CN103667140B - 一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用。所述一种粪肠球菌的复配增效方法主要包括微生物菌种复配、活菌繁殖促进剂复配等。发明中所述的微生物菌种主要由粪肠球菌、屎肠球菌、嗜酸链球菌、酵母菌中的一种或多种混合组成；所述活菌繁殖促进剂主要由木糖醇、乳糖、低聚果糖、低聚木糖、壳聚糖、酵母粉、叶酸、柠檬酸中的一种或多种混合而成。本发明菌株复配增效方法实现了不同微生物菌株间协同作用，加速了对水体污染物的净化过程，促进养殖生态系统的物流及能流的平衡。在水产养殖过程中使用本品，可以有效平衡水体菌相和藻相，快速分解残饵、粪便、动物尸体等污染物，改善养殖水体水质，增加养殖水体稳定性，防止养殖水体老化。

Description

一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用

技术领域

本发明属于微生物技术应用领域，具体涉及一种粪肠球菌的复配增效方法，还涉及到一种粪肠球菌复合微生物菌剂在水产养殖上的应用。

背景技术

粪肠球菌也叫粪链球菌，其菌体形态为链球或球状，菌体直径大小0.3μm-0.7μm之间，无芽孢，稀释后在肉汤琼脂平板上形成的菌落圆形，乳白色，表面凸起湿润，有光泽，边缘整齐，大多数成双或短链状排列，通常不运动。粪肠球菌为D族链球菌中肠球菌的代表种，通常所谓的粪肠球菌主要包括粪链球菌、粪链球菌液化亚种、粪链球菌产酶亚种、尿链球菌、牛链球菌、马肠链球菌、鸟链球菌等。其中前四种主要存在于人肠道，称肠球菌；后三种主要存在于家畜及家禽的粪便内。

粪肠球菌的繁殖营养要求低，在普通营养琼脂上也可生长。能在10℃或45℃pH9.6或含6.5%NaCl肉汤培养基中生长，并能耐65℃、30分钟。它可利用精氨酸为能源，发酵山梨醇，不发酵阿拉伯糖。

1989年，美国食品与药品管理局(FoodandDrugAdministration,FDA)和美国饲料管理协会(AssociationofAmericanFeedControlOfficials,AAFCO)公布了44种“可直接饲喂且通常认为是安全的微生物(GenerallyRecognizedasSafe,GRAS)”作为微生态制剂的出发菌株，其中均有粪肠球菌。

我国农业部1999年第105号文件公布允许使用的微生物种类是12种，也包括益生肠球菌。目前国内用于微生态调节剂的菌种主要有乳酸杆菌、双歧杆菌、大肠杆菌、链球菌、芽孢杆菌及某些酵母和真菌。这些微生物可以单个使用，也可以混合使用。

粪肠球菌是目前专用的微生物青贮接种剂主要菌种之一，属兼性厌氧革兰氏阳性菌。已被广泛应用于养殖业中，为减少和避免使用抗生素发挥了巨大作用。它经过系列工艺制成的微生物制剂直接投喂养殖动物后，有利于改善肠道内微生态平衡，防治动物肠道菌丛区系紊乱，有分解蛋白质为水肽、合成B族维生素等功效，也可以促进养殖动物的免疫反应，提高抗体水平，增强巨嗜细胞的活性。

饲料里添加粪肠球菌能使饲料里的纤维变软，提高饲料的转化吸收率。另外粪肠球菌在生长和代谢过程中会产生的乳酸、氨基酸、维生素、酶等特殊营养成分弥补了常规饵料的营养缺陷，对各种养殖动物幼体起到了十分重要的营养强化和促生长作用。粪肠球菌还可以分泌肽或蛋白质类的细菌素。因此，粪肠球菌被作为一种优良的饲料添加剂广泛使用，在饲料添加中粪肠球菌，既有防腐作用，又增加饲料的风味，促进养殖动物的食欲。

日本最早开发粪肠球菌用于治疗各种肠道疾病。日本目前市场上出售的含有粪肠球菌的酸奶制品或药品有清水制药生产的Lascpan、朝日啤酒株式会社生产的新Lacton、若素制药生产的Lebenin、武田制药生产的Biosmin、韩国生产的用于治疗婴幼儿肠道疾病的益生菌制剂如妈咪爱等。其中有些产品，如妈咪爱等目前已打入中国市场。在欧洲一些国家如德国和瑞典生产的益生菌制品中也都含有屎肠球菌。目前国内市场上对肠球菌的应用多用作畜禽、水产饲料添加剂和改良水质的微生态制剂，菌种主要集中在粪肠球菌和屎肠球菌。

