JP2000312567A

JP2000312567A - 生理活性健康食品

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Publication number: JP2000312567A
Application number: JP11122404A
Authority: JP
Inventors: Katsuhiro Osajima; 克裕筬島
Original assignee: SENMI EKISU KK
Current assignee: SENMI EKISU KK
Priority date: 1999-04-28
Filing date: 1999-04-28
Publication date: 2000-11-14
Anticipated expiration: 2019-04-28
Also published as: US20030148923A1; KR20010071676A; US7112571B2; KR100653582B1; EP1094071A1; CA2300229A1; JP4053686B2; CA2336296A1; EP1094071A4; WO2000066626A1

Abstract

(57)【要約】【解決手段】有効成分としてのペプチドＹ−２の添加
において、Ｙ−２に含まれるバリル−チロシン（Val-Ty
r）を指標とし、健康食品100ｇ中該バリル−チロシンを
０．０１０〜３．０００ｍｇの範囲で、ペプチドＹ−２
を含有せしめて各種生理機能改善性、特に血圧正常化に
優れた健康食品とすることができた。【効果】高血圧疾患または高血圧になり易いヒトに対
して血圧低下または血圧上昇抑制に寄与することができ
る。しかも長期間の摂取が可能である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、生理活性健康食品
に関するものであり、更に詳細には、ペプチドＹ−２
(ペプチドＹ−２に含まれるバリル−チロシン（Val-Ty
r）量を指標として)を特定量含有してなる各種生理機能
改善性健康食品に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】先に、本発明者らは、魚肉を熱変性処理
した後、中性ないしアルカリプロテアーゼ処理して加水
分解し、酵素を失活せしめた後、分離処理することによ
ってＡＣＥ（アンジオテンシン変換酵素）阻害活性を有
するペプチドα−１０００を得た（特開平５−２７１２
９７）。即ち、ペプチドα−１０００の出現によって、
ペプチド(群)による血圧上昇抑制の可能性が示されたの
である。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、高血圧
疾患及び／又は高血圧になり易いヒト、あるいは高血圧
を予防したり健康を維持したいヒトが大幅に増加してい
る現在の状況に鑑み、血圧を直接降下することのできる
降圧剤の開発も重要ではあるが、直接治療することを目
的とするのではなく、血圧低下または血圧上昇抑制に寄
与して血圧を正常に維持することのできるおだやかな作
用を有し且つ長期間の投与が可能な予防的な物質の開発
も重要である点に着目した。

【０００４】そして、上記目的を達成し得る物質として
は、経口投与でき、しかも服用し易く、製品化しやすい
食品、例えば、特定保健用食品としての認可が可能な液
状健康食品が好適であるとの観点にたち、血圧正常化健
康食品を新規に開発することを課題とした。

【０００５】

【課題を解決するための手段】この課題を解決するため
には、血圧上昇抑制、血圧降下作用にすぐれているだけ
でなく、長期間服用することができ、安全性についても
問題のない物質を開発することが必要であるとの観点に
たち、本発明者らは天然由来の物質にその起源を求める
ことにした。

【０００６】そして本発明者らは、各方面から検討した
結果、本発明者らが先に開発したイワシ等の魚肉由来の
ペプチドα−１０００がＡＣＥ阻害活性を有する点に着
目し、ペプチドα−１０００から本発明に係る血圧正常
化健康食品の調製に使用可能な有効成分を単離すること
を目的とした。

【０００７】本発明者らは、鋭意研究した結果、ペプチ
ドα−１０００の水溶液をペプタイド吸着性樹脂処理し
た後、１０％エタノールを用いて溶出してＹ−２画分を
得、このＹ−２画分が新規ペプチド(群)であることを確
認しただけでなく、このＹ−２画分にはバリル−チロシ
ン（Val-Tyr）が含有されていて、バリル−チロシンを
含むペプチド(群)が血圧正常化に有効に作用することを
確認し、遂に本発明の完成に至ったものである。更に、
このＹ−２画分を詳細に検討したところ、血圧正常化以
外にも毛髪生育促進性が認められ、また、筋肉機能正常
化、関節機能正常化など各種生理機能正常化が認められ
るに至った。

【０００８】すなわち本発明は、有効成分としてペプチ
ドＹ−２もしくはその含有物の添加において、ペプチド
Ｙ−２に含まれるバリル−チロシン（Val-Tyr）を指標
とし、健康食品100ｇ中該バリル−チロシンを０．０１
０〜３．０００ｍｇの範囲で、ペプチドＹ−２もしくは
その含有物を含有せしめてなる生理活性健康食品に関す
る。また、本発明は、有効成分としてペプチドＹ−２も
しくはその含有物の添加において、ペプチドＹ−２に含
まれるバリル−チロシン（Val-Tyr）を指標とし、健康
食品100ｇ中該バリル−チロシンを０．１００〜２．０
００ｍｇ、好ましくは０．１１０〜０．５００ｍｇ、よ
り好ましくは０．１３０〜０．２５０ｍｇの範囲で、ペ
プチドＹ−２もしくはその含有物を含有せしめてなる血
圧正常化用生理活性健康食品に関する。

【０００９】そして、本発明の血圧正常化用生理活性健
康食品においては、動物実験や酵素の阻害度を測定する
間接的な方法ではなく、ヒトに対してバリル−チロシン
を含有するＹ−２を直接投与してヒトの血圧を直接測定
する直接法（臨床試験）によって、血圧降下作用、しか
もきわめてすぐれた血圧降下作用を確認するのに成功し
たものであり、あわせてバリル−チロシンの安全性、服
用や製剤あるいは飲食品製品化等の容易性及びその配合
量もヒトについて確認した点できわめて特徴的であり、
まさに画期的なものである。

