CN102924134B - 一种海藻微生物肥水剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种海藻微生物肥水剂及其制备方法，属于水产养殖等技术领域。本发明所述的海藻微生物肥水剂由味精废液，海藻浆料和光合菌，放线菌，固氮菌和枯草芽孢杆菌复合，同时添加适量份数的壳聚糖，壳寡糖，微量元素及糖蜜发酵而成。所述海藻微生物肥水剂采用味精废液发酵而成，原料制备简单；含有高含量复合菌（枯草芽孢杆菌含量大于3亿/mL，光合菌、放线菌和固氮菌总含量大于1亿/mL），肥效显著；同时兼具净化水体功能；应用范围广泛，适用于海水和淡水养殖。
Description
技术领域
本发明涉及一种海藻微生物肥水剂及其制备方法，属于水产养殖等技术领域。
背景技术
当前经济发展中，水产养殖业在我国已形成产业规模，并在国民经济中占有重要地位。在整个水产养殖工业过程中，对养殖水质的肥化（又称肥水）占有非常重要的地位，直接影响养殖产量。一般每隔10-15天或者依据水质的变化都会使用肥水产品，尤其是在出现“转水”情况以后，浮游植物大量死亡，严重影响光合作用，池塘会发生缺氧现象，引起水产动物的死亡，此时就需要使用肥水产品使浮游植物大量繁殖，因此研发一种高效的肥水产品非常具有生产实践意义。由于长期集约化生产，人们为了追求经济上投入少、输出多，养殖时间短，水产养殖业中使用的肥水产品多以化肥为主，生物肥较少。使用化肥的优点是见效快，其缺点是肥效时间短，流失多，化学耗氧量、氨氮及亚硝酸盐含量高，不利于水产动物的生长，同时还使得水体中微生态环境日益恶化，以致养殖水体越来越瘦，自净与调节机制失控。因此，利用微生物技术进行水质处理研究已成为近几十年来新兴的水质处理技术和方法，在国内外已有较多的报到，并具有显著的效果。
中国专利CN101891307A公开了一种海水养殖生物净化剂及其制备方法，所述海水养殖生物净化剂利用海水代替淡水培养生物净化剂来治理海水养殖污染，节约了淡水，同时依赖海水中含藏的微生物起到肥水的功能，在兼具水产养殖净化功能的同时起到肥水剂的效果。但是，该发明中所述的净化剂主要是以净化水质的效果为主，同时限于海水中所含的营养成分有限，尤其缺乏适宜于微生物生长必需的一些微量元素，这在一定程度上影响了所述海水养殖生物净化剂作为肥水剂的肥效，而且，所述产品中使用的海水也在一定程度上限制了其加工产地。
中国专利CN101597187A公开了一种用于水产养殖的复合微生物肥料及其生产方法，所述肥料采用味精生产过程中的发酵滤饼为原料，将发酵滤饼与熟石灰混合、粉碎，同时利用稻壳分别吸附发酵后的单一菌剂混合后加入发酵滤饼中，并混入无机肥料制得。该方法所述的肥料采取有益微生物复合，起到净化水质的作用；同时利用发酵味精过程中的滤饼废料，起到降低成本、增加营养的作用。但由于滤饼为固态残渣，其营养成分滤出较为困难，因此在制备过程中需要进行较为复杂的前处理步骤，包括将发酵滤饼与熟石灰混合、粉碎，堆放15-20小时，当温度下降，低于35℃时进行第二次粉碎等步骤。该方法中，原料处理及制备过程较为繁琐，耗时耗力，同时滤饼中营养成分的滤出效果也有待商榷。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种原料制备简单，肥效显著同时兼具净化水体功能，且应用范围广泛的海藻微生物肥水剂；
本发明所要解决的第二个技术问题在于提供一种利用提取味精后的废液生产的微生物肥水剂，及提取味精后的废液在制备微生物肥水剂中的应用；
本发明还公开了上述肥水剂的制备方法。
为解决上述技术问题，本发明所述的海藻微生物肥水剂的制备方法包括如下步骤：
S01，将保存的光合菌、放线菌、固氮菌扩大培养后，得到所需的生物菌液，备用；
S02，取枯草芽孢杆菌菌种在适宜其生长的培养基中扩大培养，得到所需的枯草芽孢杆菌剂，备用；
S03，取提取过甘露醇和褐藻酸钠后的海藻废渣液经滤床得到固体海藻渣,然后对固体海藻渣进行杀菌、消毒、并浸泡、粉碎、研磨、制浆，制得海藻浆料，备用；海藻废渣液经过杀菌、消毒、并浸泡、粉碎、研磨等步骤后，采用本领域技术人员熟知的手段提取甘露醇和褐藻酸钠即可;
所述滤床为沥水绞笼平板滤床;
S04，取步骤S01得到的生物菌液1-3份、步骤S02得到的枯草芽孢杆菌剂5-10份、步骤S03得到的海藻浆料20-30份、味精废液20-40份、助剂5-9份、糖蜜12-20份和水105-125份混合并控制28-35℃进行发酵，所述份数均为重量份数;
S05，将所得的发酵液计量包装制得海藻微生物肥水剂成品。
进一步的，所述步骤S04包括：
S04-1，取所述生物菌液1-3份和所述海藻浆料20-30份混合并接入到含有所述助剂2-4份、所述糖蜜6-10份和水55-65份的培养基中扩大培养，得到海藻生物菌液；
