CN103497906B - 一种微生态制剂及其制备方法与应用 - Google Patents

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王丽萍
单大鹏
黄兆斌
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Abstract

一种微生态制剂及其制备方法与应用,涉及水产养殖。微生态制剂含有枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌中的至少一种和植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌中的至少一种;枯草芽孢杆菌包括枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis1A05680),短小芽孢杆菌包括短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus1A08151),植物乳杆菌包括植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum1A07806);嗜酸乳杆菌包括嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus PL7)。在制备促进对虾或石斑鱼生长,提高对虾或石斑鱼免疫力和抗病力,防治病害,提高存活率,净化养殖水质制剂中应用。

Description

-种微生态制剂及其制备方法与应用
技术领域
[0001] 本发明涉及水产养殖,尤其是一种应用于对虾或石斑鱼养殖的制剂,具体是由枯 草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌制成的制剂在促进对虾或石斑鱼生 长,提高对虾或石斑鱼免疫力和抗病力,防治对虾或石斑鱼病害尤其是石斑鱼黑身病,提高 对虾或石斑鱼存活率,净化养殖水质中的应用。
背景技术
[0002] 2000年以来,随着高密度养殖模式的推广,我国对虾养殖业进入高速发展时期, 2006年,我国对虾养殖总量124万吨,占全球养殖对虾产量的39. 2%,并连续多年保持世界 第一。但是,集约化、高密度水产养殖的迅猛发展,使养殖生态环境遭到严重破坏,同时也产 生了一系列负面的影响,包括饲料资源浪费、环境恶化、病害严重、种质退化、药物残留等, 尤其是病害问题日趋严重。对虾白斑综合病毒、桃拉病毒以及弧菌病害等造成对虾大规模 死亡,已成为制约对虾养殖业发展的重要瓶颈。石斑鱼作为一种名贵的经济鱼类,自20世 纪80年代起,在我国广东、福建、浙江和台湾等地区开始养殖。近年来,我国南方省区的石 斑鱼网箱养殖规模迅速扩大,石斑鱼的各种病害也呈现迅速上升的势头。在每年的春末和 夏秋高温季节,常暴发各种急性传染病,如神经坏死病毒、虹彩病毒、病原细菌等造成的鱼 苗黑身、打转等,造成大批石斑鱼苗死亡,给养殖业主带来巨大经济损失,严重制约了石斑 鱼养殖业的发展。据统计,每年石斑鱼苗的死亡率高达99%。目前,为了保持养殖密度以及 防止疾病的爆发,生产上盲目过度投放各类抗生素,如氯霉素、土霉素、呋喃唑酮等,从而造 成养殖动物体内药物残留严重,给养殖动物和人类的健康带来了潜在的危害。随着国家全 面禁止在动物养殖中应用抗生素,开发无毒、无副作用、无残留、优质、新型的微生态制剂产 品已成为当前市场的需要。
[0003] 微生态制剂作为抗生素的替代品,一方面通过有益微生物降解养殖环境的氨氮、 亚硝酸盐、H 2S、饵料残渣、粪便排泄物等净化水质,为养殖动物营造一个良好的养殖环境, 防止病原菌滋生;另一方面,通过有益微生物产生代谢产物和生理活性物质如抗菌肽等来 抑制或者杀灭病原,同时提高养殖动物免疫力和抗病力,达到防治病害的目的;再者,有益 微生物通过产生多种消化酶,帮助蛋白质、碳水化合物、脂肪的代谢,提高饲料的利用率和 转化率,达到减少资源消耗和增产的目的。
