HU228360B1 - Enzymatic process for the preparation of substituted 2-amino-3-(2-amino-phenylsulfanyl)-propionic acid - Google Patents
Enzymatic process for the preparation of substituted 2-amino-3-(2-amino-phenylsulfanyl)-propionic acid Download PDFInfo
- Publication number
- HU228360B1 HU228360B1 HU0401500A HUP0401500A HU228360B1 HU 228360 B1 HU228360 B1 HU 228360B1 HU 0401500 A HU0401500 A HU 0401500A HU P0401500 A HUP0401500 A HU P0401500A HU 228360 B1 HU228360 B1 HU 228360B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- formula
- amino
- reaction
- alkyl
- tert
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 10
- MYHSTGDTIRTLEG-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-(2-aminophenyl)sulfanylpropanoic acid Chemical class OC(=O)C(N)CSC1=CC=CC=C1N MYHSTGDTIRTLEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 title description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Natural products CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 72
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 49
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical group CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 27
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 17
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 15
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical group COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 12
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 11
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 claims description 10
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 10
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 9
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 9
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 7
- 125000004453 alkoxycarbonyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 5
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000005092 alkenyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 claims description 4
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 4
- 150000007657 benzothiazepines Chemical class 0.000 claims description 3
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical group C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 claims description 2
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical group CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 42
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 26
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- -1 pentik Chemical group 0.000 description 18
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 17
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 17
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Inorganic materials [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 17
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 17
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 16
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 16
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 11
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 11
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 11
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 11
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 11
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 11
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 9
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 8
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 8
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 8
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 8
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 8
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 8
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 8
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 7
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 7
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 7
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 6
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 6
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 6
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 5
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 5
- 108010056079 Subtilisins Proteins 0.000 description 5
- 102000005158 Subtilisins Human genes 0.000 description 5
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 5
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 5
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 4
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 4
- UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N diisopropylamine Chemical compound CC(C)NC(C)C UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 4
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 4
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 4
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 3
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N Dimethyl ether Chemical compound COC LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 3
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 3
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 3
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 3
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 3
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 3
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 3
- KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 1-Octanol Chemical compound CCCCCCCCO KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BBMCTIGTTCKYKF-UHFFFAOYSA-N 1-heptanol Chemical compound CCCCCCCO BBMCTIGTTCKYKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004206 2,2,2-trifluoroethyl group Chemical group [H]C([H])(*)C(F)(F)F 0.000 description 2
- 125000004777 2-fluoroethyl group Chemical group [H]C([H])(F)C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 2
- WDYVUKGVKRZQNM-UHFFFAOYSA-N 6-phosphonohexylphosphonic acid Chemical compound OP(O)(=O)CCCCCCP(O)(O)=O WDYVUKGVKRZQNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 2
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N Dimethylamine Chemical compound CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N Propane Chemical class CCC ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 2
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 229940043279 diisopropylamine Drugs 0.000 description 2
- ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N diphenyl Chemical group C1=CC=CC=C1C1=CC=CC=C1 ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001301 ethoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 2
- ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N hexan-1-ol Chemical compound CCCCCCO ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 2
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 2
- NJGIAKIPSDCYAC-LURJTMIESA-N methyl (2r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-sulfanylpropanoate Chemical compound COC(=O)[C@H](CS)NC(=O)OC(C)(C)C NJGIAKIPSDCYAC-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000006501 nitrophenyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000013849 propane Nutrition 0.000 description 2
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 230000000707 stereoselective effect Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000229 (C1-C4)alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000006701 (C1-C7) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- KJFRSZASZNLCDF-UHFFFAOYSA-N 1,5-benzothiazepine Chemical class S1C=CC=NC2=CC=CC=C12 KJFRSZASZNLCDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 1-[1-[2-[[5-amino-2-[[1-[5-(diaminomethylideneamino)-2-[[1-[3-(1h-indol-3-yl)-2-[(5-oxopyrrolidine-2-carbonyl)amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carbon Chemical compound C1CCC(C(=O)N2C(CCC2)C(O)=O)N1C(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C1CCC(=O)N1 UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFTYKVGDROWKQC-UHFFFAOYSA-N 1-bromo-4-(fluoromethyl)benzene Chemical compound FCC1=CC=C(Br)C=C1 LFTYKVGDROWKQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 1-butoxybutane Chemical group CCCCOCCCC DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001340 2-chloroethyl group Chemical group [H]C([H])(Cl)C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000004200 2-methoxyethyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- YJYCHJJVAXTSAH-SNVBAGLBSA-N 3-amino-4-[(2s)-2-carboxy-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]ethyl]sulfanylbenzoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](C(O)=O)CSC1=CC=C(C(O)=O)C=C1N YJYCHJJVAXTSAH-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- 102000008873 Angiotensin II receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050000824 Angiotensin II receptor Proteins 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N Carbamic acid Chemical compound NC(O)=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101800001982 Cholecystokinin Proteins 0.000 description 1
- 102100025841 Cholecystokinin Human genes 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N Dodecane Natural products CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical compound [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical class CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000882 Peptidyl-Dipeptidase A Proteins 0.000 description 1
- 102000004270 Peptidyl-Dipeptidase A Human genes 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N Propionic acid Substances CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 101100073357 Streptomyces halstedii sch2 gene Proteins 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M Thiocyanate anion Chemical compound [S-]C#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 125000002009 alkene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 1
- BHELZAPQIKSEDF-UHFFFAOYSA-N allyl bromide Chemical compound BrCC=C BHELZAPQIKSEDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005336 allyloxy group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000006294 amino alkylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000003435 aroyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005161 aryl oxy carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005605 benzo group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004305 biphenyl Substances 0.000 description 1
- 235000010290 biphenyl Nutrition 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004744 butyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N caesium atom Chemical class [Cs] TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FJDQFPXHSGXQBY-UHFFFAOYSA-L caesium carbonate Chemical compound [Cs+].[Cs+].[O-]C([O-])=O FJDQFPXHSGXQBY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000024 caesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004657 carbamic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000001589 carboacyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007073 chemical hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 229940107137 cholecystokinin Drugs 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Chemical class 0.000 description 1
- 235000019788 craving Nutrition 0.000 description 1
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 1
- 125000002704 decyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- HEFNNWSXXWATRW-JTQLQIEISA-N dexibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C([C@H](C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000002451 electron ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- VDKCGYDKRKFWOD-UHFFFAOYSA-N ethanol;propane Chemical class CCC.CCO VDKCGYDKRKFWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 210000000245 forearm Anatomy 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005446 heptyloxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 229960004187 indoprofen Drugs 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000000555 isopropenyl group Chemical group [H]\C([H])=C(\*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229960000991 ketoprofen Drugs 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 229960001913 mecysteine Drugs 0.000 description 1
- VPKDCDLSJZCGKE-UHFFFAOYSA-N methanediimine Chemical compound N=C=N VPKDCDLSJZCGKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 108010020132 microbial serine proteinases Proteins 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- IMNDHOCGZLYMRO-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylbenzamide Chemical compound CN(C)C(=O)C1=CC=CC=C1 IMNDHOCGZLYMRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003136 n-heptyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000000740 n-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 150000002828 nitro derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001181 organosilyl group Chemical group [SiH3]* 0.000 description 1
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 1
- 125000006678 phenoxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003880 polar aprotic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000031877 prophase Effects 0.000 description 1
- 125000004742 propyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- JZWFDVDETGFGFC-UHFFFAOYSA-N salacetamide Chemical group CC(=O)NC(=O)C1=CC=CC=C1O JZWFDVDETGFGFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 1
- SRWFBFUYENBCGF-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrochloride Chemical compound [Na+].Cl.[Cl-] SRWFBFUYENBCGF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 1
- 125000004044 trifluoroacetyl group Chemical group FC(C(=O)*)(F)F 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
- C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
- C07C323/57—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
- C07C323/58—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups with amino groups bound to the carbon skeleton
- C07C323/59—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups with amino groups bound to the carbon skeleton with acylated amino groups bound to the carbon skeleton
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
- C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C323/62—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton
- C07C323/63—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D285/00—Heterocyclic compounds containing rings having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D275/00 - C07D283/00
- C07D285/36—Seven-membered rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P11/00—Preparation of sulfur-containing organic compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
- C12P41/003—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions
- C12P41/005—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions by esterification of carboxylic acid groups in the enantiomers or the inverse reaction
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Nitrogen- Or Sulfur-Containing Heterocyclic Ring Compounds With Rings Of Six Or More Members (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Találmányunk (1) általános képletű vegyűietek új enzimatikus előállítási eljárására vonatkozik.
A képletben $
R jelentése hidrogénalom vagy alkil-csoport;
R~ jelentése valamely amino-védőesoporí;
mindegyik R3 jelentése egymástól függetlenül halogénatom, karton-·, alkoxi-karboniH alkeniloxi-karfeonii- vagy henziíoxi-karbonii-csopori; és a értéke 1 vagy 2.
Az EP Ö4Ö7Ö33 A sz, európai közrebocsátás; iratban 2-helyettesített savak - 2-halogén-pFopionsavaktól eltérő savak - észterei rácéra keverékeinek a megfelelő enantiomer savakká, történő enzimatikus sztereoszelektív 'hidrolízise került ismertetésre, A reakciót Caudlda rugósa lipáz ízoenziraek jelenlétében, szerves oldószerben ípi. íoluol) és redukálószer alkalmazása mellett végzik el Az eljárás különösen S-ketoprofen, S-ibuprofen, S-fenoproíen, S-2~fenil-proploosav ás S-indoprofen sztereoszelektív termelésére alkalmas.
Az EP öl 78553 A s:z. európai közrebocsátást iratban aromásán helyettesített L-aminosavaknak a megfelelő alkil-észterek kimotripszinnel végzett szelektív hidrolízisével történő előállítása került ismertetésre,
A DE 2804892 sz. német közrebocsátást írat szerint optikailag tiszta N-acii-L-treonín oly módon állítható elő. hogy N-aeíl-DL-treonin-észtert szerín-proíeázzal - különösen a suod lísra Carlsberg enzimmel - bidrolízálnak.
Az irodalomban az (!) általános képletű vegyűietek előállítására szolgáló enzimatikus reakciót nem írtak le.