S04-2，取所述海藻生物菌液、所述枯草芽孢杆菌剂5-10份、所述味精废液20-40份、所述助剂3-5份、所述糖蜜6-10份和水50-60份进行混合并控制28-35℃进行发酵；
所述份数均为重量份数。
所述生物菌液是将所述光合菌、放线菌、固氮菌同时接种至适配的培养基中发酵得到的。
所述步骤S01中，所述生物菌液是将所述光合菌、放线菌、固氮菌分别接种至适配的培养基中扩大培养，并将各自所得的菌液按照重量份数比为2-4:2-4:1-3的比例混合得到的。
所述光合菌、放线菌、固氮菌菌液的重量份数比为2:2:1。
所述步骤S04中，所述生物菌液为2份、所述枯草芽孢杆菌剂为7份、所述海藻浆料为25份、所述味精废液为35份、所述助剂为6份、所述糖蜜为20份、水为110份。
优选的，所述步骤S04中：
所述步骤S04-1中，所述生物菌液为2份、所述海藻浆料为25份所述助剂为3份、所述糖蜜为10份、水为60份；
所述步骤S04-2中，所述枯草芽孢杆菌剂为7份、所述味精废液为35份、所述助剂为3份、所述糖蜜为10份、水为50份。
所述步骤S01中，所述光合菌包括沼泽红假单胞菌、荚膜红假单胞菌、球形红假单胞菌、嗜硫红假单胞菌、深红红螺菌或黄褐红螺菌中一种或几种的混合物；所述放线菌包括细黄链霉菌、泾阳链霉菌或弗兰氏克菌中一种或几种的混合物；所述固氮菌包括圆褐固氮菌、棕色自生固氮菌、敏捷氮单胞菌或印度拜耶林克氏菌中一种或几种的混合物。
所述助剂包括壳寡糖、壳聚糖以及微量元素锌、铁、锰、铜的氧化物或盐类中的一种或几种的混合物。
所述糖蜜为蔗糖。
本发明还提供了应用上述制备方法制备得到的海藻微生物肥水剂。
本发明所述的将所述菌种接入适配的含有碳源、氮源、无机盐和水的无菌培养基中培养，其目的是为了实现菌种的增殖，本领域技术人员可以通过现有技术中常规培养基实现上述目的，也可以选用适于该菌属的基本培养基实现该属菌种的增殖，并不简单限定于某种特定培养基。
在本发明中，所述沼泽红假单胞菌，荚膜红假单胞菌，球形红假单胞菌，嗜硫红假单胞菌或，深红红螺菌或黄褐红螺菌属于光合细菌。光合细菌是具有原始光能合成体系的原核生物的总称，是水环境中重要的微生物类群。光合细菌在厌氧和好氧下均能生长，但更适宜于含氧量不足的水体，其适应的pH值为5-9，最适pH为7；适宜作用温度为l5-40℃，最适温度为30℃，在海水、淡水中均可生长。光合细菌能以光作为能源，以CO2或有机物作为营养碳源进行繁殖，能利用太阳能同化CO2，在不同的自然条件下具有不同的功能，如固氮、脱氢、固碳、氧化硫化物等多种功能，故在自然界的碳素、氮素、硫素转化循环中起重要作用。光合细菌营养丰富，营养价值高，菌体内含有丰富的氨基酸、蛋白质、叶酸、维生素B族。光合细菌能够利用水中的有机物质作为营养源合成自身营养，产生新的光合细菌，同时能迅速分解水中的氨态氮、硫化物等有害物质，大幅度降低养殖水体中的COD(化学需氧量)、BOD(生化需氧量)等污染指标，提高水体的pH值，光合细菌还可通过吸收水中的耗氧因子而间接增加水中的氧气含量，增加溶氧，提高养殖密度，改善水体环境。
本发明中对所述光合菌株的培养包括但不限于各实施例中所述的培养基配方及条件，本领域技术人员可知的任何适宜于光和菌株生长的培养基均可作为培养基使用，本发明选取了现有技术中常用的培养基配方为：酵母粉3.0g，蛋白胨3.0g，硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.5g，氯化钙0.3g，蒸馏水1000mL。调pH值6.8-7.0，将配置好的培养基121℃高压灭菌20min。
所述细黄链霉菌，泾阳链霉菌或弗兰氏克菌属于放线菌。放线菌是一类广泛分布于自然界的好氧菌，多数放线菌的最适生长温度为23-27℃。放线菌可以摄取光合细菌产生的氨基酸，产生抗生素；这些抗生素能够争夺有害霉菌及细菌生长繁殖所需的物质，有效地抑制病原菌的生长繁殖，为有益微生物的生存创造良好的环境。放线菌还具有改善土壤团粒结构，转化氮、磷、钾等元素的功能。放线菌有助于固氮菌和VA菌根菌的作用。放线菌能分解有机物，生成各种代谢产物，再在其他微生物的作用下使之矿质化。
本领域常见的培养放线菌的培养基配方为：可溶性淀粉2.0g，硝酸钾0.1g，磷酸氢二钾0.05g，氯化钠0.05g，硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.05g，硫酸亚铁0.001g，琼脂2g，水100ml。先把淀粉放在烧杯里，用5mL水调成糊状后，倒入95mL水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。调整pH值到7.2-7.4，分装后灭菌，备用。
