HU180723B - Process for producing pentapeptide derivatives of analgesie activity - Google Patents

Description

Eljárás fájdalomcsillapító hatású pentapeptid-származékok előállítására

A találmány tárgya eljárás olyan új pentapeptid-származékok előállítására, amelyek parenterális (a gyomorbélrendszert megkerülő) adagolásban fájdalomcsillapító hatást mutatnak.

Az utóbbi években emlősök agyából és agy-gerincvelői folyadékából morfinszerű sajátságokkal rendelkező endogén (a szervezeten belül keletkezett) anyagokat vontak ki. Ezekről az enkefalinoknak nevezett anyagokról Hughes és mások [Natúré, 258, 577 (1975)] megállapították, hogy a következő összetételű pentapeptidek:

^; j H Tyr—Gly -Gly Phe - Met -OH és

H Tyr—Gly- Gly—Phe—Leu—OH.

I ' E két vegyületet az irodalomban metionin-enkefalin, [ illetve leucin-enkefalin néven említik.

Habár kimutatták, hogy egerek agykamrájába adva ezek a vegyületek fájdalomcsillapító hatásúak [Buscher és mások, Natúré, 267, 423 (1976)], parenterális adagolásban viszont nem rendelkeznek a fenti hatással.

Felfedeztünk egy új vegyület-csoportot. Meglepő módon ezen új vegyületek jelentős és kimutatható fájdalomcsillapító hatást fejtenek ki, ha az élő szervezetbe juttatjuk őket. A találmány tárgya eljárás ezen vegyiiletek előállítására.

így a találmány tárgya eljárás az I általános képletü pentapeptid-származékok és gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sóik előállítására, ahol

R₄ metil- vagy szekunder alkií-alkilcsoport;

R₅, R₆ és R₇ egymástól függetlenül hidrogénatom vagy metilcsoport; és

W izopropíl-, metiltio-metil-, etiltio- vagy p180723

-metoxi-benziltio-csoport, azzal a megkötéssel, hogy ha a W izopropilesöpört, akkor az R₇ metilcsoport, és ahol

L és D mindazon esetekben, amikor értelmezhetők, 5 az adott szénatom kiralitását (aszimmetrikus térszerkezetét) jelölik.

A találmány szerinti eljárás során a peptidkémiában ismert módon védett I általános képletü vegyületekről vízmentes, savas közeggel lehasítjuk a védőcsoportokat. 10 Előnyösek azok az I általános képletü vegyületek, amelyekben a W metiltio-metilcsoport.

A találmány szerinti I általános képletü vegyületek gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sói képzésére szerves és szervetlen savakat, például sósavat, kénsavat, 15 szulfonsavat, borkősavat, fumársavat, brómhidrogénsavat, glikolsavat, citromsavat, maleinsavat, foszforsavat, borostyánkösavat, ecetsavat, salétromsavat, benzoesavat, aszkorbinsavat, p-toluol-szulfonsavat, benzol-szulfonsavat, naftalin-szulfonsavat vagy ipropionsavat 20 használhatunk. Előnyös savaddíciós sók a sósavval, ecetsavval és borostyánkősavval képzett sók. Valamennyi fent említett savval képzett sót a szokásos módszerekkel állíthatjuk elő.

Amint az I általános képletü vegyületek fenti megha25 tározásából kitűnik, az 1 általános képiétű vegyületek N-szubsztituálatlan pentápieptid-amidok. Az T általános képletü vegyületek térbeli konfigurációja e vegyületek lényeges jellemzője. Egyszerűség kedvéért az I általános képletü pentapeptidek amirtosav alkotó elemeit a ter30 minális aminocsoporttól kiindulva megszámoztuk. Az

-1180723 egyes aminosav-alkotóelemek kiralitása az 1-es helyzetben levő aminosav-alkotóelemtől az 5-ös helyzetben levő aminosav-alkotóelem felé haladva: L, D, L, L és L. Megjegyezzük ezenkívül, hogy a 3-as helyzetben levő aminosav-alkotóelem glicin is lehet. Természetesen, ha a 3-as helyzetben glicin van, ennek az aminosav-alkotóelemnek nincs kiralitása. Csak azt fontos szem előtt tartani, hogy ha a 3-as helyzetben egy királis aminosav szerepel, akkor ennek L kiraiitásúnak kell lennie.

Az I általános pentapeptidek egyes aminosav-alkotóelemeit illetően a következő szempontok érvényesek:

A) 1-es helyzet

Ez a peptid amino-terminálisa (N-terminálisa). Az ezen a helyen álló aminosav-alkotóelem L-tirozinból származtatható le.

B) 2-es helyzet

Az I általános képletü peptidek 2-es helyzetében levő aminosav-alkotóelemnek az illető aminosav D sztereoizomerjének kell lennie, és többféle aminosav lehet. Lehet például D-alanin (Alá) (az R₄ jelentése metilcsoport), D-leucin (Leu) (az R₄ jelentése izobutilcsoport), vagy D-izoleucin (He) (az R₄ jelentése szekunder-butil-csoport). Ezen aminosav-alkotóelem előnyösen D-alanin.

C) 3-as helyzet

Az ebben a helyzetben levő aminosav-alkotóelem glicin (Gly) vagy L-alanin.

D) 4-es helyzet

Az aminosav aminocsoporijának nitrogénalomja lehet szubsztituálatlan vagy metilcsoporttal szubsztituált (R₆). Előnyösen azonban ez a nitrogénatom szubsztituálatlan, tehát az R₆ jelentése hidrogénatom.

E) 5-ös helyzet

Az T általános képletü pentapeptidek 5-ös helyzetében levő aminosav-alkotóelem előnyösen az L-metionin (Met) (a W jelentése a —CH₂SCH₃ képletü csoport), és L—Leucin (Leu) (a W jelentése izopropilcsoport). Az 5-ös helyzetben levő aminosav-alkotóelem tehát előnyösen L-metionin-amid vagy L-Leucin-amid.

Ha ezen C-terminális aminosav-alkotóelem nem Lleucin, akkor az ezen a helyen álló aminosav aminocsoportjának nitrogénatomja lehet szubsztituálatlan vagy szubsztituált. Ha ez a C-terminális aminosav-alkotóelem L-leucin, akkor ennek aminocsoporijának nitrogénatomja szubsztituált. Ha az említett nitrogénatomon szubsztituens van, akkor ez metilcsoport. Az aminocsoport nitrogénatomja előnyösen szubsztituált, tehát az R₇ jelentése metilcsoport.

Ezenkívül, mivel az I általános képletü pentapeptidek 5-ös helyzetében levő aminosav-alkotóelem a karboxilterminális (C-terminális) aminosav, ez az aminosav amid-formában van jelen a molekulában.

Az I általános képletü vegyületek előállítására a peptidszintézisekben szokásosan használt módszereket alkalmazzuk. A szintézis során előfordulhat, hogy egyes általános képletü vegyületek részlegesen racemizálódnak. Ha be is következik ilyen racemizálódás, ez sohasem olyan mérvű, hogy lényegesen megváltoztatná az I általános képletü vegyületek fájdalomcsillapító hatását.

Az I általános képletü vegyületek előállítására a találmány értelmében úgy járunk el, hogy aminosavakat vagy peptid-fragmenseket oly módon kapcsolunk össze, hogy az egyik aminosav vagy peptid-fragmens karboxilcsoportját egy másik aminosav vagy peptid-fragmens aminocsoporijával reagáltatva amid-kötést hozunk létre. Az eredményes kapcsoláshoz szükséges egyrészt, hogy a reakcióban közvetlenül részt nem vevő valamennyi reakcióképes funkciós csoportot megfelelő védőcsoportok segítségével megvédjük, másrészt, hogy a kapcsolás elősegítése céljából a kapcsolni kívánt karboxilcsoportokat megfelelő módon aktiváljuk. Mindezen kívánalmak miatt igen gondosan kell meghatározni mind az elvégzendő reakciók sorrendjét és körülményeit, mind pedig azon speciális védőcsoportokat, amelyek alkalmazásával elő tudjuk állítani a kívánt pepiidet. Valamennyi, az I általános képletü vegyületek előállítása során felhasznált és a megfelelően kiválasztott védő- és aktivált funkciós csoportokkal ellátott aminosavat a peptid-kémiában jól ismert módszerekkel állítjuk elő.

Az I általános képletü vegyületek teljes szintézisének minden egyes művelete során bizonyos kiválasztott védöcsoportok kombinációját alkalmazzuk. Azt találtuk, hogy ezen kombinációk alkalmazásával enyhe körülmények között lehet véghezvinni a reakciókat. Valójában bizonyára más védőcsoport-kombinációk alkalmazásával is kielégítő módon elő lehetne állítani az I általános képletü vegyületeket, de feltehetően kevesebb sikerrel, így az I általános képletü vegyületek szintézise során az » aminocsoportok védésére például a benziloxi-karbonil(Cbz), tercier-butoxi-karbonil- (BOC), tercier-amiloxi-karbonil- (AOC), p-metoxi-benziloxi-karbonil(MBOC), adamantil-oxi-karbonil- (AdOC) és az izo- A borniloxi-karbonil-csoportot alkalmazhatjuk változatos módon. Továbbá a tirozin hidroxilcsoportjának megvédésére általában benzilcsoportot (Bzl) használunk, habár használhatnánk más védőcsoportokat is, mint például p-nitro-benzil- (PNB) vagy p-metoxi-benzil-csoportot (PMB).

Az I általános képletü vegyületek előállítása során felhasznált karboxil-védőcsoportok a jellegzetes észteres csoportok lehetnek, például metil-, etil-, benzil-, p-nitro-benzil-, p-metoxi-benzil- vagy 2,2,2-triklór-etil-észter-csoportok.

Az I általános képletü vegyületek előállítása során egy az aminocsoportján megfelelően védett aminosavnak vagy peptidfragmensnek valamely másik, karboxilcsoportján megfelelően védett aminosavval vagy peptidfragmenssel való összekapcsolása abból áll, hogy aktiváljuk az aminosav vagy peptidfragmens szabad karboxilcsoportját, hogy az alkalmas legyen a kapcsolásra. A számos jól ismert módszer bármelyikét felhasználhatjuk erre a célra. Az egyik ilyen aktiválási módszer szerint * vegyes anhidríddé alakítjuk át a karboxilcsoportot. E célból valamely más sav, általában a szénsav valamely származékával, például kloridjával reagáltatva aktiváljuk a szabad karboxilcsoportot. A vegyes anhidridek ♦ előállítására használt savkloridok például a klór-szénsav-etil-észter, a klór-szénsav-fenil-észter, a klór-szénsav-szekunder-butil-észter, a klór-szénsav-izobutii-észter és a pivalinsav-klorid. Előnyösen klór-szénsav-izobutil-csztert használunk.

A kapcsolási reakció kivitelezéséhez úgy is aktiválhatjuk a karboxilcsoportot, hogy aktív észter-származékaivá alakítjuk át a csoportot. Ilyen aktív észterek például a 2,4,5-lriklór-fenil-, pentaklór-fenil- és a p-nitro-fenil-észterek. Egy további alkalmas kapcsolási módszer a jól ismert azidos kapcsolási módszer.

Az I általános képletü vegyületek előállítására a találmány szerinti eljárás egyik előnyös kivitelezési változata szerint úgy járunk el, hogy a kapcsolás céljaira N,N'-diciklohcxil-karbodiimiddel (DCC) aktiváljuk a szabad

-2180723 karboxilcsoportokat. Oly módon végezzük ezt az aktiválást és kapcsolást, hogy az aminsavra vagy a peptidfragmensre számítva molárisán azonos mennyiségű DCC-t használunk, és ugyancsak molárisán azonos mennyiségű 1-hidroxi-benzotriazol (HBT) jelenlétében végezzük a reakciót. A HBT jelenlétében kisebb mértékűek a mellékreakciók, beleértve a racemizálódást is.

Az I általános képletü vegyületek előállítására alkalmazott reakciósor bizonyos műveleteinek elvégzése után le kell hasítanunk bizonyos védőcsoportokat. A peptidkémiában átlagos mértékben járatos vegyész könnyen ki tudja választani a védőcsoporíok közül azokat, amelyeket szelektíven lehet eltávolítani, vagyis oly módon, hogy csak egy vagy néhány, de semmi esetre sem az összes védöcsoport hasadjon le az adott aminosavról vagy peptidfragmensről. Ezek a módszerek jól ismertek a peptidkémiában. A védőcsoportok szelektív lehasítására rendelkezésünkre álló módszereket részletesebben tárgyalja Schröder és Lübke a „The Peptides című művében ([. kötet, Academic Press, New York, 1965), és különösen az idézett mű 72—75. oldalán közölt táblázatban.

Karboxil-védőcsoportokat lúgos hidrolízis útján távolíthatunk el. Általában aránylag erélyes körülményeket alkalmazunk, többnyire valamely alkálifém-hidroxidot, mint például nátrium-hidroxidot, kálium-hidroxidot vagy lítium-hidroxidot használunk, és így alakítjuk át az észtereket a szabad savakká. A hidrolízisnél alkalmazott reakciókörülmények jól ismertek. Katalitikus hidrogénezéssel is eltávolíthatunk karboxil-védőcsoportokat, például csontszenes palládium mint katalizátor alkalmazásával. Továbbá, ha a karboxil-védőcsoport p-nitro-benzil- vagy 2,2,2-triklór-etil-csoport, akkor cinkkel és sósavval végzett redukció útján is eltávolíthatjuk ezeket a védőcsoportokat.

