JP2001501595A - 免疫グロブリンの単離 - Google Patents
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1. 1または複数の免疫グロブリンを含有する溶液からの免疫グロブリンの単 離方法であって、次の操作: a) 1または複数の免疫グロブリンを含有しそして2.0〜10.0の範囲のpHおよび2 .0以下のイオン強度に相当する全塩分を有する溶液を、下記の一般式: M−SP1−L (上式中、Mは母材主鎖を表し、SP1はスペーサーを表し、そしてLは単環式 または二環式の置換または非置換の芳香族または複素環式芳香族成分を含んで成 るリガンドを表す) の固相母材と接触させ、それにより免疫グロブリンの少なくとも一部が固相母材 に結合された状態になり; b) 免疫グロブリンが結合された固相母材を前記溶液から分離し; c) 所望により固相母材を洗浄し;そして d) 固相母材から1または複数の免疫グロブリンを遊離させるために固相母材を 溶離剤と接触させる ことを含んで成り、 ただし、次の基準(a),(b)および(c)のうちの少なくとも2つを満たすという 第一の条件: (a)本明細書中に記載の「標準的免疫グロブリン結合試験」において2.0〜10.0 の範囲のpHで試験した時に、固相母材が少なくとも50%の結合効率を有すること ; (b)本明細書中に記載の「モノクローナル抗体アレイ結合試験」において2.0〜 10.0の範囲のpHで試験した時に、固相母材が試験した全ての免疫グロブリンにつ いて少なくとも60%の平均結合効率を有すること;または (c)1M NaOH中での固相母材の安定性が、本明細書中に記載の「標準的免疫グロ ブリン結合試験」において測定した時に、遮光下で室温で7日間の1M NaOH中で の母材のインキュベーションが、結合最大pH値よりも1pH単位だけ低いpHから結 合最大pH値よりも1pH単位だけ高いpHまでのpH範囲での結合効率を、対応する未 処理の母材に比べて25%未満減少させるような安定性であること;および リガンド−Lの分子量が500ダルトン以下であるという第二の条件 を有する方法。 2. 前記基準(a)と(b)が適用される、請求項1に記載の方法。 3. 前記基準(a)と(c)が適用される、請求項1に記載の方法。 4. 前記基準(b)と(c)が適用される、請求項1に記載の方法。 5. 前記3つの基準(a),(b)および(c)の全部が満たされる、請求項1に記載 の方法。 6. リガンド濃度が固相母材の乾燥物質1gあたり10〜990μモルの範囲内で ある、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。 7. リガンド濃度が水和させ沈降させた固相母材1mlあたり1〜145μモルの 範囲内である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。 8. リガンド濃度が湿潤であるが吸引排水した固相母材1gあたり1〜130μ モルの範囲内である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。 9. 前記リガンド−Lが下式: −X−A−SUB (ここでXは−O−,−S−または−NH−を表し、Aは単環式または二環式の 芳香族もしくは複素環式芳香族成分を表し、そしてSUBは1または複数の置換 基を表す) を有する基である、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。 10.Aがベンゼン基またはナフタレン基より選ばれる、請求項9に記載の方法 。 11.Aがチオフェン、フラン、ピラン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール 、イソチアゾール、イソオキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジンおよび ピリダジン基より選ばれた単環式複素環式芳香族基;またはインドール、プリン 、キノリン、ベンゾフラン、ベンゾイミダゾール、ベンゾチアゾールおよびベン ゾオキサゾール基より選ばれた二環式複素環式芳香族基;より選ばれた複素環式 芳香族成分である、請求項9に記載の方法。 12.Aがピリジン、ベンゾイミダゾール、ベンゾチアゾールおよびベンゾオキ サゾール基より選ばれる、請求項11に記載の方法。 13.SUBが下式: −SP2−ACID (上式中、SP2は随意の第二スペーサーを表し、そしてACIDは酸性基を表 す) の置換基を含んで成る、請求項9〜12のいずれか一項に記載の方法。 14.