所述圆褐固氮菌，棕色自生固氮菌，敏捷氮单胞菌或印度拜耶林克氏菌属于固氮菌。固氮菌能将大气中的分子态氮气转化为作物能利用的氨，进而为其提供合成蛋白质所必需的氮素营养。固氮菌属于严格好氧性，有机营养型；包括固氮菌属、氮单孢菌属、拜耶林克氏菌属和德克斯氏菌属。根据其与植物的生长关系，固氮菌可以分为共生固氮菌、联合固氮菌和自生固氮菌。其中共生固氮菌的代表为根瘤菌，它们与豆科植物构成共生关系，侵入豆科植物的根部并在侵入部分形成根瘤；根瘤菌将空气中游离态的氮固定并转化为植物可以利用的氮，同时植物为固氮菌提供生长与繁殖的营养和环境。联合固氮菌的代表为巴西固氮螺菌，它们可以侵入植物根部细胞，但并不致瘤。自生固氮菌的代表是圆褐固氮菌，这类菌不侵入植物细胞，与植物相互独立，可将空气中的氮固定并转化为植物可利用的氮，并将之富集在土壤中。
本领域常见的培养固氮菌的培养基配方为：D-葡萄糖酸钠5.0g，磷酸二氢钾（KH2PO4）0.4g，磷酸氢二钾（K2HP04·3H2O）0.1g，硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.2g，酵母膏1.0g，氯化钠0.1g，氯化钙0.02g，三氯化铁（FeCl3·6H2O）0.01g，钼酸钠0.002g，琼脂18.0g，蒸馏水1000mL。调pH6.8-7.0，分装后121℃高压灭菌20min。
所述枯草芽孢杆菌是一种可形成芽孢的好氧革兰氏阳性菌, 具有耐温度变化、快速复活和较强分泌酶等特点,从而成为畜牧研究和生产中最常见的微生态制剂之一。枯草芽孢杆分泌的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质菌对水产中的弧菌、大肠杆菌和杆状病毒等有害细菌有很强的抑制作用，有效预防水产动物肠炎，烂鳃等疾病；枯草芽孢杆菌分泌的几丁质酶可以分解病原真菌的细胞壁而抑制真菌病害；枯草芽孢杆菌分泌的蛋白酶，脂肪酶，淀粉酶可以分解养殖池中的有毒有害物质，净化水质；也可以分解池中残饵、粪便、有机物等,具有很强的清理水中垃圾小颗粒的作用。此外，芽孢杆菌能直接利用溶解有机物作为碳源和氮源进行生长, 当溶解有机氮被利用到一定程度或耗尽之后, 氨氮即成为细菌生长繁殖的主要氮源, 表现为水中氨氮被去除。综上，枯草芽孢杆菌能够净化水质, 优化养殖水体环境, 保持养殖池内微生态平衡。
本领域常见的培养枯草芽孢杆菌的培养基配方为：蛋白胨10g，牛肉膏3.0g，氯化钠5.0g，琼脂18.0g，蒸馏水1000mL。调pH7.2-7.5，分装后121℃高压灭菌20min。
味精是利用谷氨酸细菌发酵作用生产的。每生产一吨味精就要产生15吨左右的味精废液，且这些废液为高浓度的有机废液，包含氮，磷，氧化钾，各种氨基酸等成分，属于典型的难处理的高浓度有机废水，严重影响了自然环境。所以如果能有效地利用味精废液生产微生物肥水剂，不但可以减轻传统污水处理的成本和压力，还可以开辟味精废液重新利用的新途径。经测定，味精废液中一般含水35-45%，有机质10-20%，氮5-9%，氨基酸4-7%，硫4-7%，微量元素1-2%，pH值约为3.0-4.0，本发明所述味精废液取自齐鲁味精厂。
海藻营养成分十分丰富，富含特殊的碳水化合物，亲糖蛋白，凝集活性免疫物质，酚类化合物，生长调节物质，多糖类，褐藻酸，氨基酸，脂肪酸，维他命B12，C及E,生物素及烟碱酸。同时海藻生长在海水里，每天吸收无机元素，其含有45种以上的矿质营养元素，以钠，钾，铁，钙，碘含量最多。作为最原始的生命形态，藻类生长速度快，结构简单，适应能力强。整个藻体含有大量现代生物和陆地生物所缺乏的生物活性物质，营养物质及新材料成分，可充分的加以利用和开发。
海藻液是从大型速生褐藻中提取的可溶物，是多种有效成分的混合物。海藻液中含有丰富的矿物质，氨基酸，维生素等营养成分及细胞分裂素，生长素，酚类等生长调节物质和抗生物质。
本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：
（1）本发明所述的海藻微生物肥水剂含有高含量复合菌（枯草芽孢杆菌含量大于3亿/ml,光合菌、放线菌和固氮菌总含量大于1亿/ml），所述复合菌依靠相互间的协同作用，增殖形成一个复杂，结构稳定，功能广泛的生物菌群，当这些有益复合菌被投入养殖水体后，能够迅速复苏，增殖形成优势种群，有效抑制水中病原微生物的生长，增强鱼虾免疫力，降解水中氨氮，亚硝基，净化水质；同时所述海藻微生物肥水剂所含有的蛋白质、氨基酸、碳水化合物、微量元素和各种生理活性物质为单细胞藻类的繁殖提供营养，培肥水体，这些藻类的光合作用，又为池内水产养殖动物的呼吸、有机物的分解提供氧气，增加溶氧量；
（2）本发明所述的海藻微生物肥水剂是利用味精废液进行发酵得到的，