Az amino-védőcsoportok eltávolítására valamely savval, mint például 98%-os hangyasavval, trifluor-ecetsavval (TFA), valamely aril-szulfonsavval, mint például p-toluol-szulfonsavval (TSA), benzol-szulfbnsavval (BSA), naftalin-szulfonsaxval, trifluor-metánszulfonsavval (oldószer nélkül), cseppfolyós hidrogén-fluoriddal vagy metilén-kloridban mint oldószerben bór-trifluoriddal kezeljük a védett aminosavat vagy peptidfragmenst, ily módon a megfelelő savaddíciós só formájában nyerjük a terméket. Az amino-védőcsoportok lehasítására használhatjuk még brómhidrogénsav vagy sósav és jégecet elegyét, ily módon a megfelelő sósavas vagy brómhidrogénsavas savaddíciós sót nyerjük. A védőcsoportok eltávolítására alkalmas valamennyi itt felsorolt közeg lényegében vízmentes, savas közeg. Az, hogy melyik módszert és melyik reagenst használjuk, az adott védőcsoport-lehasítási reakciónak alávetett vegyületek kémiai vagy fizikai sajátságaitól függ. Azt találtuk, hogy a találmány szerinti eljárás egy további előnyös kivitelezési változata szerint, ha az R₇ nem hidrogénatom, és valamely legalább három aminosav-alkotóelemből álló pepiidről akarjuk lehasi’ani a védöcsoportokat, akkor igen előnyösen trifluor-ecetsavval vagy hangyasavval távolíthatjuk el a védőcsoportokat, és ily módon a megfelelő savaddíciós sóhoz jutunk. Az ily módon nyert sót valamely alkalmas ioncserélő gyanta, mint például DEAE Sephadex A25 vagy Amberlyst A27 segítségével alakíthatjuk ál valamely gyógyászatilag jobban elfogadható sóvá. A találmány szerinti eljárás egy további előnyös kivitelezési változata szerint az amino-védőcsoportok eltávolítására a 1? általános képletű, ahol az R_lo benziloxi-karbonil-, tercier-butoxi-karbonil-, tercier-amiloxi-karbonil-, p-metoxi-benzil-oxi-karbonil-, adamantiloxi-karbonil- vagy izoborniloxi-karbonil-csoport és valamennyi többi csoport jelen5 tése a fent megadott, vegyületeket lényegében vízmentes savas közeggel kezeljük.

A tirozin hidroxilcsoportjának védőcsoportját a pepiid teljes szintézise során végig megtarthatjuk, és az utolsó, az amino-védőcsoportok eltávolítására irányuló 10 reakciólépésben, azokkal egyidőben hasíthatjuk le.

A karboxil-védőcsoportok eltávolítására kiválasztott módszertől függően azonban előfordulhat, hogy a szintézisnek már egy, az utolsót megelőző művelete során ez a védöcsoport is lehasad. Ha lúgos hidrolízis útján 15 távolitjuk el a karboxil-védőcsoportokat, akkor a hidroxil-védöcsoport megmarad; ha azonban a karboxilvédőcsoportok lehasítására katalitikus hidrogénezést alkalmazunk, akkor ezzel a hidroxil-védőcsoportot is eltávolítjuk. Ez utóbbi körülmény nem jelent komoly 20 nehézséget, mivel szabad hidroxilcsoportot tartalmazó tirozin jelenlétében is elő tudjuk állítani az I általános képletü vegyületeket.

A találmány szerinti eljárás egyik előnyős kivitelezési változata szerint az I általános képletü vegyületek elö25 állítására úgy járunk el, hogy az előre elkészített N-terminális tripeptidet kapcsoljuk az előre elkészített C-terminális dipeptid-amiddal, majd valamely alkalmas módon lehasítjuk a molekulán még meglevő valamennyi védőcsoportot. Az I általános képletü pentapeptidek 30 előállítására szolgáló reakciósort az A képletsor szemlélteti. A képletsorban az AA jelentése az adott aminosav-alkotóelem, és az utolsó index jelzi, hogy hányas helyzetben van az illető aminosav az I általános képletü végtermékekben.

Az A képletsorban csak egy lehetséges szintézisutat tüntettünk fel, de lehetségesek további szintézisutak is. A találmány szerinti eljárás egy további előnyös kivitelezési változata szerint úgy is eljárhatunk, hogy az I ál40 talános képletü peptidek előállítása céljából a C-terminális aminosavból kiindulva, aminosavként építjük fel a peptidláncot. A találmány szerinti eljárás egy további előnyös kivitelezési változata szerint alkalmazhatjuk a szilárd hordozón végzett peptid-szintézis módszerét is.

Ilyenkor valamely alkalmas polimer hordozóhoz kapcsoljuk a C-terminális aminosavat, majd aminosavankéní építjük fel a kívánt pepiidet, amely a szintézis végén még mindig a polimerhez kötött állapotban van jelen. Ezután valamely alkalmas módon lehasítjuk a kész 50 pepiidet a polimer hordozóról. így például összekapcsolhatjuk az x-nitrogénatomján tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett, C-terminális aminosavat valamely benzhidrii-amin-polimerrel, aktiválószerként diciklohexil-karbodiimidet használva. A polimerhez kötött 55 aminosavról metilén-kloridban mint oldószerben, trifluor-ecetsav segítségével hasíthatjuk le a tercier-butoxi-karbonil-védőcsoporíot. Utána semlegesítjük a polimerhez kötött, sót, például valamely alkalmas tercier bázissal, majd ugyanilyen módszerrel hozzákapcsoljuk a 6) következő aminosavat. 0 C‘ hőmérsékleten, cseppfolyós hidrogén-fluoriddai hasíthatjuk le a védett pepiidet a polimerről, majd kromatográfiás úton tisztíthatjuk. A szilárd fázisú peptid-szintézis módszereiben átlagosan járatos szakemberek jól ismerik ezen reakciók spe65 ciális reakciókörülményeit. A fentiekben leírt és ahhoz

-3180723 hasonló módszereket bármilyen hasonló szintézisnél alkalmaznak.

Egyes, I általános képletű vegyületékben az R₆ és R₇ csoportok közül az egyik vagy mindkettő metilcsoport lehet. Ezekben az esetekben a szintézis céljaira a megfelelő, N-szubsztituált aminosavakat használjuk kiindulási anyagként. Ezért monoszübsZtituált áminósávak bármelyikét a találmány szerinti eljárás egy további előnyös kivitelezési változata szerint Ugyanazzal, a B képletsorban mégadott módszerrel állíthatjuk elő, az ámitiöcsoportjukon védett arríinosávakból kiindulva.

Amint ez a B képletsorból kitűnik, először a dianion képzése céljából valamely alkalmas korona-éter jelenlétében kálium-hidriddel kezeljük az aminosavat. Ezután valamely megfelelő alkil- vagy allil-jodiddal kezeljük a köztiterméket, és ily módon a kívánt N-szubsztituált aminosavhoz jutunk.

A peptid-szintézis terén átlagosan járatos szakemberék előtt nyilvánvaló, hogy a fenti aíkilezési reakcióban alkalmazotthoz hasonló, erősen lúgos közegben az aminosavak z-szénatomján racémizálódás következhet be. A racemizáció mértéke az illető reakcióban alkalmazott aminosav szerkezetétől függ. A lehető legkisebb mértékűre csökkenthetjük a racemizációt oly módon, hogy fölös alkilczőszert használunk, és a lehető legrövidebb idő alatt hajtjuk végre a reakciót. Még ha a megengedettnél nagyobb mértékű is lenne a racemizáció, a terméknek valamely alkalmas királis aminnal, például d(4 )-a-fenil-etil-aminnal képzett sóját átkristályosítva megtisztíthatjuk a terméket.

Az I általános képletű pentapeptidek C-termir>ális aminosavját amíddá alakítjuk át. Az I általános képletű pentapeptidekben ez az amid szubsztituálatlan. Az amiddá alakítási a találmány szerinti eljárás egy további előnyös kivitelezési változata szerint oly módon végezzük, hogy először 1-hidroxi-benzotriazol (HBT) jelenlétében Ν,Ν-diciklohexil-karbodiimid (DCC) segítségével aktiváljuk az aminosav karboxilcsoportját, ilyenkor a megfelelő HBT-észterek jelentkeznek. Az 1 általános képletű pentapeptidek előállítására ezután úgy járunk el, hogy vízmentes ammóniával reagáltatjuk ezt az észtert, és ily módon jutunk a kívánt szubsztituálatlan amidhoz.

A jelen szabadalmi leírásban a következő, többségükben jólismert és általánosan használt rövidítéseket hasz-

náljuk:
Abu	— a-amino-vajsav
Alá	— alanin
Cys	— cisztein
Gly	— glicin
Hse	— homoszerin
Jle	— izoleucin
Leu	— leucin
Met	— metionin
Nle	— norleucin
Nva	— norvalin
Phe	— fenil-alanin
Ser	— szerin
Tyr	— tirozin
Val	— valin
Ac	— acetilcsoport
Me	— metilcsoport
Et	— etilcsoport
Ip	— izopropilcsoport
Pr	— n-propil-csoport

Bu — n-butil-csoport i-Bu — izobutilcsóport t-Bu — tercier-butil-csoport s-Bu — szekunder-butil-csoport BOC — tcrcifer-butoxi-karbonil-csoport Bzl — benzilcsoport

DCC — N,N'-diciklohexiI-karbodiimid

HBT — 1-hidroxi-benzotriazol

DMF —N,N-dimetil-formamid

TFA - trifluor-écétsav

THF — tetrahidro-furán

DEAE — dietil-amino-etil-csoport

Az I általános képletű vegyületek értékes gyógyhatásokkai rendelkeznek. így fájdalomcsillapító hatásuk van, és különösen alkalmasak arra, hogy emlősöknek, beleértve az embert is, parenterális úton adagoljuk őket.

Adagolhatjuk az T általános képletű vegyületeket önmagukban, vagy parenterális adagolás céljaira készített egységdózis formában, a gyógyszerformához szükséges más anyagokkal együtt. A gyógyszerformák elkészítéséhez gyógyászatilag elfogadható vivőanyagokat, szerves vagy szervetlen, szilárd vagy folyékony halmazállapotú anyagokat használhatunk. A szakmában járatosak ismerik az ilyen célra alkalmas anyagokat. A gyógyszerformák lehetnek tabletták, porgranulátumok, kapszulák, szuszpenziók, oldatok és más alkalmas formák.

Megfelelő mennyiségben adagolva az I általános képletü vegyületek fájdalomcsillapító hatást fejtének ki. A dózisszintek testsúlykilogrammonként körülbelül 0,1 mg és körülbelül 100 mg között lehetnek. Az előnyös dózisszintek általában testsúlykilogrammonként körülbelül 1,0 mg és körülbelül 200 mg között vannak.

A találmány szerinti eljárást és a találmány szerinti 1 általános képletű vegyületek élettani hatását a továbbiakban, a találmány oltalmi körének szűkítése nélkül, példákkal szemléltetjük.

1. példa

L-Tirozol-D-alanil-glicil-L-fenil-alanií-N^a-metil-E-metionil-amid-hidroklorid

A) D-Alanin-benzil-észter-p-toluol-szulfonát

100 ml benzil-alkohol, 200 ml benzol és 55,1 g (0,29 mól) p-tolúol-szulfonsav elegyéhez hozzáadunk 25 g (0,281 mól) D-alanint. Felforraljuk az elegyet, és a keletkezett vizet azeotropos desztillációval vízleválasztó feltét segítségével eltávolítjuk az elegyből. 15 órás forralás után szobahőmérsékletre hűtjük az elegyet, majd dietil-éter elegyéből átkristályosítjuk. Ily módon 55,3 g-nyi mennyiségben, 56%-os termeléssel nyerjük a kívánt terméket, op.: 112—115 C°.

Analízis a C₎₂H₂|NO₅S képlet alapján (351,42): számított: C 58,10%; H6,02%; N 3,99%; talált: C 58,19%; H6,06%; N 3,82%.

B) N^-Tercier-butoxí-karbonil-O-benzil-L-tirozil-D-alanin-benzil-észter

35,1 g (0,1 mól), az A) pontban leírt módon nyert termékhez 200 ml vízmentes dimetil-formamidot adunk. Keverés mellett 0 C^c hőmérsékletre hűtjük az elegyet, majd hozzáadunk 11,2 g (0,1 mól) diaza-biciklo-oktánt.

-4180723 percig 0 C^r hőmérsékleten kevertetjük az elegyet, majd hozzáadunk egymás után az itt megadott sorrendben 37,1 g (0,1 mól) N⁵-tercier-butoxi-karboniI-0-benzil-L-tirozint, 13,5 g (0,1 mól) 1-hidroxi-benzotriazolt és 20,6 g (0,1 mól) Ν,Ν'-diciklohexil-karbodiimidet. 3 órán át 0 C hőmérsékleten, majd további 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Utána 0 C hőmérsékletre hütjük, kiszűrjük a kivált csapadékot, majd a szűrlctröl csökkentett nyomáson ledcsztilláljuk az oldószert. Etil-acetátban feloldjuk a maradékot és 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, utána vízzel, majd hideg, 0,75 normál citromsav-oldattal, végül megint vízzel mossuk az oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk az etil-acetátos oldatot, majd ledesztilláljuk róla az oldószert. Etanolban melegen feloldjuk a maradékot, lehűléskor kikristályosodik a termék. Egyszeri etanolos átkristályosítás után 41,5 g (80%) tiszta terméket nyerünk, op.: 121—123 C°.

