HU185223B - Process for preparing an enzymatic derivative containing a binary complex of streptokynase and plasminogen - Google Patents

Process for preparing an enzymatic derivative containing a binary complex of streptokynase and plasminogen Download PDF

Info

Publication number
HU185223B
HU185223B HU802661A HU266180A HU185223B HU 185223 B HU185223 B HU 185223B HU 802661 A HU802661 A HU 802661A HU 266180 A HU266180 A HU 266180A HU 185223 B HU185223 B HU 185223B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
plasminogen
streptokinase
benzoyl
derivative
blocking
Prior art date
Application number
HU802661A
Other languages
English (en)
Inventor
Smith R A Godwin
John G Winchester
Original Assignee
Beecham Group Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beecham Group Ltd filed Critical Beecham Group Ltd
Publication of HU185223B publication Critical patent/HU185223B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/315—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci
    • C07K14/3153—Streptokinase
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/99—Enzyme inactivation by chemical treatment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Description

A találmány tárgya eljárás szlreptokináz. és plazminogén aktivátor komplexét tartalmazó enzimszármazékok előállítására, melyek a vénás trombózis kezelésére használhatók.
Ismeretes, hogy a szlreptokináz és a plazminogén enzim között létrejövő komplexek trombolilikus szerként használhatók a vénás trombózis kezelésénél. A plazminogén egy béta-globulin plazma, amely a fibrinbontó enzimnek, a plazminnak az inaktív prekurzora. A sztreptokináz a vörös vérsejt-oldó sztreptococcusok szekréciós terméke, mely nagy mennyiségben is olcsón előállítható. Ha a sztreptokinázt és plazminogént összekeverjük, kezdetben egy nagyon erősen, de nem kovalens kötéssel kötött binér komplex jön létre a kettő között. Ezután szerkezeti változás megy végbe a plazminogén komponensben, ami fehérjebontó hatással rendelkező katalitikus helyet tesz szabaddá. Ez a katalitikus hely azután felhasítja a peptid kötést először a sztreptokináz komponensben és másodszor a plazminogénben, amelyet plnzminná alakít. A sztreptokináz és a plazminogén összekeverésekor keletkező végső komplex, melyet nem egészen precízen „sztreptokináz/plazminogén komplexnek” neveznek, tulajdonképpen a plazmin és a sztreptokináz hasadást terméke közt létrejött komplex. Jelenleg nem ismeretes olyan módszer, amelynek segítségével izolálni lehetne a kezdetben képződött, a sztreptokináz és a plazminogén között kialakult binér komplexet, amely katalitikus hellyel rendelkezik, mielőtt a belső peptid kötés hasadása végbemenne, mert ez a labilis komplex rögtön degradálódik. Az ilyen komplexek létezéséi azonban ki lehet mutatni, ha a katalitikus helyei blokkolják úgy, hogy a sztreptokinázt és a plazminogént p-guanidin-benzoesav-p-nitrofenil-észter, mint acilezőszer jelenlétében keverik össze. (Lásd: D. K. McClintock és P. H. Bell, Biochem. Biophys. Rés. Comm. 43 694-702. old. (1979.)
A 79 301 773.2 számú európai szabadalmi bejelentésben olyan fibrinbontó enzimszármazékot írnak le, amelyben a (ibrinbonlásért felelős katalitikus helyei blokkolják valamely csoporttal, amely bizonyos körülmények között hidrolízissel eltávolítható. Az itt leírt fibrinbontó enzimek egyike a sztreptokináz/plazminogén komplex. Minthogy ezt a komplexet úgy készítik, hogy először a szlreptokinázt és a plazminogént keverik össze, azután blokkolják a katalitikus helyet, a fenti szabadalmi bejelentésben leírt termék a „sztreplokináz/plazminogén komplex blokkolt formája, azaz a már széthasított sztreptokináz és plazmin között kialakult komplex blokkolt formája.
Azt találtuk, hogy a sztreptokináz és a plazminogén között kezdetben képződött binér komplexet is izolálhatjuk, ha e kettőt feleslegben levő blokkolószer jelenlétében keverjük össze. Ez a komplex trombolilikus szerként használható. Sőt ez sokkal homogénebb, sokkal hatásosabb és könnyebben elkészíthető, mint a 79 301 773.2 számú európai szabadalmi bejelentésben leírt blokkolt „szlreptokináz/plazminogén komplex”.
A találmány tárgya tehát olyan sztreptokináz és plazminogén binér komplexét tartalmazó enzimszármazék előállítására vonatkozó eljárás, amely komplexben a fibrinbontó hatásért felelős katalitikus hely olyan csoporttal van blokkolva, mely hidrolízissel eltávolítható, és a származék hidrolízisének pszeudo-elsörendü sebességi állandója 10~6 sec“1 és 103 sec'1 közötti, 7,4-es pH-jú izotóniás vizes oldatban 37 °C-on.
Mint előbb említettük, a p-guanidin-benzoilcsoportol McClintock és Bell alkalmazta a sztreptokináz és plazminogén között kezdetben kialakuló komplex acilezésére. Itt azonban a kapott blokkolt származék csak a komplex aktív helyének titrálása alkalmával képződött. Továbbá, az eddigiek során nem történt említés arra vonatkozóan, hogy az ilyen blokkolt származékokat bárki izolálta volna, és arra sem, hogy azokat fibrinbontó szerként lehetne használni.
A találmány tárgya továbbá eljárás olyan sztreptokináz és plazminogén binér komplexét tartalmazó enzimszármazék izolálására, amely komplexben a fibrinbontó hatásért felelős katalitikus hely olyan csoporttal van blokkolva, mely hidrolízissel eltávolítható, és a származék hidrolízisének pszeudo-elsőrendű sebességi állandója IO~6 sec-1 és 10'3 sec-1 közötti, 7,4-es pH-jú izotóniás vizes oldatban 37 ’C-on.
A találmány szerinti származék sztreptokináz komponense olyan természetes, nem hasított sztreptokináz, amelynek molekulasúlya kb. 47 000. A korábban ismert „sztreptokináz/plazminogén komplex” olyan hasított sztreptokinázt tartalmaz, amelynek molekulasúlya kisebb mint 40000.
A találmány szerinti eljárással előállított származékok jellemző vonása, hogy a nátrium-dodecilszulfát jelenlétében végzett redukció és elektroforeíikus bontás során, csak két poíipeptid lánc detektálható, melyek közül az egyik olyan sztreptokináznak felel meg, melynek molekulasúlya kb. 47000, a másik pedig plazminogén. Ezzel szemben a korábban ismert „sztreptokináz/plazminogén komplex” az előbbihez hasonló analízis során legalább három poíipeptid komponenst eredményez, melyek részben 40000-nél kisebb molekulasúlyú sztreptokinázhasadványnak és hosszú, illetve rövid plazmin láncoknak felelnek meg.
A találmány szerinti származék előállítására bármely plazminogén, pl. emberi, macska, kutya vagy nyúl plazminogén használható, amely a sztreptokinázzal bimolekuláris komplexei képez. Célszerű azonban humán plazminogént használni.
A találmány szerinti származék katalitikus helyének blokkolására lényegében olyan csoport használható, mely hidrolízissel eltávolítható és a hidrolízis pszeudo-elsőrendü sebességi állandója nem kevesebb, mint 10 6 sec~' és nem nagyobb mint Í0'3 sec’. A sebességi állandó célszerűen IO~5~1O'3 sec'1 közötti.
Az olyan származékoknál, amelyek pszeudo-elsörendü sebességi állandója nagyobb mint 10'3 sec'1, elfogadhatatlanul sok szabad enzim keletkezik, mielőtt az a fibrinhez kapcsolódnék. Az olyan származékoknál pedig, melyek pszeudo-elsörendü sebességi állandója 10 ή sec '-nél kisebb, az enzim túl lassan szabadul fel ahhoz, hogy bármely klinikai használatra alkalmas lenne.
A találmány szerinti származékok betegségek i 85 22.3 megelőzésére vagy gyógykezelésére használhatók. Megelőzés céljaira olyan származékot célszerű használni, melynek hidrolízise lassú és ezért felezési ideje hosszú. Az e célra használható származékok hidrolízisének pszeudo-elsőrendü sebességi állandója 5 x 105 és 10“5 sec” 1 közötti tartományba esik, és felezési ideje 3,5-16 óra. Gyógykezelés céljaira sokkal gyorsabban hidrolizáló származékok alkalmasak, azaz olyanok, amelyek pszeudo-elsőrendü sebességi állandója, 5 x 10”4 és 7 x 10”5 sec”1 közötti tartományba esik, amely kb. 30 perc-2 órás felezési. időnek felel meg.
A pszeudo-elsőrendü sebességi állandót úgy határozzuk meg, hogy az enzimszármazékot fiziológiai körülmények között azaz izotóniás vizes oldatban, 7,4-es pH értéknél 37 °C-cn elhidrolizáljuk. A reakcióelegyböl szabályos időközökben aliquot részeket veszünk ki, melyeket valamely kromogén vagy fluorogén proteáz szubsztráttaí pl. S-2251 -el (N-D-Val-Leu-Lys-p-nitro-anilid. 2HC1) indubálunk és a szubsztrát átalakulási sebességéi mérjük.
A hidrolízist addig végezzük, amíg a fenti szubsztrát átalakulási sebessége maximumot ér el, A „k” sebességi állandói ezután úgy számítjuk ki, hogy az ln/l-A,(Am.lx) értékeket a t függvényében ábrázoljuk. A képletben Am.n az a maximális sebesség, amellyel a reakcióelegyböl kivett aliquot rész a szubsztrátot átalakíthatja. At pedig az a sebesség, amellyel a t időpillanatban kivett aliquot részek alakítják át a szubsztrátot,
A katalitikus helyek blokkolására alkalmas csoportok közé tartozik a benzoilcsoport és a szubsztituált benzoilcsoport. Bármelyik szubsztituált benzoilcsoporttal blokkolt enzimszármazék hidrolízisének pszeudo-elsőrendü sebességi állandóját kiszámíthatjuk az illető szubsztituens Hamett δ értékének segítségével, ha két vagy több szubsztituált benzoilszármazék pszeudo-elsőrendü sebességi állandóját megmérjük, feltéve, hogy az enzim és az illető szubsztituens között nincs speciális kölcsönhatás.
Általánosan elfogadott lény, hogy a méta- és para-helyzetü szubsztiluensek Hamett értékeiből (δ,η és δρ) a hidrolízis sebességét elfogadható pontossággal megbecsülhetjük, sőt a δ,η és δρ értékek összege az egynél több szubsztituenst tartalmazó szubsztituált benzoil csoportok kinetikus sajátságainak kiszámítására is kielégítő pontossággal használható. Az orto-sz.ubszlituensek Hamett értékei (δ„) nem összegezhetők a ) nem összegezhetők a δ,„ és δρ értékeknél tapasztalt pontossággal térbeli effektusok miatt. Ha azonban az orlo-helyzetü szubsztituens kicsi és ezért a térbeli hatás elhanyagolható, például fluormelil- és meloxi-származckok esetében, akkor a Ö„ érték a hiba-haláron belül lehet és akár egyedül, akár a δ,,,-el és/vagy δρ értékekkel összegezhető és így a reakciósebesség számolható.
A fenti korlátozások figyelembevételével az olyan szubsztituált benzoil-csoport, amelyben a fenilgyürű egy- vagy több szubsztituenst tartalmaz, különösen méta- és/vagy para-helyzetü szubszlituensek esetében, ahol a Hamett δ értékek összege + 0,1--1,1 közötti tartományba esik, alkalmasak hlokkolócsoporl gyanánt a találmány szerinti eljárásban.
Az alkalmas csoportok közül megemlítjük a benzoilcsoportol, az adott esetben halogénatommal, 5 1-4 szénatomszámú alkilcsoporttal, és/vagy 1—4 szénatomos alkoxi-csoporttal szubsztituált benzoilcsoportot. További példaként megemlítjük a parafluor-benzoilcsoportot, orto-, méta-, vagy paratoluoil-csoportot, orto-, méta-, vagy para-metoxi10 benzoil-csoportot (azaz anizoilcsoportot) orto-, méta-, vagy para-etoxi-benzoilcsoportot, 4-butilbenzoil-csoportot.
Ezen általános szabály alól kivétel, ha a benzoilcsoport valamely bázikus részt, például amino-, 15 dimetil-amino- és guanidino csoportot tartalmaz. Az ilyen származékok hidrolízisének sebességi állandója a számított értéknek csak tört része, esetenként 10-ed része lehet.