所述味精废液中含水35-45%，有机质10-20%，氮5-9%，氨基酸4-7%，硫4-7%，微量元素1-2%，pH值为3.0-4.0；当所述味精废液与本发明所述其他发酵原料混合到一起时，其pH呈微酸性，可以不经过任何处理直接进行发酵，简单方便，能够有效降低生产成本；不仅可以实现味精废水的资源化利用，有效降低了废水处理费用，解决了废水中有机物污染治理问题；同时借助于味精废液中含有的氨基酸及多种矿物质为微生物提供碳源和氮源，保证产品中菌种的高浓度和高存活率，同时也为微生物生长提供必需的营养组分；
（3）本发明所述的方法采用先将光合菌、放线菌和固氮菌混合得到的生物菌液与海藻浆料混合发酵得到海藻生物菌液，然后取得到的所述海藻生物菌液和枯草芽孢杆菌剂再与味精废液混合发酵的二次发酵方式；有利于各种有益营养成分的充分浸出，有利于各种微生物菌群间的协同作用及与其他有效成分的充分作用，达到更好的改善效果；
（4）本发明所述的海藻浆料富含海洋生物活性物质、氨基酸及多种微量元素，营养全面，无需添加额外的营养物质即可满足各种微生物的生长之用；
（5）本发明所述的海藻浆料属于工业废产物，可以降低生产成本，也有利于这些工业废产物的环保化处理。
具体实施方式
实施例1
本实施例所述的海藻微生物肥水剂是通过如下步骤制备得到的：
S01，将保存的沼泽红假单胞菌、细黄链霉菌、圆褐固氮菌分别在33℃、30℃、29℃进行扩大培养，然后将所得的菌种按照2:2:1的重量份数进行混合得到生物菌液，备用；
所述沼泽红假单胞菌培养基配方为：酵母粉3.0g，蛋白胨3.0g，硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.5g，氯化钙0.3g，蒸馏水1000mL。调pH值6.8-7.0，将配置好的培养基121℃高压灭菌20min。
所述细黄链霉菌培养基配方为：可溶性淀粉2.0g，硝酸钾0.1g，磷酸氢二钾0.05g，氯化钠0.05g，硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.05g，硫酸亚铁0.001g，琼脂2g，水100ml。先把淀粉放在烧杯里，用5mL水调成糊状后，倒入95mL水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。调整pH值到7.2-7.4，分装后灭菌，备用。
所述圆褐固氮菌培养基配方为：D-葡萄糖酸钠5.0g，磷酸二氢钾（KH2PO4）0.4g，磷酸氢二钾（K2HP04·3H2O）0.1g，硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.2g，酵母膏1.0g，氯化钠0.1g，氯化钙0.02g，三氯化铁（FeCl3·6H2O）0.01g，钼酸钠0.002g，琼脂18.0g，蒸馏水1000mL。调pH6.8-7.0，分装后121℃高压灭菌20min。
S02，取枯草芽孢杆菌菌种扩大培养，得到所需的枯草芽孢杆菌剂，备用；
所述枯草芽孢杆菌培养基配方为：蛋白胨10g，牛肉膏3.0g，氯化钠5.0g，琼脂18.0g，蒸馏水1000mL。调pH7.2-7.5，分装后121℃高压灭菌20min。
S03，取海藻废渣液经沥水绞笼平板滤床得到固体海藻渣,然后对固体海藻渣进行高温（100℃以上）杀菌、消毒、并浸泡48h、粉碎至80目、研磨成120目，输送至制浆机制浆，得到所述海藻浆料，备用；
S04，取步骤S01得到的生物菌液2份、步骤S02得到的枯草芽孢杆菌剂7份、海藻浆料25份、味精废液35份、助剂6份（包括壳寡糖、壳聚糖、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸铜、氧化硼，各助剂的比例可以任意添加）、蔗糖20份和水110份进行混合，控制28-35℃进行发酵7天，所述份数均为重量份数。
S05，将所得的发酵液计量包装制得海藻微生物肥水剂成品。
实施例2
本实施例所述的海藻微生物肥水剂是通过如下步骤制备得到的：
S01，将保存的沼泽红假单胞菌、细黄链霉菌、圆褐固氮菌分别进行扩大培养，然后将所得的菌种按照2:2:1的重量份数进行混合得到生物菌液，备用；
所述沼泽红假单胞菌培养基配方为：酵母粉3.0g，蛋白胨3.0g，硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.5g，氯化钙0.3g，蒸馏水1000mL。调pH值6.8-7.0，将配置好的培养基121℃高压灭菌20min。
所述细黄链霉菌培养基配方为：可溶性淀粉2.0g，硝酸钾0.1g，磷酸氢二钾0.05g，氯化钠0.05g，硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.05g，硫酸亚铁0.001g，琼脂2g，水100ml。先把淀粉放在烧杯里，用5mL水调成糊状后，倒入95mL水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。调整pH值到7.2-7.4，分装后灭菌，备用。