Az (I) általános képletű vegyűietek kémiái hidrolízissel történő szintetikus előállítása alacsony kitermeléssel végezhető el és a reakció során a kiindulási anyag elbomlik.
ti s*í *
Találmányunk célkitűzése új és inventiv eljárás kidolgozása helyettesített 2-amino~3•(2-amlno-fer>ílszulfanil)-propionsavak előállítására.
A fenti célkitűzést a találmány szerinti áj eljárással érjük el.
Találmányunk tárgya új eljárás (I) általános képletű helyettesített 2-ammo-3-(2-amino-fe rdlszulfanílj-propionsavak előállítására [mely képletben
R jelentése hidrogénatom vagy aikikcsopon;
R“ jelentése valamely amino-védöcsopork mindegyik R5 jelentése egymástól függetlenül halogénatom, karboxk, alkoxi-teboník, alkeniioxi-karbonik vagy benziíoxi-karbonU-csoport; és n értéke 1 vagy 2] '3 ' oly módon, hogy valamely (Ti) általános képletű vegyületet: (mely képletben R\ RT R e n jelentése a fent megadott és R' jelentése alkil- vagy benzil-esoport) valamely szerves ko-oldószert tartalmazó vizes rendszerben valamely profeázzal reagáltattmk.
A találmány szerinti enzlmaukus eljárással az észterek szelektív hidrolízise enyhe reakciókörülmények között végezhető el.
A szerkezeti képleten feltüntetett ékalakű kötés (-«* ) azt jelenti, hogy papír síkja felett helyezkedik el.
szubszthuens a
Az alkíkesoport” kifejezésen adott esetben helyettesített egyenes- vagy elágazó-láncú
1- 12 szénatomot tartalmazó szénhidrogén-csoportok értendők, pl. metik, etil-, n-propil-, tzopropll-, n-butíh, szekunder bűül-, izobutíi-, tercier-butik, pentik, hextk, hepdk, oktil· uonlk, deci!-, uadecik és dodecikcsoporí, beleértve a különböző izomereket
Az alkíl-Iáne előnyösen egy-három halogénatommal (pl. fluor- vagy klóratom} vagy 1-4 szénatomos alkoxi-csoporttal (pl. metoxi- vagy etoxi-esoport) lehet helyettesítve. A helyettesített alkikcsoportok közül pl. a 2-klőr-etik, 2-fíuor-etíl-, 2,2,2-trifiuor-etih vagy
2- metoxi-enl-csoportot említjük meg..
.4 •ü k‘ **.·♦ * Φ <
·#; Α,’ **’» í \p
Az R? helyén levő alkii-csoport előnyösen egyenes- vagy etágazóiáncú 1.-7 szénatomos szénhidrogén-csoport lehet. Az R1 helyén levő alkil-csoport jelentése különösen előnyösen meol-, etil-, propil-, izopropil-, n-butii-, szekunder butil-, IzobutH- vagy tsreier-butii-csoport.
Az R' helyén levő alkh-esoport fenti definíciónak megfelelő alkil-esoportot jelent, előnyösen adott esetben helyettesített egyenes- vagy elágazóláneű 1 ~7 szénatomot tartalmazó szénhidrogén-csoportot. Az alkll-lánc előnyösen egv-három halogénatommal, (pl. fluorvágy klótatom) vagy 1-4 szénatomos aikoxAcsoporttal (pl. metoxí- vagy etoxi-csoport) lehet helyettesítve. A helyettesített alkil-csoportok közöl ph a 2-klőr-eth-, 2-fiuor-etíí-, 2,2,2-tri.fíuor-etil- vagy 2-metoxi-etif-csoportot említjük meg. Áz R4 helyén adói-csoport még előnyösebben egyenes- vagy elágazőíáncú 1-7 szénatomot vagy 1-4 szénatomot tartalmazó alkil-csoport. lehet, pl. metll-, etil-, propil-, η-buiil-, n-penti!-, n-hexib, n-heptü-csoport. Különösen előnyös amelik etil- vagy propil-csoport, Az.R‘ helyén levő·-alkil-csoport legelőnyösebben metil-csoport lehet.
Az “amino-védőcsoport kifejezés, a pepiid kémiában leírt, az amino-cso-port megvédésére szolgáló csoportokra vonatkozik. Hivatkozunk az alábbi irodalmi helyre; Green T; Pröiaerive G/mgpx ü? öngmne éhvkáeAy 5. fejezet, Jolin Wtley and Sons, Inc,, 218-287, oldal (1981). Az amino-védőcsoport pl. alliloxi-karbonil-esoport (ALLOC), kis szénatomszámú alkoxí-katbonibesoport (pl íercier-bnfoxi-karbonil-esoport (i-BOC)], helyettesített kis szénatomszámú alkoxi-karhoníl-esoport (pL triklőr-etoxi-karborál-csoport), adott esetben helyettesített áriloxi-karbonibesöpört [pl. p-nitro-benz.iloxl-karbonU~eso~ port, benzifoxi-karbonil-csoport (Z) vagy fenoxi-karboml-esoport], alkanoií-csoport (pl. form.il-, aeeíii-esoport), aroii-csoporf (pl. benzoíl-csoport), halogén-alkanoil-csoport (pb írifiuor-aeetil-esoport} vagy valamely szílil-védöcsoport (pl. terder-butíl-dímetíl-sziin-csoport) lehet, Blőnyös amíno-védőcsoport a benziloxi-karboml-, tcrcier-butoxí-karboníl-, alliioxi-karbonil” vagy benzoíl-csoport; különösen előnyös amíno-védőesoport a terc íer- butoxi - karbont 1 -csoport.
Az dkoxt-karbonil-csoport kifejezésen karbonü-esoporthoz (>O0) kapcsolódó 1-7 szénatomos alköxi-csoportok értendők. Az.alkoxi-csoport pl, meroxi-, etoxi-, n-propoxi-, ízopropoxi-, π-bntoxi-, 1-szekandér-hutox.i-, izobutoxi-, tercier-butoxi-, pentoxi-, hexiloxi~ vagy heptüoxi-csoport lehet, beleértve a különböző Izomereket. Az alkoxi-karbonil-csoportok közül pl. a meíoxi-kafecml-, etoxi-karboníl-, propoxi-karboníl-, tereier-bntoxí-karbonil-csoportot és más hasonló-csoportokat említjük meg. Előnyös kis szénatomszámú alkoxi-karbonil-esoporí a tercier-buíoxi-katbonil-csoport.
Az ^alkenílo-xi-karbonii-csoport” kifejezés karbonihesopörthoz (>C”Ö)- kapcsolódó alkeniloxl-esoportokra vonatkozik. Az aikeről-csoport'’ kifejezésen belyettesít-etlen vagy helyettesített, 2-8 szénatomok előnyösen 2.-4 szénatomot és legalább egy olennes kettőskötést tartalmazó szénhidrogén-csoportok értendők, beleértve a különböző izomereket. Az alkenll-csoportok példáiként a vínil-, allil- és izopropenil-csoportot említjük meg.
Az R' helyén levő alkernloxi-karbonil-csoport előnyösen Izopropsniloxi-karhoníl-csoport, még előnyösebben alliloxi-kartíoail-csoport lehet.
A halogénatom kifejezés a fluor-, klór-, bróm- és jöoatomot öle előnyösen bróm atom lehet.
fel. A halogénatom n értéke 1 vagy 2, előnyösen L •i
Az R·' helyettesítő a fenil-gyűrü bármely lehetséges helyzetéhez kapcsolódhat. Ha n -érté•v ke I, úgy R a femi-gyürü 3-, 4-, 5- vagy 6-helyzetshez kapcsolódhat Az R.’’ helyettesítő előnyösen a 4-heÍyzetben kapcsolódik. Ha n értéke 2, úgy a két KÁ helyettesítő egymástól függetlenül a feníl-gyűrü 3-, 4-, 5- vagy ó-helyzetéhez kapcsolódhat.
Találmányunk előnyős foganatosítást módja eljárás (1) általános képletü vegyületek előállítására, nzzoZ/e/fe.wzvg, hogy valamely (H^j-általános képletü vegyülethől indulunk ki (ahol R?, RÁ RÁ RÁ és n jelentése a fent megadott).
Találmányunk további előnyös kiviteli alakja, szerint
R{ jelentése hidrogénatom vagy alki besöpört; előnyösebben R* jelentése hidrogénatom;
> o, .
R~ jelentése valamely amino-védőcsoport; még előnyösebben R“ jelentése valamely amíno-védőcsoport,;
mindegyik R szuhsztituens jelentése egymástól függetlenül halogénatom, karboxí- vagy elkeni loxi-karboni 1-csoport;
4
R jelentése alkil- vagy benzil-csoport; előnyösebben R' jelentése alkíl-csoport; π érteke 1 vagy 2; előnyösebben n értéke 1.
A találmányunk tárgyát képező eljárás előnyös foganatosítás! módja szerint a szerves ko-oldöszert. tartalmazó vizes rendszerben proteázzal történő reakciót 4,0 és lü közötti pH értéken, előnyösen 6,0-8,5 pH értéken végezzük el.
A (11) általános képiéin szubsztrátnm enzimatíkus hidrolízise után az en&nnomer-tíszta (1) általános képletű vegyüietet. megsavanyitással és azt követő extrakeiőval választjuk el
A (II) általános képletű vegyüietet a L- vagy D-enantiornerek bármely lehetséges keveréke formájában felhasználhatjuk, A reakciót előnyösen raeém keverék vagy csak az L-ixomert tartalmazó keverék felhasználásával hajthatjuk végre.
Az izomer-keverék felhasználása esetén a reagálaüan D~észtert a reakeióközeg megsavanyitása előtt extrakeíos lépéssel távohtjuk eh maid az L-savat extraháljuk.
