＥＣ）と混合して、ＥＣ組織特異的リガンド誘導体を
得る工程、ならびに放射性核種および還元剤と共にＥＣ組織特異的リガンド誘導
体を混合して、放射性核種標識されたＥＣ組織特異的リガンド誘導体を得る工程
を包含する。この放射性核種は、Ｎ_２Ｓ_２キレートを介してＥＣにキレート化さ
れる。この組織特異的リガンドは、上記のように直接的またはリンカーを介して
のいずれかで、ＥＣの酸アームの一方または両方のに結合体化される。この還元
剤は、好ましくは、ジチオナイト（ｄｉｔｈｉｏｎｉｔｅ）イオン、スズイオン
または鉄（ＩＩ）イオンである。

【００１６】 本発明は、さらに、画像化、治療用途のため、または診断用途もしくは予後用
途のために組織特異的リガンドを標識するための方法を提供する。この標識方法
は、組織特異的リガンドを得る工程、エチレンジシステイン（ＥＣ）と共に組織
特異的リガンドを混合して、ＥＣ−リガンド薬物結合体を得る工程、および還元
剤の存在下で、薬物結合体を^９９ｍＴｃと反応させて、エチレンジシステインと
この^９９ｍＴｃとの間にＮ_２Ｓ_２キレートを形成する工程を包含する。

【００１７】 この実施形態の目的のために、組織特異的リガンドは、上記または本明細書中
で議論されるいずれかのリガンドであり得る。還元剤は、任意の公知の還元剤で
あり得るが、好ましくは、ジチオナイトイオン、スズイオンまたは鉄（ＩＩ）イ
オンである。

【００１８】 別の実施形態において、本発明は、哺乳動物の体内のある部位を画像化する方
法を提供する。この画像化方法は、^９９ｍＴｃ標識されたエチレンジシステイン
組織特異的リガンド結合体を含む組成物の診断有効量を投与する工程、およびそ
の部位に局在化された^９９ｍＴｃからの放射能シグナルを検出する工程を包含す
る。この検出する工程は、代表的に、哺乳動物の体内にこの組成物を導入した約
１０分〜約４時間後に実施される。より好ましくは、この検出する工程は、哺乳
動物の体内にこの組成物を注入した約１時間後に実施される。

【００１９】 特定の好ましい実施形態において、この部位は、感染、腫瘍、心臓、肺、脳、
肝臓、脾臓、膵臓、腸または任意の他の器官である。腫瘍または感染は、哺乳動
物の体内のどこかに局在化され得るが、一般に、胸部、卵巣、前立腺、子宮内膜
、肺、脳、または肝臓である。この部位は、ホレート陽性癌またはエストロゲン
陽性癌であり得る。

【００２０】 本発明はまた、放射性薬学的調製物を調製するためのキットを提供する。この
キットは、一般に、予め決められた量のエチレンジシステイン組織特異的リガン
ド結合体組成物およびこの結合体を^９９ｍＴｃで標識するために十分な量の還元
剤を含む、密閉されたバックまたは他の任意の種の適切な容器を含む。特定の場
合において、このエチレンジシステイン組織特異的リガンド結合体組成物はまた
、このエチレンジシステインと組織特異的リガンドとの間にリンカーを含む。こ
の組織特異的リガンドは、任意の特異的な組織型（例えば、本明細書中で議論さ
れる組織型）に特異的に結合する任意のリガンドであり得る。リンカーがこの組
成物中に含まれる場合、このリンカーは、本明細書中で記載されるようなリンカ
ーであり得る。

【００２１】 このキット成分は、任意の適切な形態（例えば、液体形態、凍結形態または乾
燥形態）であり得る。好ましい実施形態において、このキット成分は、凍結乾燥
形態で提供される。このキットはまた、抗酸化剤および／または捕捉剤を含み得
る。この抗酸化剤は、公知の任意の抗酸化剤であるが、好ましくは、ビタミンＣ
であり得る。捕捉剤はまた、残りの放射性核種を結合するために存在し得る。最
も市販されているキットは、捕捉剤としてグルコヘプトネートを含む。しかし、
グルコへプトネートは、約１０〜１５％を残したまま、代表的なキット成分と完
全には反応しない。この残りのグルコへプトネートは腫瘍に達し、そして画像化
結果をゆがめる。従って、本発明は、より安価で、かつより完全に反応するよう
に、捕捉剤としてＥＤＴＡを使用することが好ましい。

【００２２】 本発明の別の局面は、特定の腫瘍の治療のために、候補化合物の潜在的な有用
性を決定するための予後方法である。現在、ほとんどの腫瘍は、数ヶ月および数
千ドルを費やすまで、この薬物が特定の腫瘍に対して実際に有用であるどうかの
いずれの指標もなく、化学療法において「通常の選択された薬物」で処置される
。本発明の画像化組成物は、標識化されたＥＣ薬物結合体の形態で、特定の薬物
を腫瘍部位に送達すること、次いで特定の薬物かどうかを決定するために数時間
内で部位を画像化することに有用である。

【００２３】 このことに関連して、本発明の予後方法は、哺乳動物の体内の腫瘍の部位を決
定する工程、腫瘍特異的な癌化学療法薬物候補物に結合体化されるＥＣにキレー
ト化された放射性核種を含む画像化組成物を得る工程、この組成物を哺乳動物の
体内に投与する工程、ならびにこの腫瘍に対するこの候補薬物の有効性を決定す
るためにこの部位を画像化する工程を包含する。代表的に、この画像化工程は、
哺乳動物の体内に組成物を注入した約１０分〜約４時間後以内で実施される。好
ましくは、この画像化工程は、哺乳動物の体内に組成物を注入した約１時間後以
内に実施される。

【００２４】 予後組成物中のＥＣに結合体化されたこの癌化学療法薬物候補物は、公知の癌
化学療法薬物から選択され得る。このような薬物は、表２にある。癌の特定の型
に特異的であることが公知の多くの抗癌剤が存在する。しかし、癌の特定の型に
対する全ての抗癌剤が、あらゆる患者に有用とは限らない。従って、本発明は、
処置に莫大な時間とお金を費やす前に、候補薬物の潜在的な有用性を決定する方
法を初めて提供する。

【００２５】 本発明のなお別の実施形態は、シンチグラフ画像化剤を調製するための試薬で
ある。本発明の試薬は、組織特異的リガンドを含み、この組織特異的リガンドは
、シンチグラフで検出可能な画像を提供するのに十分なインビボの標識部位に対
する親和性を有し、^９９ｍＴｃ結合部分に共有結合する。^９９ｍＴｃ結合部分は
、上記のように、この組織特異的リガンドに直接的に結合されるか、またはリン
カーを介してリガンドに結合されるかのいずれかである。この^９９ｍＴｃ結合部
分は、好ましくは、＋４酸化状態の^９９ｍＴｃとエチレンジシステイン（ＥＣ）
との間のＮ_２Ｓ_２キレートである。この組織特異的リガンドは、上記のように直
接的またはリンカーを介してのいずれかで、ＥＣの酸アームの一方または両方に
共有結合される。この組織特異的リガンドは、上記のようなリガンドのいずれか
であり得る。

【００２６】 （例示的な実施形態の説明） 核医学の分野において、特定の病理的状態は、局在化するか、またはそれらの
程度が、少量の内部投与される放射性標識されたトレーサ化合物（放射性トレー
サまたは放射性薬品と呼ばれる）の分布を検出することによって評価される。こ
れらの放射性薬品を検出するための方法は、画像化法または放射性画像化法とし
て一般的に公知である。

【００２７】 放射性画像化において、放射性標識は、γ線放射放射性核種であり、そして放
射性トレーサは、γ線検出カメラを使用して位置決めされる（このプロセスは、
しばしば、γシンチグラフィと呼ばれる）。画像化部位は、検出可能である。な
ぜなら、放射性トレーサは、病理学的部位に局在化する（陽性コントラストと呼
ばれる）か、あるいは、放射性トレーサがこのような病理学的部位に特異的に局
在化しないように選択される（陰性コントラストと呼ばれる）かのいずれかであ
るからである。

【００２８】 種々の放射性核種（^６７Ｇａ、^９９ｍＴｃ、^１１１Ｉｎ、^１２３Ｉ、^１２５Ｉ
、^１６９Ｙｂまたは^１８６Ｒｅを含む）は、放射性画像化に有用であることが公
知である。より良い画像化特性および低価格に起因して、可能な場合、^１２３Ｉ
、^１３１Ｉ、^６７Ｇａおよび^１１１Ｉｎ標識された化合物を、対応する^９９ｍＴ
ｃ標識化合物に置き換える試みがなされている。好ましい物理的特質および非常
に低い価格（１ｍＣｉ当たり０．２１ドル）に起因して、^９９ｍＴｃは、放射性
薬品を標識するのに好ましかった。ＤＴＰＡ薬物結合体が^９９ｍＴｃで効果的に
標識され得ることが報告された（Ｍａｔｈｉａｓら、１９９７）が、ＤＴＰＡ部
分は、^１１１Ｉｎほど安定には^９９ｍＴｃにキレート化しない（Ｇｏｌｄｓｍｉ
ｔｈ、１９９７）。

【００２９】 ヒトにおける最適な放射線画像化のために、多くの因子が考慮されなければな
らない。検出の効率を最大にするために、１００〜２００ｋｅＶの範囲でγエネ
ルギーを放射する放射性核種が好ましい。患者に対する吸収される放射線量を最
小にするために、放射性核種の物理的半減期は、画像化手順が可能である限り短
くあるべきである。検査が任意の日にそしてその日の任意の時間で行われ得るた
めに、臨床場所においていつでも利用可能な放射性核種の供給源を有することが
有利である。^９９ｍＴｃは、１４０ｋｅＶでγ線を放射し、６時間の物理的半減
期を有し、そしてモリブデン−９９／テクネチウム−９９ｍ発生器を使用して、
現場で容易に利用可能であるので、好ましい放射性核種である。

【００３０】 ビスアミノエタンチオール４座配位リガンド（ジアミノジチオール化合物とも
呼ばれる）は、２つのチオール硫黄および２つの窒素原子に対するオキソテクネ
チウム基の効率的な結合に基づいて、非常に安定なＴｃ（Ｖ）Ｏ−錯体を形成す
ることが公知である（Ｄａｖｉｓｏｎら、１９８０；１９８１；Ｖｅｒｂｒｕｇ
ｇｅｎら、１９９２）。^９９ｍＴｃ−Ｌ，Ｌ−エチレンジシステイン（^９９ｍＴ
ｃ−ＥＣ）は、最近成功したＮ_２Ｓ_２キレートの例である（Ｖｅｒｂｒｕｇｇｅ
ｎら、１９９２；Ｖａｎ Ｎｅｒｏｍら、１９９３；Ｓｕｒｍａら、１９９４）
。ＥＣ（新規な腎臓画像化剤）は、^９９ｍＴｃで容易に標識化され得、そして高
い放射化学純度および安定性で効率的に標識され得、そして活性な管輸送によっ
て腎臓を通って排出され得る（Ｖｅｒｂｒｕｇｇｅｎら、１９９２；Ｖａｎ Ｎ
ｅｒｏｍら、１９９３；Ｓｕｒｍａら、１９９４；Ｖｅｒｂｒｕｇｇｅｎら、１
９９０；Ｖａｎ Ｎｅｒｏｍら、１９９０；Ｊａｍａｒら、１９９３）。ＥＣの
他の用途は、ＰＥＴのためのガリウム−６８（陽電子放射体、ｔ１／２＝６８分
）および磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）のためのガドリニウム、鉄またはマンガンと
キレート化される。

【００３１】 本発明は、画像化のために、リガンドを特定の組織型に標的化させるための標
識剤として^９９ｍＴｃ−ＥＣを利用する。ＥＣを組織標的リガンドに結合する利
点は、組織標的リガンドの特異的結合特性が目的の領域上で放射性シグナルを濃
縮することである。標識化戦略としての^９９ｍＴｃ−ＥＣの使用が、実質的に任
意の型の化合物で効果的であり得ることが考慮されるが、いくつかの提案される
好ましいリガンドは、例示の目的のために本明細書中において提供される。本発
明の^９９ｍＴｃ−ＥＣ薬物結合体が腫瘍だけでなく、他の組織特異的状態（例え
ば、感染、低酸素組織（発作）、心筋梗塞、アポトーシス細胞、アルツハイマー
病および子宮内膜症）をも画像化するのに有用であり得る。

【００３２】 放射標識タンパク質およびペプチドは、先行技術において報告されている（Ｅ
ｇｅら、米国特許第４，８３２，９４０号、Ａｂｒａｍｓら、１９９０；Ｂａｋ
ｋｅｒら、１９９０；Ｇｏｌｄｓｍｉｔｈら、１９９５，１９９７；Ｏｌｅｘａ
ら、１９８２；Ｒａｎｂｙら、１９８８；Ｈａｄｌｅｙら、１９８８；Ｌｅｅｓ
ら、１９８９；Ｓｏｂｅｌら、１９８９；Ｓｔｕｔｔｌｅ、１９９０；Ｍａｒａ
ｇａｎｏｒｅら、１９９１；Ｒｏｄｗｅｌｌら、１９９１；Ｔｕｂｉｓら、１９
６８；Ｓａｎｄｒｅｈａｇｅｎ １９８３）。しかし、^９９ｍＴｃ−ＥＣは、本
発明の前に、任意のリガンド（ジエチルエステル以外）と組み合わせて使用され
なかった（Ｋａｂａｓａｋａｌ、２０００）。ＥＣのジエチルエステルは、脳血
流剤として使用された（Ｋｉｋｕｋａｗａら、２０００）。

【００３３】 放射性画像化について最適ではあるが、^９９ｍＴｃの化学は、他の元素の化学
ほど完全には研究されておらず、このため、^９９ｍＴｃでの放射標識の方法は、
豊富ではない。^９９ｍＴｃは、通常、モリブデン−９９／テクネチウム−９９ｍ
発生器から、^９９ｍＴｃペルテクネテート（ＴｃＯ_４ ⁻；＋７の酸化状態のテク
ネチウム）として通常得られる。しかし、ペルテクネテートは、他の化合物と十
分結合しない。従って、化合物を放射標識するために、^９９ｍＴｃペルテクネテ
ートは、別の形態に変換されなければならない。テクネチウムが水溶液において
安定なイオンを形成しないので、分解を妨げ、^９９ｍＴｃの不溶性の二酸化テク
ネチウムへの変換も、ペルテクネテートへ戻る変換も生じることを妨げるのに十
分な動力学的および熱力学的安定性を有する配位錯体の形態でこのような溶液中
で保持されなければならない。

【００３４】 放射標識化のために、^９９ｍＴｃ錯体が、テクネチウムイオンの周りのドナー
基のすべてが単一のキレートリガンドによって提供される（この場合、エチレン
ジシステイン）であるキレートとして形成されることが特に有利である。これに
よって、キレート化された^９９ｍＴｃが、エチレンジシステインとリガンドとの
間で直接かまたは単一のリンカーを介してのいずれかで、組織特異的リガンドに
共有結合され得る。

【００３５】 テクネチウムは、多くの酸化状態（＋１、＋２、＋４、＋５、＋６および＋７
）を有する。＋１の酸化状態である場合、Ｔｃ ＭＩＢＩと呼ばれる。Ｔｃ Ｍ
ＩＢＩは、熱反応を用いて作製されなければならない（Ｓｅａｂｏｌｄら、１９
９９）。本発明の目的のために、Ｔｃが＋４の酸化状態であることが重要である
。この酸化状態は、ＥＣを用いるＮ_２Ｓ_２キレートを形成するのに理想的である
。従って、本発明の薬物結合体と放射性テクネチウムとの錯体の形成において、
テクネチウム錯体（好ましくは、^９９ｍＴｃペルテクネテートの塩）は、還元剤
の存在下で、本発明の薬物結合体と反応する。

【００３６】 本発明における使用のための好ましい還元剤は、Ｔｃをその＋４の酸化状態に
還元するための塩化スズ（ＳｎＣｌ_２）の形態のスズイオンである。しかし、他
の還元剤（例えば、ジチオネートイオンまたは鉄（ＩＩ）イオン）が本発明と組
み合わせて有用であり得る。還元剤が固相還元剤であり得ることも意図される。
還元剤の量は、重要であり得る。なぜなら、コロイドの形成を避けることが必要
であるからである。例えば、約１００〜約３００ｍＣｉのＴｃペルテクネテート
当たり、約１０〜約１００μｇのＳｎＣｌ_２を使用することが好ましい。最も好
ましい量は、約２００ｍＣｉのＴｃペルテクネテートおよび約２ｍｌの生理食塩
水当たり、約０．１ｍｇのＳｎＣｌ_２である。これは、代表的には、５人の患者
における使用に十分なＴｃ−ＥＣ組織特異的リガンド結合体を作製する。

【００３７】 エチレンジシステインの酸化を防ぐために、組成物中に酸化防止剤を含むこと
もしばしば重要である。本発明と組み合わせた使用に好ましい酸化防止剤は、ビ
タミンＣ（アスコルビン酸）である。しかし、他の酸化防止剤（例えば、トコフ
ェロール、ピリドキシン、チアミンまたはルチン）もまた有用であり得ることが
意図される。

【００３８】 一般的に、本発明と組み合わせた使用のためのリガンドは、酸のアームのいず
れかまたは両方でＥＣに結合し得るアミノ基またはヒドロキシ基のいずれかを有
する。アミノ基またはヒドロキシル基が利用可能でない場合（例えば、酸官能基
）、所望のリガンドは、リンカー（例えば、エチレンジアミン、アミノプロパノ
ール、ジエチレントリアミン、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、グルタミ
ン酸、ポリグルタミン酸、またはリジン）を加えることによって本発明の方法を
使用して、なおＥＣに結合し、そして^９９ｍＴｃで標識される。本発明における
使用に意図されるリガンドとしては、限定しないが、新脈管形成／抗新脈管形成
リガンド、ＤＮＡトポイソメラーゼインヒビター、解糖マーカー、抗代謝リガン
ド、アポトーシス／低酸素リガンド、ＤＮＡインターカレーター、レセプターマ
ーカー、ペプチド、ヌクレオチド、抗菌剤（例えば、抗生物質または抗真菌剤）
、器官特異的リガンドおよび糖または薬剤（グルコースを模倣する）が挙げられ
る。

【００３９】 ＥＣ自体は、水溶性である。本発明のＥＣ−薬物結合体もまた水溶性であるこ
とが必要である。本発明と組み合わせて使用されるリガンドの多くは、水溶性で
あるか、またはＥＣと結合した場合に水溶性化合物を形成する。しかし、組織特
異的リガンドが水溶性でない場合、リガンドの溶解性を増加するリンカーが使用
され得る。リンカーは、脂肪族アルコールまたは芳香族アルコール、アミンまた
はペプチドにあるいはカルボキシルおよびまたはペプチドに結合し得る。リンカ
ーは、ポリアミノ酸（ペプチド）またはアミノ酸（例えば、グルタミン酸、アス
パラギン酸またはリジン）のいずれかであり得る。表１は、特異的薬物官能基に
対する所望のリンカーを示す。

【００４０】

【表１】 例： Ａ．エストラジオール、トポテカン、パクリタキセル、ラロキシルフェン（ｒ
ａｌｏｘｆｅｎ）エトポシド Ｂ．ドキソルビシン、マイトマイシンＣ、エンドスタチン、アネキシンＶ．Ｌ
ＨＲＨ、オクトレオチド、ＶＩＰ Ｃ．メトトレキサート、葉酸 本発明のＥＣ組織特異的リガンド薬物結合体が他の放射性核種にキレート化し
得、放射性核種療法に使用され得ることも想定される。一般的に、実質的に任意
のα，β−放射体、γ−放射体、またはβ，γ−放射体が、本発明とともに使用
され得ることが考えられる。好ましいβ，γ−放射体としては、^１６６Ｈｏ、^{１ ８８} Ｒｅ、^１８６Ｒｅ、^１５３Ｓｍ、および^８９Ｓｒが挙げられる。好ましいβ
−放射体としては、^９０Ｙおよび^２２５Ａｃが挙げられる。好ましいγ−放射体
としては、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^６４Ｃｕ、^６２Ｃｕおよび^１１１Ｉｎが挙げら
れる。好ましいα−放射体としては、^２１１Ａｔおよび^２１２Ｂｉが挙げられる
。常磁性物質（例えば、Ｇｄ、ＭｎおよびＦｅ）が、本発明と組み合わせた使用
のためにＥＣとキレート化され得ることも想定される。