所述圆褐固氮菌培养基配方为：D-葡萄糖酸钠5.0g，磷酸二氢钾（KH2PO4）0.4g，磷酸氢二钾（K2HP04·3H2O）0.1g，硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.2g，酵母膏1.0g，氯化钠0.1g，氯化钙0.02g，三氯化铁（FeCl3·6H2O）0.01g，钼酸钠0.002g，琼脂18.0g，蒸馏水1000mL。调pH6.8-7.0，分装后121℃高压灭菌20min。
S02，取枯草芽孢杆菌菌种扩大培养，得到所需的枯草芽孢杆菌剂，备用；
所述枯草芽孢杆菌培养基配方为：蛋白胨10g，牛肉膏3.0g，氯化钠5.0g，琼脂18.0g，蒸馏水1000mL。调pH7.2-7.5，分装后121℃高压灭菌20min。
S03，取海藻废渣液经沥水绞笼平板滤床得到固体海藻渣,然后对固体海藻渣进行高温（100℃以上）杀菌、消毒、并浸泡48h、粉碎至80目、研磨成120目，输送至制浆机制浆，得到所述海藻浆料，备用；
S04-1，取所述步骤S01得到的生物菌液2份和所述步骤S03得到的海藻浆料25份混合并接入到含有3份助剂（包括壳寡糖、壳聚糖、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸铜、氧化硼，各助剂的比例可以任意添加）、10份蔗糖和60份水的培养基中扩大培养，得到海藻生物菌液；
S04-2，取得到的海藻生物菌液5份、步骤S02得到的枯草芽孢杆菌剂7份、味精废液35份、助剂3份（包括壳寡糖、壳聚糖、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸铜、氧化硼，各助剂的比例可以任意添加）、蔗糖10份和水50份进行混合，温度控制在28-35℃，发酵7天，所述份数均为重量份数。
S05，将所得的发酵液计量包装制得海藻微生物肥水剂成品。
实施例3
本实施例所述的海藻微生物肥水剂是通过如下步骤制备得到的：
S01，将保存的沼泽红假单胞菌和黄褐红螺菌、细黄链霉菌和弗兰氏克菌、圆褐固氮菌和印度拜耶林克氏菌进行分别进行扩大培养，然后将所得的菌种按照2:4:1的重量份数进行混合得到生物菌液，备用；
所述沼泽红假单胞菌和黄褐红螺菌培养基配方为：磷酸二氢钾0.5g、硫酸镁0.5g、95%的酒精3mL、酵母浸出汁2g、消毒海水1000mL。
所述细黄链霉菌和弗兰氏克菌培养基配方为：可溶性淀粉2.0g，硝酸钾0.1g，磷酸氢二钾0.05g，氯化钠0.05g，硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.05g，硫酸亚铁0.001g，琼脂2g，水100ml。先把淀粉放在烧杯里，用5mL水调成糊状后，倒入95mL水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。调整pH值到7.2-7.4，分装后灭菌，备用。
所述圆褐固氮菌和印度拜耶林克氏菌培养基配方为：D-葡萄糖酸钠5.0g，磷酸二氢钾（KH2PO4）0.4g，磷酸氢二钾（K2HP04·3H2O）0.1g，硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.2g，酵母膏1.0g，氯化钠0.1g，氯化钙0.02g，三氯化铁（FeCl3·6H2O）0.01g，钼酸钠0.002g，琼脂18.0g，蒸馏水1000mL。调pH6.8-7.0，分装后121℃高压灭菌20min。
S02，取枯草芽孢杆菌菌种扩大培养，得到所需的枯草芽孢杆菌剂，备用；
所述枯草芽孢杆菌培养基配方为：蛋白胨10g，牛肉膏3.0g，氯化钠5.0g，琼脂18.0g，蒸馏水1000mL。调pH7.2-7.5，分装后121℃高压灭菌20min。
S03，取海藻废渣液经沥水绞笼平板滤床得到固体海藻渣,然后对固体海藻渣进行高温（100℃以上）杀菌、消毒、并浸泡48h、粉碎至80目、研磨成120目，输送至制浆机制浆，得到所述海藻浆料，备用；
S04-1，取所述步骤S01得到的生物菌液1份和所述步骤S03得到的海藻浆料30份混合并接入到含有2份助剂（包括壳寡糖、壳聚糖、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸铜、氧化硼，各助剂的比例可以任意添加）、10份蔗糖和55份水的培养基中扩大培养，得到海藻生物菌液；