A reakciónál katalizátorként az alábbi enzimeket alkalmazhatjuk: proteázok, előnyösen mikrobás eredetű olcsó proteázok, előnyösebben Racihus-proteázok (pl, a Novo Nordísk cégtől beszerezhető Savinase) vagy sufetiíisinek, pk subtilisin Carlsberg (a Novo Nordlsk cégtől beszerezhető Áikalase) vagy a Solvay cég Protease-l terméke vagy Aspergillus proteázok (pl. az Amano cég Prozyme 6 terméke) vagy Trííachíum proteázok (Pinka cég Froteinase K terméke), A reakciónál enzim katalizátorként legelőnyösebben subtilisin Carísbergel alkalmazhatunk (pl. a Novo Nordlsk cég Alcalase terméke).
Alternatív módon rögzített formában levő enzimeket alkalmazhatunk.
A reakciót ko-oldőszert tartalmazó vizes rendszerben végezzük el. K.o~oldószerként pl. vízzel nem elegyedő oldószereket vagy vízzel elegyedő szerves ko-oidőszerekeí alkarφ·»
* ΦΦ * Φ X X ΦΦχ« χ7 mázhatunk, A vízzel nem elegyedő-oldószer a vizes fázissal bármely arányban alkalmazható; az előnyős arány 25:75 térfogat/térfegat%. A vízzel elegyedő szerves- ko-oldószert. olyan mennyiségben alkalmazhatjuk, amelyet az enzim még elvisel; a vízzel elegyedő szerves ko-oldószer mennyisége általában 5-25 térfogat/térfogatóá, azonban akár 50 térfogat/tértogat%-ig is emelkedhet pl a subdlism Carlsberg esetében.
A reakciót 0-5Ö °Chőmérsékleten, előnyösen 15-40 °Oony legelőnyösebben végezzük el.
15-23 C-on
Vizes fázisként a biokémiai átalakításoknál ismert szokásos putTer oldatok alkalmazhatók, pl I mólos koncentrációig nátrium- vagy kálium-foszfát, előnyösen kb. 5 mM és kb. 50 mM közötti koncentrációié nátrium.- vagy kálium-foszfát. Az ilyen felhasznált puffer oldatok valamely további szokásos sót tartalmazhatnak, pl, nátrium- vagy kálium-klorídot vagy htium-rodaní-dot, nátrium-szulfátot, vagy valamely többértékű alkoholt, pl, cukrot; e további só vagy cukor koncentrációja 1 M értékig terjedhet.
Szerves ko-oldőszerként szokásos szerves oldószerek alkalmazhatók, pl. éterek [pl tetrahidrofurán (THF)-, dioxán vagy tercier-butil-metíl-éter (TBME)], kis szenatomszámű alkoholok, észterek (pl etil-acélát), poláros aprotikus oldószerek [pl dímetil-szulfoxld (DMSO), dimetll-acetamid, N.N-dlmeíil-formamid (DMF) vagy acélon} A szerves ko-oldószerek közül előnyös a tetrahiároforán (THF), tercier-buti l-metil-éter (TBME) és az etll-acetát.
A kis szénatomszámé alkohol” kifejezésen egyenes- vagy elágazóláncú 1~§ szénatomot és egy hidroxíl-csoportot tartalmazó .alkíl-csoportok értendők, pl metanol, etanoi propánok izopropanok butanol, izobutanol, tereier-butanol, pentánok hexanol, heptanol vagy oktanol; előnyösen metanol, etanoi, propanol, Izopropanok butanol, izobutanol vagy tereier-butanol; még előnyösebben metanol vagy etanoi
A szubsztrátnmot ö. 1-25 tómeg/tömeg% összkoncentrációjú oldat formájában alkalmazzuk. Az összkoncentráeiö még előnyösebben 1-10 %>
Az enzim hozzáadása után a reakcióelegy pH-ját erőteljes keverés közben valamely bázis ellenőrzött hozzáadása mellett a kiválasztott pH-értéken tartjuk; Bázisként előnyösen vizes nátrium-hldroxid- vagy kálium-bidroxid-oldatot alkalmazhatunk..
A reakció befejeződése után az enantiomer-tiszta (í) általános képletü vegyüietet szokásos módszerekkel dolgozzuk fel, általában a fázisok szétválasztása, a vizes réteg megfelelősavval történő megsavanyltssa, majd megfelelő szerves oldószerrel végzett extrakclö útján.
Az (I) általános képletü vegyületek a találmányunk tárgyát képező eljárással magas- enantiomer-íisztasághan szintetlzálhatők, Ez 90 %-os vagy magasabb enantíomer-tisztaságot, előnyösen 95 %-os vagy magasabb enantíomer fölösleget jelent
A (Π) általános képletü vegyületek. az 1.. reakciősémán feltüntetett vagy az irodalomból ismert szokásos módszerekkel állíthatok elő.
Az 1 - reakciősémán R , RA fö* és Rl* jelentése az (I) és (II) általános;
épletnél megadott.
Az I. reakcióséba szerint valamely (a) általános képletü 2-nitro-huor-benzobszánnazékoí valamely (b) általános képiéin védett eiszteinne! (pl. B-ÖC-cisztein-metil-észter) reagálíatunk és Ily módon a megfelelő (c) .általános képletü .nitro-fenil-heívettesített védett ciszteint kapjuk A reakciót előnyösen bázikus körülmények között (pl. düzopropil-amin vagy etil-diizopropil-amin) jelenlétében, megfelelő szerves oldószerben (pl. hexán, düzopropil-éter, etil-acetát, metanol, etanol, propánok diklór-metán, dimetil-formamid vagy dímetil-szulfoxid) végezzük el. A reakciót előnyösen -30 !>€ és Ή 50 °C közötti hőfokon hajtjuk végre. Legelőnyösebben oly módon járunk el, hogy a reakciót BOC-clsztein-metil-észterrel etanolban etíl-díizopropil-amin jelenlétében 110 °C-on végezzük el.
Az (a) általános képietű vegyületek és a (b) általános képletü védett clszteinek (pl. BOC-cisztem-metil-észter) a kereskedelmi forgalomban beszerezhetők, vagy a szerves kémiából ismert módszerekkel állíthatók elő, lásd pl. az alábbi szerves kémiai kézikönyvet:
Marsh (1992), Advanced Organic Chemistry: Reactlons, Mechanisms, and Sítuctore,
4. kiadás. John Wi.ley & Sons,
Az I. reakciósémán feltüntetett eljárás 2. lépésénél a (c) általános képiem nitro-fenll-helyettesített védett ciszteínben levő· nítro-esoport redukciójával a megfelelő (Π) általános képietű amino-íénikbelycttesíteű védett ciszteint állítjuk elő. A redukciót az irodalomból Ismert módszerekkel hajthatjuk végre, pl, az alábbi szerves. kémiai kézikönyvben ismertetett módon: J. March (1992), Advanced Organic Chemisny: Reactlons, Mechanisms, and Structure”, 4. kiadás, John Wiley & Sons. A reakciót előnyösen megfelelő redukáiószerrel (pl. cink és adott esetben ammónlum-klorid) savas közegben szerves oldószeres közegben (pl. hexán, diizopropil-éter, etil-acetát, metanol, etanol, propanol, diklőr-melán, dimetií-íbnnamid, dimetil-szulfoxid, előnyösen metanol) hajthatjuk végre, A reakcióhőmérséklet előnyösen -3Ő °C és Ή 50 °C: közötti érték.
A (H) általános képietű amino-fenil-helyettesített védett ciszteinekben levő -amino-csoportót valamely R yHal általános képietű vegyulettel alkilszhetjük (ahol Rí jelentése a fent megadott és Hal jelentése klór- vagy brőmatom).
A (H-a) és (Π-b) általános képietű vegyületek új közbenső termékek, amelyek szintén találmányunk tárgyát képezik.
Az (I) általános képietű vegyületek 1,5-benzotiazepÍnek szintézisénél sokoldalúan felhasználható építőkövek. Az ilyen benzottazepin-vázas vegyületek különböző enzim inhibitorokban (proieáz, interleukin-IŐ-áfaíakitó enzim, elasztáz vagy angiotenzin-átahkító enzim) mesterséges dipeptíd mimetíkumkéní. valamint OPCR antagonistaként (kolecísztokinin,. angiotenzin II receptor) alkalmazhatók. Különböző felhasználások az alábbi irodalmi helyen kerültek Ismertetésre: ö.C. Monon és tsaí: Tér. Led., 41. 3029-3033 (2000).
i z j
A benzotiazepínek előállítását a 2. reakciósémán tüntetjük tel (ahol RR“, R~ és n jelentése az (I) és (II) általános képietű vegyületeknél megadott).
Á (Hl). általános képletű feenzotiazeplneket az (I) általános képletű vegyületek győtüzárásavai állíthatjuk elő. A ciklizácíős reakciót termikusán vagy megfelelő reagens jelenlétében végezhetjük el (lásd pl G.C. Monton és tsar. Zár. lett, 41, 3029-3033 (2000)}. A reakciót előnyösen valamely karhodhmiddel, megfelelő oldószerben (pl. hexán, xilol, diizopropíl-éter, etibaoeiát, metanol, etanoi, propánok díklór-metán, dímetil-fbrmamíd vagy dímetil-szulfoxid) végezhetjük el. A reakcíohömérsáklet előnyösen -30 °C és -5-150 ¾ közötti érték, A reakciói előnyösen szobahőmérsékleten dlmetil-formamídban EDAC [ 1 -etil~3“(3-d}tóet.llamme-propíl)-karbtxlimud-hldroklorid] jelenlétében végezzük el.
Találmányunk további részleteit az alábbi példákban ismertetjük anélkül, hogy a találmányt a példákra korlátoznánk.
