CN105494443A - 一种复合微生物菌剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于农业微生物技术领域，公开了一种复合微生物菌剂及其应用，该复合微生物菌剂由海藻素、黄赭色链霉菌发酵培养液和枯草芽孢杆菌发酵培养液复合而成，其中海藻素、黄赭色链霉菌发酵培养液和枯草芽孢杆菌发酵培养液的配比为：2～3：3～5：3～5，优选为：2:4:4。本发明提供的复合微生物菌剂不仅可以延长微生物活菌数量的衰减时间，还可以大大提高对植物病害的防治效果，对多种病害的防效都达到90％以上。
Description
技术领域：
本发明属于农业微生物技术领域，涉及一种用于防治植物病害的复合微生物菌剂。
背景技术：
植物病害是造成当前农业大幅减产、产品品质越来越差的最大恶因，极大影响了我国农业可持续健康发展的要求，而植物病害的有效防控也是全国经济作物农业生产中面临的最大难题。目前植物病害的防治还是过度依赖化学药剂进行防控，不仅对环境产生恶性影响，病原抗性越来越大，还影响着产品品质。
针对化学药剂治标不治本防控方法的不足之处，这些年的许多科研成果也表明，提高植物的免疫力可以很好地防控病害的发生及发展，但目前市场的植物免疫制剂大多数都是单打独斗，不能全方位地与植物生长需求相结合，导致效果都不是很明显。
目前许多有益的微生物菌剂也越来越受到农业生产者的青睐，例如枯草芽孢杆菌、黄赭色链霉菌等，不但可以抑制多种病原菌的生长，保护植物免受侵害，还可以为植物提供一些生长营养素，提高植物的免疫力，但许多微生物菌剂的效果比较慢，而且微生物菌剂的活菌数量也存在衰减的影响，进而导致微生物菌剂活性的降低。
最近，农业生产对能全方位对植物病害进行有效防控的产品需求越来越高，这也是未来农业生产所崇尚的愿景。
发明内容：
本发明的目的，就是为了提供一种微生物复合菌剂，该复合菌剂包含微生物活菌及其保护剂，本发明的微生物复合菌剂可以延长菌种活菌数量衰减的时间，不仅对植物病害有较好的防效，而且还能提高植物的免疫能力。
本发明中的枯草芽孢杆菌由台湾百泰生物科技股份有限公司提供，农药登记证号为PD20121632；黄赭色链霉菌购于中国农业微生物菌种保藏管理中心，保藏号为：ACCC40021；海藻素购于荷兰博特勒斯股份有限公司。且本发明中的枯草芽孢杆菌和黄赭色链霉菌已经经过菌种拮抗试验研究，两者没有存在拮抗现象。
为了实现本发明的目的，本发明采用了以下的技术方案：
一种微生物复合菌剂，由复合而成，海藻素、黄赭色链霉菌和枯草芽孢杆菌的比例为：2～3：3～5：3～5，优选为：2:4:4。
上述微生物复合菌剂的制备方法为，将斜面培养的黄赭色链霉菌制作菌悬液，接种10ml于200ml高氏合成一号液体培养基中；将斜面培养的枯草芽孢杆菌制作菌悬液，接种10ml于200ml营养肉汁液体培养基中；在280r/min、30℃下振荡培养24h，至菌悬液OD值为0.8-1.0，菌体浓度为1×109～1.5×109cfu/ml时，将海藻素、黄赭色链霉菌和枯草芽孢杆菌按2～3：3～5：3～5比例进行复合。
上述微生物复合菌剂的制备方法中，所述营养肉汁液体培养基的组分及配比为：蛋白胨-5g、牛肉膏-3g、NaCI-5g、蒸馏水-1000ml，培养基的pH为7.0；所述高氏合成一号液体培养基的组分及配比为：KNO3-1g、K2HPO4-0.5g、NaCI-0.5g、FeSO4·7H2O-0.01g、MgSO4·7H2O-0.5g、可溶性淀粉-20g、蒸馏-1000ml，培养基的pH为7.2～7.4。
