KR100490691B1 - 미생물, 이를 수득하는 방법 및 사료 첨가제 - Google Patents

미생물, 이를 수득하는 방법 및 사료 첨가제 Download PDF

Info

Publication number
KR100490691B1
KR100490691B1 KR10-2000-7007346A KR20007007346A KR100490691B1 KR 100490691 B1 KR100490691 B1 KR 100490691B1 KR 20007007346 A KR20007007346 A KR 20007007346A KR 100490691 B1 KR100490691 B1 KR 100490691B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
feed
dsm
feed additive
culture
carrier material
Prior art date
Application number
KR10-2000-7007346A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20010033799A (ko
Inventor
에바-마리아 빈더
요한 빈더
Original Assignee
에르버 악티엔게젤샤프트
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=3529940&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=KR100490691(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by 에르버 악티엔게젤샤프트 filed Critical 에르버 악티엔게젤샤프트
Publication of KR20010033799A publication Critical patent/KR20010033799A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR100490691B1 publication Critical patent/KR100490691B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/30—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for swines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Fodder In General (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 유박테륨속 미생물, 이것의 제조 방법 및 용도에 관한 것이다. 순수 배양물 DSM 11798, 및/또는 엔터로코커스 카셀리플라버스와의 혼합 배양물 DSM 11799 또는 다른 혐기성 미생물과의 혼합 배양물로서 트리코테센의 해독에 적합하다. 본 발명은 또한, 0.2kg 내지 3kg, 특히 0.5kg 내지 2.5kg의 양으로 사료중에 존재하는, 먹이 또는 동물의 소화 시스템중의 트리코테센을 불활성화시키는 사료 첨가제에 관한 것이며, 이는 미생물의 순수 및/또는 혼합 배양물(DSM 11798 또는 DSM 11799) 또는 다른 혐기성 미생물과의 혼합 배양물을 함유한다.