目前，国外已有此类产品进入到我国市场，如瑞士的粪链球菌微胶囊“赐美健”、荷兰的“百福菌”等，但是价格很高，难以大规模使用。国内市场上由于存在菌种的筛选、活菌数、菌种失活、杂菌含量的多少、使用条件等问题而导致益生肠球菌制剂活性降低，出现使用效果的重复性和稳定性较差等。目前国内对粪肠球菌的研究开发多集中在提高发酵液或产品中的活菌数，以及包埋技术的突破上，如新菌种的筛选、高浓度发酵工艺提升、微胶囊化包被工业化途径，却很少关注如何提高菌体活力。

申请号为200910232711.0的专利公布了一株粪肠球菌及其应用，是为了获得高浓度酪胺液；申请号为201110268516.0的专利提供了一种粪肠球菌的高浓度富集方法。关于活菌增殖方面的研究已有不少，如李丹丹（2008）牛蒡菊糖的制备、对双歧杆菌的增殖及应用研究，潘宝海等（2012）3种植物多糖与枯草芽孢杆菌协同作用的研究等，但是还没有关于粪肠球菌增效方面的专利或文献报道。

本发明涉及一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用，具体来讲，我们对粪肠球菌进行了菌种复配，并添加了菌种繁殖促进剂。该复配方法有效增强肠球菌制剂的菌活力和效果稳定性。

本发明涉及一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用，具体来讲，表现在养殖水体改良方面，将其成品施用在水产养殖水体中，可有效分解水中残饵、粪便等有机污染物，减少池塘淤泥沉积，降低水中氨态氨、亚硝酸盐等，明显改善了养殖水体环境，减少水体污染。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用，较为独特的是，遵循了菌种复配的多元化原则，利用多种功能互补的有益菌种，进行科学组合，形成高效的粪肠球菌复合菌剂。更为独特的是本发明添加了活菌繁殖促进剂，保证了该粪肠球菌制剂的高效、稳定。解决了目前市场上的粪肠球菌制剂存在活菌存活率低，产品性状不稳定，使用效果不理想等问题。

为实现上述目的，本发明通过以下技术方案实现：一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用，含多种功能不同的有益菌种和活菌繁殖促进剂。所述各有益菌种均为市售产品，来源易得。具体来说，一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用，其复配方法如下：

多功能有益菌组合包括粪肠球菌，屎肠球菌，嗜酸链球菌、酿酒酵母菌等四个菌群，按照1-10份：1-8份：1-8份：1~6份的重量份比例混合制成。活菌繁殖促进剂包括乳糖、低聚果糖、壳聚糖、酵母粉、叶酸、柠檬酸等，按0.1-2.5份：0.1-2.5份：0.1-2.5份：0.1-2.5份：0.1-2.5份：0.1-2.5的重量份比例混合制成。将上述复合菌粉与活菌繁殖促进剂充分混合后，低温真空冷冻干燥制成粉状产品。

优选的范围及最佳值为：

1、多功能有益菌混合菌粉的获得：

多功能有益菌各菌粉有效成分按重量份数计：将粪肠球菌，屎肠球菌，嗜酸链球菌、酿酒酵母菌按照1-10份：1-8份：1-8份：1~6份的重量份比例混合即可。

2、活菌繁殖促进剂的获得：

活菌繁殖促进剂主要包括乳糖、低聚果糖、壳聚糖、酵母粉、叶酸、柠檬酸中的一种或是多种或是全部的混合，按重量份数比0.1-2.5份：0.1-2.5份：0.1-2.5份：0.1-2.5份：0.1-2.5份：0.1-2.5混合制成。

3、将原料及辅料过40目筛，以25-40摄氏度低温干燥，配料充分混匀，低温真空冷冻干燥后按剂量无菌包装制成。

该产品具有良好的稳定性和高效性，施用过程中耗氧极低，能够迅速降解养殖水体中的残饵、粪便、生物残体等有机污染物，有效改良水质环境，并降低养殖水体中氨氮、亚硝酸盐含量，同时还能提高水产动物的免疫力，减少发病率。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

1.该粪肠球菌的复合微生物菌剂中的活菌繁殖促进剂，使用后能够快速激活菌体，抑制周围有害菌生长繁殖，有效保护复合菌种的活力。

2.该粪肠球菌的复合微生物菌剂中各菌种配比合理，制成的复合微生物菌剂产品有效活菌含量高，在养殖水体中施用后，各菌种间协同作用使得局部活菌浓度高，菌体存活率高，可有效降解底泥中的有机质，明显净化养殖水体环境，对水质稳定作用明显。