上述复合微生物菌剂应用于植物病害的防治及提高植物的免疫能力。
具体实施方式：
以下通过实施例对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但是并不用于限定本发明的保护范围。
实施例1枯草芽孢杆菌与黄赭色链霉菌的拮抗试验
将斜面培养的黄赭色链霉菌和枯草芽孢杆菌分别制作菌悬液，用无菌移液枪吸取黄赭色链霉菌和枯草芽孢杆菌菌悬液各100ul分别涂布于高氏合成一号和营养肉汁培养平板上，静置渗透片刻后，将直径为5mm的无菌滤纸片贴在培养平板的相应位置，每个培养平板贴3张滤纸片，再用无菌移液枪吸取黄赭色链霉菌和枯草芽孢杆菌菌悬液各10ul分别滴加在相应的滤纸片上，吸取高氏合成一号和营养肉汁液体培养基各10ul分别滴加相应的滤纸片上作为试验对照组，静置渗透片刻后将其倒置，于30℃恒温培养24h再分别测量抑菌圈的大小。
抑菌圈大小测量方法为：抑菌圈直径＝透明圈直径-滤纸片直径(5mm)。
表1黄赭色链霉菌与枯草芽孢杆菌拮抗试验结果(D：mm)
从表1可得黄赭色链霉菌与枯草芽孢杆菌没有存在拮抗性，两者能相互共生。
实施例2海藻素延长菌种活菌数量衰减时间试验
将斜面培养的黄赭色链霉菌制作菌悬液，接种10ml于200ml高氏合成一号液体培养基中；将斜面培养的枯草芽孢杆菌制作菌悬液，接种10ml于200ml营养肉汁液体培养基中；在280r/min、30℃下振荡培养24h，至菌悬液OD值为0.8-1.0，菌体浓度为1×109-1.5×109cfu/ml时，分别按保护剂：菌种＝1:4的比例将海藻素分别加入黄赭色链霉菌和枯草芽孢杆菌液体培养液中，将加入等比例的无菌水作为试验对照组，混匀后测量活菌数量并分别在6个月、12个月和24个月后测量活菌数量。试验结果如下表：
表2海藻素延长菌种活菌数量衰减时间试验结果(单位：cfu/ml)
从表2可得海藻素能够延长黄赭色链霉菌和枯草芽孢杆菌的活菌衰减时间，进而延长复合微生物菌剂对植物病害的防治活性。
实施例3复合微生物菌剂防治辣椒青枯病试验
将斜面培养的黄赭色链霉菌制作菌悬液，接种10ml于200ml高氏合成一号培养基中；将斜面培养的枯草芽孢杆菌制作菌悬液，接种10ml于200ml营养肉汁液体培养基中；在280r/min、30℃下振荡培养24h，至菌悬液OD值为0.8-1.0，菌体浓度为1×109-1.5×109cfu/ml时，分别按海藻素：黄赭色链霉菌：枯草芽孢杆菌＝2:4:4的比例进行复合，得到本发明的复合微生物菌剂。
在辣椒移栽前将分别将上述的海藻素、黄赭色链霉菌培养液、枯草芽孢杆菌培养液及复合菌剂稀释500倍，每株150ml进行灌施并设立空白对照组；移栽3周后分别稀释1000倍再喷施一次，移栽6周后调查统计各试验处理组辣椒青枯病的发病情况。
表3复合微生物菌剂防治辣椒青枯病的试验结果
从表3可得复合微生物菌剂对辣椒青枯病的防效远远大于微生物单菌剂的防效。
实施例4复合微生物菌剂防治辣椒猝倒病试验
将斜面培养的黄赭色链霉菌制作菌悬液，接种10ml于200ml高氏合成一号培养基中；将斜面培养的枯草芽孢杆菌制作菌悬液，接种10ml于200ml营养肉汁液体培养基中；在280r/min、30℃下振荡培养24h，至菌悬液OD值为0.8-1.0，菌体浓度为1×109-1.5×109cfu/ml时，分别按海藻素：黄赭色链霉菌：枯草芽孢杆菌＝2:3:5的比例进行复合，得到本发明的复合微生物菌剂。
