JP4053686B2 - 生理活性健康食品 - Google Patents
生理活性健康食品 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4053686B2 JP4053686B2 JP12240499A JP12240499A JP4053686B2 JP 4053686 B2 JP4053686 B2 JP 4053686B2 JP 12240499 A JP12240499 A JP 12240499A JP 12240499 A JP12240499 A JP 12240499A JP 4053686 B2 JP4053686 B2 JP 4053686B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- peptide
- blood pressure
- group
- health food
- food
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
- A23J1/04—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from fish or other sea animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
- A23L2/52—Adding ingredients
- A23L2/66—Proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/461—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from fish
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Beans For Foods Or Fodder (AREA)
- Jellies, Jams, And Syrups (AREA)
- Non-Alcoholic Beverages (AREA)
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、生理活性健康食品に関するものであり、更に詳細には、ペプチドＹ−２(ペプチドＹ−２に含まれるバリル−チロシン（Val-Tyr）量を指標として)を特定量含有してなる各種生理機能改善性健康食品に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
先に、本発明者らは、魚肉を熱変性処理した後、中性ないしアルカリプロテアーゼ処理して加水分解し、酵素を失活せしめた後、分離処理することによってＡＣＥ（アンジオテンシン変換酵素）阻害活性を有するペプチドα−１０００を得た（特開平５−２７１２９７）。即ち、ペプチドα−１０００の出現によって、ペプチド(群)による血圧上昇抑制の可能性が示されたのである。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者らは、高血圧疾患及び／又は高血圧になり易いヒト、あるいは高血圧を予防したり健康を維持したいヒトが大幅に増加している現在の状況に鑑み、血圧を直接降下することのできる降圧剤の開発も重要ではあるが、直接治療することを目的とするのではなく、血圧低下または血圧上昇抑制に寄与して血圧を正常に維持することのできるおだやかな作用を有し且つ長期間の投与が可能な予防的な物質の開発も重要である点に着目した。
【０００４】
そして、上記目的を達成し得る物質としては、経口投与でき、しかも服用し易く、製品化しやすい食品、例えば、特定保健用食品としての認可が可能な液状健康食品が好適であるとの観点にたち、血圧正常化健康食品を新規に開発することを課題とした。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
この課題を解決するためには、血圧上昇抑制、血圧降下作用にすぐれているだけでなく、長期間服用することができ、安全性についても問題のない物質を開発することが必要であるとの観点にたち、本発明者らは天然由来の物質にその起源を求めることにした。
【０００６】
そして本発明者らは、各方面から検討した結果、本発明者らが先に開発したイワシ等の魚肉由来のペプチドα−１０００がＡＣＥ阻害活性を有する点に着目し、ペプチドα−１０００から本発明に係る血圧正常化健康食品の調製に使用可能な有効成分を単離することを目的とした。
【０００７】
本発明者らは、鋭意研究した結果、ペプチドα−１０００の水溶液をペプタイド吸着性樹脂処理した後、１０％エタノールを用いて溶出してＹ−２画分を得、このＹ−２画分が新規ペプチド(群)であることを確認しただけでなく、このＹ−２画分にはバリル−チロシン（Val-Tyr）が含有されていて、バリル−チロシンを含むペプチド(群)が血圧正常化に有効に作用することを確認し、遂に本発明の完成に至ったものである。
更に、このＹ−２画分を詳細に検討したところ、血圧正常化以外にも毛髪生育促進性が認められ、また、筋肉機能正常化、関節機能正常化など各種生理機能正常化が認められるに至った。
【０００８】
すなわち本発明は、有効成分としてペプチドＹ−２もしくはその含有物の添加において、ペプチドＹ−２に含まれるバリル−チロシン（Val-Tyr）を指標とし、健康食品100ｇ中該バリル−チロシンを０．０１０〜３．０００ｍｇの範囲で、ペプチドＹ−２もしくはその含有物を含有せしめてなる生理活性健康食品に関する。
また、本発明は、有効成分としてペプチドＹ−２もしくはその含有物の添加において、ペプチドＹ−２に含まれるバリル−チロシン（Val-Tyr）を指標とし、健康食品100ｇ中該バリル−チロシンを０．１００〜２．０００ｍｇ、好ましくは０．１１０〜０．５００ｍｇ、より好ましくは０．１３０〜０．２５０ｍｇの範囲で、ペプチドＹ−２もしくはその含有物を含有せしめてなる血圧正常化用生理活性健康食品に関する。
【０００９】
そして、本発明の血圧正常化用生理活性健康食品においては、動物実験や酵素の阻害度を測定する間接的な方法ではなく、ヒトに対してバリル−チロシンを含有するＹ−２を直接投与してヒトの血圧を直接測定する直接法（臨床試験）によって、血圧降下作用、しかもきわめてすぐれた血圧降下作用を確認するのに成功したものであり、あわせてバリル−チロシンの安全性、服用や製剤あるいは飲食品製品化等の容易性及びその配合量もヒトについて確認した点できわめて特徴的であり、まさに画期的なものである。
【００１０】
以下、本発明について詳述するが、先ず、本ペプチドＹ−２の起源として用いるペプチドα−１０００について説明する。
【００１１】
ペプチドα−１０００は、魚介類を原料として製造するものであって、例えば特開平５−２７１２９７号にしたがって製造することができ、先ず、魚介類を採肉機、デボーナー等によって処理して魚肉質を分離する。原料は出来る限り新鮮なものが好ましい。分離した魚肉は、１０ｋｇ程度のすり身に分割し、このまま次の処理に使用してもよいが、−２０〜−５０℃、例えば−３０℃程度の冷気を吹き付けて急速連結し、−２０〜−２５℃に保存しておき、必要に応じてこれを適宜使用することにしてもよい。
【００１２】
魚介類としては、イワシ、アジ、マグロ、カツオ、サンマ、サバ等赤身魚；ヒラメ、タイ、キス、コノシロ、タラ、ニシン、ブリ等白身魚；サメ、エイ等軟骨魚肉；ワカサギ、コイ、イワナ、ヤマメ等淡水魚肉；アイザメ、アンコウ等深海魚肉のほか、エビ、カニ、タコ、アミ類等も適宜使用できる。
【００１３】
採肉した後、粉砕機等によって魚介類を粉砕し、原料重量に対して１／２量〜２０倍量、好ましくは等量〜１０倍量の加水を行った後、加熱処理し、もって、自己消化酵素を失活させ、且つ殺菌を死滅させるとともに、タンパク質を熱変性させて後に行う酵素反応効率を上昇せしめる。加熱条件としては、このような作用が奏される条件であればすべての条件が利用できるが、例えば６５℃以上、２〜６０分、好ましくは８０℃以上、５〜３０分とするのがよい。
【００１４】
次いで、アンモニア水か、水酸化ナトリウム（カリウム）水溶液等アルカリ剤を加えて、使用する蛋白分解酵素の適値にｐＨを調整し、（例えばアルカリプロテアーゼの場合は、ｐＨ７．５以上、好ましくは８以上）、温度も酵素適温（使用酵素によって異なるが、２０〜６５℃、アルカリプロテアーゼの場合は３５〜６０℃、好ましくは４０〜５５℃）に加温し、蛋白分解酵素を加えて３０分〜３０時間（アルカリプロテアーゼの場合は３０分〜２５時間、好ましくは１〜１７時間）処理する。
【００１５】
蛋白分解酵素としては、中性又はアルカリ性条件下で蛋白質を分解し得る酵素であればすべての酵素が単独で又は混合して使用し得る。その起源は、動植物のほかに微生物に求めることができ、ペプシン、レニン、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、プロメレインのほか、細菌プロテアーゼ、糸状菌プロテアーゼ、放線菌プロテアーゼ等も広く利用できる。これらの酵素は、通常、市販されているものが使用されるが、未精製の酵素、酵素を含有した培養液、麹といった固体又は液体の酵素含有物も、目的により必要に応じて使用することができる。酵素の添加量としては０．１％〜５．０％程度でもよい。
【００１６】
次いで必要あれば中和処理を行った後、７０℃（好適には８０℃）以上の温度に２〜６０分間（好適には５〜３０分間）保持し、酵素を失活させるとともに後に行う分離を良好ならしめる。加熱失活処理後、バイブスクリーン等によって粗分離し、必要によりジェクター処理した後、超遠心分離処理して、浮遊物、沈殿物を除去する。
【００１７】
次に、ケイソウ土等濾過助剤（例えばセライト）を用いて濾過し、濾液を活性炭処理して（０．０５〜２０％Ｗ／Ｖ、好ましくは０．１〜１０％Ｗ／Ｖ使用、２０〜６５℃、好ましくは２５〜６０℃、１５分〜４時間、好ましくは３０分〜２時間）、脱臭、脱色、精製する。
【００１８】
これを減圧濃縮（０〜５０℃）その他常法にしたがって濃縮し（３０Ｂ×程度にまで）た後、必要あれば再度（超）遠心分離又は濾過してペプチド原液を得る。このようにして得たペプチド原液は、殺菌（ＵＨＴＳＴその他常法による）した後、容器に充填して製品（α−１０００（液体））とする。また、希望するのであれば、更に濃縮したりあるいは逆に希釈したり、また、噴霧乾燥、凍結乾燥等の常法によって６０メッシュ程度に粉末化し、これを袋等の容器に充填して製品（α−１０００（粉末））とすることもできる。これらの製品は、冷蔵ないし冷凍保管する。