【００４１】 錯体およびこのような錯体を調製するための手段は、標識される本発明のＥＣ
−組織特異的リガンドの所定量および^９９ｍＴｃで結合体を標識するのに十分な
量の還元剤を含む密封バイアルを備えるキット形態で便利に提供される。本発明
に従う^９９ｍＴｃ標識シンチグラフィ画像化剤は、ＥＣ−組織特異的結合体およ
び還元剤を含むバイアルへの適切な量の^９９ｍＴｃまたは^９９ｍＴｃ錯体の添加
、および本明細書中、以下の実施例１に記載される条件下での反応によって調製
され得る。キットはまた、例えば、浸透圧を調節するための薬学的に受容可能な
塩、緩衝液、保存剤、酸化防止剤などのような従来の薬学的補助物質を含み得る
。キットの成分は、液体形態、凍結形態または乾燥形態であり得る。好ましい実
施形態において、キット成分は、凍結乾燥形態で提供される。

【００４２】 本発明によって提供される放射性標識試薬または結合体は、適切な量の放射能
を有して提供される。^９９ｍＴｃ放射性錯体を形成する際に、１ｍＬ当たり約０
．０１ミリキュリー（ｍＣｉ）〜約３００ｍＣｉの濃度で放射能を含む溶液で放
射性錯体を形成することが一般的に好ましい。

【００４３】 本発明によって提供される^９９ｍＴｃ標識シンチグラフィ画像化剤は、哺乳動
物の身体における部位を視覚化するために使用され得る。本発明に従って、^{９９ ｍ} Ｔｃ標識シンチグラフィ画像化剤は、単一の単位注射可能線量で投与される。
当業者に公知の任意の通常のキャリア（例えば、滅菌生理食塩水溶液または血漿
）は、本発明に従って、種々の器官、腫瘍などを診断的に画像化するための注射
可能溶液を調製するための放射標識の後に、利用され得る。一般的に、投与され
る単位線量は、約０．０１ｍＣｉ〜約３００ｍＣｉ、好ましくは１０ｍＣｉ〜約
２００ｍＣｉの放射能を有する。単位投薬量で注入される溶液は、約０．０１ｍ
Ｌ〜約１０ｍＬである。静脈内投与の後に、器官または腫瘍のインビボでの画像
化は、所望である場合、放射標識試薬が、患者に導入された後の数時間でまたは
それより長くにおいて行われ得る。大部分の場合、十分な量の投与線量が、シン
チフォトグラフをとることを可能にするように約０．１時間以内に画像化される
領域に蓄積する。診断目的または予後判定目的のためのシンチグラフィ画像化の
任意の従来の方法が、本発明に従って利用され得る。

【００４４】 本発明の^９９ｍＴｃ−ＥＣ標識戦略はまた、予後判定の目的のために使用され
得る。ＥＣが癌化学療法のために選択した公知の薬物（例えば、表２に列挙され
るもの）に結合され得ることが想定される。次いで、これらのＥＣ−薬物結合体
は、^９９ｍＴｃで放射標識され得、そして腫瘍を有する患者に投与され得る。標
識ＥＣ−薬物結合体は、腫瘍に特異的に結合する。画像化は、特定の患者の特定
の腫瘍に対する癌化学療法薬物の効力を決定するために実行され得る。この方法
において、医師は、続行するどの処置様式がもっとも有効か、どの化学療法薬物
がもっとも有効かを迅速に決定し得る。これは、薬物を選択する工程および１回
の化学療法を施す工程を包含する現在の方法に対して劇的な改善を表す。これは
、薬物の効果が決定され得る前の、数か月の患者の時間および数千ドルに関係す
る。

【００４５】 本発明によって提供される^９９ｍＴｃ標識ＥＣ−組織特異的リガンド結合体お
よび錯体は、水性生理食塩水媒体のような静脈内注射のための任意の従来の媒体
で、または血漿媒体において静脈内で投与され得る。このような媒体はまた、例
えば、浸透圧を調節するための薬学的に受容可能な塩、緩衝液、保存剤、酸化防
止剤などのような従来の薬学的補助物質を含み得る。好ましい媒体には、ノーマ
ルセーラインおよび血漿がある。

【００４６】 特定の好ましい標的化戦略は、さらに詳細に以下に議論される。

【００４７】 （腫瘍葉酸レセプター標的化） 放射標識リガンド（例えば、ペンテトレオチド（ｐｅｎｔｅｔｒｅｏｔｉｄｅ
）および血管作用性腸ペプチド）は、細胞レセプターに結合し、これらのうちの
いくつかは、腫瘍細胞において過剰発現される（ＢｒｉｔｔｏｎおよびＧｒａｎ
ｏｗｓｋａ、１９９６；Ｋｒｅｎｎｉｎｇら、１９９５；Ｒｅｕｂｉら、１９９
２；Ｇｏｌｄｓｍｉｔｈら、１９９５；Ｖｉｒｇｏｌｉｎｉら、１９９４）。こ
れらのリガンドが免疫原性でなく、そして血漿から迅速に排除されるので、レセ
プター画像化は、抗体画像化と比較してより見込みがあるようである。

【００４８】 葉酸および葉酸代謝拮抗薬（例えば、メトトレキサート）が、古典的な還元型
葉酸キャリアシステムに加えて、高い親和性の葉酸レセプター（グリコシルホス
ファチジルイノシトール結合膜葉酸結合タンパク質）を介して、細胞に入る（Ｗ
ｅｓｔｅｒｈｏｆら、１９９１；Ｏｒｒら、１９９５；ＨｓｕｅｈおよびＤｏｌ
ｎｉｃｋ、１９９３）。葉酸レセプター（ＦＲ）は、多くの新生物細胞型（例え
ば、肺癌、乳房癌、卵巣癌、頚部癌、結腸直腸癌、鼻咽頭癌、腎腺癌、悪性黒色
腫および上衣細胞腫）において過剰発現されるが、主に、いくつかの正常な分化
組織（例えば、脈絡叢、胎盤、甲状腺および腎臓）において発現される（Ｏｒｒ
ら、１９９５；Ｗｅｉｔｍａｎら、１９９２ａ；Ｃａｍｐｂｅｌｌら、１９９１
；Ｗｅｉｔｍａｎら、１９９２ｂ；Ｈｏｌｍら、１９９４；Ｒｏｓｓら、１９９
４；Ｆｒａｎｋｌｉｎら、１９９４；Ｗｅｉｔｍａｎら、１９９４）。ＦＲは、
葉酸結合タンパク質毒素、薬物／アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびリポソ
ームを、葉酸レセプターを過剰発現する腫瘍細胞に送達するために使用された（
Ｇｉｎｏｂｂｉら、１９９７；ＬｅａｍｏｎおよびＬｏｗ、１９９１；Ｌｅａｍ
ｏｎおよびＬｏｗ、１９９２；Ｌｅａｍｏｎら、１９９３；ＬｅｅおよびＬｏｗ
、１９９４）。さらに、抗Ｔ細胞レセプター抗体に結合される抗ＦＲ抗体を含む
二特異的抗体は、Ｔ細胞をＦＲ陽性腫瘍に標的化するために使用されており、現
在、卵巣癌について臨床試験にある（Ｃａｎｅｖａｒｉら、１９９３；Ｂｏｌｈ
ｕｉｓら、１９９２；Ｐａｔｒｉｃｋら、１９９７；Ｃｏｎｅｙら、１９９４；
Ｋｒａｎｚら、１９９５）。同様に、この性質は、放射標識葉酸結合体（例えば
、葉酸レセプター陽性腫瘍の画像化のための、^６７Ｇａデフェロキサミン−葉酸
および^１１１Ｉｎ−ＤＴＰＡ−葉酸）を開発するために鼓舞された（Ｍａｔｈｉ
ａｓら、１９９６；Ｗａｎｇら、１９９７；Ｗａｎｇら、１９９６；Ｍａｔｈｉ
ａｓら、１９９７ｂ）。これらの薬剤を用いた限定されたインビトロおよびイン
ビボ研究の結果は、葉酸レセプターが、腫瘍画像化のための潜在的な標的であり
得ることを示唆する。本発明において、本発明者らは、一連の新規な葉酸レセプ
ターリガンドを開発した。これらのリガンドは、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−葉酸、^{９９ ｍ} Ｔｃ−ＥＣ−メトトレキセート（^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＴＸ）、^９９ｍＴｃ−
ＥＣ−トムデックス（ｔｏｍｕｄｅｘ）（^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＴＤＸ）である。

【００４９】 （腫瘍低酸素標的化） 腫瘍細胞は、酸素の非存在化におけるよりも酸素の存在下において従来の照射
により感受性である；腫瘍内の少ない割合の低酸素細胞でさえ、放射線に対する
応答を制限し得る（Ｈａｌｌ、１９８８；Ｂｕｓｈら、１９７８；Ｇｒａｙら、
１９５３）。低酸素放射線抵抗性は、多くの動物腫瘍において示されたが、ヒト
においては少しの腫瘍型のみで示された（Ｄｉｓｃｈｅ、１９９１；Ｇａｔｅｎ
ｂｙら、１９８８；Ｎｏｒｄｓｍａｒｋら、１９９６）。ヒト腫瘍における低酸
素の発生は、大部分において、組織学的知見および動物腫瘍研究から推論された
。低酸素のインビボ実証は、酸素電極を用いた組織測定を必要とし、そしてこれ
らの技術の侵襲性は、それらの臨床的適用を限定している。

【００５０】 ミソニダゾール（ＭＩＳＯ）は、低酸素細胞増感剤であり、そして異なる放射
性同位体（例えば、^１８Ｆ、^１２３Ｉ、^９９ｍＴｃ）でのＭＩＳＯの標識は、Ｐ
ＥＴまたは平面（ｐｌａｎａｒ）シンチグラフィによる十分に酸素化された活性
腫瘍から、低酸素だか代謝的に活性な腫瘍を区別するのに有用であり得る。［^{１ ８} Ｆ］フルオロソニダゾール（ＦＭＩＳＯ）は、腫瘍低酸素を評価するためにＰ
ＥＴとともに使用される。最近の研究は、ＰＥＴ（［^１８Ｆ］ＦＭＩＳＯによる
細胞酸素含有量をモニターするその能力を有する）が、放射線に対する腫瘍応答
を推測するための高い可能性を有することを示した（Ｋｏｈら、１９９２；Ｖａ
ｌｋら、１９９２；Ｍａｒｔｉｎら、１９８９；Ｒａｓｅｙら、１９８９；Ｒａ
ｓｅｙｅｔａｌら、１９９０；Ｙａｎｇら、１９９５）。ＰＥＴは、視準なしで
高い分解能を提供するが、臨床設定においてＰＥＴ同位体を使用するコストは、
ひどく高い。ヨウ素でのＭＩＳＯの標識化が選択されたが、甲状腺組織における
高い取り込みが観測された。従って、同位体があまり高価でなく、そして大部分
の主用な医療設備において容易に入手可能である平面シンチグラフィのための化
合物を開発することが望ましい。本発明において、発明者らは、^９９ｍＴｃ−Ｅ
Ｃ−２−ニトロイミダゾールおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣ−メトロニダゾールの合成
を提供し、そして腫瘍低酸素マーカーとしてそれらの潜在的な使用を示す。

【００５１】 （癌のペプチド画像化） ペプチドおよびアミノ酸は、種々の型の腫瘍の画像化において首尾よく使用さ
れてきた（Ｗｅｓｔｅｒら、１９９９；ＣｏｅｎｅｎおよびＳｔｏｃｋｌｉｎ、
１９８８；Ｒａｄｅｒｅｒら、１９９６；Ｌａｍｂｅｒｔら、１９９０；Ｂａｋ
ｋｅｒら、１９９０；ＳｔｅｌｌａおよびＭａｔｈｅｗ、１９９０；Ｂｕｔｔｅ
ｒｆｉｅｌｄら、１９９８；Ｐｉｐｅｒら、１９８３；Ｍｏｃｈｉｚｕｋｉら、
ＤｉｃｋｉｎｓｏｎおよびＨｉｌｔｎｅｒ、１９８１）。グルタミン酸ベースの
ペプチドは、癌処置のための薬物キャリアとして使用されてきた（Ｓｔｅｌｌａ
およびＭａｔｈｅｗ、１９９０；Ｂｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄら、１９９８；Ｐｉｐ
ｅｒら、１９８３；Ｍｏｃｈｉｚｕｋｉら、１９８５；Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎおよ
びＨｉｌｔｎｅｒ、１９８１）。ホレートのグルタメート部分が分解し、そして
インビボでポリグルタメートを形成することは公知である。次いで、このポリグ
ルタメートは、ホレートに再結合されて、ホリルポリグルタメートを形成し、こ
のホリルポリグルタメートは、グルコース代謝に関係する。グルタミン酸ペプチ
ドを標識することは、腫瘍の悪性度を区別する際に有用であり得る。本発明にお
いて、本発明者らは、ＥＣ−グルタミン酸ペンタペプチドの合成を報告し、そし
て腫瘍の画像化におけるその潜在的な使用を評価する。

【００５２】 （腫瘍アポトーシス細胞の画像化） アポトーシスは、化学療法および放射線を用いる癌の処置の間に生じる（Ｌｅ
ｎｎｏｎら、１９９１；Ａｂｒａｍｓら、１９９０；Ｂｌａｋｅｎｂｅｒｇら、
１９９８；Ｂｌａｋｅｎｂｅｒｇら、１９９９；ＴａｉｔおよびＳｍｉｔｈ、１
９９１）。アネキシンＶは、ホスホチジルセリンに結合することが知られており
、このホスホチジルセリンは、腫瘍アポトーシス細胞によって過剰発現される（
Ｂｌａｋｅｎｂｅｒｇら、１９９９；ＴａｉｔおよびＳｍｉｔｈ、１９９１）。
アネキシンＶによるアポトーシスの評価は、治療の効力（例えば、疾患の進行ま
たは後退）を評価するために有用である。本発明において、本発明者らは、^{９９ ｍ} Ｔｃ−ＥＣ−アネキシンＶ（ＥＣ−ＡＮＮＥＸ）を合成し、そして腫瘍画像化
におけるその潜在的な使用を評価する。

【００５３】 （腫瘍新脈管形成の画像化） 新脈管形成は、部分的に、腫瘍増殖および転移の発生の原因である。抗有糸分
裂性化合物は、抗脈管形成性であり、そして抗癌薬物としてのそれらの潜在的な
使用について知られている。これらの化合物は、細胞サイクルの分裂期の間の細
胞分裂を阻害する。細胞機能の生化学的プロセス（例えば、細胞分裂、細胞運動
性、分泌、線毛運動およびべん毛運動、細胞内輸送、ならびに細胞の形態の維持
）の間に、微小管が関係する。抗有糸分裂性化合物は、高い親和性で、微小管タ
ンパク質（チューブリン）に結合し、微小管アセンブリを乱し、そして増幅細胞
の有糸分裂の停止を引き起こすことが知られている。従って、抗有糸分裂性化合
物は、微小管インヒビターとして、または紡錘体毒として、みなされる（Ｌｕ、
１９９５）。

【００５４】 多くの型の抗有糸分裂性化合物は、チューブリンに結合することによって、微
小管アセンブリ−ディスアセンブリを制御する（Ｌｕ、１９９５；Ｇｏｈら、１
９９８；Ｗａｎｇら、１９９８；Ｒｏｗｉｎｓｋｙら、１９９０；Ｉｍｂｅｒｔ
、１９９８）。コルヒチノイド（ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｏｉｄ）のような化合物は
、コルヒチン結合部位上のチューブリンと相互作用し、そしてチューブリンの構
築を阻害する（Ｌｕ、１９９５；Ｇｏｈら、１９９８；Ｗａｎｇら、１９９８）
。コルヒチノイドの中で、コルヒチンは、急性痛風の予防を処置するために使用
される有効な抗炎症性薬物である。コルヒチンはまた、慢性骨髄性白血病におい
て使用され得る。コルヒチノイドは、特定の型の腫瘍増殖に対して強力であるが
、臨床的な治療可能性は、治療的効果および毒性効果を分離することが不可能で
あるために、制限される（Ｌｕ、１９９５）。しかし、コルヒチンは、細胞機能
を評価するための生化学的ツールとして有用である。本発明のおいて、本発明者
らは、チューブンリン機能に対する生化学的プロセスの評価のために、^９９ｍＴ
ｃ−ＥＣ−コルヒチン（ＥＣ−ＣＯＬ）を開発した。

【００５５】 （腫瘍アポトーシス細胞の画像化） アポトーシスは、化学療法および放射線を用いる癌の処置の間に生じる。アネ
キシンＶは、ホスホチジルセリンに結合することが知られており、このホスホチ
ジルセリンは、腫瘍アポトーシス細胞によって過剰発現される。アネキシンＶに
よるアポトーシスの評価は、治療の効力（例えば、疾患の進行または後退）を評
価するために有用である。従って、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−アネキシンＶ（ＥＣ−Ａ
ＮＮＥＸ）を開発した。

【００５６】 （腫瘍低酸素症の画像化） 放射線治療の前の、画像化様式による腫瘍低酸素症の評価により、放射線増感
剤または生体還元薬剤（ｂｉｏｒｅｄｕｃｔｉｖｅ ｄｒｕｇ）（例えば、チラ
パザミン（ｔｉｒａｐａｚａｍｉｎｅ）、マイトマイシンＣ）での処置のための
患者を選択する合理的な手段が提供される。このような患者の選択は、低酸素症
性腫瘍を有する患者のより正確な処置を可能にする。さらに、腫瘍サプレッサ遺
伝子（Ｐ５３）は、多重薬物耐性に関係する。化学療法の前後の組織病理学によ
り画像化の知見とＰ５３の過剰発現とを相関付けることは、後の腫瘍処置応答に
おいて有用である。^９９ｍＴｃ−ＥＣ−２−ニトロイミダゾールおよび^９９ｍＴ
ｃ−ＥＣ−メトロニダゾルを開発した。

【００５７】 （腫瘍新脈管形成の画像化） 新脈管形成は、部分的に、腫瘍増殖および転移の発生の原因である。抗有糸分
裂性化合物は、抗脈管形成性であり、そして抗癌薬物としてのそれらの潜在的な
使用について知られている。これらの化合物は、細胞サイクルの分裂期の間の細
胞分裂を阻害する。細胞機能の生化学的プロセス（例えば、細胞分裂、細胞運動
性、分泌、線毛運動およびべん毛運動、細胞内輸送、ならびに細胞の形態の維持
）の間に、微小管が関係する。抗有糸分裂性化合物は、高い親和性で、微小管タ
ンパク質（チューブリン）に結合し、微小管アセンブリを乱し、そして増幅細胞
の有糸分裂の停止を引き起こすことが知られている。従って、抗有糸分裂性化合
物は、微小管インヒビターとして、または紡錘体毒として、見なされる。コルヒ
チン（これは、強力な抗脈管形成薬剤である）は、微小管重合および中期での細
胞停止を阻害することが知られている。コルヒチン（ＣＯＬ）は、細胞機能を評
価するための生化学的ツールとして有用であり得る。次いで、^９９ｍＴｃ−ＥＣ
−ＣＯＬを開発した。

【００５８】 （発作に起因する低酸素症の画像化） 腫瘍細胞は、多少低酸素症的であるが、それは、酸素プローブが、圧力を測定
することを必要とする。低酸素症的な条件を模倣するために、本発明者らは、発
作を経験した１１人の患者を、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−メトロニダゾル（^９９ｍＴｃ
−ＥＣ−ＭＮ）を使用して、画像化した。メトロニダゾルは、腫瘍低酸素症マー
カーである。発作の範囲の組織は、酸素の欠乏に起因して、低酸素症的となる。
このＳＰＥＣＴ画像を、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮの注射の１時間後と３時間後に
行った。全てのこれらの画像化研究は、積極的に、病変を局在化させた。ＣＴは
、非常に十分にまたは正確に、病変を示さなかった。いくつかの場合におけるＭ
ＲＩおよびＣＴは、病変のサイズを誇張した。以下は、３人の患者から選択され
たケースである。

【００５９】 ケース１． ５９歳の男性患者は、左脳幹神経節に発作を患った。ＳＰＥＣＴ ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮは、注入後１時間で病変を同定し（図２８）、これは
、ＭＲＩ Ｔ１負荷画像に対応する（図２９）。

【００６０】 ケース２． ７３歳の男性患者は、左中大脳動脈（ＭＣＡ）領域において、発
作を患った。ＳＰＥＣＴ ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮを、注入後１時間で、１日目
および１２日目（図３０および３１）で得た。これらの病変は、１２日目での有
意な増加した取り込みを示した。ＣＴは、病変における広範な脳出血を示した。
１日目と１２日目との間に、顕著な差異は、観察されなかった（図３２および図
３３）。これらの発見は、組織生存度に起因して、患者の症状（無酸素症から低
酸素症へ）を改善したことを示す。ＳＰＥＣＴ ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮにより
、ＣＴ画像化よりも良好な機能的情報が提供される。

【００６１】 ケース３． ７２歳の男性患者が、右ＭＣＡおよびＰＣＡ領域における発作を
患った。ＳＰＥＣＴ ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮは、注入後１時間での病変を同定
した（図３４）。ＣＴは、病変のサイズを誇張した（図３５）。

【００６２】 （腫瘍解糖標的化） 放射性標識リガンド（例えば、多糖（ネオマイシン、カナマイシン、トブラマ
イシン）および単糖（例えば、グルコサミン））は、細胞グルコーストランスポ
ータ（腫瘍細胞で過剰発現される）に結合し、続いて、リン酸化される（Ｒｏｇ
ｅｒｓら、１９６８；Ｆａｎｃｉｕｌｌｉら、１９９４；Ｐｏｐｏｖｉｃｉら、
１９７１；Ｊｏｎｅｓら、１９７３；Ｈｅｒｍａｎｎら、２０００）。多糖（ネ
オマイシン、カナマイシン、トブラマイシン）および単糖（グルコサミン）によ
って誘導されるグルコースレベルは、インスリンによって抑制され得る（Ｈａｒ
ａｄａら、１９９５；Ｍｏｌｌｅｒら、１９９１；Ｏｆｆｉｅｌｄら、１９９６
；Ｓｈａｎｋａｒら、１９９８；Ｙｏｓｈｉｎｏら、１９９９；Ｖｉｌｌｅｖａ
ｌｏｉｓ−Ｃａｍら、２０００）。これらのリガンドは、免疫原性ではなく、そ
して細胞質から迅速に浄化されるので、代謝画像化は、抗体画像化と比較して、
有望であるようである。

【００６３】 以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を例示することが意図される。以
下の実施例に開示される技術は、本発明の実施において十分に機能することが本
発明者らによって発見された技術を表し、従って、その実施のための好ましい様
式を構成すると考えられ得ることが、当業者によって理解されるべきである。し
かし、当業者は、本開示の観点から、多くの改変が、開示される特定の実施形態
においてなされ得、そしてなおも本発明の意図および範囲から逸脱することなく
同様または類似の結果を得ることを、理解する。

【００６４】 （実施例１：腫瘍ホレートレセプター標的化） （ＥＣの合成） ＥＣを、以前に記載された方法（ＲａｔｎｅｒおよびＣｌａｒｋｅ、１９３７
；Ｂｌｏｎｄｅａｕら、１９６７；各々は、本明細書中に参考として援用される
）に従って、２工程合成で調製した。前駆体Ｌ−チアゾリジン−４−カルボン酸
を、合成した（ｍ．ｐ．１９５℃、報告値１９６−１９７℃）。次いで、ＥＣを
、調製した（ｍ．ｐ．２３７℃、報告値２５１−２５３℃）。この構造を、^１Ｈ
−ＮＭＲおよび高速原子ボンバードメント質量分析法（ＦＡＢ−ＭＳ）によって
確認した。

【００６５】 （メトトレキサートのアミノエチルアミドアナログ（ＭＴＸ−ＮＨ_２）の合成
） ＭＩＸ（２２７ｍａ、０．５ｍｍｏｌ）を、１ｍｌのＨＣｌ溶液（２Ｎ）に溶
解した。ｐＨ値を、＜３とした。この攪拌溶液に、２ｍｌの水および４ｍｌのＮ
−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ、
メタノール中６．６０９％、１ｍｍｏｌ）を、室温で添加した。エチレンジアミ
ン（ＥＤＡ、０．６ ｍｌ、１０ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。この反応混
合物を、一晩攪拌し、そして溶媒を減圧下でエバポレートした。未処理の固体物
質を、ジエチルエーテル（１０ｍｌ）、アセトニトリル（１０ｍｌ）および９５
％エチルアルコール（５０ｍｌ）で洗浄して、未反応のＥＥＤＱおよびＥＤＡを
除去した。次いで、生成物は、凍結乾燥によって乾燥し、そしてさらに精製する
ことなく使用した。この生成物を、２１０ｍｇ（８４．７％）であり、黄色粉末
であった。生成物の融点：１９５−１９８℃（分解、ＭＩＸ）；^１Ｈ−ＮＭＲ（
Ｄ_２Ｏ）δ ２．９８−３．０４（ｄ，８Ｈ，−（ＣＨ_２）_２ＣＯＮＨ（ＣＨ_０ ）_２ＮＨ_２），４．１６−４．７１（ｍ，６Ｈ，−ＣＨ_２−プテリジニル，芳香
族−ＮＣＨ_３，ＮＨ−ＣＨ−ＣＯＯＨグルタメート），６．６３−６．６４（ｄ
，２Ｈ，芳香族−ＣＯ），７．５１−７５３（ｄ，２Ｈ．芳香族−Ｎ），８．３
６（ｓ，１Ｈ，プテリジニル）。ＦＡＢ ＭＳ ｍ／ｚ Ｃ_２２Ｈ_２８，Ｎ_１０ ，Ｏ_４（Ｍ）^＋についての計算値４９６．５１５，実測値４９６．８３５。

【００６６】 （ホレートのアミノエチルアミドアナログ（ホレート−ＮＨ_２）の合成） 葉酸二水和物（１ｇ、２．０ｍｍｏｌ）を、１０ｍｌの水の添加した。ｐＨ値
を、ＨＣｌ（２Ｎ）を使用して、２に調節した。この攪拌溶液に、Ｎ−エトキシ
カルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ、１０ｍｌメ
タノール中１ｇ、４．０ｍｍｏｌ）およびエチレンジアミン（ＥＤＡ、１．３ｍ
ｌ、１８ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。この反応混合物を、室温で一晩攪拌
した。溶媒を、減圧下でエバポレートした。生成物を、メタノール（５０ｍｌ）
中で沈澱させ、そしてさらに、アセトン（１００ｍｌ）で洗浄して、未反応のＥ
ＥＤＱおよびＥＤＩＴを除去した。次いで、この生成物を、凍結乾燥し、そして
さらに精製することなく使用した。ニンヒドリン（メタノール中２％）スプレー
は、陽性のアミノ基を示した。この生成物は、０．６ｇ（収率６０％）であり、
黄色粉末であった。生成物の融点：２５０℃（分解）。^１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ）
δ １．９７−２．２７（ｍ，２Ｈ，ホレートの−ＣＨ_２グルタメート），３．
０５−３．４０（ｄ，６Ｈ，−ＣＨ_２ＣＯＮＨ（ＣＨ_２）_２ＮＨ_２），４．２７
−４．８４（ｍ，３Ｈ，−ＣＨ_２−プテリジニル，ＮＨ−ＣＨ−ＣＯＯＨグルタ
メート），６．６８−６．７０（ｄ，２Ｈ，芳香族−ＣＯ）、７．６０−７．６
２（ｄ，２Ｈ，芳香族−Ｎ），８．４４（ｓ，１Ｈ，プテリジニル）。ＦＡＢ
ＭＳ ｍ／ｚ Ｃ_２１Ｈ_２５Ｎ_９，Ｏ_５（Ｍ）^＋のついての計算値：４８３，実
測値４８３．２１。

【００６７】 （エチレンジシステイン−ホレート（ＥＣ−ホレート）の合成） ＥＣを溶解するために、ＮａＯＨ（２Ｎ、０．１ｍｌ）を、水（１．５ｍｌ）
中のＥＣ（１１４ｍａ、０．４２５ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。この無色
の溶液に、スルホ−ＮＨＳ（９２．３ｍｇ、０．４２５ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ
（８１．５ｍｇ、０．４２５ｍｍｏｌ）を添加した。ホレート−ＮＨ_２（２０５
ｍｇ、０．４２５ｍｍｏｌ）を、次いで、添加した。この混合物を、室温で２４
時間攪拌した。この混合物を、５００の分子カットオフを有するＳｐｅｃｔｒａ
／ＰＯＲ分子多孔性膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉ
ｅｓ Ｉｎｃ．，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）を使用して、４８時間透析した。透析
の後、生成物を凍結乾燥した。この生成物は、１１６ｍｇ（収率３５％）であっ
た。ｍ．ｐ．１９５℃（分解）；^１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ）δ １．９８−２．２
８（ｍ，２Ｈ，ホレートの−ＣＨ_２グルタメート），２．６０−２．９５（ｍ，
４ＨおよびＥＣの−ＣＨ_２−ＳＨ），３．２４−３．３４（ｍ，１０Ｈ，−ＣＨ_２ −ＣＯ，ホレートのエチレンジアミンおよびＥＣのエチレンジアミン），４．
２７−４．７７（ｍ，５Ｈ，−ＣＨ−プテリジニル，ホレートのＮＨ−ＣＨ−Ｃ
ＯＯＨグルタメートおよびＥＣのＮＨ−ＣＨ−ＣＯＯＨ），６．６０−６．６２
（ｄ，２Ｈ，芳香族−ＣＯ），７．５８−７．５９（ｄ，２Ｈ．芳香族−Ｎ），
８．５９（ｓ，１Ｈ，プテリジニル）。Ｃ_２９Ｈ_３７Ｎ_１１Ｓ_２Ｏ_８Ｎａ_２（８
Ｈ_２Ｏ）についての分析計算値，ＦＡＢ ＭＳ ｍ／ｚ（Ｍ）^＋７７７．３（水
なし）。Ｃ，３７．７９；Ｈ，５．７５；Ｎ，１６．７２；Ｓ，６．９５。実測
値：ｍ／ｚ （Ｍ）^＋７７７．７（２０），４８９．４（１００）。Ｃ，３７．
４０；Ｈ，５．４２；Ｎ．１５．４３；Ｓ，７．５８。

【００６８】 （ＥＣ−ホレートおよびＥＣの^９９ｍＴｃでの放射標識化） ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ホレートの放射合成（ｒａｄｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）を
、必要とされる量の^９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸を、自家製キット（ＥＣ−ホ
レートの凍結乾燥残渣（３ｍｇ）、ＳｎＣｌ_２（１００μｇ）、Ｎａ_２ＨＰＯ_４ （１３．５ｍｇ）、アスコルビン酸（０．５ｍｇ）およびＮａＥＤＴＡ（０．５
ｍｇ）を含む）に添加することによって達成した。調製物の最終ｐＨは、７．４
であった。^９９ｍＴｃ−ＥＣをまた、ＥＣの凍結乾燥残渣（３ｍｇ）、ＳｎＣｌ_２ （１００μｇ）、Ｎａ_２ＨＰＯ_４（１３．５ｍｇ）、アスコルビン酸（０．５
ｍｇ）およびｐＨ１０のＮａＥＤＴＡ（０．５ｍｇ）を含む自家製キットを使用
することによって、得た。次いで、調製物のｐＨを７．４に調節した。放射化学
純度を、各々、アセトン（系Ａ）および酢酸アンモニウム（水中１Ｍ）：メタノ
ール（４：１）（系Ｂ）で溶出するＴＬＣ（ＩＴＬＣ ＳＧ，Ｇｅｌｍａｎ Ｓ
ｃｉｅｎｃｅｓ，Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）によって、決定した。ｒａｄｉｏ
−ＴＬＣ （Ｂｉｏｓｃａｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ）分析から、放射化
学純度は、両方の放射性医薬品について、＞９５％であった。Ｒａｄｉｏ−ＴＬ
Ｃデータを表２に要約する。^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ホレートの合成を、図１に示す
。

【００６９】 （表２） （癌化学療法のための選択された薬物） 以下の表は、ＵＳＡおよびカナダにおける癌の治療のために使用される薬物お
よびそれらの主要な有害な影響を列挙する。列挙する選択された薬物は、Ｍｅｄ
ｉｃａｌ Ｌｅｔｔｅｒコンサルタントの意見に基づいた。いくつかの薬物を、
それらが、米国食品医薬品庁によって承認されていない指標について列挙する。
抗癌薬物およびそれらの有害な影響については、以下の通りである。本発明の目
的のために、これらの列挙は、例示を意味し、全てを網羅するものではないこと
を意味する。

【００７０】

【表２】 ^＊ 化学療法は、中程度の活性のみを有する。^＊＊ 化学療法は、少ない活性のみを有する。^１ 化学療法を伴うかまたは伴わないタモキシフェンは、一般に、閉経後エスト
ロゲン−レセプター陽性の、モード陽性患者に対して推奨され、そしてタモキシ
フェンを伴うかまたは伴わない化学療法が、閉経前のモード陽性な患者に対して
一般に推奨される。化学療法および／またはタモフェキシンを伴うアジュバント
処置が、より大きな腫瘍または他の有害な予後指標を有するモード陰性患者に対
して推奨される。^２ メゲストロールおよび他のホルモン剤は、タモキシフェンが作用しないいく
らかの患者において有用であり得る。^３ 高用量化学療法の後（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｅｔｔｅｒ，３４：７９，１９８
２）。^４ 直腸癌について、フルオロウラシル単独での処置の前後に、フルオロウラシ
ル（ｆｌｕｏｒｏｕｔａｃｉｌ）および放射線を用いる手術後アジュバント処置
。^５ 手術切除、放射線治療、または両方と組合された場合にのみ、薬物が主要な
活性を有する。^６ ビタミンＡアナログである、ラクトラチノル（ｌａｃｔｒａｔｉｎｏｌｎ）
（Ａｃｇｕｔａｎａ）は、前腫瘍性病変（白斑症（ｌｅｕｋｏｐｌａｋｌａ））
を制御し得、そして第二の原発性腫瘍の割合を減少し得る（ＳＥ Ｂａｎｎｅｒ
ら、Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ，８８：１４０ １９９４）。^† 調査用途のためにＵＳＡのみで利用可能。^７ 高リスク患者（例えば、高カウント、細胞遺伝異常、成人）は、誘導、維持
および「強化」（寛解の達成後のさらなる薬物の使用）のためのさらなる薬物を
必要とし得る。さらなる薬物としては、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏ
ｓｐｈａｍｉｄａ）、ミトキサトロンおよびチオグアニン（ｔｈｌｏｇｕａｎｉ
ｎｅ）が挙げられる。イギリスにおける１つの大きな制御された試行の結果は、
強化が、ＡＬＬの全ての子供の生存率を改善し得ることを示唆する（ＪＭ Ｃｈ
ａｓｓｅｌｌｅら、Ｌａｎｃｅｔ，３４Ｂ：１４３，Ｊａｎ ２１，１９９５）
。^８ 初めに悪い予後を有する患者または寛解後に再発した患者。^９ 急性前骨髄球白血病を有する何人かの患者は、トラチノイン（ｔｒａｔｉｎ
ｏｉｎ）に対する完全な応答を有した。このような処置は、主に発熱および呼吸
困難により特徴付けられる有毒な症状を引き起こし得る（ＲＰ Ｗａｒｒｅｌｌ
，Ｊｒら、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．３２８：１７７，１９９３）。^１０ 同種異系ＨＬＡ同一同胞骨髄移植は、慢性期のＣＭＬの患者の４０％〜７
０％、加速期のＣＭＬの患者の１８％〜２８％、急性転化の患者の１５％未満を
治癒し得る。骨髄移植後の疾患を有さない生存率は、５０歳より大きい年齢、診
断から３年より長い疾患の持続時間、および１抗原不適合または適合無関係のド
ナーの骨髄の使用により悪影響を受けた。インターフェロンαはまた、慢性期の
ＣＭＬを有する患者（この患者は完全な細胞遺伝的応答（約１０％）を達成する
）において治癒的であり得；これは、新しく慢性期ＣＭＬと診断された８０歳を
越える年齢の患者、および同種異系骨髄移植の候補ではない全ての患者のために
選択される処置である。化学治療単独は待機的である。^１１ これらの組み合わせのいずれかを用いて第２の慢性期が達成される場合、
同種異系骨髄移植が考慮されるべきである。第２の慢性期における骨髄移植は、
ＣＭＬの患者の３０％〜３５％に対して治癒的であり得る。^１２ 極限段階のホジキン病（１段階および２段階）は、放射線治療によって治
癒可能である。播種性疾患（３ｂ段階および４段階）は、化学治療を必要とする
。いくつかの中間段階および選択された臨床的状況が、この両方から利益を受け
る。

【００７１】

【表３】 † 研究用途のためのみにＵＳＡで利用可能。 ‡ 用量制限効果は太字である。皮膚反応（時折、重篤）、色素過剰、および眼
毒性は、実質的に全ての非ホルモン性抗癌剤で報告された。他の薬物との悪い相
互作用については、Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｅｔｔｅｒ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ
Ａｄｖｅｒｓｅ Ｄｒｕｇ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，１９９５を参照のこと
。 １． 研究用途のためのみにＵＳＡで利用可能。 ２． メゲストロールおよび他のホルモン剤は、タモキシフェンで失敗した場合
の患者において有効であり得る。 ３． 高用量化学治療後（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｅｔｔｅｒ，３４：７８，１９９
２）。 ４． 直腸癌について、フルオロウラシルのみを用いる処置の前および後の、フ
ルオロウラシル＋放射線を用いる手術後のアジュバント処置。 ５． 薬物は、外科的切除、放射線治療またはその両方と組み合わせた場合にの
み、主な活性を有する。 ６． ビタミンＡアナログのイソトレチノイン（Ａｃｃｕｔａｎｅ）は、新生物
発生前のイシオン（ｉｓｉｏｎ）（白斑症）を制御し、そしてラットの第１の一
次腫瘍を減少させ得る（ＳＥ Ｓｅｎｎｅｒら、Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ
Ｉｎｓｔ．８８：１４０，１９９４）。 ７． 高リスク患者（例えば、高カウント、細胞遺伝異常、成人）は、誘導、維
持および「強化」（寛解の達成後のさらなる薬物の使用）のためのさらなる薬物
を必要とし得る。さらなる薬物としては、シクロホスファミド、ミトキサトロン
およびチオグアニンが挙げられる。イギリスにおける１つの大きな制御された試
行の結果は、強化がＡＬＬの全ての子供の生存率を改善し得ることを示唆する（
ＪＭ Ｃｈａｓｓｅｌｌａら、Ｌａｎｃｅｔ，３４８：１４３，Ｊａｎ ２１，
１９９８）。 ８． 初めに悪い予後を有する患者または寛解後に再発した患者。 ９． 急性前骨髄球白血病を有する何人かの患者は、トレチノインに対する完全
な応答を有した。このような処置は、主に発熱および呼吸困難により特徴付けら
れる有毒な症状を引き起こし得る（ＲＰ Ｗａｒｒｅｌｌ，Ｊｒら、Ｎ Ｅｎｇ
ｌ Ｊ Ｍｅｄ．３２９：１７７，１９９３）。 １０． 同種異系ＨＬＡ同一同胞骨髄移植は、慢性期のＣＭＬの患者の４０％〜
７０％、加速期のＣＭＬの患者の１５％〜２５％、急性転化の患者の１５％未満
を治癒し得る。骨髄移植後の疾患を有さない生存率は、５０歳より大きい年齢、
診断から３年より長い疾患の持続時間、および１抗原不適合または適合無関係の
ドナーの骨髄の使用により悪影響を受けた。インターフェロンαはまた、慢性期
のＣＭＬを有する患者（この患者は完全な細胞遺伝的応答（約１０％）を達成す
る）において治癒的であり得；これは、新しく慢性期ＣＭＬと診断された５０歳
を越える年齢の患者、および同種異系骨髄移植の候補ではない全ての患者のため
に選択される処置である。化学治療単独は待機的である。

【００７２】 （^９９ｍＴｃでのＣＥ−ＭＴＸおよびＥＣ−ＴＤＸの放射標識） ＥＣ−ホレートの合成について記載された同じ方法を使用して、ＥＣ−ＭＴＸ
およびＥＣ−ＴＤＸを調製した。標識手順は、ＥＣ−ＭＴＸおよびＥＣ−ＴＤＸ
を使用したこと以外は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ホレートの調製について記載された
手順と同じである。^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＴＸおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＴＤＸ
の合成を、図２および図３に示す。

【００７３】 （^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ホレート、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＴＸおよび^９９ｍＴｃ
−ＥＣ−ＴＤＸの安定性アッセイ） ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ホレート、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＴＸおよび^９９ｍＴｃ−
ＥＣ−ＴＤＸの安定性を、血清サンプル中で試験した。簡単には、７４０ＫＢｑ
の１ｍｇの^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ホレート、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＴＸおよび^{９９ ｍ} Ｔｃ−ＥＣ−ＴＤＸを、イヌ血清（２００μｌ）中で、３７℃で４時間インキ
ュベートした。この血清サンプルを、水中５０％メタノールで希釈し、そして放
射性ＴＬＣを、上記のように、０．５時間、２時間および４時間で繰り返した。

