JP2002045198A - 尿素窒素の測定方法及び測定用試薬 - Google Patents
尿素窒素の測定方法及び測定用試薬Info
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 ウレアーゼ拮抗阻害剤としてホウ酸又は
その塩の存在下、試料中の尿素をウレアーゼで加水分解
させ、その分解により生じるアンモニアに、α−ケトグ
ルタル酸及びニコチンアミドアデニンジヌクレオチド還
元型又はニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸
還元型の存在下、グルタミン酸脱水素酵素を作用させ、
その作用によるニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
還元型又はニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン
酸還元型の減少速度を測定する尿素窒素の測定方法にお
いて、フェニルボロン酸又はその誘導体を存在させるこ
とを特徴とする尿素窒素の測定方法。 【効果】 ウレアーゼ拮抗阻害剤としてホウ酸又はその
塩を用いる反応速度法による尿素窒素の測定において、
マンニトール等のポリオールを含む試料においても、正
確に尿素窒素濃度を測定することができる。
その塩の存在下、試料中の尿素をウレアーゼで加水分解
させ、その分解により生じるアンモニアに、α−ケトグ
ルタル酸及びニコチンアミドアデニンジヌクレオチド還
元型又はニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸
還元型の存在下、グルタミン酸脱水素酵素を作用させ、
その作用によるニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
還元型又はニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン
酸還元型の減少速度を測定する尿素窒素の測定方法にお
いて、フェニルボロン酸又はその誘導体を存在させるこ
とを特徴とする尿素窒素の測定方法。 【効果】 ウレアーゼ拮抗阻害剤としてホウ酸又はその
塩を用いる反応速度法による尿素窒素の測定において、
マンニトール等のポリオールを含む試料においても、正
確に尿素窒素濃度を測定することができる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ウレアーゼ拮抗阻
害剤としてホウ酸又はその塩を共存させ、ウレアーゼを
用いて試料中の尿素窒素を測定する方法において、試料
中に含まれるポリオールの影響がない尿素窒素の測定方
法及びそれに用いる測定用試薬に関する。
害剤としてホウ酸又はその塩を共存させ、ウレアーゼを
用いて試料中の尿素窒素を測定する方法において、試料
中に含まれるポリオールの影響がない尿素窒素の測定方
法及びそれに用いる測定用試薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】生体試料等に存在する尿素窒素量は、種
々の腎機能障害及び肝硬変等の肝実質障害時に変動する
ことが知られており、その障害度及び予後の診断に極め
て重要な指標である。この尿素窒素の測定方法として、
ウレアーゼ反応によって尿素を加水分解し、生じるアン
モニアにα−ケトグルタル酸（以下、α−ＫＧとい
う）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド還元型
（以下、ＮＡＤＨという）又はニコチンアミドアデニン
ジヌクレオチドリン酸還元型（以下、ＮＡＤＰＨとい
う）、及びグルタミン酸脱水素酵素（以下、ＧＬＤＨと
いう）を作用させ、ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨの減少量を
紫外部の吸収変化として測定する方法（以下、ウレアー
ゼ−ＧＬＤＨ法という）が知られている。
々の腎機能障害及び肝硬変等の肝実質障害時に変動する
ことが知られており、その障害度及び予後の診断に極め
て重要な指標である。この尿素窒素の測定方法として、
ウレアーゼ反応によって尿素を加水分解し、生じるアン
モニアにα−ケトグルタル酸（以下、α−ＫＧとい