S04-2，取得到的海藻生物菌液8份、步骤S02得到的枯草芽孢杆菌剂10份、味精废液20份、助剂5份（包括壳寡糖、壳聚糖、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸铜、氧化硼，各助剂的比例可以任意添加）、蔗糖6份和水60份进行混合，控制28-35℃进行发酵7天，所述份数均为重量份数。
S05，将所得的发酵液计量包装制得海藻微生物肥水剂成品。
实施例4
本实施例所述的海藻微生物肥水剂是通过如下步骤得到的：
S01，将保存的深红红螺菌、泾阳链霉菌、敏捷氮单胞菌分别在30℃进行扩大培养，然后将所得的菌种按照4:2:3的重量份数进行混合得到生物菌液，备用；
所述深红红螺菌培养基配方为：磷酸二氢钾0.5g、硫酸镁0.5g、乙酸钠3g、酵母浸出汁2g、消毒海水1000mL。
所述泾阳链霉菌培养基配方为：可溶性淀粉2.0g，硝酸钾0.1g，磷酸氢二钾0.05g，氯化钠0.05g，硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.05g，硫酸亚铁0.001g，琼脂2g，水100ml。先把淀粉放在烧杯里，用5mL水调成糊状后，倒入95mL水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。调整pH值到7.2-7.4，分装后灭菌，备用。
所述敏捷氮单胞菌培养基配方为：D-葡萄糖酸钠5.0g，磷酸二氢钾（KH2PO4）0.4g，磷酸氢二钾（K2HP04·3H2O）0.1g，硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.2g，酵母膏1.0g，氯化钠0.1g，氯化钙0.02g，三氯化铁（FeCl3·6H2O）0.01g，钼酸钠0.002g，琼脂18.0g，蒸馏水1000mL。调pH6.8-7.0，分装后121℃高压灭菌20min。
S02，取枯草芽孢杆菌菌种扩大培养，得到所需的枯草芽孢杆菌剂，备用；
所述枯草芽孢杆菌培养基配方为：蛋白胨10g，牛肉膏3.0g，氯化钠5.0g，琼脂18.0g，蒸馏水1000mL。调pH7.2-7.5，分装后121℃高压灭菌20min。
S03，取海藻废渣液经沥水绞笼平板滤床得到固体海藻渣,然后对固体海藻渣进行高温（100℃以上）杀菌、消毒、并浸泡48h、粉碎至80目、研磨成120目，输送至制浆机制浆，得到所述海藻浆料，备用；
S04-1，取所述步骤S01得到的生物菌液3份和所述步骤S03得到的海藻浆料20份混合并接入到含有4份助剂（包括壳寡糖、壳聚糖、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸铜、氧化硼，各助剂的比例可以任意添加）、6份蔗糖和65份水的培养基中扩大培养，得到海藻生物菌液；
S04-2，取得到的海藻生物菌液10份、步骤S02得到的枯草芽孢杆菌剂5份、味精废液40份、助剂3份（包括壳寡糖、壳聚糖、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸铜、氧化硼，各助剂的比例可以任意添加）、蔗糖10份和水50份进行混合，控制28℃进行发酵6天，所述份数均为重量份数。
S05，将所得的发酵液计量包装制得海藻微生物肥水剂成品。
实施例5
本实施例所述的海藻微生物肥水剂是通过如下步骤制备得到的：
S01，将保存的嗜硫红假单胞菌、弗兰氏克菌、印度拜耶林克氏菌分别进行扩大培养，然后将所得的菌种按照3:3:2的重量份数进行混合得到生物菌液，备用；
所述嗜硫红假单胞菌培养基配方为：磷酸二氢钾0.5g、硫酸镁0.5g、乙酸钠3g、酵母浸出汁2g、消毒海水1000mL。
所述弗兰氏克菌培养基配方为：可溶性淀粉2.0g，硝酸钾0.1g，磷酸氢二钾0.05g，氯化钠0.05g，硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.05g，硫酸亚铁0.001g，琼脂2g，水100ml。先把淀粉放在烧杯里，用5mL水调成糊状后，倒入95mL水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。调整pH值到7.2～7.4，分装后灭菌，备用。
所述印度拜耶林克氏菌培养基配方为：D-葡萄糖酸钠5.0g，磷酸二氢钾（KH2PO4）0.4g，磷酸氢二钾（K2HP04·3H2O）0.1g，硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.2g，酵母膏1.0g，氯化钠0.1g，氯化钙0.02g，三氯化铁（FeCl3·6H2O）0.01g，钼酸钠0.002g，琼脂18.0g，蒸馏水1000mL。调pH6.8-7.0，分装后121℃高压灭菌20min。
S02，取枯草芽孢杆菌菌种扩大培养，得到所需的枯草芽孢杆菌剂，备用；