[0004] 中国专利CN103005183A公开一种石斑鱼全价配合饲料,采用进口鱼粉、发酵豆 柏、α -淀粉、面粉、鱿鱼粉、磷虾粉、酵母膏、丰年虫、鱼油、大豆磷脂、DHA、EPA、复合矿物盐、 复合维生素、复合酶制剂、复合免疫增强剂、强肝剂和复合微生态制剂为原料制成。考虑石 斑鱼养成期消化生理特点,在饲料中加入各种添加剂,可以促进石斑鱼消化吸收,调节石斑 鱼肠道菌群稳定,提高石斑鱼免疫力和抗脂肪肝的作用,该配合饲料营养均衡全面,无添加 抗生素等药物,对水体无污染,属于高效环保无公害的饲料。
发明内容
[0005] 本发明的目的是提供一种微生态制剂及其制备方法。
[0006] 本发明的另一目的是提供一种微生态制剂的应用,尤其是可促进对虾或石斑鱼生 长,提高对虾或石斑鱼免疫力和抗病力,防治对虾或石斑鱼病害尤其是石斑鱼黑身病,提高 对虾或石斑鱼存活率,净化养殖水质。
[0007] 所述微生态制剂含有:
[0008] 枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌中的至少一种,和植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌中的至少 一种;
[0009] 所述枯草芽孢杆菌包括枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilislA05680)保藏编号 CCTCC NO:M2013289 ;
[0010] 所述短小芽孢杆菌包括短小芽孢杆菌(Bacillus pumiluslA08151)保藏编号 CCTCC NO:M2013291 ;
[0011] 所述植物乳杆菌包括植物乳杆菌(Lactobacillus plantarumlA07806)保藏编 CCTCC NO:M2013293 ;
[0012] 所述嗜酸乳杆菌包括嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus PL7)保藏编号 CCTCC NO:M2013294。
[0013] 所述微生态制剂包括枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌时, 所述枯草芽孢杆菌含量为菌数占总菌数百分比20%〜30% ;所述短小芽孢杆菌含量为菌数 占总菌数百分比20%〜30% ;所述植物乳杆菌含量为菌数占总菌数百分比20%〜30% ;所述 嗜酸乳酸杆菌含量为菌数占总菌数百分比20%〜30%,总量为100%。
[0014] 所述微生态制剂包括兽药、饲料添加剂或水质净化剂等。
[0015] 所述微生态制剂中,枯草芽孢杆菌发酵液、短小芽孢杆菌发酵液、植物乳杆菌发酵 液和嗜酸乳杆菌发酵液均按照本领域常规的深层液体发酵培养的方式获得,较佳地经过斜 面培养、一级种子培养和发酵培养。具体可通过以下方法制备得到:
[0016] 枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌的培养:将出发菌株按斜面、液体种子、液体发酵 的顺序培养,斜面和种子培养基为常规的营养琼脂培养基或肉汤培养基;发酵培养基配方 (W/V):豆饼粉 3%,淀粉 L 5%,玉米浆 1%,葡萄糖 0· 5%,(NH4) 2S040. 1%,NH4ClO. 1%,KH2PO4O. 0 5%,NaH2PO4O. 5%, MgSO4O. 05%,MnSO4O. 05%,发酵培养条件为 28 〜37 °C,通风培养 36 〜48h, 活菌数彡l〇9CFU/mL ;
[0017] 植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌的培养:将出发菌株按斜面、液体种子、液体发酵的顺序 培养,斜面和种子培养基为常规MRS培养基;发酵培养基配方(W/V):糖蜜3%,红糖1%,酵母 粉0. 6%,蛋白胨0. 5%,KH2PO4O. 2%,CaCO3O. 5%,发酵培养条件为28〜37°C,静置培养36〜 48h,活菌数彡 109CFU/mL。
[0018] 所述微生态制剂的存在形式较佳的为微生物菌体发酵液,或者微生物菌液与固体 辅料的混合物。