う）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド還元型
（以下、ＮＡＤＨという）又はニコチンアミドアデニン
ジヌクレオチドリン酸還元型（以下、ＮＡＤＰＨとい
う）、及びグルタミン酸脱水素酵素（以下、ＧＬＤＨと
いう）を作用させ、ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨの減少量を
紫外部の吸収変化として測定する方法（以下、ウレアー
ゼ−ＧＬＤＨ法という）が知られている。
【０００３】この方法においては、正常ヒト血清中の尿
素濃度は３〜９mM（尿素窒素として８〜２５mg／dL）で
あるのに対し、ウレアーゼの尿素に対するＫｍ値は数mM
程度と小さいため、終末点法が適当であったが、ウレア
ーゼに対する拮抗阻害剤としてホウ酸又はその塩を加え
ることにより、尿素に対する見かけのＫｍ値を測定系に
おける尿素濃度より十分大きくし、反応速度法での測定
を可能とし、高濃度の尿素を測定できる尿素窒素の測定
法が提案されている（特公平3-65160号）。
素濃度は３〜９mM（尿素窒素として８〜２５mg／dL）で
あるのに対し、ウレアーゼの尿素に対するＫｍ値は数mM
程度と小さいため、終末点法が適当であったが、ウレア
ーゼに対する拮抗阻害剤としてホウ酸又はその塩を加え
ることにより、尿素に対する見かけのＫｍ値を測定系に
おける尿素濃度より十分大きくし、反応速度法での測定
を可能とし、高濃度の尿素を測定できる尿素窒素の測定
法が提案されている（特公平3-65160号）。
【０００４】しかしながら、ウレアーゼの拮抗阻害剤と
してホウ酸又はその塩を用いると、試料中にマンニトー
ル等のポリオールが存在する場合、ホウ酸がポリオール
とキレート錯体を形成し、拮抗阻害剤としてのホウ酸の
有効濃度が低下し、ウレアーゼの反応速度が増大するた
め、結果的に測定値が上昇し、正誤差を生じるという問
題があった。実際、安定化剤としてマンニトールが添加
されている試料や、脳圧降下剤、利尿剤としてマンニト
ール製剤を使用した患者の尿を試料とした場合には、マ
ンニトールによる正誤差を受ける恐れがある。
してホウ酸又はその塩を用いると、試料中にマンニトー
ル等のポリオールが存在する場合、ホウ酸がポリオール
とキレート錯体を形成し、拮抗阻害剤としてのホウ酸の
有効濃度が低下し、ウレアーゼの反応速度が増大するた
め、結果的に測定値が上昇し、正誤差を生じるという問
題があった。実際、安定化剤としてマンニトールが添加
されている試料や、脳圧降下剤、利尿剤としてマンニト
ール製剤を使用した患者の尿を試料とした場合には、マ
ンニトールによる正誤差を受ける恐れがある。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、マンニトール等のポリオール含有試料においても、
ウレアーゼ拮抗阻害剤としてホウ酸又はその塩を用いて
尿素窒素を正確に測定できる方法を提供することにあ
る。
は、マンニトール等のポリオール含有試料においても、
ウレアーゼ拮抗阻害剤としてホウ酸又はその塩を用いて
尿素窒素を正確に測定できる方法を提供することにあ
る。
【０００６】
【課題を解決するための手段】かかる実情において、本
発明者らは鋭意検討した結果、フェニルボロン酸又はそ
の誘導体を用いれば、ウレアーゼ拮抗阻害剤として用い
るホウ酸とポリオールとの錯体形成が抑えられ、ポリオ
ール含有試料においても尿素窒素を正確に測定できるこ
とを見出し、本発明を完成した。
発明者らは鋭意検討した結果、フェニルボロン酸又はそ
の誘導体を用いれば、ウレアーゼ拮抗阻害剤として用い
るホウ酸とポリオールとの錯体形成が抑えられ、ポリオ
ール含有試料においても尿素窒素を正確に測定できるこ
とを見出し、本発明を完成した。
【０００７】すなわち、本発明は、ウレアーゼ拮抗阻害
剤としてホウ酸又はその塩の存在下、試料中の尿素をウ
レアーゼで加水分解させ、その分解により生じるアンモ
ニアに、α−ケトグルタル酸及びニコチンアミドアデニ
ンジヌクレオチド還元型又はニコチンアミドアデニンジ
ヌクレオチドリン酸還元型の存在下、グルタミン酸脱水
素酵素を作用させ、その作用によるニコチンアミドアデ
ニンジヌクレオチド還元型又はニコチンアミドアデニン