Description

미생물, 이를 수득하는 방법 및 사료 첨가제 {MICROORGANISM, METHOD FOR OBTAINING SAME AND FEED ADDITIVE}
본 발명은 트리코테센의 해독을 위한 순수 배양물 또는 혼합 배양물에 적합한 유박테륨속(genus Eubacterium)의 미생물, 이것의 분리 방법, 이것을 생성 및 제형화하는 방법, 이것의 용도 및 상기 미생물을 포함하는 사료 첨가제에 관한 것이다.
마이코톡신 부류에 포함되는 트리코테센은 수많은 동물 사료에 함유되어 있으며, 이는 일반적으로 곡식 또는 꼴풀에서 발견된 곰팡이 균에 의해 사료내로 유입된다. 마이코톡신, 특히 트리코테센의 동물로의 목적하지 않은 투입 결과, 동물의 다산성 및 예를 들어, 동물의 성장 둘 모두가 억제되며, 동물 건강에 해를 끼치는 것 이외에, 증가되는 사료 소모량과 동시에 빈약한 사료 이용율이 발생한다. 마이코톡신의 악영향을 제거하기 위해, 이러한 톡신을 결합시키거나 흡착시키는 수많은 방법이 이미 개발되었다.
이와 같이, 예를 들어, WO 91/13555에는 사료 첨가제 및 마이코톡신을 불활성화시키는 방법으로서, 필로실리케이트 무기물(phyllosilicate mineral) 입자를 마이코톡신의 불활성화를 위해 먹이에 첨가하는 방법이 기재되어 있다. 이러한 필로실리케이트의 효과를 증가시키기 위해, 상기 입자는 제거제로 피복되어 효과를 촉진시킨다. 사료는 예를 들어, WO 92/05706으로부터 추가로 공지되어 있으며, 여기에서 몬모릴로나이트 클레이(montmorillonite clay)가 사료 첨가제로서 함유되어 있다. 큰 내면 영역을 갖는 이러한 천연 클레이 무기물은 이들의 다공성으로 인해 표면에 마이코톡신을 결합시키고, 이러한 방식으로 이들을 부동화시킨다.
또한, 사료 첨가제가 오스트리아 실용 모델 AT-U 504에 기재되어 있으며, 여기에서는, 사료 및 동물의 위장관내 둘 모두에서 화학적으로 마이코톡신을 분해하고, 에폭시다아제 및 락토나아제를 형성시킬 수 있는 효소 제조물이 사용되었다. AT-U 504에 있어서, 이러한 효소 제조물의 작용은 제올라이트 등의 첨가에 의해 증가될 수 있다.
본 발명은 자연 산지로부터 분리된 특이적 미생물 또는 규정된 혼합 배양물을 이용하여, 조절된 방식으로 마이코톡신, 특히 트리코테센을 무해하고, 생리학적으로도 무해한, 특히 동물 번식에 무해한 물질로 생화학적 분해에 의해 전환시키는 것을 목적으로 하고 있다.
본 목적을 달성하기위해, 트리코테센을 해독시키기에 적합한 순수 배양물인 DSM 11798, 엔터로코커스 카셀리플라버스(strain Enterococcus casseliflavus)와의 혼합 배양물인 DSM 11799, 또는 다른 혐기성 미생물과의 혼합 배양물 형태의 유박테륨속 미생물을 분리하였다. 본 발명의 신규한 개선점에 따르면, 다른 혐기성 미생물 특히, 엔터로코커스, 스트렙토코커스, 락토코커스, 바실러스 또는 락토바실러스 속과의 혼합 배양물에서 상기 미생물은 트리코테센의 해독에 적합하다.
유박테륨 속과의 관계에 따라 유박테륨 종으로 불려지며, DSM 11798의 기탁명으로 독일 미생물 기탁기관(Collection of German Microorganisms)에 순수 배양물로 기탁되거나 DSM 11799의 기탁명으로 독일 미생물 기탁기관(Collection of German Microorganisms)에 엔터로코커스 카셀리플라버스와의 혼합 배양물로서 기탁된 유박테륨속 미생물은, 본 발명에 따라 특히, 데옥시니발레놀(DON)(deoxynivalenol), T-2 톡신, HT-2 톡신, 니발레놀(nivalenol), 모노아세톡시스키르페놀(monoacetoxyscirpenol), 디아세톡시스키르페놀(diacetoxyscirpenol), 트리코데르몰(trichodermol), 베루카린(verrucarin), 로로딘(rorodin), 아세틸데옥시니발레놀(acetyldeoxynivalenol), 이소트리코데르민(isotrichodermin), 히드록시이소트리코데르민(hydroxyisotrichodermin), 칼로넥트린(calonectrin), T-2 테트라올, T-2 트리올, 데아세틸네오솔라니올(deacetylneosolaniol), 네오솔라니올(neosolaniol), 아세틸네오솔라니올(acetylneosolaniol), 스포로트리키올(sporotrichiol), 트리코트리올(trichotriol), 삼부시놀(sambucinol) 및 쿨모린(culmorin)의 해독에 적합하다. 본 발명에 따른 미생물은 마이코톡신, 특히 트리코테센의 독성을 초래하는, 분자내에 함유된 에폭시드기를 환원 생체변환시켜 트리코테센을 해독한다. 하기 화학식에 상응하는 트리코테센에 있어서, 에폭시드기의 분해는 독성 12,13-에폭시 고리의 환원 분해에 의해 수행된다:
본 발명에 따른 미생물의 형태는, 바람직하게는, 개별적으로, 한쌍으로 또는 장쇄 형태로 존재하는 혐기성의 그람-파지티브 막대형 비포자형성 박테리아이며, 특히 길이는 0.1 내지 3μm이며, 특히 약 150μm 이하의 미생물인 것으로 나타났다. 본 발명에 따른 미생물의 계통발생적 분석은 특히, 하기 도시된 16S RNA 서열을 갖는다:
본 미생물의 상기 서열 테이타를 박테리아의 도메인의 주요 부분인 대표적인 미생물의 공지된 16S RNA 유전자 서열과 비교하였다. 이러한 비교 분석은, 유박테륨속의 박테리아와 가장 상응하다는 것을 보여준다. 그러나, 공지된 미생물에 충분히 상응하는 임의의 유전자 서열을 찾아내는 것은 불가능하며, 따라서, 단지 본 발명에 따른 미생물은 오늘날까지 분리되지 않고 분류되지 않은 유박테륨속내의 미생물이라는 것을 유도해낼 수 있다. 예를 들어, 발효 스펙트럼, 질산염에서 아질산염으로의 환원과 같은 생리학적 연구는 또한, 유박테륨과 관련됐음을 명백히 보여준다.
본 발명의 추가적인 목적은, DSM 11798의 상기 미생물의 순수 배양물, 및 엔터로코커스 카셀리플라버스와의 혼합 배양물 DSM 11799 또는 다른 혐기성 미생물과의 혼합 배양물 둘 모두를, 특히 목적하는 경제적 및 정량적 측면 둘 모두에서 최적화된 수득량으로 수득하는 방법을 제공하는데 있다.
이러한 목적을 달성하기 위해, 본 발명에 따른 방법은, 소과동물 반추위로부터의 엔터로코커스 카셀리플라버스와 본 미생물을 혐기성 배양 조건하에 2회 이상 연속 희석하여 배양 또는 발효시키므로써 혼합 배양물 DSM 11799를 수득하는 방식으로 수행되었다. 본 발명에 따른 혼합 배양물 및 순수 배양물 둘 모두를 수득하기 위해, 2회 이상 연속 희석시키면서 배양 및/또는 발효시키는 것이 유리한 것으로 입증되었는데, 그 이유는 이러한 방식으로 목적하는 생성물의 확실한 순도, 및 특히, 목적하지 않은 미생물로 인한 오염 또는 간섭 부산물의 제거가 달성될 수 있기 때문이다. 혐기성 조건을 유지하기 위해, 본 발명에 따른 배양 및/또는 발효는 바람직하게는, H2 및 CO2의 가스 환경하에서 수행되며, 특히 바람직하게는, H2:CO2의 비가 10:90 내지 90:10, 특히 약 80:20인 환경이 선택된다. 본 발명에 따른 미생물의 성장에 있어서, 낮은 산화환원 전위를 갖는 혐기성 조건이 중요하며, 놀랍게도 단지 H2의 존재하에서도 충분히 신속한 성장이 달성가능하다.