在辣椒育苗前分别将上述的海藻素、黄赭色链霉菌培养液、枯草芽孢杆菌培养液及复合菌剂稀释500倍，每株30ml进行灌施并设立空白对照组；7天后再灌施一次，21天后调查统计各试验处理组辣椒猝倒病的发病情况。
表4复合微生物菌剂预防辣椒猝倒病的试验数据
从表4可得复合微生物菌剂对辣椒猝倒病的防效远远大于微生物单菌剂的防效。
实施例5复合微生物菌剂防治黄瓜枯萎病试验
将斜面培养的黄赭色链霉菌制作菌悬液，接种10ml于200ml高氏合成一号培养基中；将斜面培养的枯草芽孢杆菌制作菌悬液，接种10ml于200ml营养肉汁液体培养基中；在280r/min、30℃下振荡培养24h，至菌悬液OD值为0.8-1.0，菌体浓度为1×109-1.5×109cfu/ml时，分别按海藻素：黄赭色链霉菌：枯草芽孢杆菌＝2:5:3的比例进行复合，得到本发明的复合微生物菌剂。
在黄瓜移栽前将分别将上述的海藻素、黄赭色链霉菌培养液、枯草芽孢杆菌培养液及复合微生物菌剂稀释500倍，每株300ml进行灌施并设立空白对照组；移栽2周后再灌施一次，移栽4周后分别稀释1000倍再喷施一次，移栽6周后调查统计各试验处理组黄瓜枯萎病的发病情况。
表5复合微生物菌剂防治黄瓜枯萎病的试验数据
从表5可得复合微生物菌剂对黄瓜枯萎病的防效远远大于微生物单菌剂的防效。
从以上的实施例可以确定本发明的复合微生物菌剂不仅可以延长微生物活菌数量的衰减时间，还可以大大提高对植物病害的防治效果。
Claims (5)
1.一种复合微生物菌剂，其特征在于该复合微生物菌剂由海藻素、黄赭色链霉菌发酵培养液和枯草芽孢杆菌发酵培养液复合而成，两种发酵培养液的有效活菌数分别都在1×109cfu/ml以上。
2.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂，其特征在于所述的海藻素、黄赭色链霉菌发酵培养液和枯草芽孢杆菌发酵培养液的配比为：2～3：3～5：3～5，优选为：2:4:4。
3.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于将斜面培养的黄赭色链霉菌制作菌悬液，接种10ml于200ml高氏合成一号液体培养基中；将斜面培养的枯草芽孢杆菌制作菌悬液，接种10ml于200ml营养肉汁液体培养基中；在280r/min、30℃下振荡培养24h，至菌悬液OD值为0.8-1.0，菌体浓度为1×109～1.5×109cfu/ml时，将海藻素、黄赭色链霉菌和枯草芽孢杆菌按2～3：3～5：3～5比例进行复合。
4.根据权利要求3所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于所述营养肉汁液体培养基的组分及配比为：蛋白胨-5g、牛肉膏-3g、NaCI-5g、蒸馏水-1000ml，培养基的pH为7.0；所述高氏合成一号液体培养基的组分及配比为：KNO3-1g、K2HPO4-0.5g、NaCI-0.5g、FeSO4·7H2O-0.01g、MgSO4·7H2O-0.5g、可溶性淀粉-20g、蒸馏-1000ml，培养基的pH为7.2～7.4。
5.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂，主要应用于植物病害的防治，特别是辣椒青枯病、辣椒猝倒病、黄瓜枯萎病等常见病害的防治。
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