ジヌクレオチドリン酸還元型の減少速度を測定する尿素
窒素の測定方法において、フェニルボロン酸又はその誘
導体を存在させることを特徴とする尿素窒素の測定方法
を提供するものである。
剤としてホウ酸又はその塩の存在下、試料中の尿素をウ
レアーゼで加水分解させ、その分解により生じるアンモ
ニアに、α−ケトグルタル酸及びニコチンアミドアデニ
ンジヌクレオチド還元型又はニコチンアミドアデニンジ
ヌクレオチドリン酸還元型の存在下、グルタミン酸脱水
素酵素を作用させ、その作用によるニコチンアミドアデ
ニンジヌクレオチド還元型又はニコチンアミドアデニン
ジヌクレオチドリン酸還元型の減少速度を測定する尿素
窒素の測定方法において、フェニルボロン酸又はその誘
導体を存在させることを特徴とする尿素窒素の測定方法
を提供するものである。
【０００８】また、本発明は、(a)α−ケトグルタル
酸、(b)ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド還元型
又はニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸還元
型、(c)グルタミン酸脱水素酵素、(d)ホウ酸又はその
塩、(e)ウレアーゼ、及び(f)フェニルボロン酸又はその
誘導体を含有する尿素窒素測定用試薬を提供するもので
ある。
酸、(b)ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド還元型
又はニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸還元
型、(c)グルタミン酸脱水素酵素、(d)ホウ酸又はその
塩、(e)ウレアーゼ、及び(f)フェニルボロン酸又はその
誘導体を含有する尿素窒素測定用試薬を提供するもので
ある。
【０００９】
【発明の実施の形態】本発明において、測定対象となる
試料としては、尿素成分を含むものであれば特に制限さ
れないが、例えば血漿、血清、尿、ずい液、腹腔液、透
析液、これらの希釈液等が挙げられる。
試料としては、尿素成分を含むものであれば特に制限さ
れないが、例えば血漿、血清、尿、ずい液、腹腔液、透
析液、これらの希釈液等が挙げられる。
【００１０】本発明で用いるフェニルボロン酸誘導体と
しては、３−アミノフェニルボロン酸、３−アセチルフ
ェニルボロン酸、４−アセチルフェニルボロン酸等が挙
げられる。フェニルボロン酸又はその誘導体としては、
フェニルボロン酸、３−アセチルフェニルボロン酸、４
−アセチルフェニルボロン酸を用いるのが好ましい。フ
ェニルボロン酸又はその誘導体の濃度は、最終濃度で
０．１〜５０mM、特に１〜３０mMであるのが好ましい。
しては、３−アミノフェニルボロン酸、３−アセチルフ
ェニルボロン酸、４−アセチルフェニルボロン酸等が挙
げられる。フェニルボロン酸又はその誘導体としては、
フェニルボロン酸、３−アセチルフェニルボロン酸、４
−アセチルフェニルボロン酸を用いるのが好ましい。フ
ェニルボロン酸又はその誘導体の濃度は、最終濃度で
０．１〜５０mM、特に１〜３０mMであるのが好ましい。
【００１１】本発明で用いるα−ＫＧ、ＮＡＤＨ又はＮ
ＡＤＰＨ、ＧＬＤＨ、ウレアーゼ、ホウ酸又はその塩の
使用濃度は、試料中のアンモニア量、測定すべき尿素量
等により異なり、適宜選択することができる。例えば、
α−ＫＧは、通常１〜３０mM、好ましくは５〜２０mMの
範囲である。ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨは、通常０．０５
〜３mM、好ましくは０．１〜１mMの範囲であり、測定時
の吸光度限界を超えない範囲で選択すれば良い。ＧＬＤ
Ｈは、牛肝臓由来、細菌由来等の何れでも良く、その由
来は特に制限されず、使用濃度は０．１〜１００単位／
mL、特に１〜２０単位／mLが好ましい。ウレアーゼは、
ナタマメ由来、細菌由来等の何れでも良く、その由来は
特に制限されず、使用濃度は１〜１００単位／mL、特に
５〜５０単位／mLが好ましい。ホウ酸又はその塩は、通
常０．１〜５００mM、好ましくは１〜１００mMである。
ホウ酸塩としては、ホウ酸ナトリウム、ホウ酸カリウム
等を用いることができる。
ＡＤＰＨ、ＧＬＤＨ、ウレアーゼ、ホウ酸又はその塩の
