CN104962490A - 一种浒苔微生物菌剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于微生物菌剂及肥料领域，具体涉及一种适用于种植、畜禽、水产养殖及污水处理等领域需求的浒苔微生物菌剂，并进一步公开了其制备方法。本发明所述浒苔微生物菌剂利用浒苔制得浆料，并复合了细黄链霉菌、干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌和膜醭比赤酵母菌等为主的多种有益微生物菌群，具有有效改善农产品品质、有效降低动植物生长期的成本，提高农产品产量等多重功效。所述微生物菌剂还具有净化水质，去除污水、垃圾及畜禽养殖圈舍中硫化氢等臭气、改善环境等功能。

Description

一种浒苔微生物菌剂及其制备方法
技术领域
本发明属于微生物菌剂及肥料领域，具体涉及一种适用于种植、畜禽、水产养殖及污水处理等领域需求的浒苔微生物菌剂，并进一步公开了其制备方法。
背景技术
当前经济发展中，农作物种植、畜禽及水产养殖业在我国已形成极大的产业规模，并在国民经济中占有重要地位。但是，人们为了追求高收益，在种植过程中大量使用化肥农药，在养殖中给畜牧、家禽、水产等喂养添加了抗生素、激素、防腐剂的饲料，导致粮食蔬菜中的亚硝酸盐和农药大量残留、耐药菌株的产生和抗生素、激素在畜禽水产品中残留，并造成二重感染，严重威胁着生态环境和人体健康。这与现代生态农业发展中，对化肥、农药、饲料、水产用品提出的一系列限制和要求相违背。在这一背景下，生物技术中有益微生物菌剂在这一领域的的优势日益彰显。但是当前市场上添加微生物的产品中，大部分产品菌种比较单一，其功能单一从而解决实际问题也比较局限，且其生产工艺复杂；另一方面现有产品多为粉状，菌活度低，成活率低，这样就明显降低了产品的实用效益。
浒苔是一种营养丰富的藻类植物，具有浓郁的海藻鲜味，可作为许多动物(猪、水产动物等)饲料的天然调味剂。浒苔含有多种活性功能成分，富含碳水化合物、蛋白质、粗纤维，同时还含有丰富的脂肪和维生素。浒苔还富含矿物质和维生素，微量元素含量也比较丰富，尤其是含碘较多，特别是Fe、Cu、Zn三种动物必需微量元素的含量均明显高于其它藻类，而对动物有害的重金属元素(尤其是Pb和As)则是海藻中最低的一种。更重要的是，作为浒苔主要活性成分的浒苔多糖，它广泛存在于藻体细胞中，具有降低胆固醇、抗菌抗病毒、抗氧化、增强免疫功能、抗肿瘤、消炎和保湿活性等诸多的药理作用。同时，浒苔还含有动物不能合成的所有必需氨基酸(EAA)，EAA含量更是占总氨基酸(TAA)的43％。由此可见，浒苔的蛋白质品质较好，是一种很好的植物蛋白源，若动物饲料中适当添加浒苔后，可弥补常规植物性饲料中微量元素不足的问题，还可以抑制有害病菌繁殖生长、增强动物免疫调节能力、改善微循环、提高营养物质吸收利用率，起到增强畜禽和水产养殖品防病抗病能力、促进增产增收等作用。
中国专利CN103421721A公开了一种浒苔青储及浒苔粗多糖的方法，该方法利用包括植物乳杆菌、短乳杆菌、西姆芽孢杆菌、冷解糖芽孢杆菌的复合微生物菌剂进行浒苔青储，使其坚固的纤维素结构变得可分解利用。实现了新鲜浒苔的存储利用，并对浒苔的利用进行了深度开发。但是单纯的浒苔多糖并不能完全解决农作物种植、畜禽及水产养殖业的需求。
中国专利CN101486612A公开了一种微生物发酵法处理浒苔生产海藻肥的方法，其以新鲜浒苔为原料，利用细菌、放线菌和真菌在不添加任何化学品情况下，通过浒苔种子液的制备，对浒苔进行发酵处理，并以浒苔发酵液为基础制备各种浒苔海藻肥。该方法可以使浒苔的有效成分适度溶出，极大的保留了浒苔的天然活性有效成分，制备的海藻肥可大大提高作物的抗寒、抗旱、抗逆能力，减少病虫害，促进根系发育，使土壤透气、松软，大大提高了作物的产量和质量。但是该海藻肥仅仅对农作物的作用较为明显，并不能广泛、综合性的适用于农作物种植、畜禽及水产养殖业的需求。