Analízis a C₃₀H₃₆N₂O₆ képlet alapján (520,53): számított: C 69,21%; H 6,97%; N 5,38%; talált: C 68,99%: H6,75%; N 5,17%.

C) Nⁿ-Tercier-butoxi-karbonil-O-benzil-L-tiroziI-D-alanin

200 ml tetrahidro-furán és 20 ml víz elegyéhez hozzáadjuk a B) pontban leírt módon nyert terméket. 0 C° hőmérsékletre hűtjük az oldatot, és lassan hozzáadunk 13,2 ml (1,1 egyenérték) 5 normál nátrium-hidroxid-oldatot. Keverés közben engedjük az elegyet szobahőmérsékletre melegedni. 5 óra múlva víz és dietil-éter között megosztjuk az elegyet, szilárd citromsav adagolásával 2-re állítjuk be az elegy pH-ját, majd etil-acetáttal kirázzuk. Vízzel mossuk, majd vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk az etil-acetátos oldatot, és a szárítószer kiszűrése után dietil-éterrel hígítjuk. Kiszűrjük a kivált csapadékot, ily módon 17,7 g (67%) terméket nyerünk, op.: 160—162 C°.

Analízis a C₂₄H₃₀N₂O₆ képlet alapján (442,51): számított: C 65,14%; H 6,83%; N6,63%; talált: C 64,73%; H6,70%; N 6,20%.

D) bP-Tercier-butoxi-karbonil-O-benzil-L-tirozil-D-alanil-gíicin-benzil-észter ml vízmentes dimetil-formamidhoz hozzáadunk 6,74 g (0,02 mól) glicin-benzil-észter-p-toluol-szulfoná• tót. 0 C hőmérsékletre hűtjük az elegyet, és hozzáadunk 2,24 g (0,02 mól) diaza-biciklo-oktánt. Néhány perces keverés után hozzáadunk először 8,84 g (0,02 mól), a C) pontban leírt módon nyert terméket, majd 2,7 g (0,02 mól) 1-hidroxi-benzotriazolt, és végül 4,12 g (0,02 mól) N,N'-diciklohexil-karbodiimidet. 2 órán át 0 C° hőmérsékleten, majd 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. 0 C' hőmérsékletre hűtjük az ily módon nyert szuszpenziót, kiszűrjük a csapadékot, és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert a szűrletről. Etil-acetátban feloldjuk a maradékot, és 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, hideg, 0,75 normál citromsav-oldattal, majd végül megint vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszáritjuk, majd csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Etanolból kristályosítjuk a maradékot, ily módon 10,8 g (92%) tiszta terméket nyerünk, op.: 145—147 C°.

Analízis a C₃₃H₃₉N₃O₇ képlet alapján (589,69): számított: C 67,22%; H 6,67%; N 7,13%; talált: C 67,32%; H 6,83%; N 6,91%.

E) N^a-Tercier-butoxi-karboniI-L-tirozil-D-alanil-glicin ml dimetil-formamidhoz hozzáadunk 10,5 g (0,018 mól) a D) pontban leírt módon nyert terméket, majd 2,5 g 5%-os csontszenes palládium dimetil-formamidos szuszpenzióját. Nitrogénnel kiöblítjük az elegyet tartalmazó edényt, majd egy elosztófejes gázbevezetőcsövön át 3 órán keresztül atmoszferikus nyomáson hidrogéngázt vezetünk bele az elegybe. Utána kiszűrjük a katalizátort, és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert a szűrletről. A maradékot dietil-éterrel eldörzsölve 5,4 g (75%) terméket nyerünk amorf, szilárd halmazállapotú anyag formájában.

Analízis a C₂₆H₂₆N₂O₅ képlet alapján (446,65): számított: C 69,94%; H5,87%; N6,27%;

talált: C 70,08%; H 5,82%; N 6,16%.

F) N^<’-Tercier-butoxi-karbonil-N“-metil-L-metionil-amid

17,2 g (0,04 mól) N^a-tercier-butoxi-karbonil-L-metionin-diciklohexil-ammóniumsót etil-acetát és hideg 0,75 normál citromsav-oldat kétfázisú elegyében feloldjuk. A szerves fázist elválasztjuk, vízzel mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk róla az oldószert. 80 ml vízmentes tetrahidro-furán és 10 ml dimetil-formamid elegyében feloldjuk az olajos maradékot, és az oldathoz hozzáadunk 0,5 g 18-korona-6-étert. Az ily módon nyert elegyhez hűtés és keverés mellett, félóra alatt, 0,12egyenértéknyi mennyiségű kálium-hidrid szuszpenzióját adagoljuk. Ezután 2,49 ml (0,04 mól) metil-jodidot adunk hozzá, majd 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Utána lehűtjük a reakcióelegyet, 0,75 normál citromsav-oldattal pH = 3-ra savanyítjuk, majd feloldjuk víz és dietil-éter kétfázisú elegyében. Vízzel többször mossuk a dietil-éteres fázist, majd 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal kirázzuk. Egyesítjük a vizes extraktumokat, pH = 2-re savanyítjuk, majd etil-acetáttal kirázzuk. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk az etil-acetátos oldatot, majd csökkentett nyomáson ledesztilláljuk róla az oldószert. Ily módon 8,4 g terméket nyerünk, amelynek NMR-spektruma összhangban áll a kívánt, N-metilezett termék szerkezetével. δ=2,92, N—CH₃; 8 = 2,11, S—CH₃: 8=1,6, C(CH₃)₃.

Ezután 60 ml dimetil-formamidban feloldjuk a fenti módon nyert 8,4 g (körülbelül 0,034 mól) olajos terméket, 0 C^z hőmérsékletre hűtjük az oldatot, majd 4,69 g (0,035 mól) !-hidroxi-benzotriazolt, utána pedig 7,0 g (0,034 mól) Ν,Ν'-dicikIohexil-karbodiimidet adunk hozzá. 2 órán át 0 C° hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd 45 percen át egy gázelosztócsövön keresztül vízmentes ammóniát vezetünk bele. Ezután megszűrjük a reakcióelegyet, és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk a szűrletről az oldószert. Egy 3 x 50 cm méretű, szilikagéllel (60—200 mesh) töltött oszlopra visszük fel a

-5180723 desztillációs maradékot, majd először kloroformmal, utána pedig kloroform és metanol 9,75 : 0,25 arányú elegyével eluáljuk az oszlopot. Vékonyrétegkromatográfiás úton vizsgáljuk az oszlopról lejövő frakciókat, a megfelelő frakciókat egyesítjük, csökkentett nyomáson ! ledesztilláljuk róluk az oldószereket, majd az ily módon nyert' terméket dietil-éter és petroléter elegyéböl átkristályosítva 4,1 g-nyi (39%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, op.: 75—78 C.

NMR-spektrumának jellemző sávjai: 8=2,80, 1

N—CH₃; 8 = 2,10, S—CH₃; 8=1,48, C(CH,)₃.

[ά]ρ = — 29,5'(c 0,5, kloroform).

Analízis a C₁₁H₂2N₂SO₃ képlet alapján (262.37): számított: C'50,36%; 1(8,45%,; N 10,68%: tálált: C 50,59%: H8,24%: N 10,87%. I

G) N-Tercier-butoxi-karbonil-L-fenil-aIanil-N'-metil-L-metionil-amid

- J ml jégecet, 2 ml anizol, 2 ml trietil-szilán és 3,8 g 2 (0,0144 mól), az F) pontban leírt módon nyert termék elegyébe félórán át vízmentes sósavgázt vezetünk. Utána dietil-éterrel hígítjuk az elegyet, kiszűrjük a kivált csapadékot, és megszárítjuk. 40 ml dimetil-formamidban feloldjuk az ily módon nyert, 2,9 g súlyú anyagot, 0, C~ hőmérsékletre hűljük az oldatot, hozzáadunk 2,9 ml (0,0146 mól) diciklohexil-amint, majd 1,97 g (0,0146 mól) 1-hidroxi-benzotriazolt, utjina 3,87 (0,0146 .mól) N^-tercier-butoxi-karbonil-L-fenil-alunüit, és végül 3,0 g (0,0146 mól) N,N'-di.ciklohcxil-karbodiimjdet. 2 órán át 0 C hőmérsékleten, majd 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Utána 0.C hőmérsékletre hűtjük, és kiszűrjük az elegyben levő szilárd anyagot. Csökkentett nyomáson Igdesztillatjuk az oldószert a szűrletről, etil-acetátban feloldjuk a maradékot, és egymás után 1 normál ná.tripm-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, 0,75 normál citropisav-oldattal és végül megint vízzel mossuk az oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Ily módon olajos terméket nyerünk, amelyet petroléterből nem lehet kristályosítani. Egy 3x50 cm méretű, szilikagcllel (60—2Q0 mesh) töltött oszlopra yisszijk fel ezt a desztillációs maradékot, és először kloroformmal, majd kloroform és metanol 9,8 : 0,2 arányú elegyével eluáljuk az oszlopot. Vékonyrétegkromatográfiával vizsgáljuk az oszlopról lejövő frakciókat, a megfelelő frakciókat egyesítjük, csökkentett nyomáson ledesztilláljuk róluk az oldószereket, majd az ily módon nyert terméket dietil-éter és petroléter elegyéböl kristályosítva 3,1 g-nyi (52,5%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, op.: 99—103 C‘.

Analízis a C_2i)H₃|N₃O₄S képlet alapján (409,55): számított: C 58,65%: H 7,63%: N 10,26%: talált: C 58,74%; H 7,47%; N10,45%.

H} N^f!-Tercier-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-alanil-glicil-L-fcnil-alani!-N-metil-L-meíioniI-amid mi jégecet, 3 ml anizol és 3 mi trietil-szilán elegyéhez hozzáadunk 2,2 g (5,37 millimól), a G ¹ .pontban leírt módon nyert terméket. Félórán át vízmentes sósavgázt vezetünk az elegybe, utána dietil-ciert adunk hozzá, kiszűrjük a kivált csapadékot, és csökkentett nyomáson megszárítjuk. 30 ml vízmentes dttnetil-formamid.ban feloldjuk az ily módon nyert szilárd anyagot (1.75 g, 5 mnlimól), 0 C hőmérsékletre híitjük az oldatot, és 0,99 ml (5 millimól) diciklohexil-amin hozzáadásával semlegesítjük a sósavas sót. '5 perc leteltével hozzáadunk 2,05 g (5 millimól), az F)' pontban leírt módon nyert anyagot, > majd 0,68 g (5 millimól) 1-hidroxi-benzotriazolt és 1,03 g (5 millimól) N,N'-diciklohexil-karbodiimidet. 24 órán át 4 C hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd kiszűrjük az elegyben levő szilárd anyagot, és a szűrletrő! csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Etii-acetát0 bán feloldjuk a maradékot, és egymás után 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oidattal, hideg, 0,75 normál citromsav-oldaítál, és végül vízzel mossuk az etil-ácétátos oldatot. VIzrhfentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd egy 3 \ 50 cm méretű, szilikagéllel (60— 5 200 mesh) töltött oszlopon engedjük át, és először kloroformmal, majd kloroform'és metanol 9: I arányú elcgyévcl eluáljuk az oszlopot. Vékonyrétegkromatográfiával vizsgáljuk az oszlopról lejövő frakciókat, a megfelelő frakciókdUegyesítjük, és csökkentett nyomáson .0 ledesztilláljuk róluk az oldószereket. Ily módon kétféle tisztasági fokú nyersterméket nyerünk, amelyek súlya 0,80 g, ill. 1,2 g. Az első részletet preparatív vékonyrétegkromatográfiával tisztítva, (szilikagél, kloroform-métá'nol—9: 1) 0,62 g-nyi mennyiségben, amorf por15 szerű anyag formájában nyerjük a kívánt terméket.

Analízis a C₃₄H₄₈N₆O₆S képlet alapján (700,86): .számított: C^:&,27%; H 6,90%; N 11,99%; talált: C’58',48%; H 6,64%; N 11,97%.

Az aminosav-analízis talált értékei: tirozin: 0,99; 30 alahin: 1,00: glicin: l,0Ó';'.fenil-alanin: 1,00.

A fent leírt módon hye'rt második anyagrészfetet a fentiekhez hasonló módom kétszer kromatografálva 0,74 g-nyi mennyiségben nyerjük a kívánt anyagot, amelynek elemi analízise és aminosav-analízise meg35 felelő értékeket ad. '

I) L-Tifozil-D-a.laniI-glicil-L-fenii-alanil-N''-metil-L-métionil-amid-hidroklorid

5 ml jégecet és 0,2 ptl anizol elegyéhez hozzáadunk

0,72 g (1,03 millimól) a Hl pontban leírt módon nyert terméket. 20 percen át vízmentes sósavgázt vezetünk az elegybe. Fagyasztva szárítás útján 0,74 g-nyi mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, amelynek R^-értéke: 0,3.

Egy analitikai mintát Csökkentett nyomáson, 100 C’ hőmérsékleten megszárítunk.

Analízis a C₂.₉H4|N₆O₆SC1 képlet alapján (637,20): számított: C'5’4,86%: H6,49%; H 13,19%; talált: C 54,36%: H 6,19%: N 13,00%.

Az aminosav-analízis''talált értékei: tirozin: 1,01; alanin: 0.99; glicin: l;00; fenil-alanin: 1,00.

2. példa υ-ΤίΓόζί]-0-]είΐοί1^ϋ·;ίΙ-Ε-ΓοηίΙ-ΰΐ3ηίί-Ν-ηείίΙ-υ-métíónil-amjd-szeszkvihi’dt-bklorid-.monoacetát

A) Drtéucin-benzil-észter-p-'toluol-szulfonát

Ezt a vegyületet pontosan az 1. példa A)'pontjában a megfelelő D-alanin-származék előállítására leírt módon állítjuk elő. Termelés: 73%, op.: 155—156 C.

Analízis a C_2l)H₂₇NO₃S képlet alapján' (393,50): számított: C 61,05:',: H 6,92’₀; _ N’3,56%;

talált: 'C61,17%; H 6,6'8%': ” N 3,81%.

-6180723

B) N^f‘-Tercier-butoxi-karbonil-O-benzi!-L-tiiOzii-D-leucin-benzil-észter ml dimetil-formamidhoz hozzáadunk 7,86 g (0,020 mól), az A) pontban leírt módon nyert terméket. 0 C° hőmérsékletre hűtjük az elegyet, majd hozzáadunk

2,24 g (0,020 mól) diaza-bieiklo-oktánt. 5 percnyi keverés után hozzáadunk 7,42 g (0,020 mól) N^a-tercier-butoxi-karbonil-O-benzil-L-tirozint, majd 2,7 g (0,020 mól) l-hidroxi-benzotriazolt, és végül 4,12 g (0,020 mól) 10 N,N'-diciklohexiI-karbodimidet. 2 órán át 0 C⁷ hőmérsékleten, majd 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Utána 0 C“ hőmérsékletre hűljük, és kiszűrjük az oldatlan részeket. Csökkentett nyomáson ledesztilláljuk a szűrletröl az oldószert, etil-acetátban felold- 15 juk a maradékot, majd egymás után 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldatial, vízzel, hideg, 0,75 normál citromsav-oldattal, majd végül megint vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, és csökkentett nyomáson ledesztiláljuk az oldószert. Forró etanolból kristályosítva 9,0 g-nyi (78/,,) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, op.: 100 103 C=.

Analízis a C₃₄H₄₂N₂O₆ képlet alapján (574,72): számított: C 71,06%: H 7,37%: N 4,87%; talált: C 71,30%: H 7,15%: N 4,79%.

C) br-Tercier-biitoxi-karbonil-O-benziFL-tirozii-D-ieucin ml tetrahidro-furánhoz hozzáadunk 8,0 g (0,0139 mól), a B) pontban leirt módon nyert terméket. Utána hozzáadunk 20 ml vizet, 0 C° hőmérsékletre hűtjük az elegyet, és lassan hozzáadunk 7,25 ml (0,0145 mól) 2 normál nátrium-hidroxid-oldatot. Ezután félórán át 0 C° hőmérsékleten, majd 4 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Dietil-éler és víz kétfázisú elegyében feloldjuk az elegyet, leválasztjuk a vizes részt, hideg, 1 normál sósav-oldattal pH =2-re savanyítjuk, majd etil-acetáttal kirázzuk. Vízzel mossuk az etil-acetátos extraktumokat, vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Az ily módon nyert szirupszerű maradékot dietil-éter és petroléter elegyéből kristályosítva* 6,4 g-nyi (95%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, op.: 90—94 C .

Analízis a C₂₇H₃₆N₂O₆ képlet alapján (484,59): számított: C 66,92%; H 7,49%; N5,78%: talált: C 67,14%; H 7,38%; N 5,76%.

D1 N“-Tercier-biitoxi-karboni!-O-benzil-L-tirozil-D-Ieucil-glicin-benzil-észter

3,37 g (0,010 mól) glicin-benzil-észter-p-toluol-szulfo nát, 1,12 g (0,010 mól) diaza-biciklo-oktán és 25 ml víz- 55 mentes dimetil-formamid elegyéhez hozzáadunk 4,84 g (0,010 mól), a C) pontban leírt módon nyert terméket. 0 C hőmérsékletre hűtjük az elegyet, és hozzáadunk 1,35 g (0,010 mól) l-hidroxi-benzotriazolt, majd 2,05 g (0,010 mól) N,N'-diciklohexil-karbodiimídet. 2 órán át 0 C hőmérsékleten, majd 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Utána 0 C^J hőmérsékletre hütjük, szűrjük, majd csökkentett nyomáson ledesztillálj uk a szőriéiről az oldószer!. Etil-acetátban feloldjuk a maradékot, cs egymás után i normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, hideg, 0,75 normál citromsav-oldattal és végül megint vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldó5 szert. Etanol és víz elegyéből kristályosítjuk a maradékot, ily módon 4,0 g-nyi (63%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, op.: 114—116 C°.

Analízis a C₃₆H₄₅N₃O₇ képlet alapján (631,77): számított: C 68,44%: H7,18%; N 6,65%; talált: C 68,17%: H7,12%: H 6,40%.

E) Nⁿ-Tercier-butoxi-karboni!-L-tirozil-D-Ieuci!-glicin ml vízmentes dimetil-formamidhoz hozzáadunk 3,9 g (0,006 mól), a D) pontban leírt módon nyert terméket, majd 1,5 g 5%-os csontszenes palládiumot. 40 ml etanolt adunk az elegyhez, a reakcióedényt nitrogénnel átöblítjük, majd 5 órán át, atmoszferikus nyomá21 són és szobahőmérsékleten hidrogéngázt vezetünk bele.

Utána kiszűrjük a katalizátort, és csökkentett nyomáson íedesztilláljuk a szűrletröl az oldószert. Dietil-éter és ! etil-acetát elegyéből kristályosítjuk a maradékot, ily “''módon 2,3 g-nyi (85%) mennyiségben nyerjük a kívánt 25 terméket, op.: 189—190 C°.

Analízis a C₂₂H₃₃N₃O₇ képlet alapján (451,52): számított: C 58,52%; H7,37%; N 9,31%; talált: C 58,79%; H 7,48%; N 9,39%.

F' N“-Tercier-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-IeuciI-glicil-L-fenil-alaniI-N^a-metil-L-metionil-amid

IC ml vízmentes dimetil-formamidhoz hozzáadunk 0,692 g (0,002 mól), az 1. példa H> pontjában leírt mó35 dón nyert L-feniI-alanil-N'^I-metil-L-metionil-amid-hidrokloridot, és 0,903 g (0,002 mól), az E) pontban leírt módon nyert terméket. 0 C' hőmérsékletre hűtjük az elegyet, hozzáadunk 0,28 ml (0,002 mól) trietil-amint, majd 10 perc múlva 0,27 g (0,002 mól) 1-hidroxi-benzo40 triazolt és utána 0,412 g (0,002 mól) N,N'-diciklohexií-karbodiimideí. 2 órán át 0 C hőmérsékleten, majd 24 órán át 4 C’³ hőmérsékleten keverjük az elegyet, utána kiszűrjük a csapadékot, és a szűrletröl csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Etil-acetátban 45 feloldjuk a maradékot, és egymás után 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, hideg, 0,75 normái citromsav-oldattal, és végül megint vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, és csökkentett nyomáson íedesztilláljuk az 50 oldószert. Két preparatív vastagrétegre visszük fel a desztillációs maradékot, és kloroform és metanol 9,25 : 0,75 arányú elegyével kromatografáljuk. Az ultraibolya fényben észlelhető sávok közül a legerősebbet tartalmazó szilikagél csíkot lekaparjuk a lemezről, és kloroform és metanol elegyével leoldjuk az anyagot a szilikagéiről. Az oldószerek ledesztillálása útján amorf szilárd anyag formájában, 1,2 g-nyi (81%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket.

[z]²o= —31,5’ (c=0,5, metanol).

Analízis a Cj₇H,₄N₆O₈S képlet alapján (742,93): számított: C 59,82%; H7,33%; N 11,31%; talált: C 59,88%; H 7,06%; N 11,15%.

Az aminosav-analízis talált értékei: tirozm: 1,01;

leucin: 1,00; glicin: 1,00; f’enil-alanin: 0,99.

-7180723

G) L-Tirozil-D-leuci!-gIiciI-L-fenil-alanil-N“-metiI-L-metionil-amid-szeszkvihidroklorid-monoacetát ml jégecet és 0,3 ml anizol clegyéhez hozzáadunk 0,900 g (0,0012 mól), az F) pontban leírt módon nyert terméket. 20 percen,át vízmentes sósavgázt vezetünk az elegybe. A termék vizes-ecetsavas oldatának fagyasztva szárítása útján amorf szilárd anyag formájában nyerjük a kívánt vegyületet.

[α]ρ = —2,Γ (c=0,3, metanol).

Analízis a C₃₂H₄₇N₆O₆S. 1,5HC1 .C₂H₄O₂ képlet alapján (757,04):

számított: C 53,93%; H 6,79%; N 11,10%;

Cl 7,02%;

talált: C 54,30%; H 6,64%; N 11,32%;

Cl 6,96%.

Az amjnosav-analizis talált értékei: tirozin: 0,99, leucin: 1,03; glicin: 0,99; fenil-alanin: 0,99.

3. példa

L-Tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-L-metionil-amid-hidroklorid

A) N^a-Tercier-butoxi-karbonil-L-fenil-aIanil-L-metionin-metil-észter

200 ml dimetil-formamidhoz hozzáadunk 19,9 g (0,1 mól) L-metionin-metil-észter-hidrokloridot. 0 C° hőmérsékletre hűtjük az elegyet, és hozzáadunk 19,9 ml (0,1 mól) diciklohexil-amint, 26,5 g (0,1 mól) N“-tercier-butoxi-karbonil-L-fenil-alanint, 13,5 g (0,1 mól) 1-hidroxi-bcn^ptriazolt és végül 20,6 g (0,1 mól) N,N'-diciklohexil-karbodiimidet. 2 órán át 0 C° hőmérsékleten, majd 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Utána megint 0 C° hőmérsékletre hűtjük, kiszűrjük a csapadékot, és a szűrletről csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Etil-acetátban feloldjuk a maradékot, és egymás után hideg, 0,75 normál citromsav-oldattal, vízzel, 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd megint vízzel rnossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. A kristályos maradékot dietil-éter és petroléter elegyéböl kétszer átkristályosítjuk, ily módon 26,6 g-nyi (65%) mennyiségben nyerjük a kívánt vegyületet, op.: 89— 92 C .

Analízis a C₂₀H_3CN₂O₅S képlet alapján (410,53): számított: C 58,51%; H7,37%; N6,82%; talált: C 58,41%; H 7,15%; N 6,71%.

B) N^a-Tercier-butoxi-karbonil-L-fenil-alanil-L-metionil-amid ml metanolhoz hozzáadunk 13,0 g (0,032 mól), az

A) pontban leírt módon nyert terméket. Mágneses keverővei keverhető nyomásálló edénybe öntjük az ily módon nyert szuszpenziót, —78 C° hőmérsékletre hűtjük, és hozzáadunk 60 ml vízmentes, cseppfolyós ammóniát. Lezárjuk a reakciósedényt, és hagyjuk szobahőmérsékletre felmelegedni. 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet, utána lassan visszahűtjük —78 C° hőmérsékletre, majd kinyitjuk a reakciósedényt. Az elegy melegítése útján hagyjuk a megmaradt ammóniát elpárologni, a maradék oldatról ledesztilláljuk a metanolt, és metanolból átkristályositjuk a maradékot. Ily módon 9,7 g-nyi (77%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, op.: 192—195 C°.

Analízis a C₁₉H₂₉N₃O₄S képlet alapján (395,52): számított: C 57,70%;' H 7,39%; N 10,62%; talált: C 57,41%: H 7,17%: N 10,37%.

C) L-Fenil-alanil-L-metionil-amid-hidroklorid

150 ml jégecet, 10 ml anizol és 10 ml trietil-szilán elegyéhez hozzáadunk 9,6 g (0,024 mól), a B) pontban leirt módon nyert terméket. Egy gázelosztócsövön keresztül félórán át vízmentes sósavgázt vezetünk az elegybe. Utána dietil-éterrel hígítjuk, majd kiszűrjük a kivált csapadékot, és etanol és dietil-éter elegyéből átkristályosítjuk. Ily módon 7,5 g-nyi (94%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, op.: 214—216 C⁼.

Analízis a C|₄H₂₂N₃O₂SC1 képlet alapján (331,87): számított: C 50,67%; H 6,68%; N 12,66%; talált: C 50,75%; H 6,84%: N 12,54%.

D) N“-Tercier-butoxi-karbonil-D-alaniI-glicil-L-fenil-alanil-L-metionil-amid ml dimetil-formamidhoz hozzáadunk 1,66 g (0,005 mól), a C) pontban leirt módon nyert terméket, majd 0,99 ml (0,005 mól) diciklohexil-amint. 0 C^c hőmérsékletre hűtjük az elegyet, majd hozzáadunk 0,88 g (0,005 mól) N“-tercier-butoxi-karbonil-glicint, utána 0,68 g (0,005 mól) 1-hidroxi-benzotriazolt, és végül 1,03 g (0,005 mól) N,N'-diciklohexil-karbodiimidet. 2 órán át 0 C~ hőmérsékleten, majd 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet, majd megint 0 C^c hőmérsékletre hűtjük. Kiszűrjük a kivált csapadékot, és a szűrletről csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Etil-acetátban feloldjuk a maradékot, és egymás után 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, hideg, 0,75 normál citromsav-oldattal, majd megint vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Forró etil-acetátban feloldjuk a maradékot, az oldat lehűlése során egy gélszerű anyag válik ki, amelyet nem lehet kikristályosítani. Kiszűrjük a gélszerű anyagot, niegszáritjuk, ily módon 1,7 g amorf szilárd anyagot nyerünk. 50 ml acetonitril, 5 ml anizol és 5 ml trietil-szilán elegyében szuszpendáljuk a szilárd terméket, hozzáadunk p-toluol-szulfonsav-monohidrátot, majd 5 órán át keverjük az elegyet. Kiszűrjük és megszárítjuk a csapadékot, ily módon 1,6 g (0,003 mól) nyers glicil-L-fenil-alanil-L-metionil-amid-p-toluol-szulfonátot nyerünk. 30 ml dimetil-formamidban feloldjuk ezt a szennyezett terméket, 0 C' hőmérsékletre hűtjük az oldatot, hozzáadunk 0,336 g (0,003 mól) diaza-biciklo-oktánt, majd 10 perc múlva 0,8 g (0,004 mól) N“-tercier-butoxi-karbonil-D-alanint, 0,540 g (0,004 mól) 1-hidroxi-benzotriazolt és végül 0,824 g (0,004 mól) N,N'-diciklohexil-karbodiimidet. 2 órán át 0 C° hőmérsékleten, majd 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Utána visszahűtjük 0 C° hőmérsékletre, majd kiszűrjük a csapadékot. A szűrletről csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert, n-butanolban feloldjuk a maradékot, és egymás után 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldat180723 tál, vízzel, hideg, 0,75 normál citromsav-oldattal és végül megint vízzel mossuk a butanolos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton rhegszárítjuk, majd csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Forró etanolban feloldjuk a maradékot, majd etil-acetát hozzáadásával ki'csapjük a terhiéket. Ily módon 1,1 g-nyi mennyiségben, 42%-os össztermeléssel nyerjük a kívánt vegyületet.

Az aminosav-análízis talált értékei: alanin: 1,01; glicin: 1,01; fenil-alanin: 1,01: metionin: 0,98.

E) N’-Terciet-butoxi-karbonil-L-tiroziFD-alanil-glicil-L-fenil-alanil-L-rrietionil-amid hil jégecet, 2 ml anizöl és 2 ml trietil-szilán elegyéhez hozzáadunk 1,0 g (0,0019 mól), a D) pontban leírt módon nyert terméket. Utána félórán át egy gázbevezető csövön keresztül vízmentes sósavgázt vezetünk az elegybe, majd dietil-étert adunk hozzá. Kiszűrjük és megszárítjuk a kivált csapadekot (0,870 g). 20 ml hideg (0 C= hőmérsékletű) dimetil-formamid és 0,38 ml (0,0019 mól) diciklohexil-amin eiegyében feloldjuk az ily módon nyert szilárd anyagot, és 10 perc elteltével hozzáadunk 0,534 g (0,0019 mól) N“-tercier-butoxi-karbonil-L-tiroziht, 0,257 g (0,0019 mól) 1-hidroxi-benzotriazolt, és végül 0,391 g (0,0019 mól) N,N'-diciklohexil-karbodiiitiidet. 2 órán át 0 C° hőmérsékleten, majd 24 órán át szobahőmérsékleten kevertetjük az elegyet. Utána ismét 0 C° hőmérsékletre hűtjük, kiszűrjük a csapadékot, és a szűrletről csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. n-Butanolban feloldjuk a maradékot, és egymás után 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, hideg, 0,75 normál citromsav-oldattal és végül megint vízzel mossuk a butanolos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. A maradék etil-acetátos és etanolos kristályosítási próbái gélszerű anyaghoz vezetnek. Forró metanolban feloldjuk a desztillációs maradékot, és egy vastag rétegre vesszük fel az oldatot. Kloroform és metanol 9 : 1 arányú elegyével futtatjuk a réteget, majd lekaparjuk a lemezről a terméket tartalmazó adszorbenst, és kloroform és metanol elegyével kivonatoljuk. Csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószereket, ily módon 0,270 g-nyi (21%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, R® = = 0,17.

Az aminosav-analizis talált értékei: tirozin: 1,00; alanin: 1,02: glicin: 0,99; fenil-alanin: 1,02; metionin: 0,98.

F) L-Tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-L-metionil-amid-hidroklorid ml jégecet és 0,25 ml anizol elegyéhez hozzáadunk 0,270 g (0,0004 mól), az E) pontban leirt módon nyert terméket. 20 percen át egy gázelosztó csövön keresztül vízmentes sósavgázt vezetünk az elegybe, majd megfagyasztjuk, és fagyasztva szárítjuk. Ily módon 0,182 gnyi (75%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, R^ = 0,5.

Az aminosav-analizis talált értékei: tirozin: 0,99; alanin: 1,00; glicin: 0,99; fenil-alanin: 1,01; metionin: 0,91*.

* Az analízis szerint metíönin-szulfoxid van jelen a termékben.

4. példa

L-Tirozil-D-aianil-glicil-N’-metii-L-fenil-alanii-N’-metil-L-metionil-amid-hidroklorid-trihidrát

A) N’-tercier-butoxi-karbonil-N’-metil-L-fenil-alanin-N,N-diciklohexil-ammóniumsó ml vízmentes tetrahidro-furánhoz hozzáadunk 10 5,3 g (0,02 mól) N’-tercier-butoxi-karbonil-L-fenil-alanint. Körülbelül 10 C^c hőmérsékletre hűtjük az oldatot, és hozzáadunk 10 ml vízmentes dimetil-formamidot és 0,5 g 18-korona-6-étert. Az ily módon nyert elegyhez lassan hozzáadagolunk (0,060 mól kálium-hidridét tár15 talmazó) 10,15 g olajos káíium-hidrid-diszperzíót. Utána 0 C° hőmérsékletre hűtjük az elegyet, és hozzáadunk

1,24 ml (0,020 mól) metil-jodidot. Ezután, 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Másnap jégre öntjük és dietil-éterrel kirázzuk. Citromsavval ptl 2-re 20 savanyítjuk a vizes oldatot, majd etil-acetáttal kirázéuk. Vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot, vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd lédesztilláljuk áz oldószert. A maradék olaj nem kristályosítható. Ezen olajos termék NMR-spektrüma összhangban van a várt 25 szerkezettel. Az NMR-spektrum jellemző sávjai: 8 = =2,72, N—CH₃: 8=1,35, C(CH₃)₃. Dietii-éterben feloldjuk a fenti olajos terméket, és hozzáadunk 4,0 ml diciklohexil-amint. Lehűléskor a termék kikristályosodik. Kiszűrjük a kivált anyagot, és metanol és dietil30 -éter elegyéböl átkristályosítjuk, ily módon 6,Í g-nyi (74%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, op.: 171—174 C \ [0-^=-22,0= (c=l, metanol).

Analízis a υ₂₇Η₄₄Ν₂Ο₄ képlet alapján (460,66):

számított: C 70,40%; H 9,63%; N 6,08%; talált: C 70,60%; H 9,49%; N 6,19%.

B) N=-Tercier-butoxi-karbonil-N^a-metil-L-fenil-

-alanil-N’-metil-L-metionil-amid

1,98 g (0,010 mól) N’-metil-L-metionil-amid-hidroklorid 30 ml vízmentes dimetil-formamiddal készült oldatához hozzáadunk 4,16 g (0,010 mól) N’-tercier45 -butoxi-karbonil-N’-metil-L-fenil-alanint. 5 perces keverés után 0 C° hőmérsékletre hűtjük az elegyet, majd hozzáadunk 1,35 g (0,010 mól) l-hidroxi-benzotriazolt és 2,06 g (0,010 mól) N,N'-dicikIohexiI-karbodiimidet. 2 órán át 0 C^J hőmérsékleten, majd 24 órán át szoba50 hőmérsékleten keverjük az elegyet. Kiszűrjük a csapadékot, és a szűrletrőí csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. A maradékként nyert szirupszerű anyagot etil-acetátban feloldjuk, majd egymás után 1 normál citromsav-oldattal, majd végül megint vízzel 55 mossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszorítjuk, és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Az ily módon nyert szirupszerű anyagot kloroformban feloldjuk, és egy szilikagéllel (60—200 mesh) töltött, 3 x 50 cm méretű oszlopra 60 visszük fel az oldatot. Először kloroformmal, majd kloroform és metanol 9,75 : 0,25 arányú elegyével mossuk az oszlopot. Vékonyrétegkromatográfiával vizsgáljuk az oszlopról lejövő frakciókat, és a megfelelő frakciókról csökkentett nyomáson egyesítve, Iedesztilláljuk az oldó65 szert. Ily módon 1,34 g szirupszerű anyagot nyerünk,

-9180723 amelynek NMR-spektruma összhangban van a várt szerkezettel. Az NMR-spektrum jellemző sávjai: 8 ^: = 2,93, N CH3^phe; 8=2,73, N -CH3^Mst; 8 = 2,10, S—CH₃: 8=1,37, C(CH₃)₃.

C) N’-Tercier-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-alanil-glicii-N^,t-metil-L-fenil-alanil-N^:t-metil-L-metionil-amid ml jégecet, I ml anizo! és l ml trietil-szilán elegyéhez hozzáadunk 1,4 g (0,0033 mól), a B) pontban leírt módon nyert terméket. Félórán át egy gázelosztócsövön keresztül vízmentes sósavgázt vezetünk az elegybe, majd dietil-éterrel hígítjuk. Kiszűrjük a kivált csapadékot, majd megszárítjuk (1,1 g). 40 ml dimetil-formamidban feloldjuk a megszárított anyagot, 0 C° hőmérsékletre hűtjük az oldatot, hozzáadunk 1,27 g (0,0031 mól), az 1. példa E) pontjában leírt módon nyert terméket, majd utána 0,420 g (0,0031 mól) 1-hidroxi-benzotriazolt, és végül 0,640 g (0,0031 mól) N.N'-diciklohexil-karbodiimidet. 10 perc múlva az elegyhez hozzáadunk 0,43 ml (0,0031 mól) trietii-amint, majd 2 órán át 0 C hőmérsékleten és utána 48 órán át 4 C^c hőmérsékleten keverjük az elegyet. Ezután kiszűrjük a kivált csapadékot, és a szőriéiről csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Etil-acetátban feloldjuk a szirupszerű maradékot, és egymás után kimossuk az oldatot 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, hideg, 0,75 normál citromsav-oldattal, és végül megint vízzel. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk az etil-acetátos oldatot, majd csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Ily módon 2,0 g nyersterméket nyerünk. Kloroformban feloldjuk és fel visszük egy szilikagéllel (60— 200 mesh) töltött, 3 :< 50 cm méretű oszlopra, majd először kloroformmal, utána kloroform és metanol 9: 1 arányú elegyével mossuk az oszlopot. Vékonyrétegkromatográfiával vizsgáljuk az oszlopról lejövő frakciókat, és a megfelelő frakciókról egyesítve, csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószereket. Ily módon 1,1 g (47°'_O) nem kristályos terméket nyerünk.

Analízis a C₃₅H₅₀N₆O_gS képlet alapján (714,88): számított: C 58,80%; H 7,05%; N 11,76%,; talált: C 59,01%; H 6,78%: N 11,58%.

D) L-Tirozil-D-alanil-glicil-N’-metil-L-fenil-alanil-N’-metil-L-metionil-amid-hidroklorid-trihidrát ml jégecet és 0,5 ml anizoí elegyéhez hozzáadunk 0,70 g (0,001 mól), a C) pontban leírt módon nyert terméket. 20 percen át egy gázelosztócsövön keresztül vízmentes sósavgázt vezetünk az elegybe. Lltána megfagyasztjuk az elegyet, és fagyasztva szárítjuk. Ily módon 0,678 g-nyi mennyiségben nyerjük a nedvszívó terméket.

Analízis C₃₀H₄₃N₆O₆SCI. 3H₂O-ra (705,23): számított: C 51,08%; H 7,0%; N 11,91%;

talált: C 51,13%; H6,97%; N 11,72%.

Az aminosav-analízis talált értékei: tirozin: 1,03; aianin: 1,01; glicin: 0,96.

5. példa

L-Tirozil-D-alanil-L-alanil-L-fenil-alanil-N’-metil-L-metionil-amid-1,25-hidroklorid-monoacetát

A) N’-Tercier-butoxi-karbonil-O-benzil-L-tirozil-D-alanil-L-alanin-benzil-észter

3,19 g (0,010 mól) alanin-benzil-észter-p-toluol-szulfonát 30 ml vízmentes dimetil-formamiddal készült oldatához hozzáadunk 4,43 g (0,010 mól) az 1. példa B) pontjában leírt módon nyert terméket. 0 C° hőmérsékletre hűljük az elegyet, és hozzáadunk 1,12 g (0,010 mól) diaza-biciklo-oktánt, majd 10 perc múlva 1,135 g (0,010 mól) 1-hidroxi-benzotriazolt és 2,06 g (0,010 mól) N,N'-diciklohexil-karbodiimidet. 2 órán át 0 C~ hőmérsékleten, majd 48 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Utána kiszűrjük a kivált csapadékot, és a szűrletről csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Etil-acetátban feloldjuk a maradékként nyert szírupszerű anyagot, és egymás után l normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, hideg, 0,75 normál sósav-oldattal és végül megint vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. A maradék dietil-éterből és etanolból nem kristályosítható. A termék dietil-éteres oldatából petroléteres hígítás útján egy gélszerű anyagot nyerünk, amelyet kiszűrünk, és csökkentett nyomáson megszárítunk. Egy szilikagéllel (60—200 mesh) töltött, 3x50 cm méretű oszlopra visszük fel a szennyezett, amorf szilárd anyagot (4.0 g), és először kloroformmal, majd kloroform és metanol 9,75 : 0,25 arányú elegyével mossuk az oszlopot. Vékonyrétegkromatográfiával vizsgáljuk az oszlopról lejövő frakciókat, és a megfelelő frakciókról egyesítve, csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószereket. Dietil-éterben feloldjuk az ily módon nyert, szirupszerű anyagot, és petroléterrel kicsapjuk a terméket. Ily módon 3,0 g-nyi (50%) mennyiségben nyerjük a kívánt vegyületet, amorf szilárd anyag formájában, op.: 100—104 C°.

Analízis a C₃₄H₄|N,O₇ képlet alapján (603,72): számított: C 67,64%; H6,85%: N 6,96%;

talált: C 67,56%; H6,60%: N 7,16%.

B.i N’-Tercier-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-alanil-L-alanin ml vízmentes dimetil-formamidhoz hozzáadunk 2,9 g (0,0048 mól), az A) pontban leírt módon nyert terméket. Utána hozzáadunk 1,0 g 5%-os csontszenes palládiumot, majd 50 ml etanolt. Ezután 6 órán át, atmoszferikus nyomáson és szobahőmérsékleten egy gázelosztó csövön keresztül hidrogéngázt vezetünk az elegybe. Utána hidrogénnel kiöblítjük a reakcióedényt, kiszűrjük a katalizátort, és a szűrletről csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Ily módon 1,5 g-nyi (74%) mennyiségben nyerjük ?. kívánt terméket, amorf, szilárd anyag formájában, [a]£= = 25,9 (c-0,5, kloroform).

Analízis a C-.₀H₂₉N₃O₇ képlet alapján (423,47): számított: C 56,73%: H6,90%: N9,92%;

talált: C 56,80%; H 6,95%; N 9,81%.

-10180723

C) N^J-Tercier-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-aIanil-L-aianil-L-fenil-alanil-N’-metíl-L-metionil-amid ml vízmentes dimetil-formamidhoz hozzáadunk 0,692 g (0,002 mól), az 1. példa H) pontjában leírt módon nyert L-fenil-alanil-N’-metil-L-metionil-amid-hidrokloridot. 0 C° hőmérsékletre hűtjük az elegyet, és hozzáadunk 0,28 ml (0,002 mól) trietil-amint. 10 perces kevertetés után az elegyhez hozzáadunk 0,846 g (0,002 mól), a B) pontban leírt módon nyert terméket, majd 0,270 g (0,002 mól) 1-hidroxi-benzotriazolt, és végül 0,412 g (0,002 mól) N.N'-diciklohexil-karbodiirnidet. 2 órán át 0 C hőmérsékleten, majd 48 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Utána megint 0 C hőmérsékletre hűtjük, kiszűrjük a csapadékot és a szűrletről csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Etil-acetátban feloldjuk a maradékot, és egymás után I normál nálrium-hidrogén-karbonát-oldatíal, vízzel, hideg, 0,75 normál citromsav-oldattal és végül megint vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Ily módon 1,6 g nyersterméket nyerünk. Kloroformban feloldjuk a nyersterméket, és felvisszük két preparatív vastagréteglemezre az oldatot, majd kloroform és metanol 9 : 1 arányú elegyében kromatografáljuk. Mindkét lemezről lekaparjuk a főterméket tartalmazó szilikaeélt, és kloroform és metanol elegyével leoidjuk róla az anyagot. Az

1,3 g súlyú terméket újra feloldjuk, és egy vastagréteglemezen újra kromatografáljuk. ily módon 1,0 g-nyi (70%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, amorf szilárd anyag formájában, [ajg =^25,6° (c 0,5, metanol).

Analízis a C₃₅H_J0N₆O₈S képlet alapján (714,88): számított: C 58,80%: H 7,05%; N 11,76%; talált: C 58,60%: H 6,87%: N 11,53%.

D) L-Tirozil-D-alanil-L-alanil-L-fenil-alanil-N*-metil-L-metionil-amid-hidroklorid-monoacetát ml jégecet és 0,5 ml anizol elegyéhez hozzáadunk 0,880 g (0,0011 mól), a C) pontban leírt módon nyert terméket. 20 percen át egy gázelosztó csövön keresztül vízmentes sósavgázt vezetünk az elegybe. Utána megfagyasztjuk az elegyet, és fagyasztva szárítjuk. Ily módon 0,704 g-nyi mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, 16,2 (c 0,5, metanol).

Analízis a C₁₀H₄,N₆O₆S. 1.25HCI .C₂H₄O₂ képlet alapján (719,14):

számított: C 53,43%; H 6,45%; N 11,68%;

Cl 6,16%:

talált: C 53,48%: H 6,47%; N 11,62%;

Cl 6,50%.

Az aminosav-analízis talált értékei: tirozin: 1,00; aianin: 1,99; fenil-alanin: 1,01,

6. példa

L-Ti rozil-D-alanii-glicil-L-fenil-alaniI-L-N*-metiI-S-etil-ciszteinil-amid-acetát

A) N’-Tercier-butoxi-karbonil-S-etil-L-cisztein-diciklohexil-ammóniumsó

400 ml dimetil-formamidhoz hozzáadunk 50 g (0,336 mól) L-(S-etilj-císzleint, majd 44,8 ml (3,336 mól) tetrametil-guanidint és 66,8 ml (0,336 mól) diciklohexil-amint. Ezután egy óra alatt az elegyhez csepegtetünk 68 ml (0,50 mól) azido-szénsav-tercier-butil-észtert, majd 48 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Kiszűrjük a kivált diciklohexil-ammónium-azidot, és a szűrletről csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Dietil-éter és víz kétfázisú elegyében feloldjuk a desztillációs maradékot, és a vizes rész pH-ját 8,0-ra állítjuk be. Elválasztjuk a szerves részt és elöntjük. Ezután hideg, hígított sósav-oldattal pH .-re állítjuk be a vizes részt, és hideg etil-acetáttal kirázzuk. Vízzel kimossuk, majd vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk az etil-acetátos oldatot és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Dietil-éterben feloldjuk a maradékot, és hozzáadunk 66,8 ml (0,336 mól) dicikioheúl-amint. Kiszűrjük, és eűl-acetátból átkrístályositjuk a kivált csapadékot, ily módon 32,8 g (23%) menynyiségben nyerjük a kívánt terméket, op.: 156—159 C, [α]ο = — Μ (c = I, metanol): [zj26s = —7,7' (c = 1, metanol).

Analízis a C₂₂H₄,N₂O₄S képlet alapján (430,6): számított: C 61,36%: H9,83%: N 6,51%; talált: C 61,37%; H9,98%: N 6,26%.

B) N⁷-Tercier-butoxi-karbonil-N-metil-S-etiI-L-cisztein-amid ml vízmentes tetrahidro-furánhoz hozzáadunk 18,58 g (74,3 millimól), az A) pontban leírt módon nyert termék semlegesítése és etil-acetátos kirázása útján nyert N'-tercíer-butoxi-karbonil-S-etil-L-ciszteínt. Ezután 42,45 g 22,1 ó-os, ásványi olajjal készült kálium-hidrid-dtszperzió (0,234 mól kálium-hidrid), 0,35 g 18-korora-6-éter és 375 ml tetrahidro-furán elegyéhez 0 C hőmérsékleten fél óra alatt hozzácsepegtetjük a fenti módon nyert oldatot, mechanikus keverés közben. Utána 15—20 perc alatt hozzáadunk az elegyhez

9,25 ml (0,149 mól) metil-jodidot, 20 ml tetrahidro-furánnal hígítva. Másfél órán át 0 C⁼ hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd hozzácsepegtetjük 7,5 ml ecetsav és 7,5 ml tetrahidro-furán elegyét, és utána 5 ml etanol;. Jégre öntjük a reakcióelegyet, majd 2 normál nátriumhidroxid-oldat hozzáadásával körülbelül 9-re állítjuk be az elegy pH-ját. Dietil-éterrel kirázzuk a vizes oldatot, majd szilárd citromsav hozzáadásával 3-ra állítjuk be az oldat pH-ját. Utána megint kirázzuk háromszor 300—300 ml dietil-éterrel, a dietil-éteres oldatokat egyesítve vízzel mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószer:. 200 ml dietil-éterben feloldjuk a desztillációs maradékot, és az oldathoz hozzáadunk 9,56 ml (74,3 millimól) d(+)-a-metil-benziI-amint. Lehűtjük az elegyei, és hozzáadunk 500 ml petrolétert. A termék ekkor nem kristályosodik ki. Csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószereket, majd petroléterben feloldjuk a maradékot. —78 C^J hőmérsékletre hűtjük az oldatot, ekkor kismennyiségű csapadék válik ki, amelyet kiszűrünk (2,74 g). Csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert a szűrletről, és dietil-éterben újra feloldjuk a maradékot. 1 normái citromsav-oldattal kirázzuk a dietil-éteres oldatot, a szerves részt vízzel visszarázzuk, vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Ily módon 6,56 g (33%) szirupszerű anyagot nyerünk, [z]d = — 61,1' (c — I, etanol), NVÍR-spektrumának jel180723 lemző sávjai (deutero-kloroformös oldatban felvéve): 8 = 2,90, N—CH₃: 8 = 1,45, tetcier-biJtil-csoport; 8 = -4.9 4,5, CH.

ml dimetil-formamidban feloldjuk a fenti módon nyert terméket és —15 C° hőmérsékletre hűtjük az oldatot. 3,6 ml (0,027 mól) klór-szénsaV-izobutil-észtert, majd 2,99 ml (0,027 móf) N-metil-morfolint adunk az elegyhez. 10 percig —15 C° hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd í órán keresztül vízmentes ammóniagázt buborékoltatunk bele. További 4 órán át —15 C~ hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd jég és 1 normál nátriüm-hidrogén-karbőnát-Őldat elegyére öntjük. Dietil-éterrel kirázzuk a hideg, vizes oldatot, hideg, 0,75 normál citromsav-oldattal, majd vízzel mossuk a dietil-éteres oldatot, vízmentes mágnézium-szulfáton megszárítjuk, és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Dietil-éter és petroléter elegyéből kristályosítjuk a maradékot, ily módon 1,7 g-nyi (26%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, op.: 56— 59 C°, [a]o = —127,6° (c=0,5, kloroform). NMRspektrumának jellemző sávjai (kloroformos oldatban felvéve): 3--2,80, N—CH₃: 8=1,46, terciér-butil-csoport; 8=4,9-4,5, «-CH.

Analízis a C_hH₂|N₂O₃S képlet alapján (261,36): számított: C 50,55%: - H 8,10%: N 10,72%; talált: C 50,56%; H 7,93%; N 10,51%.

C) N’-Tcrcier-butoxi-karbonil-L-fenil-alanil-N’-metil-S-etil-L-ciszteihil-amid ml jégecet, 1 ml trietil-szilán és 4 ml anizol elegyéhez hozzáadunk 2,5 g (9,5 millimól) N’-tercier-butoxi-karbonil-N’-metil-S-étil-L-ciszteinil-amidot. Fél órán át vízmentes sósavgázt vezetünk az elegybe, majd dietil-éter hozzáadásával kicsapjuk a sósavas sót (1,8 g). 25 ml dimetil-formamidban feloldjuk ezt a sót, 0 C° hőmérsékletre hütjük az oldatot, és 1,31 ml trietil-amin hozzáadásával semlegesítjük. Ezután az elegyhez hozzáadunk 2,65 g (0,01 mól) N’-tercier-butoxi-karbonil-L-fenil-alanint, majd 1,35 g (0,01 mól) 1-hidroxi-benzotriazolt, és végül 2,06 g (0,01 mól) N,N'-diciklohexil-karbodiimidet. 2 órán át 0 C° hőmérsékleten, majd 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Utána ismét 0 C° hőmérsékletre hűtjük, kiszűrjük a kivált csapadékot, és a szűrletről csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Etil-acetátban feloldjuk a maradékot, és egymás után 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, hideg, 0,75 normál citromsav-oldattal és végül megint vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Kloroformban feloldjuk az ily módon nyert szirupszerű anyagot és az oldatot felvisszük egy Grade 62 jelzésű, Grace—Davidson-féle szilikagéllel töltött, 3x45 cm méretű oszlopra. Először kloroformmal, majd 10%-ig növekvő mennyiségű metanolt is tartalmazó kloroformmal mossuk az oszlopot. Vékonyrétegkromatográfiával vizsgáljuk az oszlopról lejövő frakciókat, és a megfelelő frakciókról egyesítve, csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert, ily módon 3,0 g-nyi mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, [a]“——77° (c—0,5, metanol).

Analízis a C₂₍₁H₃₁N₃O₄S képlet alapján (409,5): számított: C 58,65%; H 7,63%; N 10,26%: talált: C 58,87%; H7,41%; N 9,81%.

D > N’-Tercier-butoxi-karbonil-L-tirozii-D-alanil-glicin-diciklohexil-ammóniumsó

150 ml izopropil-alkoholban feloldjuk a 46,80 g N’-tercier-butoxi-karbonil-O-benzil-L-tifOzil-D-alanil-glicin-benzil-észterböl az 1. példa Ej pontjában leírt módon végzett hidrogenolizis útján nyert terméket, és hozzáadunk J6 ml (0,081 mól) diciklohexil-amint. Dietil-éterrel körülbelül másfél liter össztérfogatra egészítjük ki az elegyet. Addig dörzsölgetjük a kivált félszilárd anyagot, amíg megszilárdul, ekkor kiszűrjük és megszárítjuk. Ily módon 46,04 g (98%), 194,5—197 C°-on olvadó anyagot nyerünk. Forralás közben 100 ml metanolban feloldjuk a nyersterméket, hozzáadunk 500 ml izopropil-alkoholt, és nitrogénáramban körülbelül 150 ml össztérfogatra betöményítjük az oldatot. Lehűléskor kikristályosodik a termék. Éjszakán át állni hagyjuk az elegyet és másnap kiszűrjük és megszáritjuk a csapadékot. Ily módon 41,44 g (88%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, op.: 198—200,5 C°, [a]p = • 17,9 (c= 1, metanol).

Analízis a C_3lH₅₀N₄O₇ képlet alapján (590,8): számított: C 63,03%; H 8,53%; N 9,48%; talált: C 62,95%; H8,77%; H 9,20%.

E) N’-Tercier-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-N’-metil-S-etil-L-ciszteinil-amid ml jégecet, 3 ml anizol és 3 ml trietil-szilán elegyéhez hozzáadunk 2,5 g (6,1 millimól), a C) pontban leírt módon nyert terméket. 25 percen át vízmentes sósavgázt vezetünk az elegybe, majd dietil-étert adunk hozzá, lehűtjük és kiszűrjük a kivált csapadékot, ily módon 1,9 g (5,5 millimól) sósavas sót nyerünk. 25 ml dimetil-formamidban feloldjuk ezt a sót, lehűtjük az oldatot, és hozzáadunk 3,2 g (5,5 millimól) N°-tercier-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-alanil-glicil-diciklohexil-ammóniumsót. 10 percig 0 C° hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd hozzáadunk 0,74 g (5,5 millimól) 1-hidroxi-benzotriazolt, és 1,1 g (5,5 millimól) N,N'-diciklohexil-karbodiimidet. 2 órán át 0 C° hőmérsékleten, majd 48 órán át 4 C° hőmérsékleten keverjük az elegyet. Kiszűrjük a kivált csapadékot, és a szűrletről csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Etil-acetátban feloldjuk a maradékot, és egymás után 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, 0,75 normál citromsav-oldattal és végül megint vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszáritjuk és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Ily módon 3,5 g nyersterméket nyerünk. Kloroformban feloldjuk a nyersterméket, és az oldatot felvisszük egy Grade 62 jelzésű, Grace—Davidson-féle szilikagéllel töltött, 3x45 cm méretű oszlopra. Először kloroformmal, majd 10%-ig növekvő mennyiségű metanolt is tartalmazó kloroformmal mossuk az oszlopot. A vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatok alapján azonos anyagot tartalmazó frakciókról egyesítve, csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószereket, ily módon 2,4 g-nyi (62%) mennyiségben nyerjük a kívánt tiszta terméket, [a]” = -30,7” (c = =0,5, metanol).

Analízis a C₃₄H₄₈N₆O₈S képlet alapján (700,86): számított: C 58,27%; H 6,90%; N 11,99%; talált: C 58.14%; H 6,98%; N 11,94%.

-12180723

Az aminosav-analizis talált értékei : tirozin: 1,01; alanin: 1,00; glicin: 1,00; fenil-alanin: 0,98; NH₃: 1,09.

F) L-TiroziJ-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-L-N’-metil-S-etil-císz-tienil-amid-acetát ml jégecet, 2 ml anizol és 2 mltrietil-szilán elegyéhez hozzáadunk 2,2 g (3 millimól), az' E) pontban leírt módon nyert terméket. 25 percig vízmentes sósavgázf vezetünk az elegybé. Utána dietil-étert adunk az el egyhez és behűtjük. Kiszűrjük a kivált csapadékot, és mégszárítjuk (2.0 g). E csapadék egy 1,2 g-nyi részletét annyi puffer-oldatban (1% piridint és 0,05% ecetsavat tartalmazó víz) oldjuk, hogy az oldat össztérfogata 10 ml legyen. DEAE—Sephadex A 25-tel (acetát-fázisban) töltött, 2,5 x 99 cm méretű, előzőleg ugyanezzel a puffer-oldattal egyensúlyba hozott oszlopra visszük fel a fenti módon nyert 10 ml oldatot. 280 nm hullámhossznál mérjük az oszlopról lejövő frakciók fényabszorpcióját, a megfelelő frakciókat egyesítjük, és fagyasztva szárítjuk. 10%-os ecetsav-oldatból újra fagyasztva szárítva, majd víz és acetonitril 75 : 25 arányú elegyéből még egyszer fagyasztva szárítva 0,59 g-nyi mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, [α)π = +9,9° (c=0,5, 1 normál sósav-oldat).

Analízis a C₃|H₄₄N_&O₈S képlet alapján (660,79): számított: C 56,35%; H 6,71%; N 12,72%:

S 4,85%;

talált: C 56,63%; H 6,72%; N 12,63%;

S 4,69%.

Az aminosav-analizis talált értékei: tirozin: 1,00; alanin: 1.01; glicin: 1,00, fenil-alanin: 0,98; NH₃: 1,09.

7. példa

L-Tirozil-D-aIanil-gíiciI-L-feniI-aIaníl-N^a-metil-L-leucil-amid-acetát

A) N’-Tercier-butoxi-karbonil-N’-metií-L-Ieucin-d(+)a-metil-benzil-ammóniumsó ml dietil-éterhez hozzáadunk 12,5 g (0,05 mól) N’-tercíer-butoxi-karbonil-L-leucin-hidrátot. Magnézium-szulfáton megszárítjuk az oldatot, majd csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. 75 ml tetrahidro-furánban feloldjuk a maradékot és 0 C° hőmérsékleten, mechanikus keverés közben, 35 perc alatt 27,9 g, ásványi olajjal készült, 22,1 %-os kálium-hidrid-diszperzió (0,154 mól kálium-hidrid), 0,25 g 18-korona-6-éter és 200 ml tetrahidro-furán elegyéhez csepegtetjük a fenti tetrahidro-furános oldatot. Ezután 15 perc alatt az elegyhez csepegtetjük 6,4 ml metil-jodid 10 ml tetrahidro-furánnal készült oldatát. 3 órán át 0 C° hőmérsékleten tartjuk az elegyet, majd hozzácsepegtetjük 5 ml ecetsav és 5 ml tetrahidrofurán elegyét, és utána 5 ml etanolt. 500 g jégre öntjük az elegyet és 1 normál nátrium-hidroxid-oldat hozzáadásával körülbelül 9-re állítjuk be az elegy pH-ját. Dietil-éterrel kirázzuk a vizes oldatot, majd szilárd citromsav adagolásával pH = 3-ra savanyítjuk a vizes részt. Dietil-éterrel kirázzuk a megsavanyított vizes oldatot, vízzel mossuk, majd vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk az egyesített dietil-éteres oldatokat. Ledesztilláljuk az oldószert csökkentett nyomáson, ily módon 13,2 g (107%) nyerster méket nyerünk. A nyerstermék vékonyrétegkromatográfiás vizsgálata még bizonyos mennyiségű réágálatlan kiindulási anyag jelenlétét mutatja/ Diétil-éterben feloldjuk á nyerstermékét és hozzáadunk 5,25 ml’ (0,05 rriol) 5 terci’ef-b'útíl-amint. PetroJéterrel hígítjuk a'diétiEétéíés oldatot és egy éjszakán át behűtve tartjuk'. Kiszűrjük a kivált csapadékot (5,4'g). 1 normál citromsa^-oldattal, majd vízzel mossuk a szűrletét; vizménfes íóágnézídnl-szulfáton megszáritjuk, és csökkentett nyomáson 'íe10 desztilláljuk az oldószereket. 100 ml dietil-éterbeh'feloldjuk a desztillációs maradékot (6,45 g)és hozzáadunk 3.39 g (0,026 mól) d(-)z-metil-benzií-amint. Egy éjszakán át behűtve tartjuk az elegyét”és utána leszűrjük a kivált csapadékot. Ily módón 9‘Ö9 g ’rhéhrfyí15 ségben (49% össztermeléssel) nyerjük a kívánt termeket, op.: 120—122 C°, [<z]^= —14,1° (c= 1, metanol).

Analízis a C₂₀H₃₄N₂O₄ képlet alapján (366,5): '' számított: C 65,54%; H 9,35%; ’ N 7,64%: ’ talált: C 65,83%; H 9,05%; N 7’,35%.

B) N’-Tercier-butoxi-karbonil-N’^;-metíl-L-léucíl-amid ml dimetil-formamídhoz hozzáadjuk a II,'5 g, az A) pontban leírt módon'nyert (0,047 mól) N’-tercier25 -butoxi-karbonil-N’-metil-L-leucinból citromsavval végzett semlegesítés és ezt követő dietil-éteres kirázás útján nyert bázist. Utána —15 C° hőmérsékletre hűtjük az elegyet, és hozzáadunk 6,7 ml (0,052 mól) klór-szénsav-izobutil-észtert és 5,7 ml (0,052 mól) N-metíl-morfo30 lirit. 10’pércen át — 1'5'C' hőmérsékletén keverjük az elegyet, majd egy órán át vízmentes ámmóniagázt vezetünk az elegybe. Utána további 4 órán át —15'^ 'hőmérsékleten keverjük az elegyét, majd jég és 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-óldat eíegyére ontjuk'.' Öi35 etil-éterrel kirázzuk a hideg elegyet és 0,75 óormai citromsav-olaattal, majd vízzel mossuk a diétíl-etercs oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton mégszaritjuk és csökkentett nyomáson ledesztílláljuk az oldószert. Dietil-éter és petroléter elegyéből kristályosítjuk a_t mara40 dékot, ily módón 5,5 g-nyi (48%) méríriyiségbeó nyerjük a kívánt terméket, őp. : 127—128 &,^: = — 42,2^C (c 1, metanol).

Analízis á Cj_?ll_?1N,Ö₃ képlet alapján (244,3): számított: C 58,99%; 119,90%: \ 11.47%; 45 talált: C 59,17%; H 9,66% ; N 11.2Í%........

C) N^a-Tercier-butoxi-karbonil-L-fenil-alahil-N^a-metil-L-leucil-amid

30 ml jégecet, 3 ml anizol és 3 ml trietií-sziíán eíegyéhez hozzáadunk 5,0 g (0,02 mól), a H/ pontban leírt módon nyert terméket. 25 percen át vízmentes sósavgázt vezetünk az elegybe. Utána dietil-étert adunk hozzá, és behűtjük. Kiszűrjük és megszáritjuk a kivált csa55 padékot (3,6 g). 60 ml dimetil-formamidban feloldjuk ezt a sót, 0 C° hőmérsékletre hűtj ük az oldatot, és hozzáadunk 3,99 ml (0,02 mól) diciklohexil-amint. 10 percig 0 C’ hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd hozzáadunk 5,3 g (0,02 mól) N^a-tercier-butoxi-karbonil-L60 -fenil-alanint, és utána 2,7 g (0,02 mól) 1-hidroxi-benzotriazolt, végül pedig 4,12 g (0,02 mól) N.N'-diciklohexil-karbodiimidet. 2 órán át 0 C hőmérsékleten, majd 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Utána ismét 0 C hőmérsékletre hűtjük az elegyet, ki65 szűrjük a kivált csapadékot, és a szűrletről csökkentett

-13180723 nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Etil-acetátban feloldjuk a maradékot, és egymás után 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, 0,75 normál cjtrQm^avyoldattal és végül megint vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Kloroformban feloldjuk a maradékot, és fejvisszük az oldatot egy Grade 62 jelzésű Grace—Davídson-féJe szilikagéllel töltött, 3x45 cm méretű oszlopra. Először kloroformmal, majd 10%-ig növekvő mennyiségű.metanolt is tartalmazó kloroformmal mossuk az oszlopot. Vékonyrétegkromatográfiával vizsgáljuk az oszlopról lejövő frakciókat, és a megfelelő frakciódról egyesítve, csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószereket. Ily módon 5,7 g-nyi (73%) termeléssel nyerjük g kívánt terméket, [a]”=—49,5° (c-0,5, metanol), az NMR-spektrum (deutero-kloroformos oldatban felvéve) jellemző csúcsai: δ ---1,4, tercier-butil-csöport; 8-7,25, fenilcsoport; 8=0,95—0,75, CH(CH₃)_;; 8=2,7, \ CH,. ' 20

D) N’-Tercier-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-alanil_ -glicil-L-fenil-alanil-N^a-metil-L-leuci!-árnid ml 1 normál jégecetes sósav-oldat és 1 ml anizol 25 elegyéhez hozzáadunk 2,0 g, a C) pontban leirt módón nyert terméket. Fél órán át szobahőmérsékleten tartjuk az elegyet, majd dietil-éteri adunk hozzá és behűtjük. Kiszűrjük és megszárífjuk_;a kivált csapadékot (1,63 g).

30.ml dimetil-formamidban feloldjuk ezt a sóSav'as sót 30 és hozzáadunk 2,95 g (0,005 mól) N’-tercier-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-alanil-glicin-diciklohexil-ammóniumsót. 15 percig 0 C° hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd hozzáadunk 0,675 g (0,005 mól) 1-hidroxi-benzotriazolt és 1,3 g (0,005 mól) N,N'-diciklohexil- 35 -karbodíimidet. Utána 24 órán át 4 C' hőmérsékleten keverjük az elegyet. Kiszűrjük a kivált csapadékot, és a szürletről csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Etil-acetátban feloldjuk a maradékot, és egymás után 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, 40 vízzel, 0,75 normál citromsav-oldattal és végül megint vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Kloroformban feloldjuk a maradékot, és az oldatot felvisszük egy Grade ΠΪ jel- 45 zésű Woelm-féle szilikagéllel töltött, 3 45 cm méretű oszlopra. Először kloroformmal, majd 10%,-ig növekvő mennyiségű metanolt is tartalmazó kloroformmal mossuk az oszlopot. A vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatok alapján a megfelelő .frakciókról egyesítve, csökken- 50 tett nyomáson ledesztilláljuk az oldószereket, ily módón

2,3 g-nyi (67%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, [«)□ . —17,5’ (c 0,6, metanol). '

Analízis a. CjsH,₀N₆O₈ képlet alapján (682,8): számított: C 61,57%;' H 7,38% ; N 12,31%:'.' , 55 talált: C61,3Í%; H 7,47/=. N 12,08%.

Az aminosav-analízis talált értékek tirozin; 1,00; aíánin; í,01: glicin: 0,99; tcnil-alanin: 1,00: NH,: 1,08.

L-Tirozií-D-alanil-gíícil-L-fenil-alanil/N’-metil- 60 ' “-leucil-amid-acetát ml h'á'ngyasav, '0,5 ml anizolés,0,l ml trietil-szilán elegyéhez hozzáadunk 1,8 g (0,003 mól), a Dl pontban leírt módon nyeri terméket. 3 órán át szobahőmérsék- 6 létén keverjük a? elegyet, majd dietil-éterrel hígítjuk, és I órán át állni hagyjuk. Leöntjük a dietil-éteres oldatot a kivált olajos anyagról, és etanolban feloldjuk az olajat. Dietil-éter hozzáadásával csapadék válik ki, ezt ki5 szűrjük és megszárítjuk, ily módon 0,9 g nyersterméket nyerünk, ^nnyi puffer-oldatban (1% piridint és 0,05% hangyasavat.tartalmazó víz) oldjuk fel a nyersterméket, hogy az oldat össztérfogata 5 ml legyen. DEAE— Sephadex A—25-tel (formiát-fázis) töltött, 2,5 x 100 cm 10 méretű oszlopra visszük fel a fenti oldatot, és a fent ’ ?· i i megadott összetételű puffer-oldattal mossuk az oszlopot. A 280 nm hullámhossznál mért UV-fényelhyelés alapján egyesített frakciókat fagyasztva szárítjuk. 10%-os ecetsavból és víz és acetonitril 75 : 25 arányú 15 elégyéből' újra fagyasztva szárítva 0,852 g-nyi mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, [a]²J= + 23,2’ (c = 0.6, Γ nprrpál sósav-oldat).

Az aminosav-árialízis talált értékei:' tirozin: 1,02; alanin: 1,00; glicin: 1,01; fenilalanin; 0,96; NH,: 1,03.

8. példa

L-Tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-aÍanil-S-(p-metoxi-benziI)-L-ciszteini!-amid-hidroklorid ’ , i J

A) N~-Tercier-butoxi-karboniI-S-(p-metoxi-benzil)-L-ciszteinii-amid mi, — T5 C’ hőmérsékletre hűtött dimetil-formamidhoz hozzáadunk 6,82 g (0,02 mól) N'-tercier-butoxi-karbonil-S-(p-metoxi-benzil)-L-ciszteint. Utána 2,88 ml (0,022 mól) klór-szénsav-izobutil-észtert, majd 2,42 ml (0,022 mól) N-metil-morfolint adunk a hűtött elegyhez. 10 perc múlva vízmentes ammóniagázt kezdünk azelegybe vezetni, és azt másfél órán át folytatjuk. További 2 órán át —15 C° hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd jég és 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldat elegyére öntjük. Étil-acetáttal kirázzuk az ily módon nyert vizes szuszpenziót, és egymás után vízzel, 0,75 normál citromsav-oldattal, majd megint vízzel mossuk az ctil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk és csökkentett nyomáson lédésztilláljuk az oldószert. Etanol és víz elegyébőíátkristáfyo.sítjuk a maradékot, ily módón 4,9 g-nyi (72%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, op.: 138— 140 C’, [a]o= — 12,8’ (c 0.5, metanol).

Analízis a C_I6H₂₄N,O₄S képlet alapján (340,4): számított: C 56,45%H7,ll%; N 8,23%: talált: C.56,58%: H6,97%: N 8,07%.

,‘B) N²-Tercier-butoxi-karbo.nil-L-fenil-a1anil-S-(p-metoxi-benzil)-L-ciszteinil-amid ' ^! ; '...·>

4,1 g (0,0)2 mól), az A) pontban leírt módon nyert termék 45 .ml jégecet, 5 ml anizol és 5. ml trietil-szilán elegyével készült oldatába 20 percen áí vízmentes sósavgázt vezetünk. Utána dietil-éteri adunk az elegyhez, kiszűrjük a kivált , csapadékot és megszárítjuk (3,3 g). 50 ml dimetil-formamidban feloldjuk ezt a sósávas sót, hozzáadunk 2,92g (0,012 mól)diciklohexii-amiíit, 3,19g N²-tercier-b'j!oxi-karbonil-L-fenil-alan.int, ' és végül 1,62 g (0,012 mól) 1-hidroxi-benzotriazoh. 10 percig 5 0 C hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd hozzá-14180723 adunk 2,47 g (0,012 mól) N,N'-diciklohexil-karbodiimidet. 2 órán át 0 C° hőmérsékleten, majd 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Utána megint 0 C° hőmérsékletre hűtjük az elegyet, kiszűrjük a kivált csapadékot és a szűrletről csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. n-Butanolban feloldjuk a maradékot, 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd vízzel mossuk a butanolos oldatot, vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, és csökkentett nyomáson ledesztilláijuk az oldószert. Etanolból átkristályosítjuk a maradékot, ily módon 4,95 g-nyi (85%) mennyiségben nyerjük a kívánt termékei, op.: 175—178 CÜ ['/.]□ = = —35,1° (c 0,5. dimetil-formamid).

Analízis a C_2JH₃₃N₃O₅S képlet alapján (487,6): számított: C 61’,58%: H 6.82%: N 8,62%,; talált: C 61,78%; H6.78%; N 8,28%.

C) N’-Tercier-buioxi-karbonil-L-tirozií-D-alanil-glicil-L-fenil-alani!-S-(p-meíoxi-benzil)-L-ciszteinil-amid

1,3 g (0,027 mól), a B) pontban leírt módon nyeri termék 40 mi jégecet, 4 ml anizol és 4 ml irictil-szilán elegyével készült oldatába 20 percen át vízmentes sósavgázt vezetünk. Utána dietil-étert adunk az elegyhez és kiszűrjük, majd megszárítjuk a kivált csapadékot (1,1 g). 10 ml dimetíl-formamidban feloldjuk ezt a sósavas sót, 0 C hőmérsékletre hűtjük az oldatot és hozzáadunk 0,34 ml (0,0026 mól) trietil-amint. 10 perc múlva az elegyhez hozzáadunk 1,06 g (0,0026 mól) N^a-tercier-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-alar.ii-glicint, majd 0,35 g (0,0026 mól) 1-hidroxi-benzotriazoh és végül 0,536 g (0,0026 mól) N,N'-diciklohexil-karbodiimídet. 0 C hőmérsékleten keverjük az elegyet 2 órán át, majd 4 C' hőmérsékleten 72 órán át. Kiszűrjük a kivált csapadékot és a szűrletről ledesztilláijuk az oldószert. Etil-acetátban feloldjuk a maradékot és egymás után I normál nátrium-hidrogén-karbonát-oídattaí, vízzel, 0,75 normál citromsav-oldattai és végül megint vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk az oldatot, majd csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Elil-acetátban feloldjuk a maradékot és Grade 62 jelzésű Grace—Davidson-féle szilikagélen végzett száraz oszlopkromatográfiával tisztítjuk. A vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatok alapján a megfelelő frakcióról egyesítve ledesztilláljuk az oldószert, és kis mennyiségű etil-acetátból átkristályosítjuk a maradékot, ily módon 1,1 g-nyi (52%) mennyiségben nyerjük a kivárt terméket, [»1Ő=—4,3^? (c =-0,5, dimetil-szulfoxid).

Analízis a C₃₉rl,-_f,N_öO₉S képlet alapján (773,9): számított: C 60,14%; H6,47%; H 10,79%; talált; C 59,95%; H6,24%; N 10,53%.

Az aminosav-analizis talált értékei: tirozin: 0,98; alanin: 1,03; glicin: 1,01; fenil-alanin: 0,98; NH₃: 0,99.

D) L-Tirozil-D-aIaníl-glicil-L-fentl-alanil-S-(p-metoxi-benzil)-L-ciszteini!-amid-hidroklorid ml jégecet és 0,5 ml anizol elegyéhez 0,90 g (0,0012 mól), a C> pontban leírt módon nyeri terméket adunk, majd fél órán át vízmentes sósavgázt vezetünk az elegybe. Utána fagyasztva szárítjuk az elegyet, ily módon 0,862 g-nyi (109%) mennyiségben nyerjük a kí vánt terméket, [«)□ = + 2,6° (c =0,5. 1 normál sósavoldat).

Analízis a C₃₄H₄₃N₆O₇SC1 képlet alapján (715,2): számított: C 57,09%: H6,06%; N 11,75%;

Cl 4,96%;

talált: C 56,85%; H6,06%; N 11,48%;

Cl 5,21%.

9. példa

L-Tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-N’-metil-L-metionil-amid-acetát

AJ N'-Tercier-butoxi-karbonil-N’-metil-L-metionin-d( ' )z-metil-benzil-ammóniumsó

600 ml hideg dietil-éterben 86,13 g (0,2 mól) N'-tcrcier-butoxi-karbonil-L-metionin-diciklohexil-ammóniumsót szuszpendálunk. Négyszer 100—100 ml hideg, 1,5 normál citromsav-oldattai, majd vízzel kirázzuk a szuszpenziót, vízmentes magnézium-szulfáton megszáiltjuk a dietil-éteres oldatot, majd csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. 150 ml tetrahidro-furánban feloldjuk a maradékot, és mechanikus keverés közben, fél óra alatt, 0 C hőmérsékleten 0,6 mól kálium-hidrid, 1,0 g 18-korona-6-éter és 1000 ml vízmentes tetrahidro-furán elegyéhez csepegtetjük a fenti letrahidro-furános oldatot. Utána az elegyhez csepegtetünk negyed óra alatt 25 ml (0,4 mól) metil-jodidot. 2 óra múlva hozzácsepegtetjük 20 ml ecetsav és 20 ml tetrahidro-furán elegyét, majd 40 ml etanolt. Fél óra utánkeverés után 2 liter jeges vízre öntjük az elegyet, és 2 normál kálium-hidroxid-oldattal 7-re állítjuk be az elegy pH-ját. Háromszor 400—400 ml dietil-éterrel kirázzuk a vizes elegyet, majd szilárd citromsav adagolásával 3-ra állítjuk be a pH-ját. Háromszor 500 —500 ml dietil-éterrel kirázzuk, a dietil-éteres részeket egyesítve vízzel kirázzuk, vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, és csökkenteti nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Ily módon 44,76 g (84%) szirupszerű anyagot nyerünk. 450 ml etil-acetátban feloldjuk ezt a szirupszerü anyagot, és hozzáadunk 25,78 ml (0,2 mól) d(^; )7.-metil-benzil-amint. Lehűtésre és dörzsölgetésre kikristályosodik a termék. Kiszűrjük, ily módon 51,05 g-nyi (66%) menynyiségben nyerjük a kívánt terméket, op.: 131—134 C°, [z] □ ------ 18,9° (c = 1, etanol).

Analízis a C_I9H₃₂N₂O₄S képlet alapján (384,54): számított: C 59,35%: H8,39%: N 7,29%; taiált; C 59,15%; H8,12%; N 7,21%.

B' N’-Tercier-butoxi-karbonil-N’-metil-L-metionil-amid

160 mi dimetíl-formamidban feloldjuk az A) pontban leírt módon nyert d( =)a-metil-benzil-ammónium-sóból savanyítás' és dietil-éteres kirázás útján nyert

33,3 g (0,127 mól) NMercier-butoxi-karbonil-N^-metil-meíionint, —15 C° hőmérsékletre hűtjük az oldatot és hozzáadunk 18,3 ml (0,14 mól) klór-szénsav-izobutil-észtert, majd 15,4 ml (0,14 mól) N-metil-morfolint. 10 percig — (5 C° hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd egy órán át egy gázelosztócsövön keresztül vízmentes ammóniagázt vezetünk bele. További 4 órán át — 15 C^? hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd 300 ml

-15180723 hideg, 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldatra öntjük. Dietil-éterrel kirázzuk a vizes szuszpenziót, vízzel, hideg, 0,75 nórmál citrömsav-oldattal, majd megint vízzel mossuk a dietil-éteres oldatot, vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Dietil-éter és petroléter elegyéből kristályosítjuk a desztillációs maradékként nyert szirupszerű anyagot, ily módon 16 g-nyi (48%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, op.: 75—77 C°, [α]²’ = —117,3“ (c==0,5, kloroform).

Analízis a C_hH₂₂N₂O₃S képlet alapján (262,37): számított: C 50,36%; H 8,45%; N 10,68%; talált: C 50,63%; H 8,57%; N 10,45%.

C) N^-Tercier-butoxi-karbonil-L-fenil-alanil-N''-metil-L-metionil-amid ml jégecet, 5 ml anizol, 7 ml trietil-sziián és 