使用濃度は、試料中のアンモニア量、測定すべき尿素量
等により異なり、適宜選択することができる。例えば、
α−ＫＧは、通常１〜３０mM、好ましくは５〜２０mMの
範囲である。ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨは、通常０．０５
〜３mM、好ましくは０．１〜１mMの範囲であり、測定時
の吸光度限界を超えない範囲で選択すれば良い。ＧＬＤ
Ｈは、牛肝臓由来、細菌由来等の何れでも良く、その由
来は特に制限されず、使用濃度は０．１〜１００単位／
mL、特に１〜２０単位／mLが好ましい。ウレアーゼは、
ナタマメ由来、細菌由来等の何れでも良く、その由来は
特に制限されず、使用濃度は１〜１００単位／mL、特に
５〜５０単位／mLが好ましい。ホウ酸又はその塩は、通
常０．１〜５００mM、好ましくは１〜１００mMである。
ホウ酸塩としては、ホウ酸ナトリウム、ホウ酸カリウム
等を用いることができる。
【００１２】本発明において、尿素窒素測定時のｐＨ
は、通常ｐＨ６〜１０、特にｐＨ７〜１０の範囲である
のが好ましい。ｐＨの調整は、緩衝液によって行うのが
好ましく、通常用いられる緩衝液、例えばトリス緩衝
液、塩酸緩衝液、リン酸緩衝液、炭酸緩衝液、イミダゾ
ール緩衝液、ジエタノールアミン緩衝液、トリエタノー
ルアミン緩衝液、ＨＥＰＥＳやBicine等のグッド緩衝液
などを使用することができる。
は、通常ｐＨ６〜１０、特にｐＨ７〜１０の範囲である
のが好ましい。ｐＨの調整は、緩衝液によって行うのが
好ましく、通常用いられる緩衝液、例えばトリス緩衝
液、塩酸緩衝液、リン酸緩衝液、炭酸緩衝液、イミダゾ
ール緩衝液、ジエタノールアミン緩衝液、トリエタノー
ルアミン緩衝液、ＨＥＰＥＳやBicine等のグッド緩衝液
などを使用することができる。
【００１３】測定は、測定対象試料と、α−ＫＧ、ＮＡ
ＤＨ又はＮＡＤＰＨ、ＧＬＤＨ、ホウ酸又はその塩、ウ
レアーゼ、及びフェニルボロン酸又はその誘導体を混合
し、ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨの減少量を、紫外部（好ま
しくは３３０〜３５０nm）の吸収変化として測定するこ
とにより行われる。ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨの減少速度
を指標とする反応速度法であるため、測定に要する時間
は短く、かつ紫外部吸収を有する試料中の干渉物質等の
影響をほとんど受けることがない。
ＤＨ又はＮＡＤＰＨ、ＧＬＤＨ、ホウ酸又はその塩、ウ
レアーゼ、及びフェニルボロン酸又はその誘導体を混合
し、ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨの減少量を、紫外部（好ま
しくは３３０〜３５０nm）の吸収変化として測定するこ
とにより行われる。ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨの減少速度
を指標とする反応速度法であるため、測定に要する時間
は短く、かつ紫外部吸収を有する試料中の干渉物質等の
影響をほとんど受けることがない。
【００１４】本発明の尿素窒素測定用試薬は、(a)α−
ＫＧ、(b)ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨ、(c)ＧＬＤＨ、(d)
ホウ酸又はその塩、(e)ウレアーゼ、及び(f)フェニルボ
ロン酸又はその誘導体を含有するものであり、１剤式、
２剤式等のいずれの形態とすることもできる。２剤式と
する場合、フェニルボロン酸又はその誘導体、及びその
他の成分は、第一試薬と第二試薬のいずれか一方、又は
両方に配合することができる。また、２剤式とする場合
には、緩衝液、α−ＫＧ、ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨ、及
びフェニルボロン酸又はその誘導体を含有する第一試薬
と、緩衝液、α−ＫＧ、ＧＬＤＨ、ウレアーゼ、ホウ酸
又はその塩、及びフェニルボロン酸又はその誘導体を含
有する第二試薬とからなるのが好ましい。各成分の配合
量は、特に制限されないが、使用時に前記のとおりの濃
度になるよう用いるのが好ましい。
