HUT72977A

HUT72977A - Difluoro-pentapeptide derivative anti-inflammatory agents

Info

Publication number: HUT72977A
Application number: HU9501844A
Authority: HU
Inventors: John Mcmillan Mciver
Original assignee: Procter & Gamble
Priority date: 1992-12-22
Filing date: 1993-12-16
Publication date: 1996-06-28
Also published as: NZ259274A; FI953106A; JPH08505143A; RU95113497A; WO1994014842A1; SK82795A3; CZ164595A3; FI953106A0; AU697299B2; HU9501844D0; SG54306A1; PE5195A1; RU2141971C1; CZ286126B6; EP0675901A1; IL108031A0; TW402607B; MX9400072A; PL309638A1; CA2152267A1

Description

A találmány tárgyát gyulladáscsökkentő hatóanyagként alkalmazható új peptid származékok képezik.

Számos, különböző biológiai hatású polipeptid származék ismeretes. A következőkben felsorolt irodalmi hivatkozások ilyen polipeptid származékokra vonatkoznak: 4,242,329 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (Cleason,

Simonson &

Arielli;

1980. december 30.); 4,316,889 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (1982.

február 23.;

Bajusz, Haenohrl, Barabas & Bagdy); 4,399,065 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (1983. augusztus 16.;

Bajusz, Hasenohrl, Barabas & Bagdy); 4,401,594 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (1983. augusztus 30;

Umezawa, Takeuchi, Aoyagi, Ishii, Saino & Someno); 4,478,745 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (1984.

október 23.; Bajusz, Hasenohrl, Barabas & Bagdy); 4,528,133 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (1985.

július 9.; Kasafirek, Fric, Slaby & Robalova); 4,596,789 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (1986. június

24. ;

Dutta, Stein,

Trainor & Wildonger);

4,623,639 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (1986 .

november 18.;

Hassal, Johnson & Róberts);

4,703,036 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (1987. október

27.; Bajusz, Hasenohrl, Bady, Barabas, Diószegi, Fittler, Jozsa, Horváth & Jozst); 4,880,780 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (1989. november 14.); Trainor &

Stein); 4,883,863 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (1989. november 28.); Abe, Yaginuma, • ·

Nagasawa & Kuroiwa); 4,902,781 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (1990. február 20.; Mizoue, Okazaki, Hanada, Omura & Amamoto); 4,923,890 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (1990. május 8.; Trainor & Stein); 5,066,643 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (1991. november 19.; Abeles & Gelb); WO 84/00365 számon közzétett nemzetközi szabadalmi bejelentés (Galpin & Wilby; közzétéve 1984. február 2-án); WO 87/02675 számon közzétett nemzetközi szabadalmi bejelentés (Hoover;

47-30618 számú japán szabadalmi bejelentés (Toray Inds. Inc.;

közzétéve 1972. november

57-145846 számú japán szabadalmi bejelentés (Mitsubishi

Ind. KK; közzétéve 1974. július 19-én); 58-164563 számú szabadalmi bejelentés (Daiichi Kagaku Yaku; közzétéve

Chem.

japán

1982 .

március 25-én); 0275101 számú európai szabadalmi bejelentés (Merrel Dow Pharmaceuticals, Inc.; közzétéve 1988. július 20-án); Aoyagi Miyata, Nanbo, Kojima; Matsuzaki, Ishizuka, Takeuchi & Umezawa, Biological Activities of Leupeptins,.

The Journal of Antibiotics, Vol. XXII,No. 11 (Nov. 1969), pp. 558-568; Bajusz, Barabas, Tolnay, Szeli & Bagdy, Inhibition of Thrombin and Trypsin by Tripeptide Aldehydes,Int. J.

Peptide Protein Rés., Vol. 12 (1978), pp. 217-221; Gaal, Bacsy & Rappay, Cationic Ferritin Uptake by Cultured Anterior Pituitary Cells Treated with the Proteinase Inhibitor, BOC-Dphe-Phe-Lys-H, Histochemistry, Vo. 88 (1988), pp. 401-406;

Makara, Rappay, Garamvolgyi, Nagy, Danko & Bajusz, The Tripeptide Aldehyde, BOC-DPhe-Phe-Lysinal, is a Növel Ca2+ • ·

Channel Inhibitor in Pituitary Cells, European Journal of Pharmacology, Vol. 151 (1988), pp. 147-149; Nagy, Makara, Horváth, Rappay, Kurcz & Bajusz, Tripeptide Aldehyde Protease Inhibitors May Depress in Vitro Prolactin and Growth Hormoné Release, Endocrinology, Vol. 116, No. 4 (1985), pp. 14261432; Rappay, Makara, Bajusz & Nagy, Various Proteinase Inhibitors Decrease Prolactin and Growth Hormoné Release by Anterior Pituitary Cells, Life Sciences, Vol. 36 (1985), pp. 549-555 .

alkalmazhtó új difluor-pentapeptid származékok képezik. A találmány tárgyát képezik továbbá azok az új

-pentapeptid származékok, melyek csökkentik a difluorreumatoid artritisszel kapcsolatos csonfelszívódást és/vagy heterotóp

Ugyancsak a találmány tárgyát képezik a különbö or-pentapeptid származékokat tartalmzó új gyógyszerkészítményék.

A találmány tárgyát képezik a gyulladásokkal összefüggő megbetegedéseknek a találmány szerinti vegyületekkel történő kezelésére szolgáló módszerek is.

A találmány tárgyát képezik az (1) általános képletű, gyulladáscsökkentő hatású vegyületek, amely képletben (a) -X jelentése egy, az alábbi helyettesítőkből álló csoportból kiválasztott csoport: 4-15 szénatomos gyűrűs alkil-, legalább kétszeresen elágazó 6-15 szénatomos alkil- és 6-15 szénatomos • · « aril-alkil-csoport;

(b) n értéke 0-tól 2-ig terjedő egész szám;

(c) -V- jelentés az -0C(0)-, -C(O)-, -SO2- és -P(O)(OH) képletű csoportok, illetve az -N(Q)C(O)- és -N(Q)C(S)- általános képletű csoportok valamelyike, amely képletekben (d) -Q jelentése hidrogénatom, vagy 1-6 szénatomos, egyenes vagy elágazó láncú telített vagy 1-2 kettős kötést tartalmazó telítetlen alkilcsoport, vagy -Q és -X egymással kovalens kötéssel kapcsolódnak oly módon, hogy 5-20 szénatomos gyűrűs szerkezetet képeznek, amely magában foglalja azt a nitrogénatomot, amelyhez a -Q csoport kapcsolódik;

(e) Z jelentése oxigénatom vagy -NH- csoport; ha V jelentése -0C(0)- csoport, akkor -Z- -NH-csoportot jelent;

(f) -R¹ jelentése egy, az alábbi helyettesítőkből álló csoportból kiválasztott csoport: 1-6 szénatomos, egyenes vagy elágazó láncú telített, vagy 1-2 kettős kötést tartalmazó telítetlen alkil-, 3-10 szénatomos, telített vagy 1-2 kettős kötést tartalmazó telítetlen gyűrűs alkil- és aril-alkil-csoport, amely utóbbinál az alifás rész 1-2 szénatomos és telített; és az a szénatom, amelyhez az -R¹ csoport . kapcsolódik D vagy L konfigurációjú;

• · (g) -R² jelentése egy, az alábbi helyettesítőkből álló csoportból kiválasztott csoport: 1-6 szénatomomos, egyenes vagy elágazó láncú telített vagy 1-2 kettős kötést tartalmazó telítetlen alkil-, 3-10 szénatomos, telített vagy 1-2 kettős kötést tartalmazó telítetlen gyűrűs alkil- és aril-alkil-csoport, amely utóbbinál az alifás rész 1-2 szénatomos és telített, és az a szénatom, amelyhez az -R² csoport kapcsolódik L konfigurációjú;

(h) -R² jelentése a - (0¾) _m-A-NH₂ vagy a

-(CH2)_m-A-B-C(NH₂)=NH általános képletú csoport, amely képletekben m értéke 1-től 6-ig terjedő egész szám, -A- jelentése kovalens kötés vagy p-fenil- vagy p-ciklohexil-csoport, -B- jelentése kovalens kötés vagy -NH-csoport; és a szénatom, amelyhez az -R³ csoport kapcsolódik L konfigurációjú;

(i) -R⁴ jelentése egy, az alábbi helyettesítőkből álló csoportból kiválasztott csoport: 1-6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú telített vagy 1-2 kettős kötést tartalmazó telítetlen alkil-, 3-10 szénatomos, telített vagy 1-2 kettős kötést tartalmzó telítetlen gyűrűs alkil- és aril-alkil-csoport, amely utóbbinál az alifás rész 1-2 szénatomos és telített; és a szénatom, amelyhez az -R⁴ csoport kapcsolódik L konfiguráció j Ú;

• · (j) -R⁵ jelentése a -(0¾)_m-A-NH2 vagy a

-(CH2)_m-A-B-C(NH2)=NH általános képletú csoport, amely képletekben m értéke 1-től 6-ig terjedő egész szám, -A- jelentése kovalens kötés vagy p-fenil- vagy p-ciklohexil-csoport, -B- jelentése kovalens kötés vagy -NH-csoport; és a szénatom, amelyhez az -R⁵ csoport kapcsolódik L konfigurációjú; és (k) -Y jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport.

Ugyancsak a találmány tárgyát képezik a fenti vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények, továbbá a gyulladás vagy a fájdalom ilyen vegyületekkel és készítményekkel történő kezelésére szolgáló módszerek.

A leírásban szereplő alkil meghatározás, ha másként nem értelmezzük, olyan szénatomokból álló láncot jelent, amely lehet egyenes, elágazó vagy gyűrűs, lehet telített vagy telítetlen, és amely szubsztituálatlan vagy szubsztituált lehet. A gyűrűs alkil kifejezés vonatkozhat az alkilcsoportban lévő szénatomok összességére, vagy csak arra a részre, amely magában a ciklusos részben található. A gyűrűs alkilcsoport lehet mono-, bi- és/vagy triciklusos alkilcsoport.

Az előnyös alkilcsoport — egyéb meghatározás hiányában — az ebben a bekezdésben meghatározott csoportot jelent, így az előnyös alkilcsoport telített, helyettesítetlen, illetve helyettesített, a szubsztituensek a következők lehetnek: halogénatom, amino-, hidroxi-, alkoxi-, ciano-, nitro-, aril- és trifluor-metil-csoport. Az alkoxi kifejezés

-O-alkil-csoportot jelent. A szubsztituált alkilcsoport előnyösen mono-, di- vagy triszubsztituált, különösen monoszubsztituált.

Az itt használt aril kifejezés — amíg azt másként meg nem határozzuk — szubsztituálatlan vagy szubsztituált árucsoportot jelent. Az előnyös arilcsoport — amíg azt másként meg nem határozzuk — az ebben a bekezdésben meghatározott csoportot jelenti. Előnyös arilcsoport a fenil- és a naftil-, különösen a fenilcsoport. Az előnyös arilcsoport mono-, di-, triszubsztituált vagy szubsztituálatlan, különösen szubsztituálatlan. Előnyös arilcsoport szubsztituensek a halogénatom, továbbá az alkil-, amino-, hidroxi-, alkoxi-, ciano-, nitro- és trifluor-metil-csoport.

Az aril-alkil kifejezés, melyet itt használunk, olyan alkilcsoportot jelent, amely arilcsoporttal szubsztituált. Előnyös aril-alkil-csoport az aril-metil-csoport.

Az itt használt alifás kifejezés az aril-alkil-csoport nyíltláncú, szénatomokból álló részét jelenti.

A leírásban az alábbi rövidítéseket használjuk. Az aminosavak rövidítései vonatkozhatnak magára az illető aminosavra, még gyakoribb azonban, hogy az aminosavmaradékokra is vonat-

koznak,	melyek	egy peptid vagy peptidszármazék szerkezetének
részei.
	Arg	arginil-
	Orn	ornitil-
	Leu	leucil-
	Gly	glicil-

• · · • · · ·«

t-Bug	tere-bútil-glicil-
Phe	fenilalanil-
Adoc	adamant i1-oxi-karboni1-
Z	benzil-oxi-karbonil-
Boc	terc-butil-oxi-karbonil-
DECP	dietil-ciano-foszfonát
Me	metil-
Et	etil-
TEA	trietil-amin
DMF	N,N-dimetil-formamid
TFA	trifluor-acetát
ipa	izopropil-alkohol
Bn	benzil-
Lys	lizil-
Ac	acetil-
TLC	vékonyréteg-kromatográfia
TSA	toluol-szulfonsav
THF	tetrahidrofurán
HOBt	hidroxi-benztriazol
DDC	diciklohexil-karbodiimid
DIPEA	N,N-diizopropil-etil-amin
Chg	ciklohexil-glicil-
Cha	ciklohexil-alanil-
Nal	naftil-alanil-
Trp	triptof il-
Adg	adamantil-glicil-
pGphe	p-guanidino-fenilalanil-

3,5 Dmadoc	(3,5-dimetil-adamantil-oxi)-karbonil-
eBroc	endo-borni1-oxi-karboni1-
Noc	naftil-oxi-karboni-
Moc	mentil-oxi-karbonil-
Ad	adamantoil-
Fmoc	(9 - fluorénál)-metoxi-karbonil-
Ada	adamantán-acetil-
Adac	(adamantil-amino)-karbonil-
Mnoc	morfolinil-
Nórád	noradamantoil-
Hadoc	homoadamantoil-oxi-karbonil-
Foc	fenchil-oxi-karboni1-
Imoc	izömétil-oxi-karboni1-
Ipoc	izopino-kamfanil-oxi-karboni1-
AC	acetil—
DMF	N,N-dimetil- formamid
HPLC	nagynyomású folyadékkromatográfia

A találmány szerinti új gyulladásgátló vegyületek kémiai szerkezetét az (1) általános képlet tünteti fel.

Az (1) általános képletben n értéke 0-tól 2-ig terjedő egész szám; n értéke előnyösen 0 vagy 1.

Az (1) általános képletben -R¹ jelentése egy, az alábbi helyettesítőkből álló csoportból kiválasztott csoport: 1-6 szénatomos, egyenes vagy elágazó láncú telített, vagy 1-2 kettőskötést tartalmazó telítetlen alkil-, 3-10 szénatomos telített vagy 1-2 kettős kötést tartalmazó telítetlen gyűrűs alkil- és aril-alkil-csoport, amely utóbbinál az alifás rész

1-2 szénatomos és telített. Előnyös -R¹ csoport a telített alkilcsoport. Az előnyös alkilcsoport szubsztituálatlan vagy aril-alkil-csoport, különösen benzil- vagy naftálcsoport. Előnyös gyűrűs alkilcsoport a 3-8 szénatomos (még előnyösebb az 5-6 szénatomos) gyűrűhöz kapcsolódó metil- vagy az adamantil-metil-csoport. Az előnyös -R¹ hidrofób csoport, amelyben a hidrofóbicitás annak a szénatomnak a közelében koncentrálódik, amelyhez az -RÍ kapcsolódik. Az előnyös -R-*- specifikus példái a következők: terc-butil-, 1,1-dimetil-propil-, izopropil-, izobutil-, szek-butil-, neopentil-, ciklohexil-, ciklohexil-metil-, adamantil-, adamantil-metil-, benzil- vagy naftálcsoport; legelőnyösebben -R¹ a terc-butil csoport.

Az (1) szerkezetben az a szénatom, amelyhez az -R¹ kapcsolódik D vagy L, előnyösen D konfigurációjú. A -Z-CH(R¹)-C(0)- általános képletű csoport egy aminosavmaradékot jelent (amelyet a továbbiakban -AAl-gyel jelölünk), ha -Zjelentése -NH-csoport; előnyös -AA1- jelentésű aminosavmaradékok a következők: t-Bug, Val, Ile, Leu, Chg, Cha, Phe, Nal, Trp és Adg; még előnyösebb aminosavmaradékok a t-Bug, Val és Ile; legelőnyösebb -AAl-csoport a t-Bug.

Az (1) szerkezetben az -R² jelentése egy, az alábbi helyettesítőkből álló csoportból kiválasztott csoport: 1-6 szénatomos, egyenes vagy elágazó láncú telített, vagy 1-2 kettős kötést tartalmazó telítetlen alkil-, 3-10 szénatomos telített, vagy 1-2 kettős kötést tartalmazó telítetlen gyűrűs alkil- és aril-alkil-csoport, amely utóbbinál az alifás rész 1-2 szénatomos és telített. Az előnyös elágazó vagy gyűrűs alkilcso12

port telített. Az előnyös elágazó vagy gyűrűs alkilcsoport szubsztituálatlan. Az előnyös elágazó alkilcsoport 3-5 szénatomos; a legelőnyösebb elágazó alkilcsoport az izobutilcsoport. Az előnyös gyűrűs alkilcsoport 3-7 szénatomos, még előnyösebben 5-6 szénatomos, és a gyűrűs rész metilén-, etilén- vagy propilén-, előnyösen metilén- vagy etilén-, még előnyösebben metiléncsoporthoz kötődik, amely viszont az (1) szerkezetben ahhoz a szénatomhoz kapcsolódik, amelyhez az -R²csoport is kötődik. Előnyös aril-alkil-csoport a benzil-, p-hidroxi-benzil- és a naftálcsoport. Még előnyösebben választhatjuk ki az -R² csoportot az izopropil-, izobutil-, szek-butil-, ciklohexil-metil-, benzil- és a naftálcsoportok közül; legelőnyösebb a benzilcsoport.

Az (1) szerkezetben az a szénatom, amelyhez az -R²-csoport kapcsolódik, D vagy L konfigurációjú. Az -NH-CH(R²)-C(0) általános képletü csoport jelentése egy amonisavmaradék, amelyet a következőkben -AA²- jellel jelölünk; az -AA²-nek megfelelő előnyös aminosavmaradékok a Phe, Nal, Cha, Leu és Ile; legelőnyösebb -AA²- csoport a Phe.

Az (1) szerkezetben az -R²- csoport a -(CH₂)_m-A-NH2 vagy a -(CH2)-A-B-C(NH₂)=NH általános képletü szekvenciák valamelyikét jelenti, amely képletekben m értéke 1-től 6-ig terjedő egész szám, -A- jelentése kovalens kötés, p-fenilvagy p-ciklohexil-csoport, és -B- jelentése kovalens kötés vagy -NH-csoport. Ha -A- kovalens kötést jelent, n értéke előnyösen 2-5, még előnyösebben 3 vagy 4. Ha -A- jelentése p-fenilvagy p-ciklohexil-csoport, m értéke előnyösen 1-4, még előnyö• · sebben 1-3, még előnyösebben 1. Az -A- jelentése előnyösen kovalens kötés, a -B- jelentése előnyösen -NH-csoport. Még előnyösebb -R³-csoport a 3-guanidino- vagy a 4-amino-butil-csoport.

Az (1) szerkezetben az a szénatom, amelyhez az -R³-csoport kapcsolódik D vagy L konfigurációjú, előnyösen L konfigurációjú. Az -NH-(CH(R³)-C(0)- általános képletű szerkezet egy aminosavmaradékot jelent (ezt a továbbiakban -AA³-csoportként tüntetjük fel); az -AA³-csoportnak megfelelő előnyös aminosavmaradékok az Arg, Lys, homo-Arg, p-amidino-phe és a p-Gphe; legelőnyösebb -AA³-aminosavmaradék a Lys.

Az (1) szerkezetben az -R^-csoport jelentése egy, az alábbi helyettesítőkből álló csoportból kiválasztott csoport ·. 1-6 szénatomos, egyenes vagy elágazó láncú, telített vagy 1-2 kettős kötést tartalmazó telítetlen alkil-, 3-10 szénatomos, telített vagy 1-2 kettős kötést tartalmazó telítetlen gyűrűs alkil- és aril-alkil-csoport, amely utóbbinál az alifás rész 1-2 szénatomos és telített. Az előnyös elágazó láncú vagy gyűrűs alkilcsoport telített és szubsztituálatlan. Az előnyös elágazó láncú alkilcsoport 3-5 szénatomos; legelőnyösebb elágazó láncú alkilcsoport az izobutilcsoport. Az előnyös gyűrűs alkilcsoport 3-7 széntomos, még előnyösebben 5-6 szénatomos, és a gyűrűs rész metilén-, etilén- vagy propilén-, előnyösen metilén- vagy etilén-, még előnyösebben metiléncsoporthoz kötődik, amely az (1) szerkezetben ahhoz a szénatomhoz kapcsolódik, amelyhez az -R⁴-csoport is kötődik. Előnyös aril-alkil-csoport a benzil-, a p-hidroxi-benzil- és a naftálcsoport. Az • · · · · · ·· ··· ··« · • · · · · » · ·· ·· ·« · · *·

-R⁴-csoportot még előnyösebben választhatjuk ki az izopropil-, izobutil-, szek-butil-, ciklohexil-metil-, benzil- és naftál-csoportok közül; legelőnyösebb a benzilcsoport.

Az (1) szerkezetben az a szénatom, amelyhez az -R⁴-csoport kötődik D vagy L konfigurációjú. Az -NH-CH(R⁴)-C(0)általános képletű szerkezeti rész egy aminosavmaradékot jelöl (amelyet a következőkben az -AA⁴- jellel jelölünk); az AA⁴-csoportnak megfelelő előnyös aminosavmaradékok a Phe, Nal, Cha, Leu és Ile; a legelőnyösebb -AA⁴-csoport a Leu.

Az (1) szerkezetben az -R^-csoport a - (0¾) _m-A-NH2 vagy a -(CH₂)_m-A-B-C(NH₂)=NH általános képletű csoportok valamelyikét jelenti, amely képletekben m értéke 1-től β-ig terjedő egész szám, -A- kovalens kötést vagy p-fenil- vagy p-ciklohexil csoportot jelent, -B- jelentése kovalens kötés vagy -NH-csoport. Ha -A- jelentése kovalens kötés, m értéke előnyösen 2-5, még előnyösebben 2-4, még előnyösebben 3 vagy 4. Ha -A- jelentése p-fenil- vagy p-ciklohexil-csoport, m értéke előnyösen 1-4, még előnyösebben 1-3, még inkább előnyös az 1. -A- előnyösen kovalens kötést jelent. -B- jelentése előnyösen -NH-csoport. Még előnyösebb, ha -R⁵ jelentése 3-guanidino-propil- vagy

4-amino-bútil-csoport.

Az (1) szerkezetben az a szénatom, amelyhez az -R⁵ kapcsolódik, D vagy L konfigurációjú, előnyösen L konfigurációjú. Az -NH-CH(R⁵)-C(0)- általános képletű szerkezeti rész egy aminosavmaradékot jelent (amelyet a következőkben az -AA^ jellel jelölünk); az -AA^-csoportnak megfelelő előnyös aminosavmaradékok az Arg, homo-Arg, Lys, p-amidino-Phe, p-amino-Phe és • · *·· • · · * ·· ··· ··» • · · · · ·· ·· «· a p-Gphe; a legelőnyösebb -AA^-csoport az Arg.

Az (1) szerkezetben az -Y jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport.

Az (1) szerkezetben a -Z- jelentése oxigénatom vagy -NH-csoport, -Z- jelentése előnyösen -NH-csoport.

Az (1) szerkezetben a -V- jelentését az -0C(0)-, -C(0)-,

-SC>2- és -P (0) (OH)- képletű, illetve az -N(Q)C(O)- és N(Q)C(S)- általános képletű csoportok közül választjuk ki. Előnyös, ha a -V- jelentése az -0C(0)- vagy -C(0)- képletű, illetve az -N(Q)C(O)- vagy az -N(Q)C(S)- általános képletű csoportok valamelyike. Még előnyösebb, ha a -V- jelentése az -0C(0)- képletű vagy az -N(Q)C(O)- általános képletű csoportnak felel meg. -V- legelőnyösebb jelentése az -0C(0)- képletű csoport. Ha -V- az -0C(0) képletű csoportot jelenti, -Z- jelentése -NH-csoport.

Az (1) szerkezetben az -X helyettesítőt a 4-15 szénatomos gyűrűs alkil-, a 6-15 szénatomos elágazó alkil-, (amelyben legalább két elágazás van), és a 6-15 szénatomos arilcsoport közül választjuk ki. Előnyös, ha az -X csoport 6-12 szénatomos; még előnyösebb, ha -X 8-10 szénatomos. Az -X csoport alkil része előnyösen telített. Az előnyös -X csoport telítetlen vagy szubsztituált helyettesítetlen alkil- vagy arilcsoporttal. Az előnyös gyűrűs alkilcsoport monocikloalkil-, bicikloalkil- vagy tricikloalkil-, még előnyösebb, ha a bícikloalkilvagy tricikloalkil-, különösen ha tricikloalkil-csoport. Az előnyös cikloalkilcsoport 5 vagy 6 szénatomos, még előnyösebb, ha mindegyik gyűrű 6 szénatomos. Kiemelkedően előnyös, ha -X jelentése adamantilesöpört. Az -X-nek megfelelő előnyös árucsoportok a helyettesítetlen vagy alkilcsoporttal helyettesített fluorénál-, naftái- és fenilcsoport. Az -X-nek megfelelő különösen előnyös arilcsoport a naftái- és a fluorenálcsoport. Ha -X jelentése arái- vagy gyűrűs alkilcsoport, n értéke elő nyösen 1.

Ha az (1) szerkezetben a -V- jelentése -N(Q)C(O)- vagy a -N(Q)C(S)- általános képletű csoportok valamelyike, a -Q csoportot az alábbi helyettesítőkből álló csoportból választjuk ki: hidrogénatom, egyenes vagy elágazó láncú, 1-6 szénatomos telített, vagy 1-2 kettős kötést tartalmazó alkilcsoport; vagy -Q és -X egymással kovalens kötéssel kapcsolódva gyűrűs csoportot képez, amely 5-től mintegy 20-ig terjedő számú szénatomot tartalmaz, és magában foglalja azt a nitrogénatomot, amelyhez a -Q csoport kötődik. Az előnyös -Q-X- egység 6-15 szénatomos, még előnyösebben 8-12 szénatomos. Az előnyös -Q-Xegység szubsztituálatlan vagy helyettesítetlen alkil- vagy arilcsoporttal szubsztituált. Az __ _NXQX _y gyűrűs szerkezet előnyösen monociklusos, biciklusos vagy triciklusos, még elő nyösebben monociklusos. A legelőnyösebb -Q helyettesítő a hid rogénatom .

Az (1) szerkezetben az előnyös -X-(CH₂)_n-V- szerkezeti rész (ezt a következőkben X'-ként jelöljük) a következő csoportoknak felel meg: Adoc, ad, Fmoc, Ada, Adac, Mnoc, Nórád, Hadoc, Foc, Imoc, Ipoc, 3,5-Dmadoc, eBroc, Noc és Moc; még előnyösebb X'csoportok az Adoc, Ipoc és az EBroc; legelőnyösebb -X¹ csoport az Adoc-csoport.

• · • ·♦·

A találmány szerinti előnyös gyulladásgátló vegyületek magukban foglalják ezeknek a vegyületeknek gyógyszerészetileg elfogadható sóit is. Különösen előnyösek a fenti vegyületek erős savakkal képezett addíciós sói. Különösen előnyösek azok az addíciós sók, amelyekben vagy az -R³ vagy az -R⁵ vagy mindkettő protonált állapotban van, melynek következtében pozitív töltés alakul ki az -R³ és az -R⁵ molekularészeken. A találmány szerinti előnyös vegyületek gyakran kötnek meg egy vagy több vízmolekulát hidrátok formájában.

A találmány szerinti előnyös gyulladásgátló vegyületek közé tartoznak a következő vegyületek:

Adoc-D-tBug-Phe-Lys-C(0)CF2C(0)-Leu-Arg-OMe

Adoc-D-tBug-Phe-Lys-C(0)CF₂C(0)-Gly-Arg-OMe

Adoc-D-tBug-Phe-Lys-C(0)CF2C(0)-D-Phe-Arg-OMe Adoc-D-tBug-Phe-Lys-C(0)CF₂C(0)-Leu-D-Arg-OMe Mnoc-D-Phe-Phe-Arg-C(0)-0Ρ₂0(0)-Leu-Lys-OMe eBroc-D-t-Bug-Phe-pGphe-C(0)CF₂C(0)-Ala-Arg-OMe Ipoc-D-Nal-Phe-Arg-C(0)CF₂C(0)-Gly-Arg-OMe Adoc-D-Phe-Phe-Lys-C(0)CF₂C(0)-Leu-Arg-0H Noc-D-t-Bug-Phe-Lys-C(0)CF2C(0)-Ala-Lys-OMe Gyógyszerkészítmények

A találmány szerinti gyógyszerkészítmények a fentebb meghatározott difluor-pentapeptid származékok biztonságos és hatékony mennyiségét tartalmazzák gyógyszerészetileg elfogadható vivőanyaggal együtt. Az ilyen készítmények a difluor-pentapeptid származékot jellemző módon mintegy 0,1 %-tól mintegy 90 %-nyi, még előnyösebben mintegy 5 %-tól mintegy 75 %-ig terje- 18

dó mennyiségben tartalmazzák; a %-os értékek tömegre vonatkoznak .

Az itt használt gyógyszerészetileg elfogadható vivőanyag kifejezés egy vagy több, egymással kompatibilis szilárd vagy folyékony töltő, hígító vagy a kapszulázást elősegítő anyagot jelent, amelyek alkalmasak embereknek vagy alacsonyabbrendú állatoknak történő beadás céljára. Az itt használt egymással kompatibilis kifejezés azt jelenti, hogy a gyógyszerészeti készítmény összetevői összekeverhetők a találmány szerinti difluor-pentapeptid származékokkal és egymással anélkül, hogy olyan kölcsönhatás lépne fel közöttük, amely lényegesen csökkentené a készítmény gyógyszerészeti hatékonyságát normális alkalmazási feltételek esetén. A gyógyszerészetileg elfogadható vivőanyagoknak természetesen olyan nagyfokú tisztasággal és kielégítően alacsony toxicitással kell rendelkezniük, hogy alkalmasak legyenek a kezelendő embereknek, illetve alacsonyabb rendű állatoknak történő beadására.

Néhány példa a gyógyszerészetileg elfogadható vivőanyagokra: cukrok, mint például a laktóz, glükóz és a szacharóz; keményítőféleségek, például kukoricakeményítő és burgonyakeményítő; cellulóz és származékai, például nátrium-(karboxi-metil)-cellulóz, etil-cellulóz és cellulóz-acetát; elporított tragakant, maláta, zselatinok, talkum, sztearinsav, magnézium-sztearát, kalcium-szulfát, növényi olajok, például földimogyoróolaj, gyapotmagolaj, szezámolaj, olívaolaj, kukoricacsíraolaj és kakaóolaj; poliolok, például propilénglikol, glicerin, szorbit, mannit és polietilén-glikol; alginsav, pirogén19 ·· ·· •4 • · · ««« mentes víz, izotóniás nátrium-klorid-oldat, foszfátpuffer-oldatok, kakaóvaj (kúpok alapanyaga), emulgeálók, például Tween-ek; nedvesítőszerek és síkosító anyagok, mint például nátrium-lauril-szulfát, színező és ízesítő anyagok, stabilizálok, antioxidánsok, tartósítószerek továbbá egyéb, nem toxikus, kompatibilis anyagok, melyek a gyógyszertormulázásban használatosak. A találmány szerinti készítményekben felhasználhatók egyéb kompatibilis gyógyszerészeti adalékok és aktív anyagok is, mint gyógyszerészetileg elfogadható vivőanyagok.

A találmány szerinti difluor-pentapeptid származékokkal kapcsolatban a gyógyszerészetileg elfogadható vivőanyagot olyan koncentrációban alkalmazzuk, amely az adagolás tekintetében megfelel a gyakorlati igényeknek. A gyógyszerészetileg elfogadható vivőanyag egészében véve a találmány szerinti gyógyszerészeti készítmények tömegének 5 %-ától azok 99,9 %áig, előnyösen 10 %-ától mintegy 99 %-áig, még előnyösebben mintegy 25 %-ától annak mintegy 95 %-áig terjedhet.

A találmány szerinti difluor-pentapeptid származékok egyszeri adagja a gyógyszerészeti készítményekben általában 1 mg és 1000 mg, előnyösen mintegy 50 mg és 800 mg, még előnyösebben mintegy 100 mg és 500 mg közötti mennyiség lehet.

A találmány szerinti difluor-pentapeptid származékokhoz felhasznált gyógyszerészetileg elfogadható vivőanyagot az aktív anyag beadási módjától függően választjuk meg. A találmány szerinti hatóanyagok előnyös adagolási módjai: injekció, szájon át történő bevétel, inhaláció és a helyi alkalmazás.

Az injekciók előállítására szolgáló módszereket és anyago20 * · · · V · ·· «· «·· _t·.·*·· · · kát az alábbi szakkönyv ismerteti: Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., 1985, Chapter 85, p. 1518; ezt teljes egészében referenciának tekintjük. Általában három injekciós adagolási formát tekintenek előnyösnek: (1) vizes oldatok, (2) nemvizes oldatok, és (3) emulziók. Az injekciós adagolási formák a találmány szerinti vegyületekből jellemzően 0,001 mg-tól mintegy 10 mg-ig, előnyösen 0,4 mg-től mintegy 0,6 mg-ig terjedő mennyiségű hatóanyagot tartalmaznak ml-enként. A találmány szerinti előnyös injekciós készítmények steril vizes oldatok vagy emulziók, melyek pH értéke 3 és 8 közé esik (még előnyösebb, ha a pH értéke 4 és 6 között van).

A találmány szerinti difluor-pentapeptid származékok szájon át történő adagolására szolgáló előnyös gyógyszerészeti vivőanyagok a protenoid mikrokapszulák, melyeket a következő szabadalmi leírások ismertetnek: 4,895,725 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (1990. január 23; Kantor, Steiner & Pack); 4,925,673 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (1990. május 15; Steiner & Rosen); 4,976,968 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (1990. december 11; Steiner) és a 4,983,402 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (1991. január 8.; Steiner); mind a négy szabadalmi leírást teljes egészében hivatkozásoknak tekintjük.

A találmány tárgyát képezik azok a módszerek, amelyek segítségével emberekben és alacsonyabb rendű állatokban gyulladásgátló és/vagy fájdalomcsillapító hatást váltunk ki azáltal, hogy az ilyen kezelésre szoruló embernek vgy alacsonyabb rendű állatnak a találmány szerinti difluor-peptid származékok valamelyikét biztonságos és hatékony mennyiségben beadjuk. Ezt a mennyiséget beadhatjuk egyetlen dózisban, vagy a kezelés időtartamára elosztva több dózisban. Bár az itt megadott dózisoknál magasabb dózisok hatékonyan csökkentik a gyulladást és eredményeznek fájdalomcsillapítást, óvatosan kell eljárnunk, hogy elkerüljük az egyes esetekben fellépő kedvezőtlen mellékhatásokat. A találmány szerinti difluor-pentapeptid származékok és készítmények felhasználhatók a gyulladások csökkentésére, melyek a mélyebb struktúrákban, izmokban, Achilles-inakban, duzzanatokban és ízületekben betegségek és traumák következtében fellépő különböző rendellenességek eredménye, és alkalmasak a fájdalom kezelésére és csökkentésére is .

A találmány szerinti difluor-pentapeptid származékok előnyös alkalmazási módjai az injekció, a szájon át történő beadás, az inhaláció és a helyi kezelés. Specifikus alkalmazási módok, anélkül, hogy ezekre korlátozódnánk, a szájon át történő lenyelés, intramuszkuláris, intravénás, intraperitoniális, intradermális és szubkután injekció, továbbá a helyi kezelések, mint például a transzdermális, a szájba helyezés, a nyálkahártyán át történő, illetve a szublingvális (nyelv alá helyezés) hatóanyag bevitel.

A biztonságos és hatékony mennyiség kifejezés, melyet a leírásban használunk, azt jelenti, hogy a difluor-pentapeptid- származékot vagy készítményt olyan mennyiségben alkalmazzuk, amely elég nagy ahhoz, hogy a kezelni kívánt körülményt ···· pozitív módon megváltoztassa, ugyanakkor eléggé kicsi ahhoz, hogy elkerüljük a komolyabb mellékhatásokat (ésszerű előny/kockázat arány mellett) a józan orvosi ítélőképesség keretein belül. A difluor-pentapeptid származék vagy készítmény biztonságos és hatékony mennyisége függ a kezelni kívánt páciens különleges állapotától, például annak korától és fizikai kondíciójától, a tünetek komolyságától, a kezelés időtartamától, az egyidejűleg alkalmazott terápia természetétől, az ajánlott specifikus hatóanyagtól, a felhasznált sajátos gyógyszerészetileg elfogadható vivőanyagtól és egyéb tényezőktől, az illető orvos ismereteitől és gyakorlatától függően.

A találmány szerinti difluor-pentapeptid származékok előnyös napi adagja mintegy 0,1 mg-tól 500 mg-ig terjed testtömeg kg-onként, még előnyösebben mintegy 1 mg-tól 100 mg-ig terjed testtömeg kg-onként, még inkább előnyös, ha a dózis 2 mg-tól 50 mg-ig terjed testtömeg kg-onként. Naponta 1 és 4 közötti számú dózist adhatunk, előnyösebb azonban, ha a napi dózisok száma 2-3. Ha az injekciós formulát választjuk, a difluor-pentapeptid származékok napi adagja 0,1 mg/tesstömeg kilogramm és 50 mg/tesstömeg kilogramm, előnyösebb azonban, ha a dózis napi 1 mg/testtömeg kilogramm és 10 mg/testtömeg kilogramm értékek közé esik. Szájon át történő lenyelés esetén a difluor-pentapeptid származékok előnyös napi mennyisége mintegy 1 mg/testtömeg kilogramm és 500 mg/testtömeg kilogramm, még előnyösebben mintegy 5 mg/testtömeg kilogramm és 100 mg/ testtömeg kilogramm közé eső érték. Inhalációs alkalmazás esetén a difluor-pentapeptid származékok napi adagja előnyösen

0,1 mg/testtömeg kilogramm és mintegy 500 mg/testtömeg kilogramm, még előnyösebb, ha ez mintegy 5 mg/testtömeg kilogramm és mintegy 100 mg/testtömeg kilogramm értékek közé esik. Ha a difluor-pentapeptid származékokat helyileg alkalmazzuk, a napi dózis előnyösen mintegy 1 mg/testtömeg kilogramm és mintegy 500 mg/testtömeg kilogramm, még előnyösebben 50 mg/testtömeg

kilogramm és mintegy 250 mg/testtömeg kilogramm

közé eső

nagyságú.

A következő vázlatok és példák anélkül, hogy a	találmány
oltalmi körét bármilyen tekintetben korlátoznák, a	találmány

szerinti difluor-pentapeptid származékok szintézisére szolgáló módszerek szemléltetésére szolgálnak.

1. példa:

Adoc-D-tBug—Phe-Lys-C(O)-CF2~C(O)-Leu-Arq-OMe szintézise. Adoc-D-tBug-OH

48,8 g (0,37 M) D-terc-butil-glicin 371 ml 1 M-os nátrium-hidroxid-oldat és 159 ml dioxán elegyével készített oldatához 0 °C-on hozzáadunk 33,9 g (0,40 M) nátrium-hidrogén-karbonátot, majd ezt követően 80,0 g (0,40 M) adamantil-fluoro-formiát 371 ml dioxánnal készült oldatát csepegtetjük hozzá 3 óra alatt. Az elegyet ugyanezen a hőmérsékleten még 0,5 órán keresztül keverjük, majd eltávolítjuk a hűtő fürdőt, és az elegyet további 3 órán át keverjük, és annak pH értékét 10-re állítjuk be 1 M-os nátrium-hidroxid oldattal. A kapott oldatot etil-acetáttal extraháljuk, és a visszamaradó vizes oldatot pH 3-ra megsavanyítjuk. A savanyú oldatot etil-acetáttal extra • · háljuk, a szerves részt megszárítjuk. Az oldószer eltávolítása után 118 g terméket kapunk, amely vékonyréteg-kromatográfiásan egységes. Kifejlesztő elegy: metilén-diklorid/ipa/ecetsav 94/5/1, az Rf értéke 0,90.

Adoc-D-tBuq-Phe-OBn

115 g (0,37 M) Adoc-D-tBug-OH és (0,36 M) L-Phe-OBn.pTSA 1 liter metilén-dikloriddal készített oldatához 74,6 g (0,74 M) trietil-amint, ezt követően 60,8 g (0,37 M) DECP-t adunk, és a kapott oldatot éjjelen át keverjük. Másnap az oldószert eltávolítjuk, a terméket ismételten feloldjuk etil-acetátban, és egymást követően telített, vizes nátrium-klorid-oldattal, 0,4 M-os sósavoldattal és telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk. A szerves részt megszárítjuk, és az oldószert eltávolítjuk. A maradékot szilikagélen kromatograáljuk, ekkor 186 g terméket kapunk. Vékonyréteg-kromatográfiás Rf értéke = 0,41, kifejlesztő elegy: hexán/etil-acetát 85/15.

Adoc-D-tBuq-Phe-OH (1)

Száraz lombikba nitrogéngáz alatt 34,0 g 5 %-os palládium-szén katalizátort teszünk. A lombikot lehűtjük -78 °C-ra és beadagolunk 200 ml levegőmentes metanolt. A kapott szuszpenzióhoz 8,8 ml 88 %-os hangyasavat, majd 36,0 g (0,066 M) Adoc-D-tBug-Phe-Bn és 4,4 ml hangyasav 100 ml metanollal készített oldatát adjuk. A hűtő fürdőt eltávolítjuk, és a szuszpenziót 2 órán keresztül keverjük. Eközben további 200 ml 4,4 %-os metanolos hangyasavoldatot adunk hozzá, és a keverést éjjelen át folytatjuk. Az elegyet leszűrjük üvegszálas szűrőpapíron nitrogéngáz alatt. A szűrletet ismételten leszűrjük Celite ágyon, • « hogy a katalizátor nyomait eltávolítsuk. Az oldószert eltávolítva 17,3 g terméket kapunk.

79,2 g (1,21 M) aktivált cink és 0,600 liter THF elegyéhez 2,36 g etil-(bróm-difluor-acetát)-ot adunk, és az elegyet forrásba hozzuk. Amint a forrás elkezdődött, 236 g etil-(bróm-difluor-acetát), 176 g (0,485 M) (2) és 1,80 liter THF elegyét adjuk be cseppenként. A (2) vegyület szintézisét Burkhart, J., N. Peet and P. Bey, A Növel Method fór the Preparation of Peptidyl α-Keto Esters, Tetrahedron Letters, Vol. 31. No. 10, pp. 1385-1388 (1990) közlemény ismerteti. Az oldatot egy órán keresztül forraljuk, lehűtjük, és telített ká lium-hidrogén-szulfát-oldattal a reakciót leállítjuk. A reakcióelegyet etil-acetáttal hígítjuk, és egymást követően telí tett kálium-hidrogén-szulfát-oldattal, telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk. Ezt követően megszárítjuk magnézium-szulfáton, és az oldószert eltávolítjuk. A maradékot szilikagélen kromatografáljuk, ekkor 68 g tiszta terméket kapunk. Rf értéke 0,20, kifejlesztő elegy: hexán/etil-acetát 75/25.

g-BOC-e-Z-Lys-C(OH)-CF₂-C(O)-ONa (4)

1,00 g (0,002 M) (3) 10 ml metanollal készített oldatához ml 1 M-os nátrium-hidroxid-oldatot adunk, és az oldatot szo bahőmérsékleten keverjük 5 órán keresztül, majd az oldószert eltávolítjuk. A maradékot feloldjuk kevés vízben, és a tejszerű oldatot dietil-éterrel extraháljuk. A vizet eltávolítjuk a vizes fázisból, és a maradékot alaposan megszárítjuk; 24 órán keresztül szívatjuk vákuumpumpával. A szárítás után visszamarad 0,069 g termék.

g-BOC- g-Z-Lys-C (0)₂-C(OH) -C (0) -Leu-Arg (NO₂ ) -OMe

0,500 g (1,03 mmol) (4) és 0,470 g (1,26 mmol) Leu-Arg(NO₂)-OMe.HC1 30 ml N,N-dimetil-formamiddal készített oldatához egyszerre hozzáadunk 0,019 g (1,26 mmol) HOBt-t. Ezt követően cseppenként beadagoljuk 0,260 g (1,26 mmol) DCC 3 ml

N, N-dimetil-formamiddal készített oldatát. Végül 0,003 ml DIPEA-t adunk az elegyhez, és az oldatot 48 órán keresztül keverjük. Az N,N-dimetil-formamidot csökkentett nyomáson eltávolítjuk, és a maradékot feloldjuk etil-acetátban. Az oldatot átvisszük választótölcsérbe, és egymást követően 0,1 M sósavoldattal, telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül telített nátrium-klorid-oldattal mossuk. Az etil-acetátos réteget magnéziumszulfáton megszárítjuk, leszűrjük, és az oldószert eltávolítjuk. A maradékot szilikagélen kromatografálva

O, 42 g terméket kapunk. Rf értéke 0,68, kifejlesztő elegy metilén-diklorid/metanol 90/10.

g-Z-Lys-C(OH)-CF₂-C(O)-Leu-Arg(N0₂)-OMe.HC1

17,3 g (0,022 M) (5) 200 ml dioxánnal készített oldatához

66,8 ml (0,220 M) 3,3 M-os dioxános sósavoldatot adunk, és az elegyet egy órán keresztül keverjük. Ekkor további 5 ml 3,3 M-os dioxános sósavoldatot adunk hozzá, és az oldatot még 0,25 órán át keverjük. Az oldószert eltávolítjuk, és a maradékot vákuumpumpával szívatjuk. A szilárd maradékot dietiléterrel trituráljuk és nitrogéngáz alatt leszűrjük. Visszamarad 16,0 g fehér, szilárd anyag.

• · • · ·

Adoc-D-tBucr-Phe-Lys (Z) -C (OH) -CF₂-C (0) -Leu-Arq (N0₂ ) -OMe ( 6 )

Az előző reakció 16,0 g-nyi (0,022 M) maradékához 11,1 g (1)-t (0,024 M) és 300 ml metilén-dikloridot adunk, majd az oldathoz 6,69 ml (0,048 M) trietil-amint, ezt követően pedig 3,64 ml (0,024 M) DECP-t csepegtetünk. Az oldatot éjjelen át keverjük, ezután az oldószert eltávolítjuk. A maradékot feloldjuk etil-acetátban, és az oldatot egymást követően 0,1 M sósavoldattal, telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül telített nátrium-klorid-oldattal mossuk. Az oldatot megszárítjuk, az oldószert eltávolítjuk, és a visszamaradó 26,6 g terméket szilikagélen kromatografáljuk. Kapunk 12,7 g tiszta terméket, melynek Rf értéke 0,85; kifejlesztő elegy: metilén-diklorid/metanol 90/10.

Adoc-D-tBug-Phe-Lys (Z) -C (0) CF₂C (O) -Leu-Arc; (NO₂ ) -OMe

14,3 g (0,034 M) Dess-Martin perjodinán 1,15 liter metilén-dikloriddal készített szuszpenziójához 0,910 ml száraz piridint adunk, ezt követően cseppenként hozzáadagoljuk 12,7 g (0,011 M) (6) 2,3 liter metilén-dikloriddal készült oldatát. A Dess-Martin perjodinán előállítását az alábbi közlemény ismerteti: Dess, D., and J. Martin, Journal of Organic Chemistry, 48, 4155-4156 (1983). A szuszpenziót 2 órán keresztül keverjük, hozzáadjuk 58,7 g (0,24 M) nátrium(I)-ditionit telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal készített oldatát, és a kapott oldatot fél órán át keverjük. A fázisokat szétválasztjuk, és a vizes fázist etil-acetáttal extraháljuk. Az egyesített szerves fázisokat megszárítjuk, az oldószert eltávolítjuk; ekkor 13,9 g terméket nyerünk, melyet további tisztítás nélkül használunk fel a következő reakcióban. Rf értéke 0,30, kifejlesztő elegy: metilén-diklorid-metanol 95/5.

Adoc-D-tBug-Phe-Lys-C(0)CF₂C(0)-Leu-Arg-OME (7)

Az előző reakció 13,4 g (0,012 M) maradékát feloldjuk 200 ml vízmentes DMF-ban, hozzáadunk 6 g palládium-fekete katalizátort, és a szuszpenziót fél órán keresztül levegőmentesítjük. Ezután a szuszpenzióhoz 8 ml 3,3 M-os dioxános sósavoldatot adunk, a reakcióelegyet Paar típusú rázó hidrálóban 6 órán keresztül hidrogénezzük. Ezután a szuszpenziót Celite-rétegen átszűrjük, és az oldószert eltávolítjuk. A maradékot fordított fázisú oszlopon HPLC-vel tisztítjuk; eluens: acetonitril-víz elegy. Végül 6,5 g terméket kapunk. Az 1. példa kémiai reakcióit az [A] reakcióvázlat szemlélteti.

2. példa:

Adoc-D-tBug-Phe-Arg-C (0) -CF₂-C(0) Ala-Arcr-OMe szintézise .

Adoc-D-tBug-OH

48,8 g (0,370 M) D-terc-butil-glicin 371 ml 1 M-os nátrium-hidroxid-oldat és 159 ml dioxán elegyével készített oldatához 0°C-on hozzáadjuk 33,9 g (0,40 M) adamantil-fluoro-formiát 371 ml dioxánnal készített oldatát 3 óra leforgása alatt. Az elegyet ugyanezen a hőmérsékleten 0,5 órán át keverjük, majd a hűtő fürdőt eltávolítjuk. Az elegyet további 3 órán keresztül keverjük, és a pH értékét 10-re állítjuk be 1 M nátrium-hidroxid-oldattal. A kapott oldatot etil-acetáttal extraháljuk, és a visszamaradó vizes oldatot pH 3-ra megsavanyítjuk. A savanyú oldatot etil-acetáttal extraháljuk, a szerves részt megszárít « · · juk, és az oldószert eldesztilláljuk. Ekkor 118 g terméket kapunk, amely vékonyréteg-kromatográfiásan egységes. Kifejlesztő elegy: metilén-diklorid/ipa/ecetsav 94/5/1. Az Rf értéke: 0,90.

Adoc-D-t-Bug-Phe-OBn

115 g (0,37M) Adoc-D-t-Bug-OH és (0,36 M) L-Phe-OBn.pTSA 1 liter metilén-dikloriddal készített oldatához 74,6 g (0,74 M) TEA-t adunk, ezt követően pedig 60,8 g (0,37 M) DECP-t, és a kapott oldatot éjjelen át keverjük. Az oldószert eltávolítjuk, a terméket ismét feloldjuk etil-acetátban, és az oldatot egymás után telített nátrium-klorid-oldattal, 0,4 M sósavoldattal, végül telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk. A szerves fázist megszárítjuk, az oldószert eltávolítjuk, és a maradékot szilikagélen kormatografáljuk. Kapunk 186 g terméket, Rf értéke 0,40, kifejlesztő elegy: hexán/etil-acetát 85/15.

Adoc-D-t-Buq-Phe-OH (1)

Száraz lombikba nitrogéngáz alatt 34,0 g 5 %-os palládium-szén katalizátort teszünk. A lombikot lehűtjük -78 °C-ra, és beadagolunk 200 ml levegőmentes metanolt. A kapott szuszpenzióhoz 8,8 ml 88 %-os hangyasavat, majd 36,0 g (0,066 M) Adoc-D-t-Bug-Phe-OBn és 4,4 ml hangyasav 100 ml. metanollal készített oldatát adjuk. A hűtő fürdőt eltávolítjuk, és a szuszpenziót 2 órán át keverjük. Eközben további 200 ml 4,4 %-os metanolos hangyasav-oldatot adunk hozzá, és a keverést éjjelen át folytatjuk. Az elegyet leszűrjük üvegszálas szűrőpapíron nitrogéngáz alatt. A szűrletet ismételten leszűrjük Celite ágyon, hogy a katalizátor nyomait eltávolítsuk. Az oldószert eltávolítva 17,3 g terméket kapunk.

g-BOC-€-Z-Lys-C(OH)-CF₂-C(O)-OEt (3)

79,2 g (1,21 M) aktivált cinkhez 0,600 liter THF-ban 2,36 g etil-(bróm-difluor-acetát)-ot adunk, és az elegyet forrásba hozzuk. Amint a forrás elkezdődött, cseppenként beadagoljuk 236 g (1,16 M) etil-(bróm-difluor-acetát) és 176 g (0,485 M) (2) 1,80 liter THF-nal készített oldatát. Az oldatot 1 órán keresztül forraljuk visszafolyató hűtő alatt, majd telített kálium-hidrogén-szulfát-oldattal leállítjuk a reakciót. A reakcióelegyet etil-acetáttal hígítjuk, és egymást követően telített kálium-hidrogén-szulfát-oldattal, telített nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, végül telített nátrium-klorid-oldattal mossuk. Ezt követően magnézium-szulfáton' megszárítjuk, az oldószert eldesztilláljuk, és a maradékot szilikagélen kromatografáljuk; ekkor 68,0 g tiszta terméket kapunk. Rf értéke 0,20, kifejlesztő elegy: hexán/etil-acetát 75/25.

a-BOC-e-Z-Lvs-C(OH)-CF₂-C(O)-ONa (4)

1,00 g (0,002 M) (3) 10 ml metanollal készült oldatához 2 ml 1 M-os nátrium-hidroxid-oldatot adunk. Az oldatot 5 órán ke resztül keverjük szobahőmérsékleten, majd az oldószert eltávolítjuk. A maradékot kevés vízben feloldjuk, és a tej szerű oldatot dietil-éterrel extraháljuk. A vizes fázisból a vizet eltávolítjuk, és a maradékot alaposan megszárítjuk; 24 órán keresztül szívatjuk vákuumpumpával. Kapunk 0,069 g terméket.

a-BOC-e-Z-Lys-C(OH)-CF?-C(O)-Leu-Aru(NO₂)-OMe (5)

0,500 g (1,03 mmol) (4) és 0,470 g (1,26 mmol) Leu • ·

- 31 - ..........

-Arg (NC>2)-OMe .HC1 30 ml DMF-dal készült oldatához egyszerre hozzáadunk 0,019 g (1,26 mmol) HOB-t. Ezt követően cseppenként hozzáadunk 0,260 g (1,26 mmol) DCC 3 ml DMF-dal készített oldatát. Végül még 0,003 ml DIPEA-t is adunk az elegyhez, és azt 48 órán keresztül keverjük. A DMF-ot csökkentett nyomáson eltávolítjuk, és a maradékot feloldjuk etil-acetátban. Az oldatot átvisszük választótölcsérbe, és egymást követően 0,1 M-os sósavoldattal, telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül telített nátrium-klorid-oldattal mossuk. Az etil-acetátos réteget magnézium-szulfáton megszárítjuk, leszűrjük, és az oldószert desztilláljuk. A maradékot szilikagélen kromatografálva 0,420 g terméket kapunk. Rf értéke 0,68, kifejlesztő elegy: metilén-diklorid/metanol 90/10.

e-Z-Lys-C(OH)-CF_?-C(O)-Leu-Arg(NO₂)-OMe.HCl

17,3 g (0,022 M) (5) 200 ml dioxánnal készült oldatához

66,8 ml (0,220 M) 3,3 M-os dioxános sósavoldatot adunk, és az elegyet 1 órán át keverjük. Ekkor további 5 ml 3,3 dioxános sósavoldatot adunk hozzá, és az oldatot még 0,25 órán át keverjük. Az oldószert eltávolítjuk, és a maradékot vákuumpumpával szívatjuk. A szilárd maradékot dietil-éterrel eldörzsöljük, és nitrogéngáz alatt leszűrjük. Visszanyerünk 16,0 g fehér, szilárd anyagot.

Adoc-D-tBug-Phe-Lys(Z)-C(OH)-CF₂_C(0)-Leu-Arg(NO_?)-OMe (6)

Az előző reakcióból kapott 16,0 g nyersterméket (0,022 M) és 11,1 g (0,024 Μ) (1)-t feloldunk 300 ml metilén-dikloridban, hozzáadunk 6,69 ml (0,048 M) TEA-t cseppenként, ezt követően pedig ugyancsak cseppenként 3,64 ml (0,024 M) DECP-t. Az • · oldatot éjjelen át keverjük, azután az oldószert eltávolítjuk. A maradékot etil-acetátban feloldjuk, és az oldatot egymást követően 0,1 M-os sósavoldattal, telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, megszárítjuk, és az oldószert eltávolítjuk. A kapott 26,6 g maradékot szilikagélen kromatografáljuk, ekkor 12,7 g tiszta terméket kapunk. Rf értéke 0,85, kifejlesztő elegy: metilén-diklorid/metanol 90/10.

Adoc-D-t-Bug-Phe-Lys(Z)-C(O)CF₂C(0)-Leu-Arg(NO₂)-OMe

14.3 g (0,034 M) Dess-Martin perjodinán 1,15 liter metilén-dikloriddal készült szuszpenziójához 0,910 ml vízmentes piridint és cseppenként az előző reakcióból származó 12,7 g (0,011 M) termék 2,3 liter metilén-dikloriddal készült oldatát adjuk. A szuszpenziót 2 órán keresztül keverjük, majd 58,7 g (0,24 M) telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldatban oldott nátrium(I)-ditionitot adunk hozzá. A kapott oldatot 0,5 órán keresztül keverjük, a fázisokat szétválasztjuk, és a vizes fázist etil-acetáttal extraháljuk. Az egyesített szerves fázist megszárítjuk, az oldószert eltávolítjuk. Kapunk 13,9 g terméket, melyet további tisztítás nélkül használunk fel a következő reakcióban. Rf értéke 0,30, kifejlesztő elegy: metilén-diklorid/metanol 95/5.

Adoc-t-Bug-Phe-Lys-C(0)CF?C(0)-Leu-Arg-OMe.TFA (7)

13.4 g (0,012 M) az előző reakcióból kapott nyerstermék 200 ml vízmentes DMF-dal készített oldatához 6 g palládium-fekete katalizátort adunk, és a kapott szuszpenziót 0,5 órán keresztül levegőmentesítjük. A szuszpenzióhoz 8 ml 3,3 M-os di- • · « · ♦ · ·· ··· · · · · • · · · · * · ·· ·· ·· ·«·· oxános sósavoldatot adunk. A reakcióelegyet Paar típusú rázó hidratálóban 6 órán keresztül hidrogénezzük. Ezután a szuszpenziót Celite rétegen átszűrjük, és az oldószert desztilláljuk. A maradékot fordított fázisú oszlopon HPLC-vel tisztítjuk. Eluens: acetonitril/víz/TFA. Végül 6,5 g terméket kapunk.

q-BOC,^-Bn,)p-Z-Orn-C (OH) -CF?-C (0) OEt (9)

5,67 g (0,087 M) aktivált cinket vízmentes tetrahidrofuránba teszünk, és hozzáadunk 1,0 g etil-(bróm-difluor-acetát)-ot. A hőmérsékletet emelve az elegyet forrásba hozzuk. Ezt követően 15,2 g (0,037 M ^-Bn, -Z-a-Boc-ornitinal (8) és 16,9 g (0,083 M) etil-(bróm-difluor-acetát) THF-nal készített oldatát adjuk hozzá, és a szuszpenziót 0,5 órán át·forraljuk. Az oldatot ezután lehűtjük, és telített kálium-hidrogén-szulfát oldattal a reakciót leállítjuk. Az oldatot etil-acetáttal hígítjuk, és egymást követően telített kálium-hidrogén-szulfát-oldattal, telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül telített nátrium-klorid-oldattal mossuk. A szerves oldatot megszárítjuk, és az oldószert desztilláljuk. A maradékot szilikagélen kromatografálva 6,58 g terméket kapunk. Rf értéke: 0,22, kifejlesztő elegy: metil-diklorid/ipa 99/1.

o-BOC, ^-Bn,y-Z-0rn-C(OH)-CF₂-C(0)ONa

A (9) észterből 0,965 g-ot (1,71 mmol) oldunk 15 ml metanolban, és hozzáadunk 1,71 g 1 M-os nátrium-hidroxid-oldatot. Az oldatot 3 órán keresztül keverjük, majd az oldószert eltávolítjuk. A maradékot éjjelen át vákuumpumpával szívatjuk, és változatlan formában használjuk fel a következő reakcióban kapott 0,87 g terméket.

- 34 α-BOC, y-Bn,^-Z-Orn-C(OH)-CF₂-C(O)Ala-Arc(NO_?)-OMe (10)

Az előző reakcióban kapott 0,87 g (1,56 mmol) nyerstermék oldatához 0,579 g (1,90 mmol) Ala-Arg(N0₂)-OMe.HC1 80 ml vízmentes DMF-dal készített oldatát és 0,283 g (2,09 mmol) HOBt-t adunk. Ezt követően egymás után beadagoljuk 0,392 g (1,90 mmol) DCC 20 ml DMF-dal készült oldatát és 0,068 ml (0,39 mmol) DIPEA-t. Az elegyet 18 órán keresztül keverjük szobahőmérsékleten, majd az oldószert eltávolítjuk. A maradékot feloldjuk etil-acetátban, és egymást követően 0,1 M-os sósavoldattal, telített nátrium-karbonát-oldattal, végül telített nátrium-klorid oldattal mossuk, megszárítjuk és az oldószert eltávolítjuk. A maradékot szilikagélen kromatografálva 0,520 g terméket nyerünk. Rf értéke 0,20 és 0,22.

g-Boc-örn-C(OH) -CF₂-C(O) -Ala-Arg(NO?) -OMe

A (10) tripeptidből 0,338 g-ot (0,43 mmol) feloldunk 10 ml N,N-dimetil-formamidban és 0,15 g palládium-fekete katalizátort adunk hozzá. A szuszpenziót levegőmentesítjük, és 0,20 ml 4,0 M-os dioxános sósavoldatot adunk hozzá. Az elegyet Parr típusú készülékben éjjelen át hidrogénezzük, majd Celite rétegen átszűrjük. A maradékot ismét feloldjuk, ezúttal metanolban, hozzáadunk 0,20 g palládium-dihidroxidot, és a szuszpenziót Parr típusú készülékben hidrogénezzük 345 kP nyomáson, 24 órán keresztül. A szuszpenziót Celite rétegen leszűrjük, és az oldószert eldesztilláljuk. A visszamaradó anyagot tisztítás nélkül használjuk fel a következő reakciólépésben.

g-Boc-Arg (Z) ₂-C (OH) -CF₂-C (O) -Alá-Arc? (NO?) -OMe (11)

A nyers amint 0,220 g; 0,39 mmol) feloldjuk tetrahidrofu35 ·· 4* • · ··· ·*· • 4 • · * · ránban, és 0,325 g (0,91 mmol) N,N-bisz-Z-S-metil-izotiokarbamidot adunk hozzá. Az oldathoz ezen kívül hozzáadunk még 0,150 g (0,47 mmol) higany-diacetátot, és az elegyet éjjelen át keverjük. Az oldatot hígítjuk etil-acetáttal, és egymást követően 0,1 M-os sósavoldattal, telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk. A szerves fázist megszárítjuk, és az oldószert eldesztilláljuk. A maradékot szilikagélen kromatografálva kapunk 0,170 g terméket, amely diasztereomerek keveréke. Rf értékek: 0,60 és 0,62; kifejlesztő elegy: 5 % metanolt tartalmazó metilén-diklorid.

Adoc-D-t-Bug-Phe-Arg(Z)₂-C(OH)-CF₂-C(0)-Ala-Arg(NO₂)-OMe (12)

0,228 g (0,262 mmol) (11) 5 ml dioxánnal készült oldatához 0,656 ml dioxánban oldott sósavat adunk. Az oldatot 1 órán keresztül keverjük és további 0,656 ml dioxánban oldott sósavat adunk hozzá. Még 1 órán át keverjük, ezután az oldószert eltávolítjuk, és a maradékot vákuumpumpával szívatjuk éjjelen át. A hidrolízis termékét 5 ml metilén-dikloridban feloldjuk, és elegyítjük 0,120 g (0,262 mmol) Adoc-D-t-Bug-Phe-OH-val. Az oldathoz 0,073 ml (0,525 mmol) trietil-amint, majd 0,043 ml DECP-t adunk, és a kapott elegyet éjjelen át keverjük. Az oldószer eltávolítása után visszamaradó anyagot szilikagélen kromatografálva 0,086 g terméket kapunk, amely diasztereomerek keveréke. Rf értékek: 0,65 és 0,68; kifejlesztő elegy: 4 % 2-izopropil-alkoholt tartalmazó metilén-diklorid.

Adoc-D-t-Bug-Phe-Arg (Z) ₂ ~C (0) -CF₂ -C (O) -Ala-Arcr (NO₂ ) -OMe

0,094 g (0,16 mmol) Dess Martin perjodinán 5 ml metilén36

-dikloriddal készített szuszpenziójához 0,091 (0,052 mmol) (12)-t adunk, 0,5 ml oldatban fecskendő segítségével. A keveréket 0,5 órán keresztül keverjük, majd 0,385 g (1,55 mmol) nátrium(I)-tioszulfátot adunk telített nátrium-hidrogén-karbonát oldatban oldott állapotban. 0,5 óra eltelte után az oldatot etil-acetáttal extraháljuk, és a szerves fázist elválasztás után magnézium-szulfáton megszárítjuk. Az oldószer desztillálása után 0,94 g nyersterméket kapunk. Rf értéke: 0,68 és 0,71; kifejlesztő elegy: 4 % 2-izopropil-alkoholt tartalmazó metilén-diklorid.

Adoc-D-t-Buq-Phe-Arq-C(0)-CF2-C(0)-Ala-Arq-OMe.TFA (13)

A nyers alkoholt 2 ml N,N-dimetil-formamidban oldjuk, hozzáadunk 50 mg palládium-fekete katalizátort. A szuszpenziót levegőmentesítjük, majd 0,040 ml 4,0 M-os dioxános sósavoldatot adunk hozzá. A keveréket Parr készülékben hidrogénezzük 345 kP nyomáson 20 órán keresztül. A szuszpenziót Celite rétegen megszűrjük, és az oldószert eltávolítjuk. A maradékot kromatografáljuk fordított fázisú oszlopon, kifejlesztésre acetonitril/víz/TFA elegyet használva. Kapunk 0,044 g tiszta terméket .

N,N'-bisz-(benzil-oxi-karbonil)-S-metil-izotiokarbamid (14)

5,00 g (18,0 mmol) S-metil-tiurónium-szulfát dimer 36,0 ml (36,0 mmol) hideg (0°C) 1-M-os nátrium-hidroxid-oldattal készített oldatához 11,3 ml (79,0 mmol) benzil-(klór-formiát)-ot és 79,0 ml (79,0 mmol) 1 M-os nátrium-hidroxid-oldatot adagolunk két különálló csepegtető tölcsérből. A szuszpenziót

- 37 0°C-on keverjük 0,5 órán keresztül, majd szobahőmérsékleten

1,5 órán át folytatjuk a keverést. Az oldatot etil-acetáttal

extraháljuk, az extraktumot magnézium-szulfáton	megszárítjuk,
és a szűrletet bepároljuk. Szilikagélen történő	kromatográfia
után 2,62 g tiszta terméket kapunk. Rf értéke:	0,40, kifej -

lesztő elegy: 15 % etil-acetátot tartalmazó petroléter.

A 2. példa kémiai reakcióit a [B] reakcióvázlat szemlél teti .

3. példa:

Az N-terminális térkitöltő (összekötő) elemeinek szintézise

Adac-D-t-Buq-Phe-OBn ml 15 %-os toluolos foszgén oldathoz argongáz alatt 0,140 ml trietil-amint (1,00 mmol) adunk. Ezt követően fecskendőből cseppenként beadagoljuk 0,112 g (0,750 mmol) 1-adamantil-amin 1 ml toluollal készített oldatát. A kapott szuszpenziót 0,3 órán át keverjük, majd a foszgén fölöslegét argongázzal végzett öblítéssel eltávolítjuk. A szilárd részt zsugorított üvegszűrőn szívatással szűrjük, és az oldószert eltávolítjuk. A maradékot újra feloldjuk metilén-dikloridban, és argongáz alatt lehűtjük 0°C-ra. Az oldathoz 0,140 ml trietil-amint (1,00 mmol), ezt követően pedig 0,100 g (0,250 mmol) d-t-Bug-Phe-OBn.HCl-t adunk egyszerre. A kapott oldatot feldolgozzuk. A szilikagélen végzett kromatográfia eredményeként 0,350 g terméket kapunk.

Ezen vegyület hidrogénezése, majd a (11) vegyület hidro• · lízisének termékével való összekapcsoláa után olyan vegyületet kapunk, amely eredményesen átalakítható egy alternatív N-terminális térkitölő (összekötő) elemmé.

Módszerek a vegyületek hatékonyságának vizsgálatára

A következő, a találmány oltalmi körét nem korlátozó eljárások azokat a módszereket jelentik, amelyekkel vizsgálhatjuk a találmány szerinti difluor-pentapeptid származékok gyulladásgátló és/vagy fájdalomcsillapító hatását.

Többféle, enzimgátláson alapuló módszer ismeretes, melyek segítségével megjósolható, hogy a vegyületek rendelkeznek gyulladáscsökkentő hatékonysággal. Ilyen enzimgátláson alapuló módszerek a következők: sertés, pankreász kallikrein (PPk), lásd az A, E és F jelű közleményeket; humán vizelet kallikrein (HŰK), lásd az E és F közleményeket; humán plazma kallikrein (HPK), lásd a B és E közleményeket; humán plazmin (HP), lásd a B és C közleményeket; és az urokináz (UK), lásd a D közleményt. A jelzett közlemények, melyeket a maguk teljességében hivatkozásnak tekintünk, a következők:

(A)

Lottenberg, R., U. Christensen, C.M. Jackson & P.L. Colemán,

Assay of Coagulation Proteases

Using Peptide Chromogenic and

Fluorogenic Substrates,

Methods in Enzymology,, Vol. 80,

Academic Press, New York, NY (1981) ,

Geiger,

R. Kallikrein Methods of

Enzymatic Analysis, Vol.

V. 3rd

Edition, Bergmeyer, ed., Acedemic Press, New York, NY pp. 129-143; (C) Morris, J.P., S. Blatt, J.R. Powell, D.K.

Strickland & F.J. Castellino, Role of Lysine Binding Regions in the Kinetic Properties of Humán Plasmin, Biochemistry, Volt. 20, No. 17 (Audust 18, 1981) p. 4811; (D) Wohl, R.C., L. Summaria & K.C. Robbins, Kinteic of Activation of Humán Plasminogen by Different Activator Species at pH 7.4 and 37 °C The Journal Biological Chemistry, Vo. 255, No. 5 (March 10, 1980), pp. 2005-2013; (E) Okunishi, H., J. Burton & J. Spragg, Specificity of Substrate Analogue Inhibitors of Humán Urinary Kallikrein, Hypertension, Vol. 7, No. 3, Suppl. 1 (May-June, 1985), pp. 172-175; (F) Amundsen, E., J. Putter, P. Friberger, M. Knos, M. Larsbraten & G. Claeson, Methods fór the Determi-

nation of Glandular	Kallikrein by Means	of	a Chromogenic	Tri-
peptide Substrate,	In Kinins-II part	A,	Fuj i, S . ,	et	al. ,
eds., Plenum Press,	New York, NY (1979)	PP	. 83-95.

Az aktivitás meghatározásának másik használatos módszere a lassú kötésű enzimgátlás meghatározása, melyet az alábbi közlemény ismertet: Imperiali, B., & R.H. Abeles, Inhibition of Serine Proteases by Peptidyl Fluoromethyl Ketones, Biochemistry, Vol. 25, (1986), pp. 3760-3767. A módszert az alant leírtak szerint módosítottuk, hogy tanulmányozhassuk a humán plazmin, a sertés pankreász kallikrein és a humán plamza kallikrein lassú kötődésének gátlását.

Reakciók: a reakcióelegyek 78 mM tris-HCl puffért (pH 7,4), 78 mM nátrium-kloridot, 0,2 mg/ml marha szérum albumint, 0,2 mM S-2251 jelű vegyületet (D-Val-Leu-Arg-p-nitro-anilid), 0,5 E/ml plazmint (1 mM), és a vizsgálandó vegyületek különböző koncentrációit tartalmazzák összesen 1 ml térfogatban. A plazmin törzsoldat ml-enként 1 E (egység)-t tartalmaz 50 %-os glicerinben. Az S-2251 enzimatikus hasítása következtében felszabaduló p-nitro-anilin okozta abszorbancia változást HP-8450 típusú spektrofotométer rendszerrel követtük, a méréseket 400-410 és 470-490 nm tartományban mértük. A mérések során a hőmérséklet 30°C volt.

Számítások: a K_v-j__ZSg. és a v_s (az állandó állapot gátolt sebessége) úgy határozható meg, hogy a görbe emelkedő részét (az első 20 perces részt) illesztjük az (i) sebességi egyenlet integráltjához Labtech NotebookR szofver alkalmazásával. A becsült kf értékét minden méréssorozatra a v_s és a nem gátolt sebesség, a v értékéből (ii egyenlet) számítjuk ki; a szubsztrát koncentráció értéke (S) = 0,2 mM, és a K_m = 0,77 mM.

(i) A = Vgt - [ (Vg - v) /k_vj__zgg] [ 1 - Θ Xp ( “ k _v 1 _Z g g . t ) ] + Aq (ii) ki = (I)/[v/v_s - 1) (1 + [s] /k_m) ]

A k_v-j__ZSg. értéket a vizsgált vegyület koncentráció-értéke inek függvényében ábrázolva y = mx + b egyenlettel jellemezhető egyenest kapunk [lásd a (iii) egyenletet]; k_be = m[l+(S)/ /k_m] és kj^i = b ezek alapján számíthatók ki. Végül a kf-t a (iv) egyenletből lehet kiszámítani.

(iii) ^kvizsg. = (I)/([v/v_s - 1] [1 + (S) /k_m] ) (iv) ki = k_ki/k_be

Ismeretes néhány in vivő módszer a vegyületek gyulladásgátló hatásának valószínűsítésére. Az ilyen in vivő módszerek felhasználhatok a találmány szerinti vegyületek hatékonyságának meghatározására. Ilyen in vivő módszereket ismertetnek az alábbi közlemények, melyeket teljes egészében referenciának tekintünk.

• ·

Winter, C.A., E.A. Risley, G.V. Nuss, Carrageenin-Induced Edema in Hind Paw of the Rat as an Assay fór Antiinflammatory Drugs, Proc. Soc. Exp. Bioi., N.Y., Vol. 111 (1962), pp. 544-547; Vander Wende, C. & S. Margolin, Analgesic Tests Based Upon Experimentally Induced Acute Abdominal Pain in Rats, Federal Proceedings., Vol. 15 (1956), p. 494; Blackham,

A., J.W. Burns, J.B. Farmer, H. Radziwonik, J. Westwick, An X-Ray Analysis of Adjuvant Arthritis in the Rat. The Effect of Prednisolone and Indomethacin, Agents and Actions, Vol. 7/1 (1977), p. 145-151; Winter, C.A. & G.W. Nuss, Ireatment of Adjuvant Arthritis in Rats with Anti -Inflammatory Drugs Arthritis and Rheumatism, Vol. 9, No. 3 (June, 1966) , pp. 394-404; and Francis, M.D., K. Hovancik & R.W. Boyce, NE-58095; A Diphosphonate Which Prevents Boné Erosion and Preverves Joint Architecture in Experimental Arthritis, Int. J. Tiss. Reac., Vol.XI, No. 5 (1989), pp. 239-252.

A vegyületek felhasználására szolgáló készítmények és módszerek:

A következő, a találmányt nem korlátozó példák bemutatják a találmány tárgyát képező tervezett készítményeket és azok felhasználását.

4. példa:

A tablettákat a szokásos módszerekkel állítjuk elő, ezek összetétele a következő:

Komponens	Mennyiség	(mg)
Noc-D-t-Bug-Phe-Lys-C(0)CF₂C(0)-Leu-Arg-OMe	400
mikrokristályos cellulóz	200
előcsirízesített keményítő	200
Povidon K-30	40
Magnézium sztearát	20
A tablettákat naponta négy alkalommal	orálisan adjuk
pácienseknek az artritis által az ízületekben kiváltott	gyűl
ladás enyhítésére.
5. példa:
A bedörzsölésre szolgáló folyadékot, melynek összetétel
az alábbi, a szokásos eljárásokkal állítjuk	elő :
Komponens	Mennyiség·
eBroc-D-t-Bug-Phe-Arg-C(0)CF₂C(0)-Gly-Arg-OMe 2,5
glicerin	4,0
metil-(p-hidroxi)-benzoát	0,2
propil-(p-hidroxi)-benzoát	0,1
carbopol 934	0,15
nátrium-hidroxid	0,46
cetil-sztearil-palmitát	1,0
sztearinsav	0,5
lanolin zsírsavak	0,5
cetil-alkohol (hexadekanol)	3,0
Zantham mézga	0,3

	• · · · · · • · ··· ··· · • · » · · · ·
- 43 -	·· ·« ·· «···
nátrium-2-(sztearoil-oxi)-propionát	0,75
izopropil-mirisztát	2 , 0
víz	szükség szerint

A bőr gyulladásos területére 1 g borogatószert (bedörzsölőszert) használunk helyi kezelésre naponta kétszer, hogy a gyulladást és a fájdalmat csökkentsük.

6. példa:

Oldatot a szokásos módszerekkel állítunk elő; az oldat 2 ml-es mennyiségének összetétele a következő:

Komponens	Mennyiség (mg)
Adoc-D-Phe-Phe-Lys-C(0)CF2C(0)-D-Phe-Arg-OH	80
(alkil-benzil-dimetil-ammónium)-klorid	40
izotóniás vizes nátrium-klorid-oldat	szükség szerint

Ezen oldat 2 ml-nyi mennyiségét intramuszkuláris injekció-

ként adjuk artritiszes pácienseknek, hogy a

gyulladást és a

fájdalmat mérsékeljük.

7. példa:

Oldatot a szokásos móon állítunk elő, mely oldatnak az összetétele a következő:

Komponens	Mennyiség (%)
Adoc-D-t-Bug-Phe-Arg-C(0)CF2C(0)-Ala-Arg-OH	5,0
(alkil-benzil-dimetil-ammónium)-klorid	0,02

• · · · ·* ··· ··· nátrium-(karboxi-metil)-cellulóz) 0,01 izotóniás vizes nátrium-klorid-oldat q.s.

Ezen oldatból 0,2 ml-nyi mennyiséget használunk inhalációs célra olyan pácienseknél, akik igénylik az asztma által kiváltott felső légúti tünetek enyhítését.

Bár leírtuk a találmány tárgyának jellemző megvalósításait, a hozzáértők számára nyilvánvaló, hogy a találmány tárgyát különböző módon megváltoztathatjuk és módosíthatjuk anélkül, hogy eltérnénk a találmány oltalmi körétől és szellemétől. Ezért az a szándékunk, hogy a következő igénypontok felöleljék mindazon módosításokat, melyek a találmány oltalmi körén belül esnek.

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Egy (1) általános képlet szerinti vegyület és annak gyógyszerészetileg elfogadható sói és hidrátjai — amely képletben (a) -X jelentése egy kiválasztott csoport a 4-15 szénatomos gyűrűs alkil-, a 6-15 szénatomos, legalább két elágazást tartalmazó, elágazó alkil- és a 6-15 szénatomos árucsoportok közül;

(b) n értéke 0-tól 2-ig terjedő egész szám;

(c) -V- jelentése egy kiválasztott csoport az -OC(O)-, -C(O)-, -SOg- és -P(O)(OH)-képletű, illetve az N(Q)C(O)vagy -N(Q)C(S)- általános képletű csoportok közül;

(d) -Q jelentése hidrogénatom vagy 1-6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú telített vagy 1-2 kettős kötést tartalmazó telítetlen alkilcsoport, vagy -Q és -X együtt 5-20 szénatomos gyűrűs csoportot képez, amely magában foglalja azt a nitrogénatomot, amelyhez a -Q kapcsolódik;

(e) -Z- jelentése oxigénatom vagy -NH-csoport; ha -V jelentése -OC(O)-csoport, -Z- jelentése -NH-csoport;

(f) -R¹ jelentése egy kiválasztott csoport az 1-6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú telített vagy 1-2 kettős kötést tartalmazó telítetlen alkil-, 3-10 szénatomos telített vagy 1-2 kettős kötést tartalmazó telítetlen gyűrűs alkilvagy aril-alkil-csoportok közül: ez utóbbi csoportban az alifás rész 1-2 szénatomos és telített és az a szénatom, amelyhez az -R¹ kapcsolódik D vagy L konfigurációjú;

(g) -R² jelentése egy kiválasztott csoport az 1-2 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú telített vagy 1-2 kettős kötést tartalmazó telítetlen alkil-, 3-10 szénatomos telített vagy 1-2 kettős kötést tartalmazó telítetlen gyűrűs alkilvagy aril-alkil-csoportok közül; ez utóbbi csoportban az alifás rész 1-2 szénatomos és telített; és az a szénatom, amelyhez az -R² kapcsolódik D vagy L konfigurációjú;

(h) -R³ jelentése a (CH₂)_m-A-NH₂ vagy a -(CH₂)_m-A-B-C(NH₂)= =NH általános képletű csoport, amely képletekben m értéke 1-től 6-ig terjedő egész szám, -A- jelentése kovalens kötés vagy p-fenil- vagy p-ciklohexil-csoport, és -B- jelentése kovalens kötés vagy -NH-csoport; és a szénatom, amelyhez az -R³ kapcsolódik L konfigurációjú;

(i) -R⁴ jelentése egy kiválasztott csoport az 1-6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú telített vagy 1-2 kettős kötést tartalmazó telítetlen alkil-, a 3-10 szénatomos telített vagy 1-2 kettős kötést tartalmazó telítetlen gyűrűs alkilés aril-alkil-csoportok közül; ez utóbbi csoportban az alifás rész 1-2 szénatomos és telített; és,az a szénatom, amelyhez az -R⁴ kapcsolódik D vagy L· konfigurációjú;

(j) -R⁵ jelentése a -(CH₂)_m-A-NH₂ vagy a -(CH₂)_ra-A-B-C(NH₂)= =NH általános képletű csoport, amely képletekben m értéke 1-től 6-ig terjedő egész szám, -A- jelentése kovalens kötés vagy p-fenil- vagy p-ciklohexil-csoport, és -B- jelentése kovalens kötés vagy -NH-csoport; és a szénatom, amelyhez az -R³ kapcsolódik D vagy L konfigurációjú; és (k) -Y jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport.

• · • · ··· ««· « • · * · · · · ·· ·« ·· ····
2. Egy 1. igénypont szerinti vegyület, amelyben (a) -V- jelentése -0C(0)- vagy -NHC(O)- képletű cso- port, és -Z- jelentése -NH-csoport;

(b) n értéke 0 vagy 1;

(c) m értéke 1-től 5-ig terjedő egész szám;

(d) -X jelentése 8-12 szénatomos telített és szubsztituálatlan biciklo- vagy tricikloalkilcsoport, vagy 8-12 szénatomos szubsztituálatlan arilcsoport; és (e) -R⁴, -R² és -R⁴ kiválasztott csoportot jelentenek az 1-5 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú alkil- vagy 3-6 szénatomos gyűrűs alkil- és benzil-csoportok közül.
3. Egy 1. vagy 2. igénypont szerinti vegyület, amelyben (a) -r3 jelentése a -(CH₂)_m-A-NH2 általános képletű csoport, amely képletben

-A- jelentése kovalens kötés, és m értéke 3-tól 5-ig térj ed;

(b) -R⁵ jelentése a -(CH₂)_m-A-B-C(NH₂)=NH általános képletű csoport, amely képletben -A- kovalens kötést, -B- pedig -NH-csoportot jelent, és m értéke 2-től 4-ig terjed;

(c) -Y jelentése metilcsoport; és (d) -V- jelentése az -0C(0)- képletű csoport.
4. Egy 1., 2. vagy 3.igénypont szerinti vegyület, amelyben (a) -X jelentése tricikloalkilcsoport; és (b) -R¹ és -R⁴ jelentése 1-4 szénatomos telített és szubsztituálatlan egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, és -R²jelentése benzilcsoport.

* · f • * · · • · · ·« ·«··

Egy X¹-AA¹-AA²-AA³-CF₂-C(0)-AA⁴-AA³-OY általános képletű vegyület és annak gyógyszerészetileg elfogadható sói és hidrátjai amely képletben (a) -AA¹- kiválasztott csoportot jelent a tere-bútil-glicil-, valil-, izoleucil-, leucil-, ciklohexil-glicil-, ciklohexil-alanil- , fenilalanil-, naftilalanil-, triptofil- és adamantil-glicil-aminosavmaradékok közül;

(b) -AA²- kiválasztott csoportot jelent a fenilalanil·-, naftilalanil-, ciklohexil-alanil-, leucil- és izoleucil-aminosavmaradékok közül;

(c) -AA³- kiválasztott csoportot jelent az arginil-, homoarginil-, lizil-, p-guanidino-fenilalanil-, p-amidino-fenilalanil-, és p-amino-fenilalanil-aminosavmaradékok közül ;

(d) -AA⁴- kiválasztott csoportot jelent a fenilalanil-, naftilalanil-, ciklohexil-alanil-, leucil- és izoleucil-aminosavmaradékok közül;

(e) -AA³- kiválasztott csoportot jelent az arginil-, homoarginil-, lizil-, ρ-guanidino-fenilalanil-, p-amidino-fenilalanil- és p-amino-fenilalanil-aminosavmaradékok közül ;

(f) -X¹ kiválasztott csoportot jelent az adamantil-oxi-karbo- nil-, adamantoil-, (fluorenil-metoxi)-karbonil-, adamantán-acetil-, (adamantán-amino)-karbonil-, noradamantoil-, morfolinil-, (homoadamantil-oxi)-karbonil-, (fenchil-oxi)-karbonil-, (izomentil-oxi)-karbonil-, (izopino-kamfanil-oxi)-karbonil-, (3,
5-dimetil-adamantil-oxi)-karbo- nil-, (endo-bornil-oxi)-karbonil-, (naftil-oxi)-karbonilés (mentil-oxi)-karbonil-csoportok közül: és (g) -Y jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport.
6. Egy 5.igénypont szerinti vegyület, amelyben (a) -AA⁵- jelentése arginil-aminosavmaradék;

(b) -AA³- jelentése lizil-aminosavmaradék; és (c) -X¹ kiválasztott csoportot jelent az (adamantil-oxi)-karbonil-, (endo-bornil-oxi)-karbonil- és (izopino-kamfanil-oxi)-karbonil-csoportok közül.
7. Egy 5. vagy 6. igénypont szerinti vegyület, amelyben (a) -AA¹- kiválasztott csoportot jelent a tere-butil-glicil-, valil- és izoleucil-aminosavmaradékok közül;

(b) -AA²- jelentése fenilalanil-aminosavmaradék; és (c) -AA⁴- jelentése leucil-aminosavmaradék.
8. Egy 5., 6. vagy 7.igénypont szerinti vegyület, amelyben (a) -AA¹- jelentése terc-butil-glicil-aminosavmaradék;

(b) -X¹ jelentése adamantil-oxi-karbonil-csoport; és (c) -Y jelentése metilcsoport.
9. Gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy egy, az

1-8. igénypontok bármelyike szerinti vegyületet és egy gyógy szerészetileg elfogadható hordozót tartalmaz.
10. Egy, az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti vegyü let felhasználása gyulladás vagy fájdalom kezelésére szolgáló gyógyszer előállítására.