【００１９】
このようにして得た、液状、ペースト状ないし粉末状のペプチドがα−１０００である。
【００２０】
ペプチドα−１０００（スプレードライ粉末）の物理化学的性質は、下記表１に示すとおりである。
【００２１】
（表１：ペプチドα−１０００（粉末）の物理化学的性質）
（Ａ）分子量；
２００〜１０，０００
（セファデックスＧ−２５カラムクロマトグラフィーによる）
（Ｂ）融点；１１９℃で着色（分解点）
（Ｃ）比旋光度
α＝−２２°（測定温度２０℃、使用波長ナトリウムＤ線）
（Ｄ）溶剤に対する溶解性；
水に易溶；エタノール、アセトン、ヘキサンにはほとんど溶解しない。
（Ｅ）酸性、中性、塩基性の区別；
中性 ｐＨ５．０〜８．０（１０％溶液）
（Ｆ）外観、成分；
白色粉末；水分５．１４％（減圧加熱乾燥法）；蛋白質８７．５％
（ケルダール法、窒素・蛋白質換算係数 ６．２５）；脂質０％
（ソックスレー抽出法）；灰分５．０％（直接灰化法）
（Ｇ）ＵＶスペクトル；
図１に示すとおり。
（Ｈ）ＩＲスペクトル；
図２に示すとおり。
（Ｉ）特 性；
魚肉由来であり、加熱によって自己消化酵素を失活させ、蛋白分解酵素で加水分解して得たペプチドである。
【００２２】
このようにして調製したペプチドα−１０００は、液状の場合はそのまま、粉末の場合は加水した後、これをＯＤＳ樹脂その他ペプチド吸着性樹脂に通し、水などで洗浄した後、各種濃度のエタノールなどを用いて順次溶出するが、１０％エタノールで溶出して得られる画分Ｙ−２が本発明に用いる有効成分となる。この画分Ｙ−２をペプチドＹ−２として使用する。
【００２３】
本発明は、上記した新規ペプチドであるＹ−２にはバリル−チロシン（Val-tyrosine、Val-Tyr：以下、サーデンペプチドということもある）が０．０５〜０．３５％程度(凍結乾燥品中)含有しており、また、このサーデンペプチドのヒトに対する１日当りの有効量も後記するように実際のヒトによるin vivo臨床試験によってそのすぐれた血圧降下作用が確認され、安全性にも問題がないところから、予防や健康維持の目的で長期間に亘っても服用可能な血圧正常化用生理活性健康食品としたのである。
また、本発明は、上記した新規ペプチド(群)であるペプチドＹ−２(もしくはその含有物)を適宜配合して、各種生理機能改善性健康食品とすることができる。
【００２４】
本発明に係る健康食品（清涼飲料、酸乳飲料、健康ドリンクなどの液状食品、クッキー、練製品、トーフなどの固状食品、又は、ジャム、スプレッドなどのペースト状食品などの食品のいずれでもよい）を製造するには、ペプチドＹ−２を有効成分とし、これを各種食品の製造に用いられ主原料、その他副原料（砂糖、果糖ブドウ糖液糖、ハチミツ、香料、酸味料（クエン酸、リンゴ酸等）、甘味料（ステビア抽出物等）、増粘剤、ビタミン類、その他）を配合して液状食品、固状食品又はペースト状食品に調製すればよい。本発明に係る食品は、特定保健用食品のほか、栄養食品、健康食品、臨床栄養食品等各種の用途に広く使用することができる。
【００２５】
有効成分としては、ペプチドＹ−２に含まれるバリル−チロシン(Val-Tyr)を指標として、健康食品100ｇ中このバリル−チロシンを０．０１０〜３．０００ｍｇの範囲で、ペプチドＹ−２を含有せしめる。特に、血圧正常化用においては、ペプチドＹ−２の添加において、Ｙ−２に含まれるバリル−チロシン（Val-Tyr）を指標とし、健康食品100ｇ中このバリル−チロシンを０．１００〜２．０００ｍｇ、好ましくは０．１１０〜０．５００ｍｇ、より好ましくは０．１３０〜０．２５０ｍｇの範囲で含有せしめものである。
【００２６】
有効成分として使用するペプチドＹ−２は、分画液、その濃縮液、又はその凍結乾燥品でそれぞれバリル−チロシンの含量が異なっているので、それぞれの配合に際しては、分画液、その濃縮液、又はその凍結乾燥品のバリル−チロシンの含量を正確に知り、これを基準に、それぞれの添加量を決定しなければならない。
また、有効成分としてペプチドＹ−２含有物としては、ペプチドＹ−２の原料であるペプチドα−１０００を用いるのがよい。ペプチドα−１０００は、凍結乾燥品で、ペプチドＹ−２を約２５〜３５％含むので、その濃縮液、又はその凍結乾燥品でバリル−チロシンの含量を正確に測定し、これからペプチドＹ−２の含量を知り、ペプチドα−１０００の添加量を決定しなければならない。
本発明の生理活性健康食品は１００ｇづつ１日２回(朝、夕)服用するのがよい。
【００２７】
以下、本発明を実施例によって更に詳しく説明する。
【００２８】
【実施例１】
：ペプチドα−１０００の調製
新鮮イワシをデボーナーで処理して採肉した。採肉した魚肉質を１０ｋｇのすり身に分割し、これを−３０℃以下で急速凍結した後、粉砕機で粉砕した後等量の水を加え、これをタンクに送り、１００℃で１０分間加熱して自己消化酵素を失活させ、熱変性させた。次いでアンモニア水を加えてｐＨを９．５に調整した。
【００２９】
これに市販のアルカリプロテアーゼ製品の０．１％液を加え、５０℃に１７．５時間保持して酵素分解を行った。次いで１５分間煮沸して酵素を失活せしめた。
【００３０】
これをバイブスクリーン（１５０メッシュ）に通し５０００ｒｐｍでジエクター処理した後、シャープレス遠心分離機で処理し（１５０００ｒｐｍ）、ケイソウ土を濾過助剤として用い、濾過処理したものをペプチド原液とした。
【００３１】
上記で得たペプチド原液に活性炭を１％Ｗ／Ｖ加え、３０℃で６０分間攪拌した後濾過して濾液を得た。これを常法にしたがって減圧濃縮（２０℃）した後、常法にしたがってＵＨＴＳＴ殺菌を行って、α−１０００（液体）製品を得、これを更に常法にしたがって噴霧乾燥して粒径６０メッシュのα−１０００（粉末）製品を得、それぞれこれらの製品は冷凍保管した。
【００３２】
このようにして調製した、噴霧乾燥前のペプチドα−１０００（液体）について、セファデックスＧ−２５カラムを用い、下記の条件でゲル濾過した結果、分子量２００〜１０，０００であることが判明した。カラムサイズ；径１６×９５０ｍｍ、溶出剤；０．１Ｍホスフェートバッファー（ｐＨ７．０）、分画：２ｍｌ／チューブ、流速；１０ｍｌ／ｈ、分子量マーカー；バシトラシン（分子量１４５０）。
【００３３】
上記によって得たα−１０００（液体）は、水分含量が７３．６％（減圧加熱乾燥法）であって、淡黄色を呈し、その１０％溶液のｐＨは７．５を示し、魚臭もなく苦味も認められなかった。
【００３４】
【実施例２】
：ペプチドＹ−２の調製
実施例１で得たペプチドα−１０００（液体）８００ｍｌ（Brix４５、たんぱく質含量２９．６％）に２６．２Ｌの脱イオン水を加え、これをＯＤＳ樹脂（YMC ODS-AQ120-S50）カラム（１．５×５０ｃｍ）に流してペプチドを吸着させ、脱イオン水で洗浄し、次に、０％、１０％、２５％、５０％、９９．５％のエタノール水溶液２７Ｌを用いて順次溶出してそれぞれＹ−１、Ｙ−２、Ｙ−３、Ｙ−４、Ｙ−５の画分を得た。このうちＹ−２画分を、４０℃で濃縮してエタノールを除去し、凍結乾燥してイワシ精製ペプチド（Ｙ−２）を得た。このＹ−２画分中には、Val-Tyrが０．１５％含有されていた。得られたペプチドＹ−２は、いずれも乾物で、ペプチドα−１０００の約３０％(重量)であった。
【００３５】
本発明に係る新規ペプチドＹ−２の物理化学的物質を下記表２に示す。
【００３６】
（表２：Ｙ−２画分の物理化学的性質）
▲１▼分子量：２００〜１００００（Asahipak GS-320カラムクロマトグラフィーによる）（図３）
▲２▼融点：１３８℃で着色した（分解点）（第五版 食品添加物公定書の一般試験法に準じ、融点測定法）
▲３▼比旋光度：α＝−５１°（測定温度２０℃、使用波長ナトリウムＤ線、第５版 食品添加物公定書の一般試験法に準じ、旋光度測定法）
▲４▼溶剤に対する溶解性；水に易溶であるが、エタノール、アセトン、ヘキサンにはほとんど溶解しない（第十二改正日本薬局方の通則に準じた）
▲５▼酸性、中性、塩基性の区別；中性 ｐＨ５．０〜８．０（１０％溶液）
▲６▼物質の外観；白色〜淡黄色粉末
▲７▼成分：水分５．４％（常圧加熱乾燥法）；タンパク質９５．３％（ケルダール法、窒素・タンパク質換算係数 ６．２５）；脂質０％（ソックスレー抽出法）；灰分１．１％（直接灰化法）
▲８▼ＵＶスペクトル（図４、第五版 食品添加物公定書の一般試験法に準じ、吸光度測定法）
試料の調製：０．１％水溶液
使用機器：島津製作所社製ＵＶ−２４０
▲９▼ＩＲスペクトル（図５、臭化カリウム錠剤法）
試料の調製 試料を臭化カリウムと混合し、錠剤を成形した。
測定条件
使用機器：ニコーレ社製FT-IR Magna560
分解能：８ｃｍ
積算回数：３２回
【００３７】
【実施例３】
：バリル−チロシン含有ペプチドＹ−２投与による臨床試験
Val-Tyrについて、実際にヒトに対する機能性を実証するため、ペプチドＹ−２を用いて血圧の高いボランティアを募り、ドリンク形態でのペプチドＹ−２の連続投与による血圧降下作用を確認した。
【００３８】
Ａ：試験飲料の調製
ペプチドの投与は実際の機能性食品を想定してドリンク剤タイプの飲料を用いた。連続投与に無理のない飲用量として１本当たり１００ｍｌ容量とし、ペプチドを含むTrue飲料と含まないPlacebo飲料の味の差をなくすため、必要最少限の調味を施して、果糖ブドウ糖液糖９．０％、精製ハチミツ７．０％、ステビア抽出物０．１２％、酸味料０．２％、香料０．１２％からなる配合とし、True飲料には粉末のイワシ精製ペプチド２．０％を添加した。従ってTrue飲料にはイワシ精製ペプチドＹ−２画分粉末が２．０ｇ／１００ｍｌ含有され、Val-Tyrとしては試験飲料１本当たり３ｍｇ／１００ｍｌを含む量とした。Placebo飲料は、イワシ精製ペプチドＹ−２画分を除き配合水に置き換えた。
【００３９】
製造は、実製造ラインにより一括製造した。すなわち、１バッチ２００ｋｇ単位で配合し、６０℃で混合溶解後、１２８℃１０秒のプレート殺菌した後、十分に洗浄した１００ｍｌ容褐色ビンに９０℃で自動充填し、室温で放冷後、流水水槽中で急冷した。ラベルはTrue、Placebo全く同じデザインで、ボランティア及び医師、看護婦には識別不可能な方法で試験に供した。
