JP4917584B2 - 可溶化蜂の子処理物、その製造方法、抗酸化剤、ace阻害剤、血圧降下剤、皮膚繊維芽細胞増殖促進剤、疲労回復剤、血流改善剤、並びに可溶化蜂の子処理物を含有する医薬品、化粧品又は飲食品 - Google Patents
可溶化蜂の子処理物、その製造方法、抗酸化剤、ace阻害剤、血圧降下剤、皮膚繊維芽細胞増殖促進剤、疲労回復剤、血流改善剤、並びに可溶化蜂の子処理物を含有する医薬品、化粧品又は飲食品 Download PDFInfo
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Description
請求項2〜7に記載の抗酸化剤、ACE阻害剤、血圧降下剤、皮膚繊維芽細胞増殖促進剤、疲労回復剤、及び血流改善剤は、蜂の子、又は蜂の子を主成分が水である抽出溶媒により抽出処理して得られる不溶性成分を、バチルス・サブティリス由来の中性プロテアーゼ、アスペルギルス・オリザエ由来の中性プロテアーゼ及びバチルス・リケニフォルミス由来のアルカリ性プロテアーゼから選ばれる少なくとも一種を用いたプロテアーゼ処理と、セルラーゼ処理と、pH2.0〜4.0における酸性化処理とを組み合わせて処理することにより得られる可溶化蜂の子処理物を含有する。
本実施形態において使用される蜂の子としては、蜂の幼虫及び蜂の蛹から選ばれる少なくとも一種が挙げられる。これら蜂の幼虫及び蛹は、雌雄のいずれであってもよく、また、ミツバチ、スズメバチ、クマバチ、アシナガバチ等いずれの蜂の幼虫及び蛹であってもよい。さらに、本実施形態で使用される蜂の子の産地は、中国、台湾、日本等のアジア諸国、ヨーロッパ諸国、北アメリカ諸国、南アメリカ諸国のいずれでもよい。
プロテアーゼも使用することができる。また、プロテアーゼには、至適pHを酸性付近(例えば、pH6.0未満)、中性付近(例えば、pH5.0〜9.0)、アルカリ性付近(例えば、pH8.0以上)に有する酸性プロテアーゼ、中性プロテアーゼ、アルカリ性プロテアーゼがそれぞれ存在するが、いずれのプロテアーゼも使用することができる。さらに、プロテアーゼは、微生物由来、動物由来、植物由来等、様々なものに由来するプロテアーゼが存在するが、いずれのものに由来するプロテアーゼも使用することができる。これらのプロテアーゼの中でも、水に対する溶解性の向上の観点から微生物由来のプロテアーゼが好ましく用いられる。
)由来の酸性プロテアーゼを挙げることができる。市販品としては、スミチームAP(新日本化学工業社製)を使用することができる。スミチームAPを用いたプロテアーゼ処理は、好ましくは35〜50℃、より好ましくは40〜50℃、さらに好ましくは45〜50℃の条件で行なわれる。
)由来の中性プロテアーゼ、アスペルギルス・オリザエ(Aspergillus oryzae)由来の中性プロテアーゼ、バチルス・ステアロサーモフィラス(Bacillus stearothermophilus)
由来の中性プロテアーゼ、及びパパイヤ由来のプロテアーゼを挙げることができる。バチルス・サブティリス由来の中性プロテアーゼとして、市販品としては、プロテアーゼN「アマノ」G(アマノエンザイム社製)を使用することができる。プロテアーゼN「アマノ」Gは、pH5.0〜7.0の領域で有効に作用し、その至適pHは、pH7.0である。プロテアーゼN「アマノ」Gを用いたプロテアーゼ処理は、好ましくは40〜60℃、より好ましくは45〜55℃、さらに好ましくは50〜55℃の条件で行なわれる。
licheniformis)由来のアルカリ性プロテアーゼを挙げることができる。市販品としては、プロチンSD−AC−10F(大和化成社製)を使用することができる。プロチンSD−AC−10Fは、アルカリ性付近で有効に作用し、その至適pHは、pH10.0〜11.0である。プロチンSD−AC−10Fを用いたプロテアーゼ処理は、好ましくは40〜60℃、より好ましくは50〜60℃、さらに好ましくは55〜60℃の条件で行なわれる。
各種プロテアーゼを用いたプロテアーゼ処理は、蜂の子原料、プロテアーゼ及び水(又は緩衝液)を含む反応液を、各種プロテアーゼに応じた反応条件下でインキュベートすることにより実施される。プロテアーゼ処理の処理時間は、反応温度、酵素の力価等により適宜設定されるが、好ましくは2〜5時間、より好ましくは3〜4時間である。処理時間が2時間未満の場合、プロテアーゼによるタンパク質分解が十分に進行しないおそれがある。逆に、処理時間が5時間を越える場合、プロテアーゼ処理(蜂の子処理物の製造)に要する時間が著しく浪費されるため不経済である。処理pHは好ましくは各酵素の至適pH付近で行なわれる。なお、このプロテアーゼ処理は、インキュベート後の反応液を直ちに85〜100℃で5〜60分間加熱してプロテアーゼを失活させることが望ましい。
−1,4−グリカンの途中位置から分解するエンド型セルラーゼとが存在するが、いずれ
のセルラーゼも使用することができる。また、セルラーゼには、至適pHを酸性付近(例えば、pH6.0未満)、中性付近(例えば、pH5.0〜9.0)、アルカリ性付近(例えば、pH8.0以上)に有する酸性セルラーゼ、中性セルラーゼ、アルカリ性セルラーゼがそれぞれ存在するが、いずれのセルラーゼも使用することができる。
酸性セルラーゼを挙げることができる。アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)
由来の酸性セルラーゼとして、市販品としては、セルラーゼA「アマノ」3(アマノエンザイム社製)を使用することができる。セルラーゼA「アマノ」3は、酸性付近で有効に作用し、その至適pHは、pH4.5である。セルラーゼA「アマノ」3を用いたセルラーゼ処理は、好ましくは40〜60℃、より好ましくは40〜55℃、さらに好ましくは50〜55℃の条件で行なわれる。
(1)本実施形態では、蜂の子処理物を得るための工程にプロテアーゼ処理及び酸性化処理が含まれている。これにより、蜂の子原料から水に対する溶解性を高めた蜂の子処理
物を高収率で得ることができる。さらに、本実施形態では、上記処理に加えて、蜂の子処理物を得るための工程にセルラーゼ処理が含まれている。これにより、蜂の子処理物の収率をより高めることができる。また、セルラーゼ処理を行なうことにより、反応液の消泡性及び濾過性が向上する。
・ 本実施形態では、蜂の子原料に対して、プロテアーゼ処理、セルラーゼ処理及び酸性化処理の3工程処理を行なうことにより蜂の子処理物を得ていたが、セルラーゼ処理を行なうことなく、プロテアーゼ処理及び酸性化処理の2工程処理のみにより蜂の子処理物を得るようにしてもよい。このようにした場合も、蜂の子原料から水に対する溶解性を高めた蜂の子処理物を高収率で得ることができる。
状、ペースト状等、いずれの形態に加工させたものであってもよい。
(蜂の子処理物の調製)
表1の実施例1〜6に示されるように、中国産の雄蜂の蛹から得られた蜂の子粉末を原料として用い、プロテアーゼ処理及び酸性化処理を行なった。まず、この蜂の子粉末2.5gを20質量%となるように水に懸濁させ、蜂の子原料水溶液(125ml)を調製した。次に、蜂の子原料水溶液に各実施例に対応するプロテアーゼを25mg(蜂の子粉末に対して1質量%)添加し、50℃にて4時間プロテアーゼ処理を行なった。ここでは、プロテアーゼとして、スミチームAP(新日本化学工業社製)、プロテアーゼN「アマノ」G(アマノエンザイム社製)、ウマミザイムG(アマノエンザイム社製)、スミチームFP(新日本化学工業社製)、プロテアーゼS「アマノ」G(アマノエンザイム社製)、プロチンSD−AC−10F(アマノエンザイム社製)の6種類を使用した。また、プロテアーゼ処理時における反応液のpHは、プロテアーゼがスミチームAPの場合は3.0、プロテアーゼN「アマノ」G、ウマミザイムG、スミチームFP、プロテアーゼS「アマノ」Gの場合は7.0、プロチンSD−AC−10Fの場合は10.0とした。
」Gを用いてセルラーゼ処理を行ない、次に酸性化処理を行なった。そして、比較例1〜3についても各実施例と同様に濾過処理及び凍結乾燥して粉末状の蜂の子処理物をそれぞれ調製し、その収量及び回収率を測定した。その結果を表1に示す。
実施例の抗酸化作用をラジカル補足能試験により評価した。本試験は、ラジカル状態で517nmの極大吸収を持つDPPH(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl)が抗酸化物質に
より還元されて退色することを利用するものである。実施例及び比較例をそれぞれ20mg/mlとなるように蒸留水中に溶解させて各試料溶液を調製した。各試料溶液100μlに、170μMのDPPHエタノール溶液1.9mlを加えて混合し、DPPHエタノール試料溶液とし、15分間反応させた。その後、分光光度計(島津製作所製UV-12