前記酸性基がカルボン酸基(-COOH)、スルホン酸基(-SO2OH)、スルフィン 酸基(-S(O)OH)、ホスフィン酸基(-PH(O)(OH))、ホスホン酸モノエステル基(-P(O )(OH)(OR))およびホスホン酸基(-P(O)(OH)2)より選ばれる、請求項13に記載の方 法。 15.SP2がC1-6アルキレン、C2-6アルケニレンまたは単結合を表す、請求 項13〜14のいずれか一項に記載の方法。 16.前記リガンドが、ジヒドロキシ安息香酸;アミノ安息香酸;ジアミノ安息 香酸;メルカプト安息香酸;メルカプトニコチン酸;メルカプトテトラゾール酢 酸;ベンゾイミダゾール;ベンゾチアゾール;ベンゾオキサゾール;および二酸 より選ばれた化合物から誘 導される、請求項1〜15のいずれか一項に記載の方法。 16.リガンドLが、2,5−ジヒドロキシ安息香酸、2−アミノ安息香酸、3 −アミノ安息香酸、4−アミノ安息香酸、2−メルカプト安息香酸、2−メルカ プトニコチン酸、5−メルカプト−1−テトラゾール酢酸、2−メルカプトベン ゾイミダゾール、4−アミノフタル酸および5−アミノイソフタル酸より選ばれ た化合物から誘導される、請求項16に記載の方法。 17.断片−SP1−Lの全部が実質的に同一である、上記請求項のいずれか一 項に記載の固相母材。 18.免疫グロブリン含有溶液のpHが2.5〜5.5の範囲内である、上記請求項のい ずれか一項に記載の方法。 19.免疫グロブリン含有溶液の全塩分が0.05〜2.0の範囲のイオン強度に相当 する、上記請求項のいずれか一項に記載の方法。 20.免疫グロブリン含有溶液が0.4M以下の濃度の親液性塩を含んで成る、上 記請求項のいずれか一項に記載の方法。 21.使用する溶離剤(操作(d))が10%(v/v)未満の有機溶剤を含んで成る、上 記請求項のいずれか一項に記載の方法。 22.溶液が固相母材1gあたり免疫グロブリン0.1〜30mgの範囲を含んで成る 、上記請求項のいずれか一項に記載の方法。 23.固相母材の洗浄(操作(c))が、負電荷を持つ洗浄剤を含む水溶液で洗浄 することを含んで成る、上記請求項のいずれか一項に記載の方法。 24.固相母材の洗浄(操作(c))が、負電荷を持つ洗浄剤を含む無機または有 機塩緩衝液で洗浄することを含んで成る、上記請求項のいずれか一項に記載の方 法。 25.免疫グロブリン含有溶液が負電荷を有する界面活性剤を含んで成る、上記 請求項のいずれか一項に記載の方法。 26.次の式: M−SP1−L (上式中、Mは母材主鎖を表し、SP1はスペーサーを表し、そしてLは単環式 または二環式の置換または非置換の芳香族または複素環式芳香族成分を含んで成 るリガンドを表す) の複数の官能基を有する機能化された母材主鎖を含んで成る固相母材であって、 次の基準(a),(b)および(c)のうちの少なくとも2つを満たし: (a)本明細書中に記載の「標準的免疫グロブリン結合試験」において2.0〜10.0 の範囲のpHで試験した時に、固相母材が少なくとも50%の結合効率を有すること ; (b)本明細書中の「モノクローナル抗体アレイ結合試験」において2.0〜10.0の 範囲のpHで試験した時に、固相母材が試験した全ての免疫グロブリンについて少 なくとも40%の平均結合効率を有すること;または (c)1M NaOH中での固相母材の安定性が、本明細書中に記載の「標準的免疫グロ ブリン結合試験」において測定した時に、遮光下で室温で7日間の1M NaOH中で の母材のインキュベーションが、結合最大pH値よりも1pH単位だけ低いpHから結 合最大pH値よりも1pH単位だけ高いpHまでのpH範囲での結合効率を、対応する未 処理の母材に比べて25%未満減少させるような安定性であること;そして リガンド−Lの分子量が500ダルトン以下であるという第一の条件;および MがアガロースでありそしてSP1がビニルスルホンから誘導される時、Lは 4−アミノ安息香酸ではないという第二の条件 を有する固相母材。 27.前記基準(a)と(b)が適用される、請求項26に記載の固相母材。 28.前記基準(a)と(c)が適用される、請求項26に記載の固相母材。 29.前記基準(b)と(c)が適用される、請求項26に記載の固相母材。 30.前記3つの基準(a),(b)および(c)の全部が満たされる、請求項27に記載 の固相母材。 31.リガンド濃度が固相母材の乾燥物質1gあたり10〜990μモルの範囲内で ある、請求項26〜30のいずれか一項に記載の固相母材。 32.リガンド濃度が水和させ沈降させた固相母材1mlあたり1〜145μモルの 範囲内である、請求項26〜30のいずれか一項に記載の固相母材。 33.リガンド濃度が湿潤だが吸引排水した固相母材1gあたり1〜130μモル の範囲内である、請求項26〜30のいずれか一項に記載の固相母材。 34.前記リガンド−Lが下式: −X−A−SUB (ここでXは−O−,−S−または−NH−を表し、Aは単環式または二環式の 芳香族もしくは複素環式芳香族成分を表し、そしてSUBは1または複数の置換 基を表す) の基である、請求項26〜33のいずれか一項に記載の固相母材。 35.Aがベンゼン基またはナフタレン基より選ばれる、請求項34に記載の固相 母材。 36.Aがチオフェン、フラン、ピラン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール 、イソチアゾール、イソオキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジンおよび ピリダジン基より選ばれた単環式複素環式芳香族基;またはインドール、プリン 、キノリン、ベンゾフラン、ベンゾイミダゾール、ベンゾチアゾールおよびベン ゾオキサゾール基より選ばれた二環式複素環式芳香族基;より選ばれた複素環式 芳香族成分である、請求項34に記載の固相母材。 37.Aがピリジン、ベンゾイミダゾール、ベンゾチアゾールまたはベンゾオキ サゾール基より選ばれる、請求項36に記載の固相母材。 38.SUBが下式: −SP2−ACID (上式中、SP2は随意の第二スペーサーを表し、そしてACIDは酸性基を表 す) の置換基を含んで成る、請求項34〜37のいずれか一項に記載の固相母材。 39.前記酸性基がカルボン酸基(-COOH)、スルホン酸基(-SO2OH)、スルフィン 酸基(-S(O)OH)、ホスフィン酸基(-PH(O)(OH))、ホスホン酸モノエステル基(-P(O )(OH)(OR))またはホスホン酸基(-P(O)(OH)2)より選ばれる、請求項38に記載の固 相母材。 40.SP2がC1-6アルキレン、C2-6アルケニレンまたは単結合を表す、請求 項38〜39のいずれか一項に記載の固相母材。 41.リガンドLが、ジヒドロキシ安息香酸;アミノ安息香酸;ジアミノ安息香 酸;メルカプト安息香酸;メルカプトニコチン酸;メルカプトテトラゾール酢酸 ;ベンゾイミダゾール;ベンゾチアゾール;ベンゾオキサゾール;および二酸よ り選ばれた化合物から誘導される、請求項26〜40のいずれか一項に記載の固相母 材。 42.前記リガンドが、2,5−ジヒドロキシ安息香酸、2−アミノ安息香酸、 3−アミノ安息香酸、4−アミノ安息香酸、2−メルカプト安息香酸、2−メル カプトニコチン酸、5−メルカプト−1−テトラゾール酢酸、2−メルカプトベ ンゾイミダゾール、4−アミノフタル酸および5−アミノイソフタル酸より選ば れた化合物から誘導される、請求項41に記載の固相母材。 43.断片−SP1−Lの全部が実質的に同一である、請求項26〜42のいずれか 一項に記載の固相母材。 44.次の式 M−SP1−X−A−SP2−ACID (上式中、Mは母材主鎖を表し;SP1はスペーサーを表し;Xは−O−,−S −または−NH−を表し;Aは単環式または二環式の置換または非置換の芳香族 または複素環式芳香族成分を表し;SP2は随意のスペーサーを表し;そしてA CIDは酸性基を表す) により示される、複数の官能基を担持している機能化された母材主鎖を含んで成 る固相母材であって、 リガンド−Lの分子量が500ダルトン以下であるという第一の条件;および MがアガロースでありそしてSP1がビニルスルホンから誘導される時、Lは 4−アミノ安息香酸でないという第二の条件 を有する固相母材。 45.リガンド濃度が固相母材の乾燥物質1gあたり10〜990μモルの範囲内で ある、請求項44に記載の固相母材。 46.リガンド濃度が水和させ沈降させた固相母材1mlあたり1〜145μモルの 範囲内である、請求項44に記載の固相母材。 47.リガンド濃度が湿潤だが吸引排水した固相母材1gあたり1〜130μモル の範囲内である、請求項44に記載の固相母材。 48.(a)本明細書中に記載の「標準的免疫グロブリン結合試験」において2.0〜 10.0の範囲のpHで試験した時に、前記固相母材が少なくとも50%の結合効率を有 し;且つ (b)本明細書中に記載の「モノクローナル抗体アレイ結合試験」において2.0〜 10.0の範囲のpHで試験した時に、前記固相母材が試験した全ての免疫グロブリン について少なくとも60%の平均結合効率を有し;且つ (c)1M NaOH中での前記固相母材の安定性が、本明細書中に記載の 「標準的免疫グロブリン結合試験」において測定した時に、遮光下で室温で7日 間の1M NaOH中での母材のインキュベーションが、結合最大pH値よりも1pH単位 だけ低いpHから結合最大pH値よりも1pH単位だけ高いpHまでのpH範囲での結合効 率を、対応する未処理の母材に比べて25%未満減少させるような安定性である 請求項44〜47のいずれか一項に記載の固相母材。 49.Aがベンゼン基またはナフタレン基より選ばれる、請求項44〜48のいずれ か一項に記載の固相母材。 50.Aがチオフェン、フラン、ピラン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール 、イソチアゾール、イソオキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジンおよび ピリダジン基より選ばれた単環式複素環式芳香族基;またはインドール、プリン 、キノリン、ベンゾフラン、ベンゾイミダゾール、ベンゾチアゾールおよびベン ゾオキサゾール基より選ばれた二環式複素環式芳香族基;より選ばれた複素環式 芳香族成分である、請求項44〜48のいずれか一項に記載の固相母材。 51.Aがピリジン、ベンゾイミダゾール、ベンゾチアゾールおよびベンゾオキ サゾール基より選ばれる、請求項50に記載の固相母材。 52.前記酸性基がカルボン酸基(-COOH)、スルホン酸基(-SO2OH)、スルフィン 酸基(-S(O)OH)、ホスフィン酸基(-PH(O)(OH))、ホスホン酸モノエステル基(-P(O )(OH)(OR))およびホスホン酸基(-P(O)(OH)2)より選ばれる、請求項44〜51のいず れか一項に記載の固相母材。 53.SP2がC1-6アルキレン、C2-6アルケニレンまたは単結合を表す、請求 項44〜52のいずれか一項に記載の固相母材。 54.リガンドLが、ジヒドロキシ安息香酸;アミノ安息香酸;ジアミノ安息香 酸;メルカプト安息香酸;メルカプトニコチン酸;メルカプトテトラゾール酢酸 ;ベンゾイミダゾール;ベンゾチアゾー ル;ベンゾオキサゾール;および二酸より選ばれた化合物から誘導される、請求 項44〜53のいずれか一項に記載の固相母材。 55.前記リガンドが、2,5−ジヒドロキシ安息香酸、2−アミノ安息香酸、 3−アミノ安息香酸、4−アミノ安息香酸、2−メルカプト安息香酸、2−メル カプトニコチン酸、5−メルカプト−1−テトラゾール酢酸、2−メルカプトベ ンゾイミダゾール、4−アミノフタル酸および5−アミノイソフタル酸より選ば れた化合物から誘導される、請求項54に記載の固相母材。 56.断片−SP1−Lの全部が実質的に同一である、請求項44〜55のいずれか 一項に記載の固相母材。 57.1または複数のタンパク質を含有する溶液からのタンパク質の単離方法で あって、次の操作: a) 1または複数のタンパク質を含有しそして1.0〜6.0の範囲のpHおよび2.0以 下のイオン強度に相当する全塩分を有する溶液を、請求項44〜57のいずれか一項 に記載の固相母材と接触させ、それにより前記タンパク質の少なくとも一部が固 相母材に結合された状態になり; b) 前記タンパク質が結合された固相母材を前記溶液から分離し; c) 所望により前記固相母材を洗浄し;そして d) 前記固相母材から前記1または複数のタンパク質を遊離させるために固相母 材を溶離剤と接触させ、ここで使用される溶離剤が10%(v/v)未満の有機溶剤を 含む; を含んで成る方法。 58.前記タンパク質含有溶液のpHが2.0〜6.0の範囲内である、請求項57に記載 の方法。 59.前記タンパク質含有溶液の全塩分が0.05〜2.0の範囲のイオン強度に相当 する、請求項57〜58のいずれか一項に記載の方法。 60.前記タンパク質含有溶液が0.4M以下の濃度で親液性塩を含んで成る、請 求項57〜59のいずれか一項に記載の方法。 61.前記溶離剤のpHが6.0〜11の範囲内である、請求項57〜60のいずれか一項 に記載の方法。 62.使用される前記溶離剤(操作(d))が5%(v/v)未満の有機溶剤を含んで成 る、請求項57〜61のいずれか一項に記載の方法。 63.前記固相母材の洗浄(操作(c))が、負電荷を持つ洗浄剤を含む水溶液で 洗浄することを含んで成る、請求項57〜62のいずれか一項に記載の方法。 64.前記固相母材の洗浄(操作(c))が、負電荷を持つ洗浄剤を含む無機また は有機塩緩衝液で洗浄することを含んで成る、請求項57〜63のいずれか一項に記 載の方法。 65.前記タンパク質含有溶液が負荷を持つ洗浄剤を含む、請求項57〜64のいず れか一項に記載の方法。 66.ハイブリドーマ細胞培養上清からのモノクローナル抗体の単離のための、 請求項26〜43のいずれか一項に記載の固相母材の使用。 67.動物血漿/血清からの免疫グロブリンの単離のための、請求項26〜43のい ずれか一項に記載の固相母材の使用。 68.初乳からの免疫グロブリンの単離のための、請求項26〜43のいずれか一項 に記載の固相母材の使用。
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