中国专利CN103304305A公开了一种复合微生物的功能浒苔叶面肥，该方法通过对浒苔降解，最大限度的提取和保留浒苔的活性成分，并通过与枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和褐球固氮菌的复合微生物功能菌及微量元素的复配，制得新型功能性叶面肥料。该肥料含有农作物生长所必须的微量元素，能显著降低农药的使用量，提高作物产量。同样的，该叶面肥也是针对土壤农作物的发展制得，依然无法广泛、综合性的适用于农作物种植、畜禽及水产养殖业的需求。
发明内容
为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种基于浒苔为原料的，可广泛适用于农作物种植、畜禽及水产养殖业需求的微生物菌剂，一方面可显著提高农作物、畜禽及水产养殖的产量，另一方面，可用于污染的治理，改良土壤及水质。
为解决上述技术问题，本发明提供了一种制备浒苔微生物菌剂的方法，包括如下步骤：
S1，取新鲜浒苔制成浆液，得浒苔浆料；
S2，将保存的细黄链霉菌、干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌和膜醭比赤酵母菌进行无菌培养，得到生物菌种；
S3，取步骤S1得到的浒苔浆料30-35重量份，步骤S2得到的生物菌种3-5重量份，以及糖蜜3-5重量份、助剂8-12重量份和水40-60重量份混匀，并控制温度低于35℃进行有氧发酵培养；
S4，当菌液中芽孢杆菌类80％以上的繁殖体转变为空型芽孢时，停止通气和搅拌、继续进行厌氧发酵；
S5，将所得发酵产物检验并包装，即得液体菌剂。
进一步的，所述步骤S2中，将保存的细黄链霉菌、干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌和膜醭比赤酵母菌混合接入到与之适配的含有碳源、氮源、无机盐和水的无菌培养基中培养，得到所需菌种。
或者，所述步骤S2中，分别将保存的细黄链霉菌、干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌和膜醭比赤酵母菌接种到与之适配的含有碳源、氮源、无机盐和水的无菌培养基中培养，并将所得的培养液混合，得到所需菌种。
优选的，所述步骤S2中，所述菌种中细黄链霉菌、干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌和膜醭比赤酵母菌的培养液的重量比为2-4：1-3：1-3：1-3：1-3。
更优的，所述细黄链霉菌、干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌和膜醭比赤酵母菌的培养液的重量比为3：1.5：2：2：1.5。
所述步骤S1中，所述浒苔经杀菌、消毒、浸泡、粉碎、研磨，制成浒苔浆液。
优选的，所述杀菌的步骤为100℃以上高温杀菌。
所述步骤S1中，所述助剂包括磷酸二氢钾、硫酸铵和磷酸氢二钾。
所述糖蜜为蔗糖。
本发明公开还公开了上述的方法制备得到的浒苔微生物菌剂。
所述微生物菌剂为液体菌剂。
本发明所述浒苔微生物菌剂利用浒苔和多种有益微生物菌复合发酵，是一种具有多菌种、多功能、多用途的高效微生物产品。它充分利用了浒苔中所含的氨基酸和钾、钙、硒等多种天然无机微量元素及蛋白等几十种有效成分，并复合了细黄链霉菌、干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌和膜醭比赤酵母等为主的多种有益微生物菌群，具有抑制有害病菌繁殖和生长，提高动植物机体细胞免疫力，增强作物防病抗病能力，减少病害的作用，能为作物补充浒苔所富含的多种氨基酸和微量元素等营养成分；同时能有效改善土壤理化性状，降低土壤表层含盐量和pH值，还可以固氮、解磷、解钾，促进农作物对土壤中磷、钾、镁及各种微量元素的吸收，提高营养物质的吸收和利用，强壮根系、促进生长、提高产量，有效减少激素、农药、化肥的使用量，改善农产品品质，可有效降低动植物生长期的成本。所述微生物菌剂还具有净化水质，去除污水、垃圾及畜禽养殖圈舍中硫化氢等臭气、改善环境等功能。
本发明所述浒苔微生物菌剂产品绿色、无污染，用其制成的生物有机肥或直接将其用于蔬菜、瓜果、粮食、茶叶、棉花等农作物种植，具有强壮根系、促进生长、减少病害等功能，能减少化肥、激素、农药用量及其残留，促进增产增收，提高农产品品质；用于畜禽水产养殖业，具有抑制有害病菌繁殖生长、增强免疫调节、改善微循环、提高营养物质吸收利用、增强畜禽和水产养殖品防病抗病能力、促进增产增收等作用。同时浒苔微生物菌剂中含有分解磷钾化合物的细菌，用于污染水体治理，能分解破坏有害藻类孢子，清除杂菌，提高水体透光性和溶解氧，优化水环境，改善水质。
本发明所述浒苔微生物菌剂能够克服现有浒苔肥料仅适用于特定作物之用的不足，既能够全面满足生态农业发展的要求，提高多种应用领域的产品品质和产量，解决生态污染和食品安全问题，又能有效解决海洋地带经常爆发的浒苔的环境污染问题。
具体实施方式
本发明所述的将所述菌种接入适配的含有碳源、氮源、无机盐和水的无菌培养基培养，其目的是为了菌种的扩大增殖，本领域技术人员可通过现有技术中常规的培养基实现上述目的，也可选用适用于该菌属的基本培养基实现该菌属菌种的增殖培养基，并不简单限定于某种特定培养基。例如细黄链霉菌可以在高氏合成一号琼脂培养基中培养，膜醭毕赤酵母菌可以在麦芽汁琼脂培养基中培养，并无特别限定及要求。其中，
细黄链霉菌是一种多功能菌种，属于放线菌的代表菌属，其代谢产物中含有生长素，能够摄取光合细菌产生的氨基酸，能够产生放线菌素、放线菌酮等活性物质，能够抑制病菌繁殖，防病保苗。这种抗生素能有效的抑制病原菌，争夺有害霉菌及细菌繁殖时所需的物质，从而抑制其增殖，创造有益于其他有益微生物生存的环境，其生长成熟后的代谢产物以及散发出的的独特气味可以驱避一些土壤作物害虫。细黄链霉菌还能产生抗菌素、苯乙酸、琥珀酸及细胞分裂素等作物生长调节剂成分，促进作物生根发芽，起到促进作物生长发育、增强光合作用和诱发抗逆基因表达，增强抗寒抗旱等抗逆性的作用，从而提高作物产量和品质；它可以转化土壤中氮、磷、钾，提高土壤肥力，从而减少化肥用量。
细黄链霉菌适宜的培养液配方以淀粉琼脂培养基最为常见：可溶性淀粉2g，硝酸钾0.1g，磷酸氢二钾0.05g，氯化钠0.05g，硫酸镁0.05g，硫酸亚铁0.001g，琼脂2g，水100mL。先把淀粉放在配置培养基的烧杯中，加5mL水调成糊状后，倒入95mL水，搅匀后加入其他药品，使其溶解。在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，带琼脂完全溶解后，补足失水。调整pH值到7.2-7.4，分装后高压灭菌30min。
干酪乳杆菌属于乳杆菌属，兼性厌氧菌，属化能异养型微生物，化能异养菌，兼性异型发酵乳糖，不液化明胶；其最适生长温度为37℃，需要营养丰富的培养基；能发酵多种糖，甚至每一株都能产生乳酸菌素。乳酸菌能使木质素、纤维素等难分解的有机物容易分解，并消除未分解有机物产生的种种弊端，因此可在有机物发酵分解方面发挥重要作用。同时，乳酸菌能抑制导致连作障碍的致病菌增殖。这些乳酸菌素还是天然肽类防腐剂的一大来源。干酪乳杆菌能够抑制和杀死食品中的许多腐败菌及致病菌，并且不影响食物性状，甚至能够改善食品特性，因此将其作为发酵剂添加到食品中能使产品更加优质，且对食品储藏过程中的防腐保鲜也起到积极作用。此外，干酪乳杆菌能在37℃恒温条件下，pH值3.0(人体正常胃液的pH值)和正常胆碱下生长，是一种良好的益生菌菌种。干酪乳杆菌还可使抗低密度氧化脂抗体和淋巴细胞增加，使粒细胞的噬菌作用明显增强，对宿主进行免疫调节，防止肿瘤的产生。