A példákban használt rövidítések jelentése a következő:
IS.P-MS ion spray pozitív tömegspektroszkőpia
ISN-M'S bn spray negatív tömegspektroszkőpia
EI-MS elektron ímpafct íömegspekíroszkőpia
SFC szuper kritikus folyadékkromaíografálás
NMR mag mágneses rezonancia spektroszkópia
ÍR infravörös spektroszkópia
HV magasvákuum
L példa (Kiindulási anyag előállítása)
Az (1) képletű (S)-3-(4-bróm-2-njtrO’-fénibz«IfanIí)-2-tercier-butoxikarbenil-ammo~pr ο pionsav-m éti t-észier
A reakciót a MLR. Schwarz és tsak J. 66-g, Cke/n., 64, 2219-2231 (1999) közleményben leírt módon végezzük el
27,3-8 g (115,35 tnillimől, 1 ekvivalens) kereskedelemben beszerezhető BOC-ciszteín-metií-észter és 4,4 ml (25,75 rmlltmól, 2,5 ekvivalens) N-eti.l-diizopropil-amin 310 ml etanollal képezett oldatához 25,62 g (116,45 míllímót 1 ekvivalens) 5-bróm-2-0uor-mtro-benzolt adunk. A reakcióéi egyet 1 10 °C-on 3 órán át hevítjük. A reakció előrehaladását HPLC úton. követjük nyomon.. Az oldószert eltávolítjuk, a visszamaradó vörösesbarna olajat 600 ml víz és 3x300 ml etil-aceíát között megosztjuk, nátrium-szulfát felett szárítjuk és bepároljuk. A nyersterméket · ciki ©hexánból átkristályosítjuk. Sárga kristályok alakjában 38,75 g cím szerinti vegyületet kapunk, kitermelés 77 %.
Analitikai adatok;
WnMR (CDCÍ3í 400 MHz); 1,430 (s, 9H, O(CH3)); 3,3.50 (dd, 1H, H(4f), J4M- - 5,2
Hz, J4«_5 - 14,4 Hz); 3,500 (dd, 1H, H(4},: J4M- - 5,2 Hz, J4«„5 - 14.4 Hz); 3,755 (s, 3H),
OCH3); 4,621 (m, 1H, H(5)); 5,301 (d, 1.H, H(ó), J6_5 - 6,4 Hz); 7,449 (d, 1H, H(l),
J{„2 8,8 Hz); 7,670 (dd, Hí, H(2), }μ2 - 8,8 Hz, J2-3 = 2,0 Hz); 8,278 (d, 1H, H(3>,
J2.3 2Hz). ÍR; 3353 cm’x (HH); 1.765 cm’x (észter-0=0); 1686 cm'5 (karbamát
-OO); 1546 cm5 (amid -OO); 1460 és 1329 ®‘ (NO2); 1220 cm~! (észter).
MS: m/z ™ 452,3 (M % NH4'] 79Br, m/z - 454,3 [M + Nll/j S1Br, m/z - 457,3 [Md-Na*] 7 Q & >
' Br, m/z - 459,3 [M t Na ] xBr. Rf ~ 0,38 1 ;2 arányú etibacetát/hexán. eíegyben, szilíciumdioxidon.
A (2) képletű (S)-3~(2-ammO“4-bróm~feníbzulfanil)~2-tereier~bntoxíkarbonil-aminO”
-propionsav-metíbészter
A reakciót a 1 Slade éstsafc J. M&d. Ckem.y 28, 1517-1521 (1985) közleményben leírt módon végezzük el.
40,34 g (92,6 milli-mól, 1 ekvivalens), az I. példa szerint előállított (1) képletű nitro-vegyület és 19,81 g (370,6 mlllimók 4 ekvivalens) mmiónlum-klorid elegyéhez 79,37 g (1,204 míilimól, 1.3 ekvivalens)-cinket 950 ml metanolban adunk'. Á reakcióeiegyet 16 órán át visszaíolyató hűtő alkalmazása, mellett forralj uk,.majd Celíten átszűrjük, forrásban levő metanollal mossuk és bepároljuk. A nyersterméket etil-acetát és vizes uátrium-hldrogén-.karbonát oldat között megosztjuk. A visszamaradó olajat etil-acetát/feexánS· % trietil-ámin elegy felhasználásával kromatograíáljnk.. 21,11 g cím szerinti vegyűietet kapunk, kitermelés 56
Analitikai adatok:
rH-NMR (COC-b, 400 MHz): 1,395 (s, 9H, 0(CH3));. 3,185 (d, 2H, H(4), J4,5 - 4 Hz); 3,617 (s, 3H, OCEh); 4,446 (s, 2H, H(7)); 4,528 (m, IH, H(5)); 5,502 (d, IH, H(6)s 1^5 - 8 Hz); 6,793 (dd, IH, H(3),. J3_2 “ 2 Hz, - 8,4 Hz); 6,868 (d, IH, H(3),
J3„2 « 2 Hz); 7,225 (d, IH, HŰ), Jfoe ~ M Hz). ÍR: 3356 cm*1 (-NH2, ~NH); 1744 cm'1 (észter-C~O); 1707 enf (karhamát ~C~:O); 1504 cm'1 (amid); 1250 cm*! (észtet).
MS: m/z - 405,3 (Μ + Hl 7% m/z- 407,3 [Μ- H*] §1Br, Ry- 0,47 1:2 arányú etil-aeetát/hexán elegyben, szilieiumdioxidon.
3.1. példa (Nagyméretekben végzett enzimaiikus hidrolízis)
A (3) képletű (S)”3-(2~amihő-4-forőm-fendszolfönű)~2-ferder-butoxÍkarbonil-amíno-propi on sav
19,9 g (48,02 miHimól) N-tercier-butoxikarbonil-3-(2-amlno-4-b.róm-femltio)-L~alanm-metii-észtert (97,3 %-os) 750 ml tercier-butikmetii-éterhen oldunk és erőteljes keverés közben 3 liter puffe-oídatban (0,1 M nátrium-kloríd, 20 mM nátrium-foszfát, pH 7,5) emulgeálunk. Ezután 12,0 ml Álcalase 2,4 L-t és 30 mg Substllisin A-t adunk hozzá (mindkét enzimkészítmény a Nőve Nordisk cégtől beszerezhető subtilisln Carlsberg) és a ρΗ-t erőteljes keverés közben 1.0 n nátdum-hidroxíd oldat ellenőrzött hozzáadásával (pH-statikus) 7.5 értéken tartjuk. Hét nap alatt 44,75 ml 1,0 N nátrium-hidroxld oldat fogy el. Az átalakulás mértéke >99 %· (HPLC- analízis). A kétfázisú reakciőelegyet szétválasztjuk. A vizes réteget a kismennyiséghen jelenlevő lípoítl szennyezések és a maradék szubsztrátum nyomainak elválasztása céljából I liter tercier-butil-metil-éterrel rövid ideig mossuk. Az egyesített szerves fázisokat 1x250 ml 0.1 M nátrium-foszfát puffertel (pH
7,6) extraháltak. Az egyesített, vizes fázisokat 32 %-os sósavval pH 2 értékre savanyítjuk és 1,5 liter etil-acetáttai extraliáljuk, A kapott emulziót keverés közben W %-os DlcaUte hozzáadásával elválasztjuk, majd szűrjük. A vizes réteget 2x1 liter etil-acetáííal extraháljuk. Az egyesített etii-aeetátos fázisokat vízmentes nátrium-szrdíát felett szárítjuk és bepá mijük. A maradékot diklór-metánban oldjuk, bepároljuk és magasvákuumhan szárítjuk. Világossárga szilárd, anyag alakjában IS,79 g N-toroÍer-butoxikmt>onil-3-'(2.-amino-4-feróm-femltioj-L-alanínt kapunk. Kitermelés 81,8 %,
Analitikai adatok.:
hd-NMR <CDCl3, 400 MHz) : 1,399 (s, 9H, OC(CH3)); 3,184 (dd, 1H, SCH2,1 - 14,2 Hz, J - 6,6 Hz); 3,235 idd, 1.H, SCHk1:::: K2 Hz, I - 6,6 Hz); 4,515 (m, 1H, COCHNH); 5,517 (d, 1H, CONBCH, J - 6,8 Hz); 6,796 (dd, IH, arom., 1 - 2 Hz, J -8,4 Hz); 6,876 (d, 1H, atom., J ~ 2 Hz); 7,25(1 (d, IH, arom., 1 ~ R,4 Hz). ÍR (ATR4R) 3445 és 3355 cm1 (-ΝΉ, -MI2); 2978 és 2929 cm1 széles (-COOH); 1693 cm’1 (COOH -0-0, karbamát -C~O); 1508 cm ! (amid-CO-NH); 1247 és 1157 cm1 (COOH),
MS (ESí-pozitív ionizáció) m/z -391,1 (M < H ‘ ' 9Br, m/z - 393,1 (Μ. < H' ] 81 Br; m/z - 413,2 {M - Na'l 798r, m/z - 415,2 (M * nV] 85Br. OR [afo - <53,3 Ö(€HCÍ3; c1,0). HPLC analízis: oszlop; ABZ+ptusz; mozgó fázis: A: 0,1 % TFÁ vízben;
B; MeCN; gradiens B: 30-80 % 0-15 perc, 80-30 % 15-16 perc, 30 % 16-19,5 perc; áramlás: 1 ml/perc; nyomás; 50-80 bar; kimutatás; UV, 300 nm; retenciós idő: 12,1 perc (termék sav) 13,5 perc (szubsztrátum-észter),
3.2. példa (Rbméreíekhen végzett, enznnatikes hidrolízis) (S)-3-(2”Amino-4-foróm-fenilszulfeníl)-2~tcrcier-butoxikarbonil-a«nno-proplonsav
1,65 g (3,99 millíméi) Ntercier-butoxikarhonÍI-3-(2-ammo-4-bróm-feniItío)-L-al3nin-metil-észtert (98 %-os) 65 ml tercier-butii-mehl-éterben oldunk és erős keverés közben, 240 ml puffer-oldatban (Ö, 1 M náírlnm-kloríd, 20 mM nátrium-foszfát, pH 7,5) emuigeálunk. Ezután 0,75 ml Álcalase 2,4 1,-1 (aNovo Nordisk cégtől beszerezhető subtílisín Carisfeerg) adunk hozzá és a pH.-t. 1,0 n nátrium-hidroxid oldat, erős keverés közben végzett ellenőrzött hozzáadásával (pH-statikus) 7,5 értéken tartjuk. Harminchárom óra után 4,23 mi 1,0 n nátrium-hidroxidoídat fogy. Az átalakulás mértéke>99% (HPLC analízis). A reakeióefegyet 32 %-os sósavval pH 2 értékre savanyítjuk és Decalíten átszűrjük. A fa14 zisok szétválasztása után a vizes réteget 3x275 ml edl-acetáttal extraháljuk. Az egyesített szerves fázisokat vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk és bepároljuk. A maradékot díkíőr-metánban oldjuk, bepároljuk és a. maradékot magasvákuumban szárítjuk,. Halványsárga szilárd anyag alakjában 1,56 gN~tercseE-butoxikarboníí-3-('2.-amino-4~bróm-feníltío}-L-alanmt kapunk. Kitermelés 99,8 %,
3.3. példa (Különböző oldószerekben végzett enzimatikus hidrolízis) (8)-3-(2 ~zAmíno~4-brőm-fenibzuÍfanil)~2-tercíer“bníöxíkarbonil-amino~propíonsav
100 mg (0,242 millimői) N-tercier-butoxikarbonU-3-{2-ammo-4~bróm-femItío).-L-aíamn-metil-észtert erőteljes keverés· közben 20 % szerves ko-oldószerből (lásd az alább? táblázat) és 80 % paffer-oldatből (0J M nátríom-klorid,. 3 mM nátrium-foszfát,. pH 7,5) álló rendszerhez adunk, Ezután 100 μΐ Aleaiase 2,4 L-t (a Növő Nordísk cégtől beszerezhető S'uötílisín Carlsberg) adunk hozzá és a pH-t 0,1 n nátrium-hidroxíd oldat erős ke verés közben történő ellenőrzött hozzáadásával 7,5 értéken tartjuk. A reakció végén az átalakulás mértékét HFLC segítségével határozzuk meg.
