CN101629157A - 一种用于净化水质的复合微生态制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及了一种用于净化水质的复合微生态制剂及其制备方法,属应用生物技术领域。该方法较为独特的是,遵循了微生态制剂向多元化发展的原则,利用多种功能不同的有益菌种,按照正交试验确定各种菌所占的比例,再进行科学组合,形成高效多功能复合微生态制剂,使其同时具有改善肠道内环境、增加进食、抑制有害菌群、改善水质等多方面的作用。更为独特的是本发明中有益菌各出发菌株市售易得,均采用液体发酵技术扩大培养,还添加了活菌繁殖促进剂、保护剂和活菌吸附剂等,保证了该复合微生态制剂稳定、高效。解决了目前市场上的微生态制剂存在产品性状不稳定,使用效果不理想、活菌存活率低等问题。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于净化水质的复合微生态制剂及其加工方法,属应用生物技术领域。
背景技术
水质因子对养殖成败和产量的影响十分显著。一般情况下,水体在有益菌的作用下,氮循环处于一种稳定的状态,水中氨氮及亚硝态氮维持正常水平。但随着水产养殖业迅猛发展,集约化高密度养殖规模日益扩大,导致水体中残饵和动物排泄物大增。与此同时,未经处理的养殖废水和工业、生活污水的排放使水体受到严重污染,养殖生态环境遭到破坏,导致病原微生物种类增多和传播速度加快,养殖生物病害发生日趋严重,给水产养殖业造成严重损失。
一些严重威胁养殖动物的病害,由于药物的使用而得到不同程度的控制。而定期的使用消毒药剂,在杀灭有害微生物的同时,有益微生物种类及数量也会相应减少,水生态失衡,表现为水质恶化,水体透明度降低,水体缺氧,大量积累的氮素硝化过程受阻,形成养殖水体中氨氮和亚硝酸盐含量高,尤其是温度及pH值较低时更为显著。药物防治存在很多弊端,比如过度使用抗生素药物不仅使细菌耐药性增加,破坏和干扰养殖环境的正常微生物区系,导致微生物的生态失调,产生二重感染,还使抗生素在生物体内残留、富集,最终将会对人体构成危害。
众多研究表明,当向水体添加有益微生物,通过大量繁殖成为优势种群可抑制有害病菌的生长,同时通过有益微生物的新陈代谢,可降低水中过剩的营养物质和其他有害物质,对去除水体中的氨态氮、有机质、降低BOD、COD和增加溶解氧等方面有明显的调节作用,同时也调节水体的pH值,促进底泥中氮磷的释放,以促进浮游生物的生长。
微生态制剂是在微生态学理论的指导下,调整生态失调保持微生态平衡,提高环境中宿主健康水平或增进健康状态的生理性活菌制品(微生物)及其代谢产物以及促进这些生理菌群生长繁殖的物质制品。对水环境治理而言,微生态制剂具有无毒、无副作用、无残留和不产生抗药性等特点,能够有效改善养殖生态环境,调节水体质量、消除氨氮等污染、增强养殖对象的免疫力,在健康水产养殖中发挥十分重要的作用。它作用的原理是利用同类生物之间存在着竞争作用,当向养殖水体中选择性地投入一定量的有利于水质改良、能分解水中有机物和有害物质,而对养殖生物无危害的微生物制剂和微生物菌种后,建立一种新的平衡关系,病原菌的生长得到抑制,水质得到改善,养殖生物得以健康成长。
近年来,微生态制剂正广泛应用到养殖的各个环节,越来越受到人们的关注和认可。微生态制剂已成为杀菌剂、消毒剂的替代环保型产品。但是,我国微生态制剂研究应用开始较晚,现在的产品主要是单一菌种的微生态制剂。这种制剂施用效果单一,在生产上难以替代抗生素。由于水产养殖环境复杂多变,目前市场上的微生态制剂存在产品性状不稳定,有效活菌数少,使用效果不理想等问题。另外产品的保质期较短,以及缺乏规范的使用技术等,制约了微生态制剂在水产养殖业的推广应用。
发明内容
本发明发明了一种用于净化水质的复合微生态制剂及其制备方法。较为独特的是,遵循了微生态制剂向多元化发展的原则,利用多种功能不同的有益菌种,按照正交试验确定各种菌所占的比例,再进行科学组合,形成高效多功能复合微生态制剂,使其同时具有改善肠道内环境、增加进食、抑制有害菌群、改善水质等多方面的作用。更为独特的是本发明还添加了活菌繁殖促进剂、保护剂和活菌吸附剂等,保证了该复合微生态制剂稳定、高效。解决了目前市场上的微生态制剂存在产品性状不稳定,使用效果不理想、活菌存活率低等问题。
为实现上述目的,本发明是通过以下技术方案实现的:一种用于净化水质的复合微生态制剂,含多种功能不同的有益菌种及活菌繁殖促进剂、保护剂和活菌吸附剂。多功能有益菌组合包括(有效成份按重量份数计):光合细菌1-10份、乳酸杆菌1-8份、酵母菌1-8份、枯草芽孢杆菌1-6份、放线菌1-5份。将上述有益菌分别培养后,与活菌繁殖促进剂、保护剂和活菌吸附剂充分混合后,低温真空干燥制成粉状产品。
所述有益菌各出发菌株均为市售产品,均采用液体发酵技术扩大培养。具体来说,一种用于净化水质的复合微生态制剂制备过程如下:
1、光合细菌的获得:
1)出发菌株可以是球形红杆菌(Phodobacter sphaeroide ATCC 17023)、深红红螺菌(Phodospirillum rubrum ATCC 11170)、沼泽红假单胞菌(Phodopseudomonas palustris ATCC 17001)的一种或全部或部分组合。
2)斜面、液体种子、发酵培养基为常规营养琼脂培养基或肉汤培养基。
3)培养条件为25-40℃光照下厌氧培养36-48小时,活菌数≥50亿个/克。
4)发酵结束后用0.2μ微滤膜浓缩,当活菌数≥500亿个/克即可。
2、酵母菌的获得:
1)出发菌株可以是啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae CICC 1964)、热带假丝酵母(Candida tropicalis CICC 1681)、产朊假丝酵母(Candida utilisCICC 1422)的一种或全部或部分组合。
2)斜面、液体种子、发酵培养基为常规YPD酵母培养基。
3)培养条件为25-40℃通风培养36-72小时,活菌数≥50亿个/克。
4)发酵结束后用0.2μ微滤膜浓缩,当活菌数≥500亿个/克即可。
3、乳酸杆菌的获得:
1)出发菌株可以是双歧杆菌(Bifidobacterium longum CICC 6186)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus CICC 6241)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus,L.b ATCC 11842)的一种或全部。
2)斜面、液体种子、发酵培养基为常规营养琼脂培养基或肉汤培养基。
3)培养条件为25-40℃厌氧培养36-48小时,活菌数≥100亿个/克。
4)发酵结束后用0.2μ微滤膜浓缩,当活菌数≥500亿个/克即可。
4、枯草芽孢杆菌的获得:
1)出发菌株是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis CICC 23659)。
2)斜面、液体种子、发酵培养基为常规营养琼脂培养基或肉汤培养基。
3)培养条件为25-40℃通风培养36-48小时,活菌数≥100亿个/克。
4)发酵结束后用0.2μ微滤膜浓缩,当活菌数≥500亿个/克即可。
5、放线菌的获得:
1)出发菌株可以是灰色链霉菌(Streptomyces griseus CICC 11002)、棘孢小单胞菌(Micromonsporae chinospora 12)、绛红小单胞菌(Micromonosporapurpurea 20)的一种或全部或部分组合。
棘孢小单胞菌(Micromonsporae chinospora 12)、绛红小单胞菌(Micromonospora purpurea 20)由江苏省微生物研究所有限公司提供。
2)斜面、液体种子、发酵培养基为常规高氏培养基。
3)培养条件为25-40℃通风培养36-72小时,活菌数≥50亿个/克。
4)发酵结束后用0.2μ微滤膜浓缩,当活菌数≥500亿个/克即可。
6、多功能有益菌混合液的获得:
有效成份按重量份数计:将1-5步骤获得的个组分浓缩液按光合细菌1-10份、乳酸杆菌1-8份、酵母菌1-8份、枯草芽孢杆菌1-6份、放线菌1-5份混合即可。
7、活菌繁殖促进剂、保护剂和活菌吸附剂的添加:分别按混合液体重量的0.5%-2%、1%-5%的比例添加。
活菌繁殖促进剂、保护剂为无机盐混合物、低聚木糖、低聚果糖、低聚麦芽糖、木糖醇、甘露醇、变性淀粉、甘油、脱脂乳中的一种或两种以上的混合物。
吸附剂为沸石粉、硅藻土、草木灰或由核桃壳、板栗壳、椰子壳制成的粉末活性炭中的一种或两种以上的混合物。
8、成品的获得:
将步骤7获得的混合物经适当的低温干燥制成粉末状产品真空包装后即可。
适当的干燥方式应当为冷冻干燥、气流干燥、滚筒干燥、真空干燥或喷雾干燥。
具体实施方式
下面的实例将具体说明本发明的操作方法,但不能作为对本发明的限定。
实例1 一种用于净化水质的复合微生态制剂的获得:
1、多功能有益菌各组分菌体的培养:
将球形红杆菌(Phodobacter sphaeroide ATCC 17023)、啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae CICC 1964)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillusbulgaricus,L.b ATCC 11842)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis CICC23659)、灰色链霉菌(Streptomyces griseus CICC 11002)分别按上述相应的培养基及培养条件,分别扩大到1500L发酵罐进行液体发酵培养。
2、多功能有益菌混合液的获得:
发酵结束后分别用0.2μ微滤膜浓缩,当活菌数≥500亿个/克时结束浓缩,分别得到球形红杆菌浓缩液110L、啤酒酵母浓缩液91L、保加利亚乳杆菌浓缩液157L、枯草芽孢杆菌浓缩液163L、灰色链霉菌浓缩液87L。将获得的各组分浓缩液按光合细菌3份、乳酸杆菌5份、酵母菌2份、枯草芽孢杆菌3份、放线菌1份混合即可。
3、活菌繁殖促进剂、保护剂和活菌吸附剂的添加:
取100L多功能有益菌混合液,向其中添加由钠盐、锰盐、镁盐等组成的无机盐混合液1L、市售甘露醇0.5kg、板栗壳活性炭5kg,搅拌均匀后,低温真空干燥,得到11.7kg复合微生态制剂粉末产品。
实例2 复合微生态制剂的活性分析:
取复合微生态制剂10克,进行常规活菌计数。结果表明各种菌活菌均在50亿个/克以上,明显优于目前市售的同类产品,并且一年后的存活率在80%以上。
实例3 应用试验(一)
1、试验主体:55×35×60cm(长×宽×高)立方体玻璃缸7只,分成3组。1号为空白组,2-4号为对照组,5-7号为实验组。为了更接近池塘条件,缸的四周用黑布遮挡,取湖底黑臭污泥,在缸中铺置8cm。放在室外较开阔处,在自然条件下随机放置。试验用水取自无锡境内太湖水,每缸水加至高50cm,静置24小时后试验。
2、试验方法:1号空白,不添加任何物质;2-4号添加市售某品牌同类产品;5-7号添加本发明产品,添加量均为3g/m2,每天于固定时间检测各缸水的溶解氧、氨氮、亚硝酸盐、COD值并记录,连续记录7天。第7天的结果见表1:
3、测定方法:
COD采用高锰酸钾滴定法;溶氧量采用碘量法;氨氮用奈氏试剂比色法;亚硝酸盐用对氨基苯磺酸和α-萘胺比色法。
表1
从表1结果可看出,本发明试验的微生态制剂有明显的改善水质的作用,各项指标均优于对照的市售某品牌同类商品。
实例4 应用试验(二):
江苏江阴一标准化鱼类养殖试验塘,取两相邻条件相似的池塘进行对比试验。塘四周为水泥板,底为土质,水深1.6米左右。每个池塘中放养100g左右的鲫鱼1000尾,其中一池塘为对照池,一池塘每30天向其中泼洒本发明复合微生态制剂1000g。试验周期为60天,实施过程中每15天定期测定池塘水质和微生物数量,试验周期结束时结果见表2:
表2
从表3结果可看出,试验塘的水质明显优于对照塘,并且试验塘未发生鱼类病害,鱼存活率也高于对照塘10个百分点。
Claims (6)
1、一种用于净化水质的复合微生态制剂及其制备方法,其特征在于:
1)多功能有益菌各组份菌的液体发酵培养:
I光合细菌的培养:将出发菌株按斜面、液体种子、液体发酵的顺序培养,培养基为常规营养琼脂培养基或肉汤培养基;培养条件为25-40℃光照下厌氧培养36-48小时,活菌数≥50亿个/克;
II酵母菌的培养:将出发菌株按斜面、液体种子、液体发酵的顺序培养,培养基为常规YPD酵母培养基;培养条件为25-40℃通风培养36-72小时,活菌数≥50亿个/克;
III乳酸杆菌的培养:将出发菌株按斜面、液体种子、液体发酵的顺序培养,培养基常规营养琼脂培养基或肉汤培养基;培养条件为25-40℃厌氧培养36-48小时,活菌数≥100亿个/克;
IV枯草芽孢杆菌的培养:将出发菌株按斜面、液体种子、液体发酵的顺序培养,培养基常规营养琼脂培养基或肉汤培养基;培养条件为25-40℃培养36-48小时,活菌数≥100亿个/克;
V放线菌的培养:将出发菌株按斜面、液体种子、液体发酵的顺序培养,培养基为常规察式培养基;培养条件为25-40℃通风培养36-72小时,活菌数≥50亿个/克。
2)多功能有益菌各组份菌的提取浓缩:各种有益菌发酵结束后用0.2μ微滤膜浓缩,当活菌数≥500亿个/克即可。
3)多功能有益菌混合液的获得:在有效成份浓缩液按重量份数计按光合细菌1-10份、乳酸杆菌1-8份、酵母菌1-8份、枯草芽孢杆菌1-6份、放线菌1-5份混合即可。
4)活菌繁殖促进剂、保护剂和活菌吸附剂的添加:分别按混合液体重量的0.5%-2%、1%-5%的比例添加。
5)成品的获得:将获得的混合物经适当的低温干燥制成粉末状产品真空包装后即可。
2、如权利要求1所述,其特征是多功能有益菌为:光合细菌是可以是球形红杆菌(Phodobacter sphaeroide ATCC 17023)、深红红螺菌(Phodospirillum rubrumATCC 11170)、沼泽红假单胞菌(Phodopseudomonas palustris ATCC 17001)的一种或全部或部分组合;酵母菌可以是啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiaeCICC 1964)、热带假丝酵母(Candida tropicalis CICC 1681)、产朊假丝酵母(Candida utilis CICC 1422)的一种或全部或部分组合;乳酸杆菌可以是双歧杆菌(Bifidobacterium longum CICC 6186)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus CICC 6241)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus,L.bATCC 11842)的一种或全部;枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis CICC 23659);放线菌可以是灰色链霉菌(Streptomyces griseus CICC 11002)、棘孢小单胞菌(Micromonsporae chinospora 12)、绛红小单胞菌(Micromonosporapurpurea 20)的一种或全部或部分组合;
3、如权利要求1所述,其特征是采用0.2μ微滤膜对各有益菌发酵液进行浓缩,浓缩至活菌数≥500亿个/克;
4、如权利要求1所述,其特征是活菌繁殖促进剂、保护剂为无机盐混合物、低聚木糖、低聚果糖、低聚麦芽糖、木糖醇、甘露醇、变性淀粉、甘油、脱脂乳中的一种或两种以上的混合物;
5、如权利要求1所述,其特征是吸附剂为沸石粉、硅藻土、草木灰或由核桃壳、板栗壳、椰子壳制成的粉末活性炭中的一种或两种以上的混合物;
6、如权利要求1所述,其特征是适当的干燥方式应当为冷冻干燥、气流干燥、滚筒干燥、真空干燥或喷雾干燥。
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