00)を用いて、各DPPHエタノール試料溶液の光の波長517nmにおける吸光度を測定した。なお、試料溶液に代えて蒸留水をDPPHエタノール溶液に混合したものをコ
ントロールとして、同様に517nmにおける吸光度を測定した。DPPHラジカル捕捉率は以下の式より求めた。その結果を表2に示す。
Ac:コントロールの517nmにおける吸光度
As:(DPPHエタノール試料溶液の517nmにおける吸光度)−(試料溶液の517nmにおける吸光度)
実施例のアンジオテンシン変換酵素(ACE)阻害作用を評価した。ACEは血圧上昇因子アンジオテンシンIIの生成に関わる酵素であり、この酵素の働きを抑えることは、血圧の降下にもつながることが確認されている。実施例及び比較例をそれぞれ0.08mg/ml,0.4mg/ml,2mg/mlとなるように蒸留水中に溶解させて試料溶液を調整した。
を酢酸エチルで抽出し、濃縮乾固したものを蒸留水2.5mlに再溶解して、その228nmにおける吸光度を測定した。
Ec:コントロールの228nmにおける吸光度
Ecb:コントロールのブランクの228nmにおける吸光度
Es:各試料の228nmにおける吸光度
Esb:各試料のブランクの228nmにおける吸光度
そして、求められた各濃度におけるACE阻害率に基づいて、ACE阻害活性を50%阻害する濃度(mg/ml)をACE阻害活性IC50値として算出した。その結果を表3に示す。
実施例のヒト皮膚繊維芽細胞増殖作用について評価した。実施例を6μg/ml,30μg/ml,150μg/mlとなるように、10%FBS含有DMEM培地中に溶解させて試料培地を調整した。また、実施例を含まない10%FBS含有DMEM培地を用意し、これをコントロールとした。
実施例の疲労回復作用をマウス強制水泳試験により評価した。マウスを水中に入れると、最初の1分間程度は四肢と尾を使って泳ぎ、脱出を試みる。しかし、その後は疲労によりマウスが水泳を止め、水面に浮くだけの時間が生じる。本試験では、これを不動時間として計測する。なお、本試験では実施例及び比較例の他に、陽性対照としてL−カルノシ
ンについても、その評価を行なった。
実施例の血流改善作用について評価した。本試験では、実施例及び比較例の他に陽性対照としてL−アルギニンについても、その評価を行なった。ラットに対して、2g/kg(体重)となるように実施例、比較例及びL−アルギニンを経口投与し、60分経過後に麻酔注射を行なうとともに、ラットの尾部付け根にける血流量の測定を開始した。血流量の測定は60分間行ない、その平均血流量を算出した。その結果を表6に示す。なお、実施例、比較例及びL−アルギニンを投与していないラットについても同様の操作を行い、これをコントロールとした。
実施例のアレルギー性の有無について評価した。本試験では、実施例及び比較例に含まれる甲殻類アレルギー物質(甲殻類アレルギー性タンパク質)をELISA法により測定した。甲殻類アレルギー物質の測定は、FAテスト EIA−甲殻類「ニッスイ」(日水製薬株式会社製)を用いて行なった。実施例及び比較例をそれぞれ2.5mg/mlとなるように蒸留水中に溶解させて試料溶液を調整し、各試料溶液中に含まれる甲殻類アレルギー物質含量を測定した。なお、各試料溶液について甲殻類アレルギー物質含量の測定を3度行い、甲殻類アレルギー物質含量の平均値が20ppm以上である場合にアレルギー性有り(陽性)、1.0ppm以上20ppm未満である場合にアレルギー性の疑い有り(疑陽性)、1.0ppm未満である場合にアレルギー性無し(陰性)と判定した。その結果を表7に示す。
○ 前記可溶化蜂の子処理物を含有することを特徴とする冷え性改善剤。
○ 前記可溶化蜂の子処理物を含有することを特徴とする耳鳴り改善剤。
○ 前記可溶化蜂の子処理物を含有することを特徴とする血圧降下剤。
○ 前記可溶化蜂の子処理物を含有することを特徴とする皮膚繊維芽細胞増殖促進剤。
○ 前記可溶化蜂の子処理物を含有することを特徴とする血流改善剤。
Claims (9)
- 蜂の子、又は蜂の子を主成分が水である抽出溶媒により抽出処理して得られる不溶性成分を、バチルス・サブティリス由来の中性プロテアーゼ、アスペルギルス・オリザエ由来の中性プロテアーゼ及びバチルス・リケニフォルミス由来のアルカリ性プロテアーゼから選ばれる少なくとも一種を用いたプロテアーゼ処理と、セルラーゼ処理と、pH2.0〜4.0における酸性化処理とを組み合わせて処理することにより得られ、
抗酸化剤、ACE阻害剤、血圧降下剤、皮膚繊維芽細胞増殖促進剤、疲労回復剤、又は血流改善剤として適用されることを特徴とする可溶化蜂の子処理物。 - 蜂の子、又は蜂の子を主成分が水である抽出溶媒により抽出処理して得られる不溶性成分を、バチルス・サブティリス由来の中性プロテアーゼ、アスペルギルス・オリザエ由来の中性プロテアーゼ及びバチルス・リケニフォルミス由来のアルカリ性プロテアーゼから選ばれる少なくとも一種を用いたプロテアーゼ処理と、セルラーゼ処理と、pH2.0〜4.0における酸性化処理とを組み合わせて処理することにより得られる可溶化蜂の子処理物を含有する抗酸化剤。
- 蜂の子、又は蜂の子を主成分が水である抽出溶媒により抽出処理して得られる不溶性成分を、バチルス・サブティリス由来の中性プロテアーゼ、アスペルギルス・オリザエ由来の中性プロテアーゼ及びバチルス・リケニフォルミス由来のアルカリ性プロテアーゼから選ばれる少なくとも一種を用いたプロテアーゼ処理と、セルラーゼ処理と、pH2.0〜4.0における酸性化処理とを組み合わせて処理することにより得られる可溶化蜂の子処理物を含有するACE阻害剤。
- 蜂の子、又は蜂の子を主成分が水である抽出溶媒により抽出処理して得られる不溶性成分を、バチルス・サブティリス由来の中性プロテアーゼ、アスペルギルス・オリザエ由来の中性プロテアーゼ及びバチルス・リケニフォルミス由来のアルカリ性プロテアーゼから選ばれる少なくとも一種を用いたプロテアーゼ処理と、セルラーゼ処理と、pH2.0〜4.0における酸性化処理とを組み合わせて処理することにより得られる可溶化蜂の子処理物を含有する血圧降下剤。
- 蜂の子、又は蜂の子を主成分が水である抽出溶媒により抽出処理して得られる不溶性成分を、バチルス・サブティリス由来の中性プロテアーゼ、アスペルギルス・オリザエ由来の中性プロテアーゼ及びバチルス・リケニフォルミス由来のアルカリ性プロテアーゼから選ばれる少なくとも一種を用いたプロテアーゼ処理と、セルラーゼ処理と、pH2.0〜4.0における酸性化処理とを組み合わせて処理することにより得られる可溶化蜂の子処理物を含有する皮膚繊維芽細胞増殖促進剤。
- 蜂の子、又は蜂の子を主成分が水である抽出溶媒により抽出処理して得られる不溶性成分を、バチルス・サブティリス由来の中性プロテアーゼ、アスペルギルス・オリザエ由来の中性プロテアーゼ及びバチルス・リケニフォルミス由来のアルカリ性プロテアーゼから選ばれる少なくとも一種を用いたプロテアーゼ処理と、セルラーゼ処理と、pH2.0〜4.0における酸性化処理とを組み合わせて処理することにより得られる可溶化蜂の子処理物を含有する疲労回復剤。
- 蜂の子、又は蜂の子を主成分が水である抽出溶媒により抽出処理して得られる不溶性成分を、バチルス・サブティリス由来の中性プロテアーゼ、アスペルギルス・オリザエ由来の中性プロテアーゼ及びバチルス・リケニフォルミス由来のアルカリ性プロテアーゼから選ばれる少なくとも一種を用いたプロテアーゼ処理と、セルラーゼ処理と、pH2.0〜4.0における酸性化処理とを組み合わせて処理することにより得られる可溶化蜂の子処理物を含有する血流改善剤。
- 抗酸化剤、ACE阻害剤、血圧降下剤、皮膚繊維芽細胞増殖促進剤、疲労回復剤、又は血流改善剤として適用される可溶化蜂の子処理物の製造方法であって、
蜂の子、又は蜂の子を主成分が水である抽出溶媒により抽出処理して得られる不溶性成分を、バチルス・サブティリス由来の中性プロテアーゼ、アスペルギルス・オリザエ由来の中性プロテアーゼ及びバチルス・リケニフォルミス由来のアルカリ性プロテアーゼから選ばれる少なくとも一種を用いたプロテアーゼ処理と、セルラーゼ処理と、pH2.0〜4.0における酸性化処理とを組み合わせて処理することを特徴とする可溶化蜂の子処理物の製造方法。 - 請求項1に記載の可溶化蜂の子処理物を含有することを特徴とする医薬品、化粧品又は飲食品。
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