3.该粪肠球菌的复配菌种，各菌种菌粉均为市售产品，来源易得，生产工艺简单，生产成本低，有利于工厂化生产。

4.该复合微生物菌剂中的各菌种菌属于兼性厌氧菌种，养殖水体中施用本品不消耗水体溶氧，且可以增加水体含氧量。

具体实施方式

下面的实例将具体说明本发明的操作方法，但这些实施例仅是范例性的，并不能作为对本发明的限定。本领域技术人员应该理解的是，如对本发明技术方案的细节和形式进行的合理修改或替换，均落入本发明的保护范围内。

实施例1：

一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用，其中微生物复配由以下原料按重量份配制而成：

一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用，其产品制备步骤是：

a、菌种：粪肠球菌，屎肠球菌，嗜酸链球菌，酿酒酵母菌。

b、粉状复合微生物菌剂的生产：将粪肠球菌，屎肠球菌，嗜酸链球菌，酿酒酵母菌（菌粉细度大于100目），按照上述配比混合得到粉状复合微生物菌剂。

所述的酵母菌菌粉购自安琪酵母股份有限公司，菌含量200亿/g；

所述的粪肠球菌，屎肠球菌，嗜酸链球菌菌粉购自华中农业大学，各菌含量50亿/g。

实施例6：一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用，其产品制备步骤是：

称取4~5重量份的粉状复合微生物菌剂，5~6重量份的活菌繁殖促进剂，上述物料经充分混匀、低温40℃烘干、冷却、过40目筛，按剂量无菌包装制成复合微生物菌剂，该菌剂的有效活菌数量大于100亿/g。

所述粉状复合微生物菌剂为粪肠球菌，屎肠球菌，嗜酸链球菌，酿酒酵母菌四个菌群，按照1-10份：1-8份：1-8份：1~6份的重量份比例混合制成。所述活菌繁殖促进剂包括乳糖、低聚果糖、壳聚糖、酵母粉、叶酸、柠檬酸等，按0.1-2.5份：0.1-2.5份：0.1-2.5份：0.1-2.5份：0.1-2.5份：0.1-2.5的重量份比例混合制成。

实施例7：一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用，其与市场其他品牌粪肠球菌制剂比较，其步骤是：

对本粪肠球菌制剂产品和市场上其他品牌粪肠球菌制剂产品进行有机质分解能力，蛋白酶、淀粉酶水解能力，生长速率等性能进行比较。主要结果如下：

表1：本发明粪肠球菌制剂与市场上粪肠球菌产品的性能对照表

实施例8：一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用，其在底质改良及水体净化中的应用，其步骤是：

1）2011年6月份，在湖北汉南“喜鹊湖”螃蟹养殖基地，选取12个养殖池塘进行对比试验，试验塘为10个，对照塘为2个。池塘水面面积多为20-25亩，环沟平均水深1m，池塘主养螃蟹，并套养鳜鱼，螃蟹规格50g/只左右，养殖密度每亩1000只螃蟹。池塘中部区域有较多浮萍，水色很浓，透明度15-20cm。此外，发现螃蟹底板较脏，说明底质不好，因此使用本产品进行改良底泥并清水。试验时，将其中10个池塘每亩分别投入150-180g本产品（实施例3制成的产品），另外两个池塘作为对照，不投入本产品。试验池塘上午9点撒过本产品后，下午水体变清爽，透明度达到30-40cm，水体溶氧也显著增加，而亚硝酸盐、氨氮含量在使用本产品2-3天后显著降低。使用本产品之后，螃蟹底板也变得干净一些，而对照池塘透明度，溶氧，亚硝酸盐及氨氮都无明显变化，螃蟹底板还是较脏。池塘水体pH值在8.0~8.5之间属于正常值。持续跟踪检测发现，本产品使用1次可保持水体处于“肥活嫩爽”状态10天。

表2试验塘与对照塘水质指标(上午9时检测结果)

从该表结果可看出，试验塘的水质指标明显优于对照塘水质指标，说明本产品效果显著。

Claims (1)

1.一种粪肠球菌制剂的复配增效方法，其特征在于：将复合微生物菌剂和活菌繁殖促进剂按重量份数比5：1.6进行配伍；其中所述的复合微生物菌剂由粪肠球菌、屎肠球菌、嗜酸链球菌和酿酒酵母菌组成，且上述四种菌按重量分数计各组分为：粪肠球菌10份，屎肠球菌8份，嗜酸链球菌6份，酿酒酵母菌3份；所述活菌繁殖促进剂按重量份数计各组分为：乳糖1.4份，低聚果糖1.2份，壳聚糖0.8份，酵母粉1.2份，叶酸0.8份，柠檬酸1.5份。