ＫＧ、(b)ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨ、(c)ＧＬＤＨ、(d)
ホウ酸又はその塩、(e)ウレアーゼ、及び(f)フェニルボ
ロン酸又はその誘導体を含有するものであり、１剤式、
２剤式等のいずれの形態とすることもできる。２剤式と
する場合、フェニルボロン酸又はその誘導体、及びその
他の成分は、第一試薬と第二試薬のいずれか一方、又は
両方に配合することができる。また、２剤式とする場合
には、緩衝液、α−ＫＧ、ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨ、及
びフェニルボロン酸又はその誘導体を含有する第一試薬
と、緩衝液、α−ＫＧ、ＧＬＤＨ、ウレアーゼ、ホウ酸
又はその塩、及びフェニルボロン酸又はその誘導体を含
有する第二試薬とからなるのが好ましい。各成分の配合
量は、特に制限されないが、使用時に前記のとおりの濃
度になるよう用いるのが好ましい。
【００１５】
【実施例】次に、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説
明するが、本発明はこれらにより何ら制限されるもので
はない。
明するが、本発明はこれらにより何ら制限されるもので
はない。
【００１６】実施例１ 第一試薬として、炭酸水素ナトリウム緩衝液 １５mM、
α−ＫＧ １０mM、ＮＡＤＰＨ ０．３３mM、及び３−
アセチルフェニルボロン酸 １０mMを含有するｐＨ１
０．３の水溶液を調製した。一方、第二試薬として、Bi
cine緩衝液 ３５０mM、α−ＫＧ １０mM、ＧＬＤＨ
６Ｕ／mL、ウレアーゼ ２２．５Ｕ／mL、ホウ酸 ５６
mM、及び３−アセチルフェニルボロン酸 １０mMを含有
するｐＨ８．１５の水溶液を調製した。
α−ＫＧ １０mM、ＮＡＤＰＨ ０．３３mM、及び３−
アセチルフェニルボロン酸 １０mMを含有するｐＨ１
０．３の水溶液を調製した。一方、第二試薬として、Bi
cine緩衝液 ３５０mM、α−ＫＧ １０mM、ＧＬＤＨ
６Ｕ／mL、ウレアーゼ ２２．５Ｕ／mL、ホウ酸 ５６
mM、及び３−アセチルフェニルボロン酸 １０mMを含有
するｐＨ８．１５の水溶液を調製した。
【００１７】実施例２ 実施例１において、３−アセチルフェニルボロン酸の代
わりにフェニルボロン酸１５mMを用いる以外は実施例１
と同様にして、第一試薬及び第二試薬を調製した。
わりにフェニルボロン酸１５mMを用いる以外は実施例１
と同様にして、第一試薬及び第二試薬を調製した。
【００１８】比較例１ 実施例１において、３−アセチルフェニルボロン酸を配
合しない以外は実施例１と同様にして、第一試薬及び第
二試薬を調製した。
合しない以外は実施例１と同様にして、第一試薬及び第
二試薬を調製した。
【００１９】試験例１ 試料として、尿素窒素濃度３３mg／dLの試料、及びマン
ニトール１重量％を含む尿素窒素濃度３３mg／dLの試料
を調製し、さらに後者を前者で希釈して、マンニトール
濃度が各々０．２、０．４、０．６、０．８重量％であ
り、かつ尿素窒素濃度３３mg／dLの試料を調製した。こ
れらの試料について、実施例１、実施例２及び比較例１
の試薬を用いて尿素窒素濃度を測定した。すなわち、こ
れら試料各６μLに第一試薬２４０μLを加え、３７℃で
５分間加温後、第二試薬６０μLを加え、波長３４０nm
における単位時間当たりの吸光度変化を、日立７１７０
形自動分析装置を用いて測定した。試料中の尿素窒素濃
度は、標準液（尿素窒素３０mg／mL）を測定することに
より、予め作成した検量線より求めた。結果を表１及び
図１に示す。
ニトール１重量％を含む尿素窒素濃度３３mg／dLの試料
を調製し、さらに後者を前者で希釈して、マンニトール
濃度が各々０．２、０．４、０．６、０．８重量％であ
り、かつ尿素窒素濃度３３mg／dLの試料を調製した。こ
れらの試料について、実施例１、実施例２及び比較例１
の試薬を用いて尿素窒素濃度を測定した。すなわち、こ
れら試料各６μLに第一試薬２４０μLを加え、３７℃で
５分間加温後、第二試薬６０μLを加え、波長３４０nm
における単位時間当たりの吸光度変化を、日立７１７０
形自動分析装置を用いて測定した。試料中の尿素窒素濃
度は、標準液（尿素窒素３０mg／mL）を測定することに
より、予め作成した検量線より求めた。結果を表１及び
図１に示す。
【００２０】
【表１】
【００２１】表１及び図１の結果より、ウレアーゼ拮抗
阻害剤としてホウ酸を用いるウレアーゼ−ＧＬＤＨ法に
おいて、３−アセチルフェニルボロン酸又はフェニルボ
ロン酸を共存させた実施例１及び実施例２では、これら
を使用しない比較例１に比べ、試料中のマンニトールの
影響を受けず、尿素窒素濃度を正確に測定することがで
きた。
阻害剤としてホウ酸を用いるウレアーゼ−ＧＬＤＨ法に
おいて、３−アセチルフェニルボロン酸又はフェニルボ
ロン酸を共存させた実施例１及び実施例２では、これら
を使用しない比較例１に比べ、試料中のマンニトールの
影響を受けず、尿素窒素濃度を正確に測定することがで
きた。
【００２２】実施例３ 第一試薬として、炭酸水素ナトリウム緩衝液 １５mM、
α−ＫＧ １０mM、ＮＡＤＰＨ ０．３３mM、及び３−
アセチルフェニルボロン酸 ２０mMを含有するｐＨ１
０．３の水溶液を調製した。一方、第二試薬として、Bi
cine緩衝液 ３５０mM、α−ＫＧ １０mM、ＧＬＤＨ
６Ｕ／mL、ウレアーゼ ２２．５Ｕ／mL、及びホウ酸
５６mMを含有するｐＨ８．１５の水溶液を調製した。
α−ＫＧ １０mM、ＮＡＤＰＨ ０．３３mM、及び３−
アセチルフェニルボロン酸 ２０mMを含有するｐＨ１
０．３の水溶液を調製した。一方、第二試薬として、Bi
cine緩衝液 ３５０mM、α−ＫＧ １０mM、ＧＬＤＨ
６Ｕ／mL、ウレアーゼ ２２．５Ｕ／mL、及びホウ酸
５６mMを含有するｐＨ８．１５の水溶液を調製した。
【００２３】実施例４ 第一試薬として、炭酸水素ナトリウム緩衝液 １５mM、
α−ＫＧ １０mM、及びＮＡＤＰＨ ０．３３mMを含有
するｐＨ１０．３の水溶液を調製した。一方、第二試薬
として、Bicine緩衝液 ３５０mM、α−ＫＧ １０mM、
ＧＬＤＨ ６Ｕ／mL、ウレアーゼ ２２．５Ｕ／mL、ホ
ウ酸 ５６mM、及び３−アセチルフェニルボロン酸 ５
０mMを含有するｐＨ８．１５の水溶液を調製した。
α−ＫＧ １０mM、及びＮＡＤＰＨ ０．３３mMを含有
するｐＨ１０．３の水溶液を調製した。一方、第二試薬
として、Bicine緩衝液 ３５０mM、α−ＫＧ １０mM、
ＧＬＤＨ ６Ｕ／mL、ウレアーゼ ２２．５Ｕ／mL、ホ
ウ酸 ５６mM、及び３−アセチルフェニルボロン酸 ５
０mMを含有するｐＨ８．１５の水溶液を調製した。
【００２４】試験例２ 試料として、尿素窒素濃度１２mg／dLの試料、及びマン
ニトール１重量％を含む尿素窒素濃度１２mg／dLの試料
を調製し、さらに後者を前者で希釈して、マンニトール
濃度が各々０．２、０．４、０．６、０．８重量％であ
り、かつ尿素窒素濃度１２mg／dLの試料を調製した。こ
れらの試料について、実施例３、実施例４及び比較例１
の試薬を用い、試験例１と同様にして尿素窒素濃度を測
定した。結果を表２及び図２に示す。
ニトール１重量％を含む尿素窒素濃度１２mg／dLの試料
を調製し、さらに後者を前者で希釈して、マンニトール
濃度が各々０．２、０．４、０．６、０．８重量％であ
り、かつ尿素窒素濃度１２mg／dLの試料を調製した。こ
れらの試料について、実施例３、実施例４及び比較例１
の試薬を用い、試験例１と同様にして尿素窒素濃度を測
定した。結果を表２及び図２に示す。
【００２５】
【表２】
【００２６】表２及び図２の結果より、ウレアーゼ拮抗
阻害剤としてホウ酸を用いるウレアーゼ−ＧＬＤＨ法に
おいて、３−アセチルフェニルボロン酸を共存させた実
施例３及び実施例４では、これを使用しない比較例１に
比べ、試料中のマンニトールの影響を受けず、尿素窒素
濃度を正確に測定することができた。
阻害剤としてホウ酸を用いるウレアーゼ−ＧＬＤＨ法に
おいて、３−アセチルフェニルボロン酸を共存させた実
施例３及び実施例４では、これを使用しない比較例１に
比べ、試料中のマンニトールの影響を受けず、尿素窒素
濃度を正確に測定することができた。
【００２７】
【発明の効果】本発明によれば、ウレアーゼ拮抗阻害剤
としてホウ酸又はその塩を用いる反応速度法による尿素
窒素の測定において、誤差を与えるマンニトール等のポ
リオールを含む試料においても、正確に尿素窒素濃度を
測定することができる。
としてホウ酸又はその塩を用いる反応速度法による尿素