【００１０】以下、本発明について詳述するが、先ず、
本ペプチドＹ−２の起源として用いるペプチドα−１０
００について説明する。

【００１１】ペプチドα−１０００は、魚介類を原料と
して製造するものであって、例えば特開平５−２７１２
９７号にしたがって製造することができ、先ず、魚介類
を採肉機、デボーナー等によって処理して魚肉質を分離
する。原料は出来る限り新鮮なものが好ましい。分離し
た魚肉は、１０ｋｇ程度のすり身に分割し、このまま次
の処理に使用してもよいが、−２０〜−５０℃、例えば
−３０℃程度の冷気を吹き付けて急速連結し、−２０〜
−２５℃に保存しておき、必要に応じてこれを適宜使用
することにしてもよい。

【００１２】魚介類としては、イワシ、アジ、マグロ、
カツオ、サンマ、サバ等赤身魚；ヒラメ、タイ、キス、
コノシロ、タラ、ニシン、ブリ等白身魚；サメ、エイ等
軟骨魚肉；ワカサギ、コイ、イワナ、ヤマメ等淡水魚
肉；アイザメ、アンコウ等深海魚肉のほか、エビ、カ
ニ、タコ、アミ類等も適宜使用できる。

【００１３】採肉した後、粉砕機等によって魚介類を粉
砕し、原料重量に対して１／２量〜２０倍量、好ましく
は等量〜１０倍量の加水を行った後、加熱処理し、もっ
て、自己消化酵素を失活させ、且つ殺菌を死滅させると
ともに、タンパク質を熱変性させて後に行う酵素反応効
率を上昇せしめる。加熱条件としては、このような作用
が奏される条件であればすべての条件が利用できるが、
例えば６５℃以上、２〜６０分、好ましくは８０℃以
上、５〜３０分とするのがよい。

【００１４】次いで、アンモニア水か、水酸化ナトリウ
ム（カリウム）水溶液等アルカリ剤を加えて、使用する
蛋白分解酵素の適値にｐＨを調整し、（例えばアルカリ
プロテアーゼの場合は、ｐＨ７．５以上、好ましくは８
以上）、温度も酵素適温（使用酵素によって異なるが、
２０〜６５℃、アルカリプロテアーゼの場合は３５〜６
０℃、好ましくは４０〜５５℃）に加温し、蛋白分解酵
素を加えて３０分〜３０時間（アルカリプロテアーゼの
場合は３０分〜２５時間、好ましくは１〜１７時間）処
理する。

【００１５】蛋白分解酵素としては、中性又はアルカリ
性条件下で蛋白質を分解し得る酵素であればすべての酵
素が単独で又は混合して使用し得る。その起源は、動植
物のほかに微生物に求めることができ、ペプシン、レニ
ン、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、プロメレ
インのほか、細菌プロテアーゼ、糸状菌プロテアーゼ、
放線菌プロテアーゼ等も広く利用できる。これらの酵素
は、通常、市販されているものが使用されるが、未精製
の酵素、酵素を含有した培養液、麹といった固体又は液
体の酵素含有物も、目的により必要に応じて使用するこ
とができる。酵素の添加量としては０．１％〜５．０％
程度でもよい。

【００１６】次いで必要あれば中和処理を行った後、７
０℃（好適には８０℃）以上の温度に２〜６０分間（好
適には５〜３０分間）保持し、酵素を失活させるととも
に後に行う分離を良好ならしめる。加熱失活処理後、バ
イブスクリーン等によって粗分離し、必要によりジェク
ター処理した後、超遠心分離処理して、浮遊物、沈殿物
を除去する。

【００１７】次に、ケイソウ土等濾過助剤（例えばセラ
イト）を用いて濾過し、濾液を活性炭処理して（０．０
５〜２０％Ｗ／Ｖ、好ましくは０．１〜１０％Ｗ／Ｖ使
用、２０〜６５℃、好ましくは２５〜６０℃、１５分〜
４時間、好ましくは３０分〜２時間）、脱臭、脱色、精
製する。

【００１８】これを減圧濃縮（０〜５０℃）その他常法
にしたがって濃縮し（３０Ｂ×程度にまで）た後、必要
あれば再度（超）遠心分離又は濾過してペプチド原液を
得る。このようにして得たペプチド原液は、殺菌（ＵＨ
ＴＳＴその他常法による）した後、容器に充填して製品
（α−１０００（液体））とする。また、希望するので
あれば、更に濃縮したりあるいは逆に希釈したり、ま
た、噴霧乾燥、凍結乾燥等の常法によって６０メッシュ
程度に粉末化し、これを袋等の容器に充填して製品（α
−１０００（粉末））とすることもできる。これらの製
品は、冷蔵ないし冷凍保管する。

【００１９】このようにして得た、液状、ペースト状な
いし粉末状のペプチドがα−１０００である。

【００２０】ペプチドα−１０００（スプレードライ粉
末）の物理化学的性質は、下記表１に示すとおりであ
る。

【００２１】（表１：ペプチドα−１０００（粉末）の
物理化学的性質）（Ａ）分子量；２００〜１０，０００（セファデックスＧ−２５カラムクロマトグラフィーに
よる）（Ｂ）融点；１１９℃で着色（分解点）（Ｃ）比旋光度 α＝−２２°（測定温度２０℃、使用波長ナトリウムＤ
線）（Ｄ）溶剤に対する溶解性；水に易溶；エタノール、アセトン、ヘキサンにはほとん
ど溶解しない。（Ｅ）酸性、中性、塩基性の区別；中性ｐＨ５．０〜８．０（１０％溶液）（Ｆ）外観、成分；白色粉末；水分５．１４％（減圧加熱乾燥法）；蛋白質
８７．５％（ケルダール法、窒素・蛋白質換算係数
６．２５）；脂質０％（ソックスレー抽出法）；灰分
５．０％（直接灰化法）（Ｇ）ＵＶスペクトル；図１に示すとおり。（Ｈ）ＩＲスペクトル；図２に示すとおり。（Ｉ）特性；魚肉由来であり、加熱によって自己消化
酵素を失活させ、蛋白分解酵素で加水分解して得たペプ
チドである。

【００２２】このようにして調製したペプチドα−１０
００は、液状の場合はそのまま、粉末の場合は加水した
後、これをＯＤＳ樹脂その他ペプチド吸着性樹脂に通
し、水などで洗浄した後、各種濃度のエタノールなどを
用いて順次溶出するが、１０％エタノールで溶出して得
られる画分Ｙ−２が本発明に用いる有効成分となる。こ
の画分Ｙ−２をペプチドＹ−２として使用する。

【００２３】本発明は、上記した新規ペプチドであるＹ
−２にはバリル−チロシン（Val-tyrosine、Val-Tyr：
以下、サーデンペプチドということもある）が０．０５
〜０．３５％程度(凍結乾燥品中)含有しており、また、
このサーデンペプチドのヒトに対する１日当りの有効量
も後記するように実際のヒトによるin vivo臨床試験に
よってそのすぐれた血圧降下作用が確認され、安全性に
も問題がないところから、予防や健康維持の目的で長期
間に亘っても服用可能な血圧正常化用生理活性健康食品
としたのである。また、本発明は、上記した新規ペプチ
ド(群)であるペプチドＹ−２(もしくはその含有物)を適
宜配合して、各種生理機能改善性健康食品とすることが
できる。

【００２４】本発明に係る健康食品（清涼飲料、酸乳飲
料、健康ドリンクなどの液状食品、クッキー、練製品、
トーフなどの固状食品、又は、ジャム、スプレッドなど
のペースト状食品などの食品のいずれでもよい）を製造
するには、ペプチドＹ−２を有効成分とし、これを各種
食品の製造に用いられ主原料、その他副原料（砂糖、果
糖ブドウ糖液糖、ハチミツ、香料、酸味料（クエン酸、
リンゴ酸等）、甘味料（ステビア抽出物等）、増粘剤、
ビタミン類、その他）を配合して液状食品、固状食品又
はペースト状食品に調製すればよい。本発明に係る食品
は、特定保健用食品のほか、栄養食品、健康食品、臨床
栄養食品等各種の用途に広く使用することができる。

【００２５】有効成分としては、ペプチドＹ−２に含ま
れるバリル−チロシン(Val-Tyr)を指標として、健康食
品100ｇ中このバリル−チロシンを０．０１０〜３．０
００ｍｇの範囲で、ペプチドＹ−２を含有せしめる。特
に、血圧正常化用においては、ペプチドＹ−２の添加に
おいて、Ｙ−２に含まれるバリル−チロシン（Val-Ty
r）を指標とし、健康食品100ｇ中このバリル−チロシン
を０．１００〜２．０００ｍｇ、好ましくは０．１１０
〜０．５００ｍｇ、より好ましくは０．１３０〜０．２
５０ｍｇの範囲で含有せしめものである。

【００２６】有効成分として使用するペプチドＹ−２
は、分画液、その濃縮液、又はその凍結乾燥品でそれぞ
れバリル−チロシンの含量が異なっているので、それぞ
れの配合に際しては、分画液、その濃縮液、又はその凍
結乾燥品のバリル−チロシンの含量を正確に知り、これ
を基準に、それぞれの添加量を決定しなければならな
い。また、有効成分としてペプチドＹ−２含有物として
は、ペプチドＹ−２の原料であるペプチドα−１０００
を用いるのがよい。ペプチドα−１０００は、凍結乾燥
品で、ペプチドＹ−２を約２５〜３５％含むので、その
濃縮液、又はその凍結乾燥品でバリル−チロシンの含量
を正確に測定し、これからペプチドＹ−２の含量を知
り、ペプチドα−１０００の添加量を決定しなければな
らない。本発明の生理活性健康食品は１００ｇづつ１日
２回(朝、夕)服用するのがよい。

【００２７】以下、本発明を実施例によって更に詳しく
説明する。

【００２８】

【実施例１】：ペプチドα−１０００の調製新鮮イワシ
をデボーナーで処理して採肉した。採肉した魚肉質を１
０ｋｇのすり身に分割し、これを−３０℃以下で急速凍
結した後、粉砕機で粉砕した後等量の水を加え、これを
タンクに送り、１００℃で１０分間加熱して自己消化酵
素を失活させ、熱変性させた。次いでアンモニア水を加
えてｐＨを９．５に調整した。

【００２９】これに市販のアルカリプロテアーゼ製品の
０．１％液を加え、５０℃に１７．５時間保持して酵素
分解を行った。次いで１５分間煮沸して酵素を失活せし
めた。

【００３０】これをバイブスクリーン（１５０メッシ
ュ）に通し５０００ｒｐｍでジエクター処理した後、シ
ャープレス遠心分離機で処理し（１５０００ｒｐｍ）、
ケイソウ土を濾過助剤として用い、濾過処理したものを
ペプチド原液とした。

【００３１】上記で得たペプチド原液に活性炭を１％Ｗ
／Ｖ加え、３０℃で６０分間攪拌した後濾過して濾液を
得た。これを常法にしたがって減圧濃縮（２０℃）した
後、常法にしたがってＵＨＴＳＴ殺菌を行って、α−１
０００（液体）製品を得、これを更に常法にしたがって
噴霧乾燥して粒径６０メッシュのα−１０００（粉末）
製品を得、それぞれこれらの製品は冷凍保管した。

【００３２】このようにして調製した、噴霧乾燥前のペ
プチドα−１０００（液体）について、セファデックス
Ｇ−２５カラムを用い、下記の条件でゲル濾過した結
果、分子量２００〜１０，０００であることが判明し
た。カラムサイズ；径１６×９５０ｍｍ、溶出剤；０．
１Ｍホスフェートバッファー（ｐＨ７．０）、分画：２
ｍｌ／チューブ、流速；１０ｍｌ／ｈ、分子量マーカ
ー；バシトラシン（分子量１４５０）。

【００３３】上記によって得たα−１０００（液体）
は、水分含量が７３．６％（減圧加熱乾燥法）であっ
て、淡黄色を呈し、その１０％溶液のｐＨは７．５を示
し、魚臭もなく苦味も認められなかった。

【００３４】

【実施例２】：ペプチドＹ−２の調製実施例１で得たペプチドα−１０００（液体）８００ｍ
ｌ（Brix４５、たんぱく質含量２９．６％）に２６．２
Ｌの脱イオン水を加え、これをＯＤＳ樹脂（YMC ODS-AQ
120-S50）カラム（１．５×５０ｃｍ）に流してペプチ
ドを吸着させ、脱イオン水で洗浄し、次に、０％、１０
％、２５％、５０％、９９．５％のエタノール水溶液２
７Ｌを用いて順次溶出してそれぞれＹ−１、Ｙ−２、Ｙ
−３、Ｙ−４、Ｙ−５の画分を得た。このうちＹ−２画
分を、４０℃で濃縮してエタノールを除去し、凍結乾燥
してイワシ精製ペプチド（Ｙ−２）を得た。このＹ−２
画分中には、Val-Tyrが０．１５％含有されていた。得
られたペプチドＹ−２は、いずれも乾物で、ペプチドα
−１０００の約３０％(重量)であった。

【００３５】本発明に係る新規ペプチドＹ−２の物理化
学的物質を下記表２に示す。

【００３６】（表２：Ｙ−２画分の物理化学的性質）分子量：２００〜１００００（Asahipak GS-320カラ
ムクロマトグラフィーによる）（図３）融点：１３８℃で着色した（分解点）（第五版食品
添加物公定書の一般試験法に準じ、融点測定法）比旋光度：α＝−５１°（測定温度２０℃、使用波長
ナトリウムＤ線、第５版食品添加物公定書の一般試験
法に準じ、旋光度測定法）溶剤に対する溶解性；水に易溶であるが、エタノー
ル、アセトン、ヘキサンにはほとんど溶解しない（第十
二改正日本薬局方の通則に準じた）酸性、中性、塩基性の区別；中性ｐＨ５．０〜８．
０（１０％溶液）物質の外観；白色〜淡黄色粉末成分：水分５．４％（常圧加熱乾燥法）；タンパク質
９５．３％（ケルダール法、窒素・タンパク質換算係数
６．２５）；脂質０％（ソックスレー抽出法）；灰分
１．１％（直接灰化法）ＵＶスペクトル（図４、第五版食品添加物公定書の
一般試験法に準じ、吸光度測定法）試料の調製：０．１％水溶液使用機器：島津製作所社製ＵＶ−２４０ＩＲスペクトル（図５、臭化カリウム錠剤法）試料の調製試料を臭化カリウムと混合し、錠剤を成形
した。測定条件使用機器：ニコーレ社製FT-IR Magna560 分解能：８ｃｍ積算回数：３２回

【００３７】

【実施例３】：バリル−チロシン含有ペプチドＹ−２投
与による臨床試験 Val-Tyrについて、実際にヒトに対する機能性を実証す
るため、ペプチドＹ−２を用いて血圧の高いボランティ
アを募り、ドリンク形態でのペプチドＹ−２の連続投与
による血圧降下作用を確認した。

【００３８】Ａ：試験飲料の調製ペプチドの投与は実際の機能性食品を想定してドリンク
剤タイプの飲料を用いた。連続投与に無理のない飲用量
として１本当たり１００ｍｌ容量とし、ペプチドを含む
True飲料と含まないPlacebo飲料の味の差をなくすた
め、必要最少限の調味を施して、果糖ブドウ糖液糖９．
０％、精製ハチミツ７．０％、ステビア抽出物０．１２
％、酸味料０．２％、香料０．１２％からなる配合と
し、True飲料には粉末のイワシ精製ペプチド２．０％を
添加した。従ってTrue飲料にはイワシ精製ペプチドＹ−
２画分粉末が２．０ｇ／１００ｍｌ含有され、Val-Tyr
としては試験飲料１本当たり３ｍｇ／１００ｍｌを含む
量とした。Placebo飲料は、イワシ精製ペプチドＹ−２
画分を除き配合水に置き換えた。

【００３９】製造は、実製造ラインにより一括製造し
た。すなわち、１バッチ２００ｋｇ単位で配合し、６０
℃で混合溶解後、１２８℃１０秒のプレート殺菌した
後、十分に洗浄した１００ｍｌ容褐色ビンに９０℃で自
動充填し、室温で放冷後、流水水槽中で急冷した。ラベ
ルはTrue、Placebo全く同じデザインで、ボランティア
及び医師、看護婦には識別不可能な方法で試験に供し
た。

【００４０】Ｂ：試験対象者（１）倫理委員会の承認本スタディに先立ち、「九州大学健康科学センター倫理
委員会」の審査承認を得た。

【００４１】（２）対象者の選定被験者は予め本試験の目的と意義、試験方法及び安全性
について予め説明を受け、本試験内容を十分理解した
後、本試験の同意書に署名した志願者とした。これらの
志願者の中から、医師による問診、心電図、胸部Ｘ線撮
影など諸検査の結果と、過去における定期検診のデータ
から４６例を適格と判定し、被験者として選択した。群
分けは米国合同委員会の基準に基づき、坐位安静時の拡
張期血圧が８５ｍｍＨｇ未満、収縮期血圧が１３０ｍｍ
Ｈｇ未満を血圧正常群（ＮＴ群）、各々の血圧がそれ以
上の高血圧症者及び正常高値血圧者を血圧高値群（ＨＴ
群）とし、ＮＴ群１２名、ＨＴ群３４名に分けた、各々
の群について無作為抽出法により、ペプチド投与のTrue
群と、ペプチド投与しないPlacebo群とに群分けした。
各群の特性を表３に示した。

【００４２】（表３） ────────────────────────────────── 年令 SBP DBP 身長体重 BMI ────────────────────────────────── (A群) 平均値 44.5 146.4 90.5 166.1 65.8 23.79 (n=17) S.E. ±3.3 ±2.3 ±1.8 ±1.9 ±2.2 ±0.6 (B群) 平均値 48.8 145.3 92.1 165.6 64.7 23.51 (n=17) S.E. ±3.1 ±2.6 ±2.0 ±2.7 ±3.3 ±0.9 F 0.19 0.34 0.26 0.31 0.21 0.22 t 0.91 0.25 0.64 0.17 0.29 0.29 ────────────────────────────────── (C群) 平均値 28.3 116.8 69.3 172.7 71.9 24.01 (n=17) S.E. ±2.9 ±3.2 ±2.6 ±2.6 ±5.8 ±1.8 (D群) 平均値 34.4 117.8 71.9 169.6 66.2 22.99 (n= 5) S.E. ±4.1 ±1.5 ±1.8 ±2.9 ±2.6 ±0.6 F 0.33 0.04 0.16 0.48 0.04 0.02 t 1.25 0.24 0.75 0.78 0.78 0.47 ──────────────────────────────────

【００４３】すなわち表に示したように、被験者を、そ
れぞれの血圧にしたがってＨＴ群とＮＴ群に大別し、各
群の被験者を更にペプチド投与のTrue群とペプチドを投
与しないPlacebo群の割合Ａ〜Ｄからなる４群に群分け
した。Ａ群：ＳＢＰ≧１３０ｍｍＨｇ、及び／又は、ＤＢＰ≧
８５ｍｍＨｇ。Trueドリンクを２回／日、４週間投与。Ｂ群：ＳＢＰ≧１３０ｍｍＨｇ、及び／又は、ＤＢＰ≧
８５ｍｍＨｇ。Placeboドリンクを２回／日、４週間投
与。Ｃ群：ＳＢＰ＜１３０ｍｍＨｇ、及び／又は、ＤＢＰ＜
８５ｍｍＨｇ。Trueドリンクを２回／日、４週間投与。Ｄ群：ＳＢＰ＜１３０ｍｍＨｇ、及び／又は、ＤＢＰ＜
８５ｍｍＨｇ。Placeboドリンクを２回／日、４週間投
与。

【００４４】なお、各記号はそれぞれ次の意味を示す。
ＳＢＰ：収縮期血圧（ｍｍＨｇ）、ＤＢＰ：拡張期血圧
（ｍｍＨｇ）、BMI：Body Mass Index、Ｆ：Ｆ−テス
ト、ｔ：ｔ−テスト。

【００４５】Ｃ：プロトコール（１）投与量ペプチド（Ｙ−２画分）４ｇを、体重６０ｋｇ成人男子
を標準とした１日の摂取量とした（Ｙ−２画分中のVal-
Tyr含量は０．１５％とみなした）。なお、亜急性毒性
試験の結果、ラットにおいて、Val-Tyr換算量で２．５
ｍｇ／ｋｇ・日の投与量でも１ヶ月の連続投与の安全性
が確認された。

【００４６】（２）投与方法連続投与試験は、２週間の観察期、１週間のPlacebo投
与期、４週間のTrue投与期のあと４週間の終了期を設け
る無作為二重盲検対照試験を行った。試験飲料はTrue投
与期に、朝食後と夕食前の朝夕２回１本ずつ投与した。
血圧（坐位）、脈拍は１週間に１回、午前９時３０分か
ら１１時３０分の間で各被験者に割り当てた定刻に測定
した。投与開始時、投与終了時に体重、血液、尿検査を
行った。飲料服用、血圧測定、諸検査実施の時間は厳守
させたが、それ以外は自由食、自由行動とした。

【００４７】（３）検査項目及び検査方法自覚症状の有無及び他覚所見は医師が問診及び診察を行
って記録し、試験期間中の測定、採血はすべて看護婦が
行った。一般生理学的検査として血圧、脈拍、体重につ
いて行った。血圧、脈拍数は、測定の５分以上前より安
静坐位を保たせて、（株）日本コーリン社製連続自動血
圧計ＢＰ−２０３ＲＶ２で約２分間隔で３回連続測定
し、その平均値を個人の血圧値及び脈拍値とした。試験
期間を通じて同一の体位で測定した。臨床検査は投与前
後に行った。

【００４８】Ｄ：統計処理数値は平均値±標準誤差（ＳＥ）で示し、臨床検査など
の経時的な変動については対応のあるｔ−検定、さら
に、連続投与試験における０〜４週の血圧については分
散分析により、その有意差を調べた。有意水準は危険率
５％以下をとり、検定結果には次の略号を用いた。＊＊＊：ｐ＜０．００１，＊＊：ｐ＜０．０１，＊：ｐ
＜０．０５

【００４９】本試験の評価は、投与前の観察期４週間の
平均値に対し、各群の値について、）投与前後のpaired
ｔ−検定、２）True群、Placebo群のgroup検定を行っ
た。介入試験は投与前の観察期を２週間とし、その平均
値に対し投与後とのpairedｔ−検定を行った。

【００５０】Ｅ：結果１．自覚症状本試験期間１２週間において、ＮＴ群及びＨＴ群のいず
れも自覚症状はみられなかった。

【００５１】２．血圧及び脈拍数ＮＴ及びＨＴ群に対し、それぞれペプチドを投与したTr
ue群と非投与のPlacebo群とに分け、観察期４週間、投
与後の終了期４週間における血圧と脈拍数の変化を図
６、図７に示した。

【００５２】図６は血圧高値群（ＨＴ群）の血圧と脈拍
の測定結果であって、図中、■及び□は、それぞれＹ−
２投与群（Ａ群）のＳＢＰ値とＤＢＰ値を示し、●及び
○は、それぞれPlacebo群（Ｂ群）のＳＢＰ値とＤＢＰ
値を示す。また、図７は正常血圧群（ＮＴ群）の血圧と
脈拍の測定結果であって、図中、■及び□は、それぞれ
Ｙ−２投与群（Ｃ群）のＳＢＰ値とＤＢＰ値を示し、●
及び○は、それぞれPlacebo群（Ｄ群）のＳＢＰ値とＤ
ＢＰ値を示す。

【００５３】上記結果から次のことが明らかとなった。

【００５４】１）正常血圧群（ＮＴ群）収縮期血圧（ＳＢＰ）１３０ｍｍＨｇ未満及び拡張期血
圧（ＤＢＰ）８５ｍｍＨｇ未満のＮＴ群１２名に対し、
イワシ精製ペプチド（Ｙ−２画分）４ｇ／日（Val-Tyr
として６ｍｇ／日）を連続投与した結果、血圧及び脈拍
数ともに、ペプチド投与前後のpaired ｔ−検定及びTru
e群（Ｃグループ７名）とPlacebo群（Ｄグループ５名）
との検定において、有意差のある変動は認められなかっ
た（図７）。

【００５５】２）血圧高値群（ＨＴ群）収縮期血圧１３０ｍｍＨｇ以上及び／又は拡張期血圧８
５ｍｍＨｇ以上のＨＴ群３４名のうち、Placebo群の５
名は諸般の事情により観察期の間に不参加を表明したの
で対象者から除き、最終的に２９名に対して、同様にイ
ワシ精製ペプチド（Ｙ−２画分：Val-Tyr含有）を投与
した結果、観察期（４週間）に対する投与期（４週間）
のpaired ｔ−検定において、Placebo群（Ｂグループ１
２名）は血圧の変動に有意差は認められなかったが、Tr
ue群（Ａグループ１７名）は有意な血圧降下が認められ
た（図６）。

【００５６】すなわち、True群（Ａグループ）におい
て、投与開始後１週間目に、収縮期血圧９．７ｍｍＨ
ｇ、拡張期血圧５．２ｍｍＨｇの最大血圧降下が認めら
れ統計的に危険率０．１％で有意であった。この血圧降
下作用はペプチド投与期中１％以下の危険率で持続し、
投与後の終了期においても収縮期血圧は３週間目（ｐ＜
０．０１）、拡張期血圧は８週間目まで（ｐ＜０．０
５）有意に継続した。その後は元の観察期血圧に復帰す
る傾向が見られた。

【００５７】また、True群（Ａグループ）とPlacebo群
（Ｂグループ）とによるgroup検定においてもPlacebo群
に対してTrue群は有意に血圧降下を示し、最大の降下差
は投与開始後１週間目に収縮期血圧差１２．１ｍｍＨ
ｇ、拡張期血圧差７．１ｍｍＨｇが認められた。この場
合も投与終了後の終了期においても３週間目まで血圧降
下作用が持続し、その後復帰する傾向が見られた。本試
験中、いずれの群においても脈拍数の異常は認められな
かった。

【００５８】３．臨床検査成績ペプチド投与前及び投与終了時の末梢血液検査、血液生
化学検査及び２４時間蓄尿における変動値を測定した結
果、末梢血液検査においていずれの群もヘマトクリット
値（Ｈｔ）、赤血球項目値（ＭＣＶ、ＭＣＨ、ＭＣＨ
Ｃ）に統計上有意な差がみられたが、数値変動項目自体
は正常値範囲内の軽微な変動であり、臨床上問題となる
ものではなかった。

【００５９】

【実施例４】：介入試験ＨＴ群のうちTrue群からの７名について、終了期４週間
の後さらに２週間の観察期をコントロールとしてPlaceb
o投与を行い、介入試験を実施した（図８）。その結
果、True投与期は本試験と同様１週間目に最大血圧降下
（収縮期血圧降下度１０．８ｍｍＨｇ、拡張期血圧降下
度５．３ｍｍＨｇ）を認め、４週間目まで有意に血圧降
下を示した。その後徐々に復帰の傾向にあり、６週間の
wash-out期間をおいてPlacebo投与した結果、観察期に
対して血圧を下げることなく、むしろ復帰の上昇傾向を
維持して、血圧の復帰は緩やかで、本ペプチドは降圧作
用持続性の大きいことが確認された。

【００６０】図中、●及び○は、それぞれＳＢＰ値及び
ＤＢＰ値を示し、星印は平均血圧値を示し、ＰはPlaceb
oドリンク、ＴはTrueドリンクを示す。有意差に関し、
検定結果には次の略号用いた。＊＊：ｐ＜０．０１，＊
＊＊：ｐ＜０．００１。

【００６１】

【実施例５】ペプチドＹ−２は、４ｇ／日（Val-Tyrと
して６ｍｇ／日）の投与で十分な血圧降下作用が示され
たが、機能性食品としての実用を考えると経済性が大き
な要因となる。そこで血圧降下作用を発現する最少のペ
プチド投与量を確認するため、段階的に投与量を変え
て、有効性が示される限界値を検討した。

【００６２】Ａ：プロトコール前記に準じた条件下で、最少有効投与量の検討を行っ
た。試験飲料の基本組成、試験対象者の母集団も同様と
した。

【００６３】（１）対象者今回は血圧に対する最少有効量の確認であるため、前記
の被験者のうち、正常高値高血圧以上のＨＴのみを対象
として、無作為に抽出し、True群を１４例（平均年齢４
５．１±３．５歳、収縮期血圧１４４．５±２．７ｍｍ
Ｈｇ、拡張期血圧９０．７±１．８ｍｍＨｇ）、Placeb
o群５名（平均年齢５０．４±４．９歳、収縮期血圧１
４７．３±２．９ｍｍＨｇ、拡張期血圧９２．０±２．
８ｍｍＨｇ）で行った。

【００６４】（２）投与量 Val-Tyrに換算量に対して前記したin vivo試験では１０
〜１００μｇ／ｋｇの投与量で有効性を認めていたがラ
ットとヒトの差、静注と経口投与方法の差などを考慮し
て、１０μｇ／ｋｇを下回る量からスタートし、順次投
与量を上げて有効性発現の境界値を探ることとした。す
なわち、イワシ精製ペプチド（Ｙ−２画分）０．２５ｇ
／日（Val-Tyr含量６．２５μｇ／ｋｇ・日）、０．５
０ｇ／日（Val-Tyr含量１２．５μｇ／ｋｇ・日）、
１．００ｇ／日（Val-Tyr含量２５μｇ／ｋｇ・日）と
倍量ずつ増やしていくこととした。

【００６５】（２）投与方法２週間の観察期をおき、投与開始後２週間単位で投与量
を変更した。試験飲料は前記と同様、朝夕２回１本ずつ
投与し、試験期間は有効性が確認できた時点で終了とし
た。

【００６６】Ｂ：結果得られた結果を図９に示す。図９は、血圧高値群（ＨＴ
群）のペプチドＹ−２（サーデンペプチドを含有）投与
量の変化による血圧測定値の変化を示したものであっ
て、図中、■及び□は、それぞれＹ−２投与群のＳＢＰ
値とＤＢＰ値を示し、●及び○は、それぞれPlacebo群
のＳＢＰ値とＤＢＰ値を示し

【００６７】図９に示すとおり、イワシ精製ペプチド
（Ｙ−２画分：Val-Tyr含有）を０．２５ｇ／日の投与
からスタートし、２週間目に収縮期血圧で５．６ｍｍＨ
ｇ、拡張期血圧で３．２ｍｍＨｇ投与前より下降し、い
ずれの期も危険率５％で統計的有意差を認めた。さらに
３週間目から投与量を０．５０ｇ／日に増やしたとこ
ろ、３週間目で収縮期血圧が８．２ｍｍＨｇ、拡張期血
圧が３．３ｍｍＨｇ下がり、収縮期血圧において危険率
１％で統計的有意差が認められた。検定結果には次の略
号を用いた。＊＊：ｐ＜０．０１，＊：ｐ＜０．０５。

【００６８】一方、Placebo群は、ほとんど血圧変動が
みられず、また両群とも脈拍の異常は認められなかっ
た。従って本ペプチドのヒトに対する有効性は０．２５
ｇ／日（Val-Tyr含量６．２５μｇ／ｋｇ・日）で統計
的にその傾向が認められ、０．５０ｇ／日（Val-Tyr含
量１２．５μｇ／ｋｇ・日）では危険率１％で有効性が
確認された。投与量０．２５ｇ／日（Val-Tyr含量６．
２５μｇ／ｋｇ・日）においても投与開始後から徐々に
降下を続けており、同投与量でも長期間継続すれば実用
上十分な効果が得られると判断された。また実用上の最
少有効量を０．２５ｇ／日（Val-Tyr含量６．２５μｇ
／ｋｇ・日）とすれば、前節の試験においてその１６倍
量の２８日間連続投与に対しても、血液生化学上及び臨
床上問題となる変化は認められず、また現在市販されて
いるＡＣＥ阻害剤にみられる副作用も問診による報告で
は皆無であった。

【００６９】

【実施例６】：血圧正常化用生理活性健康食品の製造（配合）果糖ブドウ糖液糖９．０ｇ精製ハチミツ７．０ｇステビア抽出物０．０９ｇ酸味料（クエン酸）０．２ｇ香料０．１２ｇ Val-Tyrを0.130mg／10.0g含むＹ−２画分濃縮液１０．０ｇ精製水で全量を１００ｇとする。

【００７０】上記配合を６０℃で混合溶解した後、１２
８℃、１０秒のプレート殺菌した。次いでこれを充分に
洗浄した１００ｍｌ容褐色ビンに９０℃で充填し、室温
で放冷後、流水水槽中で急冷してドリンクを製造した。

【００７１】

【実施例７】：血圧正常化等生理機能正常化用生理活性
健康食品の製造（配合）果糖ブドウ糖液糖１５．０ｇ精製ハチミツ１５．０ｇステビア抽出物０．１３ｇ酸味料（クエン酸）０．４ｇ香料０．２０ｇ Val-Tyrを0.250mg／50.0g含む実施例1の α‐1000(液体) ５０．０ｇ精製水で全量を２００ｇとする。

【００７２】上記配合を６０℃で混合溶解した後、１２
８℃、１０秒のプレート殺菌した。次いでこれを充分に
洗浄した２００ｍｌ容褐色ビンに９０℃で充填し、室温
で放冷後、流水水槽中で急冷してドリンクを製造した。

【００７３】

【発明の効果】本発明においては、ペプチドＹ−２の使
用によって各種生理機能改善性生理活性健康食品を提供
することができた。特に、本発明の血圧正常化用生理活
性健康食品においては、ペプチドＹ−２の添加におい
て、Ｙ−２に含まれるバリル−チロシン（Val-Tyr）を
指標とし、液状健康食品100ｇ中該バリル−チロシンを
０．１００〜２．０００ｍｇ、好ましくは０．１１０〜
０．５００ｍｇ、より好ましくは０．１３０〜０．２５
０ｍｇの範囲で含有せしめことによって血圧正常化の顕
著な効果が奏されるものである。

【図面の簡単な説明】

【図１】ペプチドα−１０００のＵＶスペクトルを示
す。

【図２】ペプチドα−１０００のＩＲスペクトルを示
す。

【図３】ペプチドＹ−２のゲル濾過よる分子量分布を示
す。

【図４】ペプチドＹ−２のＵＶスペクトルを示す。

【図５】ペプチドＹ−２のＩＲスペクトルを示す。

【図６】ＨＴ群の血圧と脈拍の測定結果を示す。

【図７】ＨＴ群の血圧と脈拍の測定結果を示す。

【図８】介入試験の結果を示す。

【図９】投与量の変化による血圧の変化を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ２３Ｌ 2/52 Ａ６１Ｐ 9/00 2/66 Ａ２３Ｌ 2/00 Ｆ // Ａ６１Ｋ 38/00 ＪＡ６１Ｐ 9/00 Ａ６１Ｋ 37/18 Ｆターム(参考） 4B017 LC03 LK15 LP01 LP06 4B018 LB01 LB03 LB04 LB05 LB08 LE03 MD20 ME04 MF01 MF06 MF12 4B020 LB02 LC05 LK07 LP12 LP13 4B041 LC10 LD01 LD04 LK13 LP05 4C084 AA01 BA02 BA43 CA59 DC40 MA52 NA05 NA06 NA07 ZA422 ZC172

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】有効成分として下記の理化学的性質を有
するペプチドＹ−２もしくはその含有物の添加におい
て、ペプチドＹ−２に含まれるバリル−チロシン（Val-
Tyr）を指標とし、健康食品100ｇ中に、該バリル−チロ
シンを０．０１０〜３．０００ｍｇの範囲で、ペプチド
Ｙ−２もしくはその含有物を含有せしめてなる生理活性
健康食品。（Ａ）分子量；２００〜１０，０００（Asahipak GS−320 カラムクロマトグラフィーによ
る）（Ｂ）融点；１３８℃で着色（分解点）（Ｃ）比旋光度； α＝−５１° （Ｄ）溶剤に対する溶解性；水に易溶；エタノール、アセトン、ヘキサンにはほとん
ど溶解しない。（Ｅ）酸性、中性、塩基性の区別；中性ｐＨ５．０〜８．０（１０％溶液）（Ｆ）外観；白色〜淡黄色粉末（Ｇ）ＵＶスペクトル；図４に示すとおり。（Ｈ）ＩＲスペクトル；図５に示すとおり。
【請求項２】有効成分として下記の理化学的性質を有
するペプチドＹ−２もしくはその含有物の添加におい
て、Ｙ−２に含まれるバリル−チロシン（Val-Tyr）を
指標とし、健康食品100ｇ中に、該バリル−チロシンを
０．１００〜２．０００ｍｇ、好ましくは０．１１０〜
０．５００ｍｇ、より好ましくは０．１３０〜０．２５
０ｍｇの範囲で、ペプチドＹ−２もしくはその含有物を
含有せしめてなる血圧正常化用生理活性健康食品。（Ａ）分子量；２００〜１０，０００（Asahipak GS−320 カラムクロマトグラフィーによ
る）（Ｂ）融点；１３８℃で着色（分解点）（Ｃ）比旋光度； α＝−５１° （Ｄ）溶剤に対する溶解性；水に易溶；エタノール、アセトン、ヘキサンにはほとん
ど溶解しない。（Ｅ）酸性、中性、塩基性の区別；中性ｐＨ５．０〜８．０（１０％溶液）（Ｆ）外観；白色〜淡黄色粉末（Ｇ）ＵＶスペクトル；図４に示すとおり。（Ｈ）ＩＲスペクトル；図５に示すとおり。
【請求項３】ペプチドＹ−２の含有物が、ペプチドＹ
−２を約２５〜３５％含むペプチドα−１０００である
ことを特徴とする請求項１又は２の生理活性健康食品。
【請求項４】生理活性健康食品が、清涼飲料、酸乳飲
料、健康ドリンクなどの液状食品、クッキー、練製品、
トーフなどの固状食品、又は、ジャム、スプレッドなど
のペースト状食品であることを特徴とする請求項１、２
又は３の生理活性健康食品。