【００７４】 （組織分布研究） 雌性Ｆｉｓｃｈｅｒ ３４４ラット（１５０±２５ｇ）（Ｈａｒｌａｎ Ｓｐ
ｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）に、０．１ｍｌ
の乳癌細胞を、２５ゲージ針を使用して、０１３７６２腫瘍細胞株懸濁液（１０^６ 細胞／ラット、Ｆｉｘｃｈｅｒラットに特異的な腫瘍細胞株）から後脚に皮下
接種した。腫瘍の直径が約１ｃｍに達した場合、移植後１４〜１７日間研究を実
施した。各手順の前に、動物をケタミン（１０〜１５ｍｇ／ラット、腹腔内）で
麻酔した。

【００７５】 組織分布研究において、各動物に、３７０〜５５０ＫＢｑの^９９ｍＴｃ−ＥＣ
−ホレートまたは^９９ｍＴｃ−ＥＣを静脈内注射した（ｎ＝３／時点）。各リガ
ンドの注入質量は、１０μｇ／ラットであった。放射性医薬の投与後２０分、１
時間、２時間および４時間において、麻酔した動物を屠殺し、そして腫瘍および
選択した組織を切除し、計量し、そしてγ線計数器（Ｐａｃｋａｒｄ Ｉｎｓｔ
ｒｕｍｅｎｔｓ，Ｄｏｗｎｅｒｓ Ｇｒｏｖｅ，ＩＬ）で放射能をカウントした
。各サンプル中のトレーサーの体内分布を、組織の湿潤重量１ｇあたりの注射用
量の割合（％ＩＤ／ｇ）として算出した。元の注射液の希釈サンプルのカウント
を、参照のために使用した。腫瘍／非標的組織の計数密度比を、対応する％ＩＤ
／ｇ値から算出した。スチューデントｔ検定を使用して、２つの群間の差違の有
意性を評価した。

【００７６】 別の研究において、ブロッキング研究を行って、レセプター媒介型プロセスを
決定した。ブロッキング研究において、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ホレートを、腫瘍保
有マウスに、５０および１５０μｍｏｌ／ｋｇの葉酸と同時投与（ｉ．ｖ．）し
た（ｎ＝３／群）。注射の１時間後に動物を殺し、そしてデータを収集した。

【００７７】 （シンチグラフィー画像化およびオートラジオグラフィー研究） シンチグラフィー画像を、低エネルギー平行穴型コリメーターを備えるγ線カ
メラ（Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｏｆｆ
ｍａｎ Ｅｓｔａｔｅｓ，ＩＬ）を使用して、１８．５ＭＢｑの^９９ｍＴｃ標識
放射性トレーサーの静脈内注射後０．５時間、２時間および４時間で得た。

【００７８】 全身オートラジオグラフィーを、定量用画像分析器（Ｃｙｃｌｏｎｅ Ｓｔｏ
ｒａｇｅ Ｐｈｏｓｐｈｏｒ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｐａｃｋａｒｄ，Ｍｅｒｉｄｉａ
ｎ，ＣＩ．）によって得た。３７ＭＢｑの^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ホレートの静脈内
注射後１時間で動物を殺し、そして死体をカルボキシメチルセルロース（４％）
中に固定した。冷凍した死体をクリオスタット（ＬＫＢ ２２５０クリオマイク
ロトーム）中におき、そして１００μｍの冠状切片に切断した。各切片を解凍し
、そしてスライドに取り付けた。次いで、このスライドを汎用リン光ストレージ
スクリーン（ＭＰ，７００１４８０）に接触して配置し、そして１５時間^９９ｍ Ｔｃ標識に暴露した。このリン光スクリーンを赤色レーザー光で励起し、そして
以前に吸収されたエネルギーに比例する得られる青色光を記録した。

【００７９】 （結果） （^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ホレートの化学および安定性） 単純であり、高速かつ高収率のホレートのアミノエチルアミドおよびＥＣアナ
ログ、ＭＴＸおよびＴＤＸを開発した。これらのアナログの構造を、ＮＭＲおよ
び質量分光分析により確認した。ＥＣ−ホレートの^９９ｍＴｃでの放射性合成を
、高い（＞９５％）放射化学的純度で達成した。^９９ｍＴｃ−ＥＣホレートは、
イヌ血清サンプル中で、２０分、１時間、２時間および４時間において安定であ
ることが見出された。

【００８０】 （^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ホレートの体内分布） 体内分布研究により、２０分〜４時間における腫瘍／血液計数密度比は、^{９９ ｍ} Ｔｃ−ＥＣ−ホレートについて、徐々に増加し、一方、これらの値は、同じ時
間における^９９ｍＴｃ−ＥＣについて減少することが示された（図４）。^９９ｍ ＴＣ−ＥＣ−ホレートおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣの％ＩＤ／ｇ取込み値、腫瘍／血
液比、および腫瘍／筋肉比を、それぞれ、表３および４に示した。

【００８１】 （表３） 乳房腫瘍保有ラットにおける^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ホレートの体内分布

【００８２】

【表４】 示される値は、３匹の動物のデーターの平均±標準偏差を表す。

【００８３】 （シンチグラフィー画像化およびオートラジオグラフィー研究） 異なる時点において得られたシンチグラフィー画像は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−葉
酸を注射した群における腫瘍の可視化を示した。対照的に、^９９ｍＴｃ−ＥＣを
注射した群においては、明らかな腫瘍取り込みが存在しなかった（図６）。両方
の放射性トレーサーは、全ての画像における明らかな腎臓取込みを示した。^{９９ ｍ} Ｔｃ−ＥＣ−葉酸の注射の１時間後に実施したオートラジオグラムは、腫瘍の
活性を明らかに示した。

【００８４】 （実施例２：腫瘍低酸素症標的化） （２−（２−メチル−５−ニトロ−^１Ｈイミダゾリル）エチルアミン（メトロ
ニダゾルのアミノアナログＭＮ−ＮＨ_２）の合成） メトロニダゾルのアミノアナログを、以前に記載された方法に従って合成した
（Ｈａｙら、１９９４）。簡単に言えば、メトロニダゾルをメシル化アナログ（
ｍ．ｐ．１４９〜１５０℃、報告値１５３〜１５４℃、ＴＬＣ：酢酸エチル、Ｒ
ｆ＝０．４５）に転換し、７５％を得た。次いで、メシル化メトロニダゾルをア
ジ化ナトリウムと反応させて、アジドアナログ（ＴＬＣ：酢酸エチル、Ｒｆ＝０
．５２）を、収率８０％で得た。このアジドアナログを、トリフェニルホスフィ
ンによって還元し、そして所望のアミノアナログ（ｍ．ｐ．１９０〜１９２℃、
報告値１９４〜１９５℃、ＴＬＣ：酢酸エチル、Ｒｆ＝０．１５）を得た（６０
％）。ニンヒドリン（メタノール中２％）のスプレーは、ＭＮ−ＮＨ_２のアミノ
基の陽性を示した。構造を、^１Ｈ−ＮＭＲおよび質量分析（ＦＡＢ−ＭＳ）ｍ／
ｚ １７１（Ｍ^＋Ｈ，１００）によって確認した。

【００８５】 （エチレンジシステイン−メトロニダゾル（ＥＣ−ＭＮ）の合成） 水酸化ナトリウム（２Ｎ、０．２ｍｌ）を、水（５ｍｌ）中ＥＣ（１３４ｍａ
、０．５０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。この無色の溶液に、スルホ−ＮＨ
Ｓ（２１７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）および１〜）Ｃ（１９２ｍａ．１．０ｍｍｏ
ｌ）を添加した。次いで、ＭＮ−ＮＨ：二塩酸塩（３４０ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ
）を添加した。この材料（ｍａｔｕｒｅ）を室温で２４時間攪拌した。この混合
物を、５００でのカットオフを有するＳｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ分子多孔質膜（Ｓ
ｐｅｃｔｒｕｍ ＭｅｄｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｈｏｕｓｔ
ｏｎ，ＴＸ）を使用して、４８時間透析した。透析後、生成物を、凍結乾燥機（
Ｌａｂｃｏｎｃｏ，Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ，ＭＯ）を使用してフリーズドライ
した。生成物の重量は、３１５ｍｇであった（収率５５％）。^１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ_２ Ｏ）δ２．９３（ｓ、６Ｈ、ニトロイミダゾール−ＣＨ _３）、２．６０〜２．
９５（ｍ，４ＨおよびＥＣの−ＣＨ _２−ＳＨ）、３．３０〜３．６６（ｍ、８Ｈ
、ＥＣのエチレンジアミンおよびニトロイミダゾール−ＣＨ_２−ＣＨ _２−ＮＨ_２ ）、３．７０〜３．９９（ｔ、２Ｈ、ＥＣのＮＨ−ＣＨ−ＣＯ）、５．０５（ｔ
、４Ｈ、メトロニダゾル−ＣＨ _２−ＣＨ_２−ＮＨ_２）、（ｓ、２Ｈ、ニトロイミ
ダゾールＣ＝ＣＨ）。ＦＡＢ ＭＳ ｍ／ｚ ５７２（Ｍ^＋，２０）。ＥＣ−Ｍ
Ｎの合成スキームを、図７に示す。

【００８６】 （３−（２−ニトロ−^１Ｈ−イミダゾリル）プロピルアミン（ニトロイミダゾ
ールのアミノアナログＮＩＭ−ＮＨ_２）の合成） ２−ニトロイミダゾール（１ｇ、８．３４ｍｍｏｌ）およびＳｃ_２ＣＯ_３（２
．９ｇ，８．９０ｍｍｏｌ）を含むジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、５０ｍｌ）
中の攪拌溶液に、１，３−ジトシルプロパン（３．８４ｇ、９．９９ｍｍｏｌ）
を添加した。この反応物を８０℃で３時間加熱した。溶媒を減圧下でエバポレー
トし、そして残渣を酢酸エチル中に懸濁させた。固体を濾過し、溶媒を濃縮し、
シリカゲルを充填したカラムに装填し、そして、ヘキサン：酢酸エチル（１：１
）で溶出した。生成物である、３−トシルプロピル−（２−ニトロイミダゾール
）を、ｍ．ｐ．１０８〜１１１℃で単離した（１．６７ｇ、収率５７．５％）。^１ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ２．２３（ｍ、２Ｈ）、２．４８（Ｓ、３Ｈ）、
４．０６（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝５．７Ｈｚ）、４．５２（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．８Ｈｚ
）、７．０９（Ｓ、１Ｈ）、７．２４（Ｓ、１Ｈ）、７．４０（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝
８．２Ｈｚ）、７．７７（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．２Ｈｚ）。

【００８７】 次いで、トシル化２−ニトロイミダゾール（１．３３ｇ、４．０８ｍｍｏｌ）
を、ＤＭＦ（１０ｍｌ）中アジ化ナトリウム（Ｑ２９ｇ、４．４９ｍｍｏｌ）と
、１００℃で３時間反応させた。冷却後、水（２０ｍｌ）を添加し、そして生成
物を酢酸エチル（３×２０ｍｌ）から抽出した。溶媒を、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、
そして乾固するまでエバポレートして、アジドアナログ（０．６ｇ、７５％、Ｔ
ＬＣ：ヘキサン：酢酸エチル；１：１、Ｒｆ＝０．４２）を得た。^１Ｈ−ＮＭＲ
（ＣＤＣｌ_３）δ２．１４（ｍ、２Ｈ）、３．４１（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．２Ｈｚ
）、４．５４（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．９Ｈｚ）、７．１７（Ｓ、２Ｈ）。

【００８８】 このアジドアナログ（０．５７ｇ、２．９０ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラ
ン（ＰＨＩ；）中のトリフェニル（ｔａｐｈｅｎｙｌ）ホスフィン（１．１４ｇ
、４．３５ｍｍｏｌ）によって、室温で４時間還元した。濃ＨＣｌ（１２ｍｌ）
を添加し、そしてさらに５時間加熱した。生成物を、酢酸エチルと水との混合物
から抽出した。この酢酸エチルをＭｇＳＯ_４で乾燥し、そして乾固するまでエバ
ポレートして、アミン塩酸塩アナログを得た（３６０ｍａ、６０％）。ニンヒド
リン（メタノール中２％）のスプレーは、ＮＩＭ−ＮＨのアミノ基の陽性を示し
た。^１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ）δ２．２９（ｍ、２Ｈ）、３．１３（ｔ、２Ｈ、Ｊ
＝７．８Ｈｚ）、３．６０（ｂｒ、２Ｈ）、４．３５（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７．４Ｈ
ｚ）、７．５０（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．１Ｈｚ）、７．６３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．
１Ｈｚ）。

【００８９】 （エチレンジシステイン−ニトロイミダゾール（ＥＣ−ＮＩＭ）の合成） 水酸化ナトリウム（２Ｎ、０．６ｍｌ）を、ＥＣ（１３４ｍａ、０．５０ｍｍ
ｏｌ）の水（２ｍｌ）中の攪拌溶液に添加した。この無色の溶液に、スルホ−Ｎ
ＨＳ（２６０．６ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（２３０ｍａ、１．２ｍｍｏ
ｌ）および水酸化ナトリウム（２Ｎ、１ｍｌ）を添加した。次いでＮＩＭ−ＮＨ_２ 塩酸塩（２０６．６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を室温で
２４時間攪拌した。この混合物を、５００でのカットオフを有するＳｐｅｃｔｒ
ａ／ＰＯＲ分子多孔質膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒ
ｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）を使用して、４８時間透析した。透
析後、生成物を、凍結乾燥機（Ｌａｂｃｏｎｃｏ，Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ，Ｍ
Ｏ）を使用してフリーズドライした。生成物の重量は、５９４．８ｍｇであった
（収率９８％）。ＥＣ−ＮＩＭの合成スキームを、図８Ａに示す。構造を、^１Ｈ
−ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ）によって確認する（図８Ｂ）。

【００９０】 （ＥＣ−ＭＮおよびＥＣ−ＮＩＭの、^９９ｍＴｃでの放射性同位元素標識） ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＮＩＭの放射線合成を、必
要量の過テクネチウム酸を、ＥＣ−ＭＮまたはＥＣ−ＮＩＭの凍結乾燥した残渣
（３ｍｇ）、ＳｎＣｌ_２（１００μｇ）、Ｎａ_２ＨＰＯ_４（１３．５ｍｇ）、ア
スコルビン酸（０．５ｍｇ）およびＮａＥＤＴＡ（０．５ｍｇ）を含む自家製の
キットに添加することによって、達成した。調製物の最終ｐＨは、７．４であっ
た。放射化学的純度を、それぞれアセトン（系Ａ）および酢酸アンモニウム（水
中１Ｍ）：メタノール（４：１）（系Ｂ）で溶出するＴＬＣ（ＩＴＬＡＣ ＳＧ
、Ｇｅｌｍａｎ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ、ＭＩ）によって決定
した。放射線ＴＬＣ（Ｂｉｏｓｃａｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ）分析から
、両方の放射線トレースに対して放射化学的純度は９６％より高かった。

【００９１】 （［^１８Ｆ］ＦＭＩＳＯおよび［^１３１Ｉ］ＩＭＩＳＯの合成） ［Ｆ］フッ素を、小容量の銀標的において富化された^１８Ｏ−水のプロトン照
射を使用するサイクロトロンによって、生成した。トシルＭＩＳＯ（Ｈａｙら、
１９９４）（２０ｍｇ）を、アセトニトリル（１．５ｍｌ）に溶解し、クリプト
フィックス−フッ化物錯体に添加した。加熱後、加水分解およびカラム精製によ
り、２５〜４０％の収率（崩壊を補正した）の純粋な生成物を、６０分のボンバ
ードメントの終了（ＥＯＢ）において、単離した。ＨＰＬＣを、Ｃ−１８ ＯＤ
Ｓ−２０Ｔカラム（４．６×２５ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐ．，Ｍｉｌｆ
ｏｒｄ，Ｍａｓｓ）において、水／アセトニトリル（８０／２０）を用いて、１
ｍｌ／分の流速を使用して実施した。キャリアが添加されていない生成物は、類
似の条件下での非標識ＦＭＩＳＯの保持時間（６．１２分）に対応した。放射化
学的純度は、９９％より高かった。ＵＶ検出器（３１０ｎｍ）のもとで、他の不
純物は存在しなかった。決定した［^１８Ｆ］ＦＭＩＳＯの比活性は、既知の質量
および放射能のサンプルのＵＶおよび放射能検出に基づいて、１Ｃｉ／μｍｏｌ
であった。

【００９２】 ［^１３Ｉ］ＩＭＩＳＯを、同じ手順を使用して調製した（Ｃｈｅｒｉｆら、１
９９４）。簡単に言えば、５ｍｇのトシルＭＩＳＯをアセトニトリル（１ｍｌ）
に溶解し、そしてＮａ^１３１Ｉ（０．１ｍｌの１Ｎ ＮａＯＨ中１ｍＣｉ）（Ｄ
ｕｐｏｎｔ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ．ＭＡ）
を添加した。加熱および精製の後、生成物（収率６０〜７０％）を得た。放射線
ＴＬＣは、溶出液としてクロロホルムメタノール（７：３）を使用して、最終生
成物に対して０．０１のＲｆ値を示した。

【００９３】 （^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＮＩＭの安定性アッセイ
） 標識された^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＮＩＭの安定性
を、血清サンプルにおいて試験した。簡単に言えば、７４０ＫＢｑの１ｍｇの^{９ ９ｍ} Ｔｃ−ＥＣ−ＭＮおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＮＩＭを、イヌ血清（２００μ
ｌ）中３７℃で４時間インキュベートした。これらの血清サンプルを、水中５０
％メタノールで希釈し、そして放射線ＴＬＣを、上記のように、０．５時間、２
時間および４時間において繰り返した。

【００９４】 （^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮの組織分布研究） 雌性Ｆｉｓｃｈｅｒ３４４ラット（１５０±２５ｇ）（Ｈａｒｌａｎ Ｓｐｒ
ａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）に、１３７６２腫
瘍細胞株懸濁液（１０^６細胞／ラット、Ｆｉｓｃｈｅｒラットに対して特異的な
腫瘍細胞株）由来の０．１ｍｌの哺乳動物腫瘍細胞を、２５ゲージの針を使用し
て後肢に皮下接種した。研究を、移植の１４〜１７日後に、腫瘍がおおよそ１ｃ
ｍの直径に達したときに実施した。ラットをケタミン（１０〜１５ｍｇ／ラット
、腹腔内）で麻酔し、その後、それぞれの手順を行った。

【００９５】 組織分布研究において、各動物に、３７０〜５５０ＫＢｑの^９９ｍＴｃ−ＥＣ
−ＭＮまたは^９９ｍＴｃ−ＥＣ（ｎ＝３／時点）を静脈内注射した。^９９ｍＴｃ
−ＥＣ−ＭＮの注射した質量は、１匹のラットあたり１０μｇであった。放射線
トレーサーの投与の０．５時間後、２時間後および４時間後に、これらのラット
を屠殺し、そして選択した組織を切除し、秤量し、そして放射能を計数した。各
サンプルにおけるトレーサーの生体分布を、組織含水重量１グラムあたりの注射
用量の百分率（％ＩＤ／ｇ）として、算出した。腫瘍／非標的組織の計数密度比
を、対応する％ＩＤ／ｇ値から算出した。このデータを、同じ動物モデルを使用
して［^１８Ｆ］ＦＭＩＳＯおよび［^１３１Ｉ］ＩＭＩＳＯと比較した。Ｓｔｕｄ
ｅｎｔのｔ検定を使用して、群間の差異の有意性を評価した。

【００９６】 （シンチグラフィー画像化およびオートラジオグラフィー研究） 低エネルギーの平行穴コリメータを備えるγ線カメラ（Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｍｅ
ｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｏｆｆｍａｎ Ｅｓｔａｔｅｓ，Ｉ
Ｌ）を使用するシンチグラフィー画像を、１８．５ＭＢｑの各放射線トレーサー
の静脈内注射の０．５時間後、２時間後および４時間後に得た。

【００９７】 全身のオートラジオグラムを、定量的画像分析器（Ｃｙｃｌｏｎｅ Ｓｔｏｒ
ａｇｅ Ｐｈｏｓｐｈｏｒ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｐａｃｋａｒｄ，Ｍｅｒｉｄｉａｎ
，ＣＴ）によって得た。３７ＭＢｑの^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮの静脈内注射に続
いて、これらの動物を１時間で殺傷し、そしてその身体をカルボキシメチルセル
ロース（４％）に、以前に記載されたように固定した（Ｙａｎｇら、１９９５）
。凍結させた身体を低温槽（ＬＫＢ ２２５０クリオミクロトーム）に設置し、
そして１００μｍの冠状切片に切断した。各切片を解凍し、そしてスライドに載
せた。次いで、このスライドを多目的リン貯蔵スクリーン（ＭＰ、７００１４８
０）と接触させ、そして１５時間露光した。

【００９８】 ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＮＩＭが化学療法に対する腫瘍応答をモニタリングし得る
か否かを確認するために、腫瘍容量１．５ｃｍを有するラットおよび卵巣腫瘍保
有マウスの群を、パクリタキセル（４０ｍｇ／ｋｇ／ラット、８０ｍｇ／ｋｇ／
マウス、静脈内）で、単一用量で処置した。画像を、パクリタキセル処置の４日
後に撮像した。処置ありまたは処置なしでの、１グラムの腫瘍重量あたりの注射
された用量の百分率を、決定した。

【００９９】 （ポーラログラフィー酸素微小電極によるｐＯ_２測定） 腫瘍の低酸素症を確認するために、腫瘍内のｐＯ_２測定を、エッペンドルフコ
ンピュータ化ヒストグラムシステムを使用して、実施した。２〜３の直線軌道の
各々に沿った、２０〜２５のｐＯ_２測定を各腫瘍において０．４ｍｍの間隔で実
施した（合計４０〜７５の測定）。腫瘍ｐＯ測定を、３匹の腫瘍保有ラットにお
いて実施した。オンラインコンピュータシステムを使用して、各軌道のポット測
定を、この軌道に沿った測定点の位置に対して絶対的な値として表現し、そして
２．５ｍｍのクラス幅の０ｍｍＨｇと１００ｍｍＨｇとの間のｐＯ_２ヒストグラ
ムの相対頻度として、表した。

【０１００】 （結果） （^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＮＩＭの放射線合成およ
び安定性） ＥＣ−ＭＮおよびＥＣ−ＮＩＭの、^９９ｍＴｃでの放射線合成を、高い放射化
学的純度（９５％より高い）で達成し、放射化学的収率は１００％であった。^{９ ９ｍ} Ｔｃ−ＥＣ−ＭＮおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＮＩＭ（図１３）は、イヌ血清
サンプルにおいて、０．５時間、２時間および４時間安定であることが見出され
た。分解生成物は、観察されなかった。ＭＩＳＯの放射性フッ素化および放射性
ヨウ素化は、同じ前駆体を使用して、容易に達成された。両方の標識されたＭＩ
ＳＯアナログにおいて、放射化学的純度は、９９％より高かった。

【０１０１】 （インビボ組織分布研究） ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣの、腫瘍保有ラットにおける
組織分布を、表４および５に示す。イオン性^９９ｍＴｃに対する高い親和性に起
因して、有意な一貫した甲状腺取り込みは存在せず、インビボでの^９９ｍＴｃ−
ＥＣ−ＭＮの安定性を示唆する（表５）。

【０１０２】

【表５】 示される値は、３匹の動物からのデータの平均±標準偏差を表す。

【０１０３】 ブロッキング研究において、腫瘍／筋肉および腫瘍／血液の計数密度比は、葉
酸の同時投与によって、有意に低下した（ｐ＜０．０１）（図５）。

【０１０４】

【表６】 １．各ラットが、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−メトロニダゾル（１０μＣｉ、静脈内）を
受容した。各値は、１グラムの重量あたりの注射用量（ｎ＝３）／時間間隔の百
分率である。各データは、標準偏差を伴う３回の測定の平均を表す。

【０１０５】 生体分布研究は、０．５４時間における腫瘍／血液および腫瘍／筋肉の計数密
度比が、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＮＭ、［^１８Ｆ］ＦＭＩＳＯおよび［^１３１Ｉ］Ｉ
ＭＩＳＯにおいては次第に増加し、一方でこれらの値は、同じ時間において、^{９ ９ｍ} Ｔｃ−ＥＣについては変化しないことを示した（図９および図１０）。［^{１ ８} Ｆ］ＦＭＩＳＯは、注射後３０分、２時間および４時間において、［^１３１Ｉ
］ＩＭＩＳＯおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮの取り込み比と比較して、最も高い
腫瘍対血液の取り込み比を示した。注射後２時間および４時間における^９９ｍＴ
ｃ−ＥＣ−ＭＮおよび［^１３１Ｉ］ＩＭＩＳＯについての、腫瘍／血液および腫
瘍／筋肉の比は、有意には異ならなかった（ｐ＜０．０５）。

【０１０６】 （シンチグラフ画像化およびオートラジオグラフィー研究） 異なる時点において得られたシンチグラフィー画像は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−Ｍ
Ｎおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＮＩＭ群における腫瘍の可視化を示した。対照的に
、^９９ｍＴｃ−ＥＣを注射した群においては、明らかな腫瘍の取り込みが存在し
なかった（図１１）。^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮの注射の１時間後に実施したオー
トラジオグラムは、明らかに、腫瘍活性を示した（図１２）。^９９ｍＴｃ−ＥＣ
−ＮＭと比較して、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＮＩＭは、より高い腫瘍対バックグラウ
ンドの比に起因して、より良好なシンチグラフィー画像を提供するようであった
。乳房腫瘍保有ラットにおいて、腫瘍の取り込みは、^９９ｍＴｃ−ＥＣと比較し
て、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＮＩＭ群において顕著に高かった（図１４Ａ）。１グラ
ムの腫瘍の重量あたりの^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＮＩＭの注射用量の百分率から得た
れたデータは、コントロール群と比較した場合に、パクリタキセルで処置したラ
ットにおいて、２５％が取り込みを低下したことを示した（図１４Ｂ）。

【０１０７】 卵巣癌保有マウスにおいて、パクリタキセルで処置したマウスにおける低下し
た腫瘍取り込みが存在した（図１５Ａおよび図１５Ｂ）。類似の結果が、肉腫保
有において観察された（図１５Ｃおよび図１５Ｄ）。従って、^９９ｍＴｃ−ＥＣ
−ＮＩＭは、パクリタキセル処置に対する腫瘍応答を評価するために、使用され
得る。

【０１０８】 （ポーラログラフィー酸素微小電極によるｐＯ_２測定） 腫瘍の腫瘍内ＰＯ_２測定は、腫瘍の酸素圧力が、正常筋肉の３５±１０ｍｍＨ
ｇと比較して、４．６±４．１ｍｍＨｇの範囲であることを示した。このデータ
は、腫瘍が低酸素症であることを示す。

【０１０９】 （実施例３：癌のペプチド画像化） （エチレンジシステイン−ペンタグルタミン酸（ＥＣ−ＧＡＰ）の合成） 水酸化ナトリウム（１Ｎ，１ｍｌ）を、水（１０ｍｌ）中のＥＣ（２００ｍｇ
、０．７５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に添加した。この無色溶液に、スルホＮＨＳ（
１６２ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（１４３ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ
）を添加した。次いでペンタグルタミン酸ナトリウム塩（Ｍ．Ｗ．７５０〜１５
００、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）（５００ｍｇ、０．６
７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２４時間室温で撹拌した。混合物を、５００
のカットオフを有するＳｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ分子多孔膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）を
使用して４８時間透析した。透析後、生成物を、凍結乾燥機（Ｌａｂｃｏｎｃｏ
，Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ，ＭＯ）を使用して凍結乾燥した。塩形態の生成物は
、０．９５ｇの重さであった。ＥＣ−ＧＡＰの合成スキームは、図１６に示す。

【０１１０】 （^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＧＡＰの安定性アッセイ） ^９９ｍＴｃでのＥＣ−ＧＡＰの放射性標識を、以前に記載されたのと同じ手順
を使用して達成した。放射化学純度は、１００％であった。^９９ｍＴｃ−ＥＣ−
ＧＡＰの安定性を、血清サンプル中で試験した。手短にいうと、７４０ＫＢｑの
１ｍｇ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＧＡＰを、３７℃で４時間、イヌ血清（２００μｌ）
中でインキュベートした。血清サンプルを、水中５０％メタノールで希釈し、そ
して放射性ＴＬＣを、上記のように、０．５時間、２時間、および４時間で繰り
返した。

【０１１１】 （シンチグラフィー画像化研究） 低エネルギーの、平行な穴のコリメータを備えたγカメラを使用して、シンチ
グラフィー画像を、１８．５ＭＢｑの各放射性トレーサーの静脈内注射の０．５
時間、２時間および４時間後に得た。

【０１１２】 （結果） （^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＧＡＰの安定性アッセイ） ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＧＡＰは、イヌ血清サンプル中で、０．５時間、２時間お
よび４時間で安定であることが見出された。分解産物は、観察されなかった。

【０１１３】 （シンチグラフィー画像化研究） 異なる時点で得られたシンチグラフィー画像は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＧＡＰ群
において腫瘍の可視化を示した。最適な取り込みは、投与後３０分〜１時間であ
る（図１７）。

【０１１４】 （実施例４：腫瘍アポトーシス細胞の画像化） （エチレンジシステイン−アネキシンＶ（ＥＣ−ＡＮＮＥＸ）の合成） 炭酸水素ナトリウム（１Ｎ、１ｍｌ）を、ＥＣ（５ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ
）の撹拌溶液に添加した。この無色溶液に、スルホＮＨＳ（４ｍｇ、０．０１９
ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（４ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）を添加した。次いでア
ネキシンＶ（Ｍ．Ｗ．３３ｋＤ、ヒト、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍ
ｐａｎｙ）（０．３ｍｇ）を添加した。混合物を２４時間室温で撹拌した。混合
物を、１０，０００のカットオフを有するＳｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ分子多孔膜（
Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｈｏｕ
ｓｔｏｎ，ＴＸ）を使用して４８時間透析した。透析後、生成物を、凍結乾燥機
（Ｌａｂｃｏｎｃｏ，Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ，ＭＯ）を使用して凍結乾燥した
。塩形態の生成物は、１２ｍｇの重さであった。

【０１１５】 （^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＡＮＮＥＸの安定性アッセイ） ^９９ｍＴｃでのＥＣ−ＡＮＮＥＸの放射性標識を、ＥＣ−ＧＡＰにおいて記載
されたのと同じ手順を使用して達成した。放射化学純度は、１００％であった。
標識した^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＡＮＮＥＸの安定性を、血清サンプル中で試験した
。手短にいうと、７４０ＫＢｑの１ｍｇ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＡＮＮＥＸを、３７
℃で４時間、イヌ血清（２００μｌ）中でインキュベートした。血清サンプルを
、水中５０％メタノールで希釈し、そして放射性ＴＬＣを、上記のように、０．
５時間、２時間、および４時間で繰り返した。

【０１１６】 （シンチグラフィー画像化研究） 低エネルギーの、平行な穴のコリメータを備えたγカメラを使用して、シンチ
グラフィー画像を、１８．５ＭＢｑの各放射性トレーサーの静脈内注射の０．５
時間、２時間および４時間後に得た。使用した動物モデルは、乳房、卵巣および
肉腫であった。乳房腫瘍および卵巣腫瘍を有する両方のラットは、高いアポトー
シス性の細胞を過剰発現することが知られている。画像化研究を、腫瘍細胞接種
後１４日で行なった。腫瘍処置応答を確かめるために、画像化前のマウスを、パ
クリタキセル投与し（８０ｍｇ／Ｋｇ、静脈内注射、１４日目）、そして画像を
１８日目に取った。

【０１１７】 （結果） （^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＡＮＮＥＸの安定性アッセイ） ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＡＮＮＥＸは、イヌ血清サンプル中で、０．５時間、２時
間および４時間で安定であることが見出された。分解産物は、観察されなかった
。

【０１１８】 （シンチグラフィー画像化研究） 異なる時点で得られたシンチグラフィー画像は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＡＮＮＥ
Ｘ群において腫瘍の可視化を示した（図１８〜２０）。画像は、高度にアポトー
シス性の細胞が、より多くの^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＡＮＮＥＸの取り込みを有する
ことを示した。高いアポトーシス（卵巣腫瘍保有）群（図１９Ａおよび図１９Ｂ
）および低アポトーシス（肉腫腫瘍保有）群（図２０Ａおよび図２０Ｂ）におけ
るパクリタキセル処理前とパクリタキセル処理後との間に、腫瘍取り込みの顕著
な差異は、存在しなかった。

【０１１９】 （実施例５：腫瘍新脈管形成の画像化） （（コルヒチンのアミノアナログ、ＣＯＬ−ＮＨ_２）の合成） コルヒチンの脱メチル化アミノアナログおよび脱メチル化ヒドロキシアナログ
を以前に記載された方法（Ｏｒｒら、１９９５）に従って合成した。手短にいう
と、コルヒチン（４ｇ）を、２５％硫酸を含む１００ｍｌの水中に溶解した。反
応混合物を、１００℃で５時間加熱した。混合物を、炭酸ナトリウムを用いて中
和した。生成物をろ過し、そして、凍結乾燥機で乾燥し、２．４ｇ（７０％）の
所望のアミノアナログ（融点１５３〜１５５℃、１５５〜１５７℃と報告されて
いる）を生じた。ニンヒドリン（メタノール中２％）噴霧は、ＣＯＬ−ＮＨ_２の
アミノ基の陽性を示した。構造を、^１Ｈ−ＮＭＲおよび質量分析法（ＦＡＢ−Ｍ
Ｓ）によって確かめた。

【０１２０】

【数１】 （エチレンジシステイン−コルヒチン（ＥＣ−ＣＯＬ）の合成） 水酸化ナトリウム（２Ｎ，０．２ｍｌ）を、水（５ｍｌ）中のＥＣ（１３４ｍ
ｇ、０．５０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に添加した。この無色溶液に、スルホＮＨＳ
（２１７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（１９２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）
を添加した。次いでＣＯＬ−ＮＨ_２（３４０ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）を添加した
。混合物を２４時間室温で撹拌した。混合物を、５００のカットオフを有するＳ
ｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ分子多孔膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｉｎｄ
ｕｓｔｒｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）を使用して４８時間透析し
た。透析後、生成物を、凍結乾燥機（Ｌａｂｃｏｎｃｏ，Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔ
ｙ，ＭＯ）を使用して凍結乾燥した。塩形態の生成物は、３１５ｍｇの重さであ
った（収率５５％）。

【０１２１】

【数２】 ＥＣ−ＣＯＬの合成スキームを、図２１に示す。

【０１２２】 （ＥＣ−ＣＯＬおよびＥＣの^９９ｍＴｃを用いる放射性標識） ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＬの放射性合成を、ＥＣ−ＣＯＬの凍結乾燥残渣（５
ｍｇ）、ＳｎＣｌ_２（１００μｇ）、Ｎａ_２ＨＰＯ_４（１３．５ｍｇ）、アスコ
ルビン酸（０．５ｍｇ）およびＮａＥＤＴＡ（０．５ｍｇ）を含む自家製キット
へ必要な量の^９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸を添加することによって達成した。
調製物の最終ｐＨは、７．４であった。^９９ｍＴｃ−ＥＣはまた、ｐＨ１０で、
ＥＣの凍結乾燥残渣（５ｍｇ）、ＳｎＣｌ_２（１００μｇ）、Ｎａ_２ＨＰＯ_４（
１３．５ｍｇ）、アスコルビン酸（０．５ｍｇ）およびＮａＥＤＴＡ（０．５ｍ
ｇ）を含む自家製キットを使用することによって得た。次いで、調製物の最終ｐ
Ｈを７．４に調整した。放射化学純度を、酢酸アンモニウム（水中１Ｍ）：メタ
ノール（４：１）を用いて溶出するＴＬＣ（ＩＴＬＣ ＳＧ，Ｇｅｌｍａｎ Ｓ
ｃｉｅｎｃｅｓ，Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）によって決定した。放射線−薄層
クロマトグラフィー（ＴＬＣ，Ｂｉｏｓｃａｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ）
を使用して、両方の放射線トレーサについての放射化学純度を分析した。

【０１２３】 （^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＬの安定性アッセイ） 標識された^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＬの安定性を、血清サンプル中で試験した
。手短にいうと、７４０ＫＢｑの５ｍｇ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＬを、３７℃で
４時間、ウサギ（ｒａｂｂｉｎａｔｅ）血清（５００μｌ）中でインキュベート
した。血清サンプルを、水中５０％メタノールで希釈し、そして放射性ＴＬＣを
、上記のように、０．５時間、２時間、および４時間で繰り返した。

【０１２４】 （組織分布研究） 雌性Ｆｉｓｃｈｅｒ３４４ラット（１５０±２５ｇ）（Ｈａｒｌａｎ Ｓｐｒ
ａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を、２５ゲージ針
を使用して後肢に、１３７６２腫瘍細胞株懸濁液（１０細胞／ラット、Ｆｉｓｃ
ｈｅｒラットに特異的な腫瘍細胞株）由来の０．１ｍｌの乳房腫瘍細胞で皮下接
種した。研究を、腫瘍が直径約１ｃｍに達した、移植後１４〜１７日で行なった
。ラットを、各手順の前に、ケタミン（１０〜１５ｍｇ／ラット、腹腔内）で麻
酔した。

【０１２５】 組織分布研究において、各動物を、３７０〜５５０ＫＢｑの^９９ｍＴｃ−ＥＣ
−ＣＯＬまたは^９９ｍＴｃ−ＥＣで静脈内注射した（ｎ＝３／時点）。^９９ｍＴ
ｃ−ＥＣ−ＣＯＬの注射された質量は、１匹のラット当り１０μｇであった。放
射線トレーサの投与０．５時間、２時間および４時間後、ラットを屠殺し、そし
て選択した組織を切り出し、秤量し、そして放射能についてカウントした。各サ
ンプルにおけるトレーサーの体内分布を、１ｇの組織湿重量当りの注射された用
量の割合として計算した（％ＩＤ／ｇ）。腫瘍／非標的組織カウント密度比を、
対応する％ＩＤ／ｇ値から計算した。スチューデントｔ検定を使用して、群の間
の差異の有意性を評価した。

【０１２６】 （シンチグラフィー画像化研究） 低エネルギーの、平行な穴のコリメータを備えたγカメラ（Ｓｉｅｍｅｎｓ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｏｆｆｍａｎ Ｅｓｔａｔｅｓ
，ＩＬ）を使用して、シンチグラフィー画像を、３００μＣｉの^９９ｍＴｃ−Ｅ
Ｃ−ＣＯＬおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣの静脈内注射の０．５時間、２時間および４
時間後に得た。コンピューターで概略した目的の領域（ＲＯＩ）を使用して、腫
瘍取り込み対正常筋肉取り込みを定量する（１画素当りのカウント）。

【０１２７】 （結果） （^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＬの放射性合成および安定性） ^９９ｍＴｃでのＥＣ−ＣＯＬの放射性合成を、高い（＞９５％）放射化学的純
度で達成した（図２１）。^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＬは、は、ウサギ血清サンプ
ル中で、０．５時間、２時間および４時間で安定であることが見出された。分解
産物は、観察されなかった（図２２）。

【０１２８】 （インビボ体内分布） 乳房腫瘍保有ラットにおける^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＬおよび^９９ｍＴｃ−Ｅ
Ｃのインビボ体内分布を、表４および６に示す。０．５時間、２時間および４時
間における^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＬの腫瘍取り込み値（％ＩＤ／ｇ）は、０．
４３６±０．０８９、０．３９５±０．１５４および０．２２１±０．００６で
あったが（表６）、^９９ｍＴｃ−ＥＣについての体内分布は、それぞれ０．３４
２±０．１６３、０．１１５±０．００２および０．０９７±０．００５であっ
た（表４）。時間の関数としての増加した腫瘍対血液比（０．５２±０．１２か
ら０．７２±０．０７）および腫瘍対筋肉比（３．４７±０．４０から７．９７
±０．９３）は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＬ群において観察された（図２３）。
逆に、腫瘍対血液値および腫瘍対筋肉値は、同じ期間における^９９ｍＴｃ−ＥＣ
−ＣＯＬ群と比較した場合、^９９ｍＴｃ−ＥＣでの時間依存性の減少を示した（
図２４）。

【０１２９】

【表７】 ＊各ラットは、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−コルヒチン（１０μＣｉ、静脈内）を受けた
。各値は、時間間隔あたり１グラム組織重量（ｎ＝３）当りの注射された用量の
パーセントである。各データは、標準偏差を有する３つの測定値の平均値を示す
。

【０１３０】

【表８】 （乳房腫瘍保有ラットにおける^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＬのγシンチグラフィ
ー画像化） 投与後１時間での３匹の乳房腫瘍保有ラットにおけるインビトロ画像化研究は
、腫瘍が^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＬ群で十分に可視化され得ることを示したが（
図２５）、^９９ｍＴｃ−ＥＣ群においてより少ない腫瘍取り込みが観察された（
図２６）。コンピューターで概略した目的の領域（ＲＯＩ）は、^９９ｍＴｃ−Ｅ
Ｃ−ＣＯＬ群における腫瘍／バックグラウンド比が、^９９ｍＴｃ−ＥＣ群よりも
有意に高いことを示した（図２７）。

【０１３１】 （腫瘍解糖標的化） （実施例６：^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシンの開発） （ＥＣの合成） ＥＣを、以前に記載された方法（ＲａｔｎｅｒおよびＣｌａｒｋｅ，１９３７
；Ｂｌｏｎｄｅａｕら、１９６７）に従って、２工程合成で調製した。前駆体（
Ｌ−チアゾリジン−４−カルボン酸）を合成した（融点１９５°、１９６〜１９
７°と報告されている）。次いでＥＣを調製した（融点２３７°、２５１〜２５
３°と報告されている）。構造を、^１Ｈ−ＮＭＲおよび高速原子衝撃質量分析（
ＦＡＢ−ＭＳ）によって確認した。

【０１３２】 （エチレンジシステイン−ネオマイシン（ＥＣ−ネオマイシン）の合成） 水酸化ナトリウム（２Ｎ、０．２ｍｌ）を、水中（５ｍｌ）のＥＣ（１３４ｍ
ｇ、０．５０ｍｍｏｌ）の攪拌した溶液に添加した。この無色の溶液に、スルホ
−ＮＨＳ（２１７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（１９２ｍｇ、１．０ｍ
ｍｏｌ）を添加した。次いで、ネオマイシントリスルフェート塩（９０９ｍｇ、
１．０ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を、室温にて２４時間攪拌した。この
混合物を、５００のカットオフ値を有するＳｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ分子多孔性膜
（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｈｏ
ｕｓｔｏｎ，ＴＸ）を使用して４８時間透析した。透析後、生成物を、凍結乾燥
器（Ｌａｂｃｏｎｃｏ，Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ，ＭＯ）を使用して凍結乾燥し
た。生成物の重量は、７２０ｍｇ（収率８３％）であった。ＥＣ−ネオマイシン
の合成スキームを図３６に示す。この構造を、^１Ｈ−ＮＭＲ（図３８Ａ〜Ｂ）、
質量分析計（図３９Ａ〜Ｂ）および元素分析（Ｇａｌｂｒａｉｔｈ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ，Ｋｎｏｘｖｉｌｌｅ，ＴＮ）によって確かめる。元素
分析Ｃ_３９Ｈ_７５Ｎ_１０Ｓ_４Ｏ_１９・１５Ｈ_２Ｏ（Ｃ、Ｈ、Ｎ、Ｓ）、計算値
Ｃ：３３．７７、Ｈ：７．５８、Ｎ：１０．１１、Ｓ：９．２３；実測値 Ｃ：
３２．４４、Ｈ：５．９０、Ｎ：１０．４７、Ｓ：１０．５８．ＥＣ−ネオマイ
シンのＵＶ波長は、ＥＣおよびネオマイシンと比較した場合に、２７０．５ｎｍ
シフトした（図４０Ａ〜Ｃ）。

【０１３３】 （^９９ｍＴｃでのＥＣ−ＭＮおよびＥＣ−ネオマイシンの放射標識） ^９９ｍＴｃ−ＥＣおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシンの放射合成（ｒａｄ
ｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）を、ＥＣまたはＥＣ−ネオマイシンの凍結乾燥化残渣
（１０ｍｇ）、ＳｎＣｌ_２（１００μｇ）、Ｎａ_２ＨＰＯ_４（１３．５ｍｇ）お
よびアスコルビン酸（０．５ｍｇ）を含む手製のキットに、必要量の^９９ｍＴｃ
−パラテクネテート（ｐｅｒｔｅｃｈｎｅｔａｔｅ）を添加することによって達
成した。次いで、０．１ｍｌ水中のＮａＥＤＴＡ（０．５ｍｇ）を添加した。調
製物の最終ｐＨは、７．４であった。放射化学的純度を、酢酸アンモニウム（水
中１Ｍ）：メタノール（４：１）で溶出されるＴＬＣ（ＩＴＬＣ ＳＧ，Ｇｅｌ
ｍａｎ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）によって決定した。放
射ＴＬＣ（Ｂｉｏｓｃａｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ）分析（図４１）およ
びＨＰＬＣ分析（図４２〜４５）から、放射化学的純度は、両方の放射性トレー
サーについて９５％を超えた。

【０１３４】 （^９９ｍＴｃ−ＥＣおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシンの安定性アッセイ
） 標識した^９９ｍＴｃ−ＥＣおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシンの安定性を
、イヌ血清サンプル中で試験した。手短に言うと、７４０ＫＢｑの１ｍｇの^{９９ ｍ} Ｔｃ−ＥＣおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシンを、イヌ血清中（２００μ
ｌ）で３７℃にて４時間インキュベートした。この血清サンプルを、水中の５０
％メタノールで希釈し、そして放射−ＴＬＣを、上記のように０．５時間、２時
間および４時間で繰り返した。

【０１３５】 （^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシンの組織分布研究） 雌性Ｆｉｓｈｃｅｒ ３４４ラット（１５０±２５ｇ）（Ｈａｒｌａｎ Ｓｐ
ｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）に、２５ゲージ
針を用いて、１３７６２腫瘍細胞株懸濁液由来の０．１ｍｌの乳房腫瘍細胞（１
０^６細胞／ラット、Ｆｉｓｃｈｅｒラットに特異的な腫瘍細胞株）を後脚に皮下
接種した。腫瘍が約１ｃｍ直径に到達する移植後１４〜１７日に、研究を行った
。ラットを、各手順の前にケタミン（１０〜１５ｍｇ／ラット、腹腔内）で麻酔
した。

【０１３６】 組織分布研究において、各動物に、１０〜２０μＣｉの^９９ｍＴｃ−ＥＣまた
は^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシン（ｎ＝３／時点）を静脈内注射した。^９９ｍ Ｔｃ−ＥＣ−ネオマイシンの注射した量は、２００μｇ／ラットであった。これ
らの放射トレーサーの投与後０．５時間、２時間および４時間で、ラットを屠殺
し、そして選択した組織を切り出し、重さを量り、そして放射活性を計数した。
各サンプル中のトレーサーの体内分布を、１ｇ組織湿重量あたりの注射用量のパ
ーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）として計算した。腫瘍／非標的組織の計数密度比を
、対応する％ＩＤ／ｇ値から計算した。^９９ｍＴｃ−ＥＣ（表４）および遊離テ
クネチウム（表９）と比較した場合、腫瘍対組織比は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオ
マイシン群において時間の関数として増加した（表８）。

【０１３７】 （シンチグラフィー画像化研究） 低エネルギーの平行穴コリメーターを備えたγカメラ（Ｓｉｍｅｎｓ Ｍｅｄ
ｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｏｆｆｍａｎ Ｅｓｔａｔｅｓ，ＩＬ
）を使用して、シンチグラフィー画像を、１００μＣｉの各放射トレーサーの静
脈内注射後０．５時間、２時間および４時間で得た。^９９ｍＴｃ−ＥＣと比較し
て、腫瘍中の高い取り込みが観察された（図３７Ａ）。予備的な臨床画像化研究
を、乳癌を有する患者において行った。腫瘍は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシ
ンの投与後２時間で十分に可視化された（図３７Ｂ）。

【０１３８】 （表８） （乳房腫瘍保有ラットにおける^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシンの体内分布）

【０１３９】

【表９】 示された値は、３匹の動物からのデータの平均±標準偏差を表す。

【０１４０】 （表９） （乳房腫瘍保有ラットにおける^９９ｍＴｃパーテクネテートの体内分布）

【０１４１】

【表１０】 示された値は、３匹の動物からのデータの平均±標準偏差を表す。

【０１４２】 （^９９ｍＴｃ−ＥＣ−薬物結合体のインビトロ細胞取り込み） ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−薬物結合体の細胞取り込みを評価するために、８０，００
０個の細胞（Ａ５４９肺癌細胞株）を含む各ウェルに、２μＣｉの^９９ｍＴｃ−
ＥＣ−ネオマイシンおよび^１８Ｆ−ＦＤＧを添加した。インキュベーション後０
．５〜４時間で、細胞を、リン酸緩衝化生理食塩水で３回洗浄し、次いで、トリ
プシンによって細胞を死なせた。次いで、細胞を、γカウンターによって計数し
た。^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシンは、ヒト肺癌細胞株中で試験した薬剤中で
最も高い取り込みを示した（図４６）。

【０１４３】 （^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシンおよび^１８Ｆ−ＦＤＧの細胞取り込みに対
するグルコースの効果） ネオマイシンは、グルコース吸収に影響を及ぼすことが知られている（Ｒｏｇ
ｅｒｓら、１９６８；Ｆａｎｃｉｕｌｌｉら、１９９４）。先の実験は、^９９ｍ Ｔｃ−ＥＣ−ネオマイシンが、ヒト肺癌細胞株（Ａ５４９）中で^１８Ｆ−ＦＤＧ
よりも高い取り込みを有することを示した。^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシンの
取り込みがグルコース関連機構を介して媒介されるか否かを決定するために、グ
ルコース（０．１ｍｇ〜２．０ｍｇ）を、５０，０００個の（乳房）細胞または
８０，０００個の（肺）細胞のいずれかを含有する各ウェルに、２μＣｉの^{９９ ｍ} Ｔｃ−ＥＣ−ネオマイシンおよび^１８Ｆ−ＦＤＧと共に添加した。インキュベ
ーション後、細胞を、リン酸緩衝化生理食塩水で３回洗浄し、次いで、トリプシ
ンによって細胞を死なせた。次いで、細胞を、γカウンターによって計数した。

【０１４４】 ０．１〜２．０ｍｇ／ウェルの濃度でグルコースを添加することによって、２
つの肺癌細胞株および１つの乳房細胞株における^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシ
ンの取り込みの減少が観察された。類似の結果が、^１８Ｆ−ＦＤＧ群において観
察された。^９９ｍＴｃ−ＥＣ（コントロール）は、取り込みを全く示さなかった
。これらの知見は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシンの細胞取り込みが、グルコ
ース関連機構を介して媒介され得ることを示唆する（図４７、４８Ａおよび４８
Ｂ）。

【０１４５】 （実施例７：^９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコースでの腫瘍の代謝画像化） （ＥＣ−デオキシグルコース（ＥＣ−ＤＣ）の合成） 水酸化ナトリウム（１Ｎ、１ｍｌ）を、水中（５ｍｌ）のＥＣ（１１０ｍｇ、
０．４１ｍｍｏｌ）の攪拌した溶液に添加した。この無色の溶液に、スルホ−Ｎ
ＨＳ（２４１．６ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（２１８．８ｍｇ、１
．１５ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、Ｄ−グルコサミン塩酸塩（３５６．８ｍ
ｇ、１．６５ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を、室温にて２４時間攪拌した
。この混合物を、５００のカットオフ値を有するＳｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ分子多
孔性膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｉｎｃ．
，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）を使用して４８時間透析した。透析後、生成物を、凍
結乾燥器（Ｌａｂｃｏｎｃｏ，Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ，ＭＯ）を使用して凍結
乾燥した。塩形態の生成物の重量は、５６８．８ｍｇであった。この合成スキー
ムを図５９に示す。この構造を、質量分析計（図６０）およびプロトンＮＭＲ（
図６１および６２）で確かめた。^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＣの放射化学的純度は、
放射−ＴＬＣ（図６３）およびＨＰＬＣ（図６４および６５）分析によって決定
した場合１００％であった。

【０１４６】 （ヘキソキナーゼアッセイ） ＥＣ−ＤＧがグルコースリン酸化を模倣するか否かを決定するために、ヘキソ
キナーゼアッセイを行った。既製のキット（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃ
ｏｍｐａｎｙ）を使用して、ＥＣ−ＤＧ、グルコサミンおよびグルコース（標準
）を、ＵＶ波長３４０ｎｍでアッセイした。グルコース、ＥＣ−ＤＧおよびグル
コサミンは、陽性ヘキソキナーゼアッセイを示した（図６６〜６８）。

【０１４７】 （インビトロ細胞取り込みアッセイ） インビトロ細胞取り込みアッセイを、ヒト肺癌細胞株（Ａ５４９）を使用する
ことによって行った。２μＣｉの^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧおよび^１８Ｆ−ＦＤＧ
を、各８０，０００個の細胞を含有するウェルに添加した。インキュベーション
後０．５〜４時間で、細胞を、リン酸緩衝化生理食塩水で３回洗浄し、次いで、
トリプシンによって細胞を死なせた。次いで、細胞を、γカウンターによって計
数した。^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧの取り込みは、ＦＤＧに匹敵した（図６９）。

【０１４８】 （^９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコースおよび^１８Ｆ−ＦＤＧの細胞取り込
みに対するｄ−グルコースおよびｌ−グルコースの効果） ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコースの取り込みがｄ−グルコース関連機構
を介して媒介されるか否かを評価するために、ｄ−グルコースおよびｌ−グルコ
ース（１ｍｇおよび２．０ｍｇ）を、乳癌細胞または肺癌細胞（５０，０００個
／０．５ｍｌ／ウェル）のいずれかを含有する各ウェルに、２μＣｉの^９９ｍＴ
ｃ−ＥＣ−デオキシグルコースおよび^１８Ｆ−ＦＤＧと共に添加した。２時間の
インキュベーション後、細胞を、リン酸緩衝化生理食塩水で３回洗浄し、次いで
、トリプシンによって細胞を死なせた。細胞を、γカウンターによって計数した
。

【０１４９】 １〜２．０ｍｇ／ウェルの濃度でグルコースを添加することによって、乳癌細
胞および肺癌細胞における^９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコースおよび^１８Ｆ
−ＦＤＧの取り込みの減少が観察された。しかし、ｌ−グルコースによる両薬剤
に対する影響は存在しなかった（図７０〜７３）。これらの知見は、^９９ｍＴｃ
−ＥＣ−デオキシグルコースの細胞取り込みが、ｄ−グルコース機構を介して媒
介されることを示唆する。

【０１５０】 （正常ラットにおける血中グルコースレベルに対するＥＣ−デオキシグルコー
ス負荷の効果） 先の実験は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコースの細胞取り込みが、ＦＤ
Ｇに類似することを示した。例えば、ヘキソキナーゼアッセイ（グルコースリン
酸化）は、陽性であった。^９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコースの取り込みは
、ｄ−グルコース機構を介して媒介される。この研究は、血中グルコースレベル
がＦＤＧまたはＥＣ−デオキシグルコースのいずれかによって誘導され得、そし
てインスリンによって抑制され得るか否かを決定することである。

【０１５１】 正常な健常Ｆｉｓｃｈｅｒ ３４４ラット（重量１４５〜１５５ｇ）を、実験
前に一晩絶食させた。調製した塩酸グルコサミン、ＦＤＧおよびＥＣ−デオキシ
グルコースの濃度は、６０％および１６４％（ｍｇ／ｍｌ）であった。血中グル
コースレベル（ｍｇ／ｄｌ）を、グルコースメーター（Ｇｌｕｃｏｍｅｔｅｒ
ＤＥＸ、Ｂａｙｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｅｌｋｈａｒｔ，ＩＮ）によっ
て測定した。この研究の前に、血中グルコースレベルのベースラインを得た。各
ラット（ｎ＝３／群）に、１．２ｍｍｏｌ／ｋｇのグルコサミン、ＦＤＧおよび
ＥＣ−デオキシグルコースを投与した。別の実験において、１群のラットに、Ｅ
Ｃ−デオキシグルコースおよびＦＤＧを投与した。インスリン（５ユニット）を
、３０分後に投与した。血液サンプルを、尾静脈から３０分毎に投与後６時間ま
で収集した。

【０１５２】 血中グルコースレベルは、グルコサミン、ＦＤＧおよびＥＣ−デオキシグルコ
ースのボーラス静脈内投与によって誘導された。この血中グルコースレベルの増
加は、ＥＣ−デオキシグルコースまたはＦＤＧおよびインスリンの投与によって
抑制され得た（図７４および７５）。

【０１５３】 （^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧの組織分布研究） 乳房腫瘍保有動物モデルについて、雌性Ｆｉｓｈｃｅｒ ３４４ラット（１５
０±２５ｇ）（Ｈａｒｌａｎ Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｄｉａｎａ
ｐｏｌｉｓ，ＩＮ）に、２５ゲージ針を用いて、１３７６２腫瘍細胞株懸濁液由
来の０．１ｍｌの乳房腫瘍細胞（１０^６細胞／ラット、Ｆｉｓｃｈｅｒラットに
特異的な腫瘍細胞株）を後脚に皮下接種した。腫瘍が約１ｃｍ直径に到達する移
植後１４〜１７日に、研究を行った。ラットを、各手順の前にケタミン（１０〜
１５ｍｇ／ラット、腹腔内）で麻酔した。

【０１５４】 肺腫瘍保有動物モデルについて、各胸腺欠損ヌードマウス（２０〜２５ｇ）に
、２５ゲージ針を用いて、Ａ５４９腫瘍細胞株懸濁液由来の０．１ｍｌのヒト肺
腫瘍細胞（１０^６細胞／マウス）を後脚に皮下接種した。腫瘍が約０．６ｃｍ直
径に到達する移植後１７〜２１日に、研究を行った。

【０１５５】 組織分布研究において、各動物に、１０〜２０μＣｉ（１匹のラットあたり）
または１〜２μＣｉ（１匹のマウスあたり）の^９９ｍＴｃ−ＥＣまたは^９９ｍＴ
ｃ−ＥＣ−ＤＧ（ｎ＝３／時点）を静脈内注射した。^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧの
注射した量は、１ｍｇ／ラットであった。これらの放射トレーサーの投与後０．
５時間、２時間および４時間で、これらの齧歯動物を屠殺し、そして選択した組
織を切り出し、重さを量り、そして放射活性を計数した。各サンプル中のトレー
サーの体内分布を、１ｇ組織湿重量あたりの注射用量のパーセンテージ（％ＩＤ
／ｇ）として計算した。腫瘍／非標的組織の計数密度比を、対応する％ＩＤ／ｇ
値から計算した。^９９ｍＴｃ−ＥＣ（表４）および遊離テクネチウム（表９）と
比較した場合、腫瘍対組織比は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧ群において、時間の関
数として増加した（図７６〜８０）。

【０１５６】 （シンチグラフィー画像化研究） 低エネルギーの平行穴コリメーターを備えたγカメラを使用して、シンチグラ
フィー画像を、１００μＣｉの放射トレーサーの静脈内注射後０．５時間、２時
間および４時間で得た。使用した動物モデルは、乳房腫瘍保有ラットであった。^９９ｍ Ｔｃ−ＥＣ（コントロール群）と比較した場合、腫瘍は十分に可視化され
得た（図８１）。予備的な臨床画像化研究を、５人の患者（３人の脳腫瘍および
２人肺疾患患者）において行った。画像を、投与後１〜２時間で得た。^９９ｍＴ
ｃ−ＥＣ−ＤＧは、良性腫瘍を悪性腫瘍に対して区別し得た。例えば、悪性星状
細胞腫は、高い取り込みを示した（図８２Ａ，８２Ｂ、８３Ａおよび８３Ｂ）。
良性髄膜腫は、悪性髄膜腫と比較して乏しい取り込みを示した（図８４Ａおよび
Ｂ）。乏しい取り込みは、ＴＢを有する患者において観察されたが（図８５Ａお
よび図８５Ｂ）、高い取り込みが、肺腫瘍において観察された（図８６Ａ，図８
６Ｂ、および図８６Ｃ）。

【０１５７】 本明細書中に開示されそして特許請求される全ての組成物および／または方法
は、本開示を考慮して過度の実験を伴うことなく作製および実行される。本発明
の組成物および方法は、好ましい実施形態について記載されたが、これらの組成
物および／または方法に対して、および本明細書中に記載される方法の工程また
は工程の順序において、本発明の概念、精神および範囲を逸脱することなく改変
が適用され得ることは、当業者に明らかである。より詳細には、化学的および生
理学的の両方で関連する特定の薬剤が、本明細書中に記載される薬剤と置換され
得、同じかまたは類似の結果が達成されることが、明らかである。当業者に明ら
かな全てのこのような類似の置換物および改変物は、添付の特許請求の範囲に規
定されるように、本発明の精神、範囲および概念内にあるとみなされる。

【０１５８】 （参考文献） 以下の参考文献は、これらが本明細書中に記載されるものに対して補助的な、
例示的手順または他の詳細を提供する程度まで、本明細書中に参考として詳細に
援用される。

【０１５９】

【表１１】 以下の図面は、本明細書の一部を形成し、そして本発明の特定の局面をさらに
示すために含まれる。本発明は、本明細書中に示される特定の実施形態の詳細な
説明と組み合わせて、これらの図面のうちの１つ以上を参照することによって良
好に理解され得る。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ホレートの合成スキームである。

【図２】 図２は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＴＸ（メトトレキサート）の合成スキームであ
る。

【図３】 図３は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＴＤＸ（トムデクス（ｔｏｍｕｄｅｘ））の合成
スキームである。

【図４】 図４は、^９９ｍＴｃ−ＥＣおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ホレートの生体分布研究
である。

【図５】 図５は、^９９ｍＴｃ−ＥＣホレートを用いた腫瘍／筋肉カウント比および腫瘍
／血液カウント比についてのブロッキング研究である。

【図６】 図６Ａおよび図６Ｂは、^９９ｍＴｃ−ＥＣ注射群と比較した、^９９ｍＴｃ−Ｅ
Ｃホレート注射群における腫瘍のシンチグラフィ画像である。

【図７】 図７は、ＥＣ−ＭＮ（メトロニダゾール）の合成スキームである。

【図８Ａ】 図８Ａは、ＥＣ−ＮＩＭについての合成スキームを示す。

【図８Ｂ】 図８Ｂは、ＥＣ−ＮＩＭについての構造の^１Ｈ−ＮＭＲ確認を示す。

【図９】 図９は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮ、［^１８Ｆ］ＦＭＩＳＯおよび［^１３１Ｉ］
ＩＭＩＳＯについての生体分布研究（腫瘍／血液比）である。

【図１０】 図１０は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ、［^１８Ｆ］ＦＭＩＳＯおよび［^１３１Ｉ］ＩＭ
ＩＳＯについての生体分布研究（腫瘍／筋肉比）である。

【図１１】 図１１Ａは、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮ注射群の腫瘍のシンチグラフィ画像であ
り、図１１Ｂは、^９９ｍＴｃ−ＥＣ注射群の腫瘍のシンチグラフィ画像である。

【図１２】 図１２は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮでの注射の１時間後において実施したオー
トラジオグラムである。

【図１３】 図１３は、イヌ血清サンプル中の^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮの安定性を示す。

【図１４Ａ】 図１４Ａは、ラットにおける^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮ 対 ^９９ｍＴｃ−ＥＣ
の胸部腫瘍取り込みを示す。

【図１４Ｂ】 図１４Ｂは、コントロールと比較した、パクリタキセルで処理したラットにお
ける^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮ 対 ^９９ｍＴｃ−ＥＣの胸部腫瘍取り込みを示す
。

【図１５Ａ】 図１５Ａは、ラットにおける^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＮＩＭ 対 ^９９ｍＴｃ−Ｅ
Ｃの卵巣腫瘍取り込みを示す。パクリタキセルを用いて処理したラットにおける
腫瘍取り込み（図１５Ｂ）は、パクリタキセルで処理していないラットにおける
腫瘍取り込み（図１５Ａ）よりも少ない。肉腫を有するラットにおける^９９ｍＴ
ｃ−ＥＣ−ＮＩＭの腫瘍取り込みもまた示す。図１５Ｃは、パクリタキセルで処
理した肉腫保有ラットにおける腫瘍取り込みを示し、一方、図１５Ｄは、パクリ
タキセルで処理していないラットにおける腫瘍取り込みを示す。パクリタキセル
で処理した後に、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＮＩＭの取り込みの減少したが存在した。

【図１５Ｂ】 図１５Ａは、ラットにおける^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＮＩＭ 対 ^９９ｍＴｃ−Ｅ
Ｃの卵巣腫瘍取り込みを示す。パクリタキセルを用いて処理したラットにおける
腫瘍取り込み（図１５Ｂ）は、パクリタキセルで処理していないラットにおける
腫瘍取り込み（図１５Ａ）よりも少ない。肉腫を有するラットにおける^９９ｍＴ
ｃ−ＥＣ−ＮＩＭの腫瘍取り込みもまた示す。図１５Ｃは、パクリタキセルで処
理した肉腫保有ラットにおける腫瘍取り込みを示し、一方、図１５Ｄは、パクリ
タキセルで処理していないラットにおける腫瘍取り込みを示す。パクリタキセル
で処理した後に、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＮＩＭの取り込みの減少したが存在した。

【図１５Ｃ】 図１５Ａは、ラットにおける^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＮＩＭ 対 ^９９ｍＴｃ−Ｅ
Ｃの卵巣腫瘍取り込みを示す。パクリタキセルを用いて処理したラットにおける
腫瘍取り込み（図１５Ｂ）は、パクリタキセルで処理していないラットにおける
腫瘍取り込み（図１５Ａ）よりも少ない。肉腫を有するラットにおける^９９ｍＴ
ｃ−ＥＣ−ＮＩＭの腫瘍取り込みもまた示す。図１５Ｃは、パクリタキセルで処
理した肉腫保有ラットにおける腫瘍取り込みを示し、一方、図１５Ｄは、パクリ
タキセルで処理していないラットにおける腫瘍取り込みを示す。パクリタキセル
で処理した後に、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＮＩＭの取り込みの減少したが存在した。

【図１５Ｄ】 図１５Ａは、ラットにおける^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＮＩＭ 対 ^９９ｍＴｃ−Ｅ
Ｃの卵巣腫瘍取り込みを示す。パクリタキセルを用いて処理したラットにおける
腫瘍取り込み（図１５Ｂ）は、パクリタキセルで処理していないラットにおける
腫瘍取り込み（図１５Ａ）よりも少ない。肉腫を有するラットにおける^９９ｍＴ
ｃ−ＥＣ−ＮＩＭの腫瘍取り込みもまた示す。図１５Ｃは、パクリタキセルで処
理した肉腫保有ラットにおける腫瘍取り込みを示し、一方、図１５Ｄは、パクリ
タキセルで処理していないラットにおける腫瘍取り込みを示す。パクリタキセル
で処理した後に、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＮＩＭの取り込みの減少したが存在した。

【図１６】 図１６は、ＥＣ−ＧＡＰ（ペンタグルタメート）の合成スキームである。

【図１７】 図１７は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＧＡＰ注射群における胸部腫瘍のシンチグラフ
ィー画像である。

【図１８】 図１８は、異なる時間間隔での、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＡＮＮＥＸ Ｖ注射群に
おける胸部腫瘍のシンチグラフィー画像である。

【図１９Ａ】 図１９Ａおよび図１９Ｂは、卵巣腫瘍保有群におけるパクリタキセル処理前（
図１９Ａ）とパクリタキセル処理後（図１９Ｂ）との間の、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−
ＡＮＮＥＸ Ｖの取り込み差異の比較である。

【図１９Ｂ】 図１９Ａおよび図１９Ｂは、卵巣腫瘍保有群におけるパクリタキセル処理前（
図１９Ａ）とパクリタキセル処理後（図１９Ｂ）との間の、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−
ＡＮＮＥＸ Ｖの取り込み差異の比較である。

【図２０Ａ】 図２０Ａおよび図２０Ｂは、肉腫腫瘍保有群におけるパクリタキセル処理前（
図２０Ａ）とパクリタキセル処理後（図２０Ｂ）との間の、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−
ＡＮＮＥＸ Ｖの取り込み差異の比較である。

【図２０Ｂ】 図２０Ａおよび図２０Ｂは、肉腫腫瘍保有群におけるパクリタキセル処理前（
図２０Ａ）とパクリタキセル処理後（図２０Ｂ）との間の、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−
ＡＮＮＥＸ Ｖの取り込み差異の比較である。

【図２１】 図２１は、ＥＣ−ＣＯＬ（コルヒチン）の合成スキームである。

【図２２】 図２２は、ＥＣ−ＣＯＬ合成において分解生成物が観察されなかったことを示
す。

【図２３】 図２３は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＬについての、時間関数としての腫瘍 対
筋肉比および腫瘍 対 血液比である。

【図２４】 図２４は、^９９ｍＴｃ−ＥＣについての、時間関数としての腫瘍 対 筋肉比
および腫瘍 対 血液比である。

【図２５】 図２５は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＬを用いた胸部腫瘍保有ラットにおけるイ
ンビボ画像研究である。

【図２６】 図２６は、^９９ｍＴｃ−ＥＣを用いた胸部腫瘍保有ラットにおけるインビボ画
像研究である。

【図２７】 図２７は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＬ 対 ^９９ｍＴｃ−ＥＣの、注射後のコ
ンピューターで輪郭をとった目的の領域である。

【図２８】 図２８は、発作に罹患した５９歳の男性患者の^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮを用い
たＳＰＥＣＴである。画像は、注射１時間後に撮影した。

【図２９】 図２９は、図２８と同じ患者のＭＲＩ Ｔ１重み付け画像である。

【図３０】 図３０は、発作１日後の７３歳の男性患者の、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮを用い
た注射の１時間後でのＳＰＥＣＴである。

【図３１】 図３１は、発作１２日後の図３０で画像化した同じ７３歳の男性患者の、^{９９ ｍ} Ｔｃ−ＥＣ−ＭＮを用いた注射の１時間後でのＳＰＥＣＴである。

【図３２】 図３２は、発作１日後の図３０で画像化した同じ７３歳の男性発作患者のＣＴ
である。

【図３３】 図３３は、発作１２日後の図３２で画像化した同じ７３歳の男性発作患者のＣ
Ｔである。画像化にＣＴを用いた１日目と１２日目との間に顕著な差がないこと
に注意する。

【図３４】 図３４は、発作に罹患した７２歳の男性患者の^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＭＮを用い
た注射の１時間後でのＳＰＥＣＴである。

【図３５】 図３５は、図３４で画像化した同じ７２歳の男性発作患者のＣＴである。ＣＴ
がいかに病変サイズを誇張しているかに注意すること。

【図３６】 図３６は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシンの合成スキームである。

【図３７Ａ】 ^９９ｍＴｃ−ＥＣおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシン（１００μＣｉ／ラ
ット、静脈内）の投与後の胸部腫瘍保有ラットのシンチグラフィー画像は、この
腫瘍が注射後０．５〜４時間で良好に可視化され得ることを示す。

【図３７Ｂ】 図３７Ｂは、乳癌患者の^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシン（３０ｍＣｉ、静脈
内）を用いたシンチマンモグラフィである。画像は、注射２時間後に撮影した。

【図３８Ａ】 図３８Ａは、ＥＣの^１Ｈ−ＮＭＲである。

【図３８Ｂ】 図３８Ｂは、ネオマイシンの^１Ｈ−ＮＭＲである。

【図３８Ｃ】 図３８Ｃは、ＥＣ−ネオマイシンの^１Ｈ−ＮＭＲである。

【図３９】 図３９Ａおよび図３９Ｂは、ＥＣ−ネオマイシンの質量分析である（Ｍ＋１１
１２．５５）。

【図４０Ａ】 図４０Ａは、ＥＣのＵＶ波長スキャンである。

【図４０Ｂ】 図４０Ｂは、ネオマイシンのＵＶ波長スキャンである。

【図４０Ｃ】 図４０Ｃは、ＥＣ−ネオマイシンのＵＶ波長スキャンである。

【図４１】 図４１は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシンのラジオ−ＴＬＣ分析である。

【図４２】 図４２は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシンのＨＰＬＣ分析である（放射能検
出器）。

【図４３】 図４３は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシンのＨＰＬＣ分析である（ＵＶ ２
５４ｎｍ）。

【図４４】 図４４は、^１８Ｆ−ＦＤＧのＨＰＬＣ分析である（放射能検出器）。

【図４５】 図４５は、^１８Ｆ−ＦＤＧのＨＰＬＣ分析である（ＵＶ ２５４ｎｍ）。

【図４６】 図４６は、肺癌細胞株における一連の^９９ｍＴｃ−ＥＣ薬物結合体のインビト
ロ細胞取り込みアッセイである。^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシンは、試験した
薬剤において最も高い取り込みを示した。

【図４７】 図４７は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシンおよび^１８Ｆ−ＦＤＧの細胞（Ａ
５４９）取り込みに対するグルコースの影響を示す。

【図４８Ａ】 図４８Ａは、薬物取り込み（％）として示され、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイ
シンおよび^１８Ｆ−ＦＤＧの細胞（Ｈ１２９９）取り込みに対するグルコースの
影響を示す。

【図４８Ｂ】 図４８Ｂは、グルコース充填に伴なう変化（％）として示され、^９９ｍＴｃ−
ＥＣ−ネオマイシンおよび^１８Ｆ−ＦＤＧの細胞（Ｈ１２９９）取り込みに対す
るグルコースの影響を示す。

【図４９】 図４９は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−グルコサミンの合成スキームである。

【図５０】 図５０は、グルコースのヘキソキナーゼアッセイである。

【図５１】 図５１は、グルコサミンのヘキソキナーゼアッセイである。

【図５２】 図５２は、ＥＣ−グルコサミンのヘキソキナーゼアッセイである。

【図５３】 図５３は、ＥＣ−ＧＡＰ−グルコサミンのヘキソキナーゼアッセイである。

【図５４】 図５４は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＧＡＰ−グルコサミンの合成スキームである。

【図５５Ａ】 図５５Ａ〜図５５Ｃは、肺癌細胞株（Ａ５４９）における^９９ｍＴｃ−ＥＣ（
図５５Ａ）、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコース−ＧＡＰ（図５５Ｂ）、お
よび^１８Ｆ−ＦＤＧ（図５５Ｃ）のインビトロ細胞取り込みアッセイである。^{９ ９ｍ} Ｔｃ−ＥＣ−ＤＧは、^１８Ｆ−ＦＤＧと比較して類似の取り込みを示した。

【図５５Ｂ】 図５５Ａ〜図５５Ｃは、肺癌細胞株（Ａ５４９）における^９９ｍＴｃ−ＥＣ（
図５５Ａ）、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコース−ＧＡＰ（図５５Ｂ）、お
よび^１８Ｆ−ＦＤＧ（図５５Ｃ）のインビトロ細胞取り込みアッセイである。^{９ ９ｍ} Ｔｃ−ＥＣ−ＤＧは、^１８Ｆ−ＦＤＧと比較して類似の取り込みを示した。

【図５５Ｃ】 図５５Ａ〜図５５Ｃは、肺癌細胞株（Ａ５４９）における^９９ｍＴｃ−ＥＣ（
図５５Ａ）、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコース−ＧＡＰ（図５５Ｂ）、お
よび^１８Ｆ−ＦＤＧ（図５５Ｃ）のインビトロ細胞取り込みアッセイである。^{９ ９ｍ} Ｔｃ−ＥＣ−ＤＧは、^１８Ｆ−ＦＤＧと比較して類似の取り込みを示した。

【図５６】 図５６は、胸部腫瘍保有ラットにおける^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＧＡＰの腫瘍 対
組織カウント密度比である。

【図５７】 図５７は、乳癌細胞株（１３７６２）における注射２時間後の、グルコース充
填を伴なう^１８ＦＤＧのインビトロ細胞取り込みである。

【図５８】 図５８は、胸部腫瘍保有マウスにおける^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシンのイ
ンビボ組織取り込みである。

【図５９】 図５９は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコースの合成スキームである。

【図６０】 図６０は、ＥＣ−デオキシグルコースの質量分析である。

【図６１】 図６１は、ＥＣ−デオキシグルコース（ＥＣ−ＤＧ）の^１Ｈ−ＮＭＲである。

【図６２】 図６２は、グルコサミンの^１Ｈ−ＮＭＲである。

【図６３】 図６３は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧのラジオ−ＴＬＣ分析である。

【図６４】 図６４は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコースおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣの
ＨＰＬＣ分析である（放射能検出器）。

【図６５】 図６５は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコースおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣの
ＨＰＬＣ分析である（放射能検出器、混合）。

【図６６】 図６６は、グルコースのヘキソキナーゼアッセイである。

【図６７】 図６７は、ＦＤＧのヘキソキナーゼアッセイである。

【図６８】 図６８は、ＥＣ−ＤＧのヘキソキナーゼアッセイである。

【図６９】 図６９は、肺癌細胞株（Ａ５４９）における^９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグル
コース、^９９ｍＴｃ−ＥＣおよび^１８Ｆ−ＦＤＧのインビトロ細胞取り込みアッ
セイである。^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧは、^１８Ｆ−ＦＤＧと比較して類似した取
り込みを示した。

【図７０】 図７０は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧの胸部細胞（１３７６２細胞株）取り込み
に対するｄ−グルコースおよびｌ−グルコースの影響である。

【図７１】 図７１は、^１８Ｆ−ＦＤＧの胸部細胞（１３７６２細胞株）取り込みに対する
ｄ−グルコースおよびｌ−グルコースの影響である。

【図７２】 図７２は、^１８Ｆ−ＦＤＧの肺細胞（Ａ５４９細胞株）取り込みに対するｄ−
グルコースおよびｌ−グルコースの影響である。

【図７３】 図７３は、^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧの肺細胞（Ａ５４９細胞株）取り込みに対
するｄ−グルコースおよびｌ−グルコースの影響である。

【図７４】 図７４は、グルコサミンおよびＥＣ−ＤＧ（１．２ｍｍｏｌ／ｋｇ、静脈内）
によって誘導されたインビボ血中グルコースレベルの影響である。

【図７５】 図７５は、ＦＤＧ（１．２ｍｍｏｌ／ｋｇおよび１．９ｍｍｏｌ／ｋｇ、静脈
内）およびインスリンによって誘導されたインビボ血中グルコースレベルの影響
である。

【図７６】 図７６は、胸部腫瘍保有ラットにおける^９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコー
スの腫瘍 対 組織カウント密度比である。

【図７７】 図７７は、胸部腫瘍保有ラットにおける^９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコー
スのインビボ生体分布である。

【図７８】 図７８は、肺腫瘍保有マウスにおける^９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコース
のインビボ組織取り込みである。

【図７９】 図７９は、肺腫瘍保有マウスにおける^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシンのイン
ビボ組織取り込みである。

【図８０】 図８０は、肺腫瘍保有マウスにおける^１８Ｆ−ＦＤＧのインビボ組織取り込み
である。

【図８１】 ^９９ｍＴｃ−ＥＣおよび^９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコース（１００μＣ
ｉ／ラット、静脈内）投与後の胸部腫瘍保有ラットの平面画像は、この腫瘍が、
注射後０．５〜４時間で良好に可視化され得ることを示した。

【図８２Ａ】 図８２Ａは、悪性神経膠星状細胞腫を有する患者のＭＲＩである。

【図８２Ｂ】 図８２Ｂは、悪性神経膠星状細胞腫を有する患者の^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧを
用いたＳＰＥＣＴである。

【図８３Ａ】 図８３Ａは、出血性神経膠星状細胞腫を有する患者のＭＲＩである。

【図８３Ｂ】 図８３Ｂは、悪性神経膠星状細胞腫を有する患者の^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧを
用いたＳＰＥＣＴである。

【図８４Ａ】 図８４Ａは、良性髄膜腫を有する患者のＭＲＩである。

【図８４Ｂ】 良性髄膜腫を有する患者の^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧを用いたＳＰＥＣＴは、焦
点が強調された取り込みを示さなかった。

【図８５Ａ】 図８５Ａは、肺におけるＴＢを有する患者のＣＴである。

【図８５Ｂ】 ＴＢを有する患者の^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧを用いたＳＰＥＣＴは、焦点が強
調された取り込みを示さなかった。

【図８６Ａ】 図８６Ａは、肺癌を有する患者のＣＴである。

【図８６Ｂ】 図８６Ｂは、肺癌を有する患者の^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧを用いた全身画像で
ある。

【図８６Ｃ】 図８６Ｃは、肺癌を有する患者の^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧを用いたＳＰＥＣＴ
であり、腫瘍は、焦点が強調された取り込みを示した。

【手続補正書】

【提出日】平成１４年１２月２５日（２００２．１２．２５）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項５】 前記放射性核種が、^９９ｍＴｃ、^１８８Ｒｅ、^１８６Ｒｅ、^１８３ Ｓｍ、^１６６Ｈｏ、^９０Ｙ、^８９Ｓｒ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^１１１Ｉｎ
、^１８３Ｇｄ、^５９Ｆｅ、^２２５Ａｃ、^２１２Ｂｉ、^２１１Ａｔ、^６４Ｃｕまた
は^６２Ｃｕである、請求項１に記載の組成物。

【請求項６】 前記放射性核種が^９９ｍＴｃである、請求項５に記載の組成
物。

【請求項８】 ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−トムデックスとしてさらに規定される、
請求項７に記載の組成物。

【請求項１０】 前記腫瘍マーカーが、ＰＳＡ、ＥＲ、ＰＲ、ＡＦＰ、ＣＡ
−１２５、ＣＡ−１９９、ＣＥＡ、インターフェロン、ＢＲＣＡ１、シトキサン
、ｐ５３、ＶＥＧＦ、インテグリン、エンドスタチン、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ア ンチセンスマーカー またはモノクローナル抗体である、請求項９に記載の組成物
。

