JP2002017395A - エチル−α−グルコシドの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 α−グルコシダーゼが触媒する縮合反応を利
用することにより、高収率かつ低コストにエチル−α−
グルコシドを製造することのできるエチル−α−グルコ
シドの製造方法を提供する。 【解決手段】 グルコースとエチルアルコールとの混合
溶液にα−グルコシダーゼを作用せしめ、縮合反応によ
り直接エチル−α−グルコシドを得る。また、上記α−
グルコシダーゼとして市販酵素Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ｎｉｇｅｒ由来のものまたは好熱性糸状菌Ｔｈｅｒｍ
ｏａｓｃｕｓ ａｕｒａｎｔｉａｃｕｓ由来のものを使
用する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はエチル−α−グルコ
シドの製造方法に関し、詳しくは、加水分解酵素が有す
る縮合活性（加水分解反応の逆反応を触媒する能力）を
利用し、加水分解酵素α−グルコシダーゼを用いてグル
コースとエチルアルコールを原料として直接エチル−α
−グルコシドを製造する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】エチル−α−グルコシドは、元来清酒中
に存在する非発酵性の糖質で、清酒においては独特の風
味構成に関わっており、また、調理に用いると味質の改
善など有用な効果を示す物質である。

【０００３】ここで、従来のエチル−α−グルコシドの
酵素的な製造方法としては、特公平６―３０６０８号に
清酒醸造中に進行する反応であるα−グルコシダーゼの
糖転移活性を利用して製造するものが記載されている。

【０００４】これは、例えば原料のマルトオリゴ糖にエ
チルアルコールを加え、α−グルコシダーゼの糖転移活
性を利用してエチル−α−グルコシド（α-ＥＧ）を製
造するというものである。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記の
如き従来の製造方法では、原料にマルトースやマルトオ
リゴ糖を用いる。このため、エチル−α−グルコシドの
他に副産物としてグルコース等の生成を伴い、原料基質
に対する収率はせいぜい４割程度しかないという問題点
があった。

【０００６】また、純度を上げるためにはさらに分離操
作が必要になり、コスト高になるという問題点があっ
た。

【０００７】そこで、本発明は、α−グルコシダーゼが
触媒する縮合反応を利用することにより、高収率かつ低
コストにエチル−α−グルコシドを製造することのでき
るエチル−α−グルコシドの製造方法を提供することを
目的とする。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成するにあたり、従来報告されていたα−グルコシ
ダーゼの糖転移活性ではなく、α−グルコシダーゼの縮
合反応を触媒する活性に着目し、グルコースとエチルア
ルコールから直接エチル−α−グルコシドを製造しうる
ことを見出し、本発明を完成するに至った。

【０００９】すなわち、本発明の特徴は、グルコースと
エチルアルコールとの混合溶液にα−グルコシダーゼを
作用せしめ、縮合反応によりエチル−α−グルコシドを
得ることを特徴とするエチル−α−グルコシドの製造方
法に関する。

【００１０】図１はこの場合の反応式であるが、グルコ
ースとエチルアルコールとの混合溶液にα−グルコシダ
ーゼを作用せしめ、縮合反応により直接エチル−α−グ
ルコシドを得ている。

【００１１】ところで、エチル−α−グルコシドの製造
に際しては糖質を含有するエチルアルコール溶液の調整
が不可欠である。しかし、一般にエチルアルコールに対
する糖質の溶解度は低く、エチルアルコール濃度が高く
なればなるほどその収率は高くなるが、酵素が失活して
いくという問題点を有していた。

【００１２】そこで、本発明では上記α−グルコシダー
ゼとして好熱性糸状菌Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ ａｕｒ
ａｎｔｉａｃｕｓ（サーモアスカス・アウランティアカ
ス）由来のものを使用する。このＴｈｅｒｍｏａｓｃｕ
ｓ ａｕｒａｎｔｉａｃｕｓ由来のものはエチルアルコ
ール濃度が高くても使用できる。従って、収率よくエチ
ル−α−グルコシドを製造できる。

【００１３】なお、従来、糖転移活性を利用してエチル
−α−グルコシド（α-ＥＧ）を製造するとき利用して
いた市販酵素Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ由来
のα−グルコシダーゼ（商品名： トランスグルコシダ
ーゼ「アマノ」、天野製薬株式会社製）も縮合反応に利
用できる。

【００１４】また、本発明では、上記Ｔｈｅｒｍｏａｓ
ｃｕｓ ａｕｒａｎｔｉａｃｕｓを利用してまず糖転移
活性を利用してエチル−α−グルコシド（α-ＥＧ）を
製造し、さらに、副産物として残るグルコースからも縮
合反応によりエチル−α−グルコシドを製造し、さらに
収率よくエチル−α−グルコシドを製造できる。

【００１５】なお、この場合、他の微生物由来のα−グ
ルコシダーゼも利用できる。

【００１６】例えば、上記Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ ａ
ｕｒａｎｔｉａｃｕｓに代えて上記市販酵素Ａｓｐｅｒ
ｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒを利用することもでき、両者
を併用することもできる。

【００１７】両者を併用する場合は、糖転移反応にＴｈ
ｅｒｍｏａｓｃｕｓ ａｕｒａｎｔｉａｃｕｓを使用
し、縮合反応に市販酵素Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉ
ｇｅｒを使用する場合やその逆の場合等がある。

【００１８】なお、上記Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ ａｕ
ｒａｎｔｉａｃｕｓは「Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ ａｕ
ｒａｎｔｉａｃｕｓ ＯＭ−１３」として工業技術院生
命工学工業技術研究所に受託番号「ＦＥＲＭ Ｐ−１７
９２８」として寄託してある。

【００１９】

【発明の実施の形態】本発明で用いるα−グルコシダー
ゼには、微生物由来のものを用いることが出来る。

【００２０】上記微生物としては、アスペルギルス属、
ペニシリウム属、ムコール属、リゾプス属、サーモアス
カス属のカビ、サッカロマイセス属、キャンディダ属の
酵母、バチルス属の細菌が使用できるが、好ましくはサ
ーモアスカス属由来のものである。

【００２１】また、α−グルコシダーゼとは、α−グル
コシダーゼ活性を有する上記の微生物菌体そのものの
他、菌体破砕物、または菌体抽出物、培養上清、粗酵素
および精製酵素など、何れの形態のものも含む。

【００２２】さらに、酵素の安定化や繰り返し使用を目
的として、上記微生物菌体、その破砕物もしくは抽出
物、または、粗酵素や精製酵素を担体に固定化したもの
もα−グルコシダーゼとして使用することが出来る。

【００２３】また、上記のような微生物より、α−グル
コシダーゼ遺伝子を単離し、適当な宿主微生物へ導入し
た遺伝子組換え微生物も同様に使用できる。

【００２４】

【実施例】以下、実施例により本発明を詳細に説明する
が、本発明はこれらの実施例によりなんら限定されるも
のではない。

【００２５】〔実施例１〕 Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ
ａｕｒａｎｔｉａｃｕｓ ＯＭ−１３由来α−グルコシ
ダーゼの精製 （１）Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ ａｕｒａｎｔｉａｃｕ
ｓ ＯＭ−１３の培養 培地組成：２％デンプン、０．５％ポリペプトン、０．
１％Ｋ₂ＨＰＯ₄、０．０５％ＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ４Ｌ
を含む５Ｌ容の通気撹拌培養装置中にα−グルコシダー
ゼ生産菌Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ ａｕｒａｎｔｉａｃ
ｕｓ ＯＭ−１３を植菌し、５０℃、４００ｒｐｍ、通
気量４Ｌ/ｍｉｎで９３時間振盪培養した。 （２）α−グルコシダーゼの抽出および精製 上記培養により得られた培養液より菌体を濾別し、得ら
れた培養上清を以降の酵素精製に供した。

【００２６】なお、各精製過程におけるα−グルコシダ
ーゼ画分の検出は、α−グルコシダーゼ活性を測定する
ことにより行った。

【００２７】加水分解活性の測定は、発色基質p−ニト
ロフェニル−α−グルコシド（ＰＮＰＧ）の加水分解で
遊離するp−ニトロフェノール量の比色定量（４００ｎ
ｍ）により実施し、酵素１ユニット（Ｕ）は、３７℃、
ｐＨ５で１分間に１μｍｏｌのp−ニトロフェノールを
生成する酵素量とした。

【００２８】上記で得られた菌体抽出液につき常法によ
り硫安沈殿を行った。

【００２９】培養上清に１ｍＭジチオスレイトール（Ｄ
ＴＴ）、０．２ｍＭふっ化４-（２-アミノエチル）ベン
ゼンスルホニル塩酸塩（ＡＥＢＳＦ）を添加し、これに
硫酸アンモニウムを８０％飽和になるように添加し、一
夜放置後、遠心分離（６℃、８０００ｒｐｍ、３０分）
により沈殿を回収した。この沈殿を０.２ｍＭ ＡＥＢＳ
Ｆおよび０．１ｍＭ ＤＴＴを含む１０ｍＭリン酸カリ
ウム緩衝液（ｐＨ８．０）に溶解し、透析膜を用いて脱
塩した。

【００３０】脱塩後の酵素液を、予め同組成の緩衝液で
平衡化したＤＥＡＥ−セルロファインＡ−５００カラム
（陰イオン交換樹脂、生化学工業、φ４ｃｍ×９．５ｃ
ｍ）に通して吸着させた。これを平衡化緩衝液で洗浄
後、０．５Ｍ ＮａＣｌを含む平衡化緩衝液と同緩衝液
との直線グラジエントにより溶出し、酵素の活性画分を
分取した。この活性画分に硫酸アンモニウムを８０％飽
和になるように添加し、一夜放置後、遠心分離（６℃，
１５０００ｒｐｍ，２０分）により沈殿を回収した。こ
の沈殿を０．２ｍＭ ＡＥＢＳＦおよび０．１ｍＭ ＤＴ
Ｔを含む１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．０）
を用い、透析膜を用いて脱塩した。

【００３１】脱塩後の酵素液を、予め０．２Ｍ ＮａＣ
ｌ、０．２ｍＭ ＡＥＢＳＦ、０．１ｍＭ ＤＴＴを含む
５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．０）で平衡化
したＳｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ−２００ＨＲカラム（ゲル
濾過樹脂、アマシャムファルマシアバイオテク、φ２ｃ
ｍ×１０６ｃｍ）に酵素液を重層し、０．８５ｍｌ／ｍ
ｉｎの流速にて同緩衝液により溶出し、酵素の活性画分
を分取した。

【００３２】以上の操作により精製α−グルコシダーゼ
を得た。

【００３３】〔実施例２〕 α−グルコシダーゼの縮合
反応によるエチル-α-グルコシドの生成 基質として、１０％（ｗ／ｖ）グルコース、３０％（ｖ
／ｖ）エチルアルコールの条件下で、基質グルコース１
ｇあたり１０Ｕのα-グルコシダーゼを添加し、ｐＨ
４．０、４０℃で反応させた。酵素は市販酵素トランス
グルコシダーゼ「アマノ」（天野製薬株式会社製）、お
よび、上記実施例１で調製したＴｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ
ａｕｒａｎｔｉａｃｕｓ由来精製α−グルコシダーゼ
をそれぞれ用いた。酵素１ユニットは、p-ニトロフェニ
ル-α-グルコシドを基質とし、３７℃で１分間に１μｍ
ｏｌのp-ニトロフェノールを生成する酵素量とした。

【００３４】反応開始後、経時的に生成物をＨＰＬＣに
より定量分析した。結果は図２，図３に示すとおり、市
販酵素、および、Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ ａｕｒａｎ
ｔｉａｃｕｓ ＯＭ−１３由来α−グルコシダーゼの何
れを用いても縮合反応によりエチル−α−グルコシドを
生成しうる。生成したエチル−α−グルコシドの基質に
対する収率は、反応時間１６８時間では、市販酵素では
グルコースの約３４％、Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ ａｕ
ｒａｎｔｉａｃｕｓ ＯＭ−１３由来α−グルコシダー
ゼで約２４％程度を示した。

【００３５】〔実施例３〕 高濃度エチルアルコール条
件下でのα−グルコシダーゼの縮合反応によるエチル−
α−グルコシドの生成（酵素は上記市販酵素を使用） 基質として、２０％（ｗ／ｖ）グルコース、７０％（ｖ
／ｖ）エチルアルコールの条件下で、基質グルコース１
ｇあたり１５Ｕのα−グルコシダーゼを添加し、ｐＨ
４．０、４０℃で反応させた。

【００３６】酵素は市販酵素トランスグルコシダーゼ
「アマノ」を用いた。

【００３７】反応開始後、経時的に生成物をＨＰＬＣに
より定量分析した。結果は図４に示すとおり、酵素の触
媒する縮合反応によりエチル−α−グルコシドを生成
し、反応時間１６８時間では、生成したエチル−α−グ
ルコシドの基質グルコースに対する収率は、約６２％程
度に達し、７４４時間では約７２％程度に達した。

【００３８】〔実施例４〕 高濃度エチルアルコール条
件下でのα-グルコシダーゼの縮合反応によるエチル-α
-グルコシドの生成（酵素はＴｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ
ａｕｒａｎｔｉａｃｕｓ ＯＭ−１３由来α−グルコシ
ダーゼを使用） 基質として、２０％（ｗ／ｖ）グルコース、７０％（ｖ
／ｖ）エチルアルコールの条件下で、基質グルコース１
ｇあたり１５Ｕのα−グルコシダーゼを添加し、ｐＨ
４．０、４５℃で反応させた。酵素はＴｈｅｒｍｏａｓ
ｃｕｓ ａｕｒａｎｔｉａｃｕｓ ＯＭ−１３由来α−
グルコシダーゼを用いた。

【００３９】反応開始後、経時的に生成物をＨＰＬＣに
より定量分析した。結果は図５に示すとおり、Ｔｈｅｒ
ｍｏａｓｃｕｓ ａｕｒａｎｔｉａｃｕｓ ＯＭ−１３
由来α−グルコシダーゼの触媒する縮合反応によりエチ
ル−α−グルコシドを生成し、反応時間１６８時間で
は、生成したエチル−α−グルコシドの基質グルコース
に対する収率は、約２８％程度に達し、７４４時間では
７１％に達した。

【００４０】〔実施例５〕 α−グルコシダーゼの糖転
移反応と縮合反応との組み合わせによるエチル−α−グ
ルコシドの生成 基質として、１０％（ｗ／ｖ）マルトース、６０％（ｖ
／ｖ）エチルアルコールの条件下で、基質マルトース１
ｇあたり３ＵのＴｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ ａｕｒａｎｔ
ｉａｃｕｓ ＯＭ−１３由来α−グルコシダーゼを添加
し、ｐＨ４．０、４０℃で２４時間糖転移反応させた。
反応後、この酵素反応液のエチルアルコール濃度を７０
％に調整、あるいは、エチルアルコール濃度を７０％に
調整し、さらに酵素量を投入基質１ｇあたり１５Ｕにそ
れぞれ調整後、ｐＨ４．０、４０℃で縮合反応させた。

【００４１】反応開始後、経時的に生成物をＨＰＬＣに
より定量分析した。結果は図６に示すとおり、糖転移反
応のみでは、投入基質あたりのエチル−α−グルコシド
収率は反応時間３３６時間で約３７％であったのに対
し、糖転移反応と縮合反応との組み合わせでは、反応時
間３３６時間でエチルアルコール濃度の調整のみで約４
３％、エチルアルコール濃度と酵素量との調整で約６６
％のエチル−α−グルコシド収率が得られた。

【００４２】〔実施例６〕 エチル−α−グルコシドの
同定分析 実施例２から５で製造したエチル−α−グルコシドにつ
いては、すべてＨＰＬＣおよびガスクロマトグラフィー
による同定分析を行った。特に、ＨＰＬＣにおいては、
エチルグルコシドのうち、α体、β体の両方とも同じ保
持時間に分析ピークが現れるため、厳密な分離定量分析
は不可能である。そこで、この点については事前にα
体、β体の分離分析が可能なガスクロ分析を行うことで
酵素反応生成物がすべてエチル−α−グルコシドである
ことを確認した。なお、ガスクロ分析におけるエチルグ
ルコシドのα体、β体それぞれの保持時間は、α体１
５．８分前後、β体２０分前後である。これらはエチル
グルコシドの化学合成品を用いて標品分析することによ
り確認した。

【００４３】酵素反応液に内部標準物質メチル−β−キ
シロシドを添加し、テトラヒドロほう酸ナトリウムをｐ
Ｈ９以上となるまで加え、室温で１時間以上放置した。
イオン交換樹脂（Ｈ⁺型；ダウエックス製）を用いてｐ
Ｈ４以下とし、過剰なテトラヒドロほう酸を分解した。
この上清をエバポレーターで減圧乾固し、さらに無水エ
チルアルコールで洗浄を繰り返し、ほう酸をメチルエス
テルとして留去した。ほう酸を留去後、トリメチルシリ
ルエーテル化剤（島津製作所製）を添加し、６０℃で３
０分加温しながら糖を完全に溶解し、トリメチルシリル
エーテル化を行い、上清をガスクロマトグラフィーに供
し分析を行った。分析条件は、ガスクロ分析装置：ＧＣ
−１４Ｂ（島津製作所製）、カラム：キャピラリーカラ
ムＣＢＰ１０（２５ｍ×０．２２ｍｍｉ．ｄ．；島津製
作所製）、キャリアーガス：Ｎ２５０ｍｌ／ｍｉｎ、検
出器：ＦＩＤ、カラム温度：１７０℃、検出器温度：３
００℃、注入温度：３００℃で行った。エチル−α−グ
ルコシド同定分析の一例として、実施例２における分析
結果を図７に示す。

【００４４】

【発明の効果】以上説明したように、本発明では、グル
コースとエチルアルコールよりなる原料にα−グルコシ
ダーゼを作用させ、α−グルコシダーゼの触媒する縮合
反応によりエチル−α−グルコシドを生成するようにし
たので、効率的にエチル−α−グルコシドを製造するこ
とができる。

【００４５】また、上記α−グルコシダーゼとして好熱
性糸状菌Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕｓａｕｒａｎｔｉａｃｕ
ｓ由来のものの場合、高濃度エチルアルコールを使用し
たときのエチル−α−グルコシドの収率を顕著に向上さ
せることができる。

【００４６】また、マルトースまたはマルトオリゴ糖類
とエチルアルコールよりなる原料に好熱性糸状菌Ｔｈｅ
ｒｍｏａｓｃｕｓ ａｕｒａｎｔｉａｃｕｓ由来のα−
グルコシダーゼを作用させ、α−グルコシダーゼの触媒
する糖転移反応によりエチル−α−グルコシドとグルコ
ースを生成する第１の工程と、上記第１の工程で生成さ
れたグルコースとエチルアルコールよりなる原料に好熱
性糸状菌Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ ａｕｒａｎｔｉａｃ
ｕｓ由来のα−グルコシダーゼを作用させ、α−グルコ
シダーゼの触媒する縮合反応によりエチル−α−グルコ
シドを生成する第２の工程と、を有するようにしたの
で、より効率的なエチル−α−グルコシド製造を行うこ
とが期待できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】グルコースとエチルアルコールとの混合溶液に
α−グルコシダーゼを作用せしめ、縮合反応により直接
エチル−α−グルコシドを得ている場合の説明図。

【図２】実施例２における市販酵素の縮合反応を利用し
たエチル−α−グルコシド生産反応におけるエチル−α
−グルコシドとグルコースの経時的変化を示す図。

【図３】実施例２におけるＴｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ ａ
ｕｒａｎｔｉａｃｕｓ ＯＭ−１３由来α−グルコシダ
ーゼの縮合反応を利用したエチル−α−グルコシド生産
反応におけるエチル−α−グルコシドとグルコースの経
時的変化を示す図。

【図４】実施例３における高濃度エチルアルコール条件
下での市販酵素の縮合反応を利用したエチル−α−グル
コシド生産反応におけるエチル−α−グルコシドとグル
コースの経時的変化を示す図。

【図５】実施例４における高濃度エチルアルコール条件
下でのＴｈｅｒｍｏａｓｃｕｓａｕｒａｎｔｉａｃｕｓ
ＯＭ−１３由来α−グルコシダーゼの縮合反応を利用
したエチル−α−グルコシド生産反応におけるエチル−
α−グルコシドとグルコースの経時的変化を示す図。

【図６】実施例５におけるＴｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ ａ
ｕｒａｎｔｉａｃｕｓ ＯＭ−１３由来α−グルコシダ
ーゼの糖転移反応と縮合反応とを組み合わせて実施した
エチル−α−グルコシド生産反応におけるエチル−α−
グルコシドの経時的変化を示す図。

【図７】実施例６におけるエチル−α−グルコシドの同
定分析結果を示す図。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｒ 1:645） Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 松川 直美 広島県福山市箕沖町95番地７ 池田食研株 式会社内 (72)発明者 古谷 祐治 広島県福山市箕沖町95番地７ 池田食研株 式会社内 Ｆターム(参考） 4B050 DD03 LL05 4B064 AF41 CA21 CB30 CD06 CD09 DA10

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 グルコースとエチルアルコールよりなる
   原料にα−グルコシダーゼを作用させ、α−グルコシダ
   ーゼの触媒する縮合反応によりエチル−α−グルコシド
   を生成することを特徴とするエチル−α−グルコシドの
   製造方法。
2. 【請求項２】 上記α−グルコシダーゼが微生物由来で
   あることを特徴とする請求項１に記載のエチル−α−グ
   ルコシドの製造方法。
3. 【請求項３】 上記α−グルコシダーゼがＡｓｐｅｒｇ
   ｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ由来であることを特徴とする請
   求項１に記載のエチル−α−グルコシドの製造方法。
4. 【請求項４】 上記α−グルコシダーゼが好熱性糸状菌
   Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ ａｕｒａｎｔｉａｃｕｓ由来
   であることを特徴とする請求項１に記載のエチル−α−
   グルコシドの製造方法。
5. 【請求項５】 マルトースまたはマルトオリゴ糖類とエ
   チルアルコールよりなる原料にα−グルコシダーゼを作
   用させ、α−グルコシダーゼの触媒する糖転移反応によ
   りエチル−α−グルコシドを生成することを特徴とする
   エチル−α−グルコシドの製造方法において、上記α−
   グルコシダーゼが好熱性糸状菌Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕｓ
   ａｕｒａｎｔｉａｃｕｓ由来であることを特徴とする
   エチル−α−グルコシドの製造方法。
6. 【請求項６】 マルトースまたはマルトオリゴ糖類とエ
   チルアルコールよりなる原料に微生物由来のα−グルコ
   シダーゼを作用させ、α−グルコシダーゼの触媒する糖
   転移反応によりエチル−α−グルコシドとグルコースを
   生成する第１の工程と、 上記第１の工程で生成されたグルコースとエチルアルコ
   ールよりなる原料にさらに微生物由来のα−グルコシダ
   ーゼを作用させ、α−グルコシダーゼの触媒する縮合反
   応によりエチル−α−グルコシドを生成する第２の工程
   と、 を有することを特徴とするエチル−α−グルコシドの製
   造方法。
7. 【請求項７】 マルトースまたはマルトオリゴ糖類とエ
   チルアルコールよりなる原料に好熱性糸状菌Ｔｈｅｒｍ
   ｏａｓｃｕｓ ａｕｒａｎｔｉａｃｕｓ由来のα−グル
   コシダーゼを作用させ、α−グルコシダーゼの触媒する
   糖転移反応によりエチル−α−グルコシドとグルコース
   を生成する第１の工程と、 上記第１の工程で生成されたグルコースとエチルアルコ
   ールよりなる原料にさらに好熱性糸状菌Ｔｈｅｒｍｏａ
   ｓｃｕｓ ａｕｒａｎｔｉａｃｕｓ由来のα−グルコシ
   ダーゼを作用させ、α−グルコシダーゼの触媒する縮合
   反応によりエチル−α−グルコシドを生成する第２の工
   程と、 を有することを特徴とするエチル−α−グルコシドの製
   造方法。
8. 【請求項８】 マルトースまたはマルトオリゴ糖類とエ
   チルアルコールよりなる原料に市販酵素Ａｓｐｅｒｇｉ
   ｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ由来のα−グルコシダーゼを作用
   させ、α−グルコシダーゼの触媒する糖転移反応により
   エチル−α−グルコシドとグルコースを生成する第１の
   工程と、 上記第１の工程で生成されたグルコースとエチルアルコ
   ールよりなる原料に好熱性糸状菌Ｔｈｅｒｍｏａｓｃｕ
   ｓ ａｕｒａｎｔｉａｃｕｓ由来のα−グルコシダーゼ
   を作用させ、α−グルコシダーゼの触媒する縮合反応に
   よりエチル−α−グルコシドを生成する第２の工程と、 を有することを特徴とするエチル−α−グルコシドの製
   造方法。
9. 【請求項９】 マルトースまたはマルトオリゴ糖類とエ
   チルアルコールよりなる原料に好熱性糸状菌Ｔｈｅｒｍ
   ｏａｓｃｕｓ ａｕｒａｎｔｉａｃｕｓ由来のα−グル
   コシダーゼを作用させ、α−グルコシダーゼの触媒する
   糖転移反応によりエチル−α−グルコシドとグルコース
   を生成する第１の工程と、 上記第１の工程で生成されたグルコースとエチルアルコ
   ールよりなる原料に市販酵素Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
   ｎｉｇｅｒ由来のα−グルコシダーゼを作用させ、α−
   グルコシダーゼの触媒する縮合反応によりエチル−α−
   グルコシドを生成する第２の工程と、 を有することを特徴とするエチル−α−グルコシドの製
   造方法。
10. 【請求項１０】 マルトースまたはマルトオリゴ糖類と
    エチルアルコールよりなる原料に市販酵素Ａｓｐｅｒｇ
    ｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ由来のα−グルコシダーゼを作
    用させ、α−グルコシダーゼの触媒する糖転移反応によ
    りエチル−α−グルコシドとグルコースを生成する第１
    の工程と、 上記第１の工程で生成されたグルコースとエチルアルコ
    ールよりなる原料にさらに市販酵素Ａｓｐｅｒｇｉｌｌ
    ｕｓ ｎｉｇｅｒ由来のα−グルコシダーゼを作用さ
    せ、α−グルコシダーゼの触媒する縮合反応によりエチ
    ル−α−グルコシドを生成する第２の工程と、 を有することを特徴とするエチル−α−グルコシドの製
    造方法。