본 발명에 따른 미생물의 더욱 신속한 성장은, 0.2 내지 3 바아, 특히 0.5 내지 1 바아의 과압하에서 배양 및/또는 발효를 수행하므로써 달성될 수 있는데, 이는 추가의 바람직한 구체예에 상응한다. 바람직하게는, 35 내지 42℃, 특히 약 37℃의 온도에서 배양 및/또는 발효를 수행하므로써 본 발명에 따른 미생물 DSM 11798의 추가로 증진된 성장을 달성하는 것이 가능하다. 본 발명에 따른 방법에서 배양 또는 발효에 최적인 pH는 바람직하게는, 6 내지 8이며, 특히 7 내지 7.5이다. 이러한 조건하에, 가능한 짧은 시간내에 비교적 적은 횟수의 연속 희석에 의해 상기 설명된 미생물 DSM 11798의 순수 배양물 및 이것의 혼합 배양물(DSM 11799) 둘 모두를 수득하는 것이 가능하다. 최적의 결과는, 아르기닌, 시트룰린, 펩톤, 효모 추출물, 지방산 혼합물(들), 무기 용액(들), 글루코오스, 헤민 용액, 메나디온, 비타민 용액, 미량 원소 및 환원제로부터 선택된 성분을 포함하는 배지 제조물에서 배양 및/또는 발효를 수행하므로써 달성될 수 있다.
이러한 경우, 배지 제조물중에 함유된 성분은 부분적으로 교환가능하며, 예를 들어, 글루코오스를 첨가하므로써 엔터로코커스 카셀리플라버스 또는 상응하는 기타 혐기성 미생물로 혼합 배양물중에 평형 이동을 달성하는 것이 가능하며, 특이적으로 첨가된 글루코오스의 양에 좌우되는 공정을 조절하는 것이 가능하다. 본 발명의 특히 바람직한 양태에 있어서, 0.1 내지 0.5 중량%, 특히 0.2 중량%의 글루코오스는 배양 및/또는 발효 초기에 첨가된다. 0.1 내지 0.5 중량%의 글루코오스를 첨가하므로써, 엔터로코커스 카셀리플라버스의 성장은 배양 및/또는 발효 초기에 촉진되며, 이는 산화환원 전위의 하락을 유도한다. 산화환원 전위를 저하시키므로써, 본 발명에 따른 미생물의 최적 성장 조건을 창출하였으며, 이렇게 하여, 예를 들어, 배지 제조물중의 시스테인과 같은 화합물은 글루코오스의 조절된 첨가에 의해 조제될 수 있다.
본 발명에 따른 미생물 및/또는 혼합 배양물을 이용하여 마이코톡신, 특히 트리코테센의 해독 내지 다른 유리한 효과를 달성하기 위해, 활성 트리코테센-해독 미생물 및/또는 기타 혐기성 미생물의 효소 제조물이 바람직하게는, 본 발명에 따라 첨가될 수 있다.
미생물 DSM 11798의 순수 배양물을 수득하기 위해, 본 발명에 따른 방법은 바람직하게는, 미생물 DMS 11798의 순수 배양물이 배지 제조물, 특히 성장 자극제로서 L-아르기닌이 첨가된 배지 제조물의 2회 이상의 추가의 연속 희석에 의해 배양 또는 발효 용액 DSM 11799로부터 수득되도록 수행된다. 배양 또는 발효 용액으로부터 배지 제조물로의 2회의 추가의 연속 희석을 수행하므로써, 미생물 DMS 11798이 엔터로코커스 카셀리플라버스와의 혼합 배양물로부터 완전하게 순수한 형태로 수득될 수 있으며, 성장 자극제인 L-아르기닌의 첨가는 유리하게는, 미생물의 순수 배양물쪽으로 평형이 이동되게 된다. 이러한 점에 있어서, 본 발명에 따른 박테리아의 성장은 더 높은 농도의 L-아르기닌에 의해 증진된다.
배지 제조물의 산화환원 전위를 추가로 저하시키기 위해서, 바람직하게는 배지 제조물의 순수배양의 발효를 위해, 1 내지 4 중량%의 환원제, 특히 시스테인/황화나트륨/탄산나트륨 용액의 혼합물이 첨가되는 본 발명에 따른 공정이 사용된다. 특히 경제적인 이유로, 본 발명에 따라 환원제를 가능한 적게 첨가하는데, 이는 4 중량%가 넘도록 환원제의 농도가 증가하면 미생물 성장의 추가의 촉진이 유도되지 않는다는 비교 실험으로부터 알게된 것이다.
저장가능한 최종 생성물을 수득하기 위해, 본 발명에 따른 방법은, 바람직하게는, 배양 또는 발효 용액을 농축 처리, 특히 원심분리 또는 여과되고/되거나 안정화 처리, 특히 동결건조, 분무건조 또는 캡슐화하므로써 진행된다. 이 점에 있어서, 예를 들어, 배양 또는 발효 용액은 원심분리 또는 여과에 의한 액체 제거에 의해 1차 단계에서 농축되고/거나 바람직하게는, 충전제 또는 담체 물질, 예컨대, 알루미늄 실리케이트, 규조토, 탄수화물, 당 알코올, 전분, 밀크 및 유장 분말, 단백질 가수분해물, 효모 및 PVPP를 첨가하면서 발효 용액으로부터 직접적으로 안정화를 수행한다. 이러한 담체 또는 충전제의 첨가에 의해, 후속 안정화 단계, 특히 펠렛화물의 동결건조, 분무건조, 캡슐화 단계에서 고형 생성물을 수득하는 것이 가능하며, 여기에서 미생물 DSM 11798의 순수 배양물, 스트렙토코커스 카세릴프랄버스와의 혼합 배양물(DSM 11799) 또는 다른 혐기성 미생물, 특히 트리코테센의 해독에 적합한 유박테륨속, 스트렙토코커스, 락토코커스, 바실러스 또는 락토바실러스로부터 선택된 미생물과의 혼합 배양물은 담체에 직접적으로 증착되며, 그 결과 특히 용이하게 조작가능하고 저장가능하며, 대사적으로 유리한 생성물이 수득된다. 미생물 또는 이것의 혼합 배양물을, 큰 내면 영역을 갖는 물질, 예컨대, 점토질 토(argillaceous earths), 알루미늄 실리케이트, 제올라이트 등에 증착시키므로서 트리코테센의 본 발명에 따른 유도된 분해가 추가로 촉진되는데, 그 이유는 이들이 큰 내면 영역을 갖는 물질에 물리적으로 결합하면 본 발명에 따른 미생물에 의한 생화학적 공격이 명백이 촉진되기 때문이다.
본 발명에 있어서, 사료 첨가제의 생성을 위해 순수 및/또는 혼합 배양물(DSM 11798, DSM 11799) 형태의 미생물이 추가로 사용된다. 본 발명에 따른 특히 바람직한 용도는, 본질적으로, 순수 및/또는 혼합 배양물(DSM 11798 및 DSM 11799)을 필요에 따라 담체 물질이 첨가되면서 동결건조 또는 분무건조되고/거나 캡슐화되거나 펠렛화된 부동화물로서 사용한다는 것이다. 본 발명에 따른 미생물의 순수 및/또는 혼합 배양물 및 분무건조된 부동화물 둘 모두는 사료 첨가제로서 직접적으로 사용될 수 있으며, 사료 첨가제를 제조 동안 사료에 혼합시키고/거나 동물에 공급하는 동안 고체 또는 액체 형태로 사료에 혼합시키는 것이 가능하다.
트리코테센의 생리학적으로 허용가능한 물질로의 분해 또는 화학적 전환을 가능한 완전하게 달성하기 위해, 사료 또는 동물 소화관에서 트리코테센의 불활성화를 위한 본 발명에 따른 사료 첨가제는 사실상, 본 발명에 따른 미생물 또는 본 발명에 따라 제조된 미생물의 순수 및/또는 혼합 배양물을 1000kg의 사료 당 105 내지 1012 세포/kg, 특히 107 내지 109 세포/kg의 양으로 함유함을 특징으로 한다. 105 내지 1012 세포/kg, 특히 107 내지 109 세포/kg의 본 발명에 따른 미생물, 또는 상기 미생물과 엔터로코커스 카셀리플라버스 또는 트리코테센의 해독에 적합한 다른 미생물 특히, 유박테륨, 스트렙토코커스(Streptococcus), 락토코커스(Lactococcus), 바실러스(Bacillus) 또는 락토바실러스(Lactobacillus) 속과의 본 발명에 따른 혼합 배양물을 사용하므로서, 사료중의 고농도의 트리코테센, 특히 데옥시니발레놀, T-2 톡신, HT-2 톡신, 니발레놀, 모노아세톡시스키르페놀, 디아세톡시스키르페놀, 트리코데르몰, 베르루카린, 로로딘, 아세틸데옥시니발레놀, 이소트리코데르민, 히드록시이소트리코데르민, 칼로넥트린, T-2 테트라올, T-2 트리올, 데아세틸네오솔라니올, 네오솔라니올, 아세틸네오솔라니올, 스포로트리키올, 트리코트리올, 삼부시놀 및 쿨모린을 화학적으로 무해한 물질, 예컨대, 데옥시니발레놀의 데에폭시 대사물로 전환시키는 것이 가능하며, 이렇게 하여 본 발명에 따른 사료 첨가제를 사용하므로써, 동물의 다산성의 증가, 및 감소된 독성에 따른 사료 전환율의 증진이 달성될 수 있다.
본 발명에 따라 마이코톡신, 특히 트리코테센의 생화학적 분해를 추가로 촉진시키기 위해, 담체 물질 및/또는 충전제는 바람직하게는, 0.5 내지 8kg/사료 1000kg, 특히 0.7 내지 4kg/사료 1000kg의 양으로 사료 첨가제중에 추가로 함유될 수 있다. 담체 물질 및/또는 충전제의 첨가에 의해, 필요에 따라 사료중에 함유될 수 있는 분해되는 마이코톡신 및 다른 해로운 물질을 물리적으로 상기 물질에 결합시키는 것이 가능하며, 그 결과, 마이코톡신 및 다른 해로운 물질은 대사에 더 이상 이용되지 않는다.
이러한 경우, 특히 알루미늄 실리케이트, 규조토, 탄수화물, 당 알코올, 전분, 밀크 및 유장 분말, 단백질 가수분해물, 효모 및/또는 PVPP를 담체 물질 및/또는 충전제로서 사용되고, 이러한 담체 물질 및/또는 충전제는 톡신, 특히 트리코톡신의 결합에 특히 유리한 것으로 입증되었다.
특히 바람직한 사료 첨가제는 1 내지 65 중량%, 특히 5 내지 50 중량%의 미생물의 분말건조되거나 동결건조된 부동화물과 99 내지 35 중량%, 특히 95 내지 50 중량%의 담체 물질 및/또는 충전제로 구성됨을 특징으로 한다. 이러한 유형의 사료 첨가제는 특히, 사료 및 동물의 소화관중의 데옥시니발레놀(DON), T-2 톡신, HT-2 톡신, 니발레놀, 모노아세톡시스키르페놀, 디아세톡시스키르페놀, 트리코데르몰, 베르루카린, 로로딘, 아세틸데옥시-니발레놀, 이소트리코데르민, 히드록시이소트리코데르민, 칼로넥트린, T-2 테트라올, T-2 트리올, 데아세틸-네오솔라니올, 아세틸네오솔라니올, 스포로트리키올, 트리코트리올, 삼부시놀 및 쿨모린의 불활성에 적합하다.
본 발명은 본 발명에 따른 미생물의 특징, 이것의 성장 및 활성 조건, 및 본 발명에 따른 미생물의 도움으로 트리코테센의 대사 생성물의 형성에 의해 하기에 추가로 설명될 것이며, 공급 시험의 작업 실시예에 의해 설명될 것이다.
본 발명에 따른 미생물은 활성적인 트리코테센-변환 균주, 특히 데옥시니발레놀-변환 균주이며, 혐기성 배양 조건, 즉 CO2:H2 기체 환경(20/80 v/v) 및 0.5 내지 1.5 바아의 과압하에 최적화된 영양 배지에서의 반복된 배양에 의해 소과동물 반추위로부터 수득된다. PYG 및 PY 배지가 배지 제조물로서 사용되며, 이는 각각의 경우에서, 상이한 농도의 두가지의 상이한 무기질 용액, 메나디온 원액, 헤민 용액, 효모 추출물, 펩톤 및 PYG 배지에 추가적으로 첨가되는 글루코오스로 구성되어 있다. 산화환원 전위를 저하시키기 위해, 시스테인/Na2S/Na2CO3 용액으로 구성된 2 내지 4 중량%의 환원 용액이 PYG 및 PY 배지 둘 모두에 첨가되며, pH는 CO2로 기체처리되어 7 내지 7.5로 조절되었다. 이러한 배지 제조물의 도움으로 수차례 연속 희석에 의해 미생물 DSM 11798의 순수 배양물을 수득하는 것이 가능하며, 특히 PYG 배지에 의해 상기 미생물과 엔테로코커스 카셀리플라버스와의 혼합 배양물(DSM 11799)을 수득하는 것이 가능하다. 미생물의 성장은 H2의 존재하에 충분히 낮은 산화환원 전위를 갖는 극한 혐기성 조건하에서만 달성된다. 미생물의 최적 성장은 약 37℃에서 달성될 수 있으며, 그러나 35℃ 내지 38℃에서도 미생물의 적합한 성장이 달성가능하다. 미생물 DSM 11798의 순수 배양물의 배양에 있어서, 액체 배지중의 L-아르기닌은 자극 효과를 갖는다.
본 발명에 따른 미생물을 사용하므로써, 트리코테센의 독성 12,13-에폭시 고리를 환원 분해하므로써 트리코테센을 해독하는 것이 가능하다.
일반적으로 트리코테센 및 또한, 특이적인 트리코테센 데옥시니발레놀에 의한 반응 흐름도가 하기에 도시되어 있다:
발효 조건 및 이용가능한 발효 방법 둘 모두는 예를 들어, 하기에 본 발명에 따른 미생물 DSM 11798, 다른 임의의 혐기성 미생물과의 공동배양물 및 엔터로코커스 카셀리플라버스와의 혼합 배양물(DSM 11799)에서 발효에 의해 이어서 설명될 것이다.
발효 조건:
발효 온도: 35 내지 42℃, 특히 약 37℃;
발효를 위한 pH: 6 내지 8, 특히 7.0 내지 7.5;
산화환원 전위: 수행 공정에 따라 0 내지 -350mV;
기체 환경: H2/CO2 10:90 내지 90:10, 특히 80:20;
발효 압력: 0.2 내지 3 바아, 특히 0.5 내지 1 바아.
필수 배지 성분: 아르기닌, 시트룰린, 효모 추출물, 펩톤, 헤민(heamin) 및 헤민 함유 물질, 저지방산, 무기 용액, 탄산염 완충액(탄산나트륨 + CO2), 선택적으로 글루코오스, 미량 원소 용액, 비타민 용액 및 환원제.
발효 공정을 수행하는 다양한 방법은 하기로부터 선택될 수 있다:
1) 순수 배양물 DSM 11798의 배치 발효:
공정: 배지를 121℃ 및 1.5 바아에서 멸균시키거나 멸균여과시켰다. 35 내지 42℃, 특히 37℃의 발효 온도로 배지를 냉각시키면서, 멸균된 CO2 기체로 처리하고, 탄산나트륨 및 환원제를 첨가하였다. pH 6 내지 8, 특히 pH 7 내지 7.5가 될 때 까지 계속적으로 기체처리하였다. 그 후, 24 내지 48시간 동안 선배양된 1 내지 10%, 특히 5%의 접종물을 첨가하였다. 물질 농도에 따라 약 20 내지 50시간 동안 정지상이 유지되기 시작하거나, 미생물 수가 1013 내지 1016이 될 때까지 발효시켰다.
공정은 본질적으로 물질 농도에 의해 조절된다.
2) 순수 배양물 DSM 11789의 유가 발효(Fed-batch fermentation):
공정: 1)에서와 같이 배지를 멸균시키고, 완충시키고, 환원시키고 접종시켰다. 물질, 예를 들어, 아르기닌, 시트룰린을 배치식으로 또는 연속으로 첨가하므로써 바이오매스 수득량을 증가시켰다. 비교적 높은 수준으로 물질 농도를 유지시켜 지수증식 상으로 배양을 유지시켰다. 본 공정을 수행하는 이러한 방법을 사용하므로써 발효 시간은 60시간까지 가능하였다.
본 공정은 물질 첨가 및 발효 시간에 의해 조절된다(대사 최종 산물의 축적).
3) 순수 배양물 DSM 11798의 연속 발효:
공정: 1)에서와 같이 배지를 멸균시키고, 완충시키고, 환원시키고 접종시켰다. 정지상이 시작될 때까지 배치 발효시킨 후, 멸균 영양 용액을 첨가하므로써 연속 발효로 전환시켰다. 유출물을 저장 탱크에서 모으고, 배치식 또는 연속 분말건조로 처리하였다.
4) 임의의 극한 혐기성 미생물과의 공동배양물중의 순수 배양물 DSM 11798의 발효 또는 공동배양물 DSM 11799의 발효
사용될 수 있는 공동배양물의 실례:
H2 발생물 DSM 11798 + 부티르비브리오 종
DSM 11798 + 루미노코커스 종
선생물 DSM 11798 + 엔터로코커스 카셀리플라버스 = DSM 11799
DSM 11798 + 스트렙토코커스 종(엔테로코치, 락트산, 스트렙토코치, 혐기성 스트렙토코치)
DSM 11798 + 로이코노스토크 종
DSM 11798 + 페디오콕커스 종
DSM 11798 + 락토바실러스 종
DSM 11798 + 비피도박테륨 종
DSM 11798 + 바실러스 종
DSM 11798 + 메가스페라 종
효모 DSM 11798 + 사카로마이세스 종
DSM 11798 + 클리베로마이세스 종
DSM 11798 + 캔디다 종
발효에서 보조 유기물은 한편으로는, 발효의 산화환원 지수를 감소시키고, DSM 11798를 위한 수소를 생성시키고, 작업시 보호 유기물로서 작용하며, 안정화에 기여한다. DSM 11798의 미생물 수 손실의 최소화가 수행되며, 어떤 경우, 동물 생산에서 추가적인 다산성 변수로서 작용한다.
4a) 공동배양물의 배치 발효:
Ⅰ) 탄수화물 함유 배지에서 보조 유기물을 선배양하였다. 환원제는 함유하지 않으나, 본 목적을 위해 탄수화물을 추가로 함유하는 상기 설명된 배지를 사용하여 산화환원 전위를 감소시켰다. 그 후, 보조 유기물을 불활성화시키고, DSM 11798을 접종하였다.
Ⅱ) 보조 유기물 및 DSM 11798을 동시에 접종하고, 배지에 0.1 내지 1%의 탄수화물을 첨가하였다. 환원제는 함유하지 않으나 본 목적을 위해 추가적으로 탄수화물을 함유하는 상기 설명된 배지를 사용하였다. 보조 유기물의 성장이 증진되었으며, 산화환원 전위가 급격히 하락하였고, DSM 11798은 이상적인 성장 조건에 따라 성장하기 시작하였다.
Ⅲ) Ⅰ + Ⅱ의 혼합: 발효 말기에 보조 유기물의 재발효를 위해 탄수화물을 첨가하였다. 이는 작업시 보호 효과(산소)를 유도하고, 증가된 바이오매스 수득량의 이유로 안정화된다.
4b) 공동배양물의 유가 발효:
*) 4aⅠ에 상응하는 배치 단계 후, 2에 상응하는 물질(아르기닌, 시트룰린)을 연속적으로/배치식으로 첨가하였다.
**) 4aⅠ에 상응하는 배치 단계 후, 혼합 물질(아르기닌/탄수화물 또는 시트룰린/탄수화물)을 연속적으로/배치식으로 첨가하였다.
4c) 공동배양물의 연속 발효:
4aⅠ에 상응하는 배치 단계 후, 아르기닌/탄수화물 또는 시트룰린/탄수화물을 함유하는 영양 용액을 첨가하므로써 연속 발효로 전환시켰다.
발효 생성물의 처리:
1) 막 여과 공정(한외여과, 미량여과) 또는 원심분리에 의해 농축시켰다. 유기 및/또는 무기 담체 물질의 존재하에 또는 부재하에 분무건조하거나, 동결건조하였다.
2) 유기 및/또는 무기 담체 물질의 존재하에 또는 부재하에 직접 분무건조하거나 동결건조하였다.
3) 유기 및/또는 무기 담체 물질의 존재하에 또는 부재하에 발효 브로스를 연속적으로 분무 건조시켰다.
4) 1, 2 또는 3과 혼합시켜 캡슐화시키거나 펠렛화시켰다.
창자 매질중의 DON-생체변환 균주(DSM 11798)의 활성을 체크하기 위해, 돼지 창자를 사용한 실험관내 모델을 개발하였다.
이와 관련하여, 제 1 실험에서, 동결건조화물을 첨가한 완충액중의 창자 함유물을 갖는 실험관내 모델을 개발하였다.
바로 도살된 돼지의 작은 창자 및 큰 창자를 CO2 환경하에 유지시켰다. 앞쪽, 중간 및 뒷쪽의 작은 창자 및 큰 창자의 구획의 함유물을 CO2 환경하에서 개별적인 용기에 비웠다.
20ml의 혐기성 완충액 + 1g의 창자 함유물(CO2 처리됨) + DON을 CO2 또는 H2/CO2 환경하에 37℃에서 인큐베이션하였다.
활성 동결건조화물의 첨가시 작은 창자의 앞쪽 구획에서 현저한 양성 효과가 관찰될 수 있음이 알려졌다. 현저한 활성이 순수한 CO2의 처리하에서 검출될 수 있다는 것이 분명해졌다.
제 2 실험관내 실험을 활성 현탁액을 첨가하면서 돼지 창자의 완전한 단편을 사용하여 수행하였다.
돼지 창자 단편(앞쪽, 중간, 뒷쪽 큰 창자 각각 6 내지 8cm)을 혐기성의 환원되고 선인큐베이션된 완충액(30ml)중에서 DON 2ppm을 이용하여 24시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다.
이러한 변경된 실험관내 시험 변형은, 창자의 생리학적 조건에 거의 영향을 끼치지 않는다는 장점을 갖는데, 그 이유는 도살 직후, 전체 창자가 실험실로 옮겨지고, 여기서 원하는 길이의 조각이 여기에서 묶여지기 때문이다. 그 후, 조각을 분리해내고, DON 및 활성 배양물과 완충 용액에서 인큐베이팅시켰다.
결과는 명백하였다. DON 내지 DOM-1의 데에폭시화는 활성 배양물에 의해 달성될 수 있다. 이러한 활성은 창자의 모든 구획에서 입증될 수 있다는 것이 주목할 만하며, 특히 가장 높은 활성은 앞쪽 창자에서 발견되었다. 중요한 것은 음식물 흡수의 주요 부분이 되는 한, 마이코톡신 등의 방출이 이 부분에서 발생한다는 점이다.
순수 배양물(DSM 11798), 본 미생물과 엔터로코커스 카셀리플라버스의 혼합 배양물(DSM 11799) 및 다른 혐기성 미생물, 특히, 유박테륨, 스트렙토코커스, 락토코커스, 바실러스 또는 락토바실러스 속과의 혼합 배양물 둘 모두에서 본 발명에 따른 미생물의 활동이, 닭 세포 배양물에 대한 실험 프로토콜에 의해 이어서 입증될 것이며, 돼지 및 닭에 대한 급식 실시예에서 입증될 것이다.
닭 세포 배양물을 사용한 실험 프로토콜의 도움으로, 마이코톡신, 특히 트리코테센 및 특히, 데옥시니발레놀 및 T-2 톡신을 화학적으로 분해하여, 이를 감소시키고, 이를 생리학적으로 허용가능한 물질, 특히 데옥시니발레놀을 이것의 데에폭시대사물, 즉 DOM-1으로 전환시키는 것이 가능하다.
닭 림프구를 배양하기 위해, 하기 조건이 고수된다:
사용된 세포 수: 2 x 106 세포/ml
자극: ConA 5μg/ml
마이코톡신: DON, DOM-1 및 T2 톡신
농도 범위: DON: 10-0.08μg/ml
DOM-1: 232-1.81 μg/ml
T2 톡신: 30-0.234 ng/ml
총 인큐베이션 시간: 44시간, 이중 16시간 동안은 인큐베이터에서 배양하는 동안의 라벨링 시간임: 40℃, 5% CO2, 포화된 수증기 환경.
닭 림프구 세포 배양물을 사용한 실험 프로토콜의 도움으로, 활성 배양물이 마이코톡신, 특히 트리코테센을 생화학적으로 분해할 수 있으며, 특히 이들을 감소시키고, 이들을 생리학적으로 허용되는 물질로 전환시킬 수 있다는 것을 입증하였다. 이는 DON 및 이것의 데에폭시대사물 DOM-1의 실례에 의해 하기에 나타낼 것이다.
세포 배양물의 현미경 관찰:
닭 림프구를 함유하는 세포 배양물을 배양 동안 연속적으로 현미경으로 관찰하였다.
20시간 후 관찰:
비자극된 세포를 두껍고 비균일하게 분포시키고, ConA로 검사하면, 강력한 자극 및 두드러진 증식 포커스를 나타냈다.
DON: 증식 포커스는 모든 농도 단계에서 관찰되었으며, 10μg/ml 내지 0.625μg/ml의 농도에서, 톡신 농도를 증가시키면서 증식 포커스의 현저한 감소가 관찰되었다.
DOM: 모든 농도 단계에서 58μg/ml 이하의 최고 농도 단계에서의 대조군과 비교할 경우, 현저한 차이를 나타내지 않았다.
이것은 비록 20시간 후에도, 0.625μg/ml의 농도에서 톡신 배스에서 세포 활성에 대한 현저한 악영향이 존재하는 반면, 이것 자체의 데에폭시대사물로 인한 세포 배양에 대한 음성 효과는 58μg/ml의 농도에서도 관찰되지 않았다는 것을 의미한다.
28시간 및 44시간 후의 관찰:
대조군 배스(비자극된 배스 및 ConA으로 자극된 배스)는 바꾸지 않았다.
세포 배양물에 대한 DON의 활동은 추가적으로 증가하였다. 20시간 후에 관찰된 변화에 연속하여, 세포에 대한 현저한 손상이 관찰되었다.
이러한 인큐베이션 시간 후에, 58μg/ml의 데에폭시대사물의 농도에서도 세포 활성에 대한 악영향은 발견되지 않았다.
제 2 구체예에서, 젖을 뗀 새끼 돼지에 공급된 450ppb의 마이코톡신 데옥시니발레놀을 포함한 사료중의 본 발명에 다른 사료 첨가제의 활동을 조사하였다.
동물: "라지 화이트" 및 "랜드라세" 품종의 새끼 돼지를 음성 대조군, 양성 대조군 및 시험군으로 나누었다. 젖을 뗀 후 바로 실험을 시작하였다(생후 20 내지 22일된 새끼 돼지); 동물의 다산성 변수를 14일 후에 측정하였다.
먹이: 시중에서 구입가능한 새끼 돼지용 먹이를 젖을 뗀 후 7일 동안 돼지에 공급한 후, 시중에서 구입가능한 새끼 돼지 성장용 먹이를 공급하였다. 마이코톡신 데옥시니발레놀을 450ppb(에탄올중에 용해됨) 농도로 먹이의 적은 분취량과 혼합시켜, 양성 대조군 및 시험군의 먹이에 이를 유입시켰다. 먹이를 수시로 제공하였다.
사료 첨가제의 용량: 1kg/t의 사료 첨가제를 시험군의 먹이에 첨가하였다. 사용된 사료 첨가제는 본 발명에 따른 미생물과 엔터로코커스 카셀리플라버스의 혼합 배양물(DSM 11799)이며, 알루미늄 실리케이트가 담체로서 혼합 배양물에 첨가될 수 있다.
미생물 계수: 최종 사료의 4 x 108 세포/kg
결과: 결과를 표 1에 요약하였으며, 여기에 체중의 평균 성장 및 본 시험에서 평균 먹이 전환율을 나타냈으며, 음성 대조군에는 본 발명에 따른 미생물 뿐만 아니라 마이코톡신을 함유하지 않는 먹이를 공급하였으며, 양성 대조군에는 단지 마이코톡신을 포함하는 먹이를 공급하였으며, 시험군은 본 발명에 따른 미생물 및 마이코톡신을 포함하는 먹이를 공급하였다.
표 1.
음성 대조군 양성 대조군 시험군
동물 수 45 45 45
시험 기간(d) 14 14 14
체중 증가/동물/일(g) 154.0 126.2 153.2
사료 섭취량/동물/일 247 226.3 246.5
손실(총) 0 0 0
FCR 1.60 1.79 1.61
검토: 사료 첨가제가 젖을 뗀 새끼 돼지에 대한 데옥시니발레놀 오염의 악영향을 보완할 수 있으며, 마이코톡신과 사료 첨가제 둘 모두를 수용한 새끼 돼지는 음성 대조군과 사실상 동일한 양의 사료를 소모하였으며, 또한, 동일한 먹이 전환율(FCR)을 나타내었다는 것이 이 실험으로부터 분명하다. 이러한 결과는, 본 발명에 따른 혼합 배양물(DSM 11799)에 의해 데옥시니발레놀의 음성 효과를 거의 완전하게 보완할 수 있다는 것을 명백하게 해준다.
추가의 시험에서, 트리코테센으로의 오염에 대한 본 발명에 따른 사료 첨가제의 효과는 병아리 먹이에서 관찰하였다. 사용된 변수는 최종 중량, 먹이 섭취량, 먹이 전환율 및 병아리의 손실이다. 또한, 임상학적 증상을 기록하였다.
동물: Cobb 품종의 병아리를 부화된 첫 날부터 연구하였다. 10,700, 10,900 및 15,700의 병아리를 포함하는 세 군을 이용하여 시험을 수행하였다. 특이적인 병아리 먹이를 닭에 수시로 공급하였다.
사료 첨가제의 용량: 사료 첨가제는 1kg/병아리 먹이 t의 양으로 함유되어 있으며, 단지 시험군만이 사료 첨가제를 함유하였다. 사용된 사료 첨가제는 미생물(DSM 11798)의 순수 배양물이다.
미생물 수: 1kg의 최종 먹이당 1 x 109 세포
총 750ppb(500ppb의 DON 및 250ppb의 T-2 톡신)의 전체 양으로 트리코테센을 시험군 및 대조군의 사료에 첨가하였다.
결과: 하기 표는 모든 세 군의 다산성 변수를 나타낸다.
표 2.
양성 대조군 음성 대조군 시험군
동물 수 10,700 10,900 15,700
최종 평균 체중 kg 1.806 1.91 1.92
평균 사료 섭취량 kg 3.161 2.729 2.722
먹이 전환율(FCR) 1.75 1.43 1.42
손실 205(1.92%) 175(1.61%) 248(1.58%)
임상적 관찰: 양성 대조군의 많은 동물에서 현저한 경구 염증이 명백히 나타났다.
검토: 본 발명의 경우에, 사료 첨가제는 다산성 변수 및 임상적 증상에 있어서 가금류에 대한 트리코테센의 악영향을 완전히 보완할 수 있었다. 가금류의 경우에서, 마이코톡신 이외에 미생물 DSM 11798을 수용한 시험군의 닭은 음성 대조군 보다 약간 높은 최종 평균 중량 및 약간 낮은 평균 사료 섭취량을 가지며, 그 결과, 음성 대조군에 비해서 다소 개선된 다산성 변수가 유도되었다. 본 발명에 따른 미생물을 포함하는 본 발명에 따른 사료 첨가제를 이용하면, 마이코톡신에 대한 악영향을 보완할 뿐만 아니라, DSM 11798를 수용한 동물에서 추가의 다산성 증가가 달성 가능하다.

Claims (38)

  1. 삭제
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 소과동물 반추위로부터의 엔테로코커스 카셀리플라버스(Enterococcus casseliflavus)와 유박테륨(Eubacterium)속 미생물 DSM 11798의 혼합 배양물인 DSM 11799를 혐기성 조건 하에 배지 제조물 중에서 2회 이상 연속 희석시켜 배양하는 것을 포함하여, 유박테륨속 균주의 순수 배양물 DSM 11798을 포함하는 조성물을 제조하는 방법.
  8. 제 7 항에 있어서, 배양이 H2 및 CO2의 기체 환경하에서 수행됨을 특징으로 하는 방법.
  9. 제 8 항에 있어서, 기체 환경이 10:90 내지 90:10의 H2:CO2의 비로 선택됨을 특징으로 하는 방법.
  10. 제 7 항에 있어서, 배양이 0.2 내지 3 바아의 과압하에서 수행됨을 특징으로 하는 방법.
  11. 제 7 항에 있어서, 배양이 35 내지 42℃의 온도에서 수행됨을 특징으로 하는 방법.
  12. 제 7 항에 있어서, 배양이 pH 6 내지 8에서 수행됨을 특징으로 하는 방법.
  13. 제 7 항에 있어서, 배양이 아르기닌, 시트룰린, 펩톤, 효모 추출물, 지방산 혼합물(들), 무기 용액(들), 글루코오스, 헤민(haemin) 용액, 메나디온(menadione), 비타민 용액, 미량 원소, 환원제로 구성된 군으로부터 선택된 성분을 포함하는 배지 제조물 중에서 수행됨을 특징으로 하는 방법.
  14. 제 7 항에 있어서, 0.1 내지 0.5 중량%의 글루코오스가 배양의 초기에 첨가됨을 특징으로 하는 방법.
  15. 제 7 항에 있어서, 활성인 트리코테센-해독 미생물, 다른 혐기성 미생물, 또는 이들 모두의 효소 제조물이 첨가됨을 특징으로 하는 방법.
  16. 제 7 항에 있어서, 미생물 DSM 11798의 순수 배양물이 배지 제조물 중에서 2회 이상 추가 희석시킨 배양 용액으로부터 수득됨을 특징으로 하는 방법.
  17. 제 16 항에 있어서, 배지 제조물에서 순수 배양물의 발효를 위해, 1 내지 4 중량%의 환원제가 첨가됨을 특징으로 하는 방법.
  18. 제 7 항에 있어서, 배양 용액이 농축 처리 또는 안정화 처리됨을 특징으로 하는 방법.
  19. 제 18 항에 있어서, 안정화 처리가 충전제 또는 담체 물질을 첨가하여 수행됨을 특징으로 하는 방법.
  20. 제 7 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 따라 제조된 유박테륨속 균주의 순수 배양물, DSM 11798을 포함하는 조성물을 함유하는 사료 첨가제.
  21. 제 20 항에 있어서, 유박테륨속 균주의 순수 배양물, DSM 11798을 포함하는 조성물이, 담체 물질을 첨가시키거나 첨가시키지 않음으로써 동결 또는 분무건조되거나 캡슐화된 부동화물로서 사용됨을 특징으로 하는 사료 첨가제.
  22. 사료 또는 동물의 소화관중의 트리코테센을 불활성화시키기 위한 사료 첨가제로서, 사료 첨가제가 제 7 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 따라 제조된 유박테륨속 균주의 순수 배양물, DSM 11798을 포함하는 조성물을 1000kg의 사료 당 105 내지 1012 세포/kg의 양으로 함유함을 특징으로 하는 사료 첨가제.
  23. 제 22 항에 있어서, 담체 물질, 충전제, 또는 담체 물질 및 충전제를 사료 1000kg 당 0.5 내지 8kg의 양으로 추가로 함유함을 특징으로 하는 사료 첨가제.
  24. 제 23 항에 있어서, 알루미늄 실리케이트, 규조토, 탄수화물, 당 알코올, 전분, 밀크 및 유장 분말, 단백질 가수분해물, 효모 또는 PVPP가 담체 물질 또는 충전제로서 함유됨을 특징으로 하는 사료 첨가제.
  25. 제 22 항에 있어서, 사료 첨가제가 1 내지 65 중량%의 분무건조되거나 동결건조된 미생물의 부동화물과 99 내지 35 중량%의 담체 물질, 충전제, 또는 담체 물질 및 충전제의 혼합물로 구성됨을 특징으로 하는 사료 첨가제.
  26. 제 22 항에 있어서, 동물의 소화관 또는 사료중의 데옥시니발레놀(DON), T-2 톡신, HT-2 톡신, 니발레놀, 모노아세톡시스키르페놀, 디아세톡시스키르페놀, 트리코데르몰, 베르루카린, 로로딘, 아세틸데옥시니발레놀, 이소트리코데르민, 히드록시이소트리코데르민, 칼로넥트린, T-2 테트라올, T-2 트리올, 데아세틸네오솔라니올, 네오솔라니올, 아세틸네오솔라니올, 스포로트리키올, 트리코트리올, 삼부시놀 및 쿨모린을 불활성화시키기에 유용한 사료 첨가제.
  27. 제 9 항에 있어서, H2:CO2의 비가 80:20임을 특징으로 하는 방법.
  28. 제 10 항에 있어서, 과압이 0.5 내지 1바아임을 특징으로 하는 방법.
  29. 제 11 항에 있어서, 온도가 37℃임을 특징으로 하는 방법.
  30. 제 12 항에 있어서, pH가 7 내지 7.5임을 특징으로 하는 방법.
  31. 제 14 항에 있어서, 글루코오스가 0.2 중량%임을 특징으로 하는 방법.
  32. 제 16 항에 있어서, 배지 제조물이 L 아르기닌이 성장 자극제로서 첨가된 배지 제조물임을 특징으로 하는 방법.
  33. 제 17 항에 있어서, 환원제가 시스테인/황화나트륨/탄산나트륨의 혼합물 용액임을 특징으로 하는 방법.
  34. 제 18 항에 있어서, 농축 처리가 원심분리 또는 여과 처리이고, 안정화 처리가 동결건조, 분무건조 또는 캡슐화임을 특징으로 하는 방법.
  35. 제 19 항에 있어서, 충전제 또는 담체 물질이 알루미늄 실리케이트, 규조토, 탄수화물, 당 알코올, 전분, 밀크 및 유장 분말, 단백질 가수분해물, 효모, 또는 PVPP임을 특징으로 하는 방법.
  36. 제 22 항에 있어서, 조성물이 1000㎏의 사료 당 107 내지 109 세포/㎏의 양으로 함유됨을 특징으로 하는 사료 첨가제.
  37. 제 23 항에 있어서, 담체 물질, 충전제, 또는 담체 물질 및 충전제가 사료 1000㎏당 0.7 내지 4㎏의 양으로 함유됨을 특징으로 하는 사료 첨가제.
  38. 제 25 항에 있어서, 미생물의 부동화물의 양이 5 내지 50중량%이고, 담체 물질, 충전제, 또는 담체 물질 및 충전제의 양이 95 내지 50중량%임을 특징으로 하는 사료 첨가제.
KR10-2000-7007346A 1997-12-30 1998-12-21 미생물, 이를 수득하는 방법 및 사료 첨가제 KR100490691B1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ATA2204/97 1997-12-30
AT0220497A AT406166B (de) 1997-12-30 1997-12-30 Mikroorganismus, verfahren zur gewinnung desselben sowie futtermittelzusatz

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20010033799A KR20010033799A (ko) 2001-04-25
KR100490691B1 true KR100490691B1 (ko) 2005-05-19

Family

ID=3529940

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR10-2000-7007346A KR100490691B1 (ko) 1997-12-30 1998-12-21 미생물, 이를 수득하는 방법 및 사료 첨가제

Country Status (19)

Country Link
US (1) US6794175B1 (ko)
EP (1) EP1042449B1 (ko)
JP (1) JP4362603B2 (ko)
KR (1) KR100490691B1 (ko)
CN (1) CN1317384C (ko)
AT (1) AT406166B (ko)
AU (1) AU1646599A (ko)
BR (1) BR9814521B1 (ko)
CA (1) CA2317065C (ko)
DE (1) DE59812769D1 (ko)
DK (1) DK1042449T3 (ko)
ES (1) ES2242305T3 (ko)
HK (1) HK1035554A1 (ko)
HU (1) HU225391B1 (ko)
MY (1) MY127461A (ko)
PT (1) PT1042449E (ko)
SI (1) SI1042449T1 (ko)
WO (1) WO1999035240A1 (ko)
ZA (1) ZA9811816B (ko)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ515881A (en) * 2001-12-03 2004-09-24 New Zealand Dairy Board Cheese flavour ingredient and method of its production
EP1319410A1 (en) * 2001-12-11 2003-06-18 Société des Produits Nestlé S.A. Use of micro-organisms for a directed delivery of substances to specific parts of the gut
AT413540B (de) 2001-12-20 2006-03-15 Erber Ag Mikroorganismus, welcher ochratoxine sowie ochratoxine und zearalenone entgiftet, sowie verfahren und verwendung hiefür
AT501359B1 (de) * 2004-11-16 2007-10-15 Erber Ag Verfahren und mikroorganismus zur entgiftung von fumonisinen sowie verwendung und futtermittelzusatz
JP4991998B2 (ja) * 2007-03-08 2012-08-08 独立行政法人農業環境技術研究所 デオキシニバレノールを分解する新規微生物
JP4991999B2 (ja) * 2007-03-08 2012-08-08 独立行政法人農業環境技術研究所 デオキシニバレノールを分解する新規微生物
US8642317B2 (en) 2007-08-01 2014-02-04 Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Minister Of Agriculture And Agri-Food Bacterial isolate and methods for detoxification of trichothecene mycotoxins
PL2312955T3 (pl) * 2008-07-21 2016-04-29 Erber Ag Sposób traktowania kiszonki paszowej i dodatek do kiszonki paszowej
CN101792726B (zh) * 2010-03-25 2012-04-11 山东宝来利来生物工程股份有限公司 一株能够吸附霉菌毒素的粪肠球菌及其在吸附霉菌毒素中的应用
CN102960541B (zh) * 2012-11-30 2014-09-24 张有聪 一种利用白酒糟和糖蛋白生产环保型生物饲料的方法
KR101907194B1 (ko) * 2015-03-24 2018-10-16 주식회사 기술과창조 복합 미생물 종균을 이용하여 제조된 사료 첨가제 및 그 제조 방법
CA2979288C (en) * 2015-03-27 2023-03-28 Erber Aktiengesellschaft Use of a trichothecene-transforming alcohol dehydrogenase, method for transforming trichothecenes and trichothecene-transforming additive
CN105349465B (zh) * 2015-11-30 2018-09-07 广东海洋大学 一种潮间带微小杆菌及其应用
CN106036377B (zh) * 2016-08-08 2019-08-20 广东海洋大学 乳酸乳球菌（Lactococcus lactis） CAMT22361在降解T-2毒素中的应用
CN106085920B (zh) * 2016-08-08 2019-08-09 广东海洋大学 一株降解T-2毒素的乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)CAMT22361
EP3551201A4 (en) * 2016-12-06 2020-06-24 Pendulum Therapeutics, Inc. METHOD AND COMPOSITIONS RELATING TO INSULATED AND CLEANED MICROBES
EP3501526B1 (en) * 2017-12-22 2022-11-02 DSM Austria GmbH Use of coriobacteriia to promote gut health
CN108344816B (zh) * 2018-02-08 2020-10-16 中国农业大学 一种基于仿生消化评价饲料玉米赤霉烯酮降解效率的方法
WO2020025580A1 (en) 2018-07-31 2020-02-06 Erber Aktiengesellschaft Means and methods for cleavage of zearalenone
TW202122578A (zh) 2019-08-30 2021-06-16 奧地利商爾伯股份有限公司 將基質3-酮-脫氧雪腐鐮刀菌烯醇轉化爲3-epi-脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的改良多肽
CA3173395A1 (en) 2020-06-08 2021-12-16 Bernhard NEUMAYER Improved polypeptides capable of converting substrate 3-keto- deoxynivalenol into 3-epi-deoxynivalenol
EP3977863A1 (en) 2020-09-30 2022-04-06 Erber Aktiengesellschaft Means and methods to detoxify mycotoxins
CN114292828A (zh) 2020-10-08 2022-04-08 爱尔伯股份公司 具有提高的温度稳定性的四聚体α/β水解酶变体及其使用和生产方法
CA3192721A1 (en) 2020-10-22 2022-04-28 Wulf-Dieter Moll Methods and compositions for degrading deoxynivalenol
EP4384638A1 (en) 2021-08-13 2024-06-19 DSM Austria GmbH Biomarker for trichothecene toxicity

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1991013555A1 (en) 1990-03-07 1991-09-19 Engelhard Corporation Animal feed additive and method for inactivating mycotoxins present in animal feeds
US5192547A (en) 1990-10-01 1993-03-09 Engelhard Corporation Animal feed containing selected montmorillonite clay as additive and method for selecting the clay
JP2948936B2 (ja) * 1991-03-14 1999-09-13 森永製菓株式会社 フザリウム属に属するカビが産生するカビ毒の防除方法
US5478557A (en) * 1992-07-29 1995-12-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Probiotic for control of salmonella
AT504U1 (de) 1994-10-19 1995-12-27 Erber Erich Kg Futtermittelzusatz und verwendung desselben zur inaktivierung von mykotoxinen in futtermitteln bzw. im verdauungstrakt von tieren sowie verfahren zur herstellung eines futtermittels

Also Published As

Publication number Publication date
HUP0100696A2 (hu) 2001-06-28
AT406166B (de) 2000-03-27
HUP0100696A3 (en) 2003-01-28
HK1035554A1 (en) 2001-11-30
JP4362603B2 (ja) 2009-11-11
AU1646599A (en) 1999-07-26
WO1999035240A1 (de) 1999-07-15
EP1042449A1 (de) 2000-10-11
BR9814521B1 (pt) 2010-11-16
SI1042449T1 (ko) 2005-08-31
CN1317384C (zh) 2007-05-23
ES2242305T3 (es) 2005-11-01
JP2002500038A (ja) 2002-01-08
CA2317065A1 (en) 1999-07-15
MY127461A (en) 2006-12-29
HU225391B1 (en) 2006-11-28
CA2317065C (en) 2010-08-17
ATA220497A (de) 1999-07-15
DE59812769D1 (de) 2005-06-09
DK1042449T3 (da) 2005-08-01
EP1042449B1 (de) 2005-05-04
KR20010033799A (ko) 2001-04-25
CN1285869A (zh) 2001-02-28
ZA9811816B (en) 1999-07-02
US6794175B1 (en) 2004-09-21
BR9814521A (pt) 2000-10-17
PT1042449E (pt) 2005-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100490691B1 (ko) 미생물, 이를 수득하는 방법 및 사료 첨가제
CN107164269B (zh) 一种副干酪乳杆菌、制剂及其在猪饲料中的应用
CN108541805B (zh) 一种丁酸梭菌发酵废水的再利用方法及发酵物及其应用
CN106260504B (zh) 一种利用啤酒酵母泥生产微生物发酵湿饲料的方法
CN112980735B (zh) 丁酸梭菌、菌剂及它们的应用以及菌剂的制备方法
JP2019524049A (ja) バチルスサブチリスとバチルスリケニフォルミスを含む飼料添加剤、前記添加剤を含む飼料組成物及び前記飼料添加剤の製造方法
CN116083262A (zh) 有水产病原菌拮抗特性的植物乳杆菌菌株及其制剂的制备及应用
CN114921385A (zh) 一种枯草芽孢杆菌及其在饲料添加和无抗养殖中的应用
CN115176866A (zh) 一种富集纳米硒和氧化锌的微生态饲料添加剂及制备方法
JPH0691242A (ja) 有機廃棄物の処理方法
US7347997B1 (en) Method of using a feedstuff additive
KR101252134B1 (ko) 소의 성장촉진용 사료 첨가제 및 이를 이용한 축우 사료의 제조방법
Hinton Jr et al. Carbohydrate-based cocktails that decrease the population of Salmonella and Campylobacter in the crop of broiler chickens subjected to feed withdrawal
CN115299527A (zh) 降解ddgs饲料中呕吐毒素的方法及ddgs饲料
KR100426930B1 (ko) 음식물 찌꺼기의 습식발효를 위한 양돈 사료화 능력을 보유한 신규한 균주 바실러스 아밀로리키페이시엔스 비 4
KR20030013693A (ko) 사료 첨가용 미생물 제제와 그 제조방법
MXPA00006525A (en) Microorganism, method for obtaining same and feed additive
LU502113B1 (en) Method for producing micro-ecological fermented feed by using antibiotic milk
CN117106640B (zh) 一种高效降解霉菌毒素的生物制剂及其制备方法
WO2024147326A1 (ja) エビ目の生物におけるウイルス感染症に対する予防または治療用経口投与組成物
JPH043937B2 (ko)
US1599031A (en) Food product
KR20190067647A (ko) 반추동물의 부티레이트 생산능을 증대시킬 수 있는 미생물 및 이를 이용한 반추동물 사료 첨가제
CN118028161A (zh) 一株高产短链脂肪酸的黄颡鱼源丁酸梭菌b3及其应用
KR20240085962A (ko) 바실러스 리체니포미스 균주를 활용한 친환경 저분자화 단백질 사료 첨가제

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20130508

Year of fee payment: 9

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20140507

Year of fee payment: 10

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20150506

Year of fee payment: 11

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20170504

Year of fee payment: 13

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20180417

Year of fee payment: 14