窒素の測定において、誤差を与えるマンニトール等のポ
リオールを含む試料においても、正確に尿素窒素濃度を
測定することができる。
【図１】試験例１において、マンニトールによる尿素窒
素濃度測定への影響を示す図である。
素濃度測定への影響を示す図である。
【図２】試験例２において、マンニトールによる尿素窒
素濃度測定への影響を示す図である。
素濃度測定への影響を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 2G045 AA13 AA16 AA25 BB52 BB60 CA25 CB03 DA16 FA27 FB01 FB11 GC10 4B063 QA01 QA19 QQ03 QQ64 QQ87 QQ89 QR04 QR10 QR41 QR42 QR50 QS11 QS20 QS28 QS36 QX01
Claims (3)
- 【請求項１】 ウレアーゼ拮抗阻害剤としてホウ酸又は
その塩の存在下、試料中の尿素をウレアーゼで加水分解
させ、その分解により生じるアンモニアに、α−ケトグ
ルタル酸及びニコチンアミドアデニンジヌクレオチド還
元型又はニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸
還元型の存在下、グルタミン酸脱水素酵素を作用させ、
その作用によるニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
還元型又はニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン
酸還元型の減少速度を測定する尿素窒素の測定方法にお
いて、フェニルボロン酸又はその誘導体を存在させるこ
とを特徴とする尿素窒素の測定方法。 - 【請求項２】 フェニルボロン酸又はその誘導体が、フ
ェニルボロン酸、３−アセチルフェニルボロン酸又は４
−アセチルフェニルボロン酸である請求項１記載の尿素
窒素の測定方法。 - 【請求項３】 (a)α−ケトグルタル酸、(b)ニコチンア
ミドアデニンジヌクレオチド還元型又はニコチンアミド
アデニンジヌクレオチドリン酸還元型、(c)グルタミン
酸脱水素酵素、(d)ホウ酸又はその塩、(e)ウレアーゼ、
及び(f)フェニルボロン酸又はその誘導体を含有する尿
素窒素測定用試薬。
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|---|---|---|---|
| JP2000234176A JP4503151B2 (ja) | 2000-08-02 | 2000-08-02 | 尿素窒素の測定方法及び測定用試薬 |
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|---|---|
| JP (1) | JP4503151B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100430487C (zh) * | 2002-11-15 | 2008-11-05 | 江西特康科技有限公司 | 单一稳定烟酰胺辅酶液体试剂的制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59151900A (ja) * | 1983-02-18 | 1984-08-30 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | 尿素窒素の測定法 |
| JPH08163998A (ja) * | 1994-10-13 | 1996-06-25 | Kyowa Medex Co Ltd | 尿素窒素の定量方法 |
-
2000
- 2000-08-02 JP JP2000234176A patent/JP4503151B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| CN100430487C (zh) * | 2002-11-15 | 2008-11-05 | 江西特康科技有限公司 | 单一稳定烟酰胺辅酶液体试剂的制备方法 |
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