| i Szerves ko-oldószer ; teljes reakcíótérfogat | Konverzió3 %-ban | Meglelek |
| etü-acetát, i 20 ml | -59% | bázis fogyasztás kimerült (>20035) és a reakció tökéletlen |
| THF, 50 ml | >97% | 24 mg (0,058 mii űrnél) szubsztrátum és 50 ul Alcalase |
| TBME, 25 ml | >9993 |
a Áz átalakulást a 300 nM mellett végzett HPLC analízis csűesterületéből számítjuk ki.
3.4. példa (Más enzimekkel végzett enzimatikus hidrolízis) (S)-3“(2-Ámíno~4-ferőm~feniÍszulíanil)~2-íereier~buíoxikarboníl~amino~propíonsav
2ÖÖ mg (0,493 miíllmól) N-tercier-bntoxíkarboníl-3-(4-bróm-2-amino-feniltlo)-L-alanin-metíl-észtert 5 ml tercíer-butil-metil-éterböLés· 20 ml puffer-oldatból (0,1 N nátriumIS
-klorid, 3 mM nátrium-foszfát, pH 7,0) .álló rendszerhez adunk erős keverés közben. Az alábbi táblázatban feltüntetett enzimeket hozzáadjuk és a pH-t 0J mnátrium-hidroxid-oldat erős keverés mellett történő ellenőrzőit hozzáadásával (pH-statikus) 7.0 értéken tartjuk., A. reakció befejeződése utána rsakcióelegyet 25 ml tercier-buűí-roetH-éíerret kétszer mossuk, 25 %-os sósavval pH 2,5-re savanyítjuk és 3x25 ml etil-acetáttal extraháíjuk.
Az egyesített szerves fázisokat nátrium-szulfát felett szárítjuk, az oldószert eltávolítjuk és a maradékot magas vákuumban szárítjuk.
| Enzim (cég) | Enzim mennyiség | Idő őrs | Elfogyasztott titrálószer ml | Termék (mennyiség; OP1.C-tisztaság) |
| Prozyme 6 (Amano | Pharmaeeurieals) | 42 mg | 44 | 4/76 | 191 mg; 92/2 % |
| j Sav.in.ase 16L j 100 ul 5 j (Növő Nordisk) | 43 | 4,969 | 195 mg: 90,7% |
A (4) képletű (S)-(7-bröm~4-oxo-23,4,5-íetrahldro~benzöífel|l,4jtÍazepin~3-ü)-k2rfeaminsav-tereier-butíl-észter
A.reakciót a G,C. Monon és .tsab feí. Lelt., 4b 3029-3033 (2000) közleményben leírt módon végezzük el.
Az enzim hídról ízirtermák (15,2 g, 38,8 mhíimói, 1 ekvivalens) és 7,44 g (38,8 millimól, 1 ekvivalens) EDAC [l-etll~3-(3~«Smetilanlno-propjí)-karbodümid-hÍdrökloridj 500 ml dimetil-fonnamíddal képezett elegyét szobahőmérsékleten 16 órán át keverjük. Areakcioelegyet bepároljuk, a maradékot 500 xnl etil-acetátban oldjuk és 500 mi 1 mólos vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal és 500 ml vízzel extraháljuk, nátrium-szulfát lelett szárítjuk és bepároíjuk. 14,5 g cím szerinti vegyületet kapunk, kitermelés kvantitatív.
Analitikai adatok:
ΊΙ-NMR (CD€I3, 400 MHz) :
1,409 (s, 9H, O(CH3>); 2,939 (t, IH, H(4;), 3 - 11,6 Hz);
*·♦
3,794 (dd, IH, fí(4), J4».5 - 11 Hz, J4M> - 6,4 Hz); 4,439 (m, IH, H(5)); 5,567 (d, 1H,
H(6), J6.5 - 8 Hz); 7,306 (d, HL H(2), J2-l = $ Hz, H-3 = 2 Hz); 7,337 (d, ÍR, R(3),
J3.2 - 2 Hz); 7,748 (ds IH, H(l), Jy2- 8 Hz); 8,042 (s, IH, H(7)). IR: 3284 és 3184 (-NH); 1729 cm ‘ (karbamát -€>0); 1678 cm (amid ~€~0); 1574 cm ' (amid); 1251 cm A (észter). MS: m/z - 373,3 [M ·< Η Ί ' Br, m/z - 375,3 [M -H-l ] lBr, m/z - 395 Ί- 79 . -r «1 |M + Na ] '' Br, m/z ~ 397 [M. ·+· Na ) Br. Rf ~ 0,23 1:2 arányú etíl-acetáí/hexán el egyben, szilielumdioxldon.
Az (5) képietü (S}~4-(2-tereier-but0xikarbonil-amínO“2-metoxikarbo.nIi-etllszulfaníl)~
-3-nitrö-benzoesav-aIíii-észter
49,95 g (269,8 miniméi, 1 ekvivalens) 4-fcor-3-nih:o-benzoesavat 350 ml metanolban oldunk, 44,06 g (135,2 millimól, 0,5 ekvivalens) cézium-karbonátot adunk hozzá és az oldószert eltávolítjuk. Ezután a cézium-sót dlmetil-fonnamldban oldjuk, az. oldatot 50 uC-ra melegítjük'és 22,8 mi (269,8 mHlímoI, I ekvivalens) allíl-bromidot adunk hozzá. Az oldószert 5 perc múlva eltávolítjuk, a szilárd anyagot díetil-éterrel eldörzsöljük, szűrjük és bepároguk. A nyers allíl-észtert kvantitatív kitermeléssel kapjuk. A következő lépést az alábbi irodalmi helyen leírt módon végezzük eb M.K. Schwarz és tsar J. í>g. Chenp, 64, 2219-2231 (1999). 30 g (133,2 midiméi, 1 ekvivalens) allil-észterhez 31,35 g (133,2 mü~ limól, 1 ekvivalens) BOC-dszíeín^metil-észtert és 68,3 ml (399,6 millimók 3-ekvivalens) DIPEA-t adunk etanolban lassan hozzá (exoterm reakció figyelhető meg). A reakcióetegyet 3 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd bepároljuk. A szilárd maradékot diizopropil-éferből áíkristályositjuk. 46,16 g cim szerinti vegyületet kapunk, kitermelés 79 %. Analitikai adatok:
jH-NMR (CDCÍ3,400 MHz}.; 1,443 <s, 9H, O(€H3)); 3,401 (dd, IH, H(?:), j7-„T - 2,4 Hz, J7vg « 6 Hz); 3,506 (dd, IH, H(7:’),: /7-7.- 2,4 Hz, J7M - 6 Hz); 3,777 (s, 3H,
OCH3); 4,608 (m, IH, H(8)); 4,860 (dt, 2R, Η(3\3''), J3.2 = 5,6 Hz; /3_j - 1,6 Hz); 5,322 (q, Hl /- 0,8 Hz); 5,347 (t, ÍH, H(P), / - 0,8 Hz); 5,406 (d, HL H(9), J9.8 - 1,6 Hz); 6,032 (m, ÍR, H(2)); 7,625 (d, IH, H(5), J5.4 - 8,4 Hz); 8,201 (dd, IH, H(4), J4.5 8,4 Hz, J4..6 - 1,6 Hz); 8,830 (d, IH, H(6), ló.4 - 1.6 Hz). IR: 3350 cm'1 (-NH);
1742 cm 1 (észter ~C~0); 1.719-cm 1 (kory. észter-CM}); 1686 cní1 (karbamát -C~0); 1523 és 1334 cm 1 (-NCH); 1 '24S cm : (észter). MS; m/z - 441,3 (Μ + H ’ ]; m/z- 458,4 |'M t NHg ]' m/z - 463,2 [M ·* Na | Rf0,40 1:2 arányú éti l-acetát/hexán elegyhen, .szilicíumdioxidon.
Á (6) képletü (S)-3-ammo-4-(2-íereier~butoxikarbonn~amino-2~metoxikarbönil-8tü szuÍfaniÍ)-benzo&sav-aHil-észter
A reakciót az alábbi irodalmi helyen leírt módon végezzük el: 3, Slade és tsaí: <7 Med, C6em,s 28, 1517-1521 (1985),
506 mg (1,15 miilímói, I ekvivalens) fenti termék, 20 ml vizes ammónium-klorid oldat és •976 mg (14,9 millimól, 13 ekvivalens) cink 15 ml dimeíil-éterrel képezett elegyet 80 ^C~on 16 órán át hevítjük. Az oldószert eltávolítjuk, a maradékot 250 mi etil-acetáíban oldjuk és 3x50 ml 1 mólos vizes nátrium-bidrogén-karbonát oldattal extraháljuk. A szerves fázist nátrium-szulfát felett szárítjuk és bepótoljuk. A visszamaradó sárga olaj néhány napos állás után kristályosodik. 276 mg. cím. szerinti vegyületet kapunk. Kitermelés 60 %. Analitikai adatok:
’H-NMR (CDCh, 400 MHz); 1,380 (s, 1H, Ö(CH3)); 3,283 (d, 2H, H(7:, 7), J?_8 - 4,4 Hz); 3,579 (s, 3H, OCH3), 4,445 (s, 2H, Hí 10’, 10”)); 4,554 (m, 1.H, H(8)); 4,787 íddd, 2H, H(2k2í:'), J - 1,2 Hz); 5,283 (dd, 1H, Η(Γ), Jr„2 - 10,6 Hz, 3r.r - 1,2 Hz); 5,390 (dd, 1H, H(l”), Jr.2 =5Hz, Jr.r - 1,2 Hz); 5,506 (d, 1H, H(9)? J<y8 - 7,6 Hz); 6,015 (m, Hl, H(8)); 7,360 (dd, IH, H(2), J4.5 - 8 Hz, J4.6 - 1,6 Hz); 7,398 (d, 1H, H(ó), J6„4 - 1,6
Hz): 7,425 (d, 1H, H(5), J5.4 - 8 Hz). ÍR: 3378 cm (-NH, -NH2); Π51 cní' (észter -€”O); 1713 cm’1 (kom. észter--€~ö): 1685 cm’ (karbamát -C~O); 1511 cní5 (-amid); 1220 cm5 (észter). MS; m/z 411,3 (M + Hj; m/z - 433,3 (M-vNa’}> Rr~ 0,27 1:2 arányú etil-acetát/hexán Hegyben, szíiiciumdíoxidon.
7.1. példa (Nagyméretekben végzett euzmmíikus hidrolízis)
A (7) képiéin (Sj-S-aminoM-CS-tercier-butoxikarbnnil-amíno-S-karboxí-etiisznnanH)-be.nzoesav-anil-észter ϊ
6,4 g <15,658 millimól) N-t€rcier-butoxikarlx>nii-3-(4~.alliloxÍkarboníl-2-amíno-femiítio)-L-alanm-metil-észtert (99 %-os) 480 ml terder-bntíí-medl-éterben oldunk és erőteljes keverés közben 1,3 liter puí&r-oklatban (0,1 M nátrium-kiorid, 160 mM nátrium-foszfát, pH 7,5) emulgeálunk. Ezután 12,0 ml Alealase 2,4 LA (a Növő Nordi.sk. cégtől beszerzett subtillsin Carlsberg) adunk hozzá és a pH-í 1 ,0 N nátríum-hidroxid oldat erős keverés mellett történő ellenőrzött hozzáadásával (pkLstatikus) '7,5 értéken tartjuk. Az Lő n nátríum-hidroxid oldatból 48,5 óra után .16,6 ml fogyott és az átalakulás mértéke >97 % (HPLC analízis). A fázisok szétválasztása után a vizes réteget 1x1 liter tercier-butil-metíl^éterrel exíraháljnk. Az egyesített terder-butu-mctil-éteres fázisokat 2x0,4 liter 0,1 mólos kálium-foszfát pufíerrel (pH 7,6) extrabáljuk. Az egyesített vizes fázisokat 32 %-os sósavval pH 2 értekre savanyítjuk és 3x0,5 liter étihacetáttal extraháljuk. Stabil emulzió képződése esetén a fázisok szétválasztását Díeaihen való átszúrással végezzük el. Az egyesített etil-acetátos fázisokat vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk és bepároljuk.,
A maradékot dikiör-metánbau oldjuk és magas vákuumban szárítjuk. Sárga nagyon viszkózus- olaj alakjában 5,85 g N-tercier-batoxrkarbonll-3-(4-al iiloxikarbonil-2~ammo~íenil~ üo)-L~aíanmt kapunk. Kitermelés 94,6
Analitikai adatok:
5H-NMR (DMSO., 400 MHz).: 1333 (s, 9H, OC(CH3)); 3,077 (dd, IH, SCH2,1« 12,8 Hz, i - 6,3 Hz), 3,238 (dd, IH, SCH2, J - 13,8 Hz, J - 4,6 Hz); 3,367 (m, IH, CÖCBNH); 4,753 (d, 2H, COOCIL, J - 5,2 Hz); 5,526 (d, 1B, CH-CH?, 3 - 10 Hz); 5,538 (d, IH, CH-CHa, 3 - 17,6- Hz); 5,595 (m, 2H, Mfe); 6,018 (ddtr, IH, CH2CH-CH2, J - 16,6 Hz, I - 10,6 Hz, J - 5,6 Hz): 6,5 í 9 (m, IH, CÖNHCH); 6,876 <d, IH, aram. CSCH, J -8,4 Hz); 7,330 (d, IH, arom, CSCHCH, 3 - 8,4 Hz); 7,333 (s, IH, áront. CHCNH2). ÍR (ATR-1R) 3420 és 3355 cm4 (-NH, -NB2); 2980 és 2935 cm4 széles (-CÖÖH); 1705 cm4 (COOH ~OÖ, karbamát -C“O); 1510 cm'' (amid -CÖ-NH); 1486 cm4 aromás; 1229 és 1160 cm4 (COOH); 982 és 932 cm’* (virul, ~C-:CH2).
M-S (BSI-pozitiv Ionizáció) m/z ~ 397,1 (Μ + H ]; m/z - 419,4 [M 4 Na' ].
OR [a](> +16,16 v (CHCl·,; c ~ 1,0). HPLC analízis: oszlop; ABZ+plus; mozgó fázis:
A: 0,1 % TFA vízben; B; MeCN; gradiens B: 30-80 % 0-15 perc, 80-30 % 15-16 perc, % 16-19,5 perc; áramlás: 1 ml/perc; nyomás: 50-80 bar; kimutatás: ÜV, 300 nm, rétén· clós idő: 11,2 perc (termék-sav); 12,7 perc (szubsztrátum-észter).
7.2. példa {Kisbéretekben végzett enzimaíikus hidrolízis) (S)~3-ÁmÍno-4~{2-tereier~fentoxíkarboöil-ab3no~2“karboxi-etilsznifaRÍl)“benzoesaV
-allil-észter
0,769 g (1,658 minimül) N-tereier-butoxíkarboníi-3-(4~alllioxikarbonh-2~amino-féniltio)-l.,-alanín-metil~észterí 40 ml terciavbuíil-metil-éierben oldunk és erős keverés közben 220 ml puSerhen (0,1 M nátriur».-klorid oldat; 3 naM nátrium-foszfát puffét, pH 7,5) emulgeábnk. Ezután 1,0 ml Aleaiase 2,4 L-t adunk.-hozzá (a Növő Nordisk cégtől beszerzett subtílísin Carisherg) és a pHA 1,0 u nátrium-hidroxid oldat erős keverés közben végzett ellenőrzött hozzáadásával (pH-statikus) 7,5 értéken tartjuk. Az 1,0 N nátrium-hidroxíd oldat fogyás 45,4 óra után 23,6 mi. és az átalakulás mértéke >97 % (HPI..C analízis). A reakcióelegyet 100 ml tercier-buól-mebl-éierrel extraháljuk. A fázisok szétválasztása után a vizes réteget 32 %-os sósavval pH 2,3 értékre savanyítjuk és 3x250 ml etrl-acetáttal •extraháljuk. Stabil emulzió képződése esetén a fázisok szétválasztását Dícaliten való átszűréssel végezzük el. Az egyesített edl-acetátos extraktumokat vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk és bepároljuk, A maradékot díklór-metánban oldjuk, bepároljuk és magasvákuumban szárítjuk, Halványsárga szilárd anyag alakjában 604 mg N-tereíer-butoxíkarbouíl-3“{4-alnloxikarbonil-2~ammo-teniltío)-L-alanint kapunk. Kitermelés 93,9 %, tisztaság 95 %·.
7,3, példa (Enzhuatíkns hidrolízis különböző oldószerekkel) (S)-3-Amjnö-4-(2-tereÍer-:bu-toxikarbonil-a'mino~2~karho-xí-et»'lszö.lfan.0)-benzeesav-aHO-észter
200 mg (0,487 milltmói) N-tereÍer-bumxikarboml~3-(4~aniloxíkarbonil-2-amino-leniltío)-1,-aianin-metíi-észtert (96,7 %) 2-5 mí szerves: ko-oidőszerböl (lásd az alábbi táblázat) és 20 ml púder-oldatból (0,1 M nátri'um-kiorid, 3 mM nátrium-foszfát, pH 7,0) álló rendszerhez adunk erős keverés közben. Ezután Aleaiase 2,4 L-t (aNovo Nordisk cégtől beszerzett subtilisin Carlsberg; mennyiségét lásd az alábbi táblázatban) adunk hozzá és a pH-t 0,1 n nátríum-hidroxid oldat erős keverés közben végzett ellenőrzött hozzáadásával (pH-siaílküs) 7,0 értéken tartjuk, A reakciót a titrálószer fogyásával követjük nyomon és a termék képződését HPLC úton határozzuk meg.
| Szerves ko-oldószer, mennyiség | Akalase, mennyiség | - ---- ,.--------------------------- Idő Megjegyzések óra |
| elánok 2,0 ml | 100 pl | 72 titrálószer fogyás a reakció | végén; 115 % |
| acélon, 5,0 ml | 200 pl | 171 titrálószer fogyás a reakció | végén; 1.03 % |
| THF, 5.0 ml | 100 pl | 146 | titrálószer fogyás a reakció | végén: 98 % |
| TBME, 5,0 ml | 100 pl | 72 [ titrálószer fogyás a reakció | végén: 119 % |
7.4. példa (Enzimatikus hidrolízis más enzimekkel) (S)-3~.ÁmínO”4-(2-fereicr~butoxíkarbonil-an.bno-2-karboxi-efíisz«ifani1)-benzö€sa¥-albi-észíer
200 mg (0,487 millimól) N-tereíer-butoxikarbonil-3-(4-aniloxikarboníI-2-amino-fehiltio)-L-alanin-metil-észtert (96,7 %-os) 5 m! tercíer-butil-metil-éterből és 20 ml puffer-oldatbői (0,1 M nátríunt-kiorid, 3 ntM nátrium-foszfát. pH 7,0) álló rendszerhez adunk erős keverés közben. Ezután az alábbi táblázatban feltüntetett enzimeket -adjuk hozzá és a pH-t 0,1 N nábinm-hidroxid oldat erős keverés· közben végzett ellenőrződ hozzáadásával (pH-statíkus) 7,0 értéken, tartjuk- A reakciót a titrálószer fogyásával követjük nyomon és a tennék képződését HFLC úton határozzuk meg.
| Enzim (cég) | Enzim mennyiség | idő óra | Megjegyzések |
| Frozyme 6 (Arnano Pharmaeeuticals) | 50 rag | 42 | titrálószer fogyás' a reakció végén: 112% |
| Proteínase & (Fluka) | 25 mg | 137 | lassú; 137 -óra után a titrálószer mennyiségének csak 40 %-a fogyott (az elméleti mennyiségre számítva) |
*4
Λ ?·«».·
7.5. példa (Magasabb hőmérsékleten végzett enzhnatikns hidrolízis) (S)~3-Ámíno~4~(2~fercicr~butoxikgrbonií-amíno-2-karboxí~etilszul.fanil)~benzoesav-albl-észter
200 mg (0,48 / milílmcl) N-terder~hutoxlkad>onilr3-(4-aíl.iíoxikarboníí-2-amíno-.feniíttö)•-L-alanin-meín-észtert (96,7 %-os) erős keverés közben. 40 °C~on 5 ml tercier-butil-metil-éterből és 20 ml puffer-oldatbói (ö:,l M nátrium-klori-d, 3 mM nátrium-foszfát, pH 7,0) álló rendszer adunk. Ezután. 100 pl. Alcalase 2,4 L-t (a Növő Nordisk cégből beszerezett subtilisin Carlsherg) adunk hozzá és a. pH-t 0,1 n nátrium-htdroxld oldat 40 Ύ'-οη erős keverés közben végzett ellenőrzött hozzáadásával. (pH-stahkus) 7,0 értékre állítjuk be. Miután 5,44 ml titrálószer fogyott (az elméleti értek 112 %-a; 17,4 óra után), a reakcióeiegyet 25 ml tereier-butd-metil-éterrel mossuk, 1 n sósavval pH 2,5 értékre savanyítjuk és 3x25 ml etíl-aeetáttal extraháltak. Az egyesített szerves fázisokat nátrium-szulfát felett szárítjuk, az oldószert -eltávolítjuk és a maradékot magasvákuurnban szárítjuk. 190 mg (0,479 minimál, 9S %) termék-savat kapunk, 94,5 %-os HPLC-tísztaságban (terület-%).
A (8) képletű (S)-3-terder-batöxikarbouíl-amino~4~oxo~2,3,4,5-teírahidro~benzofb](1,4]tiazepin-7-karhonsav-all0-észter
A reakciót az alábbi irodalmi helyen leírt módon végezzük, el; G.C. Morfon és tsai; Te/. M 41, 3029-3033 (2000).
Az enzim-hidrolízis termékét (5,6 g? 14,1 mlllimol, 1 ekvivalens) 7.5 ml dimetil-formamiában oldjuk, 2,70 g (1.4,1 mllllmöl, 1 ekvivalens) EDAC-t adunk hozzá és a reakeiőelegvei szobahőmérsékleten 16 órán át keverjük, majd bepótoljuk. A maradékot 500 ml ehl-aceíátfean oldjuk, maid 3x150 ml 1 mólos vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal és 3x150 ml vízzel extrahálíuk. A szerves fázist nátrium-szulfát felett szárítjuk és bepároljuk. A visszamaradó sárga olajat 1:1 arányú etíl-aceiát/hexán elcggyel kromatogratalinL Sárga kristályok alakjában 4,96 g cím szerinti vegyüietet kapunk. Kitermelés 93 %. Analitikai adatok;
H-NMR. (CDCly, 400 MHz): 1,400 (s, IH, O(CHs)); 3,014 (t, IH, H(7‘ vagy 7),
J - 12 Hz); 3,8.15 (dd, IH, H(7' vagy 7'), I7_s - 12 Hz, - 6,4 Hz); 4,466 (m, IH, *
«
Aív «
go
Η(8»; 4,835 (d, 2H, Η(3ζ 3), K2 - 5,7 Hz); 5,316 (dd, IH, H(T), J v.2 *= 10,5 Hz,.
1,2 Hz), 5,413 (dd, IH, H(H)5 17,2 Hz, JiM. - 1,2 Hz); 5,581 (d, LH, H(9),
J9„s - S Hz), 6,013 (m, 1H, H(8>); 7,338 (d, 1H, H(5), J>4:::: 1U Hz}; 7,704 (s, IH, H(IO)); 7,751 (d, IH, H(6), 1,8 Hz); 7,338 (dd, IH, H(2), J4.5 - 1.1,1 Hz, J4-ő :::: U
Hz). ÍR: 32(16 cm*1 (-NH); 1720 cm*' (karbamát -C-ö); 1671 cm’1 (amid -€~Ö); 1500 cm*1 (amid -CO»NH); 1209 cm”1 (észter). MS: m/z ~ 379,3 [Μ + H' ]; m/z - 401,4
4· (M. -t- Na ]. R.f - 0,36 1:2 arányú etil-aceíát/hexán elegyben, szilíciumdioxídcn.
Á (9) leíü (S}~3~andnO4“(2tereier“buíoxikarbonü“amino-2“karboxi~etílszulfa~
200 mg (6,540 milíimóí) N-{ercier-butoxikarboniI-3-(4-kaa’boxi~2-amino-femttio)-L-alaηΙη-ΓηΗίΙ-όχζΐοΑ erős keverés közben 5 ml tercier-butil-medl-éterből és 20 ml pufíer-oldátból (0,1 M nátrium-klorid, 3 mM nátrium-foszfát, pH 7,0) álló rendszerhez adunk. Ezután 100 μί Alcaiase 2.5 L (a Neve Nordisk cégtől beszerzett subdRsin Carlsberg) adunk hozzá és a pH-t 0,1 n nátrinm-hldroxid oldat erős keverés mellett történő ellenőrzött hozzáadásával (pH-statikus) 7,0 értékre állitjük be, A reakciőeiegyet 5,847 ml titrálószer elfogyása «tán (az elméleti érték. 108 %-a; 1,5 óra után) 2x25 mi tercier-budi-menl-éterrel mossuk, 25 %-os sósavval pH 2,5 értékre savanyítjuk és 3x25 ml etil-acetáttal extrahájuk, Az egyesített szerves fázisukat nátrium-szulfát felett szárítjuk, az oldószert eltávolítjuk és a maradékot magasvákuumban szárítjuk. Sárga kristályok alakjában 187 mg (0,479 miilimól) N-terder-butoxikarbonÍÍ-3-(2-amino~4-karboxí~íeniltlo)-L-aIanInt kapunk. Kitermelés 93,4 %.
Analitikai adatok:
í-ÍFLC-tisztaság: 96,4 % (arca). WnMR (DMSÖ, 400 MHz); 1,378 (s, $% OCÍCHs}); 2,982 (dd, IH, SCEb, 3 - 13,2 Hz, 3 - 9,6 Hz); 3,150 (dd, IH, SCbfo, 3 - 13,2 Hz, 3 - 4,4 Hz); 3,950 (m, IH, COCHNH); 5,542 (m, 2H, ~NH2); 7,067 (dd, IH, CÖNHCH, 3- 8,0 Hz, 3-1,6 Hz); 7,201 (d, IH, arom. SCCH, 3- 8,0 Hz); 7,298 (d, IH, arom. SCCHCH,
- 8,0 Hz); 7,323 (d, Hl arom. CHCNH2,3-1,6 Hz); 12,73 (széles, 2H, 2 -COOH),
ÍR: 3445 és 3347 cm'1 (-NH, -NH2); 2977 és 2930 cm*1 széles (-COOH); 1720 és 1692 cm*1 (COOH -C-Ö, karbamái -C-O); I608 cm’1 (-COO'): .1509 cm*1 (amid -CO-NH): 1486 cm 1 (aromás): 1247 és 1163 cm ’ (COOH). 1SN-MS: m/z 355,1 [Μ ~ H ]. OR [ajp - +13,00 °(EtOH;c- 1,0).
Claims (9)
- Eljárás (I) általános képletö vegyületek előállítására (mely képletben jelentése hidrogénatom vagy alkil-esoport;R“ j elentése valamely amíno-védőcsoport;mindegyik R' jelentése egymástól függetlenül halogénatom, fcarboxm alkoxi-karbonil-, alfeenitexi-karboníl- vagy benziloxi-karbonil-csoport; és n értéke I vagy 2), nzzn/ye/Zmnzve, &&gy valamely (H) általános képletö vegyüietet (mely képletben RA, RE 4R és n jelentése a Fent megadott és R jelentése alkil- vagy benzil-csoport) valamely szerves ko-szolvenst tartalmazó vizes rendszerben valamely proteázzal reagáltatunk.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, nzzo/ye//c?nem'o, Aögy valamely (HA) általános1 7 3 4 képletű vegyüietet alkalmazunk (ahol R , RE R', R és n jelentése az 1. igénypontban megadott).
- 3. Az 1. és 2. Igénypont szerinti eljárás, azzal jeMemezve, ángy olyas (Π) általános képletű kiindulási anyagot alkalmazunk, amelybenR‘ jelentése hidrogénatom vagy alkil-esoport;R“ jelentése valamely amíno-védocsoport; a mindegyik R“ szubszthnens jelentése egymástól függetlenül halogénatom, karboxú- vagy alken iloxi-karbonil-csöport;iV jelentése alkil- vagy benzíl-csoport; és n értéke 1 vagy 2.
- 4. Az I -3, igénypontok bármelyike szerinti eljárás, ózzál /«Remezve, hogy kiindulási anyagként olyan (Π) általános képletű vegyüietet alkalmazunk, amelybenR1 jelentése hidrogénatom;·>R~ jelentése valamely amíno-védöcsoport;•yR” jelentése halogénatom, karhoxíl- vagy alkeniloxi-karbonil-csoport;R' jelentése alkil-esoport; és n értéke 1.
- 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás,. .azzaf je/Zemesi-’e, hogy a reakciói 6,0 és 8,5 közötti pH-értéken végezzük el.
- 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzalyW/twezw, hogy a reakciót valamely Baeillus-proteázzal, snbtifoinneL valamely Aspergillus-proteázzal vagy valamely Tntaehiuni-proieázzal végezzük el.
- 7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azsaffetfemezve, hogy szerves ko~ - szolvensként teírabidrotitránt, dioxánt, tereier-butil-metll-étert, valamely 1-8 szénatomos alkoholt, eiii-aeetátot, dimetil-sznltóxidot, dimetil-acetamídot vagy acetont alkalmazunk.
- 8. A (11-a) vagy (fí-b) képlett! vegyület,
- 9. Az 1-7, igénypontok bármelyike szerinti eljárás, .azzal jetiemezve, hogy az (I.) általános képietü vegyületet valamely (Hl) általános képlevő benzotiazepin-származékká abkítjuk (mely képletben R , R.~, R, R és n jelentése az (I) és (II) általános képletnél megadott].
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP01122906 | 2001-09-25 | ||
| PCT/EP2002/010511 WO2003029477A1 (en) | 2001-09-25 | 2002-09-19 | Enzymatic process for the preparation of substituted 2-amino-3-(2-amino-phenylsulfanyl)-propionic acid |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0401500A2 HUP0401500A2 (hu) | 2005-02-28 |
| HUP0401500A3 HUP0401500A3 (en) | 2005-11-28 |
| HU228360B1 true HU228360B1 (en) | 2013-03-28 |
Family
ID=8178714
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0401500A HU228360B1 (en) | 2001-09-25 | 2002-09-19 | Enzymatic process for the preparation of substituted 2-amino-3-(2-amino-phenylsulfanyl)-propionic acid |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7011960B2 (hu) |
| EP (1) | EP1434870B1 (hu) |
| JP (1) | JP4359142B2 (hu) |
| KR (1) | KR100882972B1 (hu) |
| CN (1) | CN100413972C (hu) |
| AT (1) | ATE349545T1 (hu) |
| CA (1) | CA2461296C (hu) |
| DE (1) | DE60217145T2 (hu) |
| DK (1) | DK1434870T3 (hu) |
| ES (1) | ES2278061T3 (hu) |
| HU (1) | HU228360B1 (hu) |
| IL (2) | IL160527A0 (hu) |
| JO (1) | JO2426B1 (hu) |
| MX (1) | MXPA04002694A (hu) |
| WO (1) | WO2003029477A1 (hu) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8765817B1 (en) | 2008-12-03 | 2014-07-01 | Arrowhead Center, Inc. | Selective inhibitors of EG5 motors and methods of use |
| US8349899B1 (en) | 2008-12-03 | 2013-01-08 | Arrowhead Center, Inc. | Selective inhibitors of EG5 motors and methods of use |
| DK3067430T3 (da) * | 2013-11-01 | 2020-09-21 | Glytech Inc | Fremgangsmåde til fremstilling af d-form-eller l-form-aminosyrederivat med en thiolgruppe |
| CN104404098A (zh) * | 2014-12-15 | 2015-03-11 | 苏州汉酶生物技术有限公司 | 一种硫辛酸的生物制备方法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2804892A1 (de) * | 1977-02-09 | 1978-08-10 | Procter & Gamble | Verfahren zur herstellung von l-threonin und dessen n-acylderivat |
| DE3438189A1 (de) * | 1984-10-18 | 1986-04-24 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur herstellung aromatisch substituierter l-aminosaeuren |
| CN87108140A (zh) * | 1987-12-17 | 1988-10-19 | 山西省生物研究所 | D-α氨基酸类物质的制造方法 |
| US5106750A (en) * | 1988-08-30 | 1992-04-21 | G. D. Searle & Co. | Enantio- and regioselective synthesis of organic compounds using enol esters as irreversible transacylation reagents |
| US5108916A (en) * | 1989-06-05 | 1992-04-28 | Rhone-Poulenc Rorer, S.A. | Process for stereoselectively hydrolyzing, transesterifying or esterifying with immobilized isozyme of lipase from candida rugosa |
| DE4009891A1 (de) * | 1990-03-28 | 1991-10-02 | Guenter Erich Prof Dr Jeromin | Verfahren zur herstellung von optisch aktiven alkoholen und optisch aktiven kohlensaeurediestern mit hilfe von lipasen |
| CN1071434A (zh) * | 1991-07-17 | 1993-04-28 | 史密丝克莱恩比彻姆公司 | 逆转录病毒蛋白酶抑制剂 |
| US5215918A (en) * | 1992-06-19 | 1993-06-01 | Bend Research, Inc. | Enantiomeric enrichment of (R,S)-3-quinuclidinol |
| DE4445954A1 (de) * | 1994-12-22 | 1996-06-27 | Abb Management Ag | Verfahren zur Verbrennung von Abfällen |
| CZ298102B6 (cs) * | 1997-11-27 | 2007-06-20 | Lonza Ag | Zpusob výroby aminoalkoholu |
| DE60123513T2 (de) * | 2000-04-19 | 2007-05-10 | Basilea Pharmaceutica Ag | Verfahren zur Herstellung von D-Asparaginderivaten |
-
2002
- 2002-09-19 IL IL16052702A patent/IL160527A0/xx unknown
- 2002-09-19 MX MXPA04002694A patent/MXPA04002694A/es active IP Right Grant
- 2002-09-19 CA CA2461296A patent/CA2461296C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-09-19 DK DK02779375T patent/DK1434870T3/da active
- 2002-09-19 ES ES02779375T patent/ES2278061T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-19 EP EP02779375A patent/EP1434870B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-19 KR KR1020047004254A patent/KR100882972B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2002-09-19 WO PCT/EP2002/010511 patent/WO2003029477A1/en active IP Right Grant
- 2002-09-19 CN CNB02817772XA patent/CN100413972C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-09-19 HU HU0401500A patent/HU228360B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2002-09-19 JP JP2003532690A patent/JP4359142B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2002-09-19 DE DE60217145T patent/DE60217145T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-19 AT AT02779375T patent/ATE349545T1/de active
- 2002-09-23 US US10/252,971 patent/US7011960B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-24 JO JO200294A patent/JO2426B1/en active
-
2004
- 2004-02-23 IL IL160527A patent/IL160527A/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4359142B2 (ja) | 2009-11-04 |
| DE60217145D1 (de) | 2007-02-08 |
| EP1434870B1 (en) | 2006-12-27 |
| IL160527A (en) | 2010-05-31 |
| CN1553959A (zh) | 2004-12-08 |
| CA2461296C (en) | 2011-07-05 |
| US20030119152A1 (en) | 2003-06-26 |
| HUP0401500A2 (hu) | 2005-02-28 |
| US7011960B2 (en) | 2006-03-14 |
| KR100882972B1 (ko) | 2009-02-12 |
| DE60217145T2 (de) | 2007-10-25 |
| KR20040044979A (ko) | 2004-05-31 |
| ES2278061T3 (es) | 2007-08-01 |
| IL160527A0 (en) | 2004-07-25 |
| ATE349545T1 (de) | 2007-01-15 |
| DK1434870T3 (da) | 2007-04-30 |
| EP1434870A1 (en) | 2004-07-07 |
| JP2005503830A (ja) | 2005-02-10 |
| CN100413972C (zh) | 2008-08-27 |
| WO2003029477A1 (en) | 2003-04-10 |
| JO2426B1 (en) | 2008-04-17 |
| HUP0401500A3 (en) | 2005-11-28 |
| CA2461296A1 (en) | 2003-04-10 |
| MXPA04002694A (es) | 2004-06-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4447419A (en) | Thiazole derivative, and pharmaceutical compositions containing it | |
| ES2564250T3 (es) | Nuevo proceso para estatinas y sus sales farmacéuticamente aceptables de las mismas | |
| EP0045161B1 (en) | Amides of 4-oxo-5-amidohexanoic acid derivatives | |
| HU201961B (en) | Process for producing 2,3-disubstituted isoxazolidines and pharmaceutical compositions comprising same | |
| JP3473976B2 (ja) | アラニルグルタミンの製造法 | |
| HU228360B1 (en) | Enzymatic process for the preparation of substituted 2-amino-3-(2-amino-phenylsulfanyl)-propionic acid | |
| JP4197741B2 (ja) | ３―ピロリン―２―カルボン酸誘導体の製法 | |
| CA2241210C (en) | Novel process for preparing n-acetyl(l)-4-cyanophenylalanine ac-(l)-phe(4-cn)-oh and n-acetyl-(l)-p-amidinophenylalanine-cyclohexylglycine-.beta.-(3-n-methylpyridinium)-alanine ac-(l)-paph-chg-palme(3)-nh2 | |
| EP0210896B1 (fr) | Dérivés d'acides amino-4 hydroxy-3 carboxyliques optiquement purs et procédé de synthèse stéréospécifique | |
| US5359074A (en) | Process for the preparation of racemic and optically active 1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-3-carboxylic acid and its precursors | |
| JP5781928B2 (ja) | 環状アミジンの合成 | |
| US5977380A (en) | Process for preparing N-[1- (S)-ethoxycarbonyl-3- phenylpropyl]-L-alanine derivatives | |
| JP4501015B2 (ja) | アミノピリミジン化合物の製造方法 | |
| US7960558B2 (en) | Pharmaceutical intermediate for synthesizing ACE inhibitors and the use thereof | |
| TW200815370A (en) | Stereoselective synthesis of (S)-1-methyl-3-phenylpiperazine | |
| FR2760452A1 (fr) | Procede d'obtention d'enantiomeres d'acides alpha-amines et sels diastereoisomeriques intermediaires | |
| EP0225311A2 (fr) | Dérivés d'acide amino-4 butanoîque, leur procédé de préparation et leur utilisation | |
| FI85264B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av n-asyl-l-prolinderivat. | |
| WO2003087036A1 (en) | Stereoselective process for the synthesis of (d)-2-amino-5-phenylpentanoic or alkyl ester thereof | |
| JPH09255666A (ja) | ピペラジンアミド化合物及びピペラジンアミド誘導体の製造方法 | |
| JP2000212143A (ja) | 光学活性アミドカルボン酸の製造方法および精製方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |