JP2002500038A - 微生物、それを得るための方法、及び飼料添加剤 - Google Patents
微生物、それを得るための方法、及び飼料添加剤Info
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Abstract
(57)【要約】
本発明は、オウバクテリウム（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の微生物に関し、その調製及び使用に関する。純粋培養物ＤＳＭ１１７９８として、かつ／又はエンテロコッカス・カッセリフラバス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｃａｓｓｅｌｉｆｌａｖｕｓ）の菌株との混合培養物ＤＳＭ１１７９９として、又はその他の嫌気性微生物との混合培養物として、該微生物はトリコテセンの無毒化に適している。本発明は、微生物の純粋培養物、又は混合培養物（ＤＳＭ１１７９８もしくはＤＳＭ１１７９９）、又はその他の嫌気性微生物との混合培養物を、肥料１，０００ｋｇ当たり０．２と３ｋｇの間、特に０．５と２．５ｋｇの間の量で含有する、肥料又は動物の消化系におけるトリコテセンを不活化するための肥料添加剤にも関する。
Description
【０００１】 本発明は、純粋培養物又は混合培養物においてトリコテセンの無毒化に適して
いるオウバクテリウム（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の微生物に関し、それらの
単離、製造、及び処方のための方法、並びにその使用、並びに微生物を含む飼料
添加剤に関する。
いるオウバクテリウム（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の微生物に関し、それらの
単離、製造、及び処方のための方法、並びにその使用、並びに微生物を含む飼料
添加剤に関する。
【０００２】 マイコトキシン・クラスに属するトリコテセンは、多数の動物飼料に含まれて
おり、通常穀物又は草上に見出される糸状菌を介して飼料に導入される。マイコ
トキシン、特にトリコテセンの動物への望ましくない投与の結果として、動物の
生産性及び例えば成長の両方が阻害され、動物の健康障害に加え、飼料消費の増
加と同時に飼料利用効率の低下が起こる。マイコトキシンの有害な効果を排除す
るため、これらの毒素を結合又は吸着するための多数の方法が既に開示されてい
る。
おり、通常穀物又は草上に見出される糸状菌を介して飼料に導入される。マイコ
トキシン、特にトリコテセンの動物への望ましくない投与の結果として、動物の
生産性及び例えば成長の両方が阻害され、動物の健康障害に加え、飼料消費の増
加と同時に飼料利用効率の低下が起こる。マイコトキシンの有害な効果を排除す
るため、これらの毒素を結合又は吸着するための多数の方法が既に開示されてい
る。
【０００３】 このように、例えば国際特許公開第９１／１３５５５号には、マイコトキシン
を不活化するためにフィロケイ酸塩鉱物の粒子が飼料に添加される、マイコトキ
シンの不活化のための飼料添加剤及び方法が記載されている。これらのフィロケ
イ酸塩の効果を増加させるため、効果を加速するための金属イオン封鎖剤で粒子
がコーティングされる。さらに、例えば国際特許公開第９２／０５７０６号から
は、モンモリロナイト粘土が飼料添加剤として含まれている飼料が既知である。
大きな内表面積を有するこれらの天然粘土鉱物は、多孔性であるため、表面にマ
イコトキシンを結合させ、このようにしてそれらを固定化する。
を不活化するためにフィロケイ酸塩鉱物の粒子が飼料に添加される、マイコトキ
シンの不活化のための飼料添加剤及び方法が記載されている。これらのフィロケ
イ酸塩の効果を増加させるため、効果を加速するための金属イオン封鎖剤で粒子
がコーティングされる。さらに、例えば国際特許公開第９２／０５７０６号から
は、モンモリロナイト粘土が飼料添加剤として含まれている飼料が既知である。
大きな内表面積を有するこれらの天然粘土鉱物は、多孔性であるため、表面にマ
イコトキシンを結合させ、このようにしてそれらを固定化する。
【０００４】 さらに、エポキシダーゼ及びラクトナーゼを形成し、飼料及び動物の胃腸管の
両方において化学的にマイコトキシンを分解することができる酵素調製物が用い
られている飼料添加剤が、オーストリア実用新案（Ａｕｓｔｒｉａｎ Ｕｔｉｌ
ｉｔｙ Ｍｏｄｅｌ）ＡＴ−Ｕ５０４において開示されている。ＡＴ−Ｕ５０４
によると、この酵素調製物の作用は、ゼオライトなどの添加により増加されうる
。
両方において化学的にマイコトキシンを分解することができる酵素調製物が用い
られている飼料添加剤が、オーストリア実用新案（Ａｕｓｔｒｉａｎ Ｕｔｉｌ
ｉｔｙ Ｍｏｄｅｌ）ＡＴ−Ｕ５０４において開示されている。ＡＴ−Ｕ５０４
によると、この酵素調製物の作用は、ゼオライトなどの添加により増加されうる
。
【０００５】 そこで、本発明は、生化学的分解により、マイコトキシン、特にトリコテセン
を、生理学的に無害であり特に動物飼育において無害である物質へと制御された
様式で変換することが可能な、天然の環境から単離された特定の微生物又は定義
された混合培養物を利用可能にすることを目的とする。
を、生理学的に無害であり特に動物飼育において無害である物質へと制御された
様式で変換することが可能な、天然の環境から単離された特定の微生物又は定義
された混合培養物を利用可能にすることを目的とする。
【０００６】 この目的を解決するため、純粋培養物ＤＳＭ１１７９８中、又はエンテロコッ
カス・カッセリフラバス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｃａｓｓｅｌｉｆｌａｖ
ｕｓ）の菌株との混合培養物ＤＳＭ１１７９９中、もしくはその他の嫌気性微生
物との混合培養物中の、トリコテセンの無毒化に適しているオウバクテリウム（
Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の微生物が単離された。本発明の新規な改良による
と、微生物は、特にエンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、ストレ
プトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏ
ｃｏｃｃｕｓ）属、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、又はラクトバチルス（Ｌ
ａｃｒｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属由来の、その他の嫌気性微生物との混合培養物に
おいて、トリコテセンの無毒化に適している。
カス・カッセリフラバス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｃａｓｓｅｌｉｆｌａｖ
ｕｓ）の菌株との混合培養物ＤＳＭ１１７９９中、もしくはその他の嫌気性微生
物との混合培養物中の、トリコテセンの無毒化に適しているオウバクテリウム（
Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の微生物が単離された。本発明の新規な改良による
と、微生物は、特にエンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、ストレ
プトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏ
ｃｏｃｃｕｓ）属、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、又はラクトバチルス（Ｌ
ａｃｒｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属由来の、その他の嫌気性微生物との混合培養物に
おいて、トリコテセンの無毒化に適している。
【０００７】 オウバクテリウム属との関連のためオウバクテリウム種とも呼ばれる、コレク
ション・オブ・ジャーマン・マイクロオーガニズムズ（Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ
ｏｆ Ｇｅｒｍａｎ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ）にＤＳＭ１１７９８の番
号で純粋培養物中に寄託された、又はコレクション・オブ・ジャーマン・マイク
ロオーガニズムズにＤＳＭ１１７９９の番号で寄託されたエンテロコッカス・カ
ッセリフラバスの菌株との混合培養物中のオウバクテリウム属の微生物は、本発
明により、特にデオキシニバレノール（ｄｅｏｘｙｎｉｖａｌｅｎｏｌ）（ＤＯ
Ｎ）、Ｔ−２毒素、ＨＴ−２毒素、ニバレノール（ｎｉｖａｌｅｎｏｌ）、モノ
アセトキシサーペノール（ｍｏｎｏａｃｅｔｏｘｙｓｃｉｒｐｅｎｏｌ）、ジア
セトキシサーペノール（ｄｉａｃｅｔｏｘｙｓｃｉｒｐｅｎｏｌ）、トリコダー
モル（ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍｏｌ）、ベルカリン（ｖｅｒｒｕｃａｒｉｎ）、ロ
ロジン（ｒｏｒｏｄｉｎ）、アセチルデオキシニバレノール（ａｃｅｔｙｌｄｅ
ｏｘｙｎｉｖａｌｅｎｏｌ）、イソトリコダーミン（ｉｓｏｔｒｉｃｈｏｄｅｒ
ｍｉｎ）、ヒドロキシイソトリコダーミン（ｈｙｄｒｏｘｙｉｓｏｔｒｉｃｈｏ
ｄｅｒｍｉｎ）、カロネクトリン（ｃａｌｏｎｅｃｔｒｉｎ）、Ｔ−２テトラオ
ール（Ｔ−２ ｔｅｔｒａｏｌ）、Ｔ−２トリオール（Ｔ−２ ｔｒｉｏｌ）、
デアセチルネオソラニオール（ｄｅａｃｅｔｙｌｎｅｏｓｏｌａｎｉｏｌ）、ネ
オソラニオール（ｎｅｏｓｏｌａｎｉｏｌ）、アセチルネオソラニオール（ａｃ
ｅｔｙｌｎｅｏｓｏｌａｎｉｏｌ）、スポロトリキオール（ｓｐｏｒｏｔｒｉｃ
ｈｉｏｌ）、トリコトリオール（ｔｒｉｃｈｏｔｒｉｏｌ）、サンブシノール（
ｓａｍｂｕｃｉｎｏｌ）、及びカルモリン（ｃｕｌｍｏｒｉｎ）の無毒化に特に
適している。本発明に係る微生物は、マイコトキシン、特にトリコテセンの毒性
を担っている、分子内に含まれるエポキシド基の還元的生物学的転換によりトリ
コテセンを無毒化する。下記式に相当するトリコテセンにおいて、エポキシド基
の分解は、毒性を有する１２，１３−エポキシ環の還元的開裂により実施される
。
ション・オブ・ジャーマン・マイクロオーガニズムズ（Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ
ｏｆ Ｇｅｒｍａｎ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ）にＤＳＭ１１７９８の番
号で純粋培養物中に寄託された、又はコレクション・オブ・ジャーマン・マイク
ロオーガニズムズにＤＳＭ１１７９９の番号で寄託されたエンテロコッカス・カ
ッセリフラバスの菌株との混合培養物中のオウバクテリウム属の微生物は、本発
明により、特にデオキシニバレノール（ｄｅｏｘｙｎｉｖａｌｅｎｏｌ）（ＤＯ
Ｎ）、Ｔ−２毒素、ＨＴ−２毒素、ニバレノール（ｎｉｖａｌｅｎｏｌ）、モノ
アセトキシサーペノール（ｍｏｎｏａｃｅｔｏｘｙｓｃｉｒｐｅｎｏｌ）、ジア
セトキシサーペノール（ｄｉａｃｅｔｏｘｙｓｃｉｒｐｅｎｏｌ）、トリコダー
モル（ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍｏｌ）、ベルカリン（ｖｅｒｒｕｃａｒｉｎ）、ロ
ロジン（ｒｏｒｏｄｉｎ）、アセチルデオキシニバレノール（ａｃｅｔｙｌｄｅ
ｏｘｙｎｉｖａｌｅｎｏｌ）、イソトリコダーミン（ｉｓｏｔｒｉｃｈｏｄｅｒ
ｍｉｎ）、ヒドロキシイソトリコダーミン（ｈｙｄｒｏｘｙｉｓｏｔｒｉｃｈｏ
ｄｅｒｍｉｎ）、カロネクトリン（ｃａｌｏｎｅｃｔｒｉｎ）、Ｔ−２テトラオ
ール（Ｔ−２ ｔｅｔｒａｏｌ）、Ｔ−２トリオール（Ｔ−２ ｔｒｉｏｌ）、
デアセチルネオソラニオール（ｄｅａｃｅｔｙｌｎｅｏｓｏｌａｎｉｏｌ）、ネ
オソラニオール（ｎｅｏｓｏｌａｎｉｏｌ）、アセチルネオソラニオール（ａｃ
ｅｔｙｌｎｅｏｓｏｌａｎｉｏｌ）、スポロトリキオール（ｓｐｏｒｏｔｒｉｃ
ｈｉｏｌ）、トリコトリオール（ｔｒｉｃｈｏｔｒｉｏｌ）、サンブシノール（
ｓａｍｂｕｃｉｎｏｌ）、及びカルモリン（ｃｕｌｍｏｒｉｎ）の無毒化に特に
適している。本発明に係る微生物は、マイコトキシン、特にトリコテセンの毒性
を担っている、分子内に含まれるエポキシド基の還元的生物学的転換によりトリ
コテセンを無毒化する。下記式に相当するトリコテセンにおいて、エポキシド基
の分解は、毒性を有する１２，１３−エポキシ環の還元的開裂により実施される
。
【０００８】
【化２】 本発明に係る微生物の形態学は、好ましくは、それがいずれも個別に、対で、
又は特に最大約１５０μｍの長鎖で発生する、０．１から３μｍ長の嫌気性グラ
ム陽性桿様非胞子形成性細菌であることを示す。本発明に係る微生物の系統発生
学的分析は、特に１６Ｓ ＲＮＡ配列、即ち
又は特に最大約１５０μｍの長鎖で発生する、０．１から３μｍ長の嫌気性グラ
ム陽性桿様非胞子形成性細菌であることを示す。本発明に係る微生物の系統発生
学的分析は、特に１６Ｓ ＲＮＡ配列、即ち
【０００９】
【化３】 を示した。
【００１０】 細菌のドメインの一部である代表的な微生物の既知の１６Ｓ ＲＮＡ遺伝子配
列と比較されている微生物の配列データ。この比較分析は、オウバクテリウム属
の細菌に対して最も大きい一致性を示した。しかし、既知の微生物に十分に一致
する遺伝子配列を見出すことはできず、従って、本発明に係る微生物は、現在ま
でのところ未だ単離及び分類がなされていないオウバクテリウム属に属する微生
物である。例えば発酵スペクトル、硝酸塩の亜硝酸塩へ還元のような生理学的調
査も、オウバクテリウム属との関連を示した。
列と比較されている微生物の配列データ。この比較分析は、オウバクテリウム属
の細菌に対して最も大きい一致性を示した。しかし、既知の微生物に十分に一致
する遺伝子配列を見出すことはできず、従って、本発明に係る微生物は、現在ま
でのところ未だ単離及び分類がなされていないオウバクテリウム属に属する微生
物である。例えば発酵スペクトル、硝酸塩の亜硝酸塩へ還元のような生理学的調
査も、オウバクテリウム属との関連を示した。
【００１１】 本発明のさらなる目的は、微生物の純粋培養物ＤＳＭ１１７９８、並びにその
エンテロコッカス・カッセリフラバスの菌株との混合培養物ＤＳＭ１１７９９、
及びその他の嫌気性微生物との混合培養物の両方を得るための方法を可能にする
ことであり、経済的にも量的にも収量を最適化することを特に目的とする。
エンテロコッカス・カッセリフラバスの菌株との混合培養物ＤＳＭ１１７９９、
及びその他の嫌気性微生物との混合培養物の両方を得るための方法を可能にする
ことであり、経済的にも量的にも収量を最適化することを特に目的とする。
【００１２】 この目的を達成するため、本発明に係る方法は、希釈系列及び嫌気的培養条件
において少なくとも２回培養又は発酵を行うことにより、ウシ第一胃由来の微生
物とエンテロコッカス・カッセリフラバスの菌株とから混合培養物ＤＳＭ１１７
９９が得られるように実施される。本発明に係る微生物の混合培養物及び純粋培
養物の両方を得るためには、そのようにすることで所望の生成物の確実な純粋性
、特に干渉副生成物又は不要な微生物を含む混入物の除去が達成されうるので、
少なくとも２回希釈系列において培養及び／又は発酵を行うことが好適であるこ
とが証明された。嫌気的条件を維持するため、本発明に係る培養及び／又は発酵
は、好ましくはＨ２及びＣＯ２の気体雰囲気において実施され、１０：９０から
９０：１０、特に約８０：２０のＨ２：ＣＯ２比を有する気体雰囲気が、特に好
ましくは選択される。本発明に係る微生物の増殖にとっては、低い酸化還元電位
を有する嫌気的条件が重要であり、驚くべきことに、Ｈ２の存在下でのみ充分に
迅速な増殖を達成することが可能である。
において少なくとも２回培養又は発酵を行うことにより、ウシ第一胃由来の微生
物とエンテロコッカス・カッセリフラバスの菌株とから混合培養物ＤＳＭ１１７
９９が得られるように実施される。本発明に係る微生物の混合培養物及び純粋培
養物の両方を得るためには、そのようにすることで所望の生成物の確実な純粋性
、特に干渉副生成物又は不要な微生物を含む混入物の除去が達成されうるので、
少なくとも２回希釈系列において培養及び／又は発酵を行うことが好適であるこ
とが証明された。嫌気的条件を維持するため、本発明に係る培養及び／又は発酵
は、好ましくはＨ２及びＣＯ２の気体雰囲気において実施され、１０：９０から
９０：１０、特に約８０：２０のＨ２：ＣＯ２比を有する気体雰囲気が、特に好
ましくは選択される。本発明に係る微生物の増殖にとっては、低い酸化還元電位
を有する嫌気的条件が重要であり、驚くべきことに、Ｈ２の存在下でのみ充分に
迅速な増殖を達成することが可能である。
【００１３】 本発明に係る微生物のさらに迅速な増殖は、０．２から３バール、特に約０．
５から１バールの過剰圧力において培養及び／又は発酵を実施することにより達
成されうるが、これはさらに好ましい実施態様に相当する。好ましくは３５から
４２℃、特に３７℃の温度において培養及び／又は発酵を実施することにより、
本発明に係る微生物ＤＳＭ１１７９８のさらに改良された増殖を達成することが
可能であった。本発明に係る方法における培養又は発酵にとって最適なｐＨは、
好ましくは６と８の間、特に７と７．５の間であった。これらの条件下で、可能
な限り短時間で、比較的少ない希釈系列を用いて、前記の微生物の純粋培養物Ｄ
ＳＭ１１７９８及びその混合培養物（ＤＳＭ１１７９９）の両方を得ることが可
能である。最適な結果は、好ましくはアルギニン、シトルリン、ペプトン、酵母
抽出物、（一つ又は複数の）脂肪酸混合物、（一つ又は複数の）鉱物溶液、グル
コース、ヘミン（ｈａｅｍｉｎ）溶液、メナジオン、ビタミン溶液、微量元素、
及び還元剤から選択される成分を含む培地調製物において培養及び／又は発酵を
実施することにより、本発明に係る方法を用いて達成されうる。
５から１バールの過剰圧力において培養及び／又は発酵を実施することにより達
成されうるが、これはさらに好ましい実施態様に相当する。好ましくは３５から
４２℃、特に３７℃の温度において培養及び／又は発酵を実施することにより、
本発明に係る微生物ＤＳＭ１１７９８のさらに改良された増殖を達成することが
可能であった。本発明に係る方法における培養又は発酵にとって最適なｐＨは、
好ましくは６と８の間、特に７と７．５の間であった。これらの条件下で、可能
な限り短時間で、比較的少ない希釈系列を用いて、前記の微生物の純粋培養物Ｄ
ＳＭ１１７９８及びその混合培養物（ＤＳＭ１１７９９）の両方を得ることが可
能である。最適な結果は、好ましくはアルギニン、シトルリン、ペプトン、酵母
抽出物、（一つ又は複数の）脂肪酸混合物、（一つ又は複数の）鉱物溶液、グル
コース、ヘミン（ｈａｅｍｉｎ）溶液、メナジオン、ビタミン溶液、微量元素、
及び還元剤から選択される成分を含む培地調製物において培養及び／又は発酵を
実施することにより、本発明に係る方法を用いて達成されうる。
【００１４】 培地調製物に含まれる成分は、この場合、部分的に交換可能であり、例えばグ
ルコースの添加により、混合培養物中の平衡を、エンテロコッカス・カッセリフ
ラバス又は対応するその他の嫌気性微生物の方向へシフトさせることが可能であ
り、添加されたグルコースの量に特異的に依存して方法を調節することが可能で
ある。特に好ましい本発明の態様によると、培養及び／又は発酵の開始時に、０
．１から０．５重量％、特に０．２重量％のグルコースが添加される。０．１か
ら０．５重量％のグルコースの添加により、培養及び／又は発酵の開始時にエン
テロコッカス・カッセリフラバスの増殖が促進され、それにより酸化還元電位の
低下がもたらされる。酸化還元電位を低下させることにより、本発明に係る微生
物にとって最適な増殖条件が作出されるため、グルコースの調節された添加によ
り、例えば培地調製物中のシステインのような化学物質を省くことが可能になる
。
ルコースの添加により、混合培養物中の平衡を、エンテロコッカス・カッセリフ
ラバス又は対応するその他の嫌気性微生物の方向へシフトさせることが可能であ
り、添加されたグルコースの量に特異的に依存して方法を調節することが可能で
ある。特に好ましい本発明の態様によると、培養及び／又は発酵の開始時に、０
．１から０．５重量％、特に０．２重量％のグルコースが添加される。０．１か
ら０．５重量％のグルコースの添加により、培養及び／又は発酵の開始時にエン
テロコッカス・カッセリフラバスの増殖が促進され、それにより酸化還元電位の
低下がもたらされる。酸化還元電位を低下させることにより、本発明に係る微生
物にとって最適な増殖条件が作出されるため、グルコースの調節された添加によ
り、例えば培地調製物中のシステインのような化学物質を省くことが可能になる
。
【００１５】 マイコトキシン、特にトリコテセンの無毒化を達成するため、本発明に係る微
生物及び／又は混合培養物によるその他の有利な効果に、好ましくは、活性のあ
るトリコテセン無毒化微生物及び／又はその他の嫌気性微生物の酵素調製物を、
本発明により追加することも可能である。
生物及び／又は混合培養物によるその他の有利な効果に、好ましくは、活性のあ
るトリコテセン無毒化微生物及び／又はその他の嫌気性微生物の酵素調製物を、
本発明により追加することも可能である。
【００１６】 微生物の純粋培養物ＤＳＭ１１７９８を得るため、好ましくは、微生物の純粋
培養物ＤＳＭ１１７９８が、特に増殖刺激因子としてＬ−アルギニンが添加され
た培地調製物における少なくとも２回のさらなる希釈系列により、培養溶液又は
発酵溶液から得られるように、本発明に係る方法は実施される。培養溶液又は発
酵溶液から培地調製物におけるさらに２回の希釈系列を実施することにより、エ
ンテロコッカス・カッセリフラバスを含む混合培養物から完全に純粋に微生物Ｄ
ＳＭ１１７９８を得ることができ、増殖刺激因子Ｌ−アルギニンの添加は平衡を
微生物の純粋培養物の方向へと有利にシフトさせる。これに関して、本発明に係
る細菌の増殖は、Ｌ−アルギニンの濃度が高くなるほど促進される。
培養物ＤＳＭ１１７９８が、特に増殖刺激因子としてＬ−アルギニンが添加され
た培地調製物における少なくとも２回のさらなる希釈系列により、培養溶液又は
発酵溶液から得られるように、本発明に係る方法は実施される。培養溶液又は発
酵溶液から培地調製物におけるさらに２回の希釈系列を実施することにより、エ
ンテロコッカス・カッセリフラバスを含む混合培養物から完全に純粋に微生物Ｄ
ＳＭ１１７９８を得ることができ、増殖刺激因子Ｌ−アルギニンの添加は平衡を
微生物の純粋培養物の方向へと有利にシフトさせる。これに関して、本発明に係
る細菌の増殖は、Ｌ−アルギニンの濃度が高くなるほど促進される。
【００１７】 培地調製物の酸化還元電位をさらに低下させるため、培地調製物の純粋培養
物の発酵のため、１から４重量％の還元剤、特にシステイン／硫化ナトリウム／
炭酸ナトリウムの混合物が添加された方法が、本発明により好ましくは用いられ
る。特に経済的理由により、本発明により、還元剤の添加は可能な限り少なく維
持され、比較実験の過程で、４重量％を超える還元剤の濃度の増加は微生物の増
殖をそれ以上加速させないことが示された。
物の発酵のため、１から４重量％の還元剤、特にシステイン／硫化ナトリウム／
炭酸ナトリウムの混合物が添加された方法が、本発明により好ましくは用いられ
る。特に経済的理由により、本発明により、還元剤の添加は可能な限り少なく維
持され、比較実験の過程で、４重量％を超える還元剤の濃度の増加は微生物の増
殖をそれ以上加速させないことが示された。
【００１８】 保存可能な最終生成物を得るため、本発明に係る方法は、好ましくは、濃縮、
特に遠心分離もしくは濾過、及び／又は安定化、特に凍結乾燥もしくは噴霧乾燥
もしくはカプセル化により、培養溶液又は発酵溶液を製剤化するまで継続される
。これに関して、例えば、培養溶液又は発酵溶液は、第一工程において、遠心分
離もしくは濾過による液体の除去、並びに／又は好ましくはケイ酸アルミニウム
、珪藻土、炭水化物、糖アルコール、デンプン、粉乳、乳清粉末、タンパク質加
水分解物、酵母、及びＰＶＰＰのような充填剤もしくは担体材料が添加された発
酵溶液からの直接的な安定化の実施により濃縮される。これらの担体又は充填剤
の添加により、以後の安定化工程、特に凍結乾燥、噴霧乾燥、ペレット化工程の
カプセル化において、トリコテセンの無毒化に適した、微生物の純粋培養物ＤＳ
Ｍ１１７９８又はそのエンテロコッカス・カッセリフラバス株との混合培養物Ｄ
ＳＭ１１７９、もしくは特にエンテロコッカス属、ストレプトコッカス属、ラク
トコッカス属、バチルス属、又はラクトバチルス属由来のその他の嫌気性微生物
との混合培養物の固体生成物が担体上に直接沈積した固体生成物を得ることが可
能であり、その結果として、特に容易に管理可能かつ保存可能で、さらに代謝的
に好適な生成物が得られる。粘土質の土、ケイ酸アルミニウム、ゼオライトなど
のような大きな内表面積を有する物質上に、微生物又はその混合培養物を沈積さ
せることにより、本発明により意図されたトリコテセンの分解がさらに助長され
る。なぜなら、これらは大きな内表面積を有する物質に物理的に結合し、そこで
、本発明に係る微生物による生化学的攻撃が明確に助長されるためである。
特に遠心分離もしくは濾過、及び／又は安定化、特に凍結乾燥もしくは噴霧乾燥
もしくはカプセル化により、培養溶液又は発酵溶液を製剤化するまで継続される
。これに関して、例えば、培養溶液又は発酵溶液は、第一工程において、遠心分
離もしくは濾過による液体の除去、並びに／又は好ましくはケイ酸アルミニウム
、珪藻土、炭水化物、糖アルコール、デンプン、粉乳、乳清粉末、タンパク質加
水分解物、酵母、及びＰＶＰＰのような充填剤もしくは担体材料が添加された発
酵溶液からの直接的な安定化の実施により濃縮される。これらの担体又は充填剤
の添加により、以後の安定化工程、特に凍結乾燥、噴霧乾燥、ペレット化工程の
カプセル化において、トリコテセンの無毒化に適した、微生物の純粋培養物ＤＳ
Ｍ１１７９８又はそのエンテロコッカス・カッセリフラバス株との混合培養物Ｄ
ＳＭ１１７９、もしくは特にエンテロコッカス属、ストレプトコッカス属、ラク
トコッカス属、バチルス属、又はラクトバチルス属由来のその他の嫌気性微生物
との混合培養物の固体生成物が担体上に直接沈積した固体生成物を得ることが可
能であり、その結果として、特に容易に管理可能かつ保存可能で、さらに代謝的
に好適な生成物が得られる。粘土質の土、ケイ酸アルミニウム、ゼオライトなど
のような大きな内表面積を有する物質上に、微生物又はその混合培養物を沈積さ
せることにより、本発明により意図されたトリコテセンの分解がさらに助長され
る。なぜなら、これらは大きな内表面積を有する物質に物理的に結合し、そこで
、本発明に係る微生物による生化学的攻撃が明確に助長されるためである。
【００１９】 本発明によると、微生物は、飼料添加剤の製造のため、純粋培養物及び／又は
混合培養物（ＤＳＭ１１７９８、ＤＳＭ１１７９９）においてさらに用いられる
。特に好ましい本発明に係る使用においては、本質的に、純粋培養物及び／又は
混合培養物（ＤＳＭ１１７９８及びＤＳＭ１１７９９）が、適宜担体材料が添加
された、凍結乾燥もしくは噴霧乾燥及び／又はカプセル化もしくはペレット化さ
れた固定化物として使用される。本発明に係る微生物の純粋培養物及び／又は混
合培養物、並びに噴霧乾燥された固定化物はいずれも、飼料添加剤として直接的
に用いられうるが、飼料添加剤を、調製中に飼料に直接混合すること、及び／又
は動物への給餌中に固体又は液体のいずれかの形態で飼料に混合することも可能
である。
混合培養物（ＤＳＭ１１７９８、ＤＳＭ１１７９９）においてさらに用いられる
。特に好ましい本発明に係る使用においては、本質的に、純粋培養物及び／又は
混合培養物（ＤＳＭ１１７９８及びＤＳＭ１１７９９）が、適宜担体材料が添加
された、凍結乾燥もしくは噴霧乾燥及び／又はカプセル化もしくはペレット化さ
れた固定化物として使用される。本発明に係る微生物の純粋培養物及び／又は混
合培養物、並びに噴霧乾燥された固定化物はいずれも、飼料添加剤として直接的
に用いられうるが、飼料添加剤を、調製中に飼料に直接混合すること、及び／又
は動物への給餌中に固体又は液体のいずれかの形態で飼料に混合することも可能
である。
【００２０】 可能な限り完全なトリコテセンの生理学的に許容される物質への分解又は化学
的変換を達成するため、飼料又は動物の消化管におけるトリコテセンの不活化の
ための本発明に係る飼料添加剤は、本発明に係る微生物の、もしくは本発明によ
り調製された微生物の純粋培養物及び／又は混合培養物を、飼料１０００ｋｇ当
たり１０５から１０１２細胞／ｋｇ、特に１０７から１０９細胞／ｋｇの量で含
むことを本質的に特徴とする。１０５から１０１２細胞／ｋｇ、特に１０７から
１０９細胞／ｋｇの、トリコテセンの無毒化に適した、本発明に係る微生物、又
は微生物とエンテロコッカス・カッセリフラバス、もしくは特にエンテロコッカ
ス属、ストレプトコッカス属、ラクトコッカス属、バチルス属、又はラクトバチ
ルス属のその他の嫌気性微生物との本発明に係る混合培養物の使用により、飼料
中の高濃度のトリコテセン、特にデオキシニバレノール、Ｔ−２毒素、ＨＴ−２
毒素、ニバレノール、モノアセトキシサーペノール、ジアセトキシサーペノール
、トリコダーモル、ベルカリン、ロロジン、アセチルデオキシニバレノール、イ
ソトリコダーミン、ヒドロキシイソトリコダーミン、カロネクトリン、Ｔ−２テ
トラオール、Ｔ−２トリオール、デアセチルネオソラニオール、ネオソラニオー
ル、アセチルネオソラニオール、スポロトリキオール、トリコトリオール、サン
ブシノール、及びカルモリンを、デオキシニバレノールのデエポキシ代謝物（Ｄ
ＯＭ−１）のような化学的に無害な物質に変換することが可能であり、従って本
発明に係る飼料添加剤を用いて、動物の生産性の増加、及び毒性の減少のための
飼料変換率の改良の両方が達成されうる。
的変換を達成するため、飼料又は動物の消化管におけるトリコテセンの不活化の
ための本発明に係る飼料添加剤は、本発明に係る微生物の、もしくは本発明によ
り調製された微生物の純粋培養物及び／又は混合培養物を、飼料１０００ｋｇ当
たり１０５から１０１２細胞／ｋｇ、特に１０７から１０９細胞／ｋｇの量で含
むことを本質的に特徴とする。１０５から１０１２細胞／ｋｇ、特に１０７から
１０９細胞／ｋｇの、トリコテセンの無毒化に適した、本発明に係る微生物、又
は微生物とエンテロコッカス・カッセリフラバス、もしくは特にエンテロコッカ
ス属、ストレプトコッカス属、ラクトコッカス属、バチルス属、又はラクトバチ
ルス属のその他の嫌気性微生物との本発明に係る混合培養物の使用により、飼料
中の高濃度のトリコテセン、特にデオキシニバレノール、Ｔ−２毒素、ＨＴ−２
毒素、ニバレノール、モノアセトキシサーペノール、ジアセトキシサーペノール
、トリコダーモル、ベルカリン、ロロジン、アセチルデオキシニバレノール、イ
ソトリコダーミン、ヒドロキシイソトリコダーミン、カロネクトリン、Ｔ−２テ
トラオール、Ｔ−２トリオール、デアセチルネオソラニオール、ネオソラニオー
ル、アセチルネオソラニオール、スポロトリキオール、トリコトリオール、サン
ブシノール、及びカルモリンを、デオキシニバレノールのデエポキシ代謝物（Ｄ
ＯＭ−１）のような化学的に無害な物質に変換することが可能であり、従って本
発明に係る飼料添加剤を用いて、動物の生産性の増加、及び毒性の減少のための
飼料変換率の改良の両方が達成されうる。
【００２１】 本発明によりマイコトキシン、特にトリコテセンの生化学的分解をさらに助長
するため、好ましくは、飼料１０００ｋｇ当たり０．５から８ｋｇ、特に０．７
から４ｋｇの量で、担体材料及び／又は充填剤が、飼料添加剤にさらに含まれて
いてもよい。担体材料及び／又は充填剤の添加により、所望により、飼料中に含
まれているかもしれない分解すべきマイコトキシンとさらにその他の有害な物質
を物理的に物質に結合させ、その結果としてそれがもはや代謝に利用され得なく
することが可能である。
するため、好ましくは、飼料１０００ｋｇ当たり０．５から８ｋｇ、特に０．７
から４ｋｇの量で、担体材料及び／又は充填剤が、飼料添加剤にさらに含まれて
いてもよい。担体材料及び／又は充填剤の添加により、所望により、飼料中に含
まれているかもしれない分解すべきマイコトキシンとさらにその他の有害な物質
を物理的に物質に結合させ、その結果としてそれがもはや代謝に利用され得なく
することが可能である。
【００２２】 この場合、毒素、特にトリコテセンの結合に特に有利であることが証明されて
いるケイ酸アルミニウム、珪藻土、炭水化物、糖アルコール、デンプン、粉乳、
乳清粉末、タンパク質加水分解物、酵母、及び／又はＰＶＰＰが、担体材料及び
／又は充填剤として特に使用される。
いるケイ酸アルミニウム、珪藻土、炭水化物、糖アルコール、デンプン、粉乳、
乳清粉末、タンパク質加水分解物、酵母、及び／又はＰＶＰＰが、担体材料及び
／又は充填剤として特に使用される。
【００２３】 特に好ましい飼料添加剤は、１から６５重量％、特に５から５０重量％の噴霧
乾燥又は凍結乾燥された微生物の固定化物と、９９から３５重量％、特に９５か
ら５０重量％の担体材料及び／又は充填剤との混合物からなることを特徴とする
。この型の飼料添加剤は、飼料及び動物の消化管の両方における、デオキシニバ
レノール（ＤＯＮ）、Ｔ−２毒素、ＨＴ−２毒素、ニバレノール、モノアセトキ
シサーペノール、ジアセトキシサーペノール、トリコダーモル、ベルカリン、ロ
ロジン、アセチルデオキシニバレノール、イソトリコダーミン、ヒドロキシイソ
トリコダーミン、カロネクトリン、Ｔ−２テトラオール、Ｔ−２トリオール、デ
アセチルネオソラニオール、ネオソラニオール、アセチルネオソラニオール、ス
ポロトリキオール、トリコトリオール、サンブシノール、及びカルモリンの不活
化に特に適している。
乾燥又は凍結乾燥された微生物の固定化物と、９９から３５重量％、特に９５か
ら５０重量％の担体材料及び／又は充填剤との混合物からなることを特徴とする
。この型の飼料添加剤は、飼料及び動物の消化管の両方における、デオキシニバ
レノール（ＤＯＮ）、Ｔ−２毒素、ＨＴ−２毒素、ニバレノール、モノアセトキ
シサーペノール、ジアセトキシサーペノール、トリコダーモル、ベルカリン、ロ
ロジン、アセチルデオキシニバレノール、イソトリコダーミン、ヒドロキシイソ
トリコダーミン、カロネクトリン、Ｔ−２テトラオール、Ｔ−２トリオール、デ
アセチルネオソラニオール、ネオソラニオール、アセチルネオソラニオール、ス
ポロトリキオール、トリコトリオール、サンブシノール、及びカルモリンの不活
化に特に適している。
【００２４】 本発明に係る微生物の特徴決定、その増殖及び活性の条件、並びに本発明に係
る微生物の補助によるトリコテセンの代謝生成物の形成により、そして給餌試験
の実施例により、以下に本発明をさらに説明する。
る微生物の補助によるトリコテセンの代謝生成物の形成により、そして給餌試験
の実施例により、以下に本発明をさらに説明する。
【００２５】 本発明に係る微生物は、活性のあるトリコテセン転換株、特にデオキシニバレ
ノール転換株であり、嫌気的培養条件、即ちＣＯ２：Ｈ２（２０／８０ｖ／ｖ）
気体雰囲気及び０．５から１．５バールの過剰圧力における、最適化された栄養
培地における反復培養により、ウシ第一胃から得られる。本明細書においては、
それぞれの場合において、異なる濃度の２つの異なる鉱物溶液、メナジオン・ス
トック溶液、ヘミン溶液からなるＰＹＧ及びＰＹ培地を培地調製物として用いた
。ＰＹＧ培地には酵母抽出物、ペプトン、グルコースが付加的に添加されていた
。酸化還元電子を低下させるため、システイン／Ｎａ２Ｓ／Ｎａ２ＣＯ３溶液か
らなる２から４重量％の還元溶液を、ＰＹＧ培地及びＰＹ培地の両方に添加し、
ＣＯ２通気によりｐＨを７から７．５の値に調整した。この培地調製物の補助に
より、いくつかの希釈系列を実施することにより微生物の純粋培養物ＤＳＭ１１
７９８を得ることも可能であるし、特にＰＹＧ培地を用いて、微生物とエンテロ
コッカス・カッセリフラバスとの混合培養物（ＤＳＭ１１７９９）を得ることも
可能である。微生物の増殖は、充分に低い酸化還元電位を有する絶対嫌気的条件
下で、かつＨ２の存在下でのみ達成される。３５℃と３８℃の間で微生物の適度
な増殖を達成することも可能であるが、微生物の最適な増殖は、約３７℃で達成
されうる。微生物の純粋培養物ＤＳＭ１１７９８を培養するためには、液体培地
中のＬ−アルギニンが刺激効果を有する。
ノール転換株であり、嫌気的培養条件、即ちＣＯ２：Ｈ２（２０／８０ｖ／ｖ）
気体雰囲気及び０．５から１．５バールの過剰圧力における、最適化された栄養
培地における反復培養により、ウシ第一胃から得られる。本明細書においては、
それぞれの場合において、異なる濃度の２つの異なる鉱物溶液、メナジオン・ス
トック溶液、ヘミン溶液からなるＰＹＧ及びＰＹ培地を培地調製物として用いた
。ＰＹＧ培地には酵母抽出物、ペプトン、グルコースが付加的に添加されていた
。酸化還元電子を低下させるため、システイン／Ｎａ２Ｓ／Ｎａ２ＣＯ３溶液か
らなる２から４重量％の還元溶液を、ＰＹＧ培地及びＰＹ培地の両方に添加し、
ＣＯ２通気によりｐＨを７から７．５の値に調整した。この培地調製物の補助に
より、いくつかの希釈系列を実施することにより微生物の純粋培養物ＤＳＭ１１
７９８を得ることも可能であるし、特にＰＹＧ培地を用いて、微生物とエンテロ
コッカス・カッセリフラバスとの混合培養物（ＤＳＭ１１７９９）を得ることも
可能である。微生物の増殖は、充分に低い酸化還元電位を有する絶対嫌気的条件
下で、かつＨ２の存在下でのみ達成される。３５℃と３８℃の間で微生物の適度
な増殖を達成することも可能であるが、微生物の最適な増殖は、約３７℃で達成
されうる。微生物の純粋培養物ＤＳＭ１１７９８を培養するためには、液体培地
中のＬ−アルギニンが刺激効果を有する。
【００２６】 本発明に係る微生物を用いて、トリコテセンにおいて、毒性１２，１３−エポ
キシ環の還元的開裂によりこれらを無毒化することが可能である。
キシ環の還元的開裂によりこれらを無毒化することが可能である。
【００２７】 ここでは一般的なトリコテセン及び特定のトリコテセン、デオキシニバレノー
ルの補助により、以下に反応図式を示す。
ルの補助により、以下に反応図式を示す。
【００２８】
【化４】 本発明に係る微生物ＤＳＭ１１７９８、及びその他の通性嫌気性微生物との共
培養物、及びエンテロコッカス・カッセリフラバスとの混合培養物（ＤＳＭ１１
７９９）の発酵を例にとり、発酵条件及び使用可能な発酵法の両方を以下に例示
する。
培養物、及びエンテロコッカス・カッセリフラバスとの混合培養物（ＤＳＭ１１
７９９）の発酵を例にとり、発酵条件及び使用可能な発酵法の両方を以下に例示
する。
【００２９】 発酵条件： ３５と４２℃の間、特に約３７℃の発酵温度； ６と８の間、特に７．０〜７．５の発酵のためのｐＨ範囲； 酸化還元電位：方法が実施される態様に応じて０〜−３５０ｍＶ； 気体雰囲気：１０：９０から９０：１０、特に８０：２０のＨ２／ＣＯ２； 発酵圧力：０．２〜３バール、特に０．５から１バール。
【００３０】 必須の培地構成成分：アルギニン、シトルリン、酵母抽出物、ペプトン、ヘミ
ン、及びヘミン含有物質、低級脂肪酸、鉱物溶液、炭酸塩緩衝液（炭酸ナトリウ
ム＋ＣＯ２）、場合によりグルコース、微量元素溶液、ビタミン溶液、及び還元
剤。
ン、及びヘミン含有物質、低級脂肪酸、鉱物溶液、炭酸塩緩衝液（炭酸ナトリウ
ム＋ＣＯ２）、場合によりグルコース、微量元素溶液、ビタミン溶液、及び還元
剤。
【００３１】 発酵法を実施するための様々な様式が、本明細書において選択されうる。
【００３２】 １）純粋培養物ＤＳＭ１１７９８の回分発酵： 手順：１２１℃かつ１．５バール、又は滅菌濾過における培地の滅菌。滅菌さ
れたＣＯ２の通気、並びに炭酸ナトリウム及び還元剤の添加を行いながら、３５
〜４２℃、特に３７℃の発酵温度へ培地を冷却。６〜８、特に７〜７．５のｐＨ
が達成されるまで通気を継続する。その後、２４〜４８時間予備培養された１〜
１０％、特に５％の接種物を添加。定常期の開始まで、基質濃度に応じて約２０
〜５０時間、又は１０１３〜１０１６の範囲の微生物数が達成されるまで発酵。
れたＣＯ２の通気、並びに炭酸ナトリウム及び還元剤の添加を行いながら、３５
〜４２℃、特に３７℃の発酵温度へ培地を冷却。６〜８、特に７〜７．５のｐＨ
が達成されるまで通気を継続する。その後、２４〜４８時間予備培養された１〜
１０％、特に５％の接種物を添加。定常期の開始まで、基質濃度に応じて約２０
〜５０時間、又は１０１３〜１０１６の範囲の微生物数が達成されるまで発酵。
【００３３】 このプロセスは、基質濃度により本質的に調節される。
【００３４】 ２）純粋培養物ＤＳＭ１１７９８の流加発酵： 手順：１と同様の培地の滅菌、緩衝、還元、及び接種。基質、例えばアルギニ
ン、シトルリンの回分的又は連続的な添加による生物量の増加。培養物は、比較
的高いレベルに基質濃度を維持することにより、対数増殖期に維持される。この
方法の実施法を用いて、最大６０時間の発酵時間が可能である。
ン、シトルリンの回分的又は連続的な添加による生物量の増加。培養物は、比較
的高いレベルに基質濃度を維持することにより、対数増殖期に維持される。この
方法の実施法を用いて、最大６０時間の発酵時間が可能である。
【００３５】 方法は、基質添加及び発酵時間（最終代謝生成物の蓄積）により本質的に調節
される。
される。
【００３６】 ３）純粋培養物ＤＳＭ１１７９８の連続発酵： 手順：１と同様の培地の滅菌、緩衝、還元、及び接種。定常期の開始まで回分
発酵を行った後、無菌栄養溶液の添加により連続発酵に変換。流出物を貯蔵槽に
回収し、回分的又は連続的に噴霧乾燥して製剤化する。
発酵を行った後、無菌栄養溶液の添加により連続発酵に変換。流出物を貯蔵槽に
回収し、回分的又は連続的に噴霧乾燥して製剤化する。
【００３７】 ４）その他の通性嫌気性微生物及び絶対嫌気性微生物との共培養における純粋
培養物ＤＳＭ１１７９８の連続発酵、又は共培養物ＤＳＭ１１７９９の発酵。
培養物ＤＳＭ１１７９８の連続発酵、又は共培養物ＤＳＭ１１７９９の発酵。
【００３８】 使用されうる共培養物の例： H2生成体 DSM11798+フ゛チルヒ゛フ゛リオ(Butyrvibrio)種 DSM11798+ルミノコッカス(Ruminococcus)種 フ゜ロハ゛イオティクス(probiotics) DSM11798+エンテロコッカス・カッセリフラハ゛ス=DSM11799 DSM11798+ストレフ゜トコッカス種(エンテロコッキ(enterococci) 乳酸ストレフ゜トコッキ(lactic acid streptococci) 嫌気性ストレフ゜トコッキ(anaerobic streptococci)) DSM11798+ロイコノストック(Leuconostoc)種. DSM11798+ヘ゜テ゛ィオコッカス(Pediococcus)種 DSM11798+ラクトハ゛チルス種 DSM11798+ヒ゛フィト゛ハ゛クテリウム(Bifidobacterium)種 DSM11798+ハ゛チルス種 DSM11798+メカ゛スフェラ(Megasphera)種 酵母 DSM11798+サッカロミセス(Saccharomyces)種 DSM11798+クリヘ゛ロミセス(Klyveromyces)種 DSM11798+カンシ゛タ゛(Candida)種 発酵における共存生物の使用は、一方では、発酵における酸化還元電位を減少
させ、ＤＳＭ１１７９８のための水素を生成し、かつ製剤化及び安定化における
防御的生物として機能する。ＤＳＭ１１７９８の微生物数減少の最少化がここで
起こり、それらは、いくつかの場合においては、動物生産における付加的な生産
性促進因子として機能する。
させ、ＤＳＭ１１７９８のための水素を生成し、かつ製剤化及び安定化における
防御的生物として機能する。ＤＳＭ１１７９８の微生物数減少の最少化がここで
起こり、それらは、いくつかの場合においては、動物生産における付加的な生産
性促進因子として機能する。
【００３９】 ４ａ）共培養における回分発酵： Ｉ）炭酸塩含有培地における共存生物の予備培養。還元剤は含まないが、この
目的のため炭酸塩を付加的に含む前記の培地が、酸化還元電位を減少させるため
に用いられる。その後、共存生物の不活化及びＤＳＭ１１７９８の接種。
目的のため炭酸塩を付加的に含む前記の培地が、酸化還元電位を減少させるため
に用いられる。その後、共存生物の不活化及びＤＳＭ１１７９８の接種。
【００４０】 ＩＩ）共存生物及びＤＳＭ１１７９８の同時接種、並びに０．１〜１％炭酸塩
の培地への添加。還元剤は含まないが、この目的のため炭酸塩を付加的に含む前
記の培地が用いられる。共存生物の増殖は促進され、酸化還元電位が急速に減少
し、理想的な増殖条件のためＤＳＭ１１７９８が増殖を開始する。
の培地への添加。還元剤は含まないが、この目的のため炭酸塩を付加的に含む前
記の培地が用いられる。共存生物の増殖は促進され、酸化還元電位が急速に減少
し、理想的な増殖条件のためＤＳＭ１１７９８が増殖を開始する。
【００４１】 ＩＩＩ）Ｉ＋ＩＩとの組み合わせ：発酵の最後に、共存生物の再発酵のための
炭酸塩を添加。これにより、増加した生物収量のため、製剤化及び安定化におけ
る防御効果（酸素）がもたらされる。
炭酸塩を添加。これにより、増加した生物収量のため、製剤化及び安定化におけ
る防御効果（酸素）がもたらされる。
【００４２】 ４ｂ）共培養における流加発酵： ＊）４ａＩに相当する回分期、その後、２に相当する基質（アルギニン、シト
ルリン）の連続的／回分的添加。
ルリン）の連続的／回分的添加。
【００４３】 ＊＊）４ａＩに相当する回分期、その後、基質組み合わせ（アルギニン／炭酸
塩又はシトルリン／炭酸塩）の連続的／回分的添加。
塩又はシトルリン／炭酸塩）の連続的／回分的添加。
【００４４】 ４ｃ）共培養物の連続発酵： ４ａＩに相当する回分期、その後、アルギニン／炭酸塩又はシトルリン／炭酸
塩を含有する栄養溶液の添加による連続的発酵への変換。３と同様の製剤化。
塩を含有する栄養溶液の添加による連続的発酵への変換。３と同様の製剤化。
【００４５】 発酵生成物の製剤化： １）膜濾過法（限外濾過、微量濾過）又は遠心分離による濃縮。その後、有機及
び／もしくは無機担体材料を用いた、又は用いない、噴霧乾燥又は凍結乾燥。 ２）有機及び／もしくは無機担体材料を用いた、又は用いない、直接的な噴霧乾
燥又は凍結乾燥。 ３）有機及び／もしくは無機担体材料を用いた、又は用いない、連続的な発酵液
の噴霧乾燥。 ４）１、２、又は３と組み合わせられたカプセル化又はペレット化。
び／もしくは無機担体材料を用いた、又は用いない、噴霧乾燥又は凍結乾燥。 ２）有機及び／もしくは無機担体材料を用いた、又は用いない、直接的な噴霧乾
燥又は凍結乾燥。 ３）有機及び／もしくは無機担体材料を用いた、又は用いない、連続的な発酵液
の噴霧乾燥。 ４）１、２、又は３と組み合わせられたカプセル化又はペレット化。
【００４６】 腸内培地におけるＤＯＮ生物学的転換株（ＤＳＭ１１７９８）の活性を確認す
るため、ブタの腸を用いたインビトロ・モデルを開発した。
るため、ブタの腸を用いたインビトロ・モデルを開発した。
【００４７】 これに関して、第一の実験において、腸内容物を含む、凍結乾燥物が添加され
た緩衝液を用いたインビトロ・モデルを開発した。
た緩衝液を用いたインビトロ・モデルを開発した。
【００４８】 新たに屠殺されたブタの小腸及び大腸を、ＣＯ２雰囲気下で維持した。ＣＯ２ 雰囲気下で、腹側、中央、及び背側の小腸及び大腸の切片の内容物を個別の容器
に空けた。
に空けた。
【００４９】 ２０ｍｌの嫌気的緩衝液＋１ｇの腸内容物（ＣＯ２通気）＋ＤＯＮを、ＣＯ２ 又はＨ２／ＣＯ２雰囲気下で３７℃でインキュベートした。
【００５０】 ここで、小腸の腹側切片には、活性のある凍結乾燥物を添加した場合、著しい
陽性の効果が認められることが見出された。純粋なＣＯ２通気下においても著し
い活性が検出されうるという事実は、ここで特に重要であった。
陽性の効果が認められることが見出された。純粋なＣＯ２通気下においても著し
い活性が検出されうるという事実は、ここで特に重要であった。
【００５１】 第二のインビトロ実験は、活性のある懸濁液が添加されたブタの腸の完全な切
片を用いて実施された。
片を用いて実施された。
【００５２】 嫌気的な還元された予備インキュベートされた緩衝液（３０ｍｌ）中で、３７
℃で、ブタの腸の切片（腹側、中央、背側、大腸、各々６〜８ｃｍ）を、２００
ｐｐｍのＤＯＮと共に２４時間インキュベートした。
℃で、ブタの腸の切片（腹側、中央、背側、大腸、各々６〜８ｃｍ）を、２００
ｐｐｍのＤＯＮと共に２４時間インキュベートした。
【００５３】 この改変されたインビトロ試験変法は、屠殺直後に完全な腸が実験室に輸送さ
れ、そこで所望の長さの切片に血行が止められるため、腸の生理学的条件がほと
んど影響を受けないという利点を有する。その後、切片は分離され、ＤＯＮ及び
活性のある培養物を含む緩衝溶液中でインキュベートされる。
れ、そこで所望の長さの切片に血行が止められるため、腸の生理学的条件がほと
んど影響を受けないという利点を有する。その後、切片は分離され、ＤＯＮ及び
活性のある培養物を含む緩衝溶液中でインキュベートされる。
【００５４】 結果は、明白である。ＤＯＮのＤＯＭ−１への脱エポキシ化は、活性のある培
養物により達成されうる。この活性が腸の全ての切片において示され、最も高い
活性が腹側腸において見出されるということは重要である。これは、食物吸収の
主要な部分である限りにおいて重要であり、従ってマイコトキシンの放出も同様
にそこで起こる。
養物により達成されうる。この活性が腸の全ての切片において示され、最も高い
活性が腹側腸において見出されるということは重要である。これは、食物吸収の
主要な部分である限りにおいて重要であり、従ってマイコトキシンの放出も同様
にそこで起こる。
【００５５】 ニワトリ細胞培養物に関する実験プロトコルの補助により、ブタ及びニワトリ
における給餌例において、純粋培養物（ＤＳＭ１１７９８）、並びに微生物とエ
ンテロコッカス・カッセリフラバスとの混合培養物（ＤＳＭ１１７９９）、及び
特にエンテロコッカス属、ストレプトコッカス属、ラクトコッカス属、バチルス
属、又はラクトバチルス属のその他の嫌気性微生物との混合培養物の両方におけ
る本発明に係る微生物の作用を以下に証明する。
における給餌例において、純粋培養物（ＤＳＭ１１７９８）、並びに微生物とエ
ンテロコッカス・カッセリフラバスとの混合培養物（ＤＳＭ１１７９９）、及び
特にエンテロコッカス属、ストレプトコッカス属、ラクトコッカス属、バチルス
属、又はラクトバチルス属のその他の嫌気性微生物との混合培養物の両方におけ
る本発明に係る微生物の作用を以下に証明する。
【００５６】 ニワトリ細胞培養物を用いた実験プロトコルの補助により、微生物がマイコト
キシン、特にトリコテセン、特にデオキシニバレノール及びＴ−２毒素を化学的
に分解することができ、特に還元し生理学的に許容される物質、デオキシニバレ
ノールの場合であればその脱エポキシ代謝物、即ちＤＯＭ−１へと変換すること
ができることが示された。
キシン、特にトリコテセン、特にデオキシニバレノール及びＴ−２毒素を化学的
に分解することができ、特に還元し生理学的に許容される物質、デオキシニバレ
ノールの場合であればその脱エポキシ代謝物、即ちＤＯＭ−１へと変換すること
ができることが示された。
【００５７】 ニワトリ・リンパ球を培養するため、以下の条件が付加された。
【００５８】 用いられた細胞数：２×１０６細胞／ｍｌ 刺激：ＣｏｎＡ ５μｇ／ｍｌ マイコトキシン：ＤＯＮ、ＤＯＭ−１、及びＴ２毒素 濃度範囲：ＤＯＮ：１０〜０．０８μｇ／ｍｌ ＤＯＭ−１：２３２〜１．８１μｇ／ｍｌ Ｔ２毒素：３０〜０．２３４ｎｇ／ｍｌ 総インキュベート時間：４４時間。そのうち１６時間はインキュベーター中で
の培養中の標識時間：４０℃、５％ＣＯ２、飽和水蒸気雰囲気。
の培養中の標識時間：４０℃、５％ＣＯ２、飽和水蒸気雰囲気。
【００５９】 ニワトリ・リンパ球細胞培養物を用いた実験プロトコルの補助により、活性の
ある培養物がマイコトキシン、特にトリコテセンを生化学的に分解することがで
き、特に還元し生理学的に許容される物質へと変換することができることが示さ
れた。ＤＯＮ及びその脱エポキシ代謝物ＤＯＭ−１を例として、これを以下に示
す。
ある培養物がマイコトキシン、特にトリコテセンを生化学的に分解することがで
き、特に還元し生理学的に許容される物質へと変換することができることが示さ
れた。ＤＯＮ及びその脱エポキシ代謝物ＤＯＭ−１を例として、これを以下に示
す。
【００６０】 細胞培養物の顕微鏡による確認： ニワトリ・リンパ球を含む細胞培養物を、培養中、継続的に顕微鏡により確認
した。
した。
【００６１】 ２０時間後の確認： 未刺激細胞は、厚く、不均一に分布しており、ＣｏｎＡを用いた確認は、強力
な刺激及び明白な増殖フォーカスを示す。
な刺激及び明白な増殖フォーカスを示す。
【００６２】 ＤＯＮ：全ての濃度段階において増殖フォーカスが見られるが、１０μｇ／ｍ
ｌ〜０．６２５μｇ／ｍｌの濃度範囲において、毒素濃度が増加するにつれ、増
殖フォーカスの著しい減少が観察される。
ｌ〜０．６２５μｇ／ｍｌの濃度範囲において、毒素濃度が増加するにつれ、増
殖フォーカスの著しい減少が観察される。
【００６３】 ＤＯＭ：５８μｇ／ｍｌという最も高い濃度段階まで、対照と比較して明白な
変化がない、全ての濃度段階における増殖フォーカス。
変化がない、全ての濃度段階における増殖フォーカス。
【００６４】 これは、２０時間後ですら、０．６２５μｇ／ｍｌの濃度から、毒素バッチに
おける細胞活性に対する著しい有害効果が存在し、脱エポキシ代謝物自体には、
細胞培養物に対する負の効果が、５８μｇ／ｍｌの濃度ですら見られないことを
意味している。
おける細胞活性に対する著しい有害効果が存在し、脱エポキシ代謝物自体には、
細胞培養物に対する負の効果が、５８μｇ／ｍｌの濃度ですら見られないことを
意味している。
【００６５】 ２８時間後及び４４時間後の確認： 対照バッチ（未刺激及びＣｏｎＡ）は不変である。
【００６６】 細胞培養物に対するＤＯＮの作用はさらに増加した。２０時間後ですら変化が
見出されたこれらの系列において、細胞に対する著しい損傷が見られた。
見出されたこれらの系列において、細胞に対する著しい損傷が見られた。
【００６７】 これらのインキュベーション時間の後ですら、５８μｇ／ｍｌの脱エポキシ代
謝物濃度ですら、細胞活性に対する有害な効果は見出すことができなかった。
謝物濃度ですら、細胞活性に対する有害な効果は見出すことができなかった。
【００６８】 第二の実験において、離乳子豚に給餌された、マイコトキシン、デオキシニバ
レノールを４５０ｐｐｂの量で含む飼料における、本発明に係る飼料添加剤の作
用を調査した。
レノールを４５０ｐｐｂの量で含む飼料における、本発明に係る飼料添加剤の作
用を調査した。
【００６９】 動物：「ラージホワイト（Ｌａｒｇｅ Ｗｈｉｔｅ）」及び「ランドラッセ（
Ｌａｎｄｒａｓｓｅ）」という品種の子豚を、陰性比較群、陽性比較群、及び被
検群に分割した。離乳（子豚の２０から２２日齢）の直後に開始された実験；動
物の生産性パラメータを１４日後に決定した。
Ｌａｎｄｒａｓｓｅ）」という品種の子豚を、陰性比較群、陽性比較群、及び被
検群に分割した。離乳（子豚の２０から２２日齢）の直後に開始された実験；動
物の生産性パラメータを１４日後に決定した。
【００７０】 給餌：離乳の７日後に商業的に入手可能な子豚スターターをブタに給餌し、そ
の後、商業的に入手可能な子豚成長飼料を与えた。マイコトキシン、デオキシニ
バレノールを、陽性比較群及び被検群の飼料に導入するため、４５０ｐｐｂの濃
度で（エタノールに溶解して）飼料の少量の一部と混合した。飼料は無制限に与
えた。
の後、商業的に入手可能な子豚成長飼料を与えた。マイコトキシン、デオキシニ
バレノールを、陽性比較群及び被検群の飼料に導入するため、４５０ｐｐｂの濃
度で（エタノールに溶解して）飼料の少量の一部と混合した。飼料は無制限に与
えた。
【００７１】 飼料添加剤の用量：飼料添加剤を被検群の飼料に１ｋｇ／ｔの用量で添加した
。用いられた飼料添加剤は、本発明に係る微生物とエンテロコッカス・カッセリ
フラバスとの混合培養物（ＤＳＭ１１７９９）であり、ケイ酸アルミニウムが担
体として混合培養物に添加されていた。
。用いられた飼料添加剤は、本発明に係る微生物とエンテロコッカス・カッセリ
フラバスとの混合培養物（ＤＳＭ１１７９９）であり、ケイ酸アルミニウムが担
体として混合培養物に添加されていた。
【００７２】 微生物数：４×１０８細胞／ｋｇの最終飼料。
【００７３】 結果：結果は表１に要約されている。表１は、この試験における体重増加の平
均及び飼料変換率の平均を示し、陰性対照群はマイコトキシンも本発明に係る微
生物も含まない飼料を給餌され、陽性対照群はマイコトキシンのみ含む飼料を給
餌され、被検群はマイコトキシン及び本発明に係る微生物を含む飼料を給餌され
た。
均及び飼料変換率の平均を示し、陰性対照群はマイコトキシンも本発明に係る微
生物も含まない飼料を給餌され、陽性対照群はマイコトキシンのみ含む飼料を給
餌され、被検群はマイコトキシン及び本発明に係る微生物を含む飼料を給餌され
た。
【００７４】 表１
【００７５】
【表１】 考察：この試験より、飼料添加剤が、離乳子豚に対するデオキシニバレノール
混入の有害効果を補償できること、並びにマイコトキシン及び飼料添加剤の両方
を受容した子豚が、陰性対照群と本質的に同量の飼料を消費し、同等の飼料変換
率（ＦＣＲ）をも示したことが明らかである。これらの結果は、本発明に係る混
合培養物（ＤＳＭ１１７９９）により、デオキシニバレノールの負の効果をほぼ
完全に補償することが可能であることを明らかにした。
混入の有害効果を補償できること、並びにマイコトキシン及び飼料添加剤の両方
を受容した子豚が、陰性対照群と本質的に同量の飼料を消費し、同等の飼料変換
率（ＦＣＲ）をも示したことが明らかである。これらの結果は、本発明に係る混
合培養物（ＤＳＭ１１７９９）により、デオキシニバレノールの負の効果をほぼ
完全に補償することが可能であることを明らかにした。
【００７６】 さらなる試験において、本発明に係る飼料添加剤のトリコテセン混入に対する
効果が、ニワトリ飼料において示された。用いられたパラメータは、最終体重、
飼料摂取量、及び飼料変換率、並びにニワトリの損失である。臨床的な症状も記
録された。
効果が、ニワトリ飼料において示された。用いられたパラメータは、最終体重、
飼料摂取量、及び飼料変換率、並びにニワトリの損失である。臨床的な症状も記
録された。
【００７７】 動物：コブ（Ｃｏｂｂ）品種のニワトリを誕生日以後調査した。１０，７００
匹、１０，９００匹、及び１５，７００匹のニワトリを含む３つの群を用いて試
験を実施した。特定のニワトリ飼料を無制限にニワトリに投与した。
匹、１０，９００匹、及び１５，７００匹のニワトリを含む３つの群を用いて試
験を実施した。特定のニワトリ飼料を無制限にニワトリに投与した。
【００７８】 飼料添加剤の用量：飼料添加剤をニワトリ飼料１ｔ当たり１ｋｇの用量で含ま
せ、被検群のみに飼料添加剤を与えた。用いられた飼料添加剤は、微生物の純粋
培養物（ＤＳＭ１１７９８）であった。
せ、被検群のみに飼料添加剤を与えた。用いられた飼料添加剤は、微生物の純粋
培養物（ＤＳＭ１１７９８）であった。
【００７９】 微生物数：最終飼料１ｋｇ当たり１×１０９細胞。
【００８０】 トリコテセンを７５０ｐｐｂの全量（５００ｐｐｂのＤＯＮ及び２５０ｐｐｂ
のＴ−２毒素）で含む飼料を、被検群及び陽性対照群に投与した。
のＴ−２毒素）で含む飼料を、被検群及び陽性対照群に投与した。
【００８１】 結果：以下の表は３つの群全ての生産性パラメータを示す。
【００８２】 表２
【００８３】
【表２】 臨床的観察：陽性対照群の多くの動物に著しい口内炎症が認められた。
【００８４】 考察：この場合においても、飼料添加剤は、家禽に対するトリコテセンの有害
効果を、生産性パラメータ及び臨床的症状に関して補償することができた。家禽
の場合においても、マイコトキシンに加えて微生物ＤＳＭ１１７９８を受容した
被検群のニワトリは、陰性対照群よりもわずかに低い平均飼料摂取量で、わずか
に高い平均最終体重を有し、その結果として、幾分改良された生産性パラメータ
が陰性対照群との関係において生じた。本発明に係る微生物を含む本発明に係る
飼料添加剤を用いた場合、マイコトキシンの有害な効果が補償されるのみならず
、微生物ＤＳＭ１１７９８を受容した動物において生産性のさらなる増加を達成
することが可能であることが示される。
効果を、生産性パラメータ及び臨床的症状に関して補償することができた。家禽
の場合においても、マイコトキシンに加えて微生物ＤＳＭ１１７９８を受容した
被検群のニワトリは、陰性対照群よりもわずかに低い平均飼料摂取量で、わずか
に高い平均最終体重を有し、その結果として、幾分改良された生産性パラメータ
が陰性対照群との関係において生じた。本発明に係る微生物を含む本発明に係る
飼料添加剤を用いた場合、マイコトキシンの有害な効果が補償されるのみならず
、微生物ＤＳＭ１１７９８を受容した動物において生産性のさらなる増加を達成
することが可能であることが示される。
【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成１２年２月２３日（２０００．２．２３）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正内容】
【特許請求の範囲】
【化１】 を含有することを特徴とする、請求項１から５のいずれか一項に記載の微生物。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） (Ｃ１２Ｎ 1/20 (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:07） Ｃ１２Ｒ 1:07） (Ｃ１２Ｎ 1/20 (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:225） Ｃ１２Ｒ 1:225） (Ｃ１２Ｎ 1/20 (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:46） Ｃ１２Ｒ 1:46） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＵ ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，Ｉ Ｌ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＲ，ＬＫ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ ，ＭＫ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ， ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＲ，ＵＡ，ＵＳ，ＶＮ，Ｙ Ｕ Ｆターム(参考） 2B150 AA03 AA04 AA05 AB03 AC02 AC05 AC06 AC07 AC24 CC12 CE01 DA06 DC13 DD11 DD26 DH15 DH16 4B065 AA01X AC20 BB12 BB29 BC02 BC03 BC42 BD06 BD11 CA56
Claims (26)
- 【請求項１】 純粋培養物において、エンテロコッカス・カッセリフラバス
（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｃａｓｓｅｌｉｆｌａｖｕｓ）の菌株との混合培
養物ＤＳＭ１１７９９において、又はその他の嫌気性微生物との混合培養物にお
いて、トリコテセンの無毒化に適しているオウバクテリウム（Ｅｕｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍ）属の微生物ＤＳＭ１１７９８。 - 【請求項２】 嫌気性微生物が、エンテロコッカス属、ストレプトコッカス
属、ラクトコッカス属、バチルス属、又はラクトバチルス属から選択されること
を特徴とする、請求項１に記載の微生物。 - 【請求項３】 デオキシニバレノール（ｄｅｏｘｙｎｉｖａｌｅｎｏｌ）（
ＤＯＮ）、Ｔ−２毒素、ＨＴ−２毒素、ニバレノール（ｎｉｖａｌｅｎｏｌ）、
モノアセトキシサーペノール（ｍｏｎｏａｃｅｔｏｘｙｓｃｉｒｐｅｎｏｌ）、
ジアセトキシサーペノール（ｄｉａｃｅｔｏｘｙｓｃｉｒｐｅｎｏｌ）、トリコ
ダーモル（ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍｏｌ）、ベルカリン（ｖｅｒｒｕｃａｒｉｎ）
、ロロジン（ｒｏｒｏｄｉｎ）、アセチルデオキシニバレノール（ａｃｅｔｙｌ
ｄｅｏｘｙｎｉｖａｌｅｎｏｌ）、イソトリコダーミン（ｉｓｏｔｒｉｃｈｏｄ
ｅｒｍｉｎ）、ヒドロキシイソトリコダーミン（ｈｙｄｒｏｘｙｉｓｏｔｒｉｃ
ｈｏｄｅｒｍｉｎ）、カロネクトリン（ｃａｌｏｎｅｃｔｒｉｎ）、Ｔ−２テト
ラオール（Ｔ−２ ｔｅｔｒａｏｌ）、Ｔ−２トリオール（Ｔ−２ ｔｒｉｏｌ
）、デアセチルネオソラニオール（ｄｅａｃｅｔｙｌｎｅｏｓｏｌａｎｉｏｌ）
、ネオソラニオール（ｎｅｏｓｏｌａｎｉｏｌ）、アセチルネオソラニオール（
ａｃｅｔｙｌｎｅｏｓｏｌａｎｉｏｌ）、スポロトリキオール（ｓｐｏｒｏｔｒ
ｉｃｈｉｏｌ）、トリコトリオール（ｔｒｉｃｈｏｔｒｉｏｌ）、サンブシノー
ル（ｓａｍｂｕｃｉｎｏｌ）、及びカルモリン（ｃｕｌｍｏｒｉｎ）の無毒化に
適していることを特徴とする、請求項１又は２に記載の微生物。 - 【請求項４】 分子内に含まれるエポキシド基の還元的生物学的転換により
トリコテセンを無毒化することを特徴とする、請求項１、２、又は３に記載の微
生物。 - 【請求項５】 個別に、対で、又は長鎖で発生する嫌気性グラム陽性桿状非
胞子形成性細菌であることを特徴とする、請求項１から４のいずれか一項に記載
の微生物。 - 【請求項６】 １６Ｓ ＲＮＡ配列、即ち 【化１】 を含有することを特徴とする、請求項１から５のいずれか一項に記載の微生物。
- 【請求項７】 混合培養物ＤＳＭ１１７９９が、希釈系列及び嫌気的培養条
件において少なくとも２回培養及び／又は発酵することにより、ウシ第一胃由来
の微生物とエンテロコッカス・カッセリフラバス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ
ｃａｓｓｅｌｉｆｌａｖｕｓ）とから得られることを特徴とする、請求項１から
６のいずれか一項に記載の微生物の培養物を得るための方法。 - 【請求項８】 培養及び／又は発酵がＨ２及びＣＯ２の気体雰囲気において
実施されることを特徴とする、請求項７に記載の方法。 - 【請求項９】 気体雰囲気が、１０：９０から９０：１０、特に約８０：２
０のＨ２：ＣＯ２比で選択されることを特徴とする、請求項８に記載の方法。 - 【請求項１０】 培養及び／又は発酵が、０．２から３バール、特に０．５
から１バールの過剰圧力において実施されることを特徴とする、請求項７から９
のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項１１】 培養又は発酵が、３５から４２℃、特に３７℃の温度にお
いて実施されることを特徴とする、請求項７から１０のいずれか一項に記載の方
法。 - 【請求項１２】 培養及び／又は発酵が、６と８の間のｐＨ、特に７と７．
５の間のｐＨにおいて実施されることを特徴とする、請求項７から１１のいずれ
か一項に記載の方法。 - 【請求項１３】 培養及び／又は発酵が、アルギニン、シトルリン、ペプト
ン、酵母抽出物、（一つ又は複数の）脂肪酸混合物、（一つ又は複数の）鉱物溶
液、グルコース、ヘミン（ｈａｅｍｉｎ）溶液、メナジオン、ビタミン溶液、微
量元素、還元剤の中から選択される成分を含む培地調製物において実施されるこ
とを特徴とする、請求項７から１２のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項１４】 ０．１から０．５重量％、特に０．２重量％のグルコース
が、培養及び／又は発酵の開始時に添加されることを特徴とする、請求項７から
１３のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項１５】 活性のあるトリコテセン無毒化微生物及び／又はその他の
嫌気性微生物の酵素調製物が添加されることを特徴とする、請求項７から１４の
いずれか一項に記載の方法。 - 【請求項１６】 微生物の純粋培養物ＤＳＭ１１７９８が、特に増殖刺激因
子としてＬアルギニンが添加された培地調製物における少なくとも２回のさらな
る希釈系列により、培養溶液及び／又は発酵溶液から得られることを特徴とする
、請求項７から１５のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項１７】 培地調製物の純粋培養物の発酵のため、１から４重量％の
還元剤、特にシステイン／硫化ナトリウム／炭酸ナトリウムの混合物を含む溶液
が添加されることを特徴とする、請求項１６に記載の方法。 - 【請求項１８】 培養溶液及び／又は発酵溶液が、濃縮、特に遠心分離もし
くは濾過及び／又は安定化、特に凍結乾燥もしくは噴霧乾燥もしくはカプセル化
により製剤化されることを特徴とする、請求項７から１７のいずれか一項に記載
の方法。 - 【請求項１９】 安定化が、ケイ酸アルミニウム、珪藻土、炭水化物、糖ア
ルコール、デンプン、粉乳、乳清粉末、タンパク質加水分解物、酵母、ＰＶＰＰ
のような充填剤又は担体材料の添加により実施されることを特徴とする、請求項
１８に記載の方法。 - 【請求項２０】 飼料添加剤の調製ための純粋培養物及び／又は混合培養物
（ＤＳＭ１１７９８、ＤＳＭ１１７９９）中の微生物の使用。 - 【請求項２１】 純粋培養物及び／又は混合培養物（ＤＳＭ１１７９８及び
ＤＳＭ１１７９９）が、凍結乾燥又は噴霧乾燥及び／又はカプセル化された、担
体材料が添加されていてもよい固定化物として使用されることを特徴とする、請
求項２０に記載の使用。 - 【請求項２２】 請求項１から６のいずれか一項に記載の微生物もしくは請
求項７から１９のいずれか一項に従い調製された微生物の純粋培養物及び／又は
混合培養物を、飼料１０００ｋｇ当たり１０５から１０１２細胞／ｋｇ、特に１
０７から１０９細胞／ｋｇの量で含むことを特徴とする、飼料又は動物の消化管
におけるトリコテセンの不活化のための飼料添加剤。 - 【請求項２３】 担体材料及び／又は充填剤を、飼料１０００ｋｇ当たり０
．５から８ｋｇ、特に０．７から４ｋｇの量でさらに含むことを特徴とする、請
求項２２に記載の飼料添加剤。 - 【請求項２４】 ケイ酸アルミニウム、珪藻土、炭水化物、糖アルコール、
デンプン、粉乳、乳清粉末、タンパク質加水分解物、酵母、及び／又はＰＶＰＰ
が担体材料又は充填剤として含まれていることを特徴とする、請求項２３に記載
の飼料添加剤。 - 【請求項２５】 １から６５重量％、特に５から５０重量％の噴霧乾燥又は
凍結乾燥された微生物の固定化物と、９９から３５重量％、特に９５から５０重
量％の担体材料及び／又は充填剤との混合物からなることを特徴とする、請求項
２２、２３、又は２４に記載の飼料添加剤。 - 【請求項２６】 飼料又は動物の消化管におけるデオキシニバレノール（Ｄ
ＯＮ）、Ｔ−２毒素、ＨＴ−２毒素、ニバレノール、モノアセトキシサーペノー
ル、ジアセトキシサーペノール、トリコダーモル、ベルカリン、ロロジン、アセ
チルデオキシニバレノール、イソトリコダーミン、ヒドロキシイソトリコダーミ
ン、カロネクトリン、Ｔ−２テトラオール、Ｔ−２トリオール、デアセチルネオ
ソラニオール、ネオソラニオール、アセチルネオソラニオール、スポロトリキオ
ール、トリコトリオール、サンブシノール、及びカルモリンの不活化のための、
請求項２２から２５のいずれか一項に記載の飼料添加剤の使用。
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