[0019] 当所述微生态制剂的存在形式为微生物菌液时,制备方法包括将枯草芽孢杆菌发 酵液、短小芽孢杆菌发酵液、植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌发酵液按比例均匀混合即可;混合后 最好进行浓缩处理,并可加入维生素 C、低聚果糖、甘露醇等中的至少一种保护剂,起到协调 作用。
[0020] 当所述微生态制剂的存在形式为微生物菌液与固体辅料的混合物时,制备方法包 括将枯草芽孢杆菌发酵液、短小芽孢杆菌发酵液、红酵母菌发酵液和乳酸杆菌发酵液按比 例混合均匀,作为主要活性成分,按照一定的剂型工艺,添加固体辅料制成片剂、散剂、粉剂 等。所述固体辅料为本领域常规使用固体辅料,包括石灰石、硅藻土、沸石粉、活性碳、微量 元素等。
[0021] 本发明所述微生态制剂中的上述任一组合,均具有促进对虾或石斑鱼生长,提高 对虾或石斑鱼免疫力和抗病力,防治对虾或石斑鱼病害尤其是石斑鱼黑身病,提高对虾或 石斑鱼存活率,净化养殖水质的作用。
[0022] 所述微生态制剂可在制备促进对虾或石斑鱼生长,提高对虾或石斑鱼免疫力和抗 病力,防治对虾或石斑鱼病害,提高对虾或石斑鱼存活率,净化养殖水质,尤其是石斑鱼黑 身病的制剂中应用。
[0023] 本发明所述枯草芽孢杆菌优选但不限于枯草芽孢杆菌1A05680保藏编号 CCTCC N0:M2013289 ;短小芽孢杆菌优选但不限于短小芽孢杆菌1A08151保藏编号 CCTCC N0:M2013291 ;植物乳杆菌优选但不限于植物乳杆菌1A07806保藏编号CCTCC N0:M2013293 ;嗜酸乳杆菌优选但不限于嗜酸乳杆菌PL7保藏编号CCTCC N0:M2013294。
[0024] 本发明选用的菌株特性及功能如下:
[0025] 1、枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌:所述枯草芽孢杆菌CCTCC N0:M2013289和短小 芽孢杆菌CCTCC N0:M2013291具有产胞外蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等活性,可以促进养殖 动物生长,提高饲料利用率;同时能产生脂肽类抗菌物质,较强抑制各类水产动物致病菌, 包括哈维氏弧菌、溶藻弧菌、坎贝氏弧菌、副溶血弧菌、嗜水气单胞菌等。
[0026] 2、植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌:所述植物乳杆菌CCTCC N0:M2013293和嗜酸乳杆菌 CCTCC N0:M2013294进入水产动物肠道,可以调节肠道菌群平衡,能产类细菌素和乳酸,抑 制病原菌生长,提高养殖动物机体免疫力和抗病力。
[0027] 所述微生态制剂可促进对虾生长,提高对虾抗病力,防治对虾病害发生,提高对虾 存活率,净化养殖水质。所述微生态制剂应用于对虾养殖的使用方法和用量如下:
[0028] 日常饲养时,取菌剂全池均匀泼洒。每5天使用一次,每亩养殖水体用量为1〜 2L,水质恶化时可加倍使用。使用后水质改善明显,水色鲜活、pH稳定、藻类生长稳定;同时 水体弧菌含量较低,期间未见病害发生。同时取菌剂用适量水稀释后均匀喷洒在饲料表面, 每IOOkg饲料使用1〜2L,每日拌料投喂,连续投喂3天后停用2天,再连用3天。拌料投 喂一段时间后,对虾摄食旺盛、肠道粗实,未见肠炎等发生。
[0029] 所述微生态制剂可用于防治石斑鱼育苗期间病害的发生,包括神经坏死病毒、虹 彩病毒、细菌等引起的"癫"、"黑身"等症状;有效缓解或预防病害发生,极大地降低病害造 成的死亡率;同时能改善养殖水质,增加石斑鱼消化吸收功能和抗病抗逆能力,提高石斑鱼 产量和质量,缩短养殖周期。所述微生态制剂在防治石斑鱼苗"黑身病"时的使用方法和用 量如下:
[0030] 石斑鱼苗一旦出现黑身症状,立即使用菌剂。24m3水体用量为100〜200ppm,,全 池均匀泼洒。每两天加一次菌,每次加菌之前池底清污,少量换水。2天为一个周期,连用6 天,即可提高石斑鱼苗免疫力,有效缓解石斑鱼苗黑身症状,极大提高存活率。
[0031] 本发明根据微生物的不同特性,将不同功效的微生物进行配伍使用,发挥协同作 用。
具体实施方式
[0032] 以下实施例将对本发明作进一步的说明。
[0033] 制备例说明:上述已经对本发明的微生态制剂的制备进行说明,这里通过包含枯 草芽孢杆菌(Bacillus subtilislA05680)保藏编号CCTCC N0:M2013289、短小芽孢杆菌 (Bacillus pumiluslA08151)保藏编号 CCTCC N0:M2013291、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarumlA07806)保藏编号 CCTCC N0:M2013293 和嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus PL7)保藏编号CCTCC N0:M2013294四种微生物的液体制剂为例进行说明。制 备方法并不局限于本方面实施例所述,公知的能够达到制备目的的方法均可以。下面通过 实施例的方式进一步说明本发明,但并不因此将本发明限制在所述实施例范围之中。
[0034] 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilislA05680)保藏编号 CCTCC N0:M2013289、 短小芽孢杆菌(Bacillus pumiluslA08151)保藏编号CCTCC N0:M2013291、植物乳杆 菌(Lactobacillus plantarumlA07806)保藏编号 CCTCC N0:M2013293 和嗜酸乳杆菌 (Lactobacillus acidophilus PL7)保藏编号 CCTCC N0:M2013294 四种微生物已于 2013 年6月25日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏中心地址为中国,武汉,武汉大学,邮编 430072。
[0035] 实施例1 一种微生态制剂的制备
[0036] 微生态制剂中各组分菌体的培养:
[0037] 枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌的培养:将出发菌株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilislA05680)保藏编号 CCTCC N0:M2013289 和菌株短小芽孢杆菌(Bacillus pumiluslA08151)保藏编号CCTCC N0:M2013291按斜面、液体种子、液体发酵的顺序培养,斜 面和种子培养基为常规的肉汤培养基;发酵培养基配方:豆饼粉3%,淀粉1. 5%,玉米浆1%, 葡萄糖 0· 5%,(NH4)2SO4O. 1%,NH4ClO. 1%,KH2PO4O. 05%,NaH2PO4O. 5%,MgSO4O. 05%,MnSO4O. 05%, 发酵培养条件为37°C,通风培养36h,活菌数彡IO9CFUAiL ;
[0038] 植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌的培养:将出发菌株植物乳杆菌(LactobaciIIus plantarumlA07806)保藏编号 CCTCC N0:M2013293 和嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus PL7)保藏编号CCTCC N0:M2013294按斜面、液体种子、液体发酵的顺序培养, 斜面和种子培养基为常规MRS培养基;发酵培养基配方:糖蜜3%,红糖1%,酵母粉0. 6%,蛋 白胨0· 5%,KH2PO4O. 2%,CaCO3O. 5%,发酵培养条件为37°C,静置培养36h,活菌数彡IO9CFU/ HlLo
[0039] 将上述制备的枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌按照各组 分活菌数等比例混合均匀,混合菌液中添加适量维生素 C( lg/L)得到复合微生态制剂菌液。
[0040] 复合菌剂稳定性实验:
[0041] 复合菌剂在常温下避光保存0个月、1个月、2个月、3个月后,分别取样检测菌剂中 的芽孢杆菌及乳酸菌含量。芽孢杆菌采用LB平板稀释涂布法检测。乳酸菌采用MRS加 2% 碳酸钙稀释倒平板法检测,计数时只计算周围有溶钙圈的菌落。结果见表1 :
[0042] 表 1
[0043]
Figure CN103497906BD00071
[0044] 实施例2本发明的微生态制剂在对虾养殖中的应用试验I
[0045] 一、材料与方法
[0046] 1、试验产品:实施例1的复合微生态制剂菌液,总活菌数在10亿个/mL以上。
[0047] 2、试验对虾:将对虾分为2组,每组250尾,每组设3个重复。
[0048] 3、试验水体:试验用水取自厦门白城砂滤海水。
[0049] 4、试验场地:试验在半吨的玻璃纤维缸中开展。试验缸放置于室外开阔处,自然条 件下随机放置。
[0050] 5、试验方法:试验周期为45天。该试验采取对虾常规饲料喂养,试验组每吨饲料 添加试验产品lkg,保证每克饲料活菌数>10 6CFU/mL,对照组不加试验产品。在试验的第30 天和第45天统计每组对虾的重量及存活情况。在试验的第45天,每个试验缸中留下50条 对虾,余下取出。往每组试验水体中投加2 X 106cfu/ml的坎贝氏弧菌VHl进行致病性弧菌 感染实验。
[0051] 二、试验结果
[0052] 1、对促进生长的影响
[0053] 结果表明,试验组与对照组相比,将体重量提高10%,差别具有统计学意义 (Ρ〈0· 05)。
[0054] 2、对存活率的影响
[0055] 结果表明,试验组与对照组对虾存活率分别为89. 9%和80. 0%,试验组比对照组高 近10%,差异具统计学意义(Ρ〈〇. 05)。
[0056] 3、有益菌在肠道和水体中的存活情况
[0057] 通过检测对虾肠道以及养殖水体中乳酸杆菌和芽孢杆菌存活数发现,其中乳酸杆 菌在肠道中的存活数高达6 X 105CFU/g,水体中也检测到一定数量的乳酸菌(>500CFU/mL); 芽孢杆菌在肠道和水体中的存活数也都高于5 X 104CFU/g和I X 104CFU/mL。
[0058] 4、弧菌感染后对虾的存活情况
[0059] 在试验的第45天,进行致病性弧菌感染实验。结果表明,经过5天的感染试验, 对照组的对虾平均存活率为47%,而试验组对虾存活率高达92%,差异具有统计学意义 (Ρ〈0· 05)。
[0060] 实施例3本发明的微生态制剂在对虾养殖中的应用试验2
[0061] 1、试验产品:实施例1的复合微生态制剂菌液,总活菌数在10亿个/mL以上。
[0062] 2、试验对虾:投苗至养成的对虾全程使用。设3 口实验池和7 口对照池。
[0063] 3、试验场地:漳浦县深土镇某对虾养殖场。
[0064] 4、试验方法:日常饲养时,取实施例1复合菌剂全池均匀泼洒。每五天使用一次, 每亩养殖水体用量为1〜2L,水质恶化时加倍使用。而对照组不使用菌剂。同时取实施例 1复合菌剂用适量水稀释后均匀喷洒在饲料表面,每IOOkg饲料使用1〜2L,每日拌料投喂 实验池对虾,连续投喂3天后停用2天,再连用3天。而对照组对虾投喂不加菌的饲料。
[0065] 5、试验结果:
[0066] 实施例1复合菌剂的使用效果主要体现在改善水质、控制水体弧菌数和防治对虾 病害等方面,具体为:
[0067] ( 1)改善水质,当水质老化时,泼洒复合菌剂,第二天可见水色清爽、嫩、活,使用期 间,水色较好,PH值稳定,藻类生长旺盛,未见倒藻等发生;(2)定期使用实施例1复合菌剂, 水体弧菌维持在较低水平,养殖过程基本不使用消毒剂;(3)增加摄食量,将复合菌拌饲料 投喂对虾,连续投喂3天后可见对虾肠道较粗,肠道中充满食物,活力较高;当对虾呈现病 态,出现断肠等肠炎症状时,使用实施例1复合菌剂拌料投喂2天,第三天观察可见肠道恢 复正常,摄食情况好转。养殖全程,使用实施例1复合菌剂的3 口实验池对虾基本未见病害 发生,而7 口对照池常有病害发生,使用较多的消毒剂,其中有3 口对照池因为病害严重导 致对虾大规模死亡而最终排塘。对虾最终收成时,实验池比对照池增产约1000〜1500斤 /亩。
[0068] 实施例4本发明的微生态制剂在石斑鱼育苗中的应用试验1
[0069] 1、试验产品:实施例1的复合微生态制剂菌液,总活菌数在10亿个/mL以上。
[0070] 2、试验石斑鱼:出现黑身病的石斑鱼苗,第一批鱼苗黑身病发生在4〜5cm,第二 批鱼苗黑身病发生在2〜3cm。
[0071] 3、试验场地:宁德市霞浦县某石斑鱼育苗场。
[0072] 4、试验方法:一旦少数鱼苗出现黑身病,立即将所有鱼苗等量收集在两口池子中, 其中一 口为对照组,一口为实验组。对照组的石斑鱼苗在病害期间仅进行常规池底清污、换 水等工作。实验组石斑鱼苗在病害期间在进行常规池底清污、换水等工作后,添加实施例1 复合菌剂进行浸浴处理,其中,18m 3水体菌剂用量为150ppm,使用前用适量红糖活化4h左 右,全池均匀泼洒。每2天加一次活化的菌液,每次加菌之前池底适当清污,少量换水。2天 为一个周期,连用菌剂处理6天。
[0073] 5、试验结果
[0074] 本发明复合菌剂可以有效缓解石斑鱼鱼苗"黑身"症状,极大降低"黑身"鱼苗的死 亡率,同时促进"黑身"后鱼苗的生长。使用菌剂的实验组石斑鱼苗的存活率显著高于对照 组。第一批鱼苗黑身病发生在4〜5cm左右,使用菌剂处理后鱼苗存活率在80%左右,对照 组存活率仅为30%左右。第二批鱼苗黑身病发生在2〜3cm,使用菌剂处理的鱼苗存活率在 75%左右,对照组存活率仅为30%。复合菌剂治疗后存活的鱼苗摄食正常、生长健康,未再见 其它病害发生。结果见表2。
[0075] 表 2
[0076]
Figure CN103497906BD00091
[0077] 实施例5本发明的微生态制剂在石斑鱼育苗中的应用试验2
[0078] 1、试验产品:实施例1的复合微生态制剂菌液,总活菌数在10亿个/mL以上。
[0079] 2、试验石斑鱼:21日龄正常的石斑鱼苗(体长I. 8cm左右)。
[0080] 3、试验场地:广西省北海市合浦县某石斑鱼育苗场。
[0081] 4、试验方法:育苗场共24 口池子进行石斑鱼育苗。在育苗过程中第21天鱼苗收 翅阶段选择1〜10号共10 口池子作为实验组使用实施例1的复合菌剂,其余11〜24的 14 口池子的鱼苗作为对照组。1〜10号池在养殖池吸底、排污、换水后泼洒活化了 3h的复 合益生菌50ppm,每两天使用一次菌剂。11〜24号池子作为对照池,泼洒市售EM菌。实验 期间,每日分两次观察、记录鱼苗游动能力、摄食情况、体长变化,测量盐度、PH值、透明度等 数据。从收翅到最终鱼苗分池,共计实验11天。
[0082] 5、实验结果
[0083] 实验池在养殖过程中没有出现鱼苗发病和鱼苗大量死亡的情况,鱼苗生长速度较 快,同时菌剂对于池底清污能力较强,减少换水量,水质比较稳定。而对照池养殖后期鱼苗 出现肠胃问题,鱼苗死亡量较大,生长速度较一般。结果见表3。
[0084] 表 3
[0085]
Figure CN103497906BD00101
[0086] 实施例6本发明的微生态制剂在石斑鱼育苗中的应用试验3
[0087] 1、试验产品:实施例1的复合微生态制剂菌液,总活菌数在10亿个/mL以上。
[0088] 2、试验石斑鱼:石斑鱼成鱼苗(体长5cm以上)。
[0089] 3、试验场地:广西省北海市合浦县某石斑鱼养成池。
[0090] 4、试验方法:选择2 口养成池进行石斑鱼成鱼养殖,其中一口为对照池,一口为实 验池。养殖期间,往实验池水体泼洒Ippm的复合益生菌,每5天使用一次。同时实验池石 斑鱼拌喂投加复合菌的饲料,取250mL复合菌用原池水稀释后均匀喷洒在IOkg饲料上,每 两天拌料投喂一次。
[0091] 5、实验结果:实验池石斑鱼摄食正常,健康活跃,实验期间未见任何病害发生。实 验池水质较好,藻类生长旺盛,水色稳定,未见倒藻等发生。
[0092] 结论
[0093] 实施例1的微生态制剂在促进对虾或石斑鱼生长,提高对虾或石斑鱼的免疫力和 抗病力,净化养殖水质,提高养殖质量和产量等方面具有显著效果,在水产养殖中具有重要 的应用价值。

Claims (9)

1. 一种微生态制剂,其特征在于包括: 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)lA05680 保藏编号 CCTCC NO:M 2013289; 短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)lA08151 保藏编号 CCTCC NO:M 2013291 ; 植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)lA07806 保藏编号 CCTCC NO:M 2013293; 嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)PL7 保藏编号 CCTCC N0:M 2013294; 其中,枯草芽孢杆菌含量为菌数占总菌数百分比20%〜30% ;短小芽孢杆菌含量为菌 数占总菌数百分比20%〜30%;植物乳杆菌含量为菌数占总菌数百分比20%〜30%;嗜酸 乳酸杆菌含量为菌数占总菌数百分比20 %〜30%,总量为100%。
2. 如权利要求1所述一种微生态制剂,其特征在于作为饲料添加剂或水质净化剂。
3. 如权利要求1所述一种微生态制剂,其特征在于所述微生态制剂中,枯草芽孢杆菌 发酵液、短小芽孢杆菌发酵液、植物乳杆菌发酵液和嗜酸乳杆菌发酵液均按照本领域常规 的深层液体发酵培养的方式获得,经过斜面培养、一级种子培养和发酵培养。
4. 如权利要求1所述一种微生态制剂,其特征在于所述微生态制剂的存在形式为微生 物菌体发酵液,或者微生物菌液与固体辅料的混合物。
5. 如权利要求1所述一种微生态制剂的制备方法,其特征在于其具体步骤如下: 枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌的培养:将出发菌株按斜面、液体种子、液体发酵 的顺序培养,斜面和种子培养基为常规的营养琼脂培养基或肉汤培养基;发酵培养基 配方,W/V :豆饼粉 3%,淀粉 1. 5%,玉米浆 1 %,葡萄糖 0. 5%,(NH4)2S040. 1 %,NH4C1 0• 1 %,KH2P040. 05 %,NaH2P040. 5 %,MgS040 . 05 %,MnS040 . 05 %,发酵培养条件为 28 〜 37°C,通风培养36〜48h,活菌数彡109CFU/mL ; 植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌的培养:将出发菌株按斜面、液体种子、液体发酵的顺序培 养,斜面和种子培养基为常规MRS培养基;发酵培养基配方,W/V :糖蜜3 %,红糖1 %,酵母 粉0. 6 %,蛋白胨0. 5 %,KH2P040. 2 %,CaC030. 5 %,发酵培养条件为28〜37°C,静置培养 36 〜48h,活菌数彡 109CFU/mL。
6. 如权利要求4所述一种微生态制剂的制备方法,其特征在于当所述微生态制剂的存 在形式为微生物菌液时,制备方法包括将枯草芽孢杆菌发酵液、短小芽孢杆菌发酵液、植物 乳杆菌和嗜酸乳杆菌发酵液按比例均匀混合即可; 当所述微生态制剂的存在形式为微生物菌液与固体辅料的混合物时,制备方法包括将 枯草芽孢杆菌发酵液、短小芽孢杆菌发酵液和乳酸杆菌发酵液按比例混合均匀,作为主要 活性成分,按照剂型要求,添加固体辅料制成片剂、散剂、粉剂中的一种;所述固体辅料包括 石灰石、硅藻土、沸石粉、活性碳、微量元素中的至少一种。
7. 如权利要求6所述一种微生态制剂的制备方法,其特征在于所述混合后进行浓缩处 理,并加入维生素C、低聚果糖、甘露醇中的至少一种。
8. 如权利要求1所述一种微生态制剂在制备促进对虾或石斑鱼生长,提高对虾或石斑 鱼免疫力和抗病力,防治对虾或石斑鱼病害,提高对虾或石斑鱼存活率,净化养殖水质的制 剂中的应用。
9. 如权利要求8所述应用,其特征在于所述石斑鱼病害为石斑鱼黑身病。
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