【００４０】
Ｂ：試験対象者
（１）倫理委員会の承認
本スタディに先立ち、「九州大学健康科学センター倫理委員会」の審査承認を得た。
【００４１】
（２）対象者の選定
被験者は予め本試験の目的と意義、試験方法及び安全性について予め説明を受け、本試験内容を十分理解した後、本試験の同意書に署名した志願者とした。これらの志願者の中から、医師による問診、心電図、胸部Ｘ線撮影など諸検査の結果と、過去における定期検診のデータから４６例を適格と判定し、被験者として選択した。群分けは米国合同委員会の基準に基づき、坐位安静時の拡張期血圧が８５ｍｍＨｇ未満、収縮期血圧が１３０ｍｍＨｇ未満を血圧正常群（ＮＴ群）、各々の血圧がそれ以上の高血圧症者及び正常高値血圧者を血圧高値群（ＨＴ群）とし、ＮＴ群１２名、ＨＴ群３４名に分けた、各々の群について無作為抽出法により、ペプチド投与のTrue群と、ペプチド投与しないPlacebo群とに群分けした。各群の特性を表３に示した。
【００４２】
【００４３】
すなわち表に示したように、被験者を、それぞれの血圧にしたがってＨＴ群とＮＴ群に大別し、各群の被験者を更にペプチド投与のTrue群とペプチドを投与しないPlacebo群の割合Ａ〜Ｄからなる４群に群分けした。
Ａ群：ＳＢＰ≧１３０ｍｍＨｇ、及び／又は、ＤＢＰ≧８５ｍｍＨｇ。Trueドリンクを２回／日、４週間投与。
Ｂ群：ＳＢＰ≧１３０ｍｍＨｇ、及び／又は、ＤＢＰ≧８５ｍｍＨｇ。Placeboドリンクを２回／日、４週間投与。
Ｃ群：ＳＢＰ＜１３０ｍｍＨｇ、及び／又は、ＤＢＰ＜８５ｍｍＨｇ。Trueドリンクを２回／日、４週間投与。
Ｄ群：ＳＢＰ＜１３０ｍｍＨｇ、及び／又は、ＤＢＰ＜８５ｍｍＨｇ。Placeboドリンクを２回／日、４週間投与。
【００４４】
なお、各記号はそれぞれ次の意味を示す。ＳＢＰ：収縮期血圧（ｍｍＨｇ）、ＤＢＰ：拡張期血圧（ｍｍＨｇ）、BMI：Body Mass Index、Ｆ：Ｆ−テスト、ｔ：ｔ−テスト。
【００４５】
Ｃ：プロトコール
（１）投与量
ペプチド（Ｙ−２画分）４ｇを、体重６０ｋｇ成人男子を標準とした１日の摂取量とした（Ｙ−２画分中のVal-Tyr含量は０．１５％とみなした）。なお、亜急性毒性試験の結果、ラットにおいて、Val-Tyr換算量で２．５ｍｇ／ｋｇ・日の投与量でも１ヶ月の連続投与の安全性が確認された。
【００４６】
（２）投与方法
連続投与試験は、２週間の観察期、１週間のPlacebo投与期、４週間のTrue投与期のあと４週間の終了期を設ける無作為二重盲検対照試験を行った。試験飲料はTrue投与期に、朝食後と夕食前の朝夕２回１本ずつ投与した。血圧（坐位）、脈拍は１週間に１回、午前９時３０分から１１時３０分の間で各被験者に割り当てた定刻に測定した。投与開始時、投与終了時に体重、血液、尿検査を行った。
飲料服用、血圧測定、諸検査実施の時間は厳守させたが、それ以外は自由食、自由行動とした。
【００４７】
（３）検査項目及び検査方法
自覚症状の有無及び他覚所見は医師が問診及び診察を行って記録し、試験期間中の測定、採血はすべて看護婦が行った。一般生理学的検査として血圧、脈拍、体重について行った。血圧、脈拍数は、測定の５分以上前より安静坐位を保たせて、（株）日本コーリン社製連続自動血圧計ＢＰ−２０３ＲＶ２で約２分間隔で３回連続測定し、その平均値を個人の血圧値及び脈拍値とした。試験期間を通じて同一の体位で測定した。臨床検査は投与前後に行った。
【００４８】
Ｄ：統計処理
数値は平均値±標準誤差（ＳＥ）で示し、臨床検査などの経時的な変動については対応のあるｔ−検定、さらに、連続投与試験における０〜４週の血圧については分散分析により、その有意差を調べた。有意水準は危険率５％以下をとり、検定結果には次の略号を用いた。
＊＊＊：ｐ＜０．００１，＊＊：ｐ＜０．０１，＊：ｐ＜０．０５
【００４９】
本試験の評価は、投与前の観察期４週間の平均値に対し、各群の値について、）投与前後のpaired ｔ−検定、２）True群、Placebo群のgroup検定を行った。介入試験は投与前の観察期を２週間とし、その平均値に対し投与後とのpaired ｔ−検定を行った。
【００５０】
Ｅ：結果
１．自覚症状
本試験期間１２週間において、ＮＴ群及びＨＴ群のいずれも自覚症状はみられなかった。
【００５１】
２．血圧及び脈拍数
ＮＴ及びＨＴ群に対し、それぞれペプチドを投与したTrue群と非投与のPlacebo群とに分け、観察期４週間、投与後の終了期４週間における血圧と脈拍数の変化を図６、図７に示した。
【００５２】
図６は血圧高値群（ＨＴ群）の血圧と脈拍の測定結果であって、図中、■及び□は、それぞれＹ−２投与群（Ａ群）のＳＢＰ値とＤＢＰ値を示し、●及び○は、それぞれPlacebo群（Ｂ群）のＳＢＰ値とＤＢＰ値を示す。また、図７は正常血圧群（ＮＴ群）の血圧と脈拍の測定結果であって、図中、■及び□は、それぞれＹ−２投与群（Ｃ群）のＳＢＰ値とＤＢＰ値を示し、●及び○は、それぞれPlacebo群（Ｄ群）のＳＢＰ値とＤＢＰ値を示す。
【００５３】
上記結果から次のことが明らかとなった。
【００５４】
１）正常血圧群（ＮＴ群）
収縮期血圧（ＳＢＰ）１３０ｍｍＨｇ未満及び拡張期血圧（ＤＢＰ）８５ｍｍＨｇ未満のＮＴ群１２名に対し、イワシ精製ペプチド（Ｙ−２画分）４ｇ／日（Val-Tyrとして６ｍｇ／日）を連続投与した結果、血圧及び脈拍数ともに、ペプチド投与前後のpaired ｔ−検定及びTrue群（Ｃグループ７名）とPlacebo群（Ｄグループ５名）との検定において、有意差のある変動は認められなかった（図７）。
【００５５】
２）血圧高値群（ＨＴ群）
収縮期血圧１３０ｍｍＨｇ以上及び／又は拡張期血圧８５ｍｍＨｇ以上のＨＴ群３４名のうち、Placebo群の５名は諸般の事情により観察期の間に不参加を表明したので対象者から除き、最終的に２９名に対して、同様にイワシ精製ペプチド（Ｙ−２画分：Val-Tyr含有）を投与した結果、観察期（４週間）に対する投与期（４週間）のpaired ｔ−検定において、Placebo群（Ｂグループ１２名）は血圧の変動に有意差は認められなかったが、True群（Ａグループ１７名）は有意な血圧降下が認められた（図６）。
【００５６】
すなわち、True群（Ａグループ）において、投与開始後１週間目に、収縮期血圧９．７ｍｍＨｇ、拡張期血圧５．２ｍｍＨｇの最大血圧降下が認められ統計的に危険率０．１％で有意であった。この血圧降下作用はペプチド投与期中１％以下の危険率で持続し、投与後の終了期においても収縮期血圧は３週間目（ｐ＜０．０１）、拡張期血圧は８週間目まで（ｐ＜０．０５）有意に継続した。その後は元の観察期血圧に復帰する傾向が見られた。
【００５７】
また、True群（Ａグループ）とPlacebo群（Ｂグループ）とによるgroup検定においてもPlacebo群に対してTrue群は有意に血圧降下を示し、最大の降下差は投与開始後１週間目に収縮期血圧差１２．１ｍｍＨｇ、拡張期血圧差７．１ｍｍＨｇが認められた。この場合も投与終了後の終了期においても３週間目まで血圧降下作用が持続し、その後復帰する傾向が見られた。
本試験中、いずれの群においても脈拍数の異常は認められなかった。
【００５８】
３．臨床検査成績
ペプチド投与前及び投与終了時の末梢血液検査、血液生化学検査及び２４時間蓄尿における変動値を測定した結果、末梢血液検査においていずれの群もヘマトクリット値（Ｈｔ）、赤血球項目値（ＭＣＶ、ＭＣＨ、ＭＣＨＣ）に統計上有意な差がみられたが、数値変動項目自体は正常値範囲内の軽微な変動であり、臨床上問題となるものではなかった。
【００５９】
【実施例４】
：介入試験
ＨＴ群のうちTrue群からの７名について、終了期４週間の後さらに２週間の観察期をコントロールとしてPlacebo投与を行い、介入試験を実施した（図８）。その結果、True投与期は本試験と同様１週間目に最大血圧降下（収縮期血圧降下度１０．８ｍｍＨｇ、拡張期血圧降下度５．３ｍｍＨｇ）を認め、４週間目まで有意に血圧降下を示した。その後徐々に復帰の傾向にあり、６週間のwash-out期間をおいてPlacebo投与した結果、観察期に対して血圧を下げることなく、むしろ復帰の上昇傾向を維持して、血圧の復帰は緩やかで、本ペプチドは降圧作用持続性の大きいことが確認された。
【００６０】
図中、●及び○は、それぞれＳＢＰ値及びＤＢＰ値を示し、星印は平均血圧値を示し、ＰはPlaceboドリンク、ＴはTrueドリンクを示す。有意差に関し、検定結果には次の略号用いた。＊＊：ｐ＜０．０１，＊＊＊：ｐ＜０．００１。
【００６１】
【実施例５】
ペプチドＹ−２は、４ｇ／日（Val-Tyrとして６ｍｇ／日）の投与で十分な血圧降下作用が示されたが、機能性食品としての実用を考えると経済性が大きな要因となる。そこで血圧降下作用を発現する最少のペプチド投与量を確認するため、段階的に投与量を変えて、有効性が示される限界値を検討した。
【００６２】
Ａ：プロトコール
前記に準じた条件下で、最少有効投与量の検討を行った。試験飲料の基本組成、試験対象者の母集団も同様とした。
【００６３】
（１）対象者
今回は血圧に対する最少有効量の確認であるため、前記の被験者のうち、正常高値高血圧以上のＨＴのみを対象として、無作為に抽出し、True群を１４例（平均年齢４５．１±３．５歳、収縮期血圧１４４．５±２．７ｍｍＨｇ、拡張期血圧９０．７±１．８ｍｍＨｇ）、Placebo群５名（平均年齢５０．４±４．９歳、収縮期血圧１４７．３±２．９ｍｍＨｇ、拡張期血圧９２．０±２．８ｍｍＨｇ）で行った。
【００６４】
（２）投与量
Val-Tyrに換算量に対して前記したin vivo試験では１０〜１００μｇ／ｋｇの投与量で有効性を認めていたがラットとヒトの差、静注と経口投与方法の差などを考慮して、１０μｇ／ｋｇを下回る量からスタートし、順次投与量を上げて有効性発現の境界値を探ることとした。すなわち、イワシ精製ペプチド（Ｙ−２画分）０．２５ｇ／日（Val-Tyr含量６．２５μｇ／ｋｇ・日）、０．５０ｇ／日（Val-Tyr含量１２．５μｇ／ｋｇ・日）、１．００ｇ／日（Val-Tyr含量２５μｇ／ｋｇ・日）と倍量ずつ増やしていくこととした。
【００６５】
（２）投与方法
２週間の観察期をおき、投与開始後２週間単位で投与量を変更した。試験飲料は前記と同様、朝夕２回１本ずつ投与し、試験期間は有効性が確認できた時点で終了とした。
【００６６】
Ｂ：結果
得られた結果を図９に示す。図９は、血圧高値群（ＨＴ群）のペプチドＹ−２（サーデンペプチドを含有）投与量の変化による血圧測定値の変化を示したものであって、図中、■及び□は、それぞれＹ−２投与群のＳＢＰ値とＤＢＰ値を示し、●及び○は、それぞれPlacebo群のＳＢＰ値とＤＢＰ値を示し
【００６７】
図９に示すとおり、イワシ精製ペプチド（Ｙ−２画分：Val-Tyr含有）を０．２５ｇ／日の投与からスタートし、２週間目に収縮期血圧で５．６ｍｍＨｇ、拡張期血圧で３．２ｍｍＨｇ投与前より下降し、いずれの期も危険率５％で統計的有意差を認めた。さらに３週間目から投与量を０．５０ｇ／日に増やしたところ、３週間目で収縮期血圧が８．２ｍｍＨｇ、拡張期血圧が３．３ｍｍＨｇ下がり、収縮期血圧において危険率１％で統計的有意差が認められた。検定結果には次の略号を用いた。＊＊：ｐ＜０．０１，＊：ｐ＜０．０５。
【００６８】
一方、Placebo群は、ほとんど血圧変動がみられず、また両群とも脈拍の異常は認められなかった。従って本ペプチドのヒトに対する有効性は０．２５ｇ／日（Val-Tyr含量６．２５μｇ／ｋｇ・日）で統計的にその傾向が認められ、０．５０ｇ／日（Val-Tyr含量１２．５μｇ／ｋｇ・日）では危険率１％で有効性が確認された。投与量０．２５ｇ／日（Val-Tyr含量６．２５μｇ／ｋｇ・日）においても投与開始後から徐々に降下を続けており、同投与量でも長期間継続すれば実用上十分な効果が得られると判断された。また実用上の最少有効量を０．２５ｇ／日（Val-Tyr含量６．２５μｇ／ｋｇ・日）とすれば、前節の試験においてその１６倍量の２８日間連続投与に対しても、血液生化学上及び臨床上問題となる変化は認められず、また現在市販されているＡＣＥ阻害剤にみられる副作用も問診による報告では皆無であった。
【００６９】
【実施例６】
：血圧正常化用生理活性健康食品の製造
（配合）
果糖ブドウ糖液糖 ９．０ｇ
精製ハチミツ ７．０ｇ
ステビア抽出物 ０．０９ｇ
酸味料（クエン酸） ０．２ｇ
香料 ０．１２ｇ
Val-Tyrを0.130mg／10.0g含む
Ｙ−２画分濃縮液 １０．０ｇ
精製水で全量を１００ｇとする。
【００７０】
上記配合を６０℃で混合溶解した後、１２８℃、１０秒のプレート殺菌した。次いでこれを充分に洗浄した１００ｍｌ容褐色ビンに９０℃で充填し、室温で放冷後、流水水槽中で急冷してドリンクを製造した。
【００７１】
【実施例７】
：血圧正常化等生理機能正常化用生理活性健康食品の製造
（配合）
果糖ブドウ糖液糖 １５．０ｇ
精製ハチミツ １５．０ｇ
ステビア抽出物 ０．１３ｇ
酸味料（クエン酸） ０．４ｇ
香料 ０．２０ｇ
Val-Tyrを0.250mg／50.0g含む
実施例1の α‐1000(液体) ５０．０ｇ
精製水で全量を２００ｇとする。
【００７２】
上記配合を６０℃で混合溶解した後、１２８℃、１０秒のプレート殺菌した。次いでこれを充分に洗浄した２００ｍｌ容褐色ビンに９０℃で充填し、室温で放冷後、流水水槽中で急冷してドリンクを製造した。
【００７３】
【発明の効果】
本発明においては、ペプチドＹ−２の使用によって各種生理機能改善性生理活性健康食品を提供することができた。
特に、本発明の血圧正常化用生理活性健康食品においては、ペプチドＹ−２の添加において、Ｙ−２に含まれるバリル−チロシン（Val-Tyr）を指標とし、液状健康食品100ｇ中該バリル−チロシンを０．１００〜２．０００ｍｇ、好ましくは０．１１０〜０．５００ｍｇ、より好ましくは０．１３０〜０．２５０ｍｇの範囲で含有せしめことによって血圧正常化の顕著な効果が奏されるものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】ペプチドα−１０００のＵＶスペクトルを示す。
【図２】ペプチドα−１０００のＩＲスペクトルを示す。
【図３】ペプチドＹ−２のゲル濾過よる分子量分布を示す。
【図４】ペプチドＹ−２のＵＶスペクトルを示す。
【図５】ペプチドＹ−２のＩＲスペクトルを示す。
【図６】ＨＴ群の血圧と脈拍の測定結果を示す。
【図７】ＨＴ群の血圧と脈拍の測定結果を示す。
【図８】介入試験の結果を示す。
【図９】投与量の変化による血圧の変化を示す。
【発明の属する技術分野】
本発明は、生理活性健康食品に関するものであり、更に詳細には、ペプチドＹ−２(ペプチドＹ−２に含まれるバリル−チロシン（Val-Tyr）量を指標として)を特定量含有してなる各種生理機能改善性健康食品に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
先に、本発明者らは、魚肉を熱変性処理した後、中性ないしアルカリプロテアーゼ処理して加水分解し、酵素を失活せしめた後、分離処理することによってＡＣＥ（アンジオテンシン変換酵素）阻害活性を有するペプチドα−１０００を得た（特開平５−２７１２９７）。即ち、ペプチドα−１０００の出現によって、ペプチド(群)による血圧上昇抑制の可能性が示されたのである。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者らは、高血圧疾患及び／又は高血圧になり易いヒト、あるいは高血圧を予防したり健康を維持したいヒトが大幅に増加している現在の状況に鑑み、血圧を直接降下することのできる降圧剤の開発も重要ではあるが、直接治療することを目的とするのではなく、血圧低下または血圧上昇抑制に寄与して血圧を正常に維持することのできるおだやかな作用を有し且つ長期間の投与が可能な予防的な物質の開発も重要である点に着目した。
【０００４】
そして、上記目的を達成し得る物質としては、経口投与でき、しかも服用し易く、製品化しやすい食品、例えば、特定保健用食品としての認可が可能な液状健康食品が好適であるとの観点にたち、血圧正常化健康食品を新規に開発することを課題とした。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
この課題を解決するためには、血圧上昇抑制、血圧降下作用にすぐれているだけでなく、長期間服用することができ、安全性についても問題のない物質を開発することが必要であるとの観点にたち、本発明者らは天然由来の物質にその起源を求めることにした。
【０００６】
そして本発明者らは、各方面から検討した結果、本発明者らが先に開発したイワシ等の魚肉由来のペプチドα−１０００がＡＣＥ阻害活性を有する点に着目し、ペプチドα−１０００から本発明に係る血圧正常化健康食品の調製に使用可能な有効成分を単離することを目的とした。
【０００７】
本発明者らは、鋭意研究した結果、ペプチドα−１０００の水溶液をペプタイド吸着性樹脂処理した後、１０％エタノールを用いて溶出してＹ−２画分を得、このＹ−２画分が新規ペプチド(群)であることを確認しただけでなく、このＹ−２画分にはバリル−チロシン（Val-Tyr）が含有されていて、バリル−チロシンを含むペプチド(群)が血圧正常化に有効に作用することを確認し、遂に本発明の完成に至ったものである。
更に、このＹ−２画分を詳細に検討したところ、血圧正常化以外にも毛髪生育促進性が認められ、また、筋肉機能正常化、関節機能正常化など各種生理機能正常化が認められるに至った。
【０００８】
すなわち本発明は、有効成分としてペプチドＹ−２もしくはその含有物の添加において、ペプチドＹ−２に含まれるバリル−チロシン（Val-Tyr）を指標とし、健康食品100ｇ中該バリル−チロシンを０．０１０〜３．０００ｍｇの範囲で、ペプチドＹ−２もしくはその含有物を含有せしめてなる生理活性健康食品に関する。
また、本発明は、有効成分としてペプチドＹ−２もしくはその含有物の添加において、ペプチドＹ−２に含まれるバリル−チロシン（Val-Tyr）を指標とし、健康食品100ｇ中該バリル−チロシンを０．１００〜２．０００ｍｇ、好ましくは０．１１０〜０．５００ｍｇ、より好ましくは０．１３０〜０．２５０ｍｇの範囲で、ペプチドＹ−２もしくはその含有物を含有せしめてなる血圧正常化用生理活性健康食品に関する。
【０００９】
そして、本発明の血圧正常化用生理活性健康食品においては、動物実験や酵素の阻害度を測定する間接的な方法ではなく、ヒトに対してバリル−チロシンを含有するＹ−２を直接投与してヒトの血圧を直接測定する直接法（臨床試験）によって、血圧降下作用、しかもきわめてすぐれた血圧降下作用を確認するのに成功したものであり、あわせてバリル−チロシンの安全性、服用や製剤あるいは飲食品製品化等の容易性及びその配合量もヒトについて確認した点できわめて特徴的であり、まさに画期的なものである。
【００１０】
以下、本発明について詳述するが、先ず、本ペプチドＹ−２の起源として用いるペプチドα−１０００について説明する。
【００１１】
ペプチドα−１０００は、魚介類を原料として製造するものであって、例えば特開平５−２７１２９７号にしたがって製造することができ、先ず、魚介類を採肉機、デボーナー等によって処理して魚肉質を分離する。原料は出来る限り新鮮なものが好ましい。分離した魚肉は、１０ｋｇ程度のすり身に分割し、このまま次の処理に使用してもよいが、−２０〜−５０℃、例えば−３０℃程度の冷気を吹き付けて急速連結し、−２０〜−２５℃に保存しておき、必要に応じてこれを適宜使用することにしてもよい。
【００１２】
魚介類としては、イワシ、アジ、マグロ、カツオ、サンマ、サバ等赤身魚；ヒラメ、タイ、キス、コノシロ、タラ、ニシン、ブリ等白身魚；サメ、エイ等軟骨魚肉；ワカサギ、コイ、イワナ、ヤマメ等淡水魚肉；アイザメ、アンコウ等深海魚肉のほか、エビ、カニ、タコ、アミ類等も適宜使用できる。
【００１３】
採肉した後、粉砕機等によって魚介類を粉砕し、原料重量に対して１／２量〜２０倍量、好ましくは等量〜１０倍量の加水を行った後、加熱処理し、もって、自己消化酵素を失活させ、且つ殺菌を死滅させるとともに、タンパク質を熱変性させて後に行う酵素反応効率を上昇せしめる。加熱条件としては、このような作用が奏される条件であればすべての条件が利用できるが、例えば６５℃以上、２〜６０分、好ましくは８０℃以上、５〜３０分とするのがよい。
【００１４】
