JPS59113896A - ピロロキノリンキノンの製造方法 - Google Patents
ピロロキノリンキノンの製造方法Info
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- JPS59113896A JPS59113896A JP57220328A JP22032882A JPS59113896A JP S59113896 A JPS59113896 A JP S59113896A JP 57220328 A JP57220328 A JP 57220328A JP 22032882 A JP22032882 A JP 22032882A JP S59113896 A JPS59113896 A JP S59113896A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は細胞を用いて下記化学構造式（１＞のピロロキ
ノリンキノン（以下ＰＱＱと略称）を製造する方法に関
する。
ノリンキノン（以下ＰＱＱと略称）を製造する方法に関
する。
以下余白
０
ＰＱＱはキノ酵素のアポ型酵素をポロ化して酵素を活性
化する能力を有し、メタノール資化性細菌のメタノール
脱水素酵素、酢酸菌Φアルコール脱水素酵素、アルデヒ
ド脱水素酵素又はグルコース脱水素酵素などの補酵素と
して機能しているほか、動物、植物及び微生物起源のア
ミン酸化酵素及びアミン脱水素酵素又は一部のアミノ酸
ラセマーゼの補酵素として、生理学的に重要な機能を有
する物質である。更に他の酸化還元酵素や転位酵素の補
酵素、例えばチアミンピロリン酸、ニコチンアミドアデ
ニンジヌクレオチド、ニコチンアミドアデニンジヌクレ
オチドホスフェート、ピリドキサールホスフェート、フ
ラビンアデニンジヌクレオチド、フラヒンモノヌクレオ
チドなどは、それぞれ、ビタミンＢｌ、ニコチン酸、ビ
タミンＢ６゜ビタミン８２などの型で摂取することが必
須である。これと同様に、ＰＱＱは重要な酵素反応の補
酵素となって機能していることがら未同定ではあるがＰ
ＱＱもビタミン作用を有するきわめて重要な物質である
といえる。いずれにせよ、ＰＱＱは補酵素として酵素反
応又は物質代謝系を活性化するものであり、医薬品とし
て重要な役割を果す物質である。
化する能力を有し、メタノール資化性細菌のメタノール
脱水素酵素、酢酸菌Φアルコール脱水素酵素、アルデヒ
ド脱水素酵素又はグルコース脱水素酵素などの補酵素と
して機能しているほか、動物、植物及び微生物起源のア
ミン酸化酵素及びアミン脱水素酵素又は一部のアミノ酸
ラセマーゼの補酵素として、生理学的に重要な機能を有
する物質である。更に他の酸化還元酵素や転位酵素の補
酵素、例えばチアミンピロリン酸、ニコチンアミドアデ
ニンジヌクレオチド、ニコチンアミドアデニンジヌクレ
オチドホスフェート、ピリドキサールホスフェート、フ
ラビンアデニンジヌクレオチド、フラヒンモノヌクレオ
チドなどは、それぞれ、ビタミンＢｌ、ニコチン酸、ビ
タミンＢ６゜ビタミン８２などの型で摂取することが必
須である。これと同様に、ＰＱＱは重要な酵素反応の補
酵素となって機能していることがら未同定ではあるがＰ
ＱＱもビタミン作用を有するきわめて重要な物質である
といえる。いずれにせよ、ＰＱＱは補酵素として酵素反
応又は物質代謝系を活性化するものであり、医薬品とし
て重要な役割を果す物質である。
従来、ＰＱＱの製造法としては有機化学的合成法が知ら
れている〔例えばＪＡＣ５，，１０３１，５５９９〜５
６００頁（１９８１）参照〕。しかしながら、有機化学
的合成法には、合成反応が多段階から成るために製造に
時間を要し、異性体をはじめとする副生物の除去のため
に煩雑な操作を必要とし、またＰＱＱの収率も低いとい
う問題があった。
れている〔例えばＪＡＣ５，，１０３１，５５９９〜５
６００頁（１９８１）参照〕。しかしながら、有機化学
的合成法には、合成反応が多段階から成るために製造に
時間を要し、異性体をはじめとする副生物の除去のため
に煩雑な操作を必要とし、またＰＱＱの収率も低いとい
う問題があった。
本発明者らはががる従来のＰＱＱの合成法の問題点を排
除し、高純度のＰＱＱを簡単な操作で短時間かつ高収率
で経済的に製造できる方法を開発すべく鋭意研究をすす
めた結果、細胞、特に微生物を培養することによりＰＱ
Ｑを大量かつ経済的に供給することができることを見出
し、本発明をするに至った。
除し、高純度のＰＱＱを簡単な操作で短時間かつ高収率
で経済的に製造できる方法を開発すべく鋭意研究をすす
めた結果、細胞、特に微生物を培養することによりＰＱ
Ｑを大量かつ経済的に供給することができることを見出
し、本発明をするに至った。
すなわち、本発明に従ったＰＱＱの製造方法は、グルコ
ノバクタ−属、アセトバクター属、ミクロコツカス属、
シュードモナス属、コリネバクテリウム属、エシェリヒ
ア属、サルシナ属、セラチア属、エルビニア属、クレブ
シラ属、アシネトバクタ−属、ハイボミクロビウム属、
メチロコツカス属、ラクトバチルス属、ストレプトコツ
カス属、サツカロミセス属、カンシタ属、アスペルギル
ス属、ペニシリウム属、フザリウム属及びストレプトミ
セス属の少なくとも一つに属するピロロキノリンキノン
生産能を有する微生物を栄養培地中で培養して培養物中
にピロロキノリンキノンを生成せしめ、これを採取する
ことがら成る。
ノバクタ−属、アセトバクター属、ミクロコツカス属、
シュードモナス属、コリネバクテリウム属、エシェリヒ
ア属、サルシナ属、セラチア属、エルビニア属、クレブ
シラ属、アシネトバクタ−属、ハイボミクロビウム属、
メチロコツカス属、ラクトバチルス属、ストレプトコツ
カス属、サツカロミセス属、カンシタ属、アスペルギル
ス属、ペニシリウム属、フザリウム属及びストレプトミ
セス属の少なくとも一つに属するピロロキノリンキノン
生産能を有する微生物を栄養培地中で培養して培養物中
にピロロキノリンキノンを生成せしめ、これを採取する
ことがら成る。
ＰＱＱの製造方法として細胞、特に微生物の細胞を培養
してその培養液中にＰＱＱ（及びその類縁化合物）を生
成蓄積せしめ、これを例えば抽出によって採取する方法
は本発明方法が最初であり、かかる方法によりＰＱＱの
大量供給が可能となり、例えばＰＱＱの医薬用としての
開発と利用に太きく貢献することができる。なお、ＰＱ
Ｑと同時に仕度される可能性のあるＰＱＱの類縁化合物
としでは、例えば下記式（ＩＩ）のフェナンスロリンジ
オンが考えられる。
してその培養液中にＰＱＱ（及びその類縁化合物）を生
成蓄積せしめ、これを例えば抽出によって採取する方法
は本発明方法が最初であり、かかる方法によりＰＱＱの
大量供給が可能となり、例えばＰＱＱの医薬用としての
開発と利用に太きく貢献することができる。なお、ＰＱ
Ｑと同時に仕度される可能性のあるＰＱＱの類縁化合物
としでは、例えば下記式（ＩＩ）のフェナンスロリンジ
オンが考えられる。
１
（上記式において、Ｒ，＝ Ｒ３＝ ＣＯＯＣＨ，、Ｒ
２−＝−Ｒ４＝Ｈｉ Ｒ１＝Ｒ３＝’Ｈ＋ Ｒ２＝Ｒ４
＝ＣＯＯＣＨ３；又はＲ１＝Ｒ４＝Ｈ，Ｒ２＝Ｃ０Ｏｑ
２Ｈ５−、’Ｒ３＝ＣＯＯＣＨ３）本発明方法において
使用することのできるＰＱＱ生産能を有する微生物とし
ては、グルコノバクタ−属（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅ
ｒ １ｎｄｕｓＬｒｉｕｓ ＩＦＯ３２６０＋Ｇｌｕｃ
ｏｎｏｂａｃｔｅｒ ５ｕｂｏｘｙｄａｎｓ ＩＦＯ１
２５２Ｂ） 、アセトバクター属（Ａｃｅｔｏｂａｃｔ
ｅｒ ａｃｅｔｉ ＩＦＯ３２８４＋八、ｃｅｔｏｂａ
ｃｔｅｒ ａｓｃｅｎｄｅｎｓ ＩＦＯ３２９９） 、
ミクロコツカス属（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｒｏｓｅ
ｕｓ ＩＦＯ３７６４）−、シュードモナス属（Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ ＩＦＯ３
０８１、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ＡＭＩ ＮＣＩＢ
９１３３ ） 、コリネバクテリウム属（Ｃｏｒｙｎｅ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｅｐｅｄｏｎｉｃｕｍ ＩＦＯ
１３７６３） 、エシェリヒア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈ
ｉａ ｃｏｌｉＫ−１２１ＦＯ３３０１） 、サルシナ
属（Ｓａｒｃｉｎａ ＩｕｔｅａＩＦＯ１２７０Ｂ ）
、セラチア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅ
ｎｓＩＦＯ３０４６） 、エルビニア属（Ｅｒｗｉｎｉ
ａ ｌ＋ｅｒｂｉｃｏｌａＩＦＯ１２６８６） 、クレ
ブシラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏ−ｎｉ
ａｅ ＩＦＯ３３１７） 、アシネトバクタ−属（＾ｃ
ｉｎｅｔｏ−’ｂａｃｔｅｒ ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃ
ｕｓ ＩＰＯ１２５５２） 、ハイボミクロビウム属（
ｌｌｙｐｈｏｍｉｃｒｏｂｉｕｍ ｎｅｐｔｕｎｉｕｍ
ＡＴＣＣ１５４４４） 、メチロコツカス属（Ｍｅｔ
ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｃａｐｓｕｌａｔｕｓ ＡＴＣＣ
１９０６９）等に属するバクテリア、ラクト六チルス属
（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ＩＦＯ３
４２５） 、ストレプトコツカス属（Ｓ ｔｒｅｐ ｔ
ｏｃｏｃｃｕ’５ｆａｅｃａｌｉｓ ＩＦＯ３１８１）
、サツカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ＡにＵ ４１００ ＞ 、カン
シタ属（Ｃａｎｄｉｄａ ｕｔｉｌｉｓ ＡＫＵ ４５
７０ ） 、アスペルキルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓ ｏｒｙｚａｅ ＡＫＬＩ ３３０１ ） 、ペニシ
リウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅ
ｎｕｍ ＴｈｏｍＡＫＵ ３４０７） 、フザリウム属
（Ｆｕｓａｒｔｕｍ ｃｕｌｍｏｒｕｍＡＫＵ ３７０
６） 、ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓａｌｂｕｓ ＡＫＵ ２２０１）等の属に属する乳酸
菌、酵母、糸状菌、放線菌及び不完全菌に属す微生物が
あげられる。その他、タバコをはじめとする植物カルス
、は乳動物の白血球細胞や肝細胞などの細胞もＰＱＱの
生産能を有する。
２−＝−Ｒ４＝Ｈｉ Ｒ１＝Ｒ３＝’Ｈ＋ Ｒ２＝Ｒ４
＝ＣＯＯＣＨ３；又はＲ１＝Ｒ４＝Ｈ，Ｒ２＝Ｃ０Ｏｑ
２Ｈ５−、’Ｒ３＝ＣＯＯＣＨ３）本発明方法において
使用することのできるＰＱＱ生産能を有する微生物とし
ては、グルコノバクタ−属（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅ
ｒ １ｎｄｕｓＬｒｉｕｓ ＩＦＯ３２６０＋Ｇｌｕｃ
ｏｎｏｂａｃｔｅｒ ５ｕｂｏｘｙｄａｎｓ ＩＦＯ１
２５２Ｂ） 、アセトバクター属（Ａｃｅｔｏｂａｃｔ
ｅｒ ａｃｅｔｉ ＩＦＯ３２８４＋八、ｃｅｔｏｂａ
ｃｔｅｒ ａｓｃｅｎｄｅｎｓ ＩＦＯ３２９９） 、
ミクロコツカス属（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｒｏｓｅ
ｕｓ ＩＦＯ３７６４）−、シュードモナス属（Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ ＩＦＯ３
０８１、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ＡＭＩ ＮＣＩＢ
９１３３ ） 、コリネバクテリウム属（Ｃｏｒｙｎｅ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｅｐｅｄｏｎｉｃｕｍ ＩＦＯ
１３７６３） 、エシェリヒア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈ
ｉａ ｃｏｌｉＫ−１２１ＦＯ３３０１） 、サルシナ
属（Ｓａｒｃｉｎａ ＩｕｔｅａＩＦＯ１２７０Ｂ ）
、セラチア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅ
ｎｓＩＦＯ３０４６） 、エルビニア属（Ｅｒｗｉｎｉ
ａ ｌ＋ｅｒｂｉｃｏｌａＩＦＯ１２６８６） 、クレ
ブシラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏ−ｎｉ
ａｅ ＩＦＯ３３１７） 、アシネトバクタ−属（＾ｃ
ｉｎｅｔｏ−’ｂａｃｔｅｒ ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃ
ｕｓ ＩＰＯ１２５５２） 、ハイボミクロビウム属（
ｌｌｙｐｈｏｍｉｃｒｏｂｉｕｍ ｎｅｐｔｕｎｉｕｍ
ＡＴＣＣ１５４４４） 、メチロコツカス属（Ｍｅｔ
ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｃａｐｓｕｌａｔｕｓ ＡＴＣＣ
１９０６９）等に属するバクテリア、ラクト六チルス属
（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ＩＦＯ３
４２５） 、ストレプトコツカス属（Ｓ ｔｒｅｐ ｔ
ｏｃｏｃｃｕ’５ｆａｅｃａｌｉｓ ＩＦＯ３１８１）
、サツカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ＡにＵ ４１００ ＞ 、カン
シタ属（Ｃａｎｄｉｄａ ｕｔｉｌｉｓ ＡＫＵ ４５
７０ ） 、アスペルキルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓ ｏｒｙｚａｅ ＡＫＬＩ ３３０１ ） 、ペニシ
リウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅ
ｎｕｍ ＴｈｏｍＡＫＵ ３４０７） 、フザリウム属
（Ｆｕｓａｒｔｕｍ ｃｕｌｍｏｒｕｍＡＫＵ ３７０
６） 、ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓａｌｂｕｓ ＡＫＵ ２２０１）等の属に属する乳酸
菌、酵母、糸状菌、放線菌及び不完全菌に属す微生物が
あげられる。その他、タバコをはじめとする植物カルス
、は乳動物の白血球細胞や肝細胞などの細胞もＰＱＱの
生産能を有する。
本発明方法において使用することのできる培地としては
、前記微生物などが培養により増殖し得るものであれば
任意のものでよく、例えばグリセロール、マニトールな
どの糖アルコール類、クルコース、フルクトースなどの
還元糖類、蔗糖、マルトースなどの三糖類や炭水化物の
加水分解物のほか、廃糖蜜、亜硫酸パルプ廃液および酢
酸、グルコン酸なとの糖酸が利用できる。例えばシュー
ドモナスＡＭＩ ＮＧＩＢ ９１３３やメチロコソ力ス
ギャプシュレータス＾ＴＣＣ１９０６９などのようなメ
タノール資化性菌の場合には、メタノール、メチルアミ
ン及びメタンなどを炭素源とすることができる。
、前記微生物などが培養により増殖し得るものであれば
任意のものでよく、例えばグリセロール、マニトールな
どの糖アルコール類、クルコース、フルクトースなどの
還元糖類、蔗糖、マルトースなどの三糖類や炭水化物の
加水分解物のほか、廃糖蜜、亜硫酸パルプ廃液および酢
酸、グルコン酸なとの糖酸が利用できる。例えばシュー
ドモナスＡＭＩ ＮＧＩＢ ９１３３やメチロコソ力ス
ギャプシュレータス＾ＴＣＣ１９０６９などのようなメ
タノール資化性菌の場合には、メタノール、メチルアミ
ン及びメタンなどを炭素源とすることができる。
窒素源としては、アミノ酸、核酸類のほかに蛋白質加水
分解物、酵母エキス、コーンステイープリカーのような
有機態のものや、アンモニウム塩、硝酸塩などの無機態
のものを使用することができる。
分解物、酵母エキス、コーンステイープリカーのような
有機態のものや、アンモニウム塩、硝酸塩などの無機態
のものを使用することができる。
本発明方法は、前記したように、糖質を原料として直接
発酵法により培養液中にＰＱＱを生成蓄積させる方法の
他に、別途に培養して調製した微生物細胞の洗浄細胞懸
濁液にＰＱＱ生合成の前駆体となりうる化合物、すなわ
ぢ、グリセロール、マニトール、フルクトース、グルコ
ースなどの糖質とグルタミン酸、アスパラギン酸、アラ
ニンなどのアミノ酸の混合物を加えて反応させ、反応液
中に生成するＰＱＱを取得することもできる。
発酵法により培養液中にＰＱＱを生成蓄積させる方法の
他に、別途に培養して調製した微生物細胞の洗浄細胞懸
濁液にＰＱＱ生合成の前駆体となりうる化合物、すなわ
ぢ、グリセロール、マニトール、フルクトース、グルコ
ースなどの糖質とグルタミン酸、アスパラギン酸、アラ
ニンなどのアミノ酸の混合物を加えて反応させ、反応液
中に生成するＰＱＱを取得することもできる。
本発明方法における培養は好気的条件下に、例えば通気
攪拌や往復振盪方法によって培養することができる。培
養条件は、特に限定はないが、一般的に言えば、温度０
〜４０℃、ｐＨ２〜９及び２０〜１００時間程度の条件
で実施する。
攪拌や往復振盪方法によって培養することができる。培
養条件は、特に限定はないが、一般的に言えば、温度０
〜４０℃、ｐＨ２〜９及び２０〜１００時間程度の条件
で実施する。
培養液又は培養物からのＰＱＱの採取方法は慣用方法に
従って行うことができる。例えば、イオン交換クロマト
グラフィー、濃縮物のゲル濾過法、凍結乾燥物の溶媒抽
出法あるいはアフィニイティクロマトグラフィーなどが
利用できる。
従って行うことができる。例えば、イオン交換クロマト
グラフィー、濃縮物のゲル濾過法、凍結乾燥物の溶媒抽
出法あるいはアフィニイティクロマトグラフィーなどが
利用できる。
ＰＱＱの補酵素活性の検定と、培養液中の生成物の濃度
の検定は、次のようにして行うことができる。キノ酵素
のアポ酵素の調製には、発明者らがすでに発表した方法
（ＦＢＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ、 １３０巻、１７９〜１
８３頁、１９８１年）において使用したシュードモナス
・エルギノサＩＦＯ３４４５のＤ−グルコース脱水素酵
素活性欠損変異株を用いることができる。本菌株はＰＱ
Ｑ生成能を欠くが、その細胞膜中には通常のレベルのア
ポＤ−グルコース脱水素酵素を生成蓄積している。この
ような変異株より調製した細胞膜画分にＰＱＱ（及び類
縁化合物）を含む培養液、反応液あるいは菌体抽出液を
加えることによって、アポ酵素はホロ化され、Ｄ−グル
コース脱水素酵素活性が発現する。発現する酵素活性の
強度が、添加されたＰＱＱの量に比例関係を示すＰＱＱ
の濃度域を、化学合成したＰＱＱを用いて測定し検量線
を作成することによって、培養液等の試料中に含まれる
ＰＱＱ量を求める（第１図、検量線）。ＰＱＱを定量す
ることは、ＰＱＱを補酵素とする他の種類のキノ酵素か
らアポ酵素を調製し、これにＰＱＱを添加することによ
って酵素を活性化することで同様に行うことができる。
の検定は、次のようにして行うことができる。キノ酵素
のアポ酵素の調製には、発明者らがすでに発表した方法
（ＦＢＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ、 １３０巻、１７９〜１
８３頁、１９８１年）において使用したシュードモナス
・エルギノサＩＦＯ３４４５のＤ−グルコース脱水素酵
素活性欠損変異株を用いることができる。本菌株はＰＱ
Ｑ生成能を欠くが、その細胞膜中には通常のレベルのア
ポＤ−グルコース脱水素酵素を生成蓄積している。この
ような変異株より調製した細胞膜画分にＰＱＱ（及び類
縁化合物）を含む培養液、反応液あるいは菌体抽出液を
加えることによって、アポ酵素はホロ化され、Ｄ−グル
コース脱水素酵素活性が発現する。発現する酵素活性の
強度が、添加されたＰＱＱの量に比例関係を示すＰＱＱ
の濃度域を、化学合成したＰＱＱを用いて測定し検量線
を作成することによって、培養液等の試料中に含まれる
ＰＱＱ量を求める（第１図、検量線）。ＰＱＱを定量す
ることは、ＰＱＱを補酵素とする他の種類のキノ酵素か
らアポ酵素を調製し、これにＰＱＱを添加することによ
って酵素を活性化することで同様に行うことができる。
また、ＰＱＱの定量は高速液体クロマ１−グラフィーに
よっても行うことができる。
よっても行うことができる。
以下に本発明の詳細な説明するが、本発明の範囲をこれ
らの実施例に限定するものでないことばいうまでもない
。
らの実施例に限定するものでないことばいうまでもない
。
実施例１
５００ ｍ １２容三角フラスコに、グリセロール０．
４％、グルタミン酸ナトリウム０．６％、Ｋ２ＨＰＯ４
０，０５％、Ｋ Ｈ２Ｐ ０４０．０５％、Ｍ ｇ Ｓ
ｏ４・７Ｈ２００，０２％、Ｆ ｅ ＳＯ４・７ Ｈ
２Ｏ０，ＯＯ１％、ＮａＣ１ｏ、ｏｏｉ％、Ｍ ｎ Ｓ
０４・４ Ｈ２Ｏ０，００１％、チアミン塩酸０．０
０００４％、ニコチン酸ｏ、 ｏ ｏ （ｌ 。
４％、グルタミン酸ナトリウム０．６％、Ｋ２ＨＰＯ４
０，０５％、Ｋ Ｈ２Ｐ ０４０．０５％、Ｍ ｇ Ｓ
ｏ４・７Ｈ２００，０２％、Ｆ ｅ ＳＯ４・７ Ｈ
２Ｏ０，ＯＯ１％、ＮａＣ１ｏ、ｏｏｉ％、Ｍ ｎ Ｓ
０４・４ Ｈ２Ｏ０，００１％、チアミン塩酸０．０
０００４％、ニコチン酸ｏ、 ｏ ｏ （ｌ 。
４％、パントテン酸カルシウム０．００００４％、バラ
アミノ安息香酸ｏ、ｏｏｏｏｉ％を含む培地１００ｍ１
を加え、これにグルコノバクタ−・インダストリウスＩ
Ｆ０３２６０を接種して、１００〜１２０ ｒｐｍで振
盪し乍ら通気培養した。
アミノ安息香酸ｏ、ｏｏｏｏｉ％を含む培地１００ｍ１
を加え、これにグルコノバクタ−・インダストリウスＩ
Ｆ０３２６０を接種して、１００〜１２０ ｒｐｍで振
盪し乍ら通気培養した。
第２図はその培養経過を示したもので、菌の生育が対数
増殖期末期から定常期初期にあたる時期に培養液中のＰ
ＱＱの蓄積が最高になることを示している。第２図は、
培養中の培養液の一部を無菌的にとり出し、遠心分離し
て菌体を除去して得られる上ｌ青０．１ ｍ １２を３
３マイクログラムのアポＤ−グルコース脱水素酵素を含
む細胞膜両分に加え、室温で３０分放置して酵素をホロ
化させたのち、発現した酵素活性の強度から培養液中の
ＰＱＱ濃度を算出してグラフに示したものであり、菌の
生育は６００ ｎｍでの吸光度で表示した。
増殖期末期から定常期初期にあたる時期に培養液中のＰ
ＱＱの蓄積が最高になることを示している。第２図は、
培養中の培養液の一部を無菌的にとり出し、遠心分離し
て菌体を除去して得られる上ｌ青０．１ ｍ １２を３
３マイクログラムのアポＤ−グルコース脱水素酵素を含
む細胞膜両分に加え、室温で３０分放置して酵素をホロ
化させたのち、発現した酵素活性の強度から培養液中の
ＰＱＱ濃度を算出してグラフに示したものであり、菌の
生育は６００ ｎｍでの吸光度で表示した。
酵素活性を求めるために、予めホロ化した上記の酵素液
（０，１１ｍ１！、）に５０ｍＭ）リスヒドロキシアミ
ノメタン−塩酸緩衝液、ｐＨ８，７５にアジ化ナトリウ
ムを２４ｍＭ含むもの１ｍｊ２．６．７ ｍＭ、２゜６
−シクロロフエノールインドフエノール０．０４ｍ１．
６ｍＭフェナジンメトスルフェート０．２ ｍ １２を
加え、反応液全量を水で２．９ ｍ （ｌとし、２５°
Ｃで６００ ｎｍの吸光度変化を調べ、同様に調製した
盲検との間で吸光度に増減が生じないことを確認した。
（０，１１ｍ１！、）に５０ｍＭ）リスヒドロキシアミ
ノメタン−塩酸緩衝液、ｐＨ８，７５にアジ化ナトリウ
ムを２４ｍＭ含むもの１ｍｊ２．６．７ ｍＭ、２゜６
−シクロロフエノールインドフエノール０．０４ｍ１．
６ｍＭフェナジンメトスルフェート０．２ ｍ １２を
加え、反応液全量を水で２．９ ｍ （ｌとし、２５°
Ｃで６００ ｎｍの吸光度変化を調べ、同様に調製した
盲検との間で吸光度に増減が生じないことを確認した。
次いで８ｍＭアジ化ナトリウムを含む１Ｍグルコースを
一方のキュベツトにＱ、 ｌ ｍ ＩＩ加え、その時点
以降の吸光度変化をレコーダーで記録した。
一方のキュベツトにＱ、 ｌ ｍ ＩＩ加え、その時点
以降の吸光度変化をレコーダーで記録した。
ホロ化の程度及びホロ酵素の濃度と２．６−シクロロフ
エノールインドフエノールの退色とがよい相関を示す。
エノールインドフエノールの退色とがよい相関を示す。
化学合成されたＰＱＱを用いて、同様の操作によって得
た第１図の検量線から各試料中のＰＱＱ濃度を算出した
。ＰＱＱが最高に生成される時点で培養を停止し、菌体
を除去して得られる培養液をアンバーリストＡ−２１カ
ラム（オルガノ■製）に吸着さゼ、０．３５ＭＮａＣｌ
を含む５０％メタノールによって不純物を溶出させたの
ち、飽和ＮａＣ１を含む５０％メタノールによって溶出
されてくる両分にＰＱＱが含まれていた。
た第１図の検量線から各試料中のＰＱＱ濃度を算出した
。ＰＱＱが最高に生成される時点で培養を停止し、菌体
を除去して得られる培養液をアンバーリストＡ−２１カ
ラム（オルガノ■製）に吸着さゼ、０．３５ＭＮａＣｌ
を含む５０％メタノールによって不純物を溶出させたの
ち、飽和ＮａＣ１を含む５０％メタノールによって溶出
されてくる両分にＰＱＱが含まれていた。
得られたＰＱＱ画分を下記条件で液体クロマトグラフィ
ー分析を行ったところ、化学合成されたＰＱＱと両者は
ピークの保持時間（１３分）が一致していた。
ー分析を行ったところ、化学合成されたＰＱＱと両者は
ピークの保持時間（１３分）が一致していた。
機 器：日本分光製高速液体クロマトグラフ、トライロ
ーター カラム：ＨＷ−４Ｏ３（）ヨパール） ｌ容８’ｌ／夜：水−アセトニトリル（１： １）検出
器： ＵＶ （２５４ｎｍ） 流速： １．Ｑ ｎ＋ ＩＩ ／ ｍｉｎ次に、ＰＱＱ
画分から大量分取して、ＰＱＱを単離し、ＰＱＱ５．２
μｇを得た。
ーター カラム：ＨＷ−４Ｏ３（）ヨパール） ｌ容８’ｌ／夜：水−アセトニトリル（１： １）検出
器： ＵＶ （２５４ｎｍ） 流速： １．Ｑ ｎ＋ ＩＩ ／ ｍｉｎ次に、ＰＱＱ
画分から大量分取して、ＰＱＱを単離し、ＰＱＱ５．２
μｇを得た。
実施例２
シュードモナスＡＭＩ ＮＣ■Ｂ９１３３をメタノー
ル０．４％、硫安ｏ、 ｉ％、ＫＨ２ＰＯ４０，１５％
、Ｋ２ＨＰＯ４０，１５％、Ｍ ｇ Ｓ ｏ４・７Ｈ２
００．００３％を含む培地で３０℃で６０〜９０時間実
施例１と同様にして通気かくはん培養した。この間、メ
タノールを０．１％ずつ２４時間ことに補充して培養を
行った。６０〜７２時間の培養でＰＱＱの生成蓄積は２
〜３ｘｌＯＭに達した。ＰＱＱ濃度の検定法及びＰＱＱ
の単離法は実施例１と同様に行った。得られたＰＱＱは
８μｇであった。
ル０．４％、硫安ｏ、 ｉ％、ＫＨ２ＰＯ４０，１５％
、Ｋ２ＨＰＯ４０，１５％、Ｍ ｇ Ｓ ｏ４・７Ｈ２
００．００３％を含む培地で３０℃で６０〜９０時間実
施例１と同様にして通気かくはん培養した。この間、メ
タノールを０．１％ずつ２４時間ことに補充して培養を
行った。６０〜７２時間の培養でＰＱＱの生成蓄積は２
〜３ｘｌＯＭに達した。ＰＱＱ濃度の検定法及びＰＱＱ
の単離法は実施例１と同様に行った。得られたＰＱＱは
８μｇであった。
シュードモナスＡＭＩ ＮＣＩＢ９１３３を用いて、
実施例１に示した培地と同組成の培地を用いてＰＱＱの
生成を行わせて場合も７０〜１００時間の培養で２〜３
Ｘ１０ＭのＰＱＱ濃度に達した。
実施例１に示した培地と同組成の培地を用いてＰＱＱの
生成を行わせて場合も７０〜１００時間の培養で２〜３
Ｘ１０ＭのＰＱＱ濃度に達した。
実施例３
微生物による物質生産がフィートバンク調節されること
はしばしば見られることであるが、ＰＱＱ生成もその例
外ではない。フィードハック調節による制御を受けずに
ＰＱＱを生成させた例を以下に示す。
はしばしば見られることであるが、ＰＱＱ生成もその例
外ではない。フィードハック調節による制御を受けずに
ＰＱＱを生成させた例を以下に示す。
実施例１に示した培地と同組成の培地に菌株（グルコノ
バクタ−・インダストリウス ＩＦＯ３２６０、アセト
バクター・アセチＩＦＯ３２８４、シュードモナスＡＭ
Ｉ ＮＣＩＢ９１３３などのうちｌ菌株）を接種して
３０°Ｃで通気かくはん培養を行った。この際、陰イオ
ン性イオン交換樹脂（アンバーリス）Ａ−２１）を透析
チューブに入れてあらかじめ滅菌しておいたものを培養
フラスコの中へ入れた。培地１００ｍβ当り１ｇのイオ
ン交換樹脂を加えた。細胞によって培養液中に生成され
るＰＱＱは透析膜を通してイオン交換樹脂に吸着される
ため、培養液中のＰＱＱｉ度はイオン交換樹脂を添加し
ないで培養した場合の培＃液と比較すると、培地中のＰ
ＱＱａ度は１０分の１以下に保たれていた。イオン交換
樹脂を添加しなかった培養では培養液中のＰＱＱ濃度が
著しく減少する定常期末期（約１００時間口）まで培養
を続けたのち、透析膜をとり出し、封入されていたイオ
ン交換樹脂からＰＱＱの溶出を行った。
バクタ−・インダストリウス ＩＦＯ３２６０、アセト
バクター・アセチＩＦＯ３２８４、シュードモナスＡＭ
Ｉ ＮＣＩＢ９１３３などのうちｌ菌株）を接種して
３０°Ｃで通気かくはん培養を行った。この際、陰イオ
ン性イオン交換樹脂（アンバーリス）Ａ−２１）を透析
チューブに入れてあらかじめ滅菌しておいたものを培養
フラスコの中へ入れた。培地１００ｍβ当り１ｇのイオ
ン交換樹脂を加えた。細胞によって培養液中に生成され
るＰＱＱは透析膜を通してイオン交換樹脂に吸着される
ため、培養液中のＰＱＱｉ度はイオン交換樹脂を添加し
ないで培養した場合の培＃液と比較すると、培地中のＰ
ＱＱａ度は１０分の１以下に保たれていた。イオン交換
樹脂を添加しなかった培養では培養液中のＰＱＱ濃度が
著しく減少する定常期末期（約１００時間口）まで培養
を続けたのち、透析膜をとり出し、封入されていたイオ
ン交換樹脂からＰＱＱの溶出を行った。
得られたＰＱＱは１５〜２０μｇであった。
実施例４
グルコノバクタ−・サブオキシダンスＩＦＯ１２５２８
を実施例１に示した培地と同組成の培地を用いてＰＱＱ
の生成を行わせた。その結果、 ′３０ 時間（７）
培養”ｒ １． ＯＸ １０９Ｍ（７） Ｐ Ｑ Ｑ濃
度？Ｚ達した。
を実施例１に示した培地と同組成の培地を用いてＰＱＱ
の生成を行わせた。その結果、 ′３０ 時間（７）
培養”ｒ １． ＯＸ １０９Ｍ（７） Ｐ Ｑ Ｑ濃
度？Ｚ達した。
実施例５
アセトバクター・アセチＩＦＯ３２８４を実施例１に示
した培地と同組成の培地を用いてＰＱＱの生成を行わせ
た。その結果、３０時間の培養で１、ＯＸＩＯＭのＰＱ
Ｑ濃度に達した。
した培地と同組成の培地を用いてＰＱＱの生成を行わせ
た。その結果、３０時間の培養で１、ＯＸＩＯＭのＰＱ
Ｑ濃度に達した。
実施例６
アセトハクター・アセンデンス１ＦＯ３２９９を実施例
１に示した培地と同組成の培地を用いてＰＱＱの生成を
行わせた。その結果、３０時間の培養で５．２Ｘ１０Ｍ
のＰＱＱ濃度に達した。
１に示した培地と同組成の培地を用いてＰＱＱの生成を
行わせた。その結果、３０時間の培養で５．２Ｘ１０Ｍ
のＰＱＱ濃度に達した。
実施例７
５０Ｊ容培養タンクに、実施例１で用いたのと同一の組
成の培地３０βを加え、これにグルコノバクタ−・イン
ダストリーウスＩＦＯ３２６０を接種し、３０１／分の
通気及び５００ ｒｐｍの攪拌条件下に通気培養した。
成の培地３０βを加え、これにグルコノバクタ−・イン
ダストリーウスＩＦＯ３２６０を接種し、３０１／分の
通気及び５００ ｒｐｍの攪拌条件下に通気培養した。
２４時間経過後のＰＱＱ濃度はＯソトＮ［Ｌｌで６．０
Ｘ１０Ｍ ’（収量０．６３ｍｇ）、ロット陽２で１１
．２ｘｌＯＭ（収量１．１７■）であった。
Ｘ１０Ｍ ’（収量０．６３ｍｇ）、ロット陽２で１１
．２ｘｌＯＭ（収量１．１７■）であった。
実施例８
実施例１に示した培地と同組成の培地を用いて下記第１
表に示す菌体を用いて培養を行なった。
表に示す菌体を用いて培養を行なった。
得られた菌体を蒸留水で洗浄後、菌体ｌ容に対し９容の
メタノールを加えて一夜攪拌した。遠心分離によって菌
体を除去した上清を芸発乾固させ、これに水を加えて実
施例１と同様にＰＱＱを定量した。結果を以下の第１表
に示す。ＰＱＱは菌体中のクン白（ｎｗ）当りの量で示
した。
メタノールを加えて一夜攪拌した。遠心分離によって菌
体を除去した上清を芸発乾固させ、これに水を加えて実
施例１と同様にＰＱＱを定量した。結果を以下の第１表
に示す。ＰＱＱは菌体中のクン白（ｎｗ）当りの量で示
した。
以下余白
第１表
菌 体 ｐｏｕ濃
度（Ｘ １０ｍｏｌｅ／ Ｉ■蛋白） アセトバクター・アセチＩＦＯ３２８４０，５６アセト
ハクター・アセンデンス ＩＰＯ３２９９１，７０アセ
トバクター・ランセンス ＩＦＯ３２９８０，１９グル
コノバクタ−・セリヌス ＩＰｏ ３２６Ｂ
１．４６グルコノハクター・サブオキシダンス ＩＦ
Ｏ３２５４７，５１グルコノバクタ−・ザブオキシダン
ス ＩＰＯ１２５２８１，７６グノコノハクター・イン
ダストリラム １ＦＯ３２６０６，４３グルコノバクタ
−・メラノシエナス ＩＦＯ３２９３６，４０グルコノ
バクタ−・スフエリカス ＩＦＯ１２４６７０，８６セ
ラチ２ア・マルセセンス ＩＦＯ３０４６０，０４シユ
ードモナス・オハリス ＩＰｏ ３７３Ｂ
’ ０．０３実施例９ 実施例１に示した培地と同組成の培地を用いてグルコノ
バクタ−・インダストリウスＩＦＯ３２６０の培養を行
ない、得られた菌体を蒸留水で洗浄後、ＯＤ、。。＝
ｌ Ｏ，Ｏになるように菌体に蒸留水を加えてこれを洗
浄細胞懸濁液とした。
度（Ｘ １０ｍｏｌｅ／ Ｉ■蛋白） アセトバクター・アセチＩＦＯ３２８４０，５６アセト
ハクター・アセンデンス ＩＰＯ３２９９１，７０アセ
トバクター・ランセンス ＩＦＯ３２９８０，１９グル
コノバクタ−・セリヌス ＩＰｏ ３２６Ｂ
１．４６グルコノハクター・サブオキシダンス ＩＦ
Ｏ３２５４７，５１グルコノバクタ−・ザブオキシダン
ス ＩＰＯ１２５２８１，７６グノコノハクター・イン
ダストリラム １ＦＯ３２６０６，４３グルコノバクタ
−・メラノシエナス ＩＦＯ３２９３６，４０グルコノ
バクタ−・スフエリカス ＩＦＯ１２４６７０，８６セ
ラチ２ア・マルセセンス ＩＦＯ３０４６０，０４シユ
ードモナス・オハリス ＩＰｏ ３７３Ｂ
’ ０．０３実施例９ 実施例１に示した培地と同組成の培地を用いてグルコノ
バクタ−・インダストリウスＩＦＯ３２６０の培養を行
ない、得られた菌体を蒸留水で洗浄後、ＯＤ、。。＝
ｌ Ｏ，Ｏになるように菌体に蒸留水を加えてこれを洗
浄細胞懸濁液とした。
洗浄細胞懸濁液をＯＤ、、、、＝ １．０になるように
０、１ Ｍリン酸カリウム緩衝液（＋）Ｈ７，０＞で稀
釈した後、この稀釈液にグリセロール濃度が０．４％、
グルタミン酸濃度が０．６％になるようにグリセロール
又はグルタミン酸を加えて３０℃で反応を行なった。生
成したＰＱＱは実施例１と同様に定量した。
０、１ Ｍリン酸カリウム緩衝液（＋）Ｈ７，０＞で稀
釈した後、この稀釈液にグリセロール濃度が０．４％、
グルタミン酸濃度が０．６％になるようにグリセロール
又はグルタミン酸を加えて３０℃で反応を行なった。生
成したＰＱＱは実施例１と同様に定量した。
結果を以下の第２表に示す。
以下余白
第２表
グリセロール １４．３ ２１．７グ
リセロール＋グルタミン酸 ２４．１ １４．０な
し
２６実施例１０ 実施例１に示した培地と同組成の培地を用いて以下の第
３表に示した各種微生物によりＰＱＱの生成を行なわせ
た。３０時間後のＰＱＱａ度を第３表に示す。
リセロール＋グルタミン酸 ２４．１ １４．０な
し
２６実施例１０ 実施例１に示した培地と同組成の培地を用いて以下の第
３表に示した各種微生物によりＰＱＱの生成を行なわせ
た。３０時間後のＰＱＱａ度を第３表に示す。
以下余白
第３表
菌 体 Ｐ［ＩＱ
ｉＪ１度（Ｘ １０−”Ｍ） ミクロコツカス・ロゼウスＩＦ０３７６４
０．１シユードモナス・フルオレセンスＩＦ０３０８１
０．３コリネバクテリウム・セペドニカムＩＦＯ
１３７６３０，１エシエリヒア・コリ ト」２１ＦＯ３
３０１０，１サルシナ・ルチア［Ｆｏ １２７０Ｂ
０．１セラチア・マルセセンスＩＦ
Ｏ３０４６０，１エルビニア・ヘルヒコーラＩＰＯ１２
６８６０，１クレブシラ・ニューモニアＩＦＯ３３１７
０，１アシネトハククー・カルコアセティカスＩＦＯ１
２５５２０，３ ハイホミクロヒウム・ネプツニウム＾ＴＣＣ１５４４４
０，１メチロコツカス・キャプシュレイタス＾ＴＣＣ１
９０６９０，２（注）メチロコッカス・キャプシュレイ
タスＡＴＣＣ１９０６９はグリセロールの代りにメタノ
ール１％を炭素源として用いた。
ｉＪ１度（Ｘ １０−”Ｍ） ミクロコツカス・ロゼウスＩＦ０３７６４
０．１シユードモナス・フルオレセンスＩＦ０３０８１
０．３コリネバクテリウム・セペドニカムＩＦＯ
１３７６３０，１エシエリヒア・コリ ト」２１ＦＯ３
３０１０，１サルシナ・ルチア［Ｆｏ １２７０Ｂ
０．１セラチア・マルセセンスＩＦ
Ｏ３０４６０，１エルビニア・ヘルヒコーラＩＰＯ１２
６８６０，１クレブシラ・ニューモニアＩＦＯ３３１７
０，１アシネトハククー・カルコアセティカスＩＦＯ１
２５５２０，３ ハイホミクロヒウム・ネプツニウム＾ＴＣＣ１５４４４
０，１メチロコツカス・キャプシュレイタス＾ＴＣＣ１
９０６９０，２（注）メチロコッカス・キャプシュレイ
タスＡＴＣＣ１９０６９はグリセロールの代りにメタノ
ール１％を炭素源として用いた。
実施例１１
３％麦芽汁培地を用いて以下の第４表に示す菌体を通気
攪拌培養してＰＱＱを生成させた。得られた結果を３０
時間後のＰＱＱｉ度として以下の第４表に示す。
攪拌培養してＰＱＱを生成させた。得られた結果を３０
時間後のＰＱＱｉ度として以下の第４表に示す。
第４表
菌 体 ＰＱＱ濃度（Ｘ
ＩＯＭ） ラクトバチルス・カゼイＩＦＯ３４２５０，１ストレプ
トコツカス・フェカリスＩＦＯ１２９６４０，１サツカ
ロミセス・セレビシェＡＫＵ ４１００ ’ ０．
１カンシタ・ウチルスへにＵ ４５７０
０．１アスペルギルス・オリゼ＾に０３３０１ ’
０．１ペニシリウム・クリソジェナムＡＫＵ ３
４０７ ０．１フザリウム・カルモラムへにυ３７０
６ ０．１ストレプトミセス・アルフ゛スへＫ
ｌｌ ２２０１ ０．１第１図は培養液等の試料中
に含まれるＰＱＱＯ量を求める検量線を示すグラフ図で
あり、図の縦軸は０．１６ｍｇの膜を用いた場合の６０
０ ｎｍにおける１分当りの吸光度差（ΔＯＤ６゜。７
分１０．１６■１２ 蛋白質）を示し、横軸はＰＱＱモル濃度（ｘｌＯ）を示
す。
ＩＯＭ） ラクトバチルス・カゼイＩＦＯ３４２５０，１ストレプ
トコツカス・フェカリスＩＦＯ１２９６４０，１サツカ
ロミセス・セレビシェＡＫＵ ４１００ ’ ０．
１カンシタ・ウチルスへにＵ ４５７０
０．１アスペルギルス・オリゼ＾に０３３０１ ’
０．１ペニシリウム・クリソジェナムＡＫＵ ３
４０７ ０．１フザリウム・カルモラムへにυ３７０
６ ０．１ストレプトミセス・アルフ゛スへＫ
ｌｌ ２２０１ ０．１第１図は培養液等の試料中
に含まれるＰＱＱＯ量を求める検量線を示すグラフ図で
あり、図の縦軸は０．１６ｍｇの膜を用いた場合の６０
０ ｎｍにおける１分当りの吸光度差（ΔＯＤ６゜。７
分１０．１６■１２ 蛋白質）を示し、横軸はＰＱＱモル濃度（ｘｌＯ）を示
す。
第２図は実施例１の培養経過を示すグラフ図であり、図
の横軸は培養時間（時間）を示し、左縦軸はＰＣＯ２度
（ＸＩＯＭ）を示し、右縦軸は苗の生育を（ＯＤ６゜。
の横軸は培養時間（時間）を示し、左縦軸はＰＣＯ２度
（ＸＩＯＭ）を示し、右縦軸は苗の生育を（ＯＤ６゜。
）で示したものであり、曲線（イ）はＰＱＱｉ度、曲線
（ロ）は菌の生育を示す。
（ロ）は菌の生育を示す。
第１図
×１６１弘ルＰＱＱ
２０ ４０ ６０ ８０ １０
０培養時間（時間）→
０培養時間（時間）→
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、グルコノバクタ−属、アセトバクター属、ミクロコ
ツカス属、シュードモナス属、コリネバクテリウム属、
エシェリヒア属、サルシナ属、セラチア属、エルビニア
属、クレブシラ属、アシネトバクタ−属、ハイホミクロ
ビウム属、メチロコツカス属、ラクトバチルス属、スト
レプトコツカス属、サツカロミセス属、カンシタ属、ア
スペルギルス属、ペニシリウム属、フザリウム属及びス
トレプトミセス属の少なくとも一つに属するピロロキノ
リンキノン生産能を有する微生物を栄養培地中で培養し
て培養物中にピロロキノリンキノンを生成せしめ、これ
を採取することを特徴とするピロロキノリンキノンの製
造方法。 ２、グルコノバクタ−属、アセトバクター属、ミクロコ
ツカス属、シュードモナス属、コリネバ・クテリウム属
、エシェリヒア属、サルシナ属、セラチア属、エルピニ
ア属、クレブシラ属、アシネトバクタ−属、ハイホミク
ロビウム属、メチロコ・７カス属、ラクトバチルス属、
ストレプトコツカス属、サツカロミセス属、カンシタ属
、アスペルギルス属、ペニシリウム属、フザリウム属及
びストレプトミセス属の少なくとも一つに属するピロ、
ロキノリンキノン生産能を有する微生物を栄養培地中で
培養して得られた微生物細胞を分離し、この分離微生物
細胞の存在下に糖質とアミノ酸を反応させてＰＱＱ″を
生成せしめることを特徴とするピロロキノリンキノンの
製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57220328A JPS59113896A (ja) | 1982-12-17 | 1982-12-17 | ピロロキノリンキノンの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57220328A JPS59113896A (ja) | 1982-12-17 | 1982-12-17 | ピロロキノリンキノンの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59113896A true JPS59113896A (ja) | 1984-06-30 |
| JPH0214037B2 JPH0214037B2 (ja) | 1990-04-05 |
Family
ID=16749418
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57220328A Granted JPS59113896A (ja) | 1982-12-17 | 1982-12-17 | ピロロキノリンキノンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59113896A (ja) |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0164943A2 (en) * | 1984-05-29 | 1985-12-18 | Ube Industries, Ltd. | Process for production of pyrrolo-quinoline quinone |
| JPS61247397A (ja) * | 1985-04-24 | 1986-11-04 | Mitsubishi Gas Chem Co Inc | ピロロキノリンキノンの製造方法 |
| EP0206471A2 (en) * | 1985-04-24 | 1986-12-30 | Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. | Process for preparation of pyrrolo-quinoline quinone |
| EP0952220A3 (en) * | 1993-01-15 | 2000-01-26 | Regents Of The University Of Minnesota | Method to predict active growth of bacteria adhered to a surface |
| WO2000015827A3 (en) * | 1998-09-11 | 2000-07-06 | Steven F Stoddard | Bacterial strains for the production of 2-keto-l-gulonic acid |
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| US7030233B2 (en) | 2000-04-05 | 2006-04-18 | Archer-Daniels-Midland Company | Ketogulonigenium endogeneous plasmids |
| US7033824B2 (en) | 2000-04-05 | 2006-04-25 | Archer-Daniels-Midland Company | Ketogulonigenium shuttle vectors |
| WO2012020767A1 (ja) * | 2010-08-09 | 2012-02-16 | 三菱瓦斯化学株式会社 | ピロロキノリンキノンのゲル |
| CN103740780A (zh) * | 2013-12-20 | 2014-04-23 | 浙江大学 | 一种通过乳酸菌发酵合成吡咯喹啉醌的方法 |
| JP2014193838A (ja) * | 2013-02-27 | 2014-10-09 | Mitsubishi Gas Chemical Co Inc | ピロロキノリンキノンの製造方法 |
| JP2021514200A (ja) * | 2018-01-26 | 2021-06-10 | 浙江工▲業▼大学 | グルコノバクターオキシダンスのソルビトールデヒドロゲナーゼおよびコエンザイムピロロキノリンキニーネの合成を促進する方法 |
-
1982
- 1982-12-17 JP JP57220328A patent/JPS59113896A/ja active Granted
Cited By (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| JPS61247397A (ja) * | 1985-04-24 | 1986-11-04 | Mitsubishi Gas Chem Co Inc | ピロロキノリンキノンの製造方法 |
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| US6541239B1 (en) | 1996-10-24 | 2003-04-01 | Archer-Daniels-Midland Company | Bacterial strains and use thereof in fermentation processes for 2-keto-L-gulonic acid production |
| US6562584B1 (en) | 1998-09-11 | 2003-05-13 | Archer-Daniels-Midland Company | Bacterial strains for the production of 2-keto-L-gulonic acid |
| US6506583B1 (en) | 1998-09-11 | 2003-01-14 | Archer-Daniels-Midland Company | Bacterial strains for the production of 2-keto-L-gulonic acid |
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