所述干酪乳杆菌适宜的培养液配方包括：蛋白胨10.0g，肉膏10.0g，酵母膏5.0g，磷酸氢二钾2.0g，柠檬酸二铵2.0g，乙酸钠5.0g，葡萄糖20.0g，吐温801.0g，MnSO4·H2O 0.25g，MgSO4·7H2O 0.58g，琼脂20.0g，灭菌CaCO310.0g，蒸馏水1000mL。将各种成分溶解于蒸馏水中，调节pH值6.2～6.6，再加琼脂，加热溶解后分装，放入高压蒸汽灭菌锅内，121℃，灭菌20min。
枯草芽孢杆菌，是芽胞杆菌属的一种，需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。在土壤中普遍存在，也是植物体内常见的一种内生菌，对人畜无毒无害，不污染环境。其菌株的代谢产物中含有多种有效的抗菌物质，菌体还可以产生溶菌物质，这些物质可以抑制植物病原菌，对植物多种真菌性病害具有很好的防治作用；枯草芽孢杆菌能够产生类似细胞分裂素、植物生长激素的物质，促进植物的生长、诱发植物自身抗病机制从而增强植物的抗病性能。枯草芽孢杆菌可添加做生物有机肥料，提高种子出芽率和保苗率，提高作物成活率。枯草芽孢杆菌能对土壤呼吸作用产生刺激效应，能够提高土壤营养物的转化和供应能力；抑制农作物对硝态氮、重金属、农药的吸收，净化和修复土壤；它还可以在一定程度上使盐碱地土壤理化性状得到改善，提高土壤蓄水、蓄能和地温，缓解重茬障碍。
枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素等活性物质，对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用；能迅速消耗环境中的游离氧，促进肠道有益厌氧菌生长，并产生乳酸等有机酸类，降低肠道pH值，间接抑制其它致病菌生长；它能刺激动物免疫器官的生长发育，激活T、B淋巴细胞，提高免疫球蛋白和抗体水平，提高群体免疫力；枯草芽孢杆菌菌体自身可合成α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类，在消化道中与动物体内的消化酶类一同发挥作用，能合成多种B族维生素，提高动物体内干扰素和巨噬细胞的活性。由于枯草芽孢杆菌无致病性，并可以分泌多种酶和抗生素，而且还具有良好的发酵基础，所以在畜牧、家禽、特种动物及宠物养殖，水产养殖方面应用广泛，能有效提高动物免疫能力，抑制有害病菌生长繁殖，净化生存环境。
此外，枯草芽孢杆菌可用于环境污水处理、废物处理、强效去除DOD、COD及TSS，消除硫化氢、氨氮等臭味及气泡，降解有机质，并在畜牧养殖动物废料、臭味处理，粪便处理系统，垃圾、粪坑、粪池等处理方面有很明显的效用，在污水处理及生物肥发酵或发酵床制作中应用也相当广泛。
适用于枯草芽孢杆菌的培养基配方包括：蛋白胨10.0g，牛肉膏3.0g，NaCl 5.0g，琼脂18.0g，蒸馏水1000ml，将各种成分溶解于蒸馏水中，调节pH值到7.2～7.5，再加琼脂，加热溶化后分装。121℃，高压灭菌30min。
沼泽红假单胞菌，别名红假菌，属于光合菌类。光合细菌广泛存在于各种自然环境，是一类能进行不放氧光合成作用的细菌总称，是水体兼性厌氧层中主要的初级生产者，并在自然界的碳素、氮素、硫素转化循环中起重要作用。光合细菌简称PSB，是地球上最古老的菌种之一，PSB菌体营养丰富，蛋白质含量高达65％，且富含多种维生素、辅酶等生物活性物质和微量元素适应性强，能忍耐高深度的有机废水和较强的分解转化能力，对酚、氰等毒物有一定有忍受和分解能力等特点。
沼泽红假单胞菌菌体含有营养物质、多种抗病毒因子和促生长因子等生理活性物质，能明显提高畜禽机体的抗病能力，提高饲料转化率。沼泽红假单胞菌的用途很多，可用于水质净化、污水处理、饲料级微生物添加剂等，在提高畜禽、水产品的成活率、促进生长、提高抗病力等方面取得了良好效果。
适宜于沼泽红假单胞菌的培养基配方包括：酵母膏3.0g，蛋白胨3.0g，MgSO4·7H2O 0.5g，CaCl20.3g，蒸馏水1000mL。将各种成分溶解于蒸馏水中，调节pH值到6.8～7.0，再加琼脂，加热溶化后分装。121℃，高压灭菌30min。
膜醭毕赤酵母属酵母菌，为异氧型、好氧、兼性厌氧菌，可产生促进细菌分裂的生物活性物质。它能利用作物根部产生的分泌物、光合细菌合成的氨基酸及糖类，以及土壤中的有机物，发挥酵母菌具有的发酵力，合成对作物有效的物质。许多酵母菌对果蔬采后病害具有明显的抑制作用，酵母菌抑制霉菌的机理主要在于营养与空间的竞争、对病原菌的直接寄生作用及诱导寄主产生抗病性。酵母菌与其它生防微生物相比，具有拮抗效果好、不产生毒素、可以和化学杀菌剂共同使用等优点。
膜醭毕赤酵母主要通过与病原菌进行营养和空间的竞争，紧密地吸附在病原菌菌丝体上分泌能降解病原菌细胞壁的水解酶，如几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶，并可能诱导寄主产生抗性，从而抑制灰霉病、软腐病等的发生。膜醭毕赤酵母能有效的抑制甜樱桃、桃、油桃、枇杷、苹果、柑橘等果实采后的多种真菌，诱导果实中过氧化物酶、苯丙氨酸解氨酶、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶等活性显著提高，提高了果实对疾病的抵抗能力。膜醭毕赤酵母应用在土壤中，能分解出长石、云目等矿物中的钾、硅，也能分解出磷石灰中的磷，具有溶磷、释钾和固氮功能，同时能在生长繁殖过程中产生有机酸、氨基酸、多糖、激素等有利于植物吸收和利用的物质；在土壤中繁殖后，分泌植物生长刺激素和多种酶，以增强作物对一些病害的抵抗能力，抑制其它病原菌的生长；菌体内的钾在菌体死亡后，游离出来，又可以被植物吸收利用。可以作为微生物肥料的一种重要功能菌，提高土壤速效钾、磷含量，提高作物产量和品质。
适宜于膜醭比赤酵母培养液配方为稀释去除啤酒花的麦芽汁至浓度为12Brix。按1.5％的比例将琼脂加进麦芽汁中，加热溶解，然后将此培养基分装试管中。高压灭菌，110℃，灭菌30min。
本发明下述实施例以上述介绍的适宜于各菌种的培养基为例，阐述本发明的技术效果。
实施例1
本实施例所述浒苔微生物菌剂，是由如下量的组分通过如下步骤制备而成：
S1，取新鲜浒苔经100℃以上高温杀菌、消毒、浸泡、粉碎、研磨，制成浒苔浆液，得浒苔浆料；
S2，将保存的细黄链霉菌、干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌和膜醭比赤酵母菌分别接入各自适宜的培养基中进行无菌培养，并按照所述细黄链霉菌、干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌和膜醭比赤酵母菌的培养液的重量比为2：3：1：3：1的比例混匀，得到生物菌种；其中，
所述细黄链霉菌培养液配方为：可溶性淀粉2.0g，硝酸钾0.1g，磷酸氢二钾0.05g，氯化钠0.05g，硫酸镁0.05g，硫酸亚铁0.001g，琼脂2.0g，水100mL。先把淀粉放在配置培养基的烧杯中，加5mL水调成糊状后，倒入95mL水，搅匀后加入其他药品，使其溶解。在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，带琼脂完全溶解后，补足失水。调整pH值到7.2-7.4，分装后高压灭菌30min；
所述干酪乳杆菌适宜的培养液配方为：蛋白胨10.0g，肉膏10.0g，酵母膏5.0g，磷酸氢二钾2.0g，柠檬酸二铵2.0g，乙酸钠5.0g，葡萄糖20.0g，吐温801.0g，MnSO4·H2O 0.25g，MgSO4·7H2O 0.58g，琼脂20.0g，灭菌CaCO310.0g，蒸馏水1000mL。将各种成分溶解于蒸馏水中，调节pH值6.2～6.6，再加琼脂，加热溶解后分装，放入高压蒸汽灭菌锅内，121℃，灭菌20min；
所述枯草芽孢杆菌适宜的培养基配方为：蛋白胨10.0g，牛肉膏3.0g，NaCl 5.0g，琼脂18.0g，蒸馏水1000mL，将各种成分溶解于蒸馏水中，调节pH值到7.2～7.5，再加琼脂，加热溶化后分装。121℃，高压灭菌30min；
所述沼泽红假单胞菌适宜的培养基配方为：酵母膏3.0g，蛋白胨3.0g，MgSO4·7H2O 0.5g，CaCl20.30g，蒸馏水1000mL。将各种成分溶解于蒸馏水中，调节pH值到6.8～7.0，再加琼脂，加热溶化后分装。121℃，高压灭菌30min；
所述膜醭比赤酵母适宜的培养液配方为稀释去除啤酒花的麦芽汁至浓度为12Brix：按1.5％的比例将琼脂加进麦芽汁中，加热溶解，然后将此培养基分装试管中，高压灭菌，110℃，灭菌30min；
S3，取步骤S1得到的浒苔浆料30kg，步骤S2得到的生物菌种5kg，以及蔗糖糖蜜3kg、助剂(磷酸二氢钾、硫酸铵和磷酸氢二钾各4kg)12kg和水40kg混匀，并控制温度30-35℃进行有氧发酵培养；
S4，当菌液中芽孢杆菌类80％以上的繁殖体转变为空型芽孢时，停止通气和搅拌,并继续进行厌氧发酵一周；
S5，将所得的发酵产物进行产品检验，产品的有效活菌数≥2亿/mL即为合格，包装即得液体菌剂产品。
实施例2
本实施例所述浒苔微生物菌剂，是由如下量的组分通过如下步骤制备而成：
S1，取新鲜浒苔经100℃以上高温杀菌、消毒、浸泡、粉碎、研磨，制成浒苔浆液，得浒苔浆料；
S2，将保存的细黄链霉菌、干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌和膜醭比赤酵母菌分别接入各自适宜的培养基中进行无菌培养，并按照所述细黄链霉菌、干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌和膜醭比赤酵母菌的培养液的重量比为4：1：3：1：3的比例混匀，得到生物菌种；其中，各菌种使用的培养基均同实施例1相同；
S3，取步骤S1得到的浒苔浆料35kg，步骤S2得到的生物菌种3kg，以及蔗糖糖蜜5kg、助剂(磷酸二氢钾、硫酸铵各3kg，磷酸氢二钾2kg)8kg和水60kg混匀，并控制温度27-30℃进行有氧发酵培养；
S4，当菌液中芽孢杆菌类80％以上的繁殖体转变为空型芽孢时，停止通气和搅拌，并继续进行厌氧发酵一周；
S5，将所得的发酵产物进行产品检验，产品的有效活菌数≥2亿/mL即为合格，包装即得液体菌剂产品。
实施例3
本实施例所述浒苔微生物菌剂，是由如下量的组分通过如下步骤制备而成：
S1，取新鲜浒苔经100℃以上高温杀菌、消毒、浸泡、粉碎、研磨，制成浒苔浆液，得浒苔浆料；
S2，将保存的细黄链霉菌、干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌和膜醭比赤酵母菌分别接入各自适宜的培养基中进行无菌培养，并按照所述细黄链霉菌、干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌和膜醭比赤酵母菌的培养液的重量比为3：1.5：2：2：1.5的比例混匀，得到生物菌种；其中，各菌种使用的培养基均同实施例1相同；
S3，取步骤S1得到的浒苔浆料32kg，步骤S2得到的生物菌种4kg，以及蔗糖糖蜜4kg、助剂(磷酸二氢钾、硫酸铵各3kg，磷酸氢二钾4kg)10kg和水50kg混匀，并控制温度27-30℃进行有氧发酵培养；
S4，当菌液中芽孢杆菌类80％以上的繁殖体转变为空型芽孢时，停止通气和搅拌，并继续进行厌氧发酵一周；
S5，将所得的发酵产物进行产品检验，产品的有效活菌数≥2亿/mL即为合格，包装即得液体菌剂产品。
实施例4
本实施例所述浒苔微生物菌剂，是由如下量的组分通过如下步骤制备而成：
S1，取新鲜浒苔经100℃以上高温杀菌、消毒、浸泡、粉碎、研磨，制成浒苔浆液，得浒苔浆料；
S2，将保存的细黄链霉菌、干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌和膜醭比赤酵母菌混合共同接入适宜的含有碳源、氮源及无机盐的培养基中进行无菌培养，得到生物菌种；
所述的培养基包括：葡萄糖30g/L、麸皮20g/L、酵母膏5g/L、MgSO42g/L、蒸馏水、调pH5.0；
S3，取步骤S1得到的浒苔浆料31kg，步骤S2得到的生物菌种4.5kg，以及蔗糖糖蜜3.5kg、助剂(磷酸二氢钾、硫酸铵各4kg，磷酸氢二钾3kg)11kg和水45kg混匀，并控制温度27-30℃进行有氧发酵培养；
S4，当菌液中芽孢杆菌类80％以上的繁殖体转变为空型芽孢时，停止通气和搅拌，并继续进行厌氧发酵一周；
S5，将所得的发酵产物进行产品检验，产品的有效活菌数≥2亿/mL即为合格，包装即得液体菌剂产品。
实施例5
本实施例所述浒苔微生物菌剂，是由如下量的组分通过如下步骤制备而成：
S1，取新鲜浒苔经100℃以上高温杀菌、消毒、浸泡、粉碎、研磨，制成浒苔浆液，得浒苔浆料；
S2，将保存的细黄链霉菌、干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌和膜醭比赤酵母菌混合共同接入适宜的含有碳源、氮源及无机盐的培养基中进行无菌培养，得到生物菌种；
所述的培养基包括：葡萄糖30g/L、麸皮20g/L、酵母膏5g/L、MgSO42g/L、蒸馏水、调pH5.0；
S3，取步骤S1得到的浒苔浆料33kg，步骤S2得到的生物菌种3.5kg，以及蔗糖糖蜜4.5kg、助剂(磷酸二氢钾、硫酸铵、磷酸氢二钾各3kg)9kg和水55kg混匀，并控制温度27-30℃进行有氧发酵培养；
S4，当菌液中芽孢杆菌类80％以上的繁殖体转变为空型芽孢时，停止通气和搅拌，并继续进行厌氧发酵一周；
S5，将所得的发酵产物进行产品检验，产品的有效活菌数≥2亿/mL即为合格，包装即得液体菌剂产品。
实验例1
将本发明实施例1-5所制备得到的浒苔微生物菌剂用于玉米的增产效果试验。
整个试验设置12组试验田进行试验，共进行四种试验操作，每种试验操作分别进行三次重复试验，取三次平行的平均值为试验数据。
操作方式一：常规施肥(亩施20公斤玉米专用肥底肥，10公斤尿素于6-8叶期用作追肥)并在大喇叭口期分别喷施实施例1-5所制备得到的浒苔微生物菌剂1kg/亩(下表中标注为试验组1-1至试验组1-5)；
操作方式二：常规施肥(亩施20公斤玉米专用肥底肥，10公斤尿素于6-8叶期用作追肥)+并在大喇叭口期分别喷施对应施加实施例1-5所制备得到的进行灭活处理的灭活浒苔微生物菌剂1kg/亩(下表中标注为编号2-1至2-5)；
操作方式三：常规施肥(亩施20公斤玉米专用肥底肥，10公斤尿素于6-8叶期用作追肥)，与操作方式一中同期喷施等量清水；
操作方式四：常规施肥(亩施20公斤玉米专用肥底肥，10公斤尿素于6-8叶期用作追肥)。
试验后各组检测性能，取其三个重复试验的平均值，各组检测性能如下表1所示：
表1浒苔微生物菌剂用于玉米的增产试验的效果
上述数据可知，本发明所述的浒苔微生物菌剂可有效抑制有害病菌繁殖和生长，减少病害，强壮根系、促进生长、提高产量，有效减少激素、农药、化肥的使用量，可有效降低动植物生长期的成本，提高农产品质量和产量等多重功效。
实验例2
将本发明实施例1-5所制备得到的浒苔微生物菌剂用于虾池的养殖试验，来观测产品对水质调控和水产品病害防治及促生长的影响。
采用6个虾池进行试验，其中1-5号为试验池，6号池为对照池。每个池塘面积在3亩左右，平均水深1.8米，虾苗放养密度相同，养殖条件基本一致，养殖时间为6-9月4个月。1-5号池塘分别施用1-5号实验例所得产品，施用量为：平均每20天使用一次，每次每亩施用量为250ml，使用时将产品兑水后均匀喷施在水面。喷洒前后三天内，不能使用消毒剂、抗生素，不能排水，以免影响产品效果。对照池不加微生物菌剂，按照常规条件养殖。实验结果见下表2，其中COD去除率是相对于对照池计算所得。
表2浒苔微生物菌剂用于虾池养殖试验的效果
试验显示微生物菌剂能显著降低养殖水体的COD，使试验池的氨氮维持在较低水平，并能稳定溶解氧和pH，使水质处于一种良好的状态，有效提高虾的免疫能力，抑制有害病菌滋生，为养殖生物营造良好的水生环境。试验池虾的增长速度明显高于对照池，且最终收获时施用微生物菌剂的虾池的产量显著提高。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种制备浒苔微生物菌剂的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1，取新鲜浒苔制成浆液，得浒苔浆料；
S2，将保存的细黄链霉菌、干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌和膜醭比赤酵母菌进行无菌培养，得到生物菌种；
S3，取步骤S1得到的浒苔浆料30-35重量份，步骤S2得到的生物菌种3-5重量份，以及糖蜜3-5重量份、助剂8-12重量份和水40-60重量份混匀，并控制温度低于35℃进行有氧发酵培养；
S4，当菌液中芽孢杆菌类80％以上的繁殖体转变为空型芽孢时，停止通气和搅拌、继续进行厌氧发酵；
S5，将所得发酵产物检验并包装，即得液体菌剂。
2.根据权利要求1所述的制备浒苔微生物菌剂的方法，其特征在于，所述步骤S2中，将保存的细黄链霉菌、干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌和膜醭比赤酵母菌混合接入到与之适配的含有碳源、氮源、无机盐和水的无菌培养基中培养，得到所需菌种。
3.根据权利要求1所述的制备浒苔微生物菌剂的方法，其特征在于，所述步骤S2中，分别将保存的细黄链霉菌、干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌和膜醭比赤酵母菌接种到与之适配的含有碳源、氮源、无机盐和水的无菌培养基中培养，并将所得的培养液混合，得到所需菌种。
4.根据权利要求3所述的制备浒苔微生物菌剂的方法，其特征在于，所述步骤S2中，所述菌种中细黄链霉菌、干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌和膜醭比赤酵母菌的培养液的重量比为2-4：1-3：1-3：1-3：1-3。
5.根据权利要求4所述的制备浒苔微生物菌剂的方法，其特征在于，所述步骤S2中，所述细黄链霉菌、干酪乳杆菌、枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌和膜醭比赤酵母菌的培养液的重量比为3：1.5：2：2：1.5。
6.根据权利要求1-5任一所述的制备浒苔微生物菌剂的方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述浒苔经杀菌、消毒、浸泡、粉碎、研磨，制成浒苔浆液。
7.根据权利要求6所述的制备浒苔微生物菌剂的方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述杀菌的步骤为100℃以上高温杀菌。
8.根据权利要求1-7任一所述的制备浒苔微生物菌剂的方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述助剂包括磷酸二氢钾、硫酸铵和磷酸氢二钾。
9.根据权利要求1-8任一所述的方法制备得到的浒苔微生物菌剂。
10.根据权利要求9所述的浒苔微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂为液体菌剂。
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