【請求項１１】 前記標的化リガンドが、グルコースを模倣する因子である
、請求項３に記載の組成物。

【請求項１２】 グルコースを模倣する前記因子が、デオキシグルコース、 グルコース、グルコサミン、 ネオマイシン、カナマイシン、ゲンタマインシン、
パロマイシン、アミカシン、トブラマイシン、ネチルマイシン、リボスタマイシ
ン、シソマイシン、ミクロマイシン、リビドマイシン、ジベカシン、イセパマイ
シン、アストロマイシン、またはアミノグリコシドである、請求項１１に記載の
組成物。

【請求項１３】 ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシンとしてさらに規定される
、請求項１２に記載の組成物。

【請求項１４】 ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−カナマイシンとしてさらに規定される
、請求項１２に記載の組成物。

【請求項１５】 ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−アミノグリコシドとしてさらに規定さ
れる、請求項１２に記載の組成物。

【請求項１６】 ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ゲンタマイシンとしてさらに規定され
る、請求項１２に記載の組成物。

【請求項１７】 ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−トブラマイシンとしてさらに規定され
る、請求項１２に記載の組成物。

【請求項２２】 前記リンカーが、水溶性ペプチド、アミノ酸、ポリアミノ 酸、 グルタミン酸、ポリ−グルタミン酸、アスパラギン酸、ポリ−アスパラギン 酸、 ブロモ酢酸エチル、エチレンジアミンまたはリジンである、請求項２１に記
載の組成物。

【請求項２３】 画像化のためのビス−アミノエタンチオール（ＢＡＴ）四 配座キレート化リガンド を合成する方法であって、該方法は、以下の工程： ａ）標的化リガンドを得る工程； ｂ）該リガンドをＢＡＴキレート化リガンドと混合して、ＢＡＴ−標的化リガ
ンドを得る工程；ならびに ｃ）該ＢＡＴ−標的化リガンド誘導体を、放射性核種および還元剤と混合して
、放射性核種標識されたビス−アミノエタンチオール（ＢＡＴ）標的化リガンド
誘導体を得る工程であって、ここで、該ＢＡＴ部分が、該放射性核種とＮ_２Ｓ_２ キレートを形成する、工程、 を包含する、方法。

【請求項２４】 前記還元剤が、亜ジチオン酸イオン、第一スズイオン、ま
たは第一鉄イオンである、請求項２３に記載の方法。

【請求項２７】 前記部位が腫瘍である、請求項２６に記載の使用。

【請求項２８】 前記部位が感染である、請求項２６に記載の使用。

【請求項２９】 前記部位が、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮内膜、心臓、
肺、脳、肝臓、ホレート（＋）癌、ＥＲ（＋）癌、脾臓、膵臓、または腸である
、請求項２７に記載の使用。

【請求項３１】 前記放射性核種が^９９ｍＴｃである、請求項２６に記載の 使用 。

【請求項３２】 放射性薬学的調製物を調製するためのキットであって、該
キットは、所定量のＢＡＴキレート化リガンド−標的化リガンド結合体組成物お
よび選択された放射性核種を用いて該結合体を標識するために十分量の還元剤を
含むシールされた容器を備える、キット。

【請求項３４】 前記放射性核種が^９９ｍＴｃである、請求項３３に記載の キット 。

【請求項３５】 前記ＢＡＴキレート化リガンド−標的化リガンド結合体が 、該ＢＡＴと該標的化リガンドとの間にさらにリンカーを含む、請求項３２に記
載のキット。

【請求項３６】 前記標的化リガンドが、ドキソルビシン、タモキシフェン 、パクリタキセル、トポテカン、ＬＨＲＨ、マイトマイシンＣ、エトポシド、ポ ドフィロトキシン、ミトザントロン、カンプトセシン、エンドスタチン、フルダ ラビン、ゲムシタビンおよびトムデックスから選択される 抗癌剤、ＤＮＡトポイ
ソメラーゼインヒビター、代謝拮抗剤、腫瘍マーカー、ホレートレセプター標的
化リガンド、腫瘍アポトーシス細胞標的化リガンド、腫瘍低酸素標的化リガンド
、ＤＮＡインターカレーター、レセプターマーカー、ペプチド、器官リガンド、
抗生物質、抗真菌剤、グルタミン酸ペンタペプチド、またはグルコースを模倣す
る因子である、請求項３２に記載のキット。

【請求項３７】 前記標的化リガンドが、エストラジオール、トポテカン、
パクリタキセル、ラロキシフェン、エトポシド、ドキソルビシン、マイトマイシ
ンＣ、エンドスタチン、アネキシンＶ、ＬＨＲＨ、オクトレオチド、ＶＩＰ、メ
トトレキセートまたは葉酸である、請求項３６に記載のキット。

【手続補正２】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】全図

【補正方法】変更

【補正の内容】

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８Ａ】

【図８Ｂ】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４Ａ】

【図１４Ｂ】

【図１５Ａ】

【図１５Ｂ】

【図１５Ｃ】

【図１５Ｄ】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９Ａ】

【図１９Ｂ】

【図２０Ａ】

【図２０Ｂ】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４】

【図３５】

【図３６】

【図３７Ａ】

【図３７Ｂ】

【図３８Ａ】

【図３８Ｂ】

【図３８Ｃ】

【図３９】

【図４０Ａ】

【図４０Ｂ】

【図４０Ｃ】

【図４１】

【図４２】

【図４３】

【図４４】

【図４５】

【図４６】

【図４７】

【図４８Ａ】

【図４８Ｂ】

【図４９】

【図５０】

【図５１】

【図５２】

【図５３】

【図５４】

【図５５Ａ】

【図５５Ｂ】

【図５５Ｃ】

【図５６】

【図５７】

【図５８】

【図５９】

【図６０】

【図６１】

【図６２】

【図６３】

【図６４】

【図６５】

【図６６】

【図６７】

【図６８】

【図６９】

【図７０】

【図７１】

【図７２】

【図７３】

【図７４】

【図７５】

【図７６】

【図７７】

【図７８】

【図７９】

【図８０】

【図８１】

【図８２Ａ】

【図８２Ｂ】

【図８３Ａ】

【図８３Ｂ】

【図８４Ａ】

【図８４Ｂ】

【図８５Ａ】

【図８５Ｂ】

【図８６Ａ】

【図８６Ｂ】

【図８６Ｃ】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｄ 475/06 Ｃ０７Ｈ 23/00 Ｃ０７Ｈ 23/00 Ａ６１Ｋ 49/02 Ｂ Ａ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ， ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，Ｉ Ｓ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ， ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，Ｐ Ｔ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ， ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 リウ， チュン−ウェイ アメリカ合衆国 テキサス 77479， シ ュガーランド， ミルロック サークル 3918 (72)発明者 ユー， ドン−ファン アメリカ合衆国 テキサス 77030， ヒ ューストン， ビーチャースト ドライブ 15002 (72)発明者 キム， イー． エドマンド アメリカ合衆国 テキサス 77024， ヒ ューストン， マグノリア ベンド ７ Ｆターム(参考） 4C057 AA18 BB02 BB03 CC04 DD01 DD02 NN10 4C063 AA01 BB09 CC92 DD31 EE10 4C085 HH03 JJ02 JJ03 JJ11 KA04 KA09 KA29 KA34 KA36 KA37 KB05 KB07 KB08 KB09 KB10 KB11 KB12 KB15 KB28 KB52 KB56 KB57 KB78 KB82 KB91 KB92 LL05 LL07 LL09 LL11 LL12 LL18

Claims (51)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 画像化のための組成物であって、以下： 放射線核種標識； エチレンジシステイン；および 該エチレンジシステインに結合体化した組織特異的リガンド； を含み、ここで、該エチレンジシステインが、該放射線核種標識とＮ_２Ｓ_２キレ
   ートを形成する、組成物。
2. 【請求項２】 前記組織特異的リガンドが、前記エチレンジシステインの１
   つまたは両方の酸アームで該エチレンジシステインと結合体化し得る、請求項１
   に記載の組成物。
3. 【請求項３】 前記放射線核種が、^９９ｍＴｃ、^１８８Ｒｅ、^１８６Ｒｅ、^１８３ Ｓｍ、^１６６Ｈｏ、^９０Ｙ、^８９Ｓｒ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^１１１Ｉｎ
   、^１８３Ｇｄ、^５９Ｆｅ、^２２５Ａｃ、^２１２Ｂｉ、^２１１Ａｔ、^６４Ｃｕまた
   は^６２Ｃｕである、請求項１に記載の組成物。
4. 【請求項４】 前記放射線核種が^９９ｍＴｃである、請求項３に記載の組成
   物。
5. 【請求項５】 前記組織特異的リガンドが、抗癌剤、ＤＮＡトポイソメラー
   ゼインヒビター、代謝拮抗剤、腫瘍マーカー、ホレートレセプター標的化リガン
   ド、腫瘍アポトーシス細胞標的化リガンド、腫瘍低酸素標的化リガンド、ＤＮＡ
   インターカレーター、レセプターマーカー、ペプチド、ヌクレオチド、器官特異
   的リガンド、抗生物質、抗真菌剤、抗体、グルタミン酸ペンタペプチドまたはグ
   ルコースを模倣する因子である、請求項１に記載の組成物。
6. 【請求項６】 前記組織特異的リガンドが、抗癌剤である、請求項５に記載
   の組成物。
7. 【請求項７】 前記抗癌剤が、メトトレキセート、ドキソルビシン、タモキ
   シフェン、パクリタキセル、トポテカン、ＬＨＲＨ、マイトマイシンＣ、エトポ
   シドトムデックス、ポドフィロトキシン、ミトザントロン、カンプトセシン、コ
   ルヒチン、エンドスタチン、フルダラビン、ゲムシタビンおよびトムデックスか
   らなる群より選択され得る、請求項６に記載の組成物。
8. 【請求項８】 前記組織特異的リガンドが腫瘍マーカーである、請求項５に
   記載の組成物。
9. 【請求項９】 前記腫瘍マーカーが、ＰＳＡ、ＥＲ、ＰＲ、ＣＡ−１２５、
   ＣＡ−１９９、ＣＥＡ ＡＦＰ、インターフェロン、ＢＲＣＡ１、ＨＥＲ−２／
   ｎｅｕ、シトキサン、ｐ５３、エンドスタチンまたはモノクローナル抗体（例え
   ば、アンチセンス）である、請求項８に記載の組成物。
10. 【請求項１０】 前記組織特異的リガンドが、ホレートレセプター標的化リ
    ガンドである、請求項５に記載の組成物。
11. 【請求項１１】 前記ホレートレセプター標的化リガンドが、ホレート、メ
    トトレキセートまたはトムデックスである、請求項１０に記載の組成物。
12. 【請求項１２】 ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ホレートとしてさらに規定される、請
    求項１１に記載の組成物。
13. 【請求項１３】 ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−メトトレキセートとしてさらに規定さ
    れる、請求項１１に記載の組成物。
14. 【請求項１４】 ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−トムデックスとしてさらに規定される
    、請求項１１に記載の組成物。
15. 【請求項１５】 前記組織特異的リガンドが、腫瘍アポトーシス細胞標的化
    リガンドまたは腫瘍低酸素標的化リガンドである、請求項５に記載の組成物。
16. 【請求項１６】 前記組織特異的リガンドが、アネキシンＶ、コルヒチン、
    ニトロイミダゾール、マイトマイシンまたはメトロニダゾルである、請求項１５
    に記載の組成物。
17. 【請求項１７】 ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−アネキシンＶとしてさらに規定される
    、請求項１６に記載の組成物。
18. 【請求項１８】 ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−コルヒチンとしてさらに規定される、
    請求項１６に記載の組成物。
19. 【請求項１９】 ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ニトロイミダゾールとしてさらに規定
    される、請求項１６に記載の組成物。
20. 【請求項２０】 ^９９ｍＴＣ−ＥＣ−メトロニダゾールとしてさらに規定さ
    れる、請求項１６に記載の組成物。
21. 【請求項２１】 前記組織特異的リガンドが、グルタミン酸ペンタペプチド
    （分子量７５０〜１５，０００）である、請求項５に記載の組成物。
22. 【請求項２２】 ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−グルタミン酸ペンタペプチドとしてさ
    らに規定される、請求項２１に記載の組成物。
23. 【請求項２３】 前記組織特異的リガンドが、グルコースを模倣する因子で
    ある、請求項５に記載の組成物。
24. 【請求項２４】 グルコースを模倣する前記因子が、ネオマイシン、カナマ
    イシン、ゲンタマインシン、パロマイシン、アミカシン、トブラマイシン、ネチ
    ルマイシン、リボスタマイシン、シソマイシン、ミクロマイシン、リビドマイシ
    ン、ジベカシン、イセパマイシン、アストロマイシン、またはアミノグルコシド
    である、請求項２３に記載の組成物。
25. 【請求項２５】 ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ネオマイシンとしてさらに規定される
    、請求項２４に記載の組成物。
26. 【請求項２６】 ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−カナマイシンとしてさらに規定される
    、請求項２４に記載の組成物。
27. 【請求項２７】 ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−アミノグリコシドとしてさらに規定さ
    れる、請求項２４に記載の組成物。
28. 【請求項２８】 ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−ゲンタマイシンとしてさらに規定され
    る、請求項２４に記載の組成物。
29. 【請求項２９】 ^９９ｍＴｃ−ＥＣ−トブラマイシンとしてさらに規定され
    る、請求項２４に記載の組成物。
30. 【請求項３０】 ＥＣを前記組織特異的リガンドに結合体化するリンカーを
    さらに含む。請求項２に記載の組成物。
31. 【請求項３１】 前記リンカーが、水溶性ペプチド、グルタミン酸、アスパ
    ラギン酸、ブロモ酢酸エチル、エチレンジアミンまたはリジンである、請求項３
    ０に記載の組成物。
32. 【請求項３２】 前記組織特異的リガンドが、エストラジオール、トポテカ
    ン、パクリタキセル、ラロキシフェン、エトポシド、ドキソルビシン、マイトマ
    イシンＣ、エンドスタチン、アネキシンＶ、ＬＨＲＨ、オクトレオチド、ＶＩＰ
    、メトトレキセートまたは葉酸である、請求項３１に記載の組成物。
33. 【請求項３３】 画像化のための放射標識されたエチレンジシステイン誘導
    体を合成する方法であって、該方法は、以下の工程： ａ）組織特異的リガンドを得る工程； ｂ）該リガンドをエチレンジシステイン（ＥＣ）と混合して、ＥＣ−組織特異
    的リガンド誘導体を得る工程；ならびに ｃ）該ＥＣ−組織特異的リガンド誘導体を、放射線核種および還元剤と混合し
    て、放射線核種標識されたＥＣ−組織特異的リガンド誘導体を得る工程であって
    、ここで、該ＥＣが、該放射線核種とＮ_２Ｓ_２キレートを形成する、工程、 を包含する、方法。
34. 【請求項３４】 前記還元剤が、亜ジチオン酸イオン、第一スズイオン、ま
    たは第一鉄イオンである、請求項３３に記載の方法。
35. 【請求項３５】 画像化のために組織特異的リガンドを標識化する方法であ
    って、該方法は、以下の工程： ａ）組織特異的リガンドを得る工程； ｂ）該組織特異的リガンドをエチレンジシステイン（ＥＣ）と混合して、ＥＣ
    −リガンド薬物結合体を得る工程；ならびに ｃ）該薬物結合体を、還元剤の存在下で^９９ｍＴｃと反応させて、該エチレン
    ジシステイン（リンカーありまたはリンカーなし）と該^９９ｍＴｃとの間にＮ_２ Ｓ_２キレートを形成する工程、 を包含する、方法。
36. 【請求項３６】 前記組織特異的リガンドが、抗癌剤、ＤＮＡトポイソメラ
    ーゼインヒビター、代謝拮抗剤、腫瘍マーカー、ホレートレセプター標的化リガ
    ンド、腫瘍アポトーシス細胞標的化リガンド、腫瘍低酸素標的化リガンド、ＤＮ
    Ａインターカレーター、レセプターマーカー、ペプチド、器官特異的リガンド、
    抗生物質、抗真菌剤、グルタミン酸ペンタペプチドまたはグルコースを模倣する
    因子である、請求項３５に記載の方法。
37. 【請求項３７】 前記還元剤が、亜ジチオン酸イオン、第一スズイオン、ま
    たは第一鉄イオンである、請求項３６に記載の方法。
38. 【請求項３８】 哺乳動物身体内の部位を画像化する方法であって、^９９ｍ Ｔｃ標識されたエチレンジシステイン−組織特異的リガンド結合体を含む診断有
    効量の組成物を投与する工程、および該部位に局在する^９９ｍＴｃからの放射活
    性シグナルを検出する工程、を包含する、方法。
39. 【請求項３９】 前記部位が腫瘍である、請求項３８に記載の方法。
40. 【請求項４０】 前記部位が感染である、請求項３８に記載の方法。
41. 【請求項４１】 前記部位が、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮内膜、心臓、
    肺、脳、肝臓、ホレート（＋）癌、ＥＲ（＋）癌、脾臓、膵臓、または腸である
    、請求項３８に記載の方法。
42. 【請求項４２】 放射性薬学的調製物を調製するためのキットであって、該
    キットは、所定量のエチレンジシステイン−組織特異的リガンド結合体組成物お
    よび^９９ｍＴｃを用いて該結合体を標識するために十分量の還元剤を含むシール
    された容器を備える、キット。
43. 【請求項４３】 前記エチレンジシステイン−組織特異的リガンド結合体組
    成物が、該エチレンジシステインと該組織特異的リガンドとの間にさらにリンカ
    ーを含む、請求項４２に記載のキット。
44. 【請求項４４】 前記組織特異的リガンドが、抗癌剤、ＤＮＡトポイソメラ
    ーゼインヒビター、代謝拮抗剤、腫瘍マーカー、ホレートレセプター標的化リガ
    ンド、 腫瘍アポトーシス細胞標的化リガンド、腫瘍低酸素標的化リガンド、Ｄ
    ＮＡインターカレーター、レセプターマーカー、ペプチド、器官リガンド、抗生
    物質、抗真菌剤、グルタミン酸ペンタペプチドまたはグルコースを模倣する因子
    である、請求項４２に記載のキット。
45. 【請求項４５】 前記組織特異的リガンドが、エストラジオール、トポテカ
    ン、パクリタキセル、ラロキシフェン、エトポシド、ドキソルビシン、マイトマ
    イシンＣ、エンドスタチン、アネキシンＶ、ＬＨＲＨ、オクトレオチド、ＶＩＰ
    、メトトレキセートまたは葉酸である、請求項４３に記載のキット。
46. 【請求項４６】 前記リンカーが、水溶性ペプチド、グルタミン酸、ポリグ
    ルタミン酸、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、ブロモ酢酸エチル、エチレ
    ンジアミンまたはリジンである、請求項４５に記載のキット。
47. 【請求項４７】 シンチグラフィー画像化剤を調製するための試薬であって
    、^９９ｍＴｃ結合部位に共有結合した組織特異的リガンドを含む、試薬。
48. 【請求項４８】 前記^９９ｍＴｃ結合部分が、エチレンジシステインである
    、請求項４７に記載の試薬。
49. 【請求項４９】 前記組織特異的リガンドが、抗癌剤、ＤＮＡトポイソメラ
    ーゼインヒビター、代謝拮抗剤、腫瘍マーカー、ホレートレセプター標的化リガ
    ンド、腫瘍アポトーシス細胞標的化リガンド、腫瘍低酸素標的化リガンド、ＤＮ
    Ａインターカレーター、レセプターマーカー、ペプチド、器官特異的リガンド、
    抗生物質、抗真菌剤、グルタミン酸ペンタペプチドまたはグルコースを模倣する
    因子である、請求項４８に記載の試薬。
50. 【請求項５０】 前記組織特異的リガンドと前記^９９ｍＴｃ結合部位との間
    にさらにリンカーを含む、請求項４８に記載の試薬。
51. 【請求項５１】 腫瘍に対する候補薬物の有効性を決定する方法であって、
    該方法は、以下： ａ）候補薬物を得る工程； ｂ）該候補薬物をエチレンジシステイン（ＥＣ）と結合体化して、ＥＣ−候補
    薬物結合体を生成する工程； ｃ）該候補薬物結合体を、^９９ｍＴｃを用いてキレート化して、^９９ｍＴｃ−
    ＥＣ−候補薬物結合体を生成する工程； ｄ）該^９９ｍＴｃ−ＥＣ−候補薬物結合体を、腫瘍を有する患者に導入する工
    程；および ｅ）該患者を画像化して、該腫瘍に対する該候補薬物の有効性を決定する工程
    、 を包含する、方法。