A találmány szerinti származékot úgy állítjuk 70 elő. hogy a sztreptokinázt valamely blokkolószer jelenlétében a plazniinogcnnel elegyítjük. A blokkolószer általános képlete A-B vagy E-F, amelyben A olyan csoportot jelent, mely a fibrinbontó hatásért felelős katalitikus helyhez szelektíven kö25 tődik és amely képes átmenni a B-csoporttól a katalitikus helyre, és B olyan lehasítható csoportot jelent, amely megkönnyíti az enzimnek az Acsoporlhoz történő kapcsolódását. E valamely lokalizáló csoport, mely a blokkolószert a katalitikus helyhez köti és F olyan csoportot jelent, mely a lokalizáló csoportról a katalitikus helyre képes átmenni. Az így képződött származékot azután adott esetben izoláljuk.
Az A-B képletü szer használata a direkt blokko35 las módszerét képviseli. Az ilyen reagensek általában ismertek. Egy példa a p-guanidino-benzoesavp-nitrofenil-észter. A guanidino-benzoil rész szelektíven kapcsolódik a katalitikus helyhez és ennek kapcsolódását a lehasadó para-nitrofenil-csoport elősegíti.
Az E-F formájú szerek használata az inverz blokkolás módszerét képviseli. Az E képletü csoportra példaként megemlítjük a para-amidinofenoxi csoportot, és a para-acetil-amidino-fenoxi csoportot, vagy a strukturálisan hasonló helyzetű fenoxi csoportokat, melyek pozitív töltésű részt tartalmaznak, méta- vagy para-helyzetben.
Az inverz blokkolórendszerekre példák az alábbiak: p-íluor-benzoesav-p-amidino-fenil-észter, p50 toluilsav-p-amidino-fenil-észter, p-metoxi-benzoesav-p-amidino-fenil-észter, benzoesav-p-amidinofenil-észter. 4-butil-benzoesav-p-amidinofenilészter, 2.4-dimetoxi-benzoesav-p-amidino-fenilészter, 4-eloxi-benzoesav-p-amidino-fenil-észter, p55 meloxi-benzoesav-p-aeetil-amidino-fenil-észter, otoluilsav-p-amidino-fenil-észter, o-metoxi-benzoesav-p-amidino-fenil-észler, 3,4-dimetil-benzoesavp-amidino-fenil-észter.
A direkt és inverz blokkoló reakciókat célszerű5q en pufferolt vizes közegben végezzük olyan pHlartományban, amely sem az enzimre, sem a blokkolószerre. sem pedig a termékre nem káros. A reakciót végezhetjük például 6 és 9-es pH-érték közölt, de célszerű 7-es pH közelében dolgozni.
65 A reakciót általában úgy végezzük, hogy a blok-31 kolószert vagy a sztreplokinázzal vagy a plazminogénnel elegyítjük és ezután hozzáadjuk a másik komponenst. A sztreptokináz moláris koncentrációja közelítőleg megegyezik a plazminogcncvcl: Legtöbb blokkolószer mólaránya az alkalmazott sztreptokinázhoz viszonyítva legalább 100 : 1. Célszerű azonban 250-szeres feleslegben alkalmazni. Az erősen reakcióképes inverz vagy direkt blokkolószerek esetén, például p-guanidino-benzoesav-pnitrofenil-észler esetében alacsonyabb mólarány használható.
A blokkoló reakciói mérsékelt hőfokon, például 0-20 °C között végezhetjük.
A reakció lefolyásának ideje függ az alkalmazott blokkolószertől és a reakcióközeg hőmérsékletétől. A reakciót 0 °C-on, célszerűen 0,5 és 1 óra közötti időtartamig végezzük, de hosszabb idő is megengedhető.
Miután a reakció befejeződött, a származékot a standard módszerek valamelyikével megtisztítjuk, például dialízissel, kromatográfiával, ultraszűréssel, majd ezután a szokásos módszerek valamelyikével, például vizes közegből történő liofilezéssel kinyerjük. Szükség esetén az anyagot sterilizálhatjuk, pl. az emberi gyógyászatban használandó intravénás készítményeknél. Az olyan E-F képletü inverz blokkolószereket, melyekben E jelentése pamidino-fenoxi-csoport és F jelentése valamely acilcsoport, előállíthatjuk, ha a p-hidroxi-benzamidinnek valamely sóját egy F-X képletü acilszármazékkal acilezzük, amelyben F jelentése az előzőekben definiált csoport, és X jelentése hidroxilcsoport. Aktivált acilező származék is használható adott esetben valamely katalizátor jelenlétében.
Az aktivált acilező származékokra példaként megemlítjük az acil-klorídot, vagy az acil-kromidot. Ezek a származékok a szokásos módszerekkel készíthetők el.
A folyamatban használható alkalmas katalizátorok között megemlítjük a tercier szerves bázisokat, például a piridint és a kondenzációs gyorsítószereket, például a diciklo-hexil-karbodiimidet.
Az acilezést magát általában valamely poláros szerves oldószerben végezzük, mely a reagensekre és a termékre nézve egyaránt közömbös. Az alkalmas oldószerek közül megemlítjük a N.N-dimctilformamidet és a dimetil-szuifoxidot. Más esetben, ha a katalizátor valamely folyadék, például piridin, a reakciót külön oldószer nélkül is elvégezhetjük.
A reakciót általában mérsékelt hőmérsékleten végezzük, azaz 70 °C alatt, de célszerűen 40 °C alatt; legelőnyösebb azonban szobahőmérsékleten dolgozni.
A reakció befejezéséig szükséges idő függ az alkalmazott speciális reagensektől, az oldószertől és a reakció hőmérsékletétől. A reakció előrehaladását vékonyréteg kromatográfiával ellenőrizhetjük.
Ha a reakció teljesen lezajlott, a terméket kinyerjük, és a szokásos módszerekkel tisztítjuk.
A találmány szerint előállított termék gyógyszerként használható a szokásos gyógyászatiig elfogadható hordozókkal elkeverve. A gyógyszer hatóanyaga olyan enzimszármazék, mely a sztreptokinázés plazminogén binér komplexéből áll és amely komplexnek a fibrinbontó hatást előidéző katalitikus helyeit valamely hidrolízissel eltávolítható csoporttal blokkoljuk és a hidrolízis pszeudo-elsőrendű sebességi állandója 10 6 sec 1 és 10 3 sec1 közötti tartományban van, izotóniás vizes oldatban, 7,4 pH-nál 37 °C hőmérsékleten.
A találmány szerinti hatóanyagot tartalmazó gyógyászati készítményeket ugyanazokkal a szokásos módszerekkel formulázhatjuk, mint az emberi gyógyászatban használt egyéb intravénás szereket.
Az intravénás adagolásra használható szereket rendszerint úgy készítjük, hogy a steril származékot steril izotóniás vizes puíferben feloldjuk. A készítmény szükség esetén tartalmazhat oldódást elősegítő szereket, mely a hatóanyagot oldatban tartja és lokális érzéstelenítőszert, például lignokaint, mely csökkenti a fájdalmat az injekció helyén. Az enzimszármazékot általában egységdózis formájában alkalmazzuk, például száraz por, vagy vízmentes koncentrátum formájában, valamely hermetikusan lezárt tartóban, például ampullában, melyen feltüntetjük az enzim mennyiségét aktivításegységekben, valamint azt az időt, amelyen belül a szabad enzim felszabadul. Ha a származékot infúzió formájában adagoljuk, ezt steril, gyógyászati célra alkalmas vizel tartalmazó infúziós edényben készítjük el. Ha a származékot injekció formájában kívánjuk adagolni, ezt valamely steril, injekció számára alkalmas vizet tartalmazó ampullában készítjük el. Az injekcióval vagy infúzióval adagolható készítmények összetevőit a beadás előtt elegyítjük össze.
Az adagolás mértéke függ a szükséges fibrinoldás mértékétől és annak sebességétől, a trombo-embóliás állapot súlyosságától, valamint a vérrög helyétől és méretétől. Például tüdőembóliás beteg esetében, vagy combcsonti trombusz miatt fellépő életveszély esetében gyorsan ható anyag beadása szükséges. Másrészről, ha operáció utáni trombusz kialakulását akarjuk elkerülni, kis mennyiségű, lassan ható anyag adagolása szükséges. A dózis pontos mennyiségét illetőleg az adagolás módját az orvos a körülmények figyelembevételével döntheti el. Általánosságban azonban, egy közepes méretű trombussal kezelt beteg esetében a napi adag 0,1-1,0 mg testsúly kilogrammonként, melyet napi 1-8 injekcióban, vagy infúzió útján adagolhatunk. A találmány szerinti származékok előnye a korábban alkalmazott, trombolitikus szerekkel, például a sztreptokinázzal szemben az, hogy injekció formájában adható a folyamatos infúzió helyett és napi 1-2 injekció adagolása elegendő.
Az alábbi példák a találmány szerinti eljárást illusztrálják, anélkül azonban, hogy annak oltalmi körét korlátoznák.
/. példa:
A belső pepiid kötés hasadása nélküli liofilezett p-anizolil-sztreplokináz'jplazminogén komplex előállítása
250 000 egység sztreptokinázt (Kabi, Stockholm, Svédország) feloldunk 2,5 ml 0,1 mólos tris-hídroximetil-melán-hidrokloridban 7,4 pH mellett és az oldathoz 0,25 ml dimetil-szulfoxidban oldott 0,1 mól
185 223 p-metoxi-benzoesav-p-amidino-fenil-észtert adunk. Enyhe zavarosodás keletkezik. Az elegyhez 0,5 ml emberi lys-plazminogent elegyítünk (8,99 mg/ml a fenti pufferben) (Kabi, Stockholm) és az oldatot gyorsan és alaposan összekeverjük. 15 perces jéggel történő hűtés után az oldatot további felhasználásig jégen tartjuk. Kb. 2 ó.ra múlva az anyag 0,4 ml-ét (40 000 egység) 3 ml L-lizin-Sepharose 4B szuszpenzióval hígítjuk (a szuszpenzió a fenti pufferben 33 súly/tf%-os) és 1 óráig 0 °C-on tartjuk. A kapott gélt zsugorított üvegtölcséren leszűrjük 4 ’C-on, majd szívással szárítjuk és 100 ml pufferoldattal mossuk. A gélt enyhe szívás mellett eluáljuk ugyanazzal a pufferoldattal, amely 0,1 mól ε-aminokapronsavat tartalmaz (5 πίΡέΓ3 részben). Az egyesített szürleteket 2 óráig 4 °C-on dializáljuk anunónium-hidrogén-karbonát pufferrel (50 minól/l, pH 7,0) amely 2,5 súly/tf% mannitolt tartalmaz. A terméket ezután liofilezzük és így 0,799 gramm fehér anyagot kapunk. A termék kb. 195 mg-ját ezután meganalizáljuk poli-akrilamid gél rétegen történő elektroforezissel, melyhez 10 súly/tf% gélt használunk nátrium-dodecil-szulfát jelenlétében. Két fő polipeptid sávot figyelhetünk meg, mely a lys-plazininogénnek (molekulasúly 84000) és sztreplokináznak (molekulasúly 47000) felel meg. Nyomokban emberi szérum albumin származék is található, mely a kereskedelmi sztreptokináz készítményből származik.
2. példa:.
P-anizoil-(sztreptakináz-plazminogén) aktivátor komplexet tartalmazó liofilezett gyógyászati készítmény előállítása
7,5 pH-jú, 0,03 mól nátrium-foszfát és 0,12 mólos nátrium-glutamát púderben oidolt 9,95 mg/ml töménységű sztreptokinázoldatból 45,4 ml-t elegyítünk lizin/mennit puffer 110 ml-ével 7,0 pH mellett és 60 ml steril glicerint adunk hozzá, majd az elegyet ’C-on 5 percig keverjük. Ezután 15 ml (20 mmól/ 1-es DMSO-oldatban oldott) p-metoxi-benzoesavp-amidino-fenil-észler szűrt steril oldatát adjuk hozzá két perc leforgása alatt és az elegyet 4 ’C-on percig keverjük. 71 ml 11,4 mg/ml töménységű emberi lys-plazminogént adunk hozzá (Kabi, Stockholm) 2 perc leforgása alatt és az elegyet 4 ’C-on 60 percig keverjük.
Ezután 18,9 ml (20 súly/tf%-os) emberi szérum albumint (klinikai minőségű) adunk az elegyhez, majd az egészet 4 ’C-on 2 percig keverjük. A reakcióelegyet tartalmazó edény tartalmát 400 ml-re egészítjük ki lizin/mannit puffer oldat hozzáadásával, a folyadékot ezután 2,5 óráig 18 ’C-on diafiltráljuk, míg 2400 ml szürlet gyűlik össze. A kapott folyadékot ezután 14 cm átmérőjű, 0,22 μιη porozitású steril Millipore szűrön szűrjük (megfelelő előszűrés után) és steril edényben összegyűjtjük. A szürletből 5 ml-es aliquol részeket gyorsan 20 ml-es steril liofilező edényekbe töltjük (tiszta üveg) és dupla fedéllel látjuk el, majd az edényeket liofilező polcokon - 40 ’C-on fagyasztjuk. A liofilcz.es legalább 24 óráig tart, majd ezután a sapkákat steril nitrogén atmoszférában felhelyezzük, és légmentesen lezárjuk. Az egyes fiolák tartalma a következő: p-anizoií-(sztreplokináz-plazminogén) aktivátorkomplex: 4-6 mg
L lizin.HCI: 22,8 mg D-mannit: 50 mg p-metoxi-benzoesav-p-amidino-fenil-észter: < 50 Pg nálrium-klorid: nyomokban
3. példa
Az 1. példában leírtak szerint 3-metil-4-metoxibenzoil-(sztreptokináz-plazminogén) aktivátor komplexet készítünk. Az ott szereplő p-metoxibcnzoesav-p-amidino-fenil-észter helyett most 3melil-4-inetoxi-benzoesav-p-amidino-fenil-észtert használunk.
4. példa
A belső peptidkötés felhasadása nélkül liofilezett 3,5-dimetil-4-nietoxi-benzoil-sztreptokináz/plazmi~ nogén komplex előállítása
7,5-es pH-jú, 0,03 mól nátrium-foszfát és 0,12 mól nátrium-glutamát tartalmú pufferben oldott 3,58 mg/ ml töménységű sztreptokináz oldatból 20 ml-t elegyítünk 20 ml glicerinnel és az elegyet 4 ’Con 5 percig keverjük. 4-metoxi-benzoesav-pamidino-fenil-észter hidroklorid sójából 21,7 mg-ot feloldunk 3 ml dimetil-szulfoxidban és az oldatot az előzőhöz hozzáadjuk·. A kapott elegyet 4 ’C-on 5 percig keverjük. 25 ml 144 mg humán lys-plazminogént tartalmazó oldatot. (20 mmól/1 L-lizin.HCI, 1 súly/tf%-os D-mannit, pH = 7,0) adunk az előzőhöz és az elegyet 4 ’C-on 2 óráig keverjük. 3 ml (vízben 20 súly/tP’/„-os) humán szérum albumint adunk hozzá és az elegyet 250 ml-re hígítjuk lizin/ mamiit pufferrel, majd az oldatot 2,5 óráig 4 ’C-on diafiltráljuk, amíg 1130 ml szürletet kapunk. Az oldatot liofilizálva3,018 gramm fehér port kapunk, melynek deacetilezés után a szabadaktivátor-tartalma kb. 23,5 pg/mg.
Biológiai adatok
Λ.7. 1., 2. és 3. példa szerint készített származékokat összehasonlítottuk az ismert „sztreptokináz/ humán-plazminogén komplex” származékokkal, melyek a 79 301 773.2 számú Európai szabadalmi bejelentésben leírtak szerint lettek előállítva és a nem módosított szlreptokináz-plazminogér. aktivátor komplexszel. Az. összehasonlítás során mindegyik vegyületel rendszeresen adagoltuk nyulaknak, melyeknek felső vénakávájában radioaktív módszerrel jelzett vérrög helyezkedett el. Ugyanazt a módszert használtuk, mint amit a fent említett európai szabadalmi bejelentésben leírtak, kivéve, hogy a Irombust egy gyapjú szállal rögzítettük helyhez és nem az ér lekötésével.
Az átlagos oldódási viszonyokat a különböző állat-csoportoknál meghatároztuk és az eredményeket az 1. táblázatban rögzítettük (16. oldal).
Az előző kísérlet eredményei azt mulatják, hogy az 1. és 2. példa szerint készített származékok, majdnem kétszer olyan hatásosak a vérrög feloldódását illetően, mint a felhasított sztreptokináz/'plazminogén komplex blokkolásával készített származékok.
Ezenkívül, az 1. táblázat azt mutatja, hogy az aktív helyen akrilezett sztreptokináz-plazminogén aktivátor komplexek származékai még sokkal aktívabbak, mint azok nem módosított változatai abban az esetben is, ha a nem módosított komplex a lehető legfrissebb.
Egy második állatkísérlet a íibrinoldó hatás vizsgálatát célozza. Ebben a kísérletben a vérrög egy vizsla femorális vénájában rögzített, beültetett gyapjú szál körül képződött. A lekötéssel izolált vénából ezután vért vettünk egy kollaterális véna kanül segítségével. A kivett vért radioaktív jód,z5-humán fibrinogénnel megjelöltük, (lásd 79 301 773.2 számú európai szabadalmi bejelentést) és visszainjektáltuk az előbbi vénaszakaszha nyúlagy iromboplaszlínnal együtt. Alvadás után a lekötést eltávolítottuk és a keletkezett radioaktív nyomjelzéssel ellátott vérrögöt a fonal segítségével egy helyben tartottuk. A második táblázat azokat az eredményeket összegezi, amelyeket ezeknél a kutyáknál kaptunk, ha őket különböző fibrinoldó szerekkel kezeltük. A feloldódás mértékét rádiókémiai úton határoztuk meg a kísérlet végén, miután a visszamaradó trombuszt kimetszettük. A 2. táblázat mutatja, hogy a p-anizoil-sztreptokináz-plazminogén komplex, melyet a találmány szerint készítettünk, sokkal aktívabb mindkét alkalmazott dózis esetén, mint a frissen készített nem-módosított aktivátor komplex ugyanilyen dózisok mellett.
Kémiai adatok
A 3. táblázat megadja az aktív helyen szubszlituált sztreptokináz-plazminogén aktivátor komplexek deaectilezcsének látszólagos elsőrendű sebességi állandóit 37 °C-on, 7,4 pH-érlék mellett. Az adatok illusztrálják, hogy a deacilezés sebességi állandója összhangban van a szubsztituált benzoilcsoport elektronszerkezetével. Általában az elektront elvonó szubszlituensek növelik a deacelilczés
sebességéi és az elektront leadó csoportok lassítják a folyamatot.
/. Táblázat
Az Átlaeos
állatok feloldó-
száma dás %
1. Izotóniás sóoldat, kontroll- 8 ként 3± 1
2. Nem módosított „sztrepto- 6 kináz-plazminogén aktívator komplex két protein ekvimolekuláris mennyiségeiből készült 0 °C-on ΙΟ'-ig, és rögtön beinjektáltuk 20 ±4
I. Tábláiul folytatása
Az állatok száma Átlagös feloldódás %
3. Nem módosított kereskedelmi sztreptokináz-plazminogén aktivátor komplex (Behringwarke) 5 Ί4±4~
4. Az EU 79 301 773 2 számú szab. leírás 22. példája szerint készült p-anizoll- (sztreptokináz-plazminogén aktivátor komplex) melynek belső peptid kötése felhasítoll 5 24±8
5. Az 1. példa szerinti p-anizoil-(sztreptokináz-plazminogén aktivátor komplex), melynek belső pepiid kötése nem felhasított 5 42±6
6. A 2. példa szerint készült, liofilezelt p-anizoil-(sztreptokináz-plazminogén aktivátor komplex) készítmény 13 41±6
7. A 3. példa szerint készített 3-melil-4-metoxi-benzoil(sztreptokináz-plazminogén aktivátor komplex) készítmény 5 29±5
2. Táblázat
Az enzimszármazékok hatékonysága kutyákon előidézett vénás trombózis esetében
Enzimszármazék Dózis IU/kg Álla- tok száma Átla- gos felol- dódás
1. izotóniás sóoidat, - 7 22 ±10
kontrollként
2. Nem módosított 1500 5 IÖ±2~
„sztreptokináz-plazminogén aktivátor komplex két protein ekvimolekuláris mennyiségeiből készült 0 °C-on ΙΟ'-ig és rögtön beinjekláltuk
3. Ugyanaz 2500 5 25± 18
4. A 2. példa szerint készített p-anizoil- (sztreptokináz-plazminogén aktivátor komplex) 1500 5 79±14
5. Ugyanaz 2500 5 85± 14
6. Szlreptokináz 1500 3 24 ±21
3. táblázat
Az aktív helyen acilezett sztrepiokinéiz-plazminogén akt ivótor komplex deaeilezési reakciójának pszeudo-elsőrendíí sebességi állandói
Acilcsoport k3/sec 7,4-es pH mellett 37 °C-on
Benzoil 3,5 x 10 4
2-toluoil 1.9 x 10 4
4-anizoil 2,9 x 10 4
4-fluorobenzoil 2.6 x 10 4
3-metil-4-anizoil l,2x 10 4
3,5-dimetil-4-anizoil l,6x 10 4
4-nitro-benzoil c. 2,3 x 10 2
4-klör-benzoil 2,5 x 10 3
Szabadalmi igénypontok

Claims (7)

1. Eljárás sztreptokináz és plazminogén binér komplexét tartalmazó enzimszármazék előállítására, azzal jellemezve, hogy a komplex fibrinbontó hatásáért felelős katalitikus helyét olyan benzoilvagy szubsztituált benzoil- vagy toluoilcsoporttal blokkoljuk, amely hidrolízissel eltávolítható, és a blokkolt származék hidrolízisének pszeudo-eisörendü sebességi állandója 7,4-es pH-jú izotóniás vizes oldatban, 37 °C-on 10 6 sec 1 és 10 3 sec 1 között van, és a blokkolást a sztreptokináznak és a plazminogénnek benzoil-, szubsztituált benzoilvagy toluoilcsoportot tartalmazó, feleslegben alkalmazott blokkolószerrel való elegyítésével végezzük, majd az elegyítés után a kapott származékot adott esetben elkülönítjük.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a blokkolási reakcióhoz kb. 47 000-v.s molekuiasűlyú nem hasított molekulájú sztreptokináz komponenst használunk.
3. Az I. és 2. igénypontok szerinti bármelyik eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy
5 a blokkolási reakcióhoz humán plazminogént használunk.
4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a blokkoláshoz olyan benzoil- vagy szubsztituált
10 benzoil- vagy toluoilcsoportot használunk, amely hidrolízisének pszeudo-elsőrendü sebességi állandója 10 5-10 3 sec 1 közötti.
5. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy blokkolószerként
15 benzoilcsoportot vagy egy vagy több méta- és/vagy para-helyzetű szubsztituenssel helyettesített benzoílcsoportot tartalmazó vegyületet alkalmazunk, amelynek Hammelt σ,η és σρ értékeinek összege a + 0,l és l.l közötti tartományba esik.
20
6. Az 5. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy blokkolószerként adott esetben halogénalommal és/vagy 1-4 szénatomos alkilcsoporttal és/vagy 1-4 szénatomos alkoxicsoporllal vagy nitrocsoporltal helyettesített
25 benzoilcsoportot vagy toluoilcsoportot tartalmazó vegyületet alkalmazunk.
7. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy blokkolószerkénl p-guanidino-benzoesav-p-nítro30 fenil-észtert alkalmazunk, és a kapott származékot elkülönítjük.
S. Eljárás fibrinolitikus hatású gyógyászati készítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely. az t, igénypont szerinti eljárással előállított 35 blokkolt enzimszármazékot a gyógyászatban szokásos hordozó és/vagy segédanyagokkal keverünk össze és a keveréket gyógyszerkészítménnyé alakítjuk.
HU802661A 1979-11-05 1980-11-05 Process for preparing an enzymatic derivative containing a binary complex of streptokynase and plasminogen HU185223B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB7938279 1979-11-05

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HU185223B true HU185223B (en) 1984-12-28

Family

ID=10508982

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU802661A HU185223B (en) 1979-11-05 1980-11-05 Process for preparing an enzymatic derivative containing a binary complex of streptokynase and plasminogen

Country Status (18)

Country Link
US (1) US4808405A (hu)
EP (1) EP0028489B1 (hu)
JP (1) JPS5678590A (hu)
AR (1) AR224786A1 (hu)
CA (1) CA1174621A (hu)
CS (2) CS391991A3 (hu)
DE (1) DE3065190D1 (hu)
DK (1) DK158994C (hu)
ES (1) ES496586A0 (hu)
GR (1) GR72121B (hu)
HK (1) HK65886A (hu)
HU (1) HU185223B (hu)
IE (1) IE50174B1 (hu)
IL (1) IL61408A (hu)
NL (1) NL930029I2 (hu)
NO (1) NO163867C (hu)
NZ (1) NZ195469A (hu)
ZA (1) ZA806641B (hu)

Families Citing this family (78)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0091240B1 (en) * 1982-04-07 1985-12-27 Beecham Group Plc Enzyme derivatives, process for preparing them and pharmaceutical compositions containing them
WO1984001960A1 (en) * 1982-11-11 1984-05-24 Beecham Group Plc Pharmaceutically active compounds
GB8400653D0 (en) * 1984-01-11 1984-02-15 Beecham Group Plc Conjugates
GB8430253D0 (en) * 1984-11-30 1985-01-09 Beecham Group Plc Compounds
US5231006A (en) * 1986-10-16 1993-07-27 Behringwerke Aktiengesellschaft Method for the determination of plasminogen
US5256642A (en) * 1988-04-01 1993-10-26 The Johns Hopkins University Compositions of soluble complement receptor 1 (CR1) and a thrombolytic agent, and the methods of use thereof
JPH0296536A (ja) * 1988-09-29 1990-04-09 Green Cross Corp:The プラスミノゲン乾燥製剤
AU647391B2 (en) * 1989-05-01 1994-03-24 University Of Notre Dame Du Lac, The Methods and materials for expression of human plasminogen in a eukaryotic cell system
EP0397366A1 (en) * 1989-05-09 1990-11-14 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Hybrid streptokinases with fibrin binding domains and methods for the synthesis of same
EP0472657B1 (en) * 1989-05-17 1996-03-13 Research Corporation Technologies, Inc. Method and composition for the treatment of thrombosis in a mammal
AU6470590A (en) 1989-10-23 1991-04-26 Smithkline Beecham Corporation Cyclic anti-aggregatory peptides
US5190756A (en) * 1989-12-01 1993-03-02 Genentech, Inc. Methods and materials for expression of human plasminogen variant
US5087572A (en) * 1989-12-01 1992-02-11 Genentech, Inc. Dna encoding human plasminogen modified at the cleavage site
GB8928163D0 (en) * 1989-12-13 1990-02-14 Beecham Group Plc Novel treatment
US6458360B1 (en) 1990-04-25 2002-10-01 The Johns Hopkins University Soluble complement regulatory molecules
US5187069A (en) * 1990-08-06 1993-02-16 Henry Ford Health System Active site labelling of plasminogen
AU1873092A (en) * 1991-04-09 1992-11-17 Brigham And Women's Hospital Chimeric molecule with plasminogen activator activity and affinity for atherosclerotic plaques
US5520912A (en) * 1993-07-02 1996-05-28 Immuno Aktiengesellschaft Prevention and treatment of ischemic events and reperfusion injury resulting therefrom using lys-plasminogen
DE4411143C2 (de) * 1994-03-30 1996-08-01 Immuno Ag Thrombosemittel
US5760028A (en) * 1995-12-22 1998-06-02 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Integrin receptor antagonists
US6004955A (en) * 1996-08-15 1999-12-21 Dupont Pharmaceuticals Company Cyclic carbamates and isoxazolidines as IIb/IIIa antagonists
ES2239806T3 (es) 1997-06-19 2005-10-01 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Inhibidores del factor xa con un grupo de especificidad neutro p1.
AU768859B2 (en) * 1999-07-29 2004-01-08 Dyax Corp. Binding moieties for fibrin
US6388073B1 (en) 2000-07-26 2002-05-14 Shire Us Inc. Method for the manufacture of anagrelide
KR20010000669A (ko) * 2000-10-12 2001-01-05 김기환 스트렙토키나제와 사람 혈청알부민의 포합체를유효성분으로 함유하는 전신투여용 지속성 혈전 용해제
US6984373B2 (en) * 2000-12-23 2006-01-10 Dyax Corp. Fibrin binding moieties useful as imaging agents
CH1427415H1 (de) 2001-09-21 2023-12-21 Bristol Myers Squibb Holdings Ireland Lactamhaltige verbindungen und ihre derivate als faktor-xa-hemmer
US7550499B2 (en) 2004-05-12 2009-06-23 Bristol-Myers Squibb Company Urea antagonists of P2Y1 receptor useful in the treatment of thrombotic conditions
US7700608B2 (en) * 2004-08-04 2010-04-20 Shire Holdings Ag Quinazoline derivatives and their use in the treatment of thrombocythemia
US20060030574A1 (en) * 2004-08-04 2006-02-09 Shire Holdings Ag Quinazoline derivatives useful for the treatment of peripheral arterial disease and as phosphodiesterase inhibitors
WO2006076575A2 (en) 2005-01-13 2006-07-20 Bristol-Myers Squibb Company Substituted biaryl compounds as factor xia inhibitors
MX2007008434A (es) 2005-01-19 2007-07-25 Squibb Bristol Myers Co Derivados de 2-fenoxi-n-(1,3,4-tiadizol-2il)piridin-3-amina y compuestos relacionados como inhibidores del receptor p2y1 para el tratamiento de trastornos tromboembolicos.
AU2006261828A1 (en) 2005-06-27 2007-01-04 Bristol-Myers Squibb Company N-linked heterocyclic antagonists of P2Y1 receptor useful in the treatment of thrombotic conditions
DE602006017694D1 (de) 2005-06-27 2010-12-02 Bristol Myers Squibb Co C-verknüpfte zyklische antagonisten des p2y1-rezeptors mit eignung bei der behandlung thrombotischer leiden
EP1896417B1 (en) 2005-06-27 2011-03-23 Bristol-Myers Squibb Company Linear urea mimics antagonists of p2y1 receptor useful in the treatment of thrombotic conditions
WO2007002634A1 (en) 2005-06-27 2007-01-04 Bristol-Myers Squibb Company Carbocycle and heterocycle antagonists of p2y1 receptor useful in the treatment of thrombotic conditions
US8222453B2 (en) 2006-06-08 2012-07-17 Bristol-Myers Squibb Company Benzamide factor VIIa inhibitors useful as anticoagulants
US7960569B2 (en) 2006-10-17 2011-06-14 Bristol-Myers Squibb Company Indole antagonists of P2Y1 receptor useful in the treatment of thrombotic conditions
US7910597B2 (en) * 2006-11-28 2011-03-22 Shire Llc Substituted quinazolines
US8304420B2 (en) 2006-11-28 2012-11-06 Shire Llc Substituted quinazolines for reducing platelet count
EP2102189B1 (en) 2006-12-15 2015-07-29 Bristol-Myers Squibb Company Arylpropionamide, arylacrylamide, arylpropynamide, or arylmethylurea analogs as factor xia inhibitors
PE20081775A1 (es) 2006-12-20 2008-12-18 Bristol Myers Squibb Co Compuestos macrociclicos como inhibidores del factor viia
AR067329A1 (es) 2007-06-13 2009-10-07 Bristol Myers Squibb Co Analogos dipeptidos como inhibidores del factor de coagulacion
US20090130017A1 (en) * 2007-11-19 2009-05-21 Searete Llc Targeted short-lived drug delivery
WO2009143039A2 (en) 2008-05-19 2009-11-26 Schering Corporation Heterocyclic compounds as factor ixa inhibitors
WO2010147978A1 (en) 2009-06-16 2010-12-23 Pfizer Inc. Dosage forms of apixaban
EP2462123B1 (en) 2009-08-04 2013-10-02 Merck Sharp & Dohme Corp. 4,5,6-trisubstituted pyrimidine derivatives as factor ixa inhibitors
TWI577665B (zh) 2010-02-11 2017-04-11 必治妥美雅史谷比公司 作為因子ｘｉａ抑制劑之巨環類
TW201319068A (zh) 2011-08-05 2013-05-16 必治妥美雅史谷比公司 作為ｘｉａ因子抑制劑之環狀ｐ１接合劑
TW201311689A (zh) 2011-08-05 2013-03-16 必治妥美雅史谷比公司 作為因子ｘｉａ抑制劑之新穎巨環化合物
PL2766346T3 (pl) 2011-10-14 2017-09-29 Bristol-Myers Squibb Company Podstawione związki tetrahydroizochinoliny jako inhibitory czynnika XIA
ES2699226T3 (es) 2011-10-14 2019-02-08 Bristol Myers Squibb Co Compuestos de tetrahidroisoquinolina sustituidos como inhibidores del factor XIa
CN103987696B (zh) 2011-10-14 2016-12-21 百时美施贵宝公司 作为因子xia抑制剂的取代的四氢异喹啉化合物
WO2013068875A1 (en) 2011-11-11 2013-05-16 Pfizer Inc. 2-thiopyrimidinones
US9296745B2 (en) 2012-04-06 2016-03-29 Pfizer Inc. Diacylglycerol acyltransferase 2 inhibitors
CN108250199B (zh) 2012-08-03 2021-07-16 百时美施贵宝公司 二氢吡啶酮p1作为凝血因子xia抑制剂
UY34959A (es) 2012-08-03 2014-01-31 Bristol Myers Squibb Company Una Corporación Del Estado De Delaware Dihidropiridona p1 como inhibidores del factor xia
EP2978751B1 (en) 2013-03-25 2018-12-05 Bristol-Myers Squibb Company Tetrahydroisoquinolines containing substituted azoles as factor xia inhibitors
ES2665153T3 (es) 2013-10-09 2018-04-24 Pfizer Inc. Antagonistas del receptor EP3 de prostaglandina
HUE040226T2 (hu) 2014-01-31 2019-02-28 Bristol Myers Squibb Co Makrociklusok heterociklusos P2' csoportokkal XIA faktor inhibitorokként
NO2760821T3 (hu) 2014-01-31 2018-03-10
CN106103425A (zh) 2014-03-17 2016-11-09 辉瑞公司 用于治疗代谢及相关病症的二酰甘油酰基转移酶2抑制剂
ES2718552T3 (es) 2014-04-04 2019-07-02 Pfizer Compuestos de heteroarilo o arilo bicíclicos fusionados y su uso como inhibidores de IRAK4
US9969724B2 (en) 2014-04-16 2018-05-15 Merck Sharp & Dohme Corp. Factor IXa inhibitors
NO2721243T3 (hu) 2014-10-01 2018-10-20
WO2016178113A1 (en) 2015-05-05 2016-11-10 Pfizer Inc. 2-thiopyrimidinones
WO2016203347A1 (en) 2015-06-17 2016-12-22 Pfizer Inc. Tricyclic compounds and their use as phosphodiesterase inhibitors
WO2016203335A1 (en) 2015-06-18 2016-12-22 Pfizer Inc. Novel pyrido[2,3-b]pyrazinones as bet-family bromodomain inhibitors
ES2937156T3 (es) 2015-07-29 2023-03-24 Bristol Myers Squibb Co Inhibidores macrocíclicos del factor XIa que llevan un grupo P2' no aromático
JP6785838B2 (ja) 2015-08-05 2020-11-18 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 新規な置換グリシン誘導のｆｘｉａ阻害剤
MX2018002402A (es) 2015-08-27 2018-04-11 Pfizer Compuestos de heteroarilo o arilo biciclicos fusionados como moduladores de la quinasa 4 asociada al receptor de la interleucina 1 (irak4).
EP3423458A1 (en) 2016-03-02 2019-01-09 Bristol-Myers Squibb Company Diamide macrocycles having factor xia inhibiting activity
AR109179A1 (es) 2016-08-19 2018-11-07 Pfizer Inhibidores de diacilglicerol aciltransferasa 2
KR102614808B1 (ko) 2018-08-31 2023-12-19 화이자 인코포레이티드 Nash/nafld 및 관련 질환의 치료를 위한 조합물
EP3972596A1 (en) 2019-05-20 2022-03-30 Pfizer Inc. Combinations comprising benzodioxol as glp-1r agonists for use in the treatment of nash/nafld and related diseases
CN116133660A (zh) 2020-07-22 2023-05-16 詹森药业有限公司 可用作因子XIa抑制剂的化合物
WO2023026180A1 (en) 2021-08-26 2023-03-02 Pfizer Inc. Amorphous form of (s)-2-(5-((3-ethoxypyridin-2-yl)oxy)pyridin-3-yl)-n-(tetrahydrofuran-3- yl)pyrimidine-5-carboxamide
WO2024118524A1 (en) 2022-11-28 2024-06-06 Cerevel Therapeutics, Llc Azaindole compounds and their use as phosphodiesterase inhibitors

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4178368A (en) * 1971-09-30 1979-12-11 Behringwerke Aktiengesellschaft Method for the treatment of thromboembolism
JPS5325775A (en) * 1976-08-24 1978-03-09 Miller Fluid Power Corp Module type fluid flow control element
US4082612A (en) * 1976-09-24 1978-04-04 Michael Reese Research Foundation Plasminogen activator complex
NZ191320A (en) * 1978-09-07 1982-09-14 Beecham Group Ltd In vivo fibrinolytic enzyme having active site blocked by hydrolytically removable group pharmaceutical compositions

Also Published As

Publication number Publication date
HK65886A (en) 1986-09-12
JPS5678590A (en) 1981-06-27
ES8204467A1 (es) 1982-05-01
IE50174B1 (en) 1986-02-19
NO803304L (no) 1981-05-06
ES496586A0 (es) 1982-05-01
NO163867B (no) 1990-04-23
JPH0316114B2 (hu) 1991-03-04
DE3065190D1 (en) 1983-11-10
GR72121B (hu) 1983-09-16
IE802277L (en) 1981-05-05
NZ195469A (en) 1984-05-31
CS391191A3 (en) 1992-08-12
NO163867C (no) 1990-08-01
NL930029I2 (nl) 1993-12-01
IL61408A0 (en) 1980-12-31
AR224786A1 (es) 1982-01-15
ZA806641B (en) 1981-10-28
CA1174621A (en) 1984-09-18
AU534017B2 (en) 1983-12-22
DK158994C (da) 1991-01-07
DK158994B (da) 1990-08-13
AU6401180A (en) 1981-05-14
IL61408A (en) 1983-10-31
US4808405A (en) 1989-02-28
EP0028489B1 (en) 1983-10-05
EP0028489A1 (en) 1981-05-13
CS391991A3 (en) 1992-06-17
NL930029I1 (nl) 1993-06-01
DK468880A (da) 1981-05-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU185223B (en) Process for preparing an enzymatic derivative containing a binary complex of streptokynase and plasminogen
EP1232251B2 (en) Method of thrombolysis by local delivery of reversibly inactivated acidified plasmin
US6964764B2 (en) Method of thrombolysis by local delivery of reversibly inactivated acidified plasmin
KR970005837B1 (ko) 조직 플라스미노겐 활성화제(t-PA) 활성을 갖는 고농도 단백질 용액의 제조방법, t-PA 활성을 갖는 단백질 용액, 및 이러한 용액을 포함하는 섬유소 용해성 조성물
HU182458B (en) Process for preparing enzyme derivatives with in vivo fibrinolytic activity
AU7258998A (en) Activated protein c formulations
JPH0525470B2 (hu)
Smith et al. Acyl-enzymes as thrombolytic agents in a rabbit model of venous thrombosis
JPH01193229A (ja) 抗血液凝固剤
JPH0672105B2 (ja) 血栓溶解剤及びその製法
US5491129A (en) Synthetic peptides derived from vitronectin and pharmaceutical compositions comprising them
US6969515B2 (en) Method of thrombolysis by local delivery of reversibly inactivated acidified plasmin
EP1459738B1 (en) Pharmaceutical composition having thrombolytic, anti-inflammatory and cytoprotective properties
JPH0567278B2 (hu)
US4507283A (en) Pharmacologically active compounds
NZ227183A (en) A pharmaceutical composition comprising an aqueous hydrogel based on hydroxyethylcellulose and t-pa and/or rt-pa
JP2002530353A (ja) ウイルス性出血熱の処置法
EP0099126B1 (en) Thrombolytic composition
JPH0369332B2 (hu)
JPH078808B2 (ja) プラスミン阻害剤およびプラスミノゲン活性化因子を含有する血栓症治療剤
JPH0769921A (ja) 網膜血管閉塞症予防治療剤
WO2012070966A1 (ru) Модифицированные олигопептиды для лечения панкреатитов, язвенной болезни желудка и других гиперферментемий на основе пептидного ингибитора ферментов и способ их получения

Legal Events

Date Code Title Description
HU90 Patent valid on 900628
HPC4 Succession in title of patentee

Owner name: ROBERTS LABORATORIES INC. MERIDIAN CENTER II, US

HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee