ES2242305T3 - Microorganismo, procedimiento para la obtencion del mismo, asi como aditivo para pienso. - Google Patents
Microorganismo, procedimiento para la obtencion del mismo, asi como aditivo para pienso.Info
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Abstract
Microorganismo del género Eubacterium en cultivo puro, DSM 11798, adecuado para la destoxificación de tricotecenos por medio de desdoblamiento reductor del anillo 12, 13-epoxi de los mismos. Conforme a la invención, el microorganismo del género Eubacterium, que en virtud de su pertenencia al género Eubacterium también se designa Eubacterium sp., y que en cultivo puro ha sido depositado en la Sammlung deuts-cher Mikroorganismen (Compilación de Microorganismos Alemanes) bajo el Número DSM 11798, es especialmente adecuado para la destoxificación de en especial desoxinivalenol (DON), toxina T-2, toxina HT-2, nivalenol, monoace-toxiscirpenol, diacetoxiscirpenol, tricodermol, verrucarina, rorodina, acetil-desoxinivalenol, isotricodermina, hidroxii-sotricodermina, calonectrina, tetralol T-2, triol T-2, deacetilneosolaniol, neosolaniol, acetilneosolaniol, esporotriquiol, triclotriol, sambucinol, culmorina. El microorganismo conforme a la invención destoxifica los tricotecenos por medio de biotransformación reductora del grupo epóxido contenido en la molécula, grupo epóxido que es responsable de la toxicidad de las micotoxinas, en especial de los tricotecenos. En el caso de los tricotecenos, la descomposición del grupo epóxido tiene lugar de acuerdo con la siguiente fórmula, por desdoblamiento reductor del anillo 12, 13-epoxi tóxico.
Description
Microorganismo, procedimiento para la obtención
del mismo, así como aditivo para pienso.
La presente invención se refiere a un
microorganismo del género Eubacterium, que en cultivo puro
es adecuado para la detoxificación de tricotecenos, así como a un
procedimiento para el aislamiento del mismo, a su producción y
formu-
lación y a su utilización, y a un aditivo para alimentos de consumo animal o piensos que contiene el microorganismo.
lación y a su utilización, y a un aditivo para alimentos de consumo animal o piensos que contiene el microorganismo.
Los tricotecenos, que pertenecen a la clase de
las micotoxinas, se encuentran contenidos en numerosos alimentos de
consumo animal, e ingresan habitualmente en los alimentos de
consumo animal por medio de los mohos presentes en cereales o
pastos. Debido a la administración, no deseada, de micotoxinas, en
especial tricotecenos, a los animales, se inhiben tanto su
rendimiento cárnico, como también, por ejemplo, el crecimiento de
los animales, lo que, además de dañar la salud de los animales,
ocasiona también un mayor consumo del alimento para consumo animal
y al mismo tiempo empeora el coeficiente de aprovechamiento del
alimento para consumo animal. Para combatir los efectos negativos
de micotoxinas ya han llegado a conocerse numerosos procedimientos
destinados a ligar estas toxinas o a adsorberlas.
Así, por ejemplo, en el documento WO 91/13555 se
describe un aditivo para alimentos de consumo animal, así como un
procedimiento para la inactivación de micotoxinas, en el que se
añaden partículas de un mineral de silicato filiforme al alimento
para consumo animal, con el objeto de inactivar las micotoxinas.
Con el objeto de reforzar la acción de estos silicatos filiformes,
las partículas se hallan recubiertas de un agente secuestrante, para
acelerar la acción. Además, por ejemplo del documento WO 92/05706
se ha llegado a conocer un alimento para consumo animal, que
contiene arcilla montmorrilonita como aditivo del alimento para
consumo animal. Estos minerales naturales de arcilla, con
superficies interiores grandes, deberían, en virtud de su
porosidad, ligar superficialmente las micotoxinas y de esta manera
inmovilizarlas.
Por otra parte, del modelo de utilidad austríaco
AT-U 504 ha llegado a conocerse un aditivo para
alimentos de consumo animal, en el que se utiliza un preparado de
enzimas que es capaz de formar epoxidasas y lactonasas y descomponer
micotoxinas por vía química, tanto en el alimento para consumo
animal como en el tracto gastrointestinal de los animales. Conforme
al documento AT-U 504, es posible reforzar la acción
de este preparado de enzimas mediante la adición de zeolitas y
similares.
Del documento "Binder et al.", 1997,
Cereal Res. Comm. 25: 343-346, ha llegado a
conocerse una investigación relacionada con microorganismos
anaerobios que detoxifican desoxinivalenol. En estas
investigaciones pudieron encontrarse cultivos mixtos de
microorganismos, que por vía reductora convierten deoxinivalenol en
el metabolito desepoxi, no habiéndose logrado una caracterización
de este cultivo mixto.
La presente invención apunta ahora a poner a
disposición un microorganismo especial, o un cultivo mixto
definido, aislado a partir de un hábitat natural, por medio del
cual se logre convertir micotoxinas, en especial tricotecenos, de
manera selectiva por descomposición bioquímica, en sustancias
fisiológicamente inocuas, y especialmente inocuas en la cría de
animales.
Para alcanzar este cometido se aisló un
microorganismo del género Eubacterium, que en cultivo puro,
DSM 11798, es adecuado para la destoxificación de tricotecenos.
Conforme a la invención, el microorganismo del
género Eubacterium, que en virtud de su pertenencia al
género Eubacterium también se designa Eubacterium sp.,
y que en cultivo puro ha sido depositado en la Sammlung deutscher
Mikroorganismen (Compilación de Microorganismos Alemanes) bajo el
Número DSM 11798, es especialmente adecuado para la destoxificación
de en especial desoxinivalenol (DON), toxina T-2,
toxina HT-2, nivalenol, monoacetoxiscirpenol,
diacetoxiscirpenol, tricodermol, verrucarina, rorodina,
acetil-desoxinivalenol, isotricodermina,
hidroxiisotricodermina, calonectrina, tetralol T-2,
triol T-2, deacetilneosolaniol, neosolaniol,
acetilneosolaniol, esporotriquiol, triclotriol, sambucinol,
culmorina. El microorganismo conforme a la invención destoxifica
los tricotecenos por medio de biotransformación reductora del grupo
epóxido contenido en la molécula, grupo epóxido que es responsable
de la toxicidad de las micotoxinas, en especial de los
tricotecenos. En el caso de los tricotecenos, la descomposición
del grupo epóxido tiene lugar de acuerdo con la siguiente fórmula,
por desdoblamiento reductor del anillo 12,13-epoxi
tóxico:
La morfología del microorganismo conforme a la
invención muestra de manera preferible que es una bacteria
gram-positiva, anaerobia, baciliforme, con una
longitud en especial de 0,1 a 3 \mum, que no forma esporas, se
presenta tanto aislada, como en pares o en cadenas largas, en
especial de hasta aproximadamente 150 \mum. El análisis
filogenético del microorganismo conforme a la invención dio como
resultado una secuencia de ARN de 16S, a saber:
\vskip1.000000\baselineskip
habiéndose comparado los datos de
secuencia del microorganismo con secuencias de genes conocidas de
ARN de 16S de microorganismos representativos que forman parte del
dominio de las bacterias. Este análisis comparativo dio como
resultado una máxima concordancia con bacterias del género
Eubacterium. Sin embargo, no pudo encontrarse ninguna
secuencia de genes suficientemente concordante con un
microorganismo conocido, de lo que se infiere que el microorganismo
conforme a la invención representa un microorganismo, aún no
aislado y clasificado, dentro del género Eubacterium. También
investigaciones fisiológicas, tales como, por ejemplo, espectros de
fermentación, reducción de nitrato a nitrito, dieron como resultado
de manera unívoca la pertenencia al género
Eubacterium.
Otro cometido de la presente invención es el de
poner a disposición un procedimiento para la obtención de un
cultivo puro del microorganismo DSM 11798, utilizándose un cultivo
mixto con la cepa Enterococcus casseliflavus, DSM 11799, y
apuntándose en especial a una optimización del rendimiento tanto
desde el punto de vista económico como también cuantitativo.
Para resolver este cometido el procedimiento
conforme a la invención, se realizó de manera que para la obtención
de un cultivo puro del microorganismo anteriormente mencionado, del
género Eubacterium, DSM 11798, se obtiene un cultivo mixto,
DSM 11799, del microorganismo y Enterococcus casseliflavus,
de panzas de ganado vacuno, mediante cultivo o fermentación,
efectuados por lo menos dos veces, en series de dilución y bajo
condiciones de cultivo anaerobias. Para la obtención del cultivo
puro del microorganismo conforme a la invención, demostró ser
favorable un cultivo y/o fermentación, efectuados por lo menos dos
veces, en series de dilución, ya que de esta manera puede lograrse
una pureza garantizada de los productos deseados y, en especial,
una separación de productos secundarios, o impurezas, perturbadores,
con microorganismos no deseados. Para el mantenimiento de las
condiciones anaerobias se emprendió el cultivo y/o fermentación
conforme a la invención preferiblemente en una atmósfera gaseosa de
H_{2} y CO_{2}, eligiéndose de manera especialmente preferida la
atmósfera gaseosa con una relación H_{2}: CO_{2} de 10:90 a
90:10, en especial de aproximadamente 80:20. Para el desarrollo del
microorganismo conforme a la invención son importantes condiciones
anaerobias con un bajo potencial redox, siendo sorprendente que
puede lograrse un crecimiento suficientemente rápido solamente en
presencia de H_{2}.
Es posible lograr un desarrollo aún más rápido,
del microorganismo conforme a la invención, llevando a cabo el
cultivo y/o fermentación bajo una sobrepresión de 0,2 a 3 bar, en
especial de 0,5 a 1 bar, tal como esto corresponde a otra forma de
realización preferida. Pudo lograrse otro desarrollo mejorado del
microorganismo conforme a la invención, DSM 11798, mediante la
realización preferida del cultivo y/o fermentación a una temperatura
de 35 a 42ºC, en especial de aproximadamente 37ºC. En el caso del
procedimiento conforme a la invención, el óptimo de pH para el
cultivo o fermentación tenía un pH con un valor entre 6 y 8, y en
especial entre 7 y 7,5. Bajo estas condiciones es posible obtener
tanto un cultivo puro del microorganismo DSM 11798, como también su
cultivo mixto anteriormente descrito (DSM 11799) en un tiempo lo
más corto posible y utilizándose una cantidad relativamente reducida
de series de dilución. Es posible obtener resultados óptimos con el
procedimiento conforme a la invención, llevando preferiblemente a
cabo el cultivo y/o fermentación en un medio preparado que contiene
componentes seleccionados entre: arginina, citrulina, peptona,
extracto de levadura, mezcla(s) de ácidos grasos,
solución(es) de minerales, glucosa, solución de hemina,
menadiona, solución de vitaminas, elementos traza, agentes
reductores.
En este caso, los componentes contenidos en el
medio ya preparado son parcialmente intercambiables, con lo que,
por ejemplo mediante adición de glucosa, es posible lograr un
desplazamiento del equilibrio en el cultivo mixto en dirección a
Enterococcus casseliflavus, o a otros microorganismos
anaerobios correspondientes, siendo posible controlar el
procedimiento selectivamente en función de la cantidad de glucosa
añadida. De acuerdo con un aspecto especialmente preferido de la
invención, al inicio del cultivo y/o fermentación se añade 0,1 a
0,5% en peso, en especial 0,2% en peso, de glucosa. Mediante una
adición de 0,1 a 0,5% en peso de glucosa, se fomenta el desarrollo
de Enterococcus casseliflavus al inicio del cultivo y/o
fermentación, lo que conduce a una caída del potencial de redox. En
virtud de la caída del potencial redox se crean condiciones de
desarrollo óptimas para el microorganismo conforme a la invención,
por lo que mediante una adición selectiva de glucosa es posible
prescindir, por ejemplo, de productos químicos, tal como cisteína,
en la preparación del medio.
Para lograr la destoxificación de micotoxinas, en
especial tricotecenos, en base a otra acción ventajosa con el
microorganismo conforme a la invención, es también posible añadir
de manera preferida, conforme a la invención, preparaciones de
enzimas del microorganismo activo destoxificador de tricotecenos,
y/o de otros microorganismos anaerobios.
Para lograr un cultivo puro del microorganismo
DSM 11798 el procedimiento conforme a la invención se continúa
realizando de manera que a partir de la solución de cultivo, o de
fermentación, DSM 11799, se obtiene el cultivo puro del
microorganismo DSM 11798 mediante por lo menos dos series de
dilución adicionales en la preparación del medio, en especial con
la adición de L-arginina como estimulador del
desarrollo. Al llevarse a cabo dos series de dilución adicionales
en la preparación del medio, a partir de la solución de cultivo o de
fermentación, es posible obtener el microorganismo DSM 11798
completamente puro a partir del cultivo mixto con Enterococcus
casseliflavus, desplazándose de manera ventajosa el equilibrio
en la dirección del cultivo puro del microorganismo en virtud de la
adición del estimulador del desarrollo, L-arginina.
En este caso, cuanto más elevada sea la concentración de
L-arginina, tanto más se fomenta el desarrollo de
la bacteria conforme a la invención.
A efectos de reducir más aún el potencial redox
de la preparación del medio, se procede conforme a la invención,
preferiblemente añadiendo, para la fermentación del cultivo puro, a
la preparación del medio, 1 a 4% en peso de un agente reductor, en
especial una mezcla de cisteína/sulfuro de sodio/solución de
carbonato de sodio. En especial, por motivos económicos, se
mantiene conforme a la invención la adición del agente reductor lo
más baja posible, habiendo resultado, en el transcurso de ensayos
comparativos, que un aumento de la concentración del agente
reductor, superior a 4% en peso, ya no ejerce ninguna aceleración
adicional del desarrollo del microorganismo.
Para lograr un producto terminado almacenable, el
procedimiento conforme a la invención se continúa realizando
sometiendo preferiblemente la solución de cultivo o de fermentación
a una elaboración o tratamiento final por concentración, en especial
centrifugación o filtrado y/o estabilización, en especial mediante
liofilización o por pulverización, o encapsulamiento. En este caso,
se concentra por ejemplo en un primer paso la solución de cultivo o
de fermentación, para lo cual se separa líquido por centrifugación
o filtración, y/o tiene lugar la estabilización directamente a
partir de la solución de fermentación, añadiéndose preferiblemente
un material de carga o de soporte, tal como silicatos de aluminio,
tierras de infusorios, carbohidratos, azúcar - alcoholes,
almidones, leche y suero de leche en polvo, hidrolizados de
proteínas, levaduras, PVPP. Mediante la adición de estos soportes o
materiales de carga es posible obtener un producto sólido en el
siguiente paso de estabilización, en especial en el paso de
liofilización, secado por pulverización, encapsulación o
nodulación, en el cual producto sólido el cultivo puro del
microorganismo DSM 11798 se halla depositado directamente sobre un
soporte, con lo que se logra un producto con un manipulabilidad y
almacenabilidad especialmente fáciles y que también fomenta el
metabolismo. En virtud de la separación y deposición del
microorganismo sobre una sustancia con superficie interior grande,
como tierras arcillosas, silicatos de aluminio, zeolitas y
similares, se facilita más aún la descomposición, conforme a la
invención, de los tricotecenos, ya que éstos se unen físicamente a
la sustancia que tiene una superficie interior grande, después de
lo cual el ataque bioquímico con el microorganismo conforme a la
invención se facilita manifiestamente.
Conforme a la invención se utiliza además el
microorganismo en cultivo puro (DSM 11798) para la producción de un
aditivo para alimentos de consumo animal. Una utilización
especialmente preferida conforme a la invención resulta
esencialmente por el hecho de emplear el cultivo puro (DSM 11798)
como inmovilizado liofilizado o secado por pulverización, y/o
encapsulado o nodulado, eventualmente con la adición de un material
de soporte. Tanto el cultivo puro del microorganismo conforme a la
invención como también el inmovilizado, secado por pulverización,
pueden utilizarse directamente como aditivo para alimentos de
consumo animal, siendo posible agregar el aditivo para alimentos de
consumo animal, ya directamente mediante mezcladura durante la
producción del alimento para consumo animal, y/o siendo posible
incorporarlo tanto en forma sólida como también en forma líquida,
por mezcladura, en el alimento para consumo animal, durante la
alimentación de los animales.
A efectos de lograr una descomposición o
conversión química lo más completo posible, de los tricotecenos en
sustancias fisiológicamente inocuas, un aditivo para alimentos de
consumo animal destinado a la inactivación de tricotecenos en
alimentos para consumo animal, o en el tracto digestivo de
animales, se caracteriza esencialmente porque el aditivo para
alimentos de consumo animal contiene un cultivo puro de un
microorganismo conforme a la invención, o un microorganismo
producido conforme a la invención, en una cantidad de 10^{5} a
10^{12} células/kg, en especial de 10^{7} a 10^{9} células/kg,
por cada 1.000 kg de alimento para consumo animal. Mediante el
empleo de 10^{5} a 10^{12} células/kg, en especial de 10^{7} a
10^{9} células/kg, del microorganismo conforme a la invención, o
del cultivo mixto conforme a la invención a base del microorganismo
y Enterococcus casseliflavus u otros microorganismos
anaerobios, en especial del género Enterococcus, Streptococcus,
Lactococcus, Bacillus o Lactobacillus, que son adecuados
para la destoxificación de tricotecenos, es posible convertir
elevadas concentraciones de tricotecenos, en especial de
desoxinivalenol, toxina T-2, toxina
HT-2, nivalenol, monoacetoxiscirpenol,
diacetoxiscirpenol, tricodermol, verrucarina, rorodina,
acetil-desoxinivalenol, isotricodermina,
hidroxiisotricodermina, calonectrina, tetralol T-2,
triol T-2, deacetilneosolaniol, neosolaniol,
acetilneosolaniol, esporotriquiol, triclotriol, sambucinol,
culmorina, presentes en el alimento para consumo animal, en
sustancias químicamente inocuas, tales como los metabolitos
desepoxi de desoxinivalenol (DOM-1), con lo cual el
aditivo para alimentos de consumo animal, conforme a la invención,
es posible lograr tanto un aumento del rendimiento de los animales,
como también, en virtud de la toxicidad reducida, un mejor índice
del alimento para consumo animal.
Para facilitar más aún la descomposición
bioquímica de las micotoxinas, en especial de los tricotecenos,
puede estar contenido preferiblemente, conforme a la invención, en
el aditivo para alimentos de consumo animal, adicionalmente un
material de carga y/o un material de relleno en una cantidad de 0,5
a 8 kg/1.000 kg, en especial de 0,7 a 4 kg/1.000 kg, del alimento
para consumo animal. En virtud de la adición de materiales de
soporte y/o materiales de carga, es eventualmente posible ligar
físicamente a las sustancias las micotoxinas a descomponer, así
como otras sustancias nocivas, que pueden hallarse contenidas en el
alimento para consumo animal, con lo que dejan de estar disponibles
para un metabolismo perturbado.
En este caso, como materiales de soporte y/o
materiales de carga se emplean en especial silicatos de aluminio,
tierras de diatomeas, carbohidratos,
azúcar-alcoholes, almidones, leche y suero de leche
en polvo, hidrolizados de proteínas, levaduras y/o PVPP, habiéndose
manifestado estos materiales de soporte y/o materiales de relleno
resultado ser especialmente ventajosos para ligar toxinas, en
especial tricotoxinas.
Un aditivo para alimentos de consumo animal
especialmente preferido se caracteriza porque el aditivo para
alimentos de consumo animal consiste en una mezcla de 1 a 65% en
peso, en especial de 5 a 50% en peso, del inmovilizado, secado por
pulverización o liofilización, del microorganismo, y de 99 a 35% en
peso, en especial de 95 a 50% en peso, de material de soporte y/o
material de carga. Aditivos para materiales de consumo animal de
este tipo son especialmente adecuados para la inactivación de
desoxinivalenol (DON), toxina T-2, toxina
HT-2, nivalenol, monoacetoxiscirpenol,
diacetoxiscirpenol, tricodermol, verrucarina, rorodina,
acetil-desoxinivalenol, isotricodermina,
hidroxiisotricodermina, calonectrina, tetralol T-2,
triol T-2, desacetilneosolaniol, neosolaniol,
acetilneosolaniol, esporotriquiol, triclotriol, sambucinol,
culmorina, tanto en el alimento para consumo animal como también en
el tracto digestivo de animales.
Se provee seguidamente una mayor explicación de
la invención, en base a caracterizaciones del microorganismo
conforme a la invención, sus condiciones de desarrollo o de
actividad, así como de la formación de productos del metabolismo de
los tricotecenos con ayuda del microorganismo conforme a la
invención, así como en base a ejemplos de realización de ensayos de
alimentación animal.
El microorganismo conforme a la invención es una
cepa activa, que transforma tricotecenos, en especial una cepa que
transforma desoxinivalenol, y se lo obtiene a partir de panzas de
ganado vacuno mediante cultivo repetido en un medio nutriente
optimizado bajo condiciones de cultivo anaerobias, a saber una
atmósfera gaseosa de CO_{2}: H_{2} (20 / 80 vol/vol) y una
sobrepresión de 0,5 a 1,5 bar. En este caso, como preparación del
medio se utilizaron medios de PYG y de PY, que en cada caso
consisten en concentraciones diversas de dos soluciones minerales,
solución madre de menadiona, solución de hemina, extracto de
levadura, peptona, habiéndose agregado además glucosa al medio de
PYG. Para reducir el potencial redox, se añadieron tanto al medio
de PYG como al medio de PY 2 a 4% en peso de una solución de
reducción consistente en cisteína/Na_{2}S/solución de
Na_{2}CO_{3}, y se ajustó el pH mediante la gasificación con
CO_{2} hasta un valor de 7 a 7,5. Con la ayuda de esta
preparación del medio se logra obtener un cultivo puro del
microorganismo DSM 11798, para lo cual se llevan a cabo varias
series de dilución. El desarrollo del microorganismo se logra
exclusivamente bajo condiciones estrictamente anaerobias con
potencial de redox suficientemente bajo y presencia de H_{2}. El
desarrollo óptimo del microorganismo puede lograrse a
aproximadamente 37ºC, pudiéndose sin embargo lograr un desarrollo
suficiente del microorganismo también entre 35ºC y 38ºC. Para la
práctica del cultivo puro del microorganismo DSM 11798 la
L-arginina tiene un efecto estimulante en medio
líquido.
Se logra con el microorganismo conforme a la
invención, destoxificar los tricotecenos por desdoblamiento reductor
del anillo 12,13-epoxi tóxico.
Seguidamente se muestra el esquema de reacción
con ayuda de tricotecenos en general como también correspondiente al
tricoteceno especial, el desoxinivalenol.
En lo que sigue han de explicarse a título de
ejemplo tanto las condiciones de fermentación como también los
procedimientos de fermentación utilizables para la fermentación del
microorganismo conforme a la invención, DSM 11798, así como en
cultivo conjunto con otros microorganismos facultativos y
anaerobios, así como su cultivo mixto con Enterococcus
casseliflavus (DSM 11799).
Temperatura de fermentación, entre 35 y 42ºC, en
especial aproximadamente 37ºC.
Intervalo de valores de pH para la fermentación,
entre 6 y 8, en especial 7,0-7,5.
Potencial redox: 0 - - 350 mV, en función de la
modalidad de realización del proceso
Atmósfera gaseosa: H_{2}/CO_{2} 10:90 a
90:10, en especial 80:20.
Presión de fermentación: 0,2 - 3 bar, en especial
0,5 a 1 bar.
Componentes esenciales del medio: arginina,
citrulina, extracto de levadura, peptona, hemina y sustancias que
contienen hemina, ácidos grasos inferiores, solución de minerales,
tampón carbonato (carbonato de sodio + CO_{2}) eventualmente
glucosa, solución de elementos trazas, solución de vitaminas así
como agentes reductores.
En este caso, para la fermentación pueden
elegirse diversas maneras de realizar el procedimiento.
Modo del proceder: esterilización del medio a
120ºC y 1,5 bar, o filtración en condiciones estériles. Enfriamiento
del medio a una temperatura de fermentación de
35-42ºC, en especial a 37ºC, bajo gasificación con
CO_{2} esterilizado y adición de carbonato de sodio y agente
reductor. Se mantuvo la gasificación hasta lograr un valor de pH de
6-8, en especial de 7-7,5.
Seguidamente, adición de 1-10% de inóculo, que
había sido pre-cultivado durante 24- 48 horas, en
especial 5%. Fermentación hasta el inicio de la fase estacionaría -
duración: aproximadamente 20 - 50 horas, en función de la
concentración del sustrato o hasta lograr un número de gérmenes
de10_{13}- 10_{16}.
El control del proceso se efectúa esencialmente
por medio de la concentración del sustrato.
Modo de proceder: esterilización, tamponado,
reducción e inoculación del medio como en 1. Elevación del
rendimiento de biomasa mediante dosificación discontinua o continua
de sustrato, por ejemplo arginina, citrulina. Se mantiene en cultivo
en la fase exponencial de desarrollo mediante el mantenimiento de
la concentración del sustrato en un nivel superior. En el caso de
esta realización del procedimiento es posible que la duración de la
fermentación sea de hasta 60 h.
El control del proceso se efectúa por medio de la
dosificación del sustrato y duración de la fermentación (acumulación
de productos finales del metabolismo).
Modo de proceder: esterilización, tamponado,
reducción e inoculación del medio como en 1. Fermentación en tandas
hasta el inicio de la fase estacionaría, seguido por cambio a
fermentación continua mediante dosificación de solución nutriente
estéril. El material líquido evacuado se reúne en un tanque de
almacenamiento. y se le da una elaboración final en tandas, o se lo
seca de manera continua por pulverización.
- Productores de H2
- DSM 11798 + Butyrvibrio sp.
- \quad
- DSM 11798 + Ruminococcus sp.
- Probióticos
- DSM 11798 + Enterococcus casseliflavus =
- \quad
- DSM 11799
- \quad
- DSM 11798 + Streptococcus sp.
- \quad
- (Enterococci, Streptococci de ácido láctico, Streptococci anaerobios)
- \quad
- DSM 11798 + Leuconostoc sp.
- \quad
- DSM 11798 + Pediococcus sp.
- \quad
- DSM 11798 + Lactobacillus sp.
- \quad
- DSM 11798 + Bifidobacterium sp.
- \quad
- DSM 11798 + Bacillus sp.
- \quad
- DSM 11798 + Megasphera sp.
- Levadura
- DSM 11789 + Sacaromyces sp.
- \quad
- DSM 11798 + Klyveromyces sp.
- \quad
- DSM 11798 + Candida sp.
El empleo de organismos acompañantes en la
fermentación sirve por una parte para disminuir el potencial redox
en la fermentación, para la producción de hidrógeno para DSM 11798,
como organismo protector en la elaboración final y estabilización.
Con ello se logra una minimización de las pérdidas de los números de
gérmenes de DSM 11798, y sirven parcialmente como promotores
adicionales del rendimiento cárnico en la producción animal.
I).- Cultivo preliminar del organismo acompañante
sobre medio que contiene carbohidratos. Para disminuir el potencial
redox se utiliza el medio antes descrito, que sin embargo no
contiene agente reductor, pero sí adicionalmente carbohidratos a tal
efecto. Seguidamente, inactivación del organismo acompañante e
inoculación de DSM 11798.
II).- Inoculación simultánea del organismo
acompañante y DSM 11798 y adición de 0,1 - 1% de carbohidratos en el
medio. Se utiliza el medio antes descrito, que sin embargo no
contiene agente reductor, pero sí carbohidratos adicionales a tal
efecto. Se fomenta el desarrollo del organismo acompañante - rápido
descenso del potencial redox - DSM 11798 empieza a desarrollarse en
virtud de las condiciones ideales de desarrollo.
III).- En combinación con I + II: al final de la
fermentación, adición de carbohidratos para la
re-fermentación del organismo acompañante. Esto
conduce a un efecto de protección (oxígeno) durante la elaboración
final y estabilización, en virtud del mayor rendimiento de
biomasa.
*).- Fase en tandas correspondiente a 4aI,
seguido por dosificación continua/discontinua de sustrato (arginina,
citrulina), correspondiente a 2.
**).- Fase en tandas correspondiente a 4aI,
seguido por dosificación continua/discontinua de un sustrato
combinado (arginina/carbohidratos o citrulina/carbohidratos).
Fase en tandas, correspondiente a 4aI, seguido
por cambio del procedimiento a fermentación continua mediante
dosificación de una solución nutriente que contiene
arginina/carbohidratos, o de una solución nutriente que contiene
citrulina/carbohidratos. Elaboración final, como en 3.
1).- Concentración por medio del procedimiento de
filtración en membrana (ultrafiltración, microfiltración) o
centrifugación. Seguidamente, secado por pulverización o
liofilización con materiales de soporte orgánicos y/o inorgánicos, o
sin los mismos.
2).- Secado directo por pulverización o
liofilización, con materiales de soporte orgánicos y/o inorgánicos,
o sin los mismos.
3).- Secado continuo por pulverización del caldo
de fermentación, con materiales de soporte orgánicos y/o
inorgánicos, o sin los mismos.
4).- Encapsulado o nodulación en combinación con
1, 2 ó 3.
Para la verificación de la actividad de la cepa
biotransformadora de DON (DSM 11798) en medio intestinal se
desarrolló un modelo in vitro con intestino de cerdo.
Para ello, en un primer ensayo se desarrolló un
modelo in vitro con contenidos intestinales en tampón, con
adición de liofilizado.
Se mantuvo bajo atmósfera de CO_{2} intestino
grueso e intestino delgado de cerdo recién sacrificado. El vaciado
de los contenidos de las secciones o tramos anterior, medio,
posterior del intestino delgado, y del intestino grueso, en frascos
individuales, se llevó a cabo bajo atmósfera de CO_{2}.
Se incubaron 20 ml de tampón anaerobio + 1 g de
contenido intestinal (gasificado con CO_{2}) + DON, a 37ºC bajo
atmósfera de CO_{2}, o de H_{2}/CO_{2}.
En este caso, se comprobó que en la sección
anterior del intestino delgado puede observarse un efecto positivo
manifiesto al añadirse liofilizado activo. En este caso en
especial, es esencial el hecho que la actividad manifiesta también
era comprobable bajo gasificación con CO_{2} puro.
En un segundo ensayo in vitro se trabajó
con pequeños trozos de intestino entero de cerdo bajo adición de
suspensión activa.
Se incubaron pedazos de intestino de cerdo
(anterior, medio, posterior, intestino grueso, cada uno de 6 - 8
cm), en tampón anaerobio, reducido, pre-incubado,
(30 ml) a 37ºC junto con 200 ppm de DON, durante 24 h.
Esta variante modificada del ensayo in
vitro tenía la ventaja que apenas se influye sobre el estado
fisiológico del intestino, ya que inmediatamente después de la
matanza del animal se transporta la totalidad del intestino al
laboratorio, y allí se retiran los tejidos circundantes de manera
de obtener trozos con las longitudes deseadas. Seguidamente se
separan los trozos, y se los somete a incubación en solución tampón
junto con DON y cultivo activo.
Los resultados son unívocos. Mediante el cultivo
activo es posible lograr la desepoxilación de DON, transformándolo
en DOM-1. Lo esencial es que en la totalidad de las
secciones del intestino puede comprobarse esta actividad,
encontrándose en especial la actividad más elevada en el intestino
anterior. Esto es tanto más significativo por cuanto la mayor parte
de la resorción del alimento y, con ello, también la liberación de
las microtoxinas también tiene lugar allí.
Se ha de comprobar seguidamente la acción del
microorganismo conforme a la invención, tanto en cultivo puro (DSM
11798), mediante un protocolo de laboratorio relacionado con
cultivos de células de gallinas, como también mediante ejemplos de
alimentación con cerdos y gallinas.
Con ayuda de un protocolo de laboratorio con
cultivos de células de gallina se mostró para el microorganismo que
el mismo tiene la capacidad de descomponer químicamente micotoxinas,
en especial tricotecenos, y en especial desoxinivalenol y toxina
T-2, en especial de convertirlos en sustancias
fisiológicamente inocuas; en el caso del desoxinivalenol, en los
metabolitos desepoxi del mismo, a saber DOM-1.
Para el cultivo de los linfocitos de gallina se
observaron las siguientes condiciones:
Número utilizado de células: 2x10^{6}
células/ml
Estimulación: ConA: 5 \mug/ml
Micotoxinas: DON, DOM-1 y toxina
T2,
| Intervalo de concentraciones: | DON: | 10 - 0,08 \mug/ml |
| DOM-1 | 232-1,82 \mug/ml | |
| toxina T2: | 30 - 0,234 ng/ml |
Tiempo total de incubación: 44 horas, de las
cuales 16 horas de tiempo de marcaje, con el cultivo en la
incubadora: 40ºC, 5% de CO_{2}, atmósfera saturada de vapor de
agua.
Con ayuda de un protocolo de laboratorio con
cultivos de linfocitos de gallina se demostró para el cultivo
activo, que el mismo está en condiciones de descomponer
bioquímicamente micotoxinas, en especial tricotecenos, en especial
de reducirlas y de transformarlas en sustancias fisiológicamente
inocuas. Esto se transcribe en lo que sigue, mediante el ejemplo
del DON y de su metabolito desepoxi, DOM-1:
El cultivo de células con linfocitos de gallina
se controló microscópicamente de manera continua durante el
cultivo.
Control después de 20 horas:
Las células no estimuladas están distribuidas de
manera densa y uniforme, los controles con ConA muestran una
enérgica estimulación y acentuados focos de proliferación.
DON: en todas las etapas de concentración se
muestran focos de proliferación, pero llama la atención que en un
intervalo de concentraciones de 10 \mug/ml - 0,625 \mug/ml se
observan empequeñecimientos manifiestos de los focos .de
proliferación al aumentar la concentración de toxina.
DOM: focos de proliferación, en todas las etapas
de concentración, sin una modificación perceptible en comparación
con los controles, hasta la etapa de concentración máxima de 58
\mug/ml.
Esto significa, que ya al cabo de 20 horas se
encuentra presente una manifiesta influencia de la actividad celular
en la tanda de toxina a partir de una concentración de 0,625
\mug/ml, mientras que con los metabolitos desepoxi no se muestra
todavía ningún efecto negativo sobre el cultivo de células, ni
siquiera con una concentración de 58 \mug/ml.
Controles después de 28 y después de 44
horas:
Las tandas de control (no estimuladas y con
ConA), no se han modificado.
El efecto del DON sobre el cultivo de células se
ha reforzado más aún. En aquellas series en los que ya al cabo de 20
horas se comprobó una modificación, se observaron daños evidentes
en las células.
Aún después de estos tiempos de incubación, no
pudo hallarse ninguna influencia sobre la actividad en las células,
ni siquiera con una concentración de metabolitos desepoxi de 58
\mug/ml.
En otro ensayo se mostró el efecto del aditivo
para alimentos de consumo animal conforme a la invención frente a
una contaminación con tricotecenos en un alimento para polluelos.
Los parámetros utilizados fueron el peso final, la ingesta de
alimento y el índice de conversión del alimento, así como las
pérdidas (mortandad) de los polluelos. También se consignaron los
síntomas clínicos.
Animales: se investigaron polluelos de la
raza Cobb desde el primer día de vida. La investigación se llevó a
cabo con tres grupos, que abarcaban 10.700, 10.900 y 15.700
polluelos. Se suministró a las gallinas un alimento especifico para
gallinas, a voluntad.
Dosificación del aditivo para alimento de
consumo animal: el aditivo para alimento de consumo animal se
hallaba contenido con una dosificación de 1 kg/t de alimento para
polluelos, y solamente el grupo experimental recibió el aditivo para
alimento de consumo animal. Como aditivo para el alimento de
consumo animal se utilizó un cultivo puro del microorganismo (DSM
11798).
Número de gérmenes: 1.10^{9} células /kg de
alimento de consumo animal, listo para consumo
Para el grupo experimental y para el grupo
comparativo positivo se administraron en el alimento de consumo
animal tricotecenos en una cantidad total de 750 ppb (500 ppb de
DON y 250 ppb de toxina T-2).
Resultados: la tabla siguiente muestra los
parámetros de rendimiento de la totalidad de los tres grupos.
Observaciones clínicas: en muchos animales
del grupo comparativo positivo podían observarse irritaciones
orales evidentes.
Análisis del resultado: también en el
presente caso, el aditivo para alimento de consumo animal fue capaz
de compensar por completo la influencia negativa de los
tricotecenos sobre las aves de corral en lo que a los parámetros de
rendimiento y los síntomas clínicos se refiere. También en el caso
de las aves de corral se muestra que polluelos de los grupos
experimentales que, además de micotoxinas, también habían recibido
el microorganismo DMS 11798, presentaban incluso un peso final medio
un poco más elevado que los grupos comparativos negativos, y esto
con una ingesta media un poco más baja, resultando de ello, en lo
que al grupo comparativo negativo se refiere, parámetros de
rendimiento incluso un tanto mejorados. Esto demuestra que en caso
de emplearse el aditivo para alimentos de consumo animal conforme a
la invención que contiene el microorganismo conforme a la
invención, no solamente se compensó la acción negativa de las
micotoxinas, sino que además pudo lograrse un incremento adicional
del rendimiento en los animales que recibieron el microorganismo DSM
11798.
<110> Erber Aktiengesellschaft
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Microorganismo, Procedimiento para la
Obtención del Mismo, así como Aditivo para Alimento de Consumo
Animal
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 1570
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<140> PCT/AT98/00316
\vskip0.400000\baselineskip
<141>
1998-12-21
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> A2204/97
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
1997-12-30
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn Ver. 2.1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1477
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Enterococcus casseliflavus
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> El microorganismo pertenece al género
Eubacterium, llamado Eubacterium, s.p., cepa:
Enterococcus casseliflavus, Secuencia de ARN de 16S, Números
de Registros DSM 11798 y 11799
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Claims (25)
1. Microorganismo del género Eubacterium
en cultivo puro, DSM 11798, adecuado para la destoxificación de
tricotecenos por medio de desdoblamiento reductor del anillo
12,13-epoxi de los mismos.
2. Microorganismo conforme a la reivindicación 1,
caracterizado porque destoxifica desoxinivalenol (DON),
toxina T-2, toxina HT-2, nivalenol,
monoacetoxiscirpenol, diacetoxiscirpenol, tricodermol, verrucarina,
rorodina, acetil-desoxinivalenol, isotricodermina,
hidroxiisotricodermina, calonectrina, tetralol T-2,
triol T-2, deacetilneosolaniol, neosolaniol,
acetilneosolaniol, esporotriquiol, triclotriol, sambucinol,
culmorina.
3. Microorganismo conforme a la reivindicación 1
ó 2, caracterizado porque el microorganismo destoxifica los
tricotecenos por medio de biotransformación reductora del grupo
epóxido contenido en la molécula.
4. Microorganismo conforme a la reivindicación 1,
2 ó 3, caracterizado porque es una bacteria anaerobia,
gram-positiva, baciliforme, no formadora de esporas,
que se presenta aislado, en pares o en cadenas largas.
5. Microorganismo conforme a una de las
reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque presenta una
secuencia de ARN de 16S, a saber:
\vskip1.000000\baselineskip
6. Procedimiento para la obtención de un cultivo
del microorganismo conforme a una de las reivindicaciones 1 a 5,
caracterizado porque primero se obtiene un cultivo mixto,
DSM 11799, del microorganismo y Enterococcus casseliflavus,
de panzas de ganado vacuno, mediante cultivo y/o fermentación,
efectuados por lo menos dos veces, en series en dilución y bajo
condiciones de cultivo anaerobias.
7. Procedimiento conforme a la reivindicación 6,
caracterizado porque el cultivo y/o fermentación se
emprenden en una atmósfera gaseosa de H_{2} y CO_{2}.
8. Procedimiento conforme a la reivindicación 7,
caracterizado porque la atmósfera gaseosa se elige con una
relación H_{2}/CO_{2} de 10:90 a 90:10, en especial de
aproximadamente 80:20.
9. Procedimiento conforme a una de las
reivindicaciones 6 a 8, caracterizado porque el cultivo y/o
fermentación se llevan a cabo con una sobrepresión de 0,2 a 3 bar,
en especial de 0,5 a 1 bar.
10. Procedimiento conforme a una de las
reivindicaciones 6 a 9, caracterizado porque el cultivo, o
fermentación, se llevan a cabo a una temperatura de 35 a 42ºC en
especial de aproximadamente 37ºC.
11. Procedimiento conforme a una de las
reivindicaciones 6 a 10, caracterizado porque el cultivo y/o
fermentación se lleva a cabo con un valor de pH entre 6 y 8, en
especial entre 7 y 7,5.
12. Procedimiento conforme a una cualquiera de
las reivindicaciones 6 a 11, caracterizado porque el cultivo
y/o fermentación se llevan a cabo en una preparación del medio, que
contiene componentes elegidos entre: arginina, citrulina, peptona,
extracto de levadura, mezcla(s) de ácidos grasos,
solución(es) de minerales, glucosa, solución de hemina,
menadiona, solución de vitaminas, elementos traza, agentes
reductores.
13. Procedimiento conforme a una de las
reivindicaciones 6 a 12, caracterizado porque al inicio del
cultivo y/o fermentación se añade 0,1 a 0,5% en peso, en especial
0,2% en peso, de glucosa.
14. Procedimiento conforme a una de las
reivindicaciones 6 a 13, caracterizado porque se añaden
preparados de enzimas del microorganismo activo destoxificador de
tricotecenos, y/u otros microorganismos anaerobios.
15. Procedimiento conforme a una de las
reivindicaciones 6 a 14, caracterizado porque a partir de la
solución de cultivo y/o fermentación se obtiene el cultivo puro del
microorganismo DSM 11798 por medio de por lo menos dos series de
dilución adicionales en la preparación del medio, añadiéndose en
especial L-arginina como estimulador del
desarrollo.
16. Procedimiento conforme a la reivindicación
15, caracterizado porque para la fermentación del cultivo
puro se añade a la preparación del medio, 1 a 4% en peso de un
agente reductor, en especial una mezcla de cisteína/sulfuro de
sodio/solución de carbonato de sodio.
17. Procedimiento conforme a una de las
reivindicaciones 6 a 16, caracterizado porque la solución de
cultivo y/o fermentación se elabora por concentración, en especial
centrifugación o filtración y/o estabilización, en especial mediante
liofilización o secado por pulverización, o encapsulado.
18. Procedimiento conforme a la reivindicación
17, caracterizado porque la estabilización se lleva a cabo
añadiendo un material de carga o un material de soporte, tales como
silicatos de aluminio, tierras de diatomeas, carbohidratos,
azúcar-alcoholes, almidones, leche y suero de leche
en polvo, hidrolizados de proteína, levaduras, PVPP.
19. Uso del microorganismo en cultivo puro (DSM
11798) para la producción de un aditivo para alimentos de consumo
animal.
20. Uso conforme a la reivindicación 19,
caracterizado porque se emplea el cultivo puro (DSM 11798)
como inmovilizado liofilizado o pulverización y/o encapsulado,
añadiéndose eventualmente un material de soporte.
21. Aditivo para alimentos de consumo animal para
la inactivación de tricotecenos en alimentos para consumo animal, o
en el tracto digestivo de animales, caracterizado porque el
aditivo para alimentos de consumo animal contiene un cultivo puro de
un microorganismo conforme a una de las reivindicaciones 1 a 5, o
un microorganismo producido conforme a una de las reivindicaciones 6
a 18, en una cantidad de 10^{9} a 10^{12} células/kg, en
especial de 10^{7} a 10^{9} células/kg, por cada 1.000 kg de
alimento de consumo animal.
22. Aditivo para alimentos de consumo animal
conforme a la reivindicación 21, caracterizado porque
adicionalmente contiene un material de soporte y/o material de
carga en una cantidad de 0,5 a 8 kg/1.000 kg, en especial de 0,4 a 4
kg/1.000 kg, del alimento de consumo animal.
23. Aditivo para alimentos de consumo animal
conforme a la reivindicación 22, caracterizado porque como
material de soporte, o como material de relleno, contiene silicatos
de aluminio, tierra de diatomeas, carbohidratos,
azúcar-alcoholes, almidones, leche y suero de leche
en polvo, hidrolizados de proteína, levadura y/o PVPP.
24. Aditivo para alimentos de consumo animal
conforme a la reivindicación 21, 22 ó 23, caracterizado
porque el aditivo para alimentos de consumo animal consiste en una
mezcla de 1 a 65% en peso, en especial de 5 a 60% en peso, del
inmovilizado del microorganismo, secado por pulverización o
liofilizado, y de 99 a 35% en peso, en especial de 95 a 50% en
peso, de material de soporte y/o material de carga.
25. Uso de un aditivo para alimentos de consumo
animal conforme a una de las reivindicaciones 21 a 24, para la
inactivación de desoxinivalenol (DON), toxina T-2,
toxina HT-2, nivalenol, monoacetoxiscirpenol,
diacetoxiscirpenol, tricodermol, verrucarina, rorodina,
acetil-desoxinivalenol, isotricodermina,
hidroxiisotricodermina, calonectrina, tetralol T-2,
triol T-2, deacetilneosolaniol, neosolaniol,
acetilneosolaniol, esporotriquiol, triclotriol, sambucinol y
culmorina, en un alimento para consumo animal, o en el tracto
digestivo de animales.
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Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| EP1319410A1 (en) * | 2001-12-11 | 2003-06-18 | Société des Produits Nestlé S.A. | Use of micro-organisms for a directed delivery of substances to specific parts of the gut |
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| AT501359B1 (de) * | 2004-11-16 | 2007-10-15 | Erber Ag | Verfahren und mikroorganismus zur entgiftung von fumonisinen sowie verwendung und futtermittelzusatz |
| JP4991999B2 (ja) * | 2007-03-08 | 2012-08-08 | 独立行政法人農業環境技術研究所 | デオキシニバレノールを分解する新規微生物 |
| JP4991998B2 (ja) * | 2007-03-08 | 2012-08-08 | 独立行政法人農業環境技術研究所 | デオキシニバレノールを分解する新規微生物 |
| US8642317B2 (en) | 2007-08-01 | 2014-02-04 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Minister Of Agriculture And Agri-Food | Bacterial isolate and methods for detoxification of trichothecene mycotoxins |
| WO2010017568A1 (de) * | 2008-07-21 | 2010-02-18 | Erber Aktiengesellschaft | Verfahren zur behandlung von futtersilage für wiederkäuer sowie futtersilagezusatz |
| CN101792726B (zh) * | 2010-03-25 | 2012-04-11 | 山东宝来利来生物工程股份有限公司 | 一株能够吸附霉菌毒素的粪肠球菌及其在吸附霉菌毒素中的应用 |
| CN102960541B (zh) * | 2012-11-30 | 2014-09-24 | 张有聪 | 一种利用白酒糟和糖蛋白生产环保型生物饲料的方法 |
| KR101907194B1 (ko) * | 2015-03-24 | 2018-10-16 | 주식회사 기술과창조 | 복합 미생물 종균을 이용하여 제조된 사료 첨가제 및 그 제조 방법 |
| MY187073A (en) | 2015-03-27 | 2021-08-29 | Erber Ag | Use of a trichothecene-transforming alcohol dehydrogenase, method for transforming trichothecenes and trichotecene-transforming additive |
| CN105349465B (zh) * | 2015-11-30 | 2018-09-07 | 广东海洋大学 | 一种潮间带微小杆菌及其应用 |
| CN106085920B (zh) * | 2016-08-08 | 2019-08-09 | 广东海洋大学 | 一株降解T-2毒素的乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)CAMT22361 |
| CN106036377B (zh) * | 2016-08-08 | 2019-08-20 | 广东海洋大学 | 乳酸乳球菌（Lactococcus lactis） CAMT22361在降解T-2毒素中的应用 |
| CN110267669A (zh) * | 2016-12-06 | 2019-09-20 | 潘德勒姆治疗公司 | 与分离并纯化的微生物有关的方法和组合物 |
| EP3501526B1 (en) * | 2017-12-22 | 2022-11-02 | DSM Austria GmbH | Use of coriobacteriia to promote gut health |
| CN108344816B (zh) * | 2018-02-08 | 2020-10-16 | 中国农业大学 | 一种基于仿生消化评价饲料玉米赤霉烯酮降解效率的方法 |
| JP2022533867A (ja) | 2018-07-31 | 2022-07-27 | エルバー アクツィエンゲゼルシャフト | ゼアラレノンを切断するための手段および方法 |
| TW202122578A (zh) | 2019-08-30 | 2021-06-16 | 奧地利商爾伯股份有限公司 | 將基質3-酮-脫氧雪腐鐮刀菌烯醇轉化爲3-epi-脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的改良多肽 |
| WO2021249980A1 (en) | 2020-06-08 | 2021-12-16 | Erber Aktiengesellschaft | Improved polypeptides capable of converting substrate 3-keto- deoxynivalenol into 3-epi-deoxynivalenol |
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| AU2021355869A1 (en) | 2020-10-08 | 2023-05-04 | DSM Austria GmbH | Tetrameric alpha/beta hydrolase variants with increased temperature stability and methods of using and producing thereof |
| US20230399674A1 (en) | 2020-10-22 | 2023-12-14 | Erber Aktiengesellschaft | Methods and compositions for degrading deoxynivalenol |
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| US5478557A (en) * | 1992-07-29 | 1995-12-26 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | Probiotic for control of salmonella |
| AT504U1 (de) | 1994-10-19 | 1995-12-27 | Erber Erich Kg | Futtermittelzusatz und verwendung desselben zur inaktivierung von mykotoxinen in futtermitteln bzw. im verdauungstrakt von tieren sowie verfahren zur herstellung eines futtermittels |
-
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