次いで、アンモニア水か、水酸化ナトリウム（カリウム）水溶液等アルカリ剤を加えて、使用する蛋白分解酵素の適値にｐＨを調整し、（例えばアルカリプロテアーゼの場合は、ｐＨ７．５以上、好ましくは８以上）、温度も酵素適温（使用酵素によって異なるが、２０〜６５℃、アルカリプロテアーゼの場合は３５〜６０℃、好ましくは４０〜５５℃）に加温し、蛋白分解酵素を加えて３０分〜３０時間（アルカリプロテアーゼの場合は３０分〜２５時間、好ましくは１〜１７時間）処理する。
【００１５】
蛋白分解酵素としては、中性又はアルカリ性条件下で蛋白質を分解し得る酵素であればすべての酵素が単独で又は混合して使用し得る。その起源は、動植物のほかに微生物に求めることができ、ペプシン、レニン、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、プロメレインのほか、細菌プロテアーゼ、糸状菌プロテアーゼ、放線菌プロテアーゼ等も広く利用できる。これらの酵素は、通常、市販されているものが使用されるが、未精製の酵素、酵素を含有した培養液、麹といった固体又は液体の酵素含有物も、目的により必要に応じて使用することができる。酵素の添加量としては０．１％〜５．０％程度でもよい。
【００１６】
次いで必要あれば中和処理を行った後、７０℃（好適には８０℃）以上の温度に２〜６０分間（好適には５〜３０分間）保持し、酵素を失活させるとともに後に行う分離を良好ならしめる。加熱失活処理後、バイブスクリーン等によって粗分離し、必要によりジェクター処理した後、超遠心分離処理して、浮遊物、沈殿物を除去する。
【００１７】
次に、ケイソウ土等濾過助剤（例えばセライト）を用いて濾過し、濾液を活性炭処理して（０．０５〜２０％Ｗ／Ｖ、好ましくは０．１〜１０％Ｗ／Ｖ使用、２０〜６５℃、好ましくは２５〜６０℃、１５分〜４時間、好ましくは３０分〜２時間）、脱臭、脱色、精製する。
【００１８】
これを減圧濃縮（０〜５０℃）その他常法にしたがって濃縮し（３０Ｂ×程度にまで）た後、必要あれば再度（超）遠心分離又は濾過してペプチド原液を得る。このようにして得たペプチド原液は、殺菌（ＵＨＴＳＴその他常法による）した後、容器に充填して製品（α−１０００（液体））とする。また、希望するのであれば、更に濃縮したりあるいは逆に希釈したり、また、噴霧乾燥、凍結乾燥等の常法によって６０メッシュ程度に粉末化し、これを袋等の容器に充填して製品（α−１０００（粉末））とすることもできる。これらの製品は、冷蔵ないし冷凍保管する。
【００１９】
このようにして得た、液状、ペースト状ないし粉末状のペプチドがα−１０００である。
【００２０】
ペプチドα−１０００（スプレードライ粉末）の物理化学的性質は、下記表１に示すとおりである。
【００２１】
（表１：ペプチドα−１０００（粉末）の物理化学的性質）
（Ａ）分子量；
２００〜１０，０００
（セファデックスＧ−２５カラムクロマトグラフィーによる）
（Ｂ）融点；１１９℃で着色（分解点）
（Ｃ）比旋光度
α＝−２２°（測定温度２０℃、使用波長ナトリウムＤ線）
（Ｄ）溶剤に対する溶解性；
水に易溶；エタノール、アセトン、ヘキサンにはほとんど溶解しない。
（Ｅ）酸性、中性、塩基性の区別；
中性 ｐＨ５．０〜８．０（１０％溶液）
（Ｆ）外観、成分；
白色粉末；水分５．１４％（減圧加熱乾燥法）；蛋白質８７．５％
（ケルダール法、窒素・蛋白質換算係数 ６．２５）；脂質０％
（ソックスレー抽出法）；灰分５．０％（直接灰化法）
（Ｇ）ＵＶスペクトル；
図１に示すとおり。
（Ｈ）ＩＲスペクトル；
図２に示すとおり。
（Ｉ）特 性；
魚肉由来であり、加熱によって自己消化酵素を失活させ、蛋白分解酵素で加水分解して得たペプチドである。
【００２２】
このようにして調製したペプチドα−１０００は、液状の場合はそのまま、粉末の場合は加水した後、これをＯＤＳ樹脂その他ペプチド吸着性樹脂に通し、水などで洗浄した後、各種濃度のエタノールなどを用いて順次溶出するが、１０％エタノールで溶出して得られる画分Ｙ−２が本発明に用いる有効成分となる。この画分Ｙ−２をペプチドＹ−２として使用する。
【００２３】
本発明は、上記した新規ペプチドであるＹ−２にはバリル−チロシン（Val-tyrosine、Val-Tyr：以下、サーデンペプチドということもある）が０．０５〜０．３５％程度(凍結乾燥品中)含有しており、また、このサーデンペプチドのヒトに対する１日当りの有効量も後記するように実際のヒトによるin vivo臨床試験によってそのすぐれた血圧降下作用が確認され、安全性にも問題がないところから、予防や健康維持の目的で長期間に亘っても服用可能な血圧正常化用生理活性健康食品としたのである。
また、本発明は、上記した新規ペプチド(群)であるペプチドＹ−２(もしくはその含有物)を適宜配合して、各種生理機能改善性健康食品とすることができる。
【００２４】
本発明に係る健康食品（清涼飲料、酸乳飲料、健康ドリンクなどの液状食品、クッキー、練製品、トーフなどの固状食品、又は、ジャム、スプレッドなどのペースト状食品などの食品のいずれでもよい）を製造するには、ペプチドＹ−２を有効成分とし、これを各種食品の製造に用いられ主原料、その他副原料（砂糖、果糖ブドウ糖液糖、ハチミツ、香料、酸味料（クエン酸、リンゴ酸等）、甘味料（ステビア抽出物等）、増粘剤、ビタミン類、その他）を配合して液状食品、固状食品又はペースト状食品に調製すればよい。本発明に係る食品は、特定保健用食品のほか、栄養食品、健康食品、臨床栄養食品等各種の用途に広く使用することができる。
【００２５】
有効成分としては、ペプチドＹ−２に含まれるバリル−チロシン(Val-Tyr)を指標として、健康食品100ｇ中このバリル−チロシンを０．０１０〜３．０００ｍｇの範囲で、ペプチドＹ−２を含有せしめる。特に、血圧正常化用においては、ペプチドＹ−２の添加において、Ｙ−２に含まれるバリル−チロシン（Val-Tyr）を指標とし、健康食品100ｇ中このバリル−チロシンを０．１００〜２．０００ｍｇ、好ましくは０．１１０〜０．５００ｍｇ、より好ましくは０．１３０〜０．２５０ｍｇの範囲で含有せしめものである。
【００２６】
有効成分として使用するペプチドＹ−２は、分画液、その濃縮液、又はその凍結乾燥品でそれぞれバリル−チロシンの含量が異なっているので、それぞれの配合に際しては、分画液、その濃縮液、又はその凍結乾燥品のバリル−チロシンの含量を正確に知り、これを基準に、それぞれの添加量を決定しなければならない。
また、有効成分としてペプチドＹ−２含有物としては、ペプチドＹ−２の原料であるペプチドα−１０００を用いるのがよい。ペプチドα−１０００は、凍結乾燥品で、ペプチドＹ−２を約２５〜３５％含むので、その濃縮液、又はその凍結乾燥品でバリル−チロシンの含量を正確に測定し、これからペプチドＹ−２の含量を知り、ペプチドα−１０００の添加量を決定しなければならない。
本発明の生理活性健康食品は１００ｇづつ１日２回(朝、夕)服用するのがよい。
【００２７】
以下、本発明を実施例によって更に詳しく説明する。
【００２８】
【実施例１】
：ペプチドα−１０００の調製
新鮮イワシをデボーナーで処理して採肉した。採肉した魚肉質を１０ｋｇのすり身に分割し、これを−３０℃以下で急速凍結した後、粉砕機で粉砕した後等量の水を加え、これをタンクに送り、１００℃で１０分間加熱して自己消化酵素を失活させ、熱変性させた。次いでアンモニア水を加えてｐＨを９．５に調整した。
【００２９】
これに市販のアルカリプロテアーゼ製品の０．１％液を加え、５０℃に１７．５時間保持して酵素分解を行った。次いで１５分間煮沸して酵素を失活せしめた。
【００３０】
これをバイブスクリーン（１５０メッシュ）に通し５０００ｒｐｍでジエクター処理した後、シャープレス遠心分離機で処理し（１５０００ｒｐｍ）、ケイソウ土を濾過助剤として用い、濾過処理したものをペプチド原液とした。
【００３１】
上記で得たペプチド原液に活性炭を１％Ｗ／Ｖ加え、３０℃で６０分間攪拌した後濾過して濾液を得た。これを常法にしたがって減圧濃縮（２０℃）した後、常法にしたがってＵＨＴＳＴ殺菌を行って、α−１０００（液体）製品を得、これを更に常法にしたがって噴霧乾燥して粒径６０メッシュのα−１０００（粉末）製品を得、それぞれこれらの製品は冷凍保管した。
【００３２】
このようにして調製した、噴霧乾燥前のペプチドα−１０００（液体）について、セファデックスＧ−２５カラムを用い、下記の条件でゲル濾過した結果、分子量２００〜１０，０００であることが判明した。カラムサイズ；径１６×９５０ｍｍ、溶出剤；０．１Ｍホスフェートバッファー（ｐＨ７．０）、分画：２ｍｌ／チューブ、流速；１０ｍｌ／ｈ、分子量マーカー；バシトラシン（分子量１４５０）。
【００３３】
上記によって得たα−１０００（液体）は、水分含量が７３．６％（減圧加熱乾燥法）であって、淡黄色を呈し、その１０％溶液のｐＨは７．５を示し、魚臭もなく苦味も認められなかった。
【００３４】
【実施例２】
：ペプチドＹ−２の調製
実施例１で得たペプチドα−１０００（液体）８００ｍｌ（Brix４５、たんぱく質含量２９．６％）に２６．２Ｌの脱イオン水を加え、これをＯＤＳ樹脂（YMC ODS-AQ120-S50）カラム（１．５×５０ｃｍ）に流してペプチドを吸着させ、脱イオン水で洗浄し、次に、０％、１０％、２５％、５０％、９９．５％のエタノール水溶液２７Ｌを用いて順次溶出してそれぞれＹ−１、Ｙ−２、Ｙ−３、Ｙ−４、Ｙ−５の画分を得た。このうちＹ−２画分を、４０℃で濃縮してエタノールを除去し、凍結乾燥してイワシ精製ペプチド（Ｙ−２）を得た。このＹ−２画分中には、Val-Tyrが０．１５％含有されていた。得られたペプチドＹ−２は、いずれも乾物で、ペプチドα−１０００の約３０％(重量)であった。
【００３５】
本発明に係る新規ペプチドＹ−２の物理化学的物質を下記表２に示す。
【００３６】
（表２：Ｙ−２画分の物理化学的性質）
▲１▼分子量：２００〜１００００（Asahipak GS-320カラムクロマトグラフィーによる）（図３）
▲２▼融点：１３８℃で着色した（分解点）（第五版 食品添加物公定書の一般試験法に準じ、融点測定法）
▲３▼比旋光度：α＝−５１°（測定温度２０℃、使用波長ナトリウムＤ線、第５版 食品添加物公定書の一般試験法に準じ、旋光度測定法）
▲４▼溶剤に対する溶解性；水に易溶であるが、エタノール、アセトン、ヘキサンにはほとんど溶解しない（第十二改正日本薬局方の通則に準じた）
▲５▼酸性、中性、塩基性の区別；中性 ｐＨ５．０〜８．０（１０％溶液）
▲６▼物質の外観；白色〜淡黄色粉末
▲７▼成分：水分５．４％（常圧加熱乾燥法）；タンパク質９５．３％（ケルダール法、窒素・タンパク質換算係数 ６．２５）；脂質０％（ソックスレー抽出法）；灰分１．１％（直接灰化法）
▲８▼ＵＶスペクトル（図４、第五版 食品添加物公定書の一般試験法に準じ、吸光度測定法）
試料の調製：０．１％水溶液
使用機器：島津製作所社製ＵＶ−２４０
▲９▼ＩＲスペクトル（図５、臭化カリウム錠剤法）
試料の調製 試料を臭化カリウムと混合し、錠剤を成形した。
測定条件
使用機器：ニコーレ社製FT-IR Magna560
分解能：８ｃｍ
積算回数：３２回
【００３７】
【実施例３】
：バリル−チロシン含有ペプチドＹ−２投与による臨床試験
Val-Tyrについて、実際にヒトに対する機能性を実証するため、ペプチドＹ−２を用いて血圧の高いボランティアを募り、ドリンク形態でのペプチドＹ−２の連続投与による血圧降下作用を確認した。
【００３８】
Ａ：試験飲料の調製
ペプチドの投与は実際の機能性食品を想定してドリンク剤タイプの飲料を用いた。連続投与に無理のない飲用量として１本当たり１００ｍｌ容量とし、ペプチドを含むTrue飲料と含まないPlacebo飲料の味の差をなくすため、必要最少限の調味を施して、果糖ブドウ糖液糖９．０％、精製ハチミツ７．０％、ステビア抽出物０．１２％、酸味料０．２％、香料０．１２％からなる配合とし、True飲料には粉末のイワシ精製ペプチド２．０％を添加した。従ってTrue飲料にはイワシ精製ペプチドＹ−２画分粉末が２．０ｇ／１００ｍｌ含有され、Val-Tyrとしては試験飲料１本当たり３ｍｇ／１００ｍｌを含む量とした。Placebo飲料は、イワシ精製ペプチドＹ−２画分を除き配合水に置き換えた。
【００３９】
製造は、実製造ラインにより一括製造した。すなわち、１バッチ２００ｋｇ単位で配合し、６０℃で混合溶解後、１２８℃１０秒のプレート殺菌した後、十分に洗浄した１００ｍｌ容褐色ビンに９０℃で自動充填し、室温で放冷後、流水水槽中で急冷した。ラベルはTrue、Placebo全く同じデザインで、ボランティア及び医師、看護婦には識別不可能な方法で試験に供した。
【００４０】
Ｂ：試験対象者
（１）倫理委員会の承認
本スタディに先立ち、「九州大学健康科学センター倫理委員会」の審査承認を得た。
【００４１】
（２）対象者の選定
被験者は予め本試験の目的と意義、試験方法及び安全性について予め説明を受け、本試験内容を十分理解した後、本試験の同意書に署名した志願者とした。これらの志願者の中から、医師による問診、心電図、胸部Ｘ線撮影など諸検査の結果と、過去における定期検診のデータから４６例を適格と判定し、被験者として選択した。群分けは米国合同委員会の基準に基づき、坐位安静時の拡張期血圧が８５ｍｍＨｇ未満、収縮期血圧が１３０ｍｍＨｇ未満を血圧正常群（ＮＴ群）、各々の血圧がそれ以上の高血圧症者及び正常高値血圧者を血圧高値群（ＨＴ群）とし、ＮＴ群１２名、ＨＴ群３４名に分けた、各々の群について無作為抽出法により、ペプチド投与のTrue群と、ペプチド投与しないPlacebo群とに群分けした。各群の特性を表３に示した。
【００４２】
すなわち表に示したように、被験者を、それぞれの血圧にしたがってＨＴ群とＮＴ群に大別し、各群の被験者を更にペプチド投与のTrue群とペプチドを投与しないPlacebo群の割合Ａ〜Ｄからなる４群に群分けした。
Ａ群：ＳＢＰ≧１３０ｍｍＨｇ、及び／又は、ＤＢＰ≧８５ｍｍＨｇ。Trueドリンクを２回／日、４週間投与。
Ｂ群：ＳＢＰ≧１３０ｍｍＨｇ、及び／又は、ＤＢＰ≧８５ｍｍＨｇ。Placeboドリンクを２回／日、４週間投与。
Ｃ群：ＳＢＰ＜１３０ｍｍＨｇ、及び／又は、ＤＢＰ＜８５ｍｍＨｇ。Trueドリンクを２回／日、４週間投与。
Ｄ群：ＳＢＰ＜１３０ｍｍＨｇ、及び／又は、ＤＢＰ＜８５ｍｍＨｇ。Placeboドリンクを２回／日、４週間投与。
【００４４】
なお、各記号はそれぞれ次の意味を示す。ＳＢＰ：収縮期血圧（ｍｍＨｇ）、ＤＢＰ：拡張期血圧（ｍｍＨｇ）、BMI：Body Mass Index、Ｆ：Ｆ−テスト、ｔ：ｔ−テスト。
【００４５】
Ｃ：プロトコール
（１）投与量
ペプチド（Ｙ−２画分）４ｇを、体重６０ｋｇ成人男子を標準とした１日の摂取量とした（Ｙ−２画分中のVal-Tyr含量は０．１５％とみなした）。なお、亜急性毒性試験の結果、ラットにおいて、Val-Tyr換算量で２．５ｍｇ／ｋｇ・日の投与量でも１ヶ月の連続投与の安全性が確認された。
【００４６】
（２）投与方法
連続投与試験は、２週間の観察期、１週間のPlacebo投与期、４週間のTrue投与期のあと４週間の終了期を設ける無作為二重盲検対照試験を行った。試験飲料はTrue投与期に、朝食後と夕食前の朝夕２回１本ずつ投与した。血圧（坐位）、脈拍は１週間に１回、午前９時３０分から１１時３０分の間で各被験者に割り当てた定刻に測定した。投与開始時、投与終了時に体重、血液、尿検査を行った。
飲料服用、血圧測定、諸検査実施の時間は厳守させたが、それ以外は自由食、自由行動とした。
【００４７】
（３）検査項目及び検査方法
自覚症状の有無及び他覚所見は医師が問診及び診察を行って記録し、試験期間中の測定、採血はすべて看護婦が行った。一般生理学的検査として血圧、脈拍、体重について行った。血圧、脈拍数は、測定の５分以上前より安静坐位を保たせて、（株）日本コーリン社製連続自動血圧計ＢＰ−２０３ＲＶ２で約２分間隔で３回連続測定し、その平均値を個人の血圧値及び脈拍値とした。試験期間を通じて同一の体位で測定した。臨床検査は投与前後に行った。
【００４８】
Ｄ：統計処理
数値は平均値±標準誤差（ＳＥ）で示し、臨床検査などの経時的な変動については対応のあるｔ−検定、さらに、連続投与試験における０〜４週の血圧については分散分析により、その有意差を調べた。有意水準は危険率５％以下をとり、検定結果には次の略号を用いた。
＊＊＊：ｐ＜０．００１，＊＊：ｐ＜０．０１，＊：ｐ＜０．０５
【００４９】
本試験の評価は、投与前の観察期４週間の平均値に対し、各群の値について、）投与前後のpaired ｔ−検定、２）True群、Placebo群のgroup検定を行った。介入試験は投与前の観察期を２週間とし、その平均値に対し投与後とのpaired ｔ−検定を行った。
【００５０】
Ｅ：結果
１．自覚症状
本試験期間１２週間において、ＮＴ群及びＨＴ群のいずれも自覚症状はみられなかった。
【００５１】
２．血圧及び脈拍数
ＮＴ及びＨＴ群に対し、それぞれペプチドを投与したTrue群と非投与のPlacebo群とに分け、観察期４週間、投与後の終了期４週間における血圧と脈拍数の変化を図６、図７に示した。
【００５２】
図６は血圧高値群（ＨＴ群）の血圧と脈拍の測定結果であって、図中、■及び□は、それぞれＹ−２投与群（Ａ群）のＳＢＰ値とＤＢＰ値を示し、●及び○は、それぞれPlacebo群（Ｂ群）のＳＢＰ値とＤＢＰ値を示す。また、図７は正常血圧群（ＮＴ群）の血圧と脈拍の測定結果であって、図中、■及び□は、それぞれＹ−２投与群（Ｃ群）のＳＢＰ値とＤＢＰ値を示し、●及び○は、それぞれPlacebo群（Ｄ群）のＳＢＰ値とＤＢＰ値を示す。
【００５３】
上記結果から次のことが明らかとなった。
【００５４】
１）正常血圧群（ＮＴ群）
収縮期血圧（ＳＢＰ）１３０ｍｍＨｇ未満及び拡張期血圧（ＤＢＰ）８５ｍｍＨｇ未満のＮＴ群１２名に対し、イワシ精製ペプチド（Ｙ−２画分）４ｇ／日（Val-Tyrとして６ｍｇ／日）を連続投与した結果、血圧及び脈拍数ともに、ペプチド投与前後のpaired ｔ−検定及びTrue群（Ｃグループ７名）とPlacebo群（Ｄグループ５名）との検定において、有意差のある変動は認められなかった（図７）。
【００５５】
２）血圧高値群（ＨＴ群）
収縮期血圧１３０ｍｍＨｇ以上及び／又は拡張期血圧８５ｍｍＨｇ以上のＨＴ群３４名のうち、Placebo群の５名は諸般の事情により観察期の間に不参加を表明したので対象者から除き、最終的に２９名に対して、同様にイワシ精製ペプチド（Ｙ−２画分：Val-Tyr含有）を投与した結果、観察期（４週間）に対する投与期（４週間）のpaired ｔ−検定において、Placebo群（Ｂグループ１２名）は血圧の変動に有意差は認められなかったが、True群（Ａグループ１７名）は有意な血圧降下が認められた（図６）。
【００５６】
すなわち、True群（Ａグループ）において、投与開始後１週間目に、収縮期血圧９．７ｍｍＨｇ、拡張期血圧５．２ｍｍＨｇの最大血圧降下が認められ統計的に危険率０．１％で有意であった。この血圧降下作用はペプチド投与期中１％以下の危険率で持続し、投与後の終了期においても収縮期血圧は３週間目（ｐ＜０．０１）、拡張期血圧は８週間目まで（ｐ＜０．０５）有意に継続した。その後は元の観察期血圧に復帰する傾向が見られた。
【００５７】
また、True群（Ａグループ）とPlacebo群（Ｂグループ）とによるgroup検定においてもPlacebo群に対してTrue群は有意に血圧降下を示し、最大の降下差は投与開始後１週間目に収縮期血圧差１２．１ｍｍＨｇ、拡張期血圧差７．１ｍｍＨｇが認められた。この場合も投与終了後の終了期においても３週間目まで血圧降下作用が持続し、その後復帰する傾向が見られた。
本試験中、いずれの群においても脈拍数の異常は認められなかった。
【００５８】
３．臨床検査成績
ペプチド投与前及び投与終了時の末梢血液検査、血液生化学検査及び２４時間蓄尿における変動値を測定した結果、末梢血液検査においていずれの群もヘマトクリット値（Ｈｔ）、赤血球項目値（ＭＣＶ、ＭＣＨ、ＭＣＨＣ）に統計上有意な差がみられたが、数値変動項目自体は正常値範囲内の軽微な変動であり、臨床上問題となるものではなかった。
【００５９】
【実施例４】
：介入試験
ＨＴ群のうちTrue群からの７名について、終了期４週間の後さらに２週間の観察期をコントロールとしてPlacebo投与を行い、介入試験を実施した（図８）。その結果、True投与期は本試験と同様１週間目に最大血圧降下（収縮期血圧降下度１０．８ｍｍＨｇ、拡張期血圧降下度５．３ｍｍＨｇ）を認め、４週間目まで有意に血圧降下を示した。その後徐々に復帰の傾向にあり、６週間のwash-out期間をおいてPlacebo投与した結果、観察期に対して血圧を下げることなく、むしろ復帰の上昇傾向を維持して、血圧の復帰は緩やかで、本ペプチドは降圧作用持続性の大きいことが確認された。
【００６０】
図中、●及び○は、それぞれＳＢＰ値及びＤＢＰ値を示し、星印は平均血圧値を示し、ＰはPlaceboドリンク、ＴはTrueドリンクを示す。有意差に関し、検定結果には次の略号用いた。＊＊：ｐ＜０．０１，＊＊＊：ｐ＜０．００１。
【００６１】
【実施例５】
ペプチドＹ−２は、４ｇ／日（Val-Tyrとして６ｍｇ／日）の投与で十分な血圧降下作用が示されたが、機能性食品としての実用を考えると経済性が大きな要因となる。そこで血圧降下作用を発現する最少のペプチド投与量を確認するため、段階的に投与量を変えて、有効性が示される限界値を検討した。
【００６２】
Ａ：プロトコール
前記に準じた条件下で、最少有効投与量の検討を行った。試験飲料の基本組成、試験対象者の母集団も同様とした。
【００６３】
（１）対象者
今回は血圧に対する最少有効量の確認であるため、前記の被験者のうち、正常高値高血圧以上のＨＴのみを対象として、無作為に抽出し、True群を１４例（平均年齢４５．１±３．５歳、収縮期血圧１４４．５±２．７ｍｍＨｇ、拡張期血圧９０．７±１．８ｍｍＨｇ）、Placebo群５名（平均年齢５０．４±４．９歳、収縮期血圧１４７．３±２．９ｍｍＨｇ、拡張期血圧９２．０±２．８ｍｍＨｇ）で行った。
【００６４】
（２）投与量
Val-Tyrに換算量に対して前記したin vivo試験では１０〜１００μｇ／ｋｇの投与量で有効性を認めていたがラットとヒトの差、静注と経口投与方法の差などを考慮して、１０μｇ／ｋｇを下回る量からスタートし、順次投与量を上げて有効性発現の境界値を探ることとした。すなわち、イワシ精製ペプチド（Ｙ−２画分）０．２５ｇ／日（Val-Tyr含量６．２５μｇ／ｋｇ・日）、０．５０ｇ／日（Val-Tyr含量１２．５μｇ／ｋｇ・日）、１．００ｇ／日（Val-Tyr含量２５μｇ／ｋｇ・日）と倍量ずつ増やしていくこととした。
【００６５】
（２）投与方法
２週間の観察期をおき、投与開始後２週間単位で投与量を変更した。試験飲料は前記と同様、朝夕２回１本ずつ投与し、試験期間は有効性が確認できた時点で終了とした。
【００６６】
Ｂ：結果
得られた結果を図９に示す。図９は、血圧高値群（ＨＴ群）のペプチドＹ−２（サーデンペプチドを含有）投与量の変化による血圧測定値の変化を示したものであって、図中、■及び□は、それぞれＹ−２投与群のＳＢＰ値とＤＢＰ値を示し、●及び○は、それぞれPlacebo群のＳＢＰ値とＤＢＰ値を示し
【００６７】
図９に示すとおり、イワシ精製ペプチド（Ｙ−２画分：Val-Tyr含有）を０．２５ｇ／日の投与からスタートし、２週間目に収縮期血圧で５．６ｍｍＨｇ、拡張期血圧で３．２ｍｍＨｇ投与前より下降し、いずれの期も危険率５％で統計的有意差を認めた。さらに３週間目から投与量を０．５０ｇ／日に増やしたところ、３週間目で収縮期血圧が８．２ｍｍＨｇ、拡張期血圧が３．３ｍｍＨｇ下がり、収縮期血圧において危険率１％で統計的有意差が認められた。検定結果には次の略号を用いた。＊＊：ｐ＜０．０１，＊：ｐ＜０．０５。
【００６８】
一方、Placebo群は、ほとんど血圧変動がみられず、また両群とも脈拍の異常は認められなかった。従って本ペプチドのヒトに対する有効性は０．２５ｇ／日（Val-Tyr含量６．２５μｇ／ｋｇ・日）で統計的にその傾向が認められ、０．５０ｇ／日（Val-Tyr含量１２．５μｇ／ｋｇ・日）では危険率１％で有効性が確認された。投与量０．２５ｇ／日（Val-Tyr含量６．２５μｇ／ｋｇ・日）においても投与開始後から徐々に降下を続けており、同投与量でも長期間継続すれば実用上十分な効果が得られると判断された。また実用上の最少有効量を０．２５ｇ／日（Val-Tyr含量６．２５μｇ／ｋｇ・日）とすれば、前節の試験においてその１６倍量の２８日間連続投与に対しても、血液生化学上及び臨床上問題となる変化は認められず、また現在市販されているＡＣＥ阻害剤にみられる副作用も問診による報告では皆無であった。
【００６９】
【実施例６】
：血圧正常化用生理活性健康食品の製造
（配合）
果糖ブドウ糖液糖 ９．０ｇ
精製ハチミツ ７．０ｇ
ステビア抽出物 ０．０９ｇ
酸味料（クエン酸） ０．２ｇ
香料 ０．１２ｇ
Val-Tyrを0.130mg／10.0g含む
Ｙ−２画分濃縮液 １０．０ｇ
精製水で全量を１００ｇとする。
【００７０】
上記配合を６０℃で混合溶解した後、１２８℃、１０秒のプレート殺菌した。次いでこれを充分に洗浄した１００ｍｌ容褐色ビンに９０℃で充填し、室温で放冷後、流水水槽中で急冷してドリンクを製造した。
【００７１】
【実施例７】
：血圧正常化等生理機能正常化用生理活性健康食品の製造
（配合）
果糖ブドウ糖液糖 １５．０ｇ
精製ハチミツ １５．０ｇ
ステビア抽出物 ０．１３ｇ
酸味料（クエン酸） ０．４ｇ
香料 ０．２０ｇ
Val-Tyrを0.250mg／50.0g含む
実施例1の α‐1000(液体) ５０．０ｇ
精製水で全量を２００ｇとする。
【００７２】
上記配合を６０℃で混合溶解した後、１２８℃、１０秒のプレート殺菌した。次いでこれを充分に洗浄した２００ｍｌ容褐色ビンに９０℃で充填し、室温で放冷後、流水水槽中で急冷してドリンクを製造した。
【００７３】
【発明の効果】
本発明においては、ペプチドＹ−２の使用によって各種生理機能改善性生理活性健康食品を提供することができた。
特に、本発明の血圧正常化用生理活性健康食品においては、ペプチドＹ−２の添加において、Ｙ−２に含まれるバリル−チロシン（Val-Tyr）を指標とし、液状健康食品100ｇ中該バリル−チロシンを０．１００〜２．０００ｍｇ、好ましくは０．１１０〜０．５００ｍｇ、より好ましくは０．１３０〜０．２５０ｍｇの範囲で含有せしめことによって血圧正常化の顕著な効果が奏されるものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】ペプチドα−１０００のＵＶスペクトルを示す。
【図２】ペプチドα−１０００のＩＲスペクトルを示す。
【図３】ペプチドＹ−２のゲル濾過よる分子量分布を示す。
【図４】ペプチドＹ−２のＵＶスペクトルを示す。
【図５】ペプチドＹ−２のＩＲスペクトルを示す。
【図６】ＨＴ群の血圧と脈拍の測定結果を示す。
【図７】ＨＴ群の血圧と脈拍の測定結果を示す。
【図８】介入試験の結果を示す。
【図９】投与量の変化による血圧の変化を示す。
Claims (4)
- 下記の理化学的性質を有するペプチド含有画分を添加した生理活性健康食品において、バリル−チロシン（Ｖａｌ−Ｔｙｒ）の含量を測定することにより該ペプチド含有画分の含量を測定する方法。
（Ａ）分子量；
２００〜１０，０００
（Ａｓａｈｉｐａｋ ＧＳ−３２０ カラムクロマトグラフィーによる）
（Ｂ）融点；１３８℃で着色（分解点）
（Ｃ）比旋光度；
α＝−５１°（測定温度２０℃、使用波長ナトリウムＤ線）
（Ｄ）溶剤に対する溶解性；
水に易溶；エタノール、アセトン、ヘキサンにはほとんど溶解しない。
（Ｅ）酸性、中性、塩基性の区別；
中性 ｐＨ５．０〜８．０（１０％溶液）
（Ｆ）外観；
白色〜淡黄色粉末
（Ｇ）ＵＶスペクトル；
図４に示すとおり。
（Ｈ）ＩＲスペクトル；
図５に示すとおり。 - 生理活性健康食品が血圧正常化用生理活性健康食品であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
- 生理活性健康食品が、清涼飲料、酸乳飲料、健康ドリンクから選ばれる液状食品；クッキー、練製品、トーフから選ばれる固状食品；ジャム、スプレッドから選ばれるペースト状食品の少なくともひとつであることを特徴とする請求項１又は２に記載の方法。
- 生理活性健康食品が健康ドリンクであることを特徴とする請求項３に記載の方法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12240499A JP4053686B2 (ja) | 1999-04-28 | 1999-04-28 | 生理活性健康食品 |
| KR1020007014958A KR100653582B1 (ko) | 1999-04-28 | 1999-08-09 | 신규 펩티드 ｙ-2 |
| CA002336296A CA2336296A1 (en) | 1999-04-28 | 1999-08-09 | Novel peptide y-2 |
| PCT/JP1999/004287 WO2000066626A1 (fr) | 1999-04-28 | 1999-08-09 | Nouveau peptide y-2 |
| EP99935103A EP1094071A4 (en) | 1999-04-28 | 1999-08-09 | NEW PEPTIDE Y-2 |
| CA002300229A CA2300229A1 (en) | 1999-04-28 | 2000-03-09 | Physiologically-active health foods |
| US10/266,609 US7112571B2 (en) | 1999-04-28 | 2002-10-09 | Peptide Y-2 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12240499A JP4053686B2 (ja) | 1999-04-28 | 1999-04-28 | 生理活性健康食品 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000312567A JP2000312567A (ja) | 2000-11-14 |
| JP4053686B2 true JP4053686B2 (ja) | 2008-02-27 |
Family
ID=14834968
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12240499A Expired - Fee Related JP4053686B2 (ja) | 1999-04-28 | 1999-04-28 | 生理活性健康食品 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7112571B2 (ja) |
| EP (1) | EP1094071A4 (ja) |
| JP (1) | JP4053686B2 (ja) |
| KR (1) | KR100653582B1 (ja) |
| CA (2) | CA2336296A1 (ja) |
| WO (1) | WO2000066626A1 (ja) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2274414A1 (en) * | 1999-06-11 | 2000-12-11 | Universite Laval | Dietary fish protein for use in restoring normal insulin function insulin-resistant individuals |
| DE60224576T2 (de) | 2001-12-25 | 2009-01-08 | Senmi Ekisu Co. Ltd., Ohzu | Neues peptid sy |
| WO2004057976A1 (en) | 2002-12-24 | 2004-07-15 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada As Represented By The Minister Of Agriculture And Agri-Food Canada | Ace inhibitory peptides from plant materials |
| EP1685764A1 (en) | 2005-01-27 | 2006-08-02 | Globus Egg Sciences B.V. | Anti-hypertensive functional food products |
| JP2006056805A (ja) * | 2004-08-18 | 2006-03-02 | Senmi Ekisu Co Ltd | カルシウムチャンネル阻害剤 |
| JPWO2007069716A1 (ja) * | 2005-12-16 | 2009-05-28 | 日本水産株式会社 | 内臓脂肪蓄積抑制作用を有する組成物 |
| ES2791448T3 (es) | 2013-01-23 | 2020-11-04 | Bottled Science Ltd | Composición de bebida para mejorar la piel |
| US11753442B2 (en) | 2020-12-01 | 2023-09-12 | Thai Union Group Public Company Limited | Angiotensin I-converting enzyme (ACE) inhibitory peptides |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62257360A (ja) | 1986-04-29 | 1987-11-09 | Kazuharu Osajima | 低分子量ペプチドを主成分とする呈味物質の製法 |
| ES2053724T3 (es) | 1987-03-20 | 1994-08-01 | Sumitomo Seika Chemicals | Un metodo para la produccion de una composicion comestible y composicion comestible obtenida por dicho metodo. |
| JP3117779B2 (ja) * | 1992-02-24 | 2000-12-18 | 仙味エキス株式会社 | 新規ペプチドα−１０００ |
| JP3388602B2 (ja) * | 1993-02-12 | 2003-03-24 | 仙味エキス株式会社 | 新規親水性ペプチド |
| JP3406341B2 (ja) * | 1993-02-19 | 2003-05-12 | 仙味エキス株式会社 | 新規ペプチド、その製法及び用途 |
| JPH11228599A (ja) * | 1998-02-10 | 1999-08-24 | Senmi Extract Kk | 新規ペプチドｙ−２ |
-
1999
- 1999-04-28 JP JP12240499A patent/JP4053686B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1999-08-09 CA CA002336296A patent/CA2336296A1/en not_active Abandoned
- 1999-08-09 WO PCT/JP1999/004287 patent/WO2000066626A1/ja active IP Right Grant
- 1999-08-09 KR KR1020007014958A patent/KR100653582B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-08-09 EP EP99935103A patent/EP1094071A4/en not_active Withdrawn
-
2000
- 2000-03-09 CA CA002300229A patent/CA2300229A1/en not_active Abandoned
-
2002
- 2002-10-09 US US10/266,609 patent/US7112571B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20030148923A1 (en) | 2003-08-07 |
| CA2300229A1 (en) | 2000-10-28 |
| WO2000066626A1 (fr) | 2000-11-09 |
| EP1094071A1 (en) | 2001-04-25 |
| JP2000312567A (ja) | 2000-11-14 |
| CA2336296A1 (en) | 2000-11-09 |
| EP1094071A4 (en) | 2005-02-09 |
| US7112571B2 (en) | 2006-09-26 |
| KR20010071676A (ko) | 2001-07-31 |
| KR100653582B1 (ko) | 2006-12-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7281031B2 (ja) | 加齢に伴う持続的注意力低下の改善用の組成物 | |
| WO2019203136A1 (ja) | 認知機能改善用食品組成物、認知機能改善剤、及び、これらの製造方法 | |
| JP5594819B2 (ja) | 脂質代謝改善用組成物 | |
| JP4917584B2 (ja) | 可溶化蜂の子処理物、その製造方法、抗酸化剤、ａｃｅ阻害剤、血圧降下剤、皮膚繊維芽細胞増殖促進剤、疲労回復剤、血流改善剤、並びに可溶化蜂の子処理物を含有する医薬品、化粧品又は飲食品 | |
| JP4053686B2 (ja) | 生理活性健康食品 | |
| JP2004244359A (ja) | 血管拡張性医薬及び健康食品組成物 | |
| JP2001342142A (ja) | 泌尿器系疾患予防治療用組成物 | |
| JP4087339B2 (ja) | 新規ペプチドｓｙ | |
| JP3117779B2 (ja) | 新規ペプチドα−１０００ | |
| JP2001002583A (ja) | 血糖値上昇抑制剤 | |
| JP2010100663A (ja) | タマネギ発酵物を含有する酵素阻害剤 | |
| JP2005097222A (ja) | タマネギ発酵物 | |
| JP2003210138A (ja) | 機能性食品、その製造方法及び医薬 | |
| JP2006199641A (ja) | 鉄吸着性高分子物質及び鉄含有高分子物質ならびにこれらの製造方法 | |
| JP2522367B2 (ja) | アミノ酸類含有食品組成物 | |
| JP6083085B2 (ja) | アンジオテンシン変換酵素阻害剤およびその用途 | |
| JP4163801B2 (ja) | アルコール代謝促進作用物 | |
| JPH11228599A (ja) | 新規ペプチドｙ−２ | |
| JP2010043036A (ja) | 糖代謝促進剤 | |
| JPH07135923A (ja) | 機能性食品用組成物 | |
| KR20210018957A (ko) | 경구 또는 경장 영양 조성물 및 그의 제조 방법 | |
| JP3361167B2 (ja) | 緩下性の機能性食品及び緩下剤 | |
| JP2003277273A (ja) | ミネラル吸収促進剤 | |
| JP4435882B2 (ja) | アルコール吸収抑制組成物 | |
| JP2019041696A (ja) | 経口用組成物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20060222 |
|
| RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20060222 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20061024 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20061225 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20071204 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20071206 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101214 Year of fee payment: 3 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4053686 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131214 Year of fee payment: 6 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |