HU228975B1 - Vaccine - Google Patents

Vaccine Download PDF

Info

Publication number
HU228975B1
HU228975B1 HU0203335A HUP0203335A HU228975B1 HU 228975 B1 HU228975 B1 HU 228975B1 HU 0203335 A HU0203335 A HU 0203335A HU P0203335 A HUP0203335 A HU P0203335A HU 228975 B1 HU228975 B1 HU 228975B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
vaccine
rotavirus
variant
virus
population
Prior art date
Application number
HU0203335A
Other languages
English (en)
Inventor
Brigitte Desiree Alberte Colau
Francoise Denamur
Isabelle Knott
Annick Poliszczak
Georges Thiry
De Velde Vincent Van
Original Assignee
Smithkline Beecham Biolog
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GBGB9919468.0A external-priority patent/GB9919468D0/en
Priority claimed from GBGB9927336.9A external-priority patent/GB9927336D0/en
Application filed by Smithkline Beecham Biolog filed Critical Smithkline Beecham Biolog
Publication of HUP0203335A1 publication Critical patent/HUP0203335A1/hu
Publication of HUP0203335A3 publication Critical patent/HUP0203335A3/hu
Publication of HU228975B1 publication Critical patent/HU228975B1/hu
Priority to HUS1300072 priority Critical patent/HUS1300072I1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/15—Reoviridae, e.g. calf diarrhea virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
    • A61K8/0216—Solid or semisolid forms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A61K9/0056—Mouth soluble or dispersible forms; Suckable, eatable, chewable coherent forms; Forms rapidly disintegrating in the mouth; Lozenges; Lollipops; Bite capsules; Baked products; Baits or other oral forms for animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0087—Galenical forms not covered by A61K9/02 - A61K9/7023
    • A61K9/0095—Drinks; Beverages; Syrups; Compositions for reconstitution thereof, e.g. powders or tablets to be dispersed in a glass of water; Veterinary drenches
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12—Antidiarrhoeals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A61K2039/542—Mucosal route oral/gastrointestinal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2095—Tabletting processes; Dosage units made by direct compression of powders or specially processed granules, by eliminating solvents, by melt-extrusion, by injection molding, by 3D printing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2720/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsRNA viruses
    • C12N2720/00011—Details
    • C12N2720/12011—Reoviridae
    • C12N2720/12311—Rotavirus, e.g. rotavirus A
    • C12N2720/12321—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2720/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsRNA viruses
    • C12N2720/00011—Details
    • C12N2720/12011—Reoviridae
    • C12N2720/12311—Rotavirus, e.g. rotavirus A
    • C12N2720/12322—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2720/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsRNA viruses
    • C12N2720/00011—Details
    • C12N2720/12011—Reoviridae
    • C12N2720/12311—Rotavirus, e.g. rotavirus A
    • C12N2720/12332—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2720/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsRNA viruses
    • C12N2720/00011—Details
    • C12N2720/12011—Reoviridae
    • C12N2720/12311—Rotavirus, e.g. rotavirus A
    • C12N2720/12334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2720/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsRNA viruses
    • C12N2720/00011—Details
    • C12N2720/12011—Reoviridae
    • C12N2720/12311—Rotavirus, e.g. rotavirus A
    • C12N2720/12351—Methods of production or purification of viral material
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Description

A találmány tárgyát áj vsketnakiszerefesek, aa alóállkásakra szolgáld eljárások és terápiás alkalmaaáspk képezi. A találmány tárgyát közelebbről őj rteavírassk. és rmavim-v^mitóésjdlméayo^ képezek,
A találmány szeriste magoldás előnyösen alkalmazható totavkas okotda megbetegedések megelőzésére és teelésém.
A heveny, fertőző eredete hasmenés a világ számos részén vezető megbetegedési- és haláloknak szfenit. A fejlődő országokban a hsammá» zttegbetegedések tendkivől súlyos vwieséget okxrzsak, Azttiáten, Afrikába» és Itefe-Aosedkébna becslések szza'ife: évente 3-4 íoiiliteita tehető a hasmenése» megbetegedések szánsa, melyek közül körtiiEelei d-iö mdliö halállal végződik (Walsh, X A. és mtsai.: N. Engl, .1, Med. 301, Oö? {1079}].
A roiavinwk ez feszülőitek és kisgyerotekek aályw foké teisexeaeséí kiváltó legioeíosstbb kórokozók köze tartoznak (Estes, Μ. K.: “Roiavfesses and tteir repbesőos, testes Virology, 3. kiadás, szetk.; Piekls és ottani., kiad.; Savén Pabltótm, Philadelphia (iteölj, Eeeslések smiat a rotevlrosos hasmenés évente több mist egymillió halálesetért tetető felelőssé. A roUvkw okozte kórkép ieggyeknfebsn 6-24 hónapos gyermekeket érinl, mérsékelt égövén ss nsegbetegedés eíóftmhdási csáesa a hidegebb bőenpokrn esik, «ópwi vidékeken viswnt egész évben előtöntel. A rotavőnsok jetemad eteden betsárszeenyezödés széfen ét: történd felvételével tejednek emfeeradl-embme, a nssgbetsgsfete lappangási ideje kődiiteltd 1-3 nap. A 6-24 hónapos kotescportral szemben aa ójszfeőtiek általában titeetavsztesep vagy ősapán enyhe tnnnteldste vészelik ét a fertőzést:, A felnőttek: többsége a korábba» átvészelt rofevbns-fertözés etefeteeyekérn védettséggel rendelkezik, igy a felnőttkort fertőzések a italai gyersstnkekben megfigyelhető súlyos klinikai dinetekkel szemben teoebosrsíesek, vsgy csak erzyhe tteolskkel járnak ((Mii, E, A. ős satsab: Cottfe. Ther, §(á), 21 (1 Oá2)j,
A tzteferssok álttófesn gömb alakáak, nevekét a jellegzetes, külső és belső rétegből kilő kétrétegű teortezerkezettlkről kapták. A rotavkns kettős tette egy belső porfete-éteget vagy magot vesz kőről, amely a genootot tertstlmazzs. A refevims genomjs 11 sxegttmnsbői éllé dupla szélé RNS, amely legalább 11 ktliőnfete vtespretefet kódot Ezek közöl kettő. a VP4 és a VP7 a kettős booíkszerkezet külsején tteálhsiő. A etesvlíns belső barka egy, VEö-osnek nevezett proteint tartalom. Az említett bárom rotavteís-protebsnek s totevknsfertőzés hattóm kialakuld itoottmválnsgfetn betöltött szerepe még nem bsztezott, A YP6 postát ngyenteter a csoport- és alosnpctt-speoifííást, ndg a VP4 és a VF7 proteinek a szerölfete'Speciőíásl meghatározó antigének.
A átfedő De (neut-gllkoziláli alakban feiílöö fen) iömégtt VP7 glikeptetetn a vlrnstöezstöi lltggöen a 7., 8, vagy Ő. genomí szegmens trsttmzláfeós terméke., A rtsíávkns-tertőzés során ez & profeist idézi elő a lő neuteli* telő ellemmy&g termelését, A 4. gennsni szegmens tmtmlfenéjávai létrejövő, megközelítőkig SÖőiXl öa tömegé aetn-gkknzilfet VP 4 protein szinten nentteizteö elfetwzyag kfezodési fedtétek tervei a treotedizzilö ellemmyagsfe a VP4 és VP? vteísinntebsek eben itesytenak, elsősorban ezeket tetetek aiteteasnnk a nfetvtrosok otezte stegtefegedés ellen védő vakéinak kifej tesztesése.
A kora nyerrntekörbitn bsköveitezö rotavsrwfertőtes védő tetsző immanitást vélt ki. Ennek megfelelően egy őlö, gyengített rntsvirnsvvatefes. iránt jelentős igény mnlaikezfe, telvel a vtrnsiertözés széfen át követtetek be, sz említett vsteinénsfe előnyösen szájöa át betttfeaíönak kell lennie,
A. retavfetss-fertözés iísegfedtesére szolgáld vakéinak kifejlesztése a vtras felfedezését kővetően, a 1070es években kezdődött. A kezdeti iáöszskbsn erre a sete enfeeri és tetei eredete gyertgltett itetaetes: ttlkateszAkteszásnnteí 06277-3072.4^0 íak, vegyes, vagy csalódást keltő eredménnyel Újabban nagyobb sikerrel vettek igénybe vakcina készítésre emberi-áílaíi átrendezése» virttöváltozatokaí' (Geassoítaals'’)..
A 89-í 2 jelzésű toiavírus-íőtxset Ward itta le [3474773 szántó amerikai egyesült államokbeli szabadalmi Irat; Bsmstein, D, L. és mtsai.: Vaccine 16(4)- 381-38? (4988)]. A 89-'l2-es törzset 1988-h&ís izolálták egy természetes rotavírus-feriőzésben megbetegedett 14 hónapos gyermek bélsármmtájából. Az 5474773 szántó amerikai egyesült államokbeli szabadalmi irat. szerint a 1ÍRV 59-12-es emberi rotavirus törzset elsődleges afrikai kabócamajom-vese (Alricaa Örsen Monkey Kidsey, AGMK) sejteken végzett két passzázzsal, majd. MA-104 sejteken végzett 4 passzázzsal tenyészethez adaptálták (Ward.; J. Clin, Microbioí. 19, 748 (1984)], Ezt követően MÁ-1Ö4 sejteken hárem alkalommal (a 9. passzázsig) piakktisztították, majd ugyanezen sejteken két további alkalommal passzálták. Az ATCC-beli deponálás érdekében egy újabb (42.) passzáiást végeztek (ATCC deponálási szám: VK 2273), A deponált törzs elnevezése 89-I2C2.
Bernstein és munkatársai Vaceine c. folyóiratban 1998-ban megjelent cikkére az alábbiakban Vaceine (1998) formában hivatkozunk. Ez a közlemény egy szájon át alkalmazott emberi élő rotóyírttsvnkeítta»jelöít biztonságosságát és immunogén hatását ismerted. A vakcina alapjául szolgáló vírust a 89-12-es törzsből elsődleges AGMK-sejtekhen 26 alkalommal plakkdsztítás nélkül, majd egy stabil AGMK sejtvonalon további ? alkalommal végzett (összesen 33) passzáiással állították elő.
A továbbiakban az említettek szerint 26 alkalommal passzált anyagot F2ó~nak, a 33 alkalommal passzákat pedig P33-aak nevezzük. Alt&láerssságban, a 89-12-es törzs n szántó passzálásával előállított vinmörzset Pn-aek nevezzük.
A későbbiekben bemutatandó példákban a P33-at őt további alkalommal Verő sejteken pasazáltuk, erre az anyagra F38jelzéssel utalunk.
A Vaccine (1998) közleményben ismertetett F2ö ás F33 izolátumok tömgyőjteménybelí deponálására és genetikai jellemzőik. elemzésére nem került sor.
Bebizonyosodott, bogy a szakirodalomban leírt F2ő'populáeiő vírusvariánsok keverékének tekinthető. Ez a későbbiekben ismertetett genetikai jellemzés eredményéből derük ki (ld. ts példákat).. Ennek megfelelően a F2ő különösen a vakcinatéteiek előállításéra szolgáló továbbpasszálás céljából nem számit megbízhatóan homogén populációnak, A F33 is variánsok keverékének tekinthető, Igy vakcinatéteiek előállítása során szintén nem jelent megbízhatóan homogén .populációt.
Kimutattuk, bogy a F2Ő legalább bárom VF4 génvariáns keveréke, a F33 és a P38 pedig hasonlóképpen két variáns keverékei, F33-mal vakeinázott csecsemők szómmá említett: variánsok elleni neuttaltzálő ellenanyagtiterének vizsgálatával megáltapífottafc,, hogy a variánsok a netttmlízáló ellenanyagok képződését kiváltó epítópok tekintetében eltérnek az ATCC-nél deponált 89-I2C2 törzstől. Ezt a megállapítást a 3, ábra szemlélteti,
A F33 csecsemőknek történt beadását követte két azonosított variáns replitetőja ős kiválasztódása volt kimutatható. Száz vakeinázott csecsemő közül rotavbns fertőzés hatására csupán kettő mutatott gastroenierittsne jellemző tüneteket, míg a plscsbóí kapott csoport 20%-a mentegeden. Mindezek alapján a® azonosított variánsok védettséget alakítanak ki a rotavimos megbetegedéssel szemben, A találmány tárgyát rotavirus vtsriansok elkülönítésére alkalmas eljárás és klónozott (homogén) emberi -rötavöus-tőmhől származó tökéletesített élő, attenuált rotavbus-vakema képezi.
ΦΦΧΦ ΧΦΦ*
Mindezeknek mnglelelően egy szempontból a találmány tárgyát kizárólag vsgy alapvetően egy, o V?4 vzgy VP? jeiő fő vkospmtemek közöl legalább egyet kódoló nuldeoridmkvestóa álisd megbatározott változatot tartalmazó attesmált toüiyóxrs-gopoiáeíő (izolálom.) kájsste,
A találmány szerinti rotavlms-pópuláeiő elonyősess klónozott variáns.
Kizárólag vagy alapvetően egy variánst tartalmazó popsláciő ebe olyan romvíro-popnífóőt értőnk, amely lő%.-nál nem több, előnyösen őriVoél kevesebb, iegeteoyőzelteáé pedig 1 Ebnél kevesebb eltérő variánst vagy variámoknt tartalmaz, Megfelelő sejttípusokon párnáivá, vagy egy vsgy több klónozás! lépés segítségével bosoogéo vagy alapvetően komogón vlrospogeléelők isozkoték létre.
A találmány szerint! megoldás előnye, begy az egy vate lartelmazó vlm^mpuláclóból bonso.géserib vakeiaatótei állítható «lő, A lő vlnispostemt kódoló ««kleotidszekvenoiáknak megfelelő variánsok fokozott hatékonyságának bmayalh&tnak a íxtlztem-tedőzte megelőxésébeto
A találmány egy előnyös megvalósítási méőjéto a találmány szerinti kizárólag vagy alapvetően egy veriánst tartalmazó ottitvő-os-psgoíláesólyso. található variánsban a Y.P4 geo a következők legalább egyikét magában foglzio ookieoririszekveoeste tsristeas: a kezdőkodöntól számított ?§Ő. pozíelőbell adentn (A), 80,2. pozíoiébell adenin (A), vagy 50 1, poxtelőbell tisste (T)<
Egy további szempontból a taiéltoáoy szerinti klzsróteg vagy alapvetőm egy variánst tartalmazó populációban steélhmő variánsban a VP? .géo a kővetkezők legalább egyikét magában foglaló ««kleotidszekveneiát tartalmaz; a kezílrikeriofitől seámtes Ó05. pestetekéit rirnm <T> vagy §07. goetelőixdi admdn (A) vagy gna&ln (G). A 097, pozícióban előnyőse» adenin (A) tblélbzte,
A találmány egy előnyős megvalósítási módjában a találmány szerinti gogsdáolrifeao ériálbslri egyetlen variáns a VF4 gánszekveneiában a kezdőkodöttíől számítolt ?§§, év élte. poxletóbsn sdenmt (A), ex 501, pozseióbaa pedig inteni: (T) tartalmaz.
Egy további előnyös megvalósítás! módban a találmány szerint! pegtOáeiébso található egyetlen variáns a VP? génszekveneiában a kezdőkedomó! számított 605, pozícióban timmt (Tt, a §07. pozícióban pedig admiat/gasmat (Ari?) hatalmaz. A VP? szekvencia §97. pozícióban legelőnyösebben adenin (A) található,
A találmány egy küidsöseo előnyős megvalósítási módjában a találmány szeried populációban található egyetlen variáns a VP4 génszekveneiában a kezdőkodontól számított 788, és §07, portesébm adenint (A), az 50 L gozlciőbon rimlnt (T), továbbá a VE? geeszeEveeclébeo a kezdékoboőiki számított Ő05, poztelribeo Estest {Ti, a 507, pozícióban pedig sdeoéeVgoaejtá (Aéö) tartalmaz, A VP? szekvencia 897, pozícióban iegeiőeyEsete benadems (A) lalálfestó.
ügy további szempontból az egyetlen variáns az 1. ábrán bemutatott, VP4 proteint kódoló sbkseotláseekviwiát ébvegy a 2, ábrán bemutatott, VP? postaim kódoló tmldecddazekvenciát tartalmaz.
A Iteáhsásy tárgyéi képezi továbbá az slegvetőes egyetlen variánst tasmbsnxó tolavbse-'pőpuléeló előéri ütésére szolgáié, á kővetkező lépésekből álló elfázfe rotsvines'-késziimány pesszálása megfelelő sejhípnsoa; esteti, esetben homogén tenyészet kteálasziáse (a) korlátozó hlgüfasri vagy
φ) egyedi plató: Izolálással; és az alapvetően egyetlen variáns jelen létének kimutatása a VF4 és/vagy VF7 génszekvencia megfelelő régiója szfökveeetájáKsk meghatározásával.
A szekvencia-meghatározásra kvantitatív vagy szemikvanUtatív hibridizációs eljárás, pl, ”slot-bloí hibridizáció vagy plakldübridizáciő alkalmazható.
A kiválasztott variáns előnyőse» a kezdeti notavhus-preparátum emberi páciensnek, közelebbről gyermeknek történő beadását kővetően repíikákkló és kiválasztódó („excretíon”) variáns.
A találmány szerinti eljárással előállított klónozott viruspopuiáctó megfelelő sejivonaion tovább párnáivá megsokszorozhaiő.
A fentiekben ismertetett eljárásban & roíavöus-popnlácíó passzázsára alkalmas többek között sz afrikai kabócsmaiom·vese (African. Green Monkey Kitiné/*, AGMK) sejtekből származó stabil sejtvonal vagy elsődleges sejttenyészet. Megfelelő AGMK-sejtvonaiak pl, a Verő (ÁTCC CCL-itl}, a DBS-FRht.-2 (ATCC CL· 160), a BSC-l (ECACC 850 i 1422 és a CV-i (ATCC CCX,-7Ö). A fenti célra alkalmasak továbbá az MA-104 (rézusroajom eredetű) és az MRC-5 (emberi eredetű, ÁTCC CCL-17X) sejtvonaiak. A sokszorozás céljára különösen előnyös a Verő sejtek alkalmazása, mivel a rajiak végzett passzálás nagy vkusmemsyisége? eredményez.
Annak megállapítására, hogy a találmány szerinti eljárással előállított vírnspopniáelóban egyetlen variáns van-e jelen, valamint a variáns tulajdonságainak megbalámzására az alábbiakban bemutatott, szakember számára Ismert standard azekvenálári vagy Inbridizácíds eljárások alkalmazhatók,
A találmány egy előnyős megvalósítási módjában, a találmány szerinti eljárás kivitelezésére megfelelő rotaviras, közelebbről a 89-12-es törzs vagy annak pssszálássai nyeri leszármazottja jellemzőivel rendelkező rotavíras felhasználásával kerül sor.
Különösen előnyös egyedi variánst tartalmazó populáció a P43, amelyet P33-ből (izolált és megfelelő rojttenyészeteken 35 alkalommal passzált emberi rotavíntsból) vághtgitásos klónozást lépesek sorosával, majd a klónozott anyag Verő sejteken történt sokszorozásával nyertünk.
A P43 jelű. populációt a Budapesti Egyezménynek megfelelő teltételek melleti 1999. augusztus 13-án 99081301 deponálási szám. alatt letétbe helyeztük a következő intézményben: Buropeao Coliectíort of Animál Cell Cnltares (ECACC), Vaccine Research and Erodnetiou laboratory, Bubik: Health. Laboratory Service, Centre fór Applied Mieroltiology and Research, börtön Dovm, Sahsbnry, Wiltsbire, SP4 OKI Egyesült Királyság.
Bár a P43-as emberi rotavhus legegyszerűbben az előzőekben Ismertetett, köz számára hozzáférhető forrásból szerezhető be, nem elképzelhetetlen, hogy a találmány szerinti khartitás ismeretében az itt közölt vagy egyéb eljárások segítségével hozzá hasonló, vagy vele fenkeienális szempontból lényegében azonos rotavifusofc állíthatók elő. Az Ilyen, itinkeionátis szempontból lényegében azonos ntisvimsokst a t&Jáhaány szerinti F43-as emberi mtavírassaJ biológiailag egyenértékűnek, ennélfogva a találmány hatókörébe tartozónak tekintjük. Ennek megfelelően a találmány tárgyát képezik a találmány toriad P43-as variáns joitenazöível rendelkező rotavirus-populástők is.
A találmány tárgyét képezik továbbá a öóOSl.SOi ECACC deponálási számú P43~bó! mvébbfeláolgozássak pl. továbbpasazálésssl, klónozással, az élő vírust alkalmazó egyéb eljárásokkal, vagy a P43 bármely módosításával, pl. génsebészeti vagy átrendezési eljárásokkal nyert anyagok, is. Az említett lépések és eljárások szakember számára jól ismertek.
X X Φ * * φ « φ * φ φ ♦ « ♦ * X φ* *
Φ φ Φ ♦ Φ X
A deportált P43~ból származó anyagok közül a találmány tárgyát képezi a protein és a genedfesi anyag. Ebtói a szemponttól különöse» lényegesek a P43 legalább egy ardigénjéí vsgy legalább egy szegmensét tartalmazó átrendezett roumirusok, pl azok, amelyekben egy virulens rotavirns-törzs 1í genomí szegatease közül egyet vagy annak egy részét a P43 genomí szegmense vagy annak egy része helyettesíti Közelebbről, a találmány szerinti megoldás szempontjából előnyős tulajdonságokkal mnőelkezber az az átrendezett totavirus, amelyben az NSP4-et kódoló szegmenst vagy szegmens-részt P43-eredetó szegmens vagy szegmens-rész helyettesíti .Az átrendezett rotavíntsok és az előállításukra szolgáló eljárások jól ismertek [Foster, Κ, H, és Wagstaff, A. I.: ”Tetravale»t Rotavirns Vaccíne, a ravtew/, .AIDS drog evaíuatlon, SioDrugs, Gev. 9(2), 155 (19931.
Különös érdeklődésre tartanak számot a P43 utódai és ímmanoiógiailag aktív származékai. Imrmmológiailag aktív származékok alatt. a P43 vírusból -vagy annak felhasználásával előállítod anyagok mindenekelőtt gazdaállatba isjektálva roiaviras éltess immunválasz kiváltására képes vtrussntigéneket értünk.
A rotavhus megfelelő sejtvonalhoz, pl. Vető sejtekhez történő adaptálása során a potenciálisan szennyeződést okozó járulékos ágensektől történő toegszabadulás érdekében a vírus kezelésére lehet szükség, Éterérzékeny szennyező vírusok esetében ez. az alábbiakban ismertetett átérés kezeléssel végezhető el. A találmány tárgyat képezi az emhtett éteres kezelés szabadon választható lépésként történő igénybevétele az attenuált élő rotavínrs vagy azt tartalmazó vakcina előállítására szolgáló általános eljárás során.
A találmány tárgyat képezik továbbá a P43 egyéb rotevírus-variánsekkal, pl. más klónozott variánsokkal, vagy «sás vírusokkal, közelebbről más attetírsák vírusokkal képzett keverékek Ezek' a keverékek a találmány szerinti, az alábbiakban ismertetett vakcinákba® alkalmazhatók.
A találmány tárgyit képezi továbbá egy alapvetően egy variánsból álló víntspoptdáciő és megfelelő adjnváns vagy gyógyászati hordozóanyag keverékét tartalmazó élő, attenuáh rotavims-vakensa.
.A találmány szerinti rotavhus-vaké ina előnyösen egy ratavhus-tőrasei ísztahnazé, nsonovaíens vakcina.
A találmány szerinti megoldás kQIönŐsen előnyös abból a -szempontból, hogy élő, attenuált emberi rotavírsst tartalmazó vakéinál biztosít, amelynek vímstörzse sem idéz: elő feéíitrvagmáeiőt.
A találmány szerinti vakeiaaheli alkalmazás céljára megfelelő gyógyászati vivőanyagok a szakember számára Ismert, elsősorban csecsemőknek szájon át történő beadásra alkalmas anyagok, ilyen vivőanyagok többek között a szénhidrátok, a polialkoholok, az aminosavak, az alamíniam-hidroxid, a magnézlum-hidroxíd, a hidroxíapátit, a tálkám, a titásoxíd, a vasíndroxid, a magnézium-sztearát, a karbotómetü-eelhdóz, a hidrox^roph-ntetílcehulőz, a mikrokmtályos cellulóz, s zselatin, a növényi pepién, a xantáa, a karragés, a gumíarábikum és a β-crkíodezírm.
A találmány tárgyát képezi továbbá egy mí&viros-vaketna előállítására szolgáló, pl. a találmány szerinti vírus megfelelő stábílteálóswek jefeíiétébén történő fagyasztva szártiásák vagy megfelelő adjuvánmi vagy gyógyászati vtvöányaggal íőnénó összekeverését tartalmazó eljárás..
Előnyös lébet továbbá § találmány szerinti vírus Itpídalapó hordozókkal, pl, virwómákka.1 vagy' szóraákkaí, hmdozórfeecskétol, vagy olaj a vízben típusú emulziókba» történő kiszerelése is. Ezek helyett vagy mellért a szájon át történő beadásra szánt vakcinákban alkalmazott» szakember számára ismert immnostimuláos szerek is helyet kaphatnak & kiszerelésben. Ilyen hmnunsrirauláasok pl a baktóriumtexionk, elsősorban a .teleratexm (CT) teljes molekuláin (hoíotoxm) vsgy B-lánca (CTS), valamint az E-. coli hölábiiis
ΦΦΦ φφφ*
ΦΦΦΦ φ enterotoxínja (Ι,Τ). Αχ aktív ioxinná a természetes alaknál kisebb eséllyel átalakuló mutáns LT-k <mLT-k) leírása megtalálható például a WO §ő/öóő27 számú nemzetközi közzétételi italban, a WO 93/13202 számú nemzetközi közzétételi iratban és az S i 82I09 teste amerikai egyesült államokbeli szabadalmi tettes.
További, előnyösen alkalmazható ímmansíimulánsok a szapoamszánnszékek, pl. a QS21 és a monofoszforil A-lipid, elsősorban a 3-de-Ö-aeilált -ttmnoibszíbríi A-lipid (3D-MPL). Szájon át történő beadásra szánt adjuvánsként alkalmazott tisztított szaponinokat ismertet a WO 98/56415 számú nemzetközi közzétételi áat. A szaponinok és a monofoszforil A-lipfo külöts-kűlön ás együtt is alkalmazhatók. (ld. pl. WO §4/00153 számú tísmaetközt közzétételi itat) és adjaváas módszerekben egyéb anyagokkal együtt is kiszerelhetők. A 3DMPL a Ribi immunochem (Mdntaöa) által gyártott; jól ismert adjuváns, amely tesáliííshteak menetét a GB 2122204 számú nagy-britanniaí szabadalmi irat ismerteti.
A. szájon át történő immunizálás során alkalmazott hordozóanyagok és adjovánsok általános ismertetése megtalálható a Vaceme Design: The Snhunit and Ádjuvant Approach*, szerL: Powell és Méwnan, kiad.: Eleműn Press, New York (1995) c, műben.
A. találmány tárgyát képem továbbá emberi páciensek, elsősorban csecsemők vakcinázására szolgáló, a sászoraló páciensnek a találmány szerinti vakcmakészítméay hatékony mennyiségének beadását magában foglaló eljárás. Az élő, attenuált vakcina beadására előnyösen .tejest? át kéről sor.
A találmány egy előnyös megvalósítási módjában a találmány szerinti vakeinákészttmény a gyomorsósav írtakiiválő hatásának minimalizálása érdekében savlekötö anyaggal együtt kerül kiszerelésre. Erre a célra megfelelő savlekötö összetevők. többek között a szerveden savlekőtők, pl. az alumtninm-hídrosid [Al(GH}3] és a stagnézáam-hiártsxid A. találmány szerinti megoldásban alkalmazható, kereskedelmi forgalomban kapható, alundnium-'hidíöxid és magnézínas-hidroxid tartalmú savlekötö szer pl. a Mylaata™.
Ezek az anyagok vízben oldhatatlanok, adagolásuk szuszpenzióban történik.
Az alundnium-bldroxid a találmány szerinti vakcinakészítmény' különösen előnyős összetevője, mivel nemcsak savlekötö, hanem adjuváns hatással Is bír,
A találmány szerinti vakcinában savlekötö anyagként szerves savlekőtők, pl, szervessav-fcatboxilát sók is alkalmazhatók. A találmány szerinti vakcisteészítmésybsd ssv-ekótő anyag előnyösem szervessav-karboxsiát sót, előnyöset! citromsav-sót, pl. náttium-citrthot vagy kálium-eiöátot tartalmaz.
A találmány szerinti vakeinakészíttnényben savlekötö anyagként különösen előnyösen alkalmazható oldhatatlan szervetlen só a kalcium-karbonát (CaCÖ3>. A kalcium-karbonát képes összekapcsolódni a xoütvírussal, amelynek aktivitását ez a kapcsolat nem befolyásosa.
A kalcium-karbonát töltési lépésben történő kiSiepedését megakadályozandó a kiszerelés előnyösen viszkózus anyagokat, is tartalmaz.
Az alksbnajásatő viszkózus anyagok közé tttrtemtk az ún. pszentfopimriktts köíbünyagok Cpseudnplastíe exeípients), Pszeadoplasztikus oldatnak nevezzük szí az oldatot, amely állás- köztest nagyobb teztozkásá, mint keverés során, Az ilyen típusú kötőanyagok lehetnek íentscsztes polimerek* Iá® tartozik pl. a gumiaráfeíkum, azadragaatmézga, az agar-agar,azalgistáfok,-apekteok vagy lehetnekfoiszfoiettespolimerek, mini pl- sí terixtxk&eril-celhdőz (Tyíoses OfÖ, a nsetíleellttlőz (M.eShoeds A®, Vbcotrans MCW, Tylose MH® és MB®), .ss hiátostptopih-ceifolóz (Rkicds®), és a hiártssiprtspUwseíilcteufoz (Methoeels £<> és K®, V'iseotrans MPHC®). 'Ezeket a psxmtáoplaszfikus kötőanyagokat általában tbtotröp ágensekkel együtt alkalmazφ « φ φ φφφ* zik. Viszkózus ágensként altemaíáv módon alacsony folyási teljesítményű pszeudopiasztikus .kötőanyagok is alkalmazhatók. Megfelelő koncentrációban ezek a polimerek olyan szerkezeti elrendeződést alakítanak ki a folyadékban, amely nagy viszkozitást, állás során alacsony folyási teljesítményű oldatot eredményez. £ rendszer csak bizonyos mértékű energlaköriés eredményeként válik folyékonnyá és átvihetövé. Külső energia (őszszerázás) szükséges ahhoz, hogy Ideiglenesen megszűnjön a folyadék szerkezeti elrendeződése és folyékony oldatot kapjunk. Ilyen polimerek pl. a CarbopoW-ok és a xantáagyanta.
A tíxotóp kötőanyagok állás közben gél szerkezetet vesznek fok felrázva pedig folyékony oldatot alkotnák. Tixotróp kötőanyagok pi. a Veegutn® (ma^feztum-aluajlmum-szlllkát) és az Avicel R.C® (kb. 89% mikrokristályos cellulózt és 11% karboximetíl-cellalóz-nátriumot tartalmaz).
A találmány szerinti vakeinakészitmény viszkózus ágensként előnyösen xantángomit vagy keményítőt tartalmaz.
Mindezeknek megfelelően a találmány szerinti vakeinakészitmény előnyösen kalcium-karbonát és xantángumi kombinációjával kerül kiszerelésre.
A találmány szerinti megoldásbaa alkalmazóit készítmény további Összetevőként alkalmas módon cukrokat, például szacharózt és/vagy iaktózt tartalmaz.
A. találmány szerinti vakeinakészitmény tartalmazhat további összetevőket is, pl. (különösen szájon át történő leadásra szánt vakcina esetében) ízesítőszereket és öakteriosztatikus ágenseket.
A találmány szerinti vakcinakészítraény többféle formában valósítható meg,
A találmány egy előnyös megvalósítási módjában a vakcina beadására folyékony kiszerelésként kerül sor. A beadás «lód a folyékony kiszerelést: előnyösen legalább a következő két Összetevőből történő helyreállítással (twonshíatlo»-) nyerjük:
i) virusősszetevő ii) folyadékösszetevö,
A találmány szerinti megvalósítási módban a vírus- és a folyadékösszetevö rendszerint különálló tárolóedényekben foglal helyet. Ezek egyazon edény elkülönített rekeszek vagy különálló edények lehetnek, amelyek összekötésével a vakeinakészitmény végső formása, a levegővel történő érintkezés nélkül állítható elő.
A helyreállítás előtt a vírus szárított vagy folyékony alakt lehet. A virusősszetevő előnyösen hoftitzák, ebben. az állapotban a vírus ugyanis stabilabb, mint vizes oldatban. A lioülriáh városból folyékony savlekőtő készítménnyel megfelelő módon végzett helyreállítással folyékony vakeinakészitmény nyerhető. A iforih'záh város alternatív módon vízzel vagy vizes oldattal is helyreállítható, ebben az esetben a líoíílizák vfrosősszetevö előnyösen ssvlekőtő összetevőt ss tartalmaz.
A találmány szerinti vakeinakiszereiés az egyik rekeszben vagy edénybe» előnyösen kalcium-karbonáttal és xantángamival kiszerelt vlmsösszetevöt tartalmaz, amelyet a második rekeszben vagy edényben található vízzel vagy vizes oldattal állítunk helyre.
A találmány egy további előnyös megvalósítási módjában a vakcínaösssetevő szilárd kiszerelésű, előnyösen a szájba véve azonnal feloldódó liofdixáh: komig, lioftlizáit kiszerelések tablettaként, gyógyászati hóíyagssömagoláshan {feiiste? pacid) is elóállithniók,
A találmány egy iováisfeí tnegvsiósstási módját gyotmm oldódó tabletta formájú, szájon át történő beadásra szám rotavuus-vakcisa képezi.
φφφφ φ V «ΐ φ *
ΦΦΚΦΦ 5ί« Φ & Φ Φ φφ Φ* *χ
A tsdáknény egy további jxtegvalósltásl módját élő, attenuált roiavlrus-tőrzseí, közelebbről emberi rotavkus-tötzset tartalmazó,a szájba helyezve azomutl feloldódó hotilszált szilárd készítmény képezi.
A találmány szerinti gyors oldódásit tabletta előnyösen olyan gyorsan feloldódik a páetesss szájában, bogy a feloldatlan tabletta lenyelésére nem kerülhet sor. Ez különösen előnyös megoldás gvennekgyógyászati rotavírus- vakcinák'««etében,
A vlros előnyösen szervetlets savlekölö anyaggal, pl. kalcium-karbonáttal és viszkózus ágenssel, pl. xantángnmíval kiszerelt élő, attenuált emberi rotavírus.
A találmány egy további megvalósítási módját olyan liofilizáit kiszerelés képezi, amelyben bármely, kalcium-karbonáttal és xantáagumíval kiszerelt rotavrrus-törzs virasösszetevő lehet.
A találmány szerinti tipikus vakomázott egyedekben rotavíms-fertözés elleni hatékony védettséget ki váltó, de lényeges mellékhatást nem előidéző élövkus-mennyíséget tartalmazó vakcinák kiszerelése és beadása ismert eljárásokkal történheti .Az adagonként megfelelő élővirus-mennyíség rendszerint 104 és 107 fen f’fbcns fenning unit, gécképző egység”) közötti. A jellemző vakcinaadag 1ÖS-106 ífe-1 tartalmazhat éa megbatározott időtartam alatt több adagban, pl. két hónapos intervallumban kétszer adható be. Elsősorfw a fejlődő országokban előnyős lehet azonban kettőnél több adag alkalmazása, pl. a 3 vagy 4 adagos kezelési összeállítás. Ás egyes beadások közötti időtartam. két. hónapnál rövidehb vagy hosszabb egyaránt lehet Az egy vagy több adagos kezelési összodllrhisfean az élövirtss optimális mennyisége és a beadások optimális idóporttja standard eljárásokkal, pl. a páciensek eUenanyagtíterének és egyéb válaszreakcióinak meghatározásával állapítható meg.
A találmány szerinti vakcina más megbetegedések ellesd védelem céljából egyéb megfelelő élő vírusokat, pb poliovtrusi is tartabnazhah Alternatív módon, az egyéb, szájon át történő beadásra szánt megfelelő élő vírusos vakcinák a találmány szerinti rotavüusvakeina-kéoítiuéay beadásával egy időben, de külön adagban is adagolhaiók.
Áz alábbiakban röviden ismertetők az ábrákat.
Az 1, ábrán VF4 proteint kódoló nukleotidszekvencia látható.
A 2. ábrán VP? proteint kódoló nukleotidszekvencia látható.
Az alábbiakban rövideti ismertetjük a .3. ábrás,
A Vaccioe f i 998) cikkében közölt P33 jelá anyaggal vakcinázott tizenkét, 4-6 hónapos csecsemő szérumát a P33,P38, P43 és 89-12C2 neotralizálása. szempontjából riasgáhak.
A P33, P38 és P43 esetében megállapított aeotralizáló titerérték-iaríomány st vizsgált szérumok mind«gylkében hasonló volt. Statisztikai elemzéssel nem lebetsti lényeges mértékű különbséget kimutatni a három vírus elleni neutrulizálö íhetútiékek közötti Bz nt utal, hogy a P33, P38 és P43 neutrallzációt kiváltó, szerkezeti és nem-szerkezeti opttópjalf egyformán jól felismerik a P33-mál wkelnázett csecssemök szérumában található P33 ellásd elfessassjatgok, Ez az eredmény áttételesen azt Is jelzi, hogy az említett ín vitro vhasgálatlal kissrstatoth neatrahzácíót kiváltó epítópok a P33, P38 éa P43 esetében megegyeznek.
A F89-12C2 esetében, megállapított neuttali.záeíós tltarérték-tariosnáay sjgysoakköf jelentős mértükben ebéz a P33, P3b és F43 esetében megállapítottól. Bz sasa «fel, hogy a P33, F38 és F43 neutralizációt kiváltó, szerkezeti és nem-szerkezeti ephőpjsh nem ugyanolyan mértékben ismerik fel a P33-mál vakeinázott csecsemők szérumában található P33 ellesd slfewsysgok. Ez sz eredntósy áttételesen azt Is jelzi, hogy az emhfett in •X * ·? ψ X s
X·* «χ vitro vizsgálattal kbxsnmtom nmtralizáeiőt kiváltó epitépok eltérnek a 89-12C2 valnsnln! a F33, F38 éa F43 esetében,
A 4.&-e ábrák különböző vakoinakészftotey-ktszoreléseket sassnlélminek,
Aa alábbi pélslák a találmány Illusztrálását sesslgébák,
A 26 alkalommal passzák |F26) 89-12 jelt! lom variánsok keveréke
Különböző pasfeaviétefekbéi ateré VF4 és VF? gének szefcveoálása
A 826 (elsődleges ÁGMK sejtek), a P33 (stabil AÍIMK sejtvonal), a F41 és a F43 jelű passzázsokból származó VF4 és VF? gének szekwnálását végeztük el. A kivont összes RN8-t egy lépéabea/egy eső A revem: trasmlarígejóaak vetettük síé és FGR-antpliökálmk.
A Rota Sbls és a Rots 29bis jelö iáneiadíték a teljes VF4 gént, ndg a Rota 1 és a Rom 2bls jeiő iéoeinditók & teljes VF? gént snspisiilmlmk, A XTt-noyagot köiőoteö láscindítók alkalmazásával szekvenáitek (1, Séblfet),
A F26 jelű passzázs VF4-szekv«o«íáfe (a kezdőködesatól számított 581., 788, és 882, pozícióban) 3 báAonál, VFT-szekveaelája pedig (a kezdőkodeatól számított 198,. fe)S, és 897, pozícióban) szmtőo három bázisnál tér! el a F33 jelűétől,
A P2Ő jelű passzázs VF4 és VF? génjeinek oeogákapRoR szekveesiáíbaK a mmációk helyén a kéttéfea a F33 szekvenciája volt megfigyelhető. Ez alapján a F2Ő jeiő passaázs legalább ké! variáns keverékének mkiotbmo,
A F33 jóid passzázs VH génjének megállapított szekvenciája homogénnek, VF? génoekvenetája heterogénnek ttók (2, tábÁnt),
A P33-béI származó, Véső sejteken öt alkalommal paaszált F38 agyasazoa VF4 és VF? szekvenciákul mosfelteseti,. mint a F33 (AGMK sejtvonal). Ennek megfelelően a F33 és H8 jelű gopoiéesök kSeSst an tőrétől lényeges mértékű váltóéin
1, táblázat
Az RT-F€R«hez és a szekvesáláshez alkalmazott obgnossklestildok
Név Reekveoeia Pozíció
VF? Roin l Rom Ifeb Rom 2hm Rom 7 Rota 12 Rota éö Rota 1,8 GGC TTT AAA AGA GAC AATTO CGT CGT G got tag ere ctt τγα atg tat ggt a GGT CAC ATC GAA. CAA TTC TAA TCT AAG CA A GTA CW AAA TCA ATS ATG G TÖT TGA TTT TO TGT CG A TCC AC GGT TGC TG. A. GAA TGA GAA ATT AGC TAT AGT GG CCA CTA TAG CTA ATT TCT CAT TCT CAG GAA CC -49--22., -16-18. 1014-«. 260-287. 372-394. 681-682,. 682-681.
VH Rota. $ Rota 6 TGG C'n CGC CAT TTT ΑΤΆ GAC A ATT TCG GAC CAT TTA TAA CC 2-22. 878-858,
Rota 5bb TGC ctt c ac tca ttt ata gac a 2-22.
Rotaőbts ATT TCA GAG CAT TTA TAA CCT AG 878-856,
komén GGA GTA GTA TAT GAA ACT ACA AAT AAT AG 268-296,
φφ
ΦΦΦΦ φφ φφ
Φ Φ Φ Φ *
ΦΦΦΦ Φ *
ΦΦΦΦ Φ Φ Φ Φ X Φ
Φ Φ Φ Φ Φ Φ Φ
Róla 26 CTÁ ΊΤΑ TTT GTA CTT TCA TAT ACT ACT CC 296-268,
Róla 27bis TCG AT A CAC TAT AAG AGA GCA CAA G 721-745.
Rita 28 TTC ATT AAC TTG TGC TCT CTT ATA CTG 753-727,
Robi 31 GTA TAT GTA GAC TAT TÖG GAT G 1048-1670.
Rois 32 CAT CCC AAT AGT CTA CAT ΑΊΑ C 1070-1648.
Róla 45 TGT AAC TCC GGC AAA ATG CAA CC 1205-1227.
Róla 33 CGT TCC ATT TTG CCG GAC TTA CA 1227-1205.
Róla 54 GTA AGA CAA GAT TTA GAG CCC CA 1465-1487.
Róla 55 TGG CCC TCT AAA TCT TGT CTT AC 1487-1465.
Róla 40 CTT GAT GCT GAT GAA CCA CCA TCT G 1703-1727.
Róla 39 CAG A TG CTG CTT GAT CAG CAT CAA G 1727-1703.
Róla 33 CGÁ TCA TÁT CGA ΑΓΑ TTA AAG GAT C 2008-2032.
Róla 34 CAT CCT TTA ATA TTC CAT ATG ATG G 2032-2008.
Róla 29feís ACC CTT CAC ACA ATT TAC ATT CTA C 2335-2311.
A bítód&áesó wán alkalmasod aakkatidak
N«v Ssskvéada Pozíció
VR7 Róla 41 Róla 42 AGT ATT TTA TAC TAT AGT AGA TTA TAT TAA TC AGT ATT TTA TAC TAT GGT AGA TTA TAT TAA TC 882-913, 882-013.
VP4 Róla 15 Róla 16 Róla 35 Róla 36 ATC CCC ATT ATA CTG CAT TCC TTT C ATC CCT ATT ATA CTG CAT TTC TIT C ATC CCC ATT ATA CTG CAT TTC ITT C ATC CCT ATT ATA CTG CAT TCC TTT C 807-783. 807-783. 807-783. 807-783.
A 2. téblázsibae a VR4- és VP?-he.h spaesllkos szekvescia-venációk hslyés. átló bázisokét kivastagítva jelöltök.
3. Oiblszal - 3Λ
A VF4 és VT? g&tefc mb-veBcin-veriáeíái
VF4 VF7
501 bp 167 sa 788 bp 263 aa 802 bp 268 aa 108 be 36 sa 605 bp 202 aa 897 bp 299 as
R26 (AGMK) A G/Á C/A A C/T A
R33 (AGMK) T A A . G/A T/C Á/G
R23 (VERŐ) T A Á A/G T C/A
T43IVCRO) f A Á A T A
.Magjogyzéa; A háresa, gyáíbasayíéíal al&pjAoi is szolgáló idős közti a njásoáibbm a VP7 897. pozRióisbsas a P4.3 ksvélasstoR klón esetében lapsszialiakkal ellentétben A tóyeö G lalalbató. Ez az aoiisoaav-saok'zasískRzm jzoletmn helyett inetioaia lx;épókisét eredményezi. A P33 jelt anyaggal vafeesnfest csecsemők béiswbói a χ X X X χ * X 4ί·χ X x χ'ΧΧΧ X XX X * χ
X χχ χχ XX kiválasztott Ρ43 kiónnak és a VP7 kezdökodoojától szájaitok 897, pozícióban ö-t tartalmazó klóssiak megfelelő variánsok egyaránt kánotathatók voltak,
A 3.1 táblázatban, ha egy adott beíyen két alternatív bázis szerepel, köztünk az elsó a nagyobb, míg a második a kisebb populációban előforduló bázist jelöli. A variánsok nagyobb és kisebb populációkba sorolása a szckvenálás során kapott jel erőssége alapjáé történi.
3.2
VP4 VP?
SOI bp 167 aa 788 bp 2ö3 SÍ& 802 bp 268 aa 108 bp 36 sa 605 bp 202 aa 897 bp 29$ sa
P2Ő (AÖMK) len gly/gfo. glylarg arg thr/met Ite
P33 {AÖMK) phe gin arg arg/arg mctOhr ileóuet
P38 (VERŐ) phe gin arg arg/arg met met/íle
P43 (VERŐ) phe gin arg srg met üe
A 3,2 táblázat a variánsok közötti nukleotldkSiÖnbségek eredményeként kialakuló anüaosttvváitozásokat mutatja be.
4, táblázat
VP4 (788, - 802. pozíciók) VP? (897. pozíció)
ö-G A-A A-ö G-A A Ö
Próbák Rota 15 Róla 16 Róla 35 Rom 36 Robi 41 Rota 42
Passzázsok
P26 - «·· •r ·· «V nv
P33 - 4' - - 4-4- 4-
P38 - 4' - - ···
P43 ·· - - 4- -
“Siot-bloí lübrídizáeió”
A P26-os ás a P33-as Aö'MK-sejtekes végzett passzázsok közötti populációbeli változásokat ”siot-biot” hibridizációval is igazoltok. Az Rl'-PCR-rd előállítón: VF4 és VP7 gén&sgjrtenseket a variánsokra specifikus obgonökieotid próbákkal hibridizáituk (3,1 és 3.2 táblázat). A Rota 16-bü, Rota 3S-tul és Rota 36-Ps.l hibridizáló, Rota 15-tel viszont nem hibridizídő P26-tsi szemben a P33 jelzésű anyag VP4 ECR-tregmcnse a 788-802. pozíciók között csapán a Rota íó-taí hibridizált, a Rota IS-lel, Rota 35-iel vagy .Rota 3lótal nem. Mindezek alapján a F2ő-bsn legalább bárom variáns .található (4. táblázat);
A P33 jelzésű anyag VP? PCE.-fmgsnense a 897. pozíciónál hihndízált a Rota 41-gye.i ás a Rota 42-veí. Mindezek alapján a P33-baa legalább két variáns található.
2. példa .A P43-as klón izolálása és jellemzése »♦**
A P33 összetevők homogén viruspopuláeiőként történő izolálása érdekében a P33/AGMK~t bárom slkalommal Vető sejteken végpont-hígííodnk, majd a kapod vírussal Verő sejteket fertőztünk.
A pozitív «regeket hagyományos módos, kés szempont alapján választottak ki: a legnagyobb száma gócot tartalmazó üreget és a legtöbb pozitív öreget tartalmazó tálcát szelektáltuk. A 9ő üregű mikrotiter tálcákon végzert három végidgíiásos passzáiáfi kővetően I Ö pozitív üreg tartalmát sokszoroztuk meg Verő sejteken, majd meghatároztak a termelt vkusmenayiséget.
A termelt vírasmennyiség alapján három klóm passzáltunk gyártmány tétel elöáliiiásásg, Az alkalmazott poiÜdotólis ellenanyagok hasonló eredménnyel ismerték lei a tórom kiónt, valamint a P33-at. A kiónok homogenitását síel-blot” hibridizációval értékeltük, .Az egyes kiónok kiválasztása a termelt vfrasmennyiség és a megállapítod szekvencia alapján történt.
A kiválasztott klánból Verő sejteken egymást követő passzázsokkal végzett sokszorozási! először törzsanyagot (m&ster seed), maid munkaanyagot (“working seed), végül gyártmánytételeket állítottak. elő.
A kiválasztott klón genetikai jellemezését a PCR-amplifikált VP4 és VP? szekvenáiásával (azonosítás), valamint specifikus slot-blot tóbridizálásávai (homogenitás-vizsgálat) több passzálás! állapotban is elvégeztük. A P43 jelzésű anyagbeli VP4 és VP? gének szekvenciája megegyezik a Pöl esetében megállapítottal (1. és 2. ábra),
A kiválasztott klórt homogenitását & P2é/elsödíege§ AOMK szekvenáiásával azonosított variánsok VP4 és/vagy VP? régióinak rttóleodd-váhozataít megkSíőnböztetö oíigoutóleotid próbákkal végzett szelektív hibridrzátással értékeltük (4. táblásat).
A VP4-fragmens hihridizált a Róla 16-lal, nem hsbridisalt viszont a Rota I 5-tel, a Rota 35-tel vagy a Rota 3ő-tal.
Á VP?-fragmens híferídízáli a Rota 41 -gyei, nem hihridizált viszont a Rota 42-vel.
A Rrtrti eredmények a P43 populáció homogenitását igazolták.
3< példa
A potenciális vírusszennyeződés eltávolítása
Az AGME-rt tenyésztett P33-hoz 1 óra időtartamra 2Ű% végkoncentrációban étert adtató. Az étert N2nel 35 percen át. végzett áömborékoltatássaí távolítottak el. Az említett eljárás nem volt hatással a P33 jelzésű aayag literére.
Élő, adenaált vakcina kiszerelése
A fentiekben Ismertetett gyártmánytételek csecsemőknek szájon át történő beadásra szánt kiszerelését a következő eljárással állítottuk elő,
1, tíofiiizált vírus
A virusadsgokelöáífitására standard eljárásokat alkahnaztmsk, A fagyasztott, dsztttött vírust kioivusztottűk, majd megfelelő összetételű tenyésztöközeggel, jelen esetben Dalbeceo-féie módosítod Hagle lápkőzegge! a kívánt standard vhasktmceotráció, esetünkben Kló,2 ffiásul eléréséig hígítottak. Az így kapod vírust liofilízáctós stahihzálószetrei (4% szacharóz, fefe dexbáu, $% szerbit és 4% amiaosav) a kívánt vírastiter, esetünkben 105,6 fib/adag eléréséig tovább bigiíoűuk. A stabilizált feruskéssiimésy 0,5 ml-es adagiad steril körülmények között. 3 ml-es fiolákba töltöttek. A fiolákat ezután gumidugóval részben lezártuk, a mintákat vá»*««( tea alatt fagyasztva szárítottuk, majd a fiola teljes lezárást követően a dugó rögzítése érdekében alumíniumkupakkal körbejártuk a fiola tetejét
A felhasználás előtt a vírust a következő saviekőtő szerek egyikével állítjuk helyre.
(»s Citrátos helyreáliitószer
A nátríum-cátrátot vízben oldottuk, szűréssel sterilizáltak, majd steril körülmények között 544 mg Na3estrét· 2H2Ö-Í tartalmazó 1,5 ml-es adagokban kelyreáilítoszer-tároló tartályokba adagoltuk. A helyreállítöszertároló tartályok többek között 3 ml-es fiolák, 4 ml-es fiolák, 2 ml-es fecskendők vagy szájon át történő beadásra szánt puha műanyag kapszulák tehernek. A steril összetevők sterilitásának megőrzése alternatívájaként a már megtöltött tárolótartály is autoklávozhatö.
(b) A1(0.H)3os helyreáliitószer
Steril alnmimum-hidroxid szuszpenziót {Mylanta™} steril vízben aszeptikus körülmények között hígítottunk és 48 mg Al(0H)3-at tartalmazó 2 ml-es adagokban belyreáilítószer-tároió tartályokba (pl. 2 mi-es fecskendőkbe vagy szájon át történő beadásra szánt puha műanyag kapszulákba) juttattuk. A steril összetevők, steril körülmények közötti használatának alternatívájaként az (előnyösen hígított) alumínt«tn-hidrox.id szuszpenzió gamma-besugárzása is alkalmazható.
.A szuszpenzió kiülepedésének megakadályozására standard összetevőket alkalmazunk. Ilyenek többek közölt a magnézium-sztearát, a karhoximetil-cellulóz, a hidmxiprópil-metilcellulóz, a mikrokristályos cellulóz es a szilikon poiisnerek. A készítményben élelmiszerekben általában igénybe vett standard bákteriosztatikus anyagok, pl. butilparaben, propilparaben, valamint ízesítőszerek is alkalmazhatók.
2. Al(0H)3-dal Iiofílizáit folyékony víntstószetelés
A vírusadagok előállítására standard eljárásokat alkalmaztunk. A fagyasztott, tisztított vírust kiolvasztottűk, majd megfelelő összetételű tenyésztőközeggel, jelen esetben Dulbeeco-féle módosított fiagle tápfcőzeggel a kívánt standatd vímskoncentéáciö, esetünkben 106.2 ffu/ml eléréséig hígítottuk. Az így kapott vírushoz 48 tng/adag végső mennyiségben alumíntum-hidroxid szuszpenziót adtunk, majd liofilízáciös stabilizálószetrel (4% szacharóz, §% dextrán, 6% szorbit és 4% aminosav) a kívánt vírustiter, esetünkben 1 ÖS,ő fifu/adag eléréséig tovább hígítottuk. A stabilizált víruskészísmény 0,5 mi-es adagjai; steril körülmények között 3 ml-es fiolákba töltöttük, A liofilízálást és a fiolák lezárási, az 1. részben ismertetettek szerint végeztük,
3. Al(OH)3-dal liofiiizált víruski szerelés hólyagcsomagolásban
A'vlrusadagok előállítására standard eljárásokat alkalmaztunk, A fagyasztott, tisztított vírust kiolvasztottuk, majd megfelelő összetételű tenyésztőközeggel, jelen esetben Dulbeeco-féle módosított Eagte tápközeggsl a kívánt standard víruskoneentráció, esetünkben 106,2 ffu/ml eléréséig hígítottuk. Az így kapott vírushoz 48 tng/adag végső mennyiségben alumíntum-hidroxid szuszpenziót adtunk, majd a viruskészítményt iioftltzációs sáréilizálószetrei (ami leltei szacharóz, dextrán, 4% aminosav, zselatin, növényt pepton vagy xantán) a kívánt, 105,6 ffu/adag vírustiter eléréséig tovább hígítottuk, A víruskészísmény 0,5 mi-es adagjait steril körülmények között a hólyagcsotnagolás üregeibe töltöttük. A készítményt liofilizáltuk, majd a hólyagcsomagolás üregeit hőkezeléssel lezártak.
Az aíuminium-hidroxid szuszpenzió kiülepedésének megakadályozására adott esetben standard Összetevők alkalmazhatók, ilyenek többek között a magnéziutn-sztearás, a kasboximetsl-cellulóz, a hidroxípropilmetilceliuióz, a mikrokristályos cellulóz és a szilikon polimerek. A készítmény ízesítőszereket Is tartalmazhat.
5, példa
Különböző kész.fonények rtgsvirss-aíetsrtyiségétsek titráiása
5.1: A i&któz és szacharóz alapú kiszerelések összehasonlítása * * Φ Φ *X φ Φ Φ X X $ χ Φ X * φ φ φ φ φ *
ΦΧΦΦ* « Φ φφ Φ φ ,φ* φφ φ*
Tételsorszám Kiszerelés összetétele tiofiílzálás előtti vírastiter Liofiiizáíást és egy iákig 37:'C-<?h tartást kővető vfrvstíier
9SG06/Ö1 laktóz: 2%; áeatrán; 4%; szerbit: 3%; amínosavak: 259 105,22 104,6?
94006/03 szacharóz: 2%; dexttán: 4%; szerbit: 3%; amínosavak: 2% 105,28 104,02
A P43 jelű rotavirus kiszerelését a fbntí táblázat sdstafosk megfelelően szacharózzal vagy laktózzal végeztük, A liofhfoáiás előtti vínisfiter a készre kiszerelt (szacharózt, dextránt, szorbitot és amieesavakat tartalmazó) folyadékban a iiofálzálási lépést megelőzően mérhető vírustiteri jelenti.
Jó eredménynek számít, ha a líofiilzálás és az “egy hétig 3?°C-on tartás* (gyorsított sísbühssvizsgáiat) <0,5 ing csökkenéssel jár.
A vimstítrSlás pontossága ± 0,2 fog.
A fenti eretiméayek alapját} a iakfoz helyett szacharóz alkalmazható,
5,2; Az argháa, valamint a szerbit makidat történő helyettesítésének hatása
Tételsorszám Kiszerelés összetétele Licfiüzálást kővető ”0 idópontbeli virustiter Liofiiizáíást és egy hétig 37®C-os tartást kővető virustiter
OSI.iö.Oi laktóz: 269: dextrán: 489; szerbit 386; anánosavak: 2% 104,8 104,8
931.16/02 laktóz: 286; dexhánt 486; szerbit 389; ammoaavak: 259; argkáa: 385 104,8 104,9
98Π6/03 laktóz: 23«; áekítán: 4%; malát: 3%; anánmavak; 286; argínin 386 104,7 Í05
* $ * * * ** * * < x * 4 * » s\ »ψ ❖« *·«
A fesd sttóttósyak alapján az arginia teaztetóa (ate igatótet tótói a wus tóblitete a Istóslitóite sóstó vafeste tem^ste a gymw wm któitetátetók kOtómtótótetóte) megtel & virsisskart,
A saotót tótógssssasr asgyasátótóas stókkató a Iktóltólí tes'iw; Ovagsstete? átmeneti hltótetóktetó C'giasa tetette; sazs^aztes'tó}. Bz a tótó s satóte mltiitó tettek Isteyaiteitótes? a vtóteste itóstótes ítólte kskOstóttóhtós
3,3: Kötetek; tetetettek kltestótótó teste a tetetette sgstetósk, Bsigy a tótóstósystó tósssas tóaatetea Utót.
Ttótestestóra Któertetó Ossatókte ItefÖBtótó testó tessssitet Iteftesstót tó sgy hétig 37Ό m tartást követé vtetóter
oocti/oi Itetóz; 2%; tetete; 453; teaksi; 354; sssxstewvak: 354 105,24 105,0?
5501/02 saactótea: 355; testes: 454; stóte 354; «uacw^: 354 405,09 104,32
öocí 1/03 testes: 454; stete 354; anwoaatóG 354 1 04,39 405,00
Tétebomém Ktestótó tesztetek; ItelB tótól ktetóO '5Γ tó^sastek tetetette· ktekltótóí te agy hétig 3?te> tel tartói kstetó vtóteöst
95C17/0? aztetóss4z; 354; tetetó; 454; sóstói; 354; eraiaosavak; 354 105,40 105,4?
99C3.7/02 saactósöa; 254; tetette: 454; szodte 1,554; stósasatóz 254 Ϊ 05,30 104,93
5907/03 tetósasöz; 454; testes: 954; jstówavtó; 254 10.5,31 105,24
99CI7/Ö4 szsetette; 354; tetette; 454; mklt: 354; sszsBssssssvssk: 354 i.04,43 104,45
g « φ * ¥ « « ** * * χ >' * * * * í Sí í< Φ*
99C17/05 szacharóz: 2%; dexöán: 4%; mattit: 1,5%; a-ádnosav&k: 2% 104,39 104,40
99C17/06 szacharóz: 2%; dexttán: 4%; szorb.lt: 3% 105,44 104,07
99C17/07 szacharóz: 2%; dextrán: 4%; szerbit 1,5% 105,11 104,89
5.4; Rot&vhus ás Ál(OH}3 savléfcötó kapcsolata
Rotaviras Al(0H)3 1120 Érintkezési idő szoba- hőmérsékleten Ceatrííbgáíás Felülted víxustitere (OWrol) Üledék vitesd tere (fed/rnl)
105,6 ifu/ml 48 mg / 0,240 ml 0,76 mi 30 pere 8000/pero, 10 perc 105,66
105,6 ffo/ml 0,48 mg/ 0,240 ml 0,76 ml 30 pete SOÖÖ/pere, 10 pere 104,41
105,6 ffe/ml 1 ml 30 perc 8000/perc, 10 perc 105,68
Ikifdis&k korongban 12 mg / 0,120 ml 138 íjvi 30 perc gÖÖÖ/pere, 10 perc kimutatási határ alatt 104,7
Az Al(OH)3-ot saviekötőként alkalmaztuk. A lentiek alapján a rotavirus az- oldhatatlan szeméten sóhoz kapcsolódott, mível az Al(OH}3-dal együtt centrifirgáíódott (afeihiteó vírusaktivitása csökkent).
5.5: Az Ai(0H)3 savlekötő sátriam-citrálban történd oldása a vlrnsOlrslás előtt
Vírusminta Oldás Körülmények Vlnsstit-er (ibs/mi)
99B10/06 lioülizáiás előtti folyékony kteeerelás; 105,43 1,5 mi Na3~ci»át 24 óm szobahóptéteákfetes 10531
991310/06 Ifeislfeáit; 105,43 1,5 nd Na3-citrár. 24 óta -szobahőmérsékleten 104,53
Ha a totnvírus Ai(OB)3-hoz kapcsolódott, a teljes készítmény lleillizálbátó (ideértve az AL(öO)3-ot. is), A tiofilizálást követően a reiavlms kinyerhető az AL(Ötí)3 nisírkan-dtráiban tösténö oldásával. B lépés hatására a rotsvlm nem károsodik, aktivitását megőrzi.
5.6: A Msvltns feríOzoképessóge az AUGRjS-kapssoIsí sstegszüntelése mán
A vírus felszabadulása (a hordozóanyag oldódásával) ia vivő nagy valósstoöséggel bekövetkezik. Az atamküöm-hidrőxíd pH «= 6 alatt teljes mértékben ©lábaié lesz, ennek hatására a rotavlras a gyomorban szabaddá válik.
φφ
Φ Φ Λ tf φφ * * «φ?» * ·$ * φ * * tf φφ tf# φφ
ΑΙ(ΟΗ)3 + 3 Η*---> ΑΙΉ·* (vfeofeéktmy) · 3 Η2Ο
A gyomorban az ARh- Ionok «cm szívtklnak fel. (Powell, J. X, jngdstoslisngh, A. és Thompson, R. Ρ. H.t The reguládon of mineral adsorptlon iu the gasírolnlerönal érsek”, Pmeeedlsgs of the '.Nwíritsoti Society SS, 147 (1999)1,
A bélben a pH «övctedésévei ddhatadan sthsminíumsók (AI(ÖH)3 vagy A1PO4] csapódnak kt, amelyek természetes ikon távoznak,
Nem Ismert, hogy az így képzöíidtt .41(011)3 (vagy AIP04) csapadék képes-e isméi: összekapcsolódni a szabad roíavírussal. Ez felveti a® Al(011}3 -roíavinss kapcsolat fertőzőképességónek kérdését.
A rotaviras az Al(OH}3-rotavirus kapcsolatból másképpen is felszabadulhat. A Iizin példád. -zavarja ts vírus AÍ(OH)3-hoz törtétk) adszorpcióját.
Egyéb anionok, mint példád a borát, a szulfát, a karbonát és a foszfát igazoltan specifikusan adszorbeálódnak az ahunimnm-iudtoxidhoz, így segáségllkkel az AL(GH)3-rotavirus kapcsolatban a rotavirus (az adszorpciós helyhez történő kompetíeió által) elméletileg helyettesíthető.
DRVC0Ö3A46
412 mg AI(ÖH}3 0,1.20 ml-bes
465 mg lírán 1,340 tn? H2O •r pete sxobahőméméklcíen •r ceatrifegákis
8öÖÖ/perc fordulat lö percig üledék felülüszó
4öltiás citráfeaa kimutatási 3,§ hatás Matt
A fentieknek megfelelően a rotavirus felszabadítható a rofev4ras-AI(OH)3· kapcsolatból, és az így felszabadított rotaviras megőrzi aktivitását.
* * «
Φ Χ « * * * φ fc φ *χ· * Φ Φ φ. Φ χ * Φ-ί XX fcfc
Áss említett fetabsdMs eléfhetó s® Al(OBp (gyemmtórnvval vegy iő vites 443-4ö4it5sl töstéső) feloldásával, vagy á sötevfeís bázikus aminosaml (imáméi) Wá43 kelyeppskésévsl.
3.7: Az Al(0H)3-nmviw kegcsoist fwtoöképess^s
Egy &4sg koEEzsk íotsvimi vtoel keiyveéiktekssík és kél teszre esztommk. Az első, ieimwiikssk tekmteíi adaghoz- tevébbi sás» « adbmk. A második sáegbcz 0,240 eá vxsbcs: saos^mdált 24 mg Al(0H)3ot aáamk (pmk&ákai vkastitrálásak).
DRVC003A4á ·!
l,5mlH2Ö
A
0,750 ml v
A,
A
0,750 s4 'Ϊ'
0,240 ml M2O mg A1AW 0,240 ml»bea óm
I óm
5,55 §32
Al(ÖB)3 jelenlétébe» a .tíAsvlm akdv és s mfemróammíáfesm képest magasabb s vbwipAbös érték,
A kibbdetet s. iksóbsák sásg kettéosztása oélkól és 12 mg vagy 24 mg A1(OH>3 hozzáadásával megismételtek.
Ebben &s ese&ea s mfemmtemiaife eitféi-bíkartxAás pafeml áMkePnk helyre. A vimtte AÍ(0H>3 jelesiéíébes isméé magasabtesk bízoayolt
«VC003A4Ó DRVCÖ03A4Ó DRVC003A45
-í· SÍ- -;·
1,5 ml WL pskfe t2mgÁl<ÖH}3Ö,12Ümh 24 mg Ai(0H)3 0,24
bes ben
s- 4-
U3Ö ml H20 U«ŐmiH20
534 424 4,05
532 533 426
Amim a feml ’Aidóbss látható, a totavfew sz 31(03)3 tésaecskékhaa kapcsolódik, mivel cwdfegaiAs-ssi eksévíkámíA. A DRVCW3A40 IktóEzáA ktamdésá rsMáAms (sPtebsAA 2W destrtas 454 ssoAkb 3%, ambwavsfc 2%).
XX fc fcfcfcX
DRVCÖ03A46 DRVCÖÖ3A46
·; -r
12 mg ,Al(OH}3 0,120 mi-ben 24 mg Ai(OH}3 0,240 ml-ben
-* •r
1,380 wH-120 1,260 ml H2O
t·
ceatritögalás centriiugálás
SOÖO/pezc lő percig 8<KX)/pem 10 perc lg
>/ X MX R
üledék felülüszó üledék fclüíúszó
4' -r
1,5 mi SDSÁA 1,5 mlSDSAA
5,78 < 1,44 S, 02 < i,44
5,3ö <1,44 6,11 < í ,44
SDSA.A 2% szukróz, 4% desttátr, 3% szerbit, 2% aminosav,
A felüiteé vírustiírálásámk eredménye alapján a rotaviros adsxorbaál&sáhoa kis mennyiségű AI(ÖH)3ra volt szükség (egy hol slízáh kezdőadag, 5,7 lóg}.
AI(OH}3 Adszorpciód idő Feíatószó liter
12 mg szobahőmérsékleten i őrs 2,7
24 mg szohthőmérsékfeíen i őrá 3,4
42 mg ssobahŐHíérséklöfen 1 óra 3,4
72 mg szobahőmérsékleten 1 óra 2,0
96 mg szotehőmérsékfeten 1 óra kimutatási határ alatt
12 mg egy éjszakán át 2,7
24 mg egy éjszakán át kimutatási határ alatt
42 mg egy éjszakán ál 2,5
12 mg azoknál kimutatási határ alatt
24 mg azotstal . 2,0
48· mg azonnal kiamtatásj határ alatt
A j’öAíWös A.i(Ö.H)3'ho?. történő töAzotpcsőjáhúz rövid idő szükséges.
X X· φ X φφ 'fe
Bgy adag feíifelh ratavfirnst. 24 mg A1(OH)3 jefelfetas helymálöloiteak, majd Ö, 15, 60 perc és 24 óm elteltével cowllhgáfeak, Az Üledéket i'fefe’) a feisifelés slbp fiOSAA-baa mszeszgesdálfcrk.
idd Öfeék feülífeő
Ö pcf'v 5,26 fe?
15 gém 5,34 < 1,44
60 gém 53b < 1,44
24 óm 6,13 < 044
A: C&CO3 zavlekötőként történő atalmáxása
Az Mm vatónabeis alkalmazásának «feddése éfeketes «z AL(ÖH)3 savfebfe egy másik oldhatatlan zxemsOen sóval, kfefemfefefefe <CaOÖ3) helyedastetök.
A QdXö «fefeo az AUÖél)feál omgOgfelfehea fefeó jetoségeket tapasztatok: a mtavfces a szerveden sóhoz kspmokhfe a kapcsolódás megőrzi a retavims aktivitását;
a smwtleo b&s;s savvsl tfeéoő oldásafe a mtavhus Mszahsáhhaté a kapesalafel; a savkdtöté és a saiavfes egylfesos heffifelhaíA A CaCO3 ~ fesvteí kapcsolat
Az alsó vizsgálatban liofilizáit máavfead (fessfer 5,7} vizes Cs€O3 szaszgenzsőhen (50 mg 1,5 asl· ben) kelyfeilfeimk sfed eeatófiigáiték és a fefefe vinfetót őstasevehmSk az Üledékével,
ÜRYCTOAdO sDRVO03A4Ő mg CsCö3 1,5 mi vitám é mg CsCO3 1,5 ml vízben -s cmmiófelsls SOOÖ/psse 10 percig ««mdmgálés SÖÖ6?pem 10 gémig
üledék lelífefe
-r
UmismAA
533 4,40 ifeíék folülfetó
V
UdODSAA
5,38 433
A fedek m amfoak, hogy a mmfess több mint fefe CsGÖSfez fesmolodfe
A kegesoiéfet vkw oséiéima íz elvégezhető volt a feéfe és ss ereded vfesmomsyiség kinyerése.
A feCfe használata fekőís esete vfemsyfes a fafefel kimé magasabb sfefemmfe feafesb tank eseg>
Φ ·> β » Α
DRVC0Ö3A4Ó l,5mlH2O
DRVC003A46
1,5 tni W, L, puffer
4· centrifugálás 8000/perc lö percig
üledék:
felüfúszó
4.99
5,03
5,35
A kapcsolódó CaCO3 · rotavirus menny iség
Liofilizált rota vírust 1,5 ml vízben 10 mg, 50 tng és 100 tag CaCO3-ot tartalmazó szuszpenzióval helyreállítottunk, majd centrifugáltunk és a féíiiíúszó vírustiterét összehasonlítottuk az üledékével.
CaCO3 azonnali cenlrífugálás 1 óra - eenttifugáíás
üledék felülúszó üledék félülúszó
100 mg 4,57 3,01 4,79 3.09
50 mg 4,17 4.15 4,22 3,86
i 0 mg 3.I ? 4,77 3,87 4,87
A fentiek alapján a CaCO3 mennyiségének növelésével egyre több vírus kapcsolódik hozzá és csökken a íetttluszöbao kimutatható vtrustnennyiség.. A teljes adag ugyanakkor netn volt visszanyerhető (a korábbiakhoz hasonlóan összesen legalább 5,3 vagy akár 5,8 visszanyerésére számítottunk - Id. fentebb).
A rotavirus CaCOS-védehue Baby Rossett••R.ice sav lekötő bírálás során
Tíz adag liofilizált rotavirus (DRVC0Ö3A4Ő) és 50 mg CaCO3 felhasználásával kétféle Baby RossettRice bírálást végeztünk el.
A klasszikus ''Rosett-Rice” titrálásban a sav lekötő anyagot rotavirussal keverjük, majd ebbe a közegbe HCl-t öntünk.
A fordított Baby Rossett-Rice tstrálás során a savlskőtó anyagot csepegtetjük a HCI-oldatba (ahogy a?, in vívó történik).
Klasszikus Baby Rossett-Rice tstrálás
Liofilizált rotavirus tárolása Buffer Elméleti vírustiter Mért vírustiter
4A3 60 mg CaCO3 5,3 4,6
-80%' 60 rag CaCO3 5,3 4,6
4°C 24 mg Al(Off}3 5,4 <2,9
-80% 24 mg A1(OH}3 54 <2,9
φ φ φ φ φ
Φ' Φ Φ Φ V Φ φφφφ φ φφ φ φ φ φ φφ φφ φ·φ
Fordított Bsby Rowtt-Sice” bírálás
4;C 69 mg CsCC3 53 4,6
-8ÖeC 60 mg CaCO3 5,3 4,6
•AC 24 mg A1(OH}3 5,4 <2,9
-WC 24tagAi{OH)3 5,4 <2,9
Α fenti ia vitro kísérlet tanúsága szériát a CaCO3 a roiavím kb, 2086-át megvédi a sósav hatásától, míg eme az aitanimtim-hidroxid nem képes.
5,9: Rnwrints MoShaáiáaa CaCO3 savlekdlb jefemlMbe;»
Tételsorszám Összetétel LloShzálást kévető ő idépoa&cli vhöstuer Liofiíizálási és «gy hétig 37*0-»» tartást kővető vsrastíter
69R0WÍ szacharóz; 286; őeztráa: 466; szerbit 3%; aminosávak: 296: CaCÖ3: 59 mg 105,28 195,19
99R08/02 szacharóz: 2%; áoxttáa: 4%; szerbit 386; zabaossvsk: 2%; CaCO3; 69 mg 165,16 105,15
0ÖC24/91 szacharóz; 2%; farrá»: 486; szerbit 3%; ami sósavak: 28-6; CaCG3: 69 mg; sántán: 9,3% 105,97 164,69
09C24/95 szacharóz; 256; fatmm 4%; szerbit: 356: ssbswvak: 234; CzCÖT: 69 mg; zmddö: 6,386 1053)? 104,85
««5 szsökacbz; 296; faltán; 434; azotblt: 384; aminnsávak; 284; 163,93 194,61
* χχ χ * * « χ X χ X
XXXX X χχ χ χ χ
X X* X* Xs*
CsCGs; ÓÖ mg; xaatfe 0,2584
00EÖV30 szscfearóz: 274; sfedfa 484; szerbit: 374; aasaosavak: 284; CaC03: 00 mg; xaaífc 0,30¾ 105,01 104,27
0002006 szacharóz; 2%; dsatrte 474; awróít; 3%; anwosawk: 234;. GtoX>3: ód reg: keményítő: 274 M4.:80 104,70
A OsnOek s reísvhns és savíeköíö (CeCO3) egy idejd, egyazea iúdóbse ιδηΗ liotlíizáiására vonatkoznak. A CCÖ3 tóbós közbeni kiOfegeáéresek megakadályozása érdekében viszkózus anyagok hozzáadására v® arókség. ilyen viszkózus anyagok pl, a xentángomt és a keményítő, A reisvhns még zautángami és keményítő jelenlétében is fflc$tsg& súbvilússL
5, to: A szójhms gysuuau szétüsd liotoiróú tabletták
A kővetkező kissuudásek az ám Öyosó koncepciót, vagyán a Ikdi&áit korong szájbeb gyco oldódását tbnuwiAdják,
Tételsorszám Kiszerelés összetétele thrólirólás sdöhl virnstíter UeBhzáiást. és egy hóéig 37*C- on tartánt kóvetö vítwthcr
OOBIOAlé szacharóz: 434; nátrimnglatamái; 484; A1<GE)3:4§ mg ,tos?n 104,53
OOCH/to midé: 384; AI.(OH)3:42 mg hidmzípmpíl- metilcellalóz: 184 1043$ 103,70
TÓlétossssáré Készítmény Osszstúieie bkdtosájMildivmo'r íddpeulbek vtatder Irétoizólúsi és sgy hóiig 3'Γ€-· on. tereké koretó viresdire
OOC20O3 sreuhetoz: 234; dttlrám 434; szmMk 384; mrdrnwvA 274; CoCO3; 00 mg; remiére 0,374 105,02 104,84
Φ * # φ X
Φ X ΦΦ * φ φφφφ Φ Φ * χ Φ φ
Φ ΦΧ ΦΦ ΦΦ «φφφ φφφφ
Ö0C24/Ö6 szacharóz: 2·%; dextsán; 4%; szerbit: 3%; aminosavak: .2%; CsCO3: ŐO mg: xantán: 0 104,Ső 104,56
ŐÖF2Ő/11 _______________________________ szacharóz: 1%; destrám 2%; szórtat: 1,5%; annnossvak: 1%; ü«CÖ3: 60 mg; keményítő: 2% 104,70 104,40
A lyoe koncepcióban (a kofiimáli korong gyors oldódtóaak megtartása mellett) xsntán éa ketnényltó is sikelmezhatő,
6, példa
Kalchim-kafoonüt savlekötő alkalmazása a nstavtrosvakcina-készltményben
Ra á rutsvirss mellett saviekötökátsf vizes CaCO3 szus^penztói alkalmazunk, gondot jelent a vízbe juttatott katómn-kafoooát por megközelítőleg 2,6-os sűrűségének ás 3Ö g«u-es átlagos részecskeméretének köszönhető gyors kiölepedás,
A kitlfopsdés a kővetkező módokon lassítható: a környező anyag sűrűségének tőkozáss, a környező anyag viszkozitásának fokozása, a sésaeeskemere: csökkentese, a fészeeskék távol tartása egymástól. ő.ít A környező anyag sűrűségének fokozása
Ha a (fecskendőbe szívod) vizes CaCO3 szuszpenziőt a (2% szacharózt, 4% dextránt, 3% szorbítot és 2. % aminosavai: tartalmazó) lioiálizált korongra juttatjuk, a környező anyag sűrűsége nő ugyan, do a C&CÖ3 kíőlepedéséoek ideje séta különbözik lényeges ssertékben a vizes CaCO3 «zasxpeoziőétél.
6,2; A környező anyag viszkozitásának növelése
Fszeadoplasziíkusnak nevezzük s felrásott állapotához képest állás közben magasabb viszkozitással rendelkező oldatot.
Ilyen ti'pnsu, gyaloőbfess alkalmazott kőtésstyagok pl. a kővetkezők..
Természetes polimerek;
guutiatáblks m, aórsgeuiufozue, agsz-agar, aigiiékek, pekőttek.
FéteóUéákízs psslísserek:
fc fcfc fcfcfcX fc fc fcfc fcfcfc fc fc w ·?·\ .v. * * fcfc fc fc
A.V> fcfc* fcfc fcfc $ φ fc Xfc fcfc fcfc karboxinmlil-eclfefez (Tylosss Cikk mettteelfelőz (Meásocels Ate Vtow MC&, Tyloss MRte és Μ8Φ), hidroxipíOpii-eeUnlóz (Ktöstöstö), bidroxípn^tt-metiteöulőx- (Methooels E® és &>, Vireottass MFHOt).
Az említett pazemíoplssztlkaa köttömysgoksk éltsléhss; tixettóp ágensekkel együtt alkalmazzak.
Alacsony folyási teijesstnteayü pszeodoplasztikns kötőanyagok
Megfelelő koncentrációban ezek a polimerek olyan szerkezeti elrendeződést alakítanak ki a folyadékban, amely asgy viszkozitás^» állás során alacsony folyási íeijeslhttéoyő oldatot eredményez, E rendszer csak bizonyos mértékű energlakőzlés eredményeként vésik folyékonnyá tö átviheíövé, külső energia (ösvszrteés) szükséges ahhoz, hogy ideiglenesen nmgszűnjőn a folyadék szerkezeti elrendeződése és folyékrmy oldatot kafomte
Ilyen polimerek pl. a CarhepoláMk tö a wdángyanta.
Tixetrép kötőanyagok
A tixotróp kötőanyagé: süss köztes gél szerkezetet vesznek fog felráxva pedig folyékony oldatot alkotnak
Fixotróp kötőanyagok pl. a Veegom^ (magnézsumOlnmímmn-szllikát) és az Avieel ROfo (kb. 83% mikrokristályos eelhdőzl és 11% ksrboximrtil-oeiiaíőz-náoinmte tartalmaz), tett A réwseskméret csökkentése
A CsCOS tösxeoskeméreténdc csökkenése a vsgfotöt saviekötö kapacitásának csöktetestt eredményezte. ö,4; A rés&eenkék téved tartása egymástól
E« pl. azzal érhető el, ba össsassspöátöte oíoggáilása. teljéből a CaCX>3 ttteccskék közé azoknál kisebb (kb. 1 pm-as) oldhatatlan részecskékkel rendelkező Veegnmik vagy Avfotöfo anyagot juttatnak.
7, példa
Tszteikk Mák tttö
A követéssé teüáé a tsrttek különféle lehetséges ktabádtázi mó^aáa matatnak he példákét
7,1; CaC'OÖ a Itesteadütea
Fiolában lévő tetetett rotaviras alkalmazása esette s savlekőtő sttysgstt s helyreállító folyadékot tartalmazó Itesksstteösst is elhelyezhetjük (4a ébre),
A fecskendő tartalma; 1,3 ml (ÓÖ mgtel) CaCOS.
A fiola tartalma: rotavires.
tehén s termékfennában a CaCö3 kiölepedését aemá a töltés, teem a teretek teljes elferthalőságí időtartama (legalább 2 év) alatt szabályozni teli.
7,3; Ca€03 a tefoltött anyagot tstealmszö teláhaa
A focskcodö tartalma; 1,3 mi vtö,
A Béla tartalma: EoStfeált retövteíg (te mg.) CaCO3 * xanfen (4b ábra).
7,3; Uottitetea telysgtwmagalásbsn tetess ss; esefeen a rotavtönsí, a CaCO3-ot tö a xantángamií. a bélyagoaomssgolssteov cgySttesen Hőfok ztejsk <4.c ötötök * φ φ φ » φ * φφ φ φ φφφφ φ φ χ χ φ φ * φφ φφ φφ φφφφ φφφ»
A példa
Különböző romvírus-törzsek üoíilizalása
Tételsor- szám Vírnstörxs Készítmény összetétele íáoftltzáíást követé 0“ idöpombeli virasbter Liofilízálást és egy hétig 37°C- on tartást követő vírust! tér
00F2é/Öl G1 S8 tiszt no, öl PRO/Ö232 szacharóz: 2%; dextrán; 4%; szorbit: 3%; aminosavak: 2% ÍÓ4,ó 104,7
0ŐF2Ö/02 G2(DS4) szacharóz: 2%; dextrán: 4%; szorbit; '3%; anriaosavak; 2% 104,4 104,4
Ö0P26/03 Ö3(P) szacharóz: 2%; dextrán: 4%; szorbit: 3%; aminosavak: 2% 104,6 104,5
00F26/04 G4(VA-7ö) szacharóz: 2%; dexnám 4%; szorbit: 3%; mnisosttvsk: 2% ÍÖ4> 104,8
00F26/O5 G9(Wíől) szacharóz: 2%; dexttttn: 4%; szorbit; 3%; aminosavak: 2% 104,6 104,5
A DS-1, a P és a VÁ7Ö jelű vírttstömek G2, G3 valamint G4 szerotípusé emberi rotévírua refereneiatorzsek [,:Fields”, 2, kiad., p, 1361«, kiad,: Rávett Press (1990)].
Ebben a kísérletben a nnavírus-törzsekei liofiiizálink,
Mindegyik esetben unná a Itofiiizálás, miad a gyorsított stabilitésvizsgálat (37°C egy hétig) során & vírustiter változatlan maradt,
9, példa
Felnőttek rotavinssvakcmávsl egy alkalommal szájon át történő kezelésének L tézisé biztonságossági vizsgálata
A P43 vakcina 106,0 fin íitsrő egyszeri orális adagja biztonságosságának és reakcióképességének elböálása érdekében egészséges, 18-45 év közötti felnőttek bevonásával k feíső vizsgálatot végezténk,
A 'tetős vak” és modemizált elrendettéső, plaeebo knstteoÖt alkalmazó, zárt klinikai vizsgálatot egy belgimsí egészségügyi körönöm® végeztük.
Vizsgált populáció
A összesen felvett 33 páciens (11 a plaeebo» 22 a kísérleti csoportban) mindegyike végig részt vett a vizsgálatban. Az önkéntesek mindegyike fehér voh, A vakcínázáskor átlagéletkoruk 35,3 év, életkonartornásyuk 18-44 év volt. A kísérlet januárban kezdődött és kevéssel több mint egy hónapig tartott.
Anyag
Vakcina
Á P43 vakcina kísérleti tételeinek előállítását, tisztítását, kiszerelését és Hoiílízéiását Good Manníaciuring Praetices szerint végeztük. A tételek használata minőségellenőrzési és minőségbiztosítási jóváhagyással tőr-ént. A vakcinás fiolák mindegyike a kővetkező összetevőket tartalmazta.
Hatóanyag:
P43 törzs legalább 105,8 ffu
Kötőanyagok, síabillzáiószerek:
Szacharóz 9 tng
Dextrán IS mg
Szerbit 13,5 mg
Aminosavak 9 mg
Placebo
Piacehe anyagot tartalmazó fiolákat is előállítottunk. A fiolák mindegyike a kővetkezőket tartalmazta.
Kötőanyagok, stabílízálószerek:
Szacharóz 9 mg
Dextrán 18 mg
Szerbit 13,5 mg
Aminosavak 9 mg
Oldószer
A vakcina és a plaeeho helyreállítására injekció céljára szolgáló vizet alkalmaztunk.
Eessiás
A vakcina vagy a placebo beadása előtt kb, l0-15 perccel mindkét csoportba tartozó pácienseknek 10 ml Myíama®~t adtunk szájon át A Myianta® engedélyezett savlekötő szer. A savíekötö szer megnöveli a gyomornedv pH-értékét, ami megakadályozza a rota'viros gyomorbeli maktiválódását.
A vakcina elkészítéséhez két fiola, fiolánként 105,8 ff» tartalmú liofilizált P43-at 1,5 ml injekció céljára szolgáló vízzel helyreállítottunk. Ez adagonként 106,1 ff» száadtott vírastitert eredményezett. A vakcina beadása a helyreállítás: követően azotmal, szájon át, egy adagban történt.
A placebo elkészítéséhez két fiola bolti száll piacéból '1,5 ml injekció céljára szolgáló vízzel helyreállítottunk, majd azt szájon át, egy adagban adtuk be.
Biztonságosság és reakcióképesség
A kővetkező biztonságossági és reakelóképességi kritériumokat alkalmaztak.
A vizsgált fsolicited’*) általános tünetek a kővetkezők voltak: láz, hasmenés, hányás, émelygés, hasi fájdalom, étvágytalanság. Ezeknek: a tüneteknek a meglétét a beadást kővető 8 napot: át jegyeztük le.
4**4 »4«
X 4 4
4'
4« *4
Az egyéb, nem vizsgák tüneteket a beadást követő 30 asp alak jegyeztük fel
A súlyos fokú mellékhatásokat a vizsgálat teljes Időtartama alatt lejegyeztük.
A beadást követő 8 nap során hasmenéses bélsármimákat gyűjtöttünk.
Ereánsények
A megbattamtt megfigyelést időtartamok alatt vizsgák és egyéb fenéteket vagy súlyos fokú mellékhatásokat «t észleltünk.
Hsswtséses megbetegedés nem történt.
Következtetések
Az SB .Bíologleais F43 vakcinája 18-44 éves egészséges felnőtt önkénteseknek kettős vak elrendezésű kisss'ktbes 106,1 t& virasssetmyiséger tartalmazó egyszeri adagban beadva a plaeebőhoz képest biztonságinak bizonyaik
SZEKVENCIAL1STA «110» tobbkáno Baecbnm Blolcgisak S.A. «120» Vassíné <13S> 8S4S194 «1ÜG>2 «178» FatokG W Wíttdow Varsám 3,8 <2iÖ> 1 <2á 1> 23S3 to 2> OMÁ <213> Humán <·4δδ> 1 atteagtaga caacaaawe agafcaaatga teaceccacc
X Λ « * »«*!» a s cac gaaatagage gCiXteXXe gtsgaaceaa •SgSXSS4X^S' ssetggssXö asattsggtg gsasegssts aesags a - tg cs«s»sgs na catwagaat aacggtetgc íx»axa«agc ceg&aaeaaa gísssgscgs saaí asaati g g »0 £ 9 ® & <·'· «* ssrgssgcts stcagaasea ggcggssge;; éjiíxcgscge aae&c&ecac acacgcacag taegaassat «xecaassa egsga&gssx eigíxgexsx aaatcaatgg sxaxsasxga agstegaatt actaasxens aaagaaasaa aaaacaaaaa gaagcaectg isgg&aatta ccatxcgasg sxegas.ttxa ecaá&sxcaa attataagga ggasgegsxe sxas. ttatag &«ssegesse gatasgrrxe ε exesgst'gg .®-.sS-SíC«S;..®SSn-ugtegttgc aaa^sraa^cs ga&geagsag taggaatast «tácxg&eag tttacattat caccaattca ssxsgsgagc egcagextss gaggaes. agg acstaegaga ssaacagcía ntaaagagaa cggcatasgc atsstcceag &txa cgexgg gat s. tagat a agaasttgta caggaaggtx agaaatcaga aíaacceatt aag&eatgtt cgáesagagt essasteset caacsgegat cgaaegaaaa tt&sxcaaac tagatatga© agaaatttac aiacag&agg aaaaaaaatt agaeaeagaa aaaaefi-ftgaa aaaga&aaga acaactcsnc agaaaaaact sgsxsexsgg •SSX-XötXSg teacaa^-c.ggs.
£.&·£ sg&accg aattaaagtg ícasaatgas taaacscggt caeaagtaet teesaggstx anasaataga acsagst&at tagggatata <. caxaaaagg cggtgaaaaa teát <i~ a~S« aacttaagaa εagateás aa easaeeagsa ags.naeasaa nagaatgaca aggat csecs íAeacacaea gaeggaaaga gtcacaagaa seccsagíxs aaegaegaaa gaeagaages saeaaaatgg εtc«ac#c*8 tgaaggaaag aa«a«aaaaa aecaaaaega a&aafctesat egeagaaeta aaaataaaaa tccaaaeatg acaattaata aesaattxae cagaatgtaa gaéeatggag ccaatt&sac
..gaagxasAtg.
essgeessse agsaacgasc aettaaáaea ggaagageae gcsaaeaaaa caggaaacta aasgesgttc gsagaerseta atsaaaaga; iccgaaa:a; gtsaaagesc atseaaaeea aacgaagaet gc«ges«att gecgesagee nceaegeaaa gCCgSSgSSC geagetaaac cc:at«gaac caagattaag aaagetatgg tce83»ass* essagaa&as gcxtcateag acsascgccs acasexacaa agettxgacg ggaaaaaaaa testasegaa gcat&eaaaa cisasig®ss Sasaattatg eeaegtasm ceaeaatgta cagaagaeag cssssa&aag gaegaaeaea ggaeascfcca acaaeaaaee aaageaatga csíx&xcatc eagetacaaa ccssxcesgg caaaaangge aeaceacttg ccgsiX segg as a 999® ega ssaseccags eagtaatgaa εsactgaatt ceccttsctc eaaaaaaegg eaaetaatgs agcgceaaca caeaattgaa asagsacias csaaettasc c&tcaagaaa caaasgasge snagaaagaa scastteagc cettaccaga aaetasagga tsaatacátt cxeexgex&c. gaaaeaeteg teatsaaaca saetgegaga tttaeaágafc gggeceaaat s tcgaesaca saaagateaa scaataa&tg gaagtstxta aacetetgae aggegaaaca aat&acaaae sracatsaat atxatst&ga aaesxcatca esssigesec aasaaaasat ateageaarss «a«ss:eaaS9 ?: ícaaaagea gssssgsses tggeggeget agaascat .s& aaaaetg&ga aaaagaataö cgattatcag sac&Sattta tganteagca cg®s.c s«a« naeaaeaaax egesex sasé gaeaaaegca acttagaeaa agctgaaftfca lac&gsx&c® tgatgaagea egatgaageg sceagcgas.® aaeagaageg aotaatcca aegsxatfcga
Sö
Uö
ISO
240
3so
29 « sö S4 0 900 SSÖ 7gö ?se 340 309 355
X/3 Ϊ2Χ ISÖ 1200 1255 1329 1399 U 40 XS90 ÁSSö 1120 1550 W IS 0 9 1899 1329 1889 2Ö4Ö 2XÖÖ 2X50 2229 2385 2MU 23S0 <210>2 <211» W <212» OHA <213» Humán <400 2 aegs&tggtc segaacacac cacaass-cc.» aectetcaga tatcáattat cctaone&ac so eatacat:taa aatc&gcaae eergaataafcg gaeeaeatca caRacagaec ceegtegace t20 cargeagcat tacfcbgcctc gaeaagagcc cagaaccasg ggettaaefcc aeca&taaca iSö ggaecaaegg aeacegtata egecaactct acccaag&ag gaacateeet: aacaéceaca 24 ó teacgtttgé atcacéeaac egaageaagt actcaaitta atgatggega atggaaagae söö tcafecgt-cac «saxgsr.~.cc cacaaaaggc tggccaacag gatcagccca txsx&aagag .íSö tatxcaagca ttgtt.gacs.t: cccegtcgas ccácaacsat. atxgsgacca taactxagta «29 ccaaegaaac. aegatcaaaa cccegaacna gatacgeeag agtcagccga ctxaatafctg «80 aacgaafcggt tatgtaae.cc aatggataca acattátaec acfca&caaca ascgggagaa 540 teaáat&agt ggatatcaat gggatcatea tgtactgtga aagtgtgtcc acngáatácg aoo caaatqccag gaataggnsg ccaaacaaca aaegcagacc cgettgaaac ggttgccgag Sőö aatgagaaat tagetacagt ggatgtcgtt gatgggataa atcataaaat aaatttgaca ?20 acsáegacat gtaetatecg aaattgsaag aagttaggtc eaagagagaa tgtagccgca 780 aescaágexg geggeectaa tgcactagae acaacagcag atccaacgae t-ssrce-sős.» S-W actgagágaá cgasgagagt gaaetggaaa aaatggcggc aagtattcca taccasagca 9ő0 uatt&tatta accaaatcgt geaggtaacg cccaaaagar eaagatcasc aaaccetgca 940 getttttatt: acagagtata gata&acccc agattagate gstgtgaec ‘ icog

Claims (31)

  1. Szabadalmi igénypontok
    1. Attenuált emberi rotavims-populáció, azzal jellemezve, hogy kizárólag egyetlen variánst vagy -alapvetően egyetlen variánst tartalmaz, amely variánst a VP4 és VP? jelzésű fó virusproteinek legalább egyikét kódoló nukleotidszekvencla határoz meg.
  2. 2. Az .1. igénypont szerinti, rotavírus-populáció. amely klónozott törzs,
  3. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti rotavims-populáció, amely emberi rotavirus-fertőzéshól származik.
  4. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti roíavints-popttláctó, amely emberi szervezetben replikálődik és onnan választódik ki.
  5. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti rotavírus-populáció, amely toiavíms-populáciő alapvetően egy variánsában a VP4 gén a következők legalább egyikét magában foglaló nnkitmtülszekveneiát. tartalmaz: a kezdőkodontől számított 788. pozieióbeii adenin (A), 802, pozieióbeii. adósain (A), vagy 501. poztólóbeb. tímin (T).
    ő. Az 5. igénypont szerinti rotavims-populáció, amelyben a VP4 gén a kezdőkodontől számított 788. és 802. pozícióban adeaint t'A), az 501, pozícióban pedig timint (T) tartalmazó nukleotidszekvenciát foglal magában.
  6. 7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti rotavims-populáció, amely rotavirus-populáció alapvetően egy variánsában a V'P? gén a kővetkezők legalább egyikét magában foglaló nnkieoddszekvenclát tartalmaz: a kezdőkodontől számított őÖ5. pozieióbeii tímin (T) vagy 89?. pozieióbeii adenin (A) vagy 897. pozieióbeii gnanin (G).
  7. 8. A 7, igénypont szerinti rotaviros-popuíáciő, ahol a VP? gén a kezdökodontói számított 6ÖS. pozícióban timint (?}, a 897, pozícióban pedig adenint (A) vagy guanint (<3> tartalmazó ntddeotídszefcveneiát foglal magában.
  8. 9. Az 5-8. igénypontok szerinti rotavírus-popuiáció, ahol a VP4 gén a kezdökodontói számított 788, és 802. pozícióban adeaint (A), az 501. pozícióban timint (T) tartalmazó nukleotidszekvenciát, a VP? gén pedig a * * Φ Φ ¥ ♦ Φ «« φ * * Λ Α φ φ * ** -*« ΦΦ kezdőkodontől szántiteti. őÖ5. pozícióban timiní (T), a 897. pozícióban pedig adnnlnt (A) tartalmazó nakleotidszekveuciát foglal magában,
  9. 10. Rotavirus, amely az I. ábrán bemutatott, VF4 proteint kódoló nokeotidszekvenciáí, és/vagy a 2. ábrán bemutatott, VP7 proteint kódoló rmkleotidszekvonoiát tartalmaz.
  10. 11. Az l.-lö. igénypontok bátmelyíke szerinti miavím-popaíácíé, amelynek jelzése E43, BCACC deponálási száma pedig 99Ö81301 ·
  11. 12. F43 jelzésű, Ö9ÖS13O1 BCACC deponálási számó tofevíras variáns, a rotavírus utódai, immunológia· iíag aktív származékai és a 'belőle származó anyagok.
  12. 13. Átrendezett emberi rotavíras, amely a 11, vagy 12, igénypontbeli P43 jelzésű rotavírtts variáns legalább egy antigénjét vagy legalább egy szegmensét tartalmazza.
  13. 14. Eljárás alapvetően egy variánst tartalmazó tisztított emberi rotavíras-popuiáeíő előállítására, azzal jellemezve, hogy:
    rotavíras-készítményt megfelelő sejttípuson passzáleok; adott esetben homogén tenyészetet választunk ki korlátozó hígítással vagy egyedi plakk izolálással és egy alapvetően egyetlen variáns jelenlétének kimutatása érdekében meghatározzuk a VP4 és/vagy VP? génszekveneia megfelelő régiójának szekvenciáját.
  14. 15. A 14, igénypont szerinti eljárás, azzal j&líemezye, hogy & rnmvírus-késziönényt AGMK, sejteken pssszáljufc.
    1Ő. A 14, vagy I5, igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy egy 89-12-es törzs vagy származéka jellemzőivel rendelkező rotavkas-készltménytalkalmaznrdc
  15. 17. A I4~lb. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, aszal jellemezve, hogy az étetfeékesy járulékos szennyező ágensek eltávolítása érdekében éteres kiegészítő kezelést: Is alkalmazunk.
  16. 18. Vakcmakészítmény, amely 1-13. igénypontok bármelyike szerinti élő, attenuált vírushoz keverte» megfelelő gyógyászati hordozóanyagot vagy adjuvánst tartalmaz,
  17. 19. A 18. igénypont szerinti vakeisakészitmény, amely szájon át történő beadásra adaptált.
  18. 20. A 19. igénypont szerinti wkcmakészltmény, amely az é.lÓ, attenuált vírust savlekötö készítménnyel kiszerelten. tartalmazza.
  19. 21. A '20, igénypont szerinti vakcinakészitméay, amely savlekötö készítményként szerves savlekötö anyagot tartalmaz.
  20. 22. A 2,1. Igénypoai: szerinti vatónakteltoény, amely savtekötő anyagkéntnárilten-úírittet tartalmaz.
  21. 23. A 2ő. igénypont szerinti vstótakészltitteny, amely savfekötii készfeaényként szervetlen savíekőtó anyagot tartalmaz.
  22. 24. A 23. igénypont szerinti vakemakésriönény, amely savlekötő anyagként alumíníum-lndroxidot tartalmaz,
  23. 25. A 23. igénypont szerinti ssrkebtekászldnőny, amely savlekötö anyagként katóam-karbonámt tártál· máz.
  24. 26, A 25. igénypont szerinti vakomakésaiímésay, amely viszkózus anyagot Is tartalmaz.
    φφ φ
    ΦΧ φ
    «· * φ
    X * φ * φ φ φ·φ φφ>
  25. 27. Α 26, igésyp<sto.szerinti vakcmakétómétry, amely vAzkézos anyagként xantángmmt tartalmaz,
    25. A 25-27, igénypontok bármelyike szenntl vakoínakésztenéoy, amely az élő, síteatsáit vírust kaleiurskárkertettel és xamáttgtmbval tesAueltea tartalmazza, és amely vizes oldattal állith&té belym.
    25, A 30-2Ó, igésyyvmoA bármelyike szerinti vskeissAAzkmésy, amely az éló, stíssssélt vbw a ssvfckötö készítménnyel tószemlter és hélyagestxrtagolásbaa liofikzáltaa tartalmazza,
  26. 30. A 15-25, igénypontok bármelyike szezbíb vakoinakőaz-ítraéo.y, amely a vírast hofilizáiten tartalmazza.
  27. 31. A 30. igénypont zzertoií vakeinskészitmétty, amely az élő, tetemek vímst év a ssvlekOró készítményt, folyékony vakcinskésxttménykétrt velő kiszerelés beadás A&o WGoö balymllitására alkalmas módom, különálló íómlóedésyekbes tartalmam,
  28. 32. A 30, igénypont szerinti vakciaskésztonény, amely az éld, attomtelí vírust és a savtokötő hészftarányt, lioírlizátt vakeínafcéstotményfcéat sálé kiszerelés beadás dós véges oldattal történd heiyreólíításto alkalom módon, wanezoa tároióedóeyfeen tartalmazza.
  29. 33. Hjatés e 15-32. igésypízSök bármelyike szerint igényeit mteviros-vakeina előállítására, amely líoillíráit élé, attenaált embert swvkas alkatom gyógyávzab hordozóval vagy a^továnssal valé Összekeverését tartalmazza,
  30. 34. Atremtelt tormán mtavíros alkalmazása 15-32, igénypontok bármelyike szertöt sgósysH vakcina előállítására tetovftusíbrtőzás megelőzésére mbsd smmélybea,
  31. 35. A 13-32. igénypontok bármelyike mist igényeit vatómtktómény gyógyászaiban veié alkalmazásra.
HU0203335A 1999-08-17 2000-08-15 Vaccine HU228975B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HUS1300072 HUS1300072I1 (hu) 1999-08-17 2013-11-29 Vakcina

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB9919468.0A GB9919468D0 (en) 1999-08-17 1999-08-17 Vaccine
GBGB9927336.9A GB9927336D0 (en) 1999-11-18 1999-11-18 Vaccine
PCT/EP2000/007965 WO2001012797A2 (en) 1999-08-17 2000-08-15 Method of separating rotavirus variants and live attenuated rotavirus vaccine

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HUP0203335A1 HUP0203335A1 (hu) 2003-02-28
HUP0203335A3 HUP0203335A3 (en) 2004-07-28
HU228975B1 true HU228975B1 (en) 2013-07-29

Family

ID=26315853

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0203335A HU228975B1 (en) 1999-08-17 2000-08-15 Vaccine
HUS1300072 HUS1300072I1 (hu) 1999-08-17 2013-11-29 Vakcina

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HUS1300072 HUS1300072I1 (hu) 1999-08-17 2013-11-29 Vakcina

Country Status (42)

Country Link
US (4) US7285280B1 (hu)
EP (1) EP1212084B1 (hu)
JP (3) JP2003507040A (hu)
KR (1) KR100695599B1 (hu)
CN (1) CN100379451C (hu)
AP (1) AP1768A (hu)
AR (1) AR029643A1 (hu)
AT (1) ATE327765T1 (hu)
AU (1) AU767885B2 (hu)
BG (1) BG65314B1 (hu)
BR (1) BRPI0013357B8 (hu)
CA (1) CA2379196C (hu)
CO (1) CO5580165A1 (hu)
CY (2) CY1106103T1 (hu)
CZ (1) CZ302173B6 (hu)
DE (2) DE122006000026I1 (hu)
DK (1) DK1212084T3 (hu)
DZ (1) DZ3219A1 (hu)
EA (1) EA005952B1 (hu)
ES (1) ES2260046T3 (hu)
FR (1) FR06C0018I2 (hu)
HK (1) HK1046860B (hu)
HU (2) HU228975B1 (hu)
IL (3) IL147926A0 (hu)
LU (1) LU91251I2 (hu)
MA (1) MA25489A1 (hu)
MX (1) MXPA02001648A (hu)
MY (1) MY133158A (hu)
NL (1) NL300233I2 (hu)
NO (2) NO328112B1 (hu)
NZ (1) NZ517131A (hu)
OA (1) OA12312A (hu)
PE (1) PE20010487A1 (hu)
PL (1) PL205550B1 (hu)
PT (1) PT1212084E (hu)
SI (1) SI1212084T1 (hu)
SK (1) SK287261B6 (hu)
TR (1) TR200200420T2 (hu)
TW (1) TWI283270B (hu)
UA (1) UA77388C2 (hu)
UY (1) UY26297A1 (hu)
WO (1) WO2001012797A2 (hu)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE122006000026I1 (de) * 1999-08-17 2006-10-12 Glaxosmithkline Biolog Sa Methoden um Rotavirusvarianten zu trennen und lebender attenuierter Rotavirus impfstoff
US6592869B2 (en) * 1999-08-24 2003-07-15 Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. Vaccine composition and method of using the same
GB0020089D0 (en) * 2000-08-15 2000-10-04 Smithkline Beecham Biolog Vaccine Composition
KR20030026654A (ko) * 2001-09-26 2003-04-03 주식회사 씨트리 인간 로타바이러스의 활성을 저해하는 항체의 생산용 항원및 그의 제조방법과 이용
GB0414787D0 (en) 2004-07-01 2004-08-04 Glaxosmithkline Biolog Sa Method
SG147465A1 (en) * 2003-09-02 2008-11-28 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
GB0503337D0 (en) * 2005-02-17 2005-03-23 Glaxosmithkline Biolog Sa Compositions
ES2534637T3 (es) * 2005-08-17 2015-04-27 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vacuna de rotavirus que induce protección cruzada heterotípica
CA2630220C (en) 2005-11-22 2020-10-13 Doris Coit Norovirus and sapovirus antigens
KR101051986B1 (ko) * 2006-09-28 2011-07-26 중앙대학교 산학협력단 인간로타바이러스 및 이를 이용한 백신 조성물
WO2008058035A1 (en) * 2006-11-03 2008-05-15 Alphavax, Inc. Alphavirus and alphavirus replicon particle formulations and methods
EP2236617A1 (en) 2009-03-31 2010-10-06 Leukocare Ag Methods of terminal sterilization of biofunctional compositions
WO2010132561A2 (en) 2009-05-12 2010-11-18 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services, Centers For Disease Control And Prevention New human rotavirus strains and vaccines
CN102470170B (zh) 2009-07-13 2015-03-18 巴拉特生物技术国际有限公司 用作轮状病毒疫苗的组合物及其方法
FR2960781B1 (fr) * 2010-06-07 2013-11-22 Sanofi Pasteur Preparation d'un vaccin oral sec stabilise, compose d'un virus vivant attenue
RU2643929C2 (ru) 2012-04-23 2018-02-06 Бхарат Байотек Интернэшнл Лимитед Новые ротавирусные вакцинные композиции и способ получения вышеуказанных композиций
BR112015004085A2 (pt) * 2012-08-27 2017-08-08 Murdoch Childrens Res Inst método para cultivar uma cepa de rotavírus (rv); método para gerar uma rv3 atenuada em células vero; rv3 adaptada à vero isolada; composição de rv morto ou vivo atenuado; método para vacinar um indivíduo humano contra infecção por rv; método para tratar um indivíduo humano com uma infecção por rv ou em risco de desenvolver uma infecção ou reinfecção por rv; uso da rv3 de vero; anticorpo isolado; e método para detectar ou monitorar a rv3 de vero
CN106167518B (zh) * 2015-05-21 2021-01-15 厦门大学 截短的轮状病毒vp4蛋白及其用途
CN108431214B (zh) 2015-10-05 2022-03-01 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) 人轮状病毒g9p[6]毒株和作为疫苗的用途
CN108367164A (zh) * 2015-12-18 2018-08-03 默沙东公司 热稳定的轮状病毒疫苗制剂及其使用方法
MA44557B1 (fr) 2016-06-16 2021-11-30 Bharat Biotech Int Ltd Vaccin contre le rotavirus sans tampon, stable en milieu acide, et d'un faible volume de dose à administrer
GB201614799D0 (en) 2016-09-01 2016-10-19 Glaxosmithkline Biologicals Sa Compositions
CN110856493B (zh) * 2018-08-20 2022-02-25 中国烟草总公司黑龙江省公司牡丹江烟草科学研究所 一种植物病毒弱毒疫苗组合物、弱毒疫苗保存方法及其应用

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5927323B2 (ja) * 1976-10-12 1984-07-05 花王株式会社 歯みがき組成物
US4341763A (en) * 1981-03-10 1982-07-27 Smithkline-Rit Methods of vaccinating humans against rotavirus infection
US4571385A (en) * 1983-06-27 1986-02-18 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Genetic reassortment of rotaviruses for production of vaccines and vaccine precursors
US4624850A (en) * 1984-02-09 1986-11-25 Royal Children's Hospital Research Foundation Live attenuated human rotavirus vaccine
US5626851A (en) * 1987-11-30 1997-05-06 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Rotavirus reassortant vaccine
ES2121841T3 (es) * 1990-11-16 1998-12-16 Childrens Hosp Medical Center Una vacuna para proporcionar proteccion inmunologica contra enfermedades de rotavirus en humanos.
US5471385A (en) * 1992-05-21 1995-11-28 Tsubakimoto Chain Co. Routeless guiding method for moving body
US5773009A (en) * 1994-04-15 1998-06-30 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Rotavirus strain G9P11
WO1996001651A1 (en) * 1994-07-11 1996-01-25 The Government Of The United States Of America, Represented By The Department Of Health And Human Services Attenuated human rotavirus vaccine
US6403098B1 (en) * 1996-09-26 2002-06-11 Merck & Co., Inc. Rotavirus vaccine formulations
EP0939648B1 (en) * 1996-09-26 2007-11-07 Merck & Co., Inc. Rotavirus vaccine formulations
US5932223A (en) * 1996-09-26 1999-08-03 Merck & Co., Inc. Rotavirus vaccine formulations
US6552024B1 (en) * 1999-01-21 2003-04-22 Lavipharm Laboratories Inc. Compositions and methods for mucosal delivery
DE122006000026I1 (de) * 1999-08-17 2006-10-12 Glaxosmithkline Biolog Sa Methoden um Rotavirusvarianten zu trennen und lebender attenuierter Rotavirus impfstoff

Also Published As

Publication number Publication date
NZ517131A (en) 2003-07-25
IL147926A0 (en) 2002-08-14
EP1212084B1 (en) 2006-05-31
FR06C0018I2 (fr) 2007-04-27
ES2260046T3 (es) 2006-11-01
SI1212084T1 (sl) 2006-08-31
CN100379451C (zh) 2008-04-09
KR100695599B1 (ko) 2007-03-14
AP1768A (en) 2007-08-16
NL300233I1 (nl) 2006-09-01
SK287261B6 (sk) 2010-04-07
HUS1300072I1 (hu) 2019-11-28
JP2011045374A (ja) 2011-03-10
ATE327765T1 (de) 2006-06-15
NO2010011I1 (no) 2010-06-07
EA200200142A1 (ru) 2002-08-29
CZ302173B6 (cs) 2010-11-24
IL147926A (en) 2008-03-20
OA12312A (en) 2006-05-12
CA2379196C (en) 2015-05-26
CZ2002522A3 (cs) 2002-05-15
SK2432002A3 (en) 2002-09-10
CO5580165A1 (es) 2005-11-30
BG65314B1 (bg) 2008-01-31
PL354135A1 (en) 2003-12-29
NO328112B1 (no) 2009-12-07
WO2001012797A2 (en) 2001-02-22
AP2002002424A0 (en) 2002-03-31
KR20020092344A (ko) 2002-12-11
CY2006004I1 (el) 2009-11-04
HUP0203335A3 (en) 2004-07-28
US7285280B1 (en) 2007-10-23
CY2006004I2 (el) 2009-11-04
NO2010011I2 (no) 2015-02-02
PT1212084E (pt) 2006-07-31
DE122006000026I1 (de) 2006-10-12
WO2001012797A3 (en) 2001-08-02
AU6996100A (en) 2001-03-13
US20090130145A1 (en) 2009-05-21
PE20010487A1 (es) 2001-06-23
JP2007319164A (ja) 2007-12-13
AU767885B2 (en) 2003-11-27
US7790179B2 (en) 2010-09-07
AR029643A1 (es) 2003-07-10
HUP0203335A1 (hu) 2003-02-28
EP1212084A2 (en) 2002-06-12
DK1212084T3 (da) 2006-07-10
NO20020763D0 (no) 2002-02-15
NO20020763L (no) 2002-04-16
IL188686A0 (en) 2008-04-13
NL300233I2 (nl) 2006-10-02
MXPA02001648A (es) 2002-08-06
DZ3219A1 (fr) 2001-02-22
BR0013357A (pt) 2002-04-30
DE60028390T2 (de) 2006-11-02
EA005952B1 (ru) 2005-08-25
CY1106103T1 (el) 2010-07-28
BRPI0013357B8 (pt) 2021-05-25
BRPI0013357B1 (pt) 2016-08-02
JP2003507040A (ja) 2003-02-25
CN1379683A (zh) 2002-11-13
LU91251I9 (hu) 2018-12-31
MY133158A (en) 2007-10-31
DE60028390D1 (de) 2006-07-06
HK1046860A1 (en) 2003-01-30
TWI283270B (en) 2007-07-01
PL205550B1 (pl) 2010-04-30
BG106417A (en) 2003-04-30
LU91251I2 (fr) 2006-08-14
HK1046860B (zh) 2006-10-06
CA2379196A1 (en) 2001-02-22
US20080063662A1 (en) 2008-03-13
US7790180B2 (en) 2010-09-07
UY26297A1 (es) 2001-03-16
UA77388C2 (uk) 2006-12-15
FR06C0018I1 (hu) 2006-07-21
MA25489A1 (fr) 2002-07-01
TR200200420T2 (tr) 2002-05-21
US20080057082A1 (en) 2008-03-06
JP5474720B2 (ja) 2014-04-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU228975B1 (en) Vaccine
JP2003507040A5 (hu)
NO342397B1 (no) Anvendelse av en attenuert human rotavirusstamme fra en G1 serotype for fremstilling av en sammensetning for indusering av en immunrespons
EP2233153B1 (en) Rotavirus vaccine inducing heterotypic cross protection
ES2407840T3 (es) Vacuna de rotavirus
EP1676586B1 (en) Method of separating rotavirus variants and live attenuated rotavirus vaccine
ZA200601771B (en) Vaccine

Legal Events

Date Code Title Description
HC9A Change of name, address

Owner name: GLAXOSMITHKLINE BIOLOGICALS (S.A.), BE

Free format text: FORMER OWNER(S): SMITHKLINE BEECHAM BIOLOGICALS S.A., BE

AA1S Information on application for a supplementary protection certificate

Free format text: PRODUCT NAME: ROTAVIRUS VACCINE; REG. NO/DATE: EU/1/05/330/001-004 20060221

Spc suppl protection certif: S1300072

Filing date: 20131129

Expiry date: 20200815

FG4S Grant of supplementary protection certificate

Spc suppl protection certif: S1300072

Filing date: 20131129

Expiry date: 20200815

Extension date: 20210223