所述枯草芽孢杆菌培养基配方为：蛋白胨10g，牛肉膏3.0g，氯化钠5.0g，琼脂18.0g，蒸馏水1000mL。调pH7.2-7.5，分装后121℃高压灭菌20min。
S03，取海藻废渣液经沥水绞笼平板滤床得到固体海藻渣,然后对固体海藻渣进行高温（100℃以上）杀菌、消毒、并浸泡48h、粉碎至80目、研磨成120目，输送至制浆机制浆，得到所述海藻浆料，备用；
S04-1，取所述步骤S01得到的生物菌液1.5份和所述步骤S03得到的海藻浆料23份混合并接入到含有2.5份助剂（包括壳寡糖、壳聚糖、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸铜、氧化硼，各助剂的比例可以任意添加）、8份蔗糖和57份水的培养基中扩大培养，得到海藻生物菌液；
S04-2，取得到的海藻生物菌液6份、步骤S02得到的枯草芽孢杆菌剂6份、味精废液25份、助剂3.5份（包括壳寡糖、壳聚糖、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸铜、氧化硼，各助剂的比例可以任意添加）、蔗糖7份和水53份进行混合，控制35℃进行发酵6天，所述份数均为重量份数。
S05，将所得的发酵液计量包装制得海藻微生物肥水剂成品。
实施例6
本实施例所述的海藻微生物肥水剂是通过如下步骤制备得到的：
S01,将保存的沼泽红假单胞菌、细黄链霉菌、圆褐固氮菌同时接种到适配的含有碳源、氮源、无机盐和水的培养基中培养，在温度不超过35℃的条件下培养，得到所需三种菌种的混合菌液,备用；
所述培养沼泽红假单胞菌、细黄链霉菌、圆褐固氮菌的培养基配方为：糖蜜10g，蛋白胨4g，氯化钠（NaCl）2.0g，硫酸亚铁（FeSO4）0.5g，硫酸镁（MgSO4）0.2g，生长因子溶液之一或它们的混合物10g，蒸馏水1000mL。调pH6.8-7.5，分装后121℃高压灭菌20min。
S02，取枯草芽孢杆菌菌种在适宜其生长的培养基中扩大培养，得到所需的枯草芽孢杆菌剂，备用；
所述枯草芽孢杆菌培养基配方为：蛋白胨10g，牛肉膏3.0g，氯化钠5.0g，琼脂18.0g，蒸馏水1000mL。调pH7.2-7.5，分装后121℃高压灭菌20min。
S03，取海藻废渣液经沥水绞笼平板滤床得到固体海藻渣,然后对固体海藻渣进行高温（100℃以上）杀菌、消毒、并浸泡48h、粉碎至80目、研磨成120目，输送至制浆机制浆，得到所述海藻浆料，备用；
S04-1，取所述步骤S01得到的生物菌液2.5份和所述步骤S03得到的海藻浆料27份混合并接入到含有3.5份助剂（包括壳寡糖、壳聚糖、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸铜、氧化硼，各助剂的比例可以任意添加）、7份蔗糖和63份水的培养基中扩大培养，得到海藻生物菌液；
S04-2，取得到的海藻生物菌液9份、步骤S02得到的枯草芽孢杆菌剂9份、味精废液35份、助剂4.5份（包括壳寡糖、壳聚糖、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸铜、氧化硼，各助剂的比例可以任意添加）、蔗糖8份和水57份进行混合，控制30℃进行发酵8天，所述份数均为重量份数。
S05，将所得的发酵液计量包装制得海藻微生物肥水剂成品。
将本发明实施例1-6所制备得到的微生物肥水剂用于南美白对虾的养殖。选择生态环境特征比较相近的虾池进行试验，虾池水深1.2米，面积为1亩，总共27个虾池，将虾池分为试验组1-6，对照组2和对照组3，共三个重复，随机排列；试验前，各个虾池内的水质均一致：水体能见度为30-40厘米，溶氧量为4.5mg/L,氨氮含量为0.25mg/L,亚硝酸盐含量为0.08mg/L，pH值为8.0，试验过程中，开增氧机也一致。试验组1-6分别对应施加实施例1-6所制备得到的海藻微生物肥水剂（下表中标注为试验组1-1至试验组1-6），对照组2不施用任何肥料，对照组3施用化肥。
海藻微生物肥水剂的施用量及施用方法为：一亩1.2米深的养虾池施用1千克肥水剂，晴天无风时均匀泼洒入池。
化肥的施用量及施用方法为:所述化肥为碳酸氢铵和过磷酸钙，碳酸氢铵和过磷酸钙的用量共20千克，两者的比例为3:1；把碳酸氢铵和过磷酸钙溶于水，晴天无风时均匀泼洒入池。
所述碳酸氢铵由济南世纪通达化工有限公司生产, 氮含量17.7%；所述过磷酸钙由石家庄市金鑫肥业有限公司生产，五氧化二磷≥12%。
试验后各组检测性能，取其三个重复试验的平均值，各组检测性能如下表所示：
| 项目 | 溶氧含量（mg/L） | 氨氮含量（mg/L） | 亚硝酸盐含量（mg/L） | pH值 | 能见度（cm） | 虾产量（kg） |
| 试验组1-1 | 5.1 | 0.44 | 0.13 | 8.4 | 30-40 | 501 |
| 试验组1-2 | 5.4 | 0.40 | 0.08 | 8.2 | 30-40 | 530 |
| 试验组1-3 | 5.2 | 0.42 | 0.10 | 8.3 | 30-40 | 506 |
| 试验组1-4 | 5.3 | 0.43 | 0.11 | 8.4 | 30-40 | 504 |
| 试验组1-5 | 5.2 | 0.43 | 0.12 | 8.4 | 30-40 | 505 |
| 试验组1-6 | 5.1 | 0.44 | 0.11 | 8.4 | 30-40 | 503 |
| 对照组2 | 4.7 | 0.48 | 0.18 | 8.6 | 30-40 | 450 |
| 对照组3 | 4.4 | 0.49 | 0.2 | 8.8 | 25-35 | 490 |
从以上数据可以看出，和对照2对照3相比，本发明所述的海藻微生物肥水剂具有不同程度的培肥水体，提高水中溶氧量，净化水质，提高产量的作用，六个不同配比的海藻微生物菌肥中，都起到不同程度的净化水质的作用，实施例1-2效果最好，和对照2相比溶解氧提高13%，产量增加15.1%；和对照3相比溶解氧提高18.5%,产量增加7.5%,所以实施1-2为最佳配比。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (8)
1.一种制备海藻微生物肥水剂的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S01，将保存的光合菌、放线菌、固氮菌分别接种至适配的培养基中扩大培养，并将各自所得的菌液按照重量份数比为2-4:2-4:1-3的比例混合，得到所需的生物菌液，备用；
S02，取枯草芽孢杆菌菌种在适宜其生长的培养基中扩大培养，得到所需的枯草芽孢杆菌剂，备用；
S03，取提取过甘露醇和褐藻酸钠后的海藻废渣液制浆得到海藻浆料，备用；
S04，取步骤S01得到的生物菌液1-3份、步骤S02得到的枯草芽孢杆菌剂5-10份、步骤S03得到的海藻浆料20-30份、味精废液20-40份、助剂5-9份、糖蜜12-20份和水105-125份混合并控制28-35℃进行发酵，所述份数均为重量份数；
S05，将所得的发酵液计量包装制得海藻微生物肥水剂成品。
2.根据权利要求1所述的制备海藻微生物肥水剂的方法，其特征在于，所述步骤S04包括：
S04-1，取所述生物菌液1-3份和所述海藻浆料20-30份混合并接入到含有所述助剂2-4份、所述糖蜜6-10份和水55-65份的培养基中扩大培养，得到海藻生物菌液；
S04-2，取所述海藻生物菌液、所述枯草芽孢杆菌剂5-10份、所述味精废液20-40份、所述助剂3-5份、所述糖蜜6-10份和水50-60份进行混合并控制28-35℃进行发酵；
所述份数均为重量份数。
3.根据权利要求 1所述的制备海藻微生物肥水剂的方法，其特征在于：所述光合菌、放线菌、固氮菌菌液的重量份数比为2:2:1。
4.根据权利要求1所述的制备海藻微生物肥水剂的方法，其特征在于：所述步骤S04中，所述生物菌液为2份、所述枯草芽孢杆菌剂为7份、所述海藻浆料为25份、所述味精废液为35份、所述助剂为6份、所述糖蜜为20份、水为110份。
5.根据权利要求2所述的制备海藻微生物肥水剂的方法，其特征在于，所述步骤S04中：
所述步骤S04-1中，所述生物菌液为2份、所述海藻浆料为25份所述助剂为3份、所述糖蜜为10份、水为60份；
所述步骤S04-2中，所述枯草芽孢杆菌剂为7份、所述味精废液为35份、所述助剂为3份、所述糖蜜为10份、水为50份。
6.根据权利要求1-5任一所述的制备海藻微生物肥水剂的方法，其特征在于：
所述步骤S01中，所述光合菌包括沼泽红假单胞菌、荚膜红假单胞菌、球形红假单胞菌、嗜硫红假单胞菌、深红红螺菌或黄褐红螺菌中一种或几种的混合物；所述放线菌包括细黄链霉菌、泾阳链霉菌或弗兰氏克菌中一种或几种的混合物；所述固氮菌包括圆褐固氮菌、棕色自生固氮菌、敏捷氮单胞菌或印度拜耶林克氏菌中一种或几种的混合物。
7.根据权利要求1-5任一所述的制备海藻微生物肥水剂的方法，其特征在于：所述助剂包括壳寡糖、壳聚糖以及微量元素锌、铁、锰、铜的氧化物或盐类中的一种或几种的混合物。
8.根据权利要求1-7任一所述的方法得到的海藻微生物肥水剂。
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| CN104962490A (zh) * | 2015-06-09 | 2015-10-07 | 日照益康有机农业科技发展有限公司 | 一种浒苔微生物菌剂及其制备方法 |
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