CS391991A3 - Enzyme derivatives, process of their preparation and pharmaceuticals comprising thereof - Google Patents
Enzyme derivatives, process of their preparation and pharmaceuticals comprising thereof Download PDFInfo
- Publication number
- CS391991A3 CS391991A3 CS913919A CS391991A CS391991A3 CS 391991 A3 CS391991 A3 CS 391991A3 CS 913919 A CS913919 A CS 913919A CS 391991 A CS391991 A CS 391991A CS 391991 A3 CS391991 A3 CS 391991A3
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- group
- plasminogen
- streptokinase
- complex
- derivative
- Prior art date
Links
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 26
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 title 1
- 229960005202 streptokinase Drugs 0.000 claims description 48
- 108010023197 Streptokinase Proteins 0.000 claims description 47
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 claims description 31
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 claims description 31
- -1 p-guanidinobenzoyl Chemical group 0.000 claims description 29
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 25
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 claims description 20
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 20
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 20
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 claims description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 9
- 125000003647 acryloyl group Chemical group O=C([*])C([H])=C([H])[H] 0.000 claims description 7
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 7
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 7
- 230000003480 fibrinolytic effect Effects 0.000 claims description 6
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 4
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 4
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 claims description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 4
- 101000605403 Homo sapiens Plasminogen Proteins 0.000 claims description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 125000000229 (C1-C4)alkoxy group Chemical group 0.000 claims 1
- 101150110129 CHD1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims 1
- 125000001589 carboacyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 claims 1
- 125000002541 furyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 7
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010088842 Fibrinolysin Proteins 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 6
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 239000010630 cinnamon oil Substances 0.000 description 5
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 5
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 description 5
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 3
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 3
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 3
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 3
- 230000020176 deacylation Effects 0.000 description 3
- 238000005947 deacylation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 3
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JWKAIXSLWGLVPE-UHFFFAOYSA-N (4-carbamimidoylphenyl) 4-methoxybenzoate Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C(=O)OC1=CC=C(C(N)=N)C=C1 JWKAIXSLWGLVPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CFOQGBUQTOGYKI-UHFFFAOYSA-N (4-nitrophenyl) 4-(diaminomethylideneamino)benzoate Chemical group C1=CC(N=C(N)N)=CC=C1C(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 CFOQGBUQTOGYKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M .beta-Phenylacrylic acid Natural products [O-]C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M 0.000 description 2
- ZEYHEAKUIGZSGI-UHFFFAOYSA-N 4-methoxybenzoic acid Chemical compound COC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ZEYHEAKUIGZSGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N Dimethylamine Chemical compound CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710196208 Fibrinolytic enzyme Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 229930016911 cinnamic acid Natural products 0.000 description 2
- 235000013985 cinnamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 108010087750 lysyl-plasminogen Proteins 0.000 description 2
- WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N methyl p-hydroxycinnamate Natural products OC(=O)C=CC1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003335 steric effect Effects 0.000 description 2
- 108010008962 streptokinase-plasminogen complex Proteins 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 229960000103 thrombolytic agent Drugs 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 1
- MOKGSRSTKODRKS-UHFFFAOYSA-N (4-carbamimidoylphenyl) 3,4-dimethylbenzoate Chemical compound C1=C(C)C(C)=CC=C1C(=O)OC1=CC=C(C(N)=N)C=C1 MOKGSRSTKODRKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BZSXOKFZQWHQJI-UHFFFAOYSA-N (4-carbamimidoylphenyl) 3-(furan-2-yl)prop-2-enoate Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1OC(=O)C=CC1=CC=CO1 BZSXOKFZQWHQJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLFFXYYAMVYCSQ-UHFFFAOYSA-N (4-carbamimidoylphenyl) 4-butylbenzoate Chemical compound C1=CC(CCCC)=CC=C1C(=O)OC1=CC=C(C(N)=N)C=C1 XLFFXYYAMVYCSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OCAHKLLJCGKWCH-UHFFFAOYSA-N (4-carbamimidoylphenyl) 4-fluorobenzoate Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1OC(=O)C1=CC=C(F)C=C1 OCAHKLLJCGKWCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MEFIBLLWBKSWKZ-UHFFFAOYSA-N (4-carbamimidoylphenyl) 4-methylbenzoate Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C(=O)OC1=CC=C(C(N)=N)C=C1 MEFIBLLWBKSWKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FXWXBLXPGAZOHE-UHFFFAOYSA-N (4-carbamimidoylphenyl) benzoate Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1OC(=O)C1=CC=CC=C1 FXWXBLXPGAZOHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODIGIKRIUKFKHP-UHFFFAOYSA-N (n-propan-2-yloxycarbonylanilino) acetate Chemical group CC(C)OC(=O)N(OC(C)=O)C1=CC=CC=C1 ODIGIKRIUKFKHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NMIJQVGEQUAMTN-UHFFFAOYSA-N 3-carbamimidoyl-6-methyl-2-phenylbenzoic acid Chemical compound CC1=C(C(=C(C=C1)C(=N)N)C2=CC=CC=C2)C(=O)O NMIJQVGEQUAMTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUWREDLHIUFGIA-UHFFFAOYSA-N 4-acetamido-4-carbamimidoyl-2-phenylcyclohexa-1,5-diene-1-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)NC1(CC(=C(C=C1)C(=O)O)C2=CC=CC=C2)C(=N)N FUWREDLHIUFGIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XRWBFIBCGDKOLQ-UHFFFAOYSA-N 4-carbamimidoyl-2,4-dimethoxy-3-phenylcyclohexa-1,5-diene-1-carboxylic acid Chemical compound COC1=C(C=CC(C1C2=CC=CC=C2)(C(=N)N)OC)C(=O)O XRWBFIBCGDKOLQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VRJWMZFTJMHQJF-UHFFFAOYSA-N 4-carbamimidoyl-2-methoxy-3-phenylbenzoic acid Chemical compound COC1=C(C=CC(=C1C2=CC=CC=C2)C(=N)N)C(=O)O VRJWMZFTJMHQJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RERGZUQQJQQETF-UHFFFAOYSA-N 4-carbamimidoyl-4-ethoxy-2-phenylcyclohexa-1,5-diene-1-carboxylic acid Chemical compound CCOC1(CC(=C(C=C1)C(=O)O)C2=CC=CC=C2)C(=N)N RERGZUQQJQQETF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GLCKPRDGURCHGO-UHFFFAOYSA-N 4-carbamimidoyl-4-methoxy-2-phenylcyclohexa-1,5-diene-1-carboxylic acid Chemical compound COC1(CC(=C(C=C1)C(=O)O)C2=CC=CC=C2)C(=N)N GLCKPRDGURCHGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZEYHEAKUIGZSGI-UHFFFAOYSA-M 4-methoxybenzoate Chemical compound COC1=CC=C(C([O-])=O)C=C1 ZEYHEAKUIGZSGI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000006734 Beta-Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010087504 Beta-Globulins Proteins 0.000 description 1
- JPIXEHZJYIUJPE-UHFFFAOYSA-N C(N)(=N)C1(C(C(=C(C(=O)O)C=C1C)C1=CC=CC=C1)C)OC Chemical compound C(N)(=N)C1(C(C(=C(C(=O)O)C=C1C)C1=CC=CC=C1)C)OC JPIXEHZJYIUJPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N Cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 206010022086 Injection site pain Diseases 0.000 description 1
- BVHLGVCQOALMSV-JEDNCBNOSA-N L-lysine hydrochloride Chemical compound Cl.NCCCC[C@H](N)C(O)=O BVHLGVCQOALMSV-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 1
- NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N Lidocaine Chemical compound CCN(CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010001014 Plasminogen Activators Proteins 0.000 description 1
- 102000001938 Plasminogen Activators Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 1
- 229920006397 acrylic thermoplastic Polymers 0.000 description 1
- 150000001262 acyl bromides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001263 acyl chlorides Chemical group 0.000 description 1
- 125000004423 acyloxy group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000005236 alkanoylamino group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 229940071248 anisate Drugs 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000010504 bond cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- YYXYBWIDIWTCGS-UHFFFAOYSA-N chembl363685 Chemical class NC(=N)C1=CC=C(O)C=C1 YYXYBWIDIWTCGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- UKJLNMAFNRKWGR-UHFFFAOYSA-N cyclohexatrienamine Chemical group NC1=CC=C=C[CH]1 UKJLNMAFNRKWGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide Substances CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L disodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L 0.000 description 1
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043264 dodecyl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003191 femoral vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N guanidine group Chemical group NC(=N)N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-O guanidinium Chemical compound NC(N)=[NH2+] ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical group 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960004194 lidocaine Drugs 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- BAZQYVYVKYOAGO-UHFFFAOYSA-M loxoprofen sodium hydrate Chemical compound O.O.[Na+].C1=CC(C(C([O-])=O)C)=CC=C1CC1C(=O)CCC1 BAZQYVYVKYOAGO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010064755 lys-plasmin Proteins 0.000 description 1
- 229960005337 lysine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 125000004401 m-toluyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C(=C1[H])C([H])([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- DDIZAANNODHTRB-UHFFFAOYSA-N methyl p-anisate Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(OC)C=C1 DDIZAANNODHTRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M monosodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M 0.000 description 1
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 description 1
- 125000001038 naphthoyl group Chemical group C1(=CC=CC2=CC=CC=C12)C(=O)* 0.000 description 1
- 125000005441 o-toluyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(C(*)=O)=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical group 0.000 description 1
- 125000005440 p-toluyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C(*)=O)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000007030 peptide scission Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229940127126 plasminogen activator Drugs 0.000 description 1
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000011045 prefiltration Methods 0.000 description 1
- 230000000019 pro-fibrinolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 239000011814 protection agent Substances 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- ISXSCDLOGDJUNJ-UHFFFAOYSA-N tert-butyl prop-2-enoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)C=C ISXSCDLOGDJUNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000009424 thromboembolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002537 thrombolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 210000002268 wool Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/315—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci
- C07K14/3153—Streptokinase
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/99—Enzyme inactivation by chemical treatment
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
Enzymový derivát, způsobředky s jeho obsahem ΑΛΞΓΘΟν jeho výroby a farmaceutické úhd ov$n 2 6 II L 0
Oblast techniky r I3íoc
Vynález se zabývá enzymovými deriváty, zvláště eLay^ogýfl-β Q mi deriváty aktivátorového komolexu streptokináza/plasminogen, í který se používá k léčení venozní trombózy. ——
Dosavadní stav
Je známo, 23 komplex vytvořený streptokinázou a enzymemplasminogenem lze použít jako trombolytické látky při léčběvenozní trombózy. Plasminogen je plasmatický /?-globulin a jeinaktivním prekurzorem fibrinolytického enzymu plasminu. Stréptokináza je sekreční produkt hemolytického streptokoka a lzeji získat levně vé velkých množstvích. Smísením streptokiná-zy a plasminogenu vznikne dvousložkový komplex, kde jsou obělátky vzájemně vázány velmi silnou, nekovalentní vazbou. Poz -ději dochází ke konformačním změnám v plasminogenové komponen-tě a k odkrytí katalytického místa s proteolytickou aktivitou.Tínr. se rozštěpí peptidická vazba, nejdříve u strěptokinázovékomponenty a druhotně také u plasminogenu, z něhož vzniká plasmin. Výsledný komplex, který se volně označuje jako ”strepto-kináza/plasminogenový komplex” je v podstatě komplexem fra£-mentované streptókinázy a plasminu. V současné době není známžádný mpůsob, jak izolovat počáteční dvousložkový komplexstreptókinázy a plasminogenu s katalytickými místy předtím,než dojde k rozštěpení vnitřní peptidické vazby, protože sejedná o komplex, který je velmi labilní a okamžitě se rozklá-dá. Tento komplex byl však detekován tak, že katalytická mís-ta byla chráněna přidáním acylační látky p-nitrophenol p-gua-nidinobenaoátu ke směsi streptókinázy a plasminogenu / vizD. K. McClintock a P. H. Bell, Biochem Biophys Res Comm 43,694-702, 1979/. - 2 -t V Evropské-přihlášce vynálezu č. 79301773*2 byly popsányderiváty fibrinolytických enzymů, jejichž katalytická místapro fibrinolytickou aktivitu byla blokována pomocí skupiny,kterou bylo možné za určitých okolností odstranit hydrolýzou.Jedním z vhodných enzymů byl komplex streptokináza/plasminogen.Protože tento komplex vzniká nejdříve smísením streptokinázy aplasminogenu, s následným chráněním katalytických míst, paktedy výsledný produkt popsaný ve vyn lezu je chráněná forma“komplexu streptokináza/plasminogen”', vlastně chráněná formakomplexu rozštěpené streptokinázy a plasminu.
Nyní bylo zjištěno, že chráněný derivát původního dvou-složkového komplexu streptokinázy a plasminogenu lze izolovattak, že se při jejich smísení přidá v nadbytku chránící látka.Tento komplex si nejen podrží svou trombolytickou aktivitu,ale je také homogenější, účinnější a je snazší sledovat tvorbukomplexu, v porovnání s vynálezem popsaným v Evropské přihláš-ce vynálezu č. 79301773·2.
Podstata vynálezu
Vynález popisuje enzymový derivát skládající se zf dvou-složkového komplexu nerozštěpené streptokinázy a plasminogenu.Tento komplex má katalytická místa nezbytná pro fibrinolytic-kou aktivitu chráněna skupinou, kterou lze odstranit hydrolý-zou tak,·že rychlostní konstanta reakce pseudo-prvého řádu —6 *"1 -3 “1 pro hydrolýzu derivátu je v rozsahu 10 °s« až 1 0-se-e-v izotonickém vodním prostředí při pH 7^4 a 37 °C, za předponkladu, že skupina, která chrání katalytická místa není ze sku-piny p-guanidinobenzoylu.
Jak bylo uvedeno shora, McClintock a Bell použilip-guanidinobenzoylovou skupinu k acylaci původního komplexustreptokinázy a plasminogenu. Výsledný chráněný derivát sevytvořil až při titraci aktivních míst komplexu. V souladu s těmito poznatky byl další výhled tohoto vy-nálezu, izolovat enzymový derivát dvousložkového komplexustreptokinázy a plasminogenu, kde nedošlo k žádnému podstat- němu štěpení vnitřní peptidické vazby jak ve streptokinázovákomponentě, tak u plasminogenu. Tento komplex má katalytickámísta nezbytná pro fibrinolytickou aktivitu chráněna skupinou,kterou lze odstranit hydrolýzou, jestliže rychlostní konstan-ta reakce pseudo-prvého řádu pro hydrolýzu derivátu je v roz-mezí od 10 setf do 10— v izotonickém vodním prostředí při pH. 7.4 a 37 °C. Dalším předpokladem je, že chránící sku-pina není p-guanidinobenzoylového typu.
Streptokinázová komponenta použitá v tomto vynálezu je na-tivní nefragmentovaná strěptokináza o molekulové hmotnosti ko-lem 47 000. Původní "komplex streptokináza/plasminogen" obsaho-val fragmentovanou streptokinázu o molekulové hmotnosti menšínež 40 000.
Charakteristickou vlastností derivátu v tomto vynálezu je,že při redukci a elektroforetické analýze ze přítomnosti na-trium dodecyl sulfátu lze stanovit pouze dva polypeptidové ře-tězce, jeden odpovídající streptokináze o molekulové hmotnostikolem 47 000 a druhý odpovídající plasminogenu. V rozporu stímto zjištěním, shora uvedený "komplex streptokináza/plasmi-nogen" vykazoval nejméně tři polypeptidické komponenty, z nichžjedna odpovídá fragmentu streptokinázy o molekulové hmotnostiméně než 40 000 a další lehkému a těžkému řetězci plasminu.
Pro přípravu derivátu v tomto vynálezu může,, být použitlibovolný plasminogen, který je schopen tvořit bimolekulárníkomplex se streptokinázou, například lidský, kočičí, psí nebokráličí. Jako nejvhhdnější se jevil lidský plasminogen. Základní vlastností skupiny chránící katalytická místa derivátu v tomto vynálezu, je její odstranitelnost pomocí hy- drolýzy, kde rychlostní konstanta reakce pseudo-prvého řádu—6 —1 —3 pro hydrolýzu není menší než 10 se^ a není větší než 10seef. Nejvhodnější konstanta je v rozmezí 10”^až 10 ^se^
Jestliže deriváty mají rychlostní konstantu větší než10 Js$ťj uvolňují neúměrně více volného enzymu, než' se můženavázat na fibrin. Jestliže deriváty mají naopak rychlostníkonstantu menší než 10 ^se^ , pak uvolňují enzym příliš poma-lu na to, aby došlo k jakémukoli klinickému použití.
Tento vynález se zabývá deriváty určenými jak k léčebnér-mu, tak k profylaktickému použití. Pro účely profylaxe jsoupreferovány deriváty s pomalou rychlostí hydrolýzy a z tohoplynoucím delším poločasem. Deriváty vhodné pro tento účelměly rychlostní konstantu reakce pseudo-prvého řádu u hydrolýzy v rozmezí 5x1 0“^ až 10”5 se^“1 a poločas· od 3-5 do 16 ho-din. Pro léčebné účely byly vhodnější deriváty, které se rychleji hydrolyzovaly, například jako preparát o rychlostní kon-stantě pro hydrolýzu pseudo-prvého rádu v rozmezí 5x1 O-^ ag «λ t —1 7x10 , což odpovídá poločasu 30 minut až dvě hodiny.
Rychlostní konstanta reakce pseudo-prvého řádu byla sta-novena hydrolýzou enzymového derivátu za fyziologických pod-mínek, to znamená v izatonickém vodním prostředí při pH 7.4a při 37 C.V pravidelných intervalech se odebíraly podíly,inkubovaly s chromogenním nebo fluorogenním proteázovým sub-strátem jako je S-2251 / H-D-val-leu-lys-p-nitroanilid hydro-chlorid/ a byla měřena rychlost konyerze substrátu.
Hydrolýza byla měřena do doby, kdy rychlost konverze subbyla vypočte- strátu dosáhla maxima. Rychlostní konstanta pakna vynesením do grafu: loge / 1 - max Z proti t kde Amax je maximální rychlost přeměny určitéhostrátu a A. je rychlost přeměny určitého podílu podílu sub-substrátu v čase t.
Mezi vhodné skupiny, které chránily katalytická místapatří acylové skupiny jako je benzoyl, akryTóýl nebo substi-tuované skupiny akryloylové. Rychlostní konstanta pro hydro-lýzu pseudoprvého řádu pro kterýkoliv enzymový derivát substi-tuovaný benzoylem byla stanovena na základě Hammettovy hodno-sty . Stanovovala se najednou rychlostní konstanta pseudo>-prvého řádu pro dva a více substituovaných- benzoylových deri-vátů a předpokládalo se, že nedochází k žádné zvláštní inter-akci mezi jednotlivými substituenty a enzymem. Všeobecně se uznává, že Hammettovy hodnoty pro meta a pa Λ»Κ >Í’. .· '1'· :'ν . ť.LrC? z.»iV ι.ί'Λ-'ί’1- X»Χ*ί.'·:^'·< ίΛ.':.'·- J .··, ·» ,. ·ύ ra substituenty /G^ a (F^/ poskytují přijatelnou predikci rych-losti hydrolýzy. Navíc hodnoty a (Γ'ρ ve svém součtu umož-ňují se značnou přesností vypočítat kinetické vlastnosti dalsších substituovaných benzoylových skupin, zvláště, když se jed-ná o více substituentů. Hammettovy hodnoty pro orto substituen-ty / {r0, / nelze sčítat s takovou spolehlivostí jako 0"^ ahodnoty, pro jejich sterický efekt.JJestliže se však jedná o ma-lý orto substituent, jehož sterický efekt je zanedbatelný,např. u methyl a methoxy fluorid, kde ΖΓθ hodnota je v rámcivšeobecně přípustná chyby, lze ji použít samotnou, nebo v sou-čtu s ť anebo (Τ' hodnotami při výpočtu rychlosti reakce. ill
Pod}. e uvedených omezení je nejvhodnější chránící skupinoupro vynález taková substituovaná benzoylová skupina,kde na fe-nylovém kruhu je jeden nebo více substituentů, zvláště v polo-ze meta a para a kde součet Hammettových hodnot je v rozsahu0.1 až 1.1.
Mezi vhodné benzoylové a substituované benzoylové skupinypatří benzoyl, podle volby substituovaný halogenem, alky-lem, θι_g alkoxylem, alkanoyloxylem, alkanoylamino /RCONH-/. Jsou to například benzoyl, p-fluorobenzoyl, o-, m-,nebo p-toluoyl, 0-, m-, nebo p-methoxybenzoyl /anisoyl/,o-, m-, nebo p-ethoxybenzoyl, 2,4-dimethoxybenzoyl, 3,4-di-methoxybenzoyl, 4-betylbenzoyL, 3-methyl-4-methoxybenzoyl,o-acetoxybenzoyl /acetysalicyloyl/ a pr-acetamidobenzoyl. Dalšíaromatickou skupinou je naftoyl. Výjimkou z tohoto všeobecného pravidla je ten případ, kdybenzoylová skupina obsahuje aminovou, dimethylaminovou a gua-nidinovou složku. Rychlost hydrolýzy u takových derivátů jevíce než desetkrát pomalejší, než vypočítaná hodnota.
Jinou skupinou, která by mohla být vhodně použita ve vyná-lezu je akryloyl samotný nebo substituovaný, zvláště skořicovásilice samotná nebo substituovaná jedním nebo více substituen-ty, zvláště pak v poloze meta a para, kde součet Hammettových hodnot je v rozsahu -1^0 až +0,15, vzhledem k omezením uve-deným nahoře.
Mezi vhodné substituované akryloylové skupiny patří
alkylakryloyl, skořicová silice, G1 _g alkyl-skořicové silice.Zvláštní případy představují 3,3-dimethylakryloyl, 2-fůry1--3-akryloyl, skořicová silice á p-methyL skořicová silice.
Derivát uvedený v tomto vynálezu byl připraven -smísenímstreptokinázy s plásminogenem za přítomnosti chránících látekpodle vzorce A-B nebo podle vzorce E-F, kde A je skupina selek-tivní pro katalytická místa, jež jsou nezbytná pro fibrinolyř-tickou aktivitu. Skupina B je odstupující skupina, která má zaúčel přenos skupiny A na katalytické místo a urychlení vazbytéto skupiny na enzym. Skupina E určuje polohu agens na kataly-tickém místě a skupina F je odpovědná za přenos na katalytickémísto, čímž lze dosáhnout volitelnou izolaci derivátu.
Použití agens A-B představuje přímý chránící postup. Lát-ky působící tímto způsoběm jsou známy. Jedním příkladem jep-nitrofenyl p 'guanidinobenzoát. Guanidinová část je selektivněsituována do blízkosti katalytického místa a její navázání jepodporováno nitrophenyloxilov.ou odstupující skupinou.
Použití agens E-F představuje nepřímou chránící metodu.Příklady skupiny E-F zahrnují p-amidinophenyloxil a p-acetami-dinophenyloxil nebo strukturálně stejně substituované fenylovéskupiny obsahující pozitivně nabitou část v pozici meta nebopara. Příklady inverzně chránících látek jsou: p-amidinofenylpffluorobenzoát, p-amidinofenyl p '-toluát, p-amidinofenylp'anisát, p-amidinofenyl benzoát, p-amidinofenyl skořicovésilice, p-amidinofenyl p-methyl skořicové silice, p-amidino-phenyl 3-/2-furyl/-akrylát, p-amidinofenyl^-naftoát, p-amidi-nofenyl-3,3-dimethylakrylát, p-amidinofenyl 4-butyl^benzoát,p-amidinofenyl-2,4-dimeth.oxybenzoát, p-amidinofenyl-acetylsa-licylát, p-amidinofenyl-4-ethoxybenzoát, p-amidinofenyl-p-ani -sát, p-amidinofenyl-o-toluát, p-acetamidinofenyl-p -anisát,p-amidinofenyl-o-anisát, p-amidinofenyl-3,4-dimethylbenzoát,p-amidinofenyl-3-methyl-4-niethoxy-. benzoát a p-amidinofenyl-"4-acetamidobenzoát.
Je vhodné, aby přímá i inverzní chránící reakce probíhalav pufrovaném vodním prostředí při pH, které není pro enzym, chráníc£ látku nebo produkt škodlivé, což je pH od 6 do 9, nej-lépe kolem pHL 7.
Reakce se většinou provádí tak, že se nejdříve smísí chrá-nící látka se streptokinázou nebo s plasminogenem a pak se při-dají další komponenty. Molární koncentrace streptokinázy by mě-la být přibližně stejná jako molární koncentrace plasminogenu. U většiny chránících látek je poměr chránící látky ke strepto-kináze 100-násobek molárního základu, přičemž je nejvhodnější250-ti násobný přebytek. U některých zvlášt reaktivních inverz-ních nebo přímých chránících látek, jako je p-nitrofenyl-p*-guanidinobenzoát lze použít i nižší molární poměr.
Chránící reakce lze provádět při mírných teplotách, toje od 0 °C do 20 °C.
Doba trvání reakce závicí na použitém chránícím réagensa na teplotě za které reakce probíhá. Vhodná doba je od 0.5do 1 hodiny, ale je možné nechat reakci probíhat déle.
Po ukončení reakce je derivát purifikován standardnímizpůsoby,jako je dialýza, afinitní chromatografie a ultrafiltra-ce a dále zpracováván standardními postupy, jako je lyroíiliza-ce. Je-li to nutné, může být materiál upraven například steri-lizací pro nitrožilni podání u lidí. U inverzních chránícíchlátek typu E-F, kde E je představováno p-amidinofenoxylem a Facylovou skupinou lze postupovat tak, že se připraví acylovanásůl p-hydroxybenzamidinu s acylačním derivátem o vzorci F-X,kde F je shora popsáno a X je hydroxyl nebo jeho' aktivovanýderivát za volitelné přítomnosti katalyzátoru. Příklad aktivovaného acylačního derivátu je acyl chloridnebo acyl bromid. Tyto deriváty lze připravit standardnímipostupy.
Vhodné katalyzátory pro tento proces představují terciár-ní organické báze jako například pyridin a kondenzační látkupředstavuje například dicyklohexylkarbodiimid.
Acylační reakce probíhají obvykle v polárním organickémrozpouštědle, které je inertní k reagenciím i k produktu.Ν,Ν-dimethylformamid a dimethylsulfoxid jsou příklady vhodnéhorozpouštědla. Jestliže je katalyzátor tekutina, jako tomu jev případě pyridinu, pak může reakce probíhat za nepřítomnostirozpouštědla.
Reakce je prováděna větáinou za nírné teploty, to znamenápři, méně než 70 °G a většinou při méně než 40 °C;. přičemž jenejvhodnější okolní teplota.
Doba- potřebná pro ukončení reakce závisí od specifickýchreagens, jež byla použita, od rozpouštědla a od teploty za kte-ré reakce probíhá. Lobu lze stanovit, když sledujeme reakcinapříklad pomocí chromatografie ma tenké vrstvě.
Když je reakce ukončena, produkt je regenerován a čištěnstandardními postupy.
Vynález se dotýká rovněž farmaceutického prostředku, jerž za-hrnuje farmaceuticky přijatelný nosič spolu s enzymovým deri-vátem, představovaným dvousložkovým komplexem streptokináay aplasminogenu. Tento komplex má katalytická místa nezbytná profibrinolytckou aktivitu chráněna skupinou, jež je odstranitel-ná hydrolýzou, kde rychlostní konstanta reakce pseudo-prvéhořádu pro hydrolýzu je v rozsahu 10až 1 O^se·#“1 v izo-t-onickém vodním prostředí při pH 7/4 a teplotě 37 °C.
Prostředek, uvederý ve vynálezu je vyjádřen v souladu s běž-ným postupem u farmaceutických sloučenin upravených pro nitro-žilní podání lidem.
Charakteristické složení pro intravenozní podání předsta-vuje roztok sterilního derivátu ve sterilním izotonickém vod-ním pufru. Jestliže je to nezbytné, sloučenina může obsahovattaké solubilizační činidlo zajištující rozpustnost derivátu ataké anestetikum, jako je například lignokain, za účelem, sní-žení bolestivosti v místě vpichu. Enzymový derivát je většinoudodáván, v balení po jednotlivých dávkách, buá jako suchý prá-šek, nebo jako bezvodý koncentrát, jež je hermeticky zatavenv obalu v podobě ampulí nebo sáčků s označením množství enzymuv jednotkách aktivity, spolu s indikací a dobou v průběhu kte-ré se enzym uvolní. V případě, že by derivát měl být podán vinfuzi, je dodáván s infuzní láhví obsahující sterilní MVodupro injekci”. Pokud by se derivát měl podávat injekčně, pak jedodáván spolu s ampulí sterilní vody pro injekci. Injekční, ne-nebo infuzní roztok se připraví smísením ingrediencií před po-dáním.
Množství podaného materiálu závisí od toho, jak velká fi-brinoXýza je požadována a od rychlosti, kterou by měla probí-hat a také cul závažnosti tromboembolických podmínek, to zname-ná od polohy a velikosti sraženiny. Například, u pacienta spulmonální embolií^ nebo u pacienta s velkým, život ohrožují-cím, stoupajícím ileo-femorálním trombem, bude nutné podatvelké množství rychle působícího materiálu. Pokud by však, nadruhé straně, bylo potřeba preventivně zabránit tvorbě trombůpo operaci, stačí malé dávky pomalu působícího materiálu. 0velikosti dávky a způsobu podání rozhodne lékař odpovědný zaléčbu. Nicméně, pacient léčený pro trombus střední velikostibude obecně dostávat denní dávku od 0.10 do 1.0 mg kg 1 váhytěla v injekcích do počtu osmi dávek anebo infuzí. V porovnánís jinými trombolytickými látkami, má derivát uvedený v tomtovynálezu výhodu v tom, že ha lze podávat spíše v injekci nežv kontinuální infuzi a že lze vystačit s jednou nebo dvěmainjekcemi za den. Příklady provedení vynálezu Příklad 1 Příprava lyofilizovaného komplexu streptokináza/plasminogenbez rozštěpení vnitřní peptidické vazby
Streptokináza /250 000 jednotek, Kabi, Stockholm/ bylarozpuštěna v 0.1 M roztoku hydrochloridu trishydroxymethylme-thanu o pH 7·4 /2.5 ml/, ke kterému byl přidán 0.1 M roztokp-amidinophenyl-p'-anisátu v dimethylsulfoxidu /0.25 ml/.Vznikla mírná sraženina. K této směsi se přidala 0.5 ml rozto-ku lidského lys-plasminogenu / 8.99 mg/ml ve shora uvedenémpufru/ /Kabi, Stockholm/ a směs byla rychle a důkladně pro-míchána. Poté, co byl roztok zchlazen na ledu po dobu 15 min,,byl uskladněn, na ledu do doby použití. Po asi 2 hodinách, bylo0.4 ml /40 000 j./ materiálu rozpuštěno ve 3-0 ml suspenzeL-lysin-sepharosa 4B / 33g/100 ml suspenze ve shora uvedenémpufru/ a roztok byl uložen po dobu 1 hodiny do teploty 0 °C. \λ - 10 -
Gel byl odfiltrován; v nálevce zer slinutého) skla při 4 °C aodsáván, dále promyt pufrem /100 ml/-. Gel byl eluován mírnýmodsáváním se; stejným pufrem obsahujícím. 0.1 14 <£-aminokaprono-vé kyseliny / 3 dávky po 5 ml/. Chemicky vázaný filtrát byldialyzován: po) dobu 2 hodin; při 4 °C v pufru s amoniem bikarbo-nátem /50 mM, pH. 7*0/ obsahujícím 2.5 g manitolu na 100 ml.Produkt byl pak lyofilizován na 0.799 g pevné bílé látky. Při-bližně 1 95 mg tohoto materiálu bylo- analyzováno pomocí gelové'elektroforézy s vrstvou gelového polyakrylamidu, kde bylo cel-kem 10% suché hmotnosti gelů. Tato elektroforéza proběhla zapřítomnosti dodecyl sulfátu sodného. Byly pozorovány dva hlav-ní polypeptidové pruhy, jeden odpovídající lys-plasminogenu/molekulová hmotnost 84,000/ a streptokinázový pruh / moleku-lová hmotnost 47,000/. Byla rovněž pozorována stopa odpovída-jící příměsi lidského sérového albuminu z komerčního přípravkustreptokinázy. Příklad 2 Příprava farmaceutické, lyofiíizované směsi obsahující akti-vační komplex p-aniseyl-Zstreptokináza-plasminogen/
Roztok 0.03 M fosforečnanu sodného a 0.12 M glutamátu.sodného) o pH. 7*5 obsahující streptokinázu / 9.95mg/mlvuvede-ných; roztocf kde celkový objem byl pak 45 »4 ml/ byl smí sens~ lysin/manitolovým pufrem /110 ml/ při pH 7·0 a se sterilnímglycerolem / 60 ml/ a míchán po dobu 5 minut za teploty 4 °C*Po dobu 2 minut byl přidáván sterilní filtrovaný roztok p-ami-dinofenyl p*anisátu v DMSG /15 ml, 20 mM/ a míchán po dobu5 minut. Po dobu 2 minut byl přidáván lidský plasminogen/71 ml, 11.4 mg/ml - Kabi, Stockholm/ a směs se míchala 60minut při 4 C. Dále byl do směsi přidán lidský sérový albumin /klinickášarže/ / 18.9 ml roztoku, kde bylo 20 g na 1 00 ml/ a tatosměs se míchala 2 minuty při 4 °C. Po přidání lysin/manitoló-vóho pufru obsahovala reakční nádoba až 400 ml tekutiny. Te-kutina byla profiltrována přes sterilní materiál Millipor .Z/f'tit.UiÍÍr, 3ώ>Α2ί.χιώΐϊβοΖ&ίώώΛώίΙ»ιίίί'£· λ<"λν^\ύ^ν.άί ‘^M^feiÍíwŠi’ - 11 - ο průměru 14 cm a s průměrem otvorů 0.22 ju / za použití hru-bého předfiltru/ a převeden do sterilního rezervoáru. Jednotlivé podíly po 5·θ ml. byly rychle rozděleny do sterilních lahvi-ček o obsahu 20 ml, opatřeny dvoustupňovým uzávěrem a zmraženynebo lyofilizovány při -40 °C. Lyofilizace probíhala; po dobunejméně 24 hodin, uzávěry byly uzavírány ve- sterilním azataveny.
Složení každé lahvičky bylo následující:aktivační komplex p-anisoyl-/streptokináza-plasminogen/: 4-6mgL-lysin hydrochlorid: 22.8 mg D-mannitol: 50 mg p-amidihofenyl p 'ani sát: <(50 /ig chlorid sodný: stopa Příklad 3
Podobně jako u příkladu 1, s tím rozdílem, že'místo p-amidino-fenyl pzanisátu byla použita p-amidinofenyl 3-methyl, 4-methoxybenzoová kyselina pro přípravu aktivačního komplexu 3-methyl4-methoxybenzoyl-/streptokináza-plasminoge-n/. Příklad 4 Příprava lyofilizovaného komplexu 3»5 dimethyl 4-methoxy ben-zoyl streptokináza/plasminogen bez rozštěpení vnitřních pep-tidických vazeb.
Streptokináza / 20 ml roztoku připraveného rozpuštěním 3.58 mg streptokinázy v 1 ml 0.03 M roztoku fosforečnanu sod-ného a 0.12 M. glutamátu sodného o pH 7*5/ byla smísena s gly-cerolem / 20 ml/ a míchána po dobu 5 minut při teplotě 4 °C.
Pak byla přidána p-amidinofenyl 3,5 dimethyl 4-methoxy benzo-ová kyselina HCl / 21.7 mg/ v dimethylsulfoxidu / 3 ml/ amíchána po dobu 5 minut při teplotě 4 G. Lidský lys-plasmino-gen / 144 mg v 25 ml, 20 mM L-lysín HCl, 1 g D-mannitolu na100 ml, o pH. 7*0/ byl dále přidán ke směsi a 2 hodiny míchánpři 4 °C. Pak byl přidán lidský sérový albumin / 3 ml, 20 g na 100 ml rozpuštěného; ve vodě/, celá směs pak byla zředěna na 250 ml lysin/manitolovým pufrem a filtrována po dobu 2 1/2 ho- diny při 4 °C, dokud'nebylo dosaženo 1130 ml filtrátu. Při lyo filizaci zbytkového roztoku vzniklo 3.018 g bílého prášku, kte rý po děacylaci obsahoval 23·5 jug/mg volného aktivátoru. - 12 -
Biologieké údaje
Králík s radioaktivně označenou sraženinou ve véna cavainferior sloužil ke srovnání systémového podání následujícíchpreparátů: deriváty připravené podle příkladu 1 až 3; p-ani-soylový derivát známý jako ”komplex streptokináza/plasmino-gen" připravený podle příkladu 22 Evropské přihlášky vynálezuš. 79301773.2 a nemodifikovaný aktivační komplex streptokiná-za/plasminogen. Na rozdíl od metody použité v Evropské přihlášce vynálezu byl trombus přichycen vlněným vláknem místo kon-strikční ligaturou. V tabulce 1 jsou uvedeny průměrné hodnoty lýze stanovenéna různém počtu zvířat:
Tabulka 1
Počet Průměrnázvířat lýze /%/ 1. Kontroly, které dostaly fyziologický 8 roztok 2. Nemodifikovaný aktivační”komplex střep- 6tokináza-plasminogen" připravený vekvimolárních množstvích obou proteinů při 0 °C a 10 min. a podávaný ihned 3. Nemodifikovaný komerční aktivační komplex 5streptokináza-plasminogen /Behringwerke/ 4. Aktivační komplex p-anisoyl-/streptokiná- 5za-plasminogen/ s rozštěpenou vnitřní pep-tidickou vazbou připravený podle příkladu 22 EU 79301773.2 3 + 1 20 + 4 14+4 24+8 pokračování tabulky 1 - 13 -
Počet. Průměrnázvířat lýze /%/ 5. Aktivační komplex p-anisoyl-/streptokiná- 5 42+6 za-plasminogen/ s nerozštěpenou vnitřnípeptidickou vazbou, připravený podle pří-kladu 1 6. Podle příkladu 2 připravený lyofilizova- 13ný aktivační komplex p-amsoyl-/strep-tokináza-plasminogen/ 7. Podle příkladu 3 připravený aktivační 5 komplex 3-methyl, 4-methoxy-benzoyl-/étreptokináza-plasminogen/ 41+6 29+5
Uvedené výsledky ukazují, že za použití tohoto experimen-tálního uspořádání jsou deriváty vyrobené podle příkladu 1 a 2skoro dvakrát více účinné v rozpouštění trombů, než derivátypřipravené blokováním: fragmentováného komplexu streptokináza/plasmin. Z tabulky 1 je rovněž patrné, že deriváty aktivačníhokomplexu streptokináza-plasminogen, jež mají aktivní místaacylována, jsou účinnější,než jejich- nemodifikované protějšky,a to i v případě, že nemodifikované komplexy jsou připravenyzcela čerstvé.
Pro testování fibrinolyťických látek bylo vytvořeno ještědruhé experimentální uspořádání, kde se trombus vytvořil kolemvlněného vlákna upevněného ve femorální véně psů rasy beagle.Po uvolnění ligatury se pomocí venozní kanyly odsála krevz venozních segmentů a byla označena pomocí radioaktivního izot©pu 1^25 na ij^gkém fibrinogenu /viz Evropská přihláška vy-nálezu č. 79301773*2/ a pak spolu s králičím mozkovým trombo-plastinem vpravena zpět do segmentu odkud byla odebrána. Povzniku sraženiny byla ligatura odstraněna a výsledný radio-aktivně označený okluzivní trombus byl upevněn pomocí nitě. - 14, -
Tabulka 2 shrnuje výsledky léčby těchtoc psů různými fibrinoly-tickými, látkami. Konečná lýza byla stanovena radiochemicky poexGizi zbylého trombu na konci pokusu. Z. tabulky 2 je patrné,že p-anisoyl streptokináza-plasminogenový komplex připravenýve vynálezu ve dvou dávkách je účinnější, než ve stejných dáv-kách podaný nemodifikovaný a čerstvě připravený aktivační kom-plex.
Chemické údaje
Tabulka 3 podává zdánlivé konstanty prvního rádu pro de-?acylaci aktivních míst substituovaného aktivačního komplexustrěptokináza-plasminogen: při 37 °C a pH 7·4· Z tabulky jezřejmé, že konstanta deacylační rychlosti má-\ztah k elektrono-vé struktuře substituované benzoylové skupiny. V zásadě lzepozorovat, že substituenty, které odebírají elektrony zvyšujírychlost deacylace a skupiny dodávající elektrony tento proceszpomalují.
Tabulka 2
Aktivita enzymových derivátů na modeluvenozní. trombózy u psa
Enzymový derivát Dávka Počet Průměrnám.j./kg zvířat lýze /%/ 1. Kontroly s fyziologickým roztokem - 7 22+10 2. Nemodifikovaný aktivační komplex 1500 5 10+2 streptokináza-plasminogen připra-vený v ekvimolárníchQmnožstvích obou proteinů při 0 C a 10 min.podávaný ihned 3· Dtto 2500 25+18 - 15 pokračování tabulky 2 ' .....— Aktivilta enzymových derivátů na modelu venozní trombózy u psa Enzymový derivát Dávkam. j./kg Počet zvířat Průměrnálýze /%/ 4. Podle příkladu 2 připravený akti-vační komplex p-anisoyl-/strepto-kináza.plasminogen/ 1500 5 79 + 14 5· Dtto 2500 5 85+14 6. Streptokináza 1500 3 24 + 21
Tabulka 3
Zdánlivé konstanty prvého, řádu pro deacylaci aktivních místacylovaných derivátů aktivačního, komplexu streptokináza-plasminogen
Acylová skupina; k^ / se-er při pE 7.4 a 3^0
Benzoyl 2-toloyl 4-anisoyl 4-fluorobenzoyl 3r methyl-4-anisoyl 3,5idimethyl-4-anisoyl 4-nitrobenzoyl 4-chorobenzoy1 3.5 x 10'4 1.9 x 1 O“4 2.9 x 10“4 2.6 x 10"41.2x10~41 .6 x 10'42.3 x 10“22.5 x 10"3
Claims (16)
16 -
PATENTOVÉ NÁROKY
1. Enzymový derivát, vyznačující f λΛ3?ΘΟ V. AZ3TVNaA Chd1 I ávgc s e
že sestává z dvousložkového komplexu streptokinázy a pl; -nogenu bez podstatného rozštěpení vnitrní peptidické vazb^7 ? 6ve streptokinázové nebo plasminogenové komponentě a mající -t>5katalytická místa nezbytná pro fibrinolytickou aktivitu chTá'-s'""'Lněna skupinou, kterou lze odstranit hydrolýzou jestliže kon-stanta rychlosti pro hydrolýzu pseudo-prvého rádu je v roz-mezí od 10 se« 1 do 10 ^s^a v izotonickém vodním pro-středí při pH 7,4 a teplotš 37 °C a za předpokladu, že sku-pina chránící katalytická místa není p-guanidinobenzoylové-ho typu.
2. Izolovaný enzymový derivát sestávající z dvouslož-kového komplexu nefragmentované streptokinázy a plasmino-genu, vyznačující se tím, žeu něj nedošlok podstatnému rozštěpení vnitřní peptidické vazby jak vestreptokinázové,tak v plasminogenové komponentě, jež má ka-talytická místa nezbytná pro fibrinolytickou aktivitu chrá-něna skupinou, kterou lze odstranit hydrolýzou, jestližekonstanta rychlosti pro hydrolýzu pseudo-prvého řádu je vrozmezí 10 ^sba”^ až 10-^seú-^ v izotonickém vodním prostře-dí při pH 7,4 a 37 °C a za předpokladu, že se nejedná o p--guanidinobenzoylovou skupinu.
3. Derivát podle nároku la2, vYznačujícíse tím, že nefragmentovaná streptokináza má molekulo-vou hmotnost kolem 47 000.
4. Derivát podle nároku laž3, vyznačujícíse t í m, že plasminogenové komponenta je lidský plasmino-gen. 17
5. Derivát podle nároku 1 až 4, vyznačujícíse t í m , že rychlostní konstanta pseudo-prvého řádu jev rozmezí 10"^ až 10-^ sp^""!.
6. Derivát podle nároku 1 až 5, vyznačujícíse tím, že skupina, která se odstraňuje hydrolýzou jeacylová skupina.
7. Derivát podle nároku 6, vyznačující set í m , že acylová skupina je představována substituovanýmbenzoylea, akryloylem nebo substituovanou akryloylovou sku-pinou .
8. Derivát podle nároku 7, vyznačující setím, že jako acylová skupina je benzoylová skupina nebosubstituovaná benzoylová skupina se substituenty v meta nebopara poloze a součet Hammettových a J" hodnot je v rozsa-hu +0,1 až -1,1.
9. Derivát podle nároku 8, vyznačující se tím , že jeho acylová skupina je benzoyl volitelně substi-tuovaný halogenem, alkylem, C-^_^ alkoxylem, alka- noyloxylem nebo akanoylaminoskupinou.
10. Derivát podle nároku 7, vyznačující se tím, že jeho acylová skupina je akryloyl volitelně sub-stituovaný alkylem, furylem, fenylem nebo C^_^alkyl- fenylem.
11. Farmaceutický prostředek, vyznačujícíse tím, že jako účinnou složku obsahuje enzymový de-rivát podle nároku 1 až 10 spolu s farmaceuticky přijatelnýmnosičem.
12. Prostředek podle nároku 11, vyznačujícíse t í m , že je ve formě vhodné pro nitrožilní podání. 18
13. Prostředek podle nároku 1 nebo 2, vyznaču-jící se tím, že jde o p-anisoyl streptokináza//plasmigenový komplex.
14. Způsob výroby derivátu podle nároku 1 nebo 2,vyznačující se tím , že se smísí streptokiná-za s plasminogenem v přítomnosti přebytku chrániči látkypodle vzorce A-8 nebo E-F, kde A je skupina selektivní prokatalytická místa nezbytná pro fibrinolytickou akti-vitu; 8je skupina schopná přenést skupinu A na katalytické místoa urychlit její navázání na enzym; skupina E určuje polohuagens na katalytickém miste a skupina F je odpovědná za pře-nos z umisťující skupiny E na katalytické místo, čímž lzedosáhnout izolaci volitelného derivátu.
15. Způsob podle nároku 14, vyznačujícíse tím, že skupina E znamená p-amidinofenoxyl nebop-acetamidofenoxyl.
16. Způsob podle nároku 15, vyznačují c.í se t í m , že skupina F je volitelně substituována benzoy-lovou skupinou nebo substituovanou akryloylovou skupinou. Zastupuje:
advukátka
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB7938279 | 1979-11-05 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS391991A3 true CS391991A3 (en) | 1992-06-17 |
Family
ID=10508982
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS913919A CS391991A3 (en) | 1979-11-05 | 1991-12-19 | Enzyme derivatives, process of their preparation and pharmaceuticals comprising thereof |
| CS913911A CS391191A3 (en) | 1979-11-05 | 1991-12-19 | Complex of p-anisoyl streptokinase and plasminogen, and pharmaceuticalscomprising thereof |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS913911A CS391191A3 (en) | 1979-11-05 | 1991-12-19 | Complex of p-anisoyl streptokinase and plasminogen, and pharmaceuticalscomprising thereof |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4808405A (cs) |
| EP (1) | EP0028489B1 (cs) |
| JP (1) | JPS5678590A (cs) |
| AR (1) | AR224786A1 (cs) |
| CA (1) | CA1174621A (cs) |
| CS (2) | CS391991A3 (cs) |
| DE (1) | DE3065190D1 (cs) |
| DK (1) | DK158994C (cs) |
| ES (1) | ES496586A0 (cs) |
| GR (1) | GR72121B (cs) |
| HK (1) | HK65886A (cs) |
| HU (1) | HU185223B (cs) |
| IE (1) | IE50174B1 (cs) |
| IL (1) | IL61408A (cs) |
| NL (1) | NL930029I2 (cs) |
| NO (1) | NO163867C (cs) |
| NZ (1) | NZ195469A (cs) |
| ZA (1) | ZA806641B (cs) |
Families Citing this family (78)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3361610D1 (en) * | 1982-04-07 | 1986-02-06 | Beecham Group Plc | Enzyme derivatives, process for preparing them and pharmaceutical compositions containing them |
| WO1984001960A1 (en) * | 1982-11-11 | 1984-05-24 | Beecham Group Plc | Pharmaceutically active compounds |
| GB8400653D0 (en) * | 1984-01-11 | 1984-02-15 | Beecham Group Plc | Conjugates |
| GB8430253D0 (en) * | 1984-11-30 | 1985-01-09 | Beecham Group Plc | Compounds |
| US5231006A (en) * | 1986-10-16 | 1993-07-27 | Behringwerke Aktiengesellschaft | Method for the determination of plasminogen |
| US5256642A (en) * | 1988-04-01 | 1993-10-26 | The Johns Hopkins University | Compositions of soluble complement receptor 1 (CR1) and a thrombolytic agent, and the methods of use thereof |
| JPH0296536A (ja) * | 1988-09-29 | 1990-04-09 | Green Cross Corp:The | プラスミノゲン乾燥製剤 |
| WO1990013640A1 (en) * | 1989-05-01 | 1990-11-15 | The University Of Notre Dame Du Lac | Methods and materials for expression of human plasminogen in a eukaryotic cell system |
| EP0397366A1 (en) * | 1989-05-09 | 1990-11-14 | The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Hybrid streptokinases with fibrin binding domains and methods for the synthesis of same |
| DE69025934T2 (de) * | 1989-05-17 | 1996-09-19 | Res Corp Technologies Inc | Verfahren und zusammensetzung zur thrombosebehandlung beim säugetier |
| CA2027936C (en) | 1989-10-23 | 2001-07-24 | Smithkline Beecham Corporation | Cyclic anti-aggregatory peptides |
| US5087572A (en) * | 1989-12-01 | 1992-02-11 | Genentech, Inc. | Dna encoding human plasminogen modified at the cleavage site |
| US5190756A (en) * | 1989-12-01 | 1993-03-02 | Genentech, Inc. | Methods and materials for expression of human plasminogen variant |
| GB8928163D0 (en) * | 1989-12-13 | 1990-02-14 | Beecham Group Plc | Novel treatment |
| US6458360B1 (en) | 1990-04-25 | 2002-10-01 | The Johns Hopkins University | Soluble complement regulatory molecules |
| US5187069A (en) * | 1990-08-06 | 1993-02-16 | Henry Ford Health System | Active site labelling of plasminogen |
| AU1873092A (en) * | 1991-04-09 | 1992-11-17 | Brigham And Women's Hospital | Chimeric molecule with plasminogen activator activity and affinity for atherosclerotic plaques |
| US5520912A (en) * | 1993-07-02 | 1996-05-28 | Immuno Aktiengesellschaft | Prevention and treatment of ischemic events and reperfusion injury resulting therefrom using lys-plasminogen |
| DE4411143C2 (de) * | 1994-03-30 | 1996-08-01 | Immuno Ag | Thrombosemittel |
| US5760028A (en) * | 1995-12-22 | 1998-06-02 | The Dupont Merck Pharmaceutical Company | Integrin receptor antagonists |
| US6004955A (en) * | 1996-08-15 | 1999-12-21 | Dupont Pharmaceuticals Company | Cyclic carbamates and isoxazolidines as IIb/IIIa antagonists |
| ATE296805T1 (de) | 1997-06-19 | 2005-06-15 | Bristol Myers Squibb Pharma Co | Inhibitoren des faktors xa mit einer neutralen gruppe mit p1-spezifität |
| AU768859B2 (en) * | 1999-07-29 | 2004-01-08 | Dyax Corp. | Binding moieties for fibrin |
| US6388073B1 (en) | 2000-07-26 | 2002-05-14 | Shire Us Inc. | Method for the manufacture of anagrelide |
| KR20010000669A (ko) * | 2000-10-12 | 2001-01-05 | 김기환 | 스트렙토키나제와 사람 혈청알부민의 포합체를유효성분으로 함유하는 전신투여용 지속성 혈전 용해제 |
| US6984373B2 (en) * | 2000-12-23 | 2006-01-10 | Dyax Corp. | Fibrin binding moieties useful as imaging agents |
| UA78232C2 (uk) | 2001-09-21 | 2007-03-15 | Брістол-Майерс Сквібб Компані | Лактамвмісні сполуки та їх похідні як інгібітори фактора ха |
| US7550499B2 (en) | 2004-05-12 | 2009-06-23 | Bristol-Myers Squibb Company | Urea antagonists of P2Y1 receptor useful in the treatment of thrombotic conditions |
| US7700608B2 (en) | 2004-08-04 | 2010-04-20 | Shire Holdings Ag | Quinazoline derivatives and their use in the treatment of thrombocythemia |
| US20060030574A1 (en) * | 2004-08-04 | 2006-02-09 | Shire Holdings Ag | Quinazoline derivatives useful for the treatment of peripheral arterial disease and as phosphodiesterase inhibitors |
| CN101137412B (zh) | 2005-01-13 | 2012-11-07 | 布里斯托尔-迈尔斯·斯奎布公司 | 用作凝血因子XIa抑制剂的取代的二芳基化合物 |
| WO2006078621A2 (en) | 2005-01-19 | 2006-07-27 | Bristol-Myers Squibb Company | 2-phenoxy-n- (1, 3 , 4-thiadizol-2-yl) pyridin-3-amine derivatives and related compounds as p2y1 receptor inhibitors for the treatment of thromboembolic disorders |
| US7728008B2 (en) | 2005-06-27 | 2010-06-01 | Bristol-Myers Squibb Company | N-linked heterocyclic antagonists of P2Y1 receptor useful in the treatment of thrombotic conditions |
| WO2007002634A1 (en) | 2005-06-27 | 2007-01-04 | Bristol-Myers Squibb Company | Carbocycle and heterocycle antagonists of p2y1 receptor useful in the treatment of thrombotic conditions |
| ES2360818T3 (es) | 2005-06-27 | 2011-06-09 | Bristol-Myers Squibb Company | Miméticos de urea lineal antagonistas del receptor p2y, útiles en el tratamiento de afecciones trombóticas. |
| US7700620B2 (en) | 2005-06-27 | 2010-04-20 | Bristol-Myers Squibb Company | C-linked cyclic antagonists of P2Y1 receptor useful in the treatment of thrombotic conditions |
| JP2009539873A (ja) | 2006-06-08 | 2009-11-19 | ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー | 抗凝固剤として有用な第ＶＩＩａ因子インヒビターとしての２−アミノカルボニルフェニルアミノ−２−フェニルアセトアミド類 |
| US7960569B2 (en) | 2006-10-17 | 2011-06-14 | Bristol-Myers Squibb Company | Indole antagonists of P2Y1 receptor useful in the treatment of thrombotic conditions |
| US7910597B2 (en) * | 2006-11-28 | 2011-03-22 | Shire Llc | Substituted quinazolines |
| US8304420B2 (en) | 2006-11-28 | 2012-11-06 | Shire Llc | Substituted quinazolines for reducing platelet count |
| EP2102189B1 (en) | 2006-12-15 | 2015-07-29 | Bristol-Myers Squibb Company | Arylpropionamide, arylacrylamide, arylpropynamide, or arylmethylurea analogs as factor xia inhibitors |
| PE20081775A1 (es) | 2006-12-20 | 2008-12-18 | Bristol Myers Squibb Co | Compuestos macrociclicos como inhibidores del factor viia |
| MX2009012847A (es) | 2007-06-13 | 2009-12-08 | Bristol Myers Squibb Co | Analogos dipeptidicos como inhibidores de factores de coagulacion. |
| US20090130017A1 (en) * | 2007-11-19 | 2009-05-21 | Searete Llc | Targeted short-lived drug delivery |
| EP2300435A2 (en) | 2008-05-19 | 2011-03-30 | Schering Corporation | Heterocyclic compounds as factor ixa inhibitors |
| SMT202000093T1 (it) | 2009-06-16 | 2020-03-13 | Pfizer | Forme di dosaggio di apixaban |
| WO2011017296A1 (en) | 2009-08-04 | 2011-02-10 | Schering Corporation | 4, 5, 6-trisubstituted pyrimidine derivatives as factor ixa inhibitors |
| ES2822130T3 (es) | 2010-02-11 | 2021-04-29 | Bristol Myers Squibb Co | Macrociclos como inhibidores del factor XIa |
| TW201311689A (zh) | 2011-08-05 | 2013-03-16 | 必治妥美雅史谷比公司 | 作為因子ｘｉａ抑制劑之新穎巨環化合物 |
| TW201319068A (zh) | 2011-08-05 | 2013-05-16 | 必治妥美雅史谷比公司 | 作為ｘｉａ因子抑制劑之環狀ｐ１接合劑 |
| IN2014CN02805A (cs) | 2011-10-14 | 2015-07-03 | Bristol Myers Squibb Co | |
| TWI633091B (zh) | 2011-10-14 | 2018-08-21 | Bristol-Myers Squibb Company | 作為因子ｘｉａ抑制劑之經取代四氫異喹啉化合物 |
| US9108951B2 (en) | 2011-10-14 | 2015-08-18 | Bristol-Myers Squibb Company | Substituted 5,6,7,8-tetrahydro-1,6-naphthyridines as factor XIa inhibitors |
| CN103917529B (zh) | 2011-11-11 | 2016-08-17 | 辉瑞大药厂 | 2-硫代嘧啶酮类 |
| AP2014007953A0 (en) | 2012-04-06 | 2014-09-30 | Pfizer | Diacylglycerol acyltransferase 2 inhibitors |
| SG11201500270RA (en) | 2012-08-03 | 2015-03-30 | Bristol Myers Squibb Co | Dihydropyridone p1 as factor xia inhibitors |
| PL2880026T3 (pl) | 2012-08-03 | 2017-08-31 | Bristol-Myers Squibb Company | Dihydropirydon P1 jako inhibitory czynnika XIA |
| US9738655B2 (en) | 2013-03-25 | 2017-08-22 | Bristol-Myers Squibb Company | Tetrahydroisoquinolines containing substituted azoles as factor XIa inhibitors |
| JP6348582B2 (ja) | 2013-10-09 | 2018-06-27 | ファイザー・インク | プロスタグランジンｅｐ３受容体の拮抗薬 |
| NO2760821T3 (cs) | 2014-01-31 | 2018-03-10 | ||
| BR112016015717B1 (pt) | 2014-01-31 | 2023-04-04 | Bristol-Myers Squibb Company | Compostos macrociclos com grupos p2' heterocíclicos como inibidores do fator xia, composição farmacêutica compreendendo os referidos compostos e uso dos mesmos |
| SI3119757T1 (en) | 2014-03-17 | 2018-08-31 | Pfizer Inc. | Diacylglycerol acyltransferase 2 inhibitors for use in the treatment of metabolic and related disorders |
| RS58597B1 (sr) | 2014-04-04 | 2019-05-31 | Pfizer | Biciklično-spojena heteroaril ili aril jedinjenja i njihova upotreba kao irak4 inhibitora |
| WO2015160636A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Factor ixa inhibitors |
| NO2721243T3 (cs) | 2014-10-01 | 2018-10-20 | ||
| MA42035A (fr) | 2015-05-05 | 2018-03-14 | Pfizer | 2-thiopyrimidinones |
| PL3310784T3 (pl) | 2015-06-17 | 2021-03-08 | Pfizer Inc. | Związki tricykliczne i ich zastosowanie jako inhibitory fosfodiesterazy |
| WO2016203335A1 (en) | 2015-06-18 | 2016-12-22 | Pfizer Inc. | Novel pyrido[2,3-b]pyrazinones as bet-family bromodomain inhibitors |
| CN114874222B (zh) | 2015-07-29 | 2025-06-06 | 百时美施贵宝公司 | 携带非芳族p2,基团的因子xia新大环 |
| WO2017023992A1 (en) | 2015-08-05 | 2017-02-09 | Bristol-Myers Squibb Company | Novel substituted glycine derived fxia inhibitors |
| ES2865199T3 (es) | 2015-08-27 | 2021-10-15 | Pfizer | Compuestos de heteroarilo o arilo condensados bicíclicos como moduladores de IRAK4 |
| JP2019507167A (ja) | 2016-03-02 | 2019-03-14 | ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ | 第ｘｉａ因子阻害活性を有するジアミド大員環 |
| AR109179A1 (es) | 2016-08-19 | 2018-11-07 | Pfizer | Inhibidores de diacilglicerol aciltransferasa 2 |
| US11254660B2 (en) | 2018-08-31 | 2022-02-22 | Pfizer Inc. | Combinations for treatment of NASH/NAFLD and related diseases |
| EP3972596B1 (en) | 2019-05-20 | 2025-07-16 | Pfizer Inc. | Combinations comprising benzodioxol as glp-1r agonists for use in the treatment of nash/nafld and related diseases |
| CA3189771A1 (en) | 2020-07-22 | 2022-01-27 | Janssen Pharmaceutica Nv | Compounds useful as factor xia inhibitors |
| WO2023026180A1 (en) | 2021-08-26 | 2023-03-02 | Pfizer Inc. | Amorphous form of (s)-2-(5-((3-ethoxypyridin-2-yl)oxy)pyridin-3-yl)-n-(tetrahydrofuran-3- yl)pyrimidine-5-carboxamide |
| WO2024118524A1 (en) | 2022-11-28 | 2024-06-06 | Cerevel Therapeutics, Llc | Azaindole compounds and their use as phosphodiesterase inhibitors |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4178368A (en) * | 1971-09-30 | 1979-12-11 | Behringwerke Aktiengesellschaft | Method for the treatment of thromboembolism |
| JPS5325775A (en) * | 1976-08-24 | 1978-03-09 | Miller Fluid Power Corp | Module type fluid flow control element |
| US4082612A (en) * | 1976-09-24 | 1978-04-04 | Michael Reese Research Foundation | Plasminogen activator complex |
| NZ191320A (en) * | 1978-09-07 | 1982-09-14 | Beecham Group Ltd | In vivo fibrinolytic enzyme having active site blocked by hydrolytically removable group pharmaceutical compositions |
-
1980
- 1980-10-27 EP EP80303797A patent/EP0028489B1/en not_active Expired
- 1980-10-27 DE DE8080303797T patent/DE3065190D1/de not_active Expired
- 1980-10-29 ZA ZA00806641A patent/ZA806641B/xx unknown
- 1980-11-03 GR GR63267A patent/GR72121B/el unknown
- 1980-11-04 CA CA000363957A patent/CA1174621A/en not_active Expired
- 1980-11-04 DK DK468880A patent/DK158994C/da not_active IP Right Cessation
- 1980-11-04 NO NO803304A patent/NO163867C/no unknown
- 1980-11-04 AR AR283122A patent/AR224786A1/es active
- 1980-11-04 IL IL61408A patent/IL61408A/xx not_active IP Right Cessation
- 1980-11-04 IE IE2277/80A patent/IE50174B1/en not_active IP Right Cessation
- 1980-11-05 ES ES496586A patent/ES496586A0/es active Granted
- 1980-11-05 NZ NZ195469A patent/NZ195469A/en unknown
- 1980-11-05 HU HU802661A patent/HU185223B/hu not_active IP Right Cessation
- 1980-11-05 JP JP15573380A patent/JPS5678590A/ja active Granted
-
1986
- 1986-08-29 US US06/902,429 patent/US4808405A/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-09-04 HK HK658/86A patent/HK65886A/en not_active IP Right Cessation
-
1991
- 1991-12-19 CS CS913919A patent/CS391991A3/cs unknown
- 1991-12-19 CS CS913911A patent/CS391191A3/cs unknown
-
1993
- 1993-04-22 NL NL930029C patent/NL930029I2/nl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AR224786A1 (es) | 1982-01-15 |
| AU534017B2 (en) | 1983-12-22 |
| EP0028489B1 (en) | 1983-10-05 |
| HK65886A (en) | 1986-09-12 |
| NO163867B (no) | 1990-04-23 |
| JPH0316114B2 (cs) | 1991-03-04 |
| ES8204467A1 (es) | 1982-05-01 |
| NO163867C (no) | 1990-08-01 |
| NL930029I1 (nl) | 1993-06-01 |
| IL61408A (en) | 1983-10-31 |
| HU185223B (en) | 1984-12-28 |
| DK158994B (da) | 1990-08-13 |
| GR72121B (cs) | 1983-09-16 |
| CS391191A3 (en) | 1992-08-12 |
| IL61408A0 (en) | 1980-12-31 |
| JPS5678590A (en) | 1981-06-27 |
| NZ195469A (en) | 1984-05-31 |
| DE3065190D1 (en) | 1983-11-10 |
| ES496586A0 (es) | 1982-05-01 |
| DK468880A (da) | 1981-05-06 |
| NL930029I2 (nl) | 1993-12-01 |
| DK158994C (da) | 1991-01-07 |
| IE802277L (en) | 1981-05-05 |
| EP0028489A1 (en) | 1981-05-13 |
| AU6401180A (en) | 1981-05-14 |
| IE50174B1 (en) | 1986-02-19 |
| ZA806641B (en) | 1981-10-28 |
| NO803304L (no) | 1981-05-06 |
| US4808405A (en) | 1989-02-28 |
| CA1174621A (en) | 1984-09-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CS391991A3 (en) | Enzyme derivatives, process of their preparation and pharmaceuticals comprising thereof | |
| US4337244A (en) | Enzyme derivatives for use in the treatment of venous thrombosis | |
| EP0196920B1 (en) | Degraded species of tissue-type plasminogen activator, pharmaceutical composition and method of preparation | |
| JP2766986B2 (ja) | 動脈の血栓症的閉塞または塞栓症を阻止するための医薬組成物 | |
| JP2818898B2 (ja) | 活性に鋭敏な人のプロテインから成る装薬を作用物質として備えている双室注射器 | |
| KR970005837B1 (ko) | 조직 플라스미노겐 활성화제(t-PA) 활성을 갖는 고농도 단백질 용액의 제조방법, t-PA 활성을 갖는 단백질 용액, 및 이러한 용액을 포함하는 섬유소 용해성 조성물 | |
| Smith et al. | Acyl-enzymes as thrombolytic agents in a rabbit model of venous thrombosis | |
| EP0151593B1 (en) | Enzyme derivatives | |
| CA1267602A (en) | Composition containing tissue plasminogen activator | |
| WO1984001960A1 (en) | Pharmaceutically active compounds | |
| US4507283A (en) | Pharmacologically active compounds | |
| EP0099126B1 (en) | Thrombolytic composition | |
| JPH07291999A (ja) | 血小板安定化因子ｉｘ−フラグメント、その製造方法及びこれを含有する薬剤 | |
| US5234686A (en) | Human tissue plasminogen activator consisting essentially of t-PA residues to 160 to 527, pharmaceutical compositions and methods of treatment | |
| FI67300B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av in vivo fibrinolytiska enzymderivat foer anvaendning vid behandling ventrombos | |
| JPS61277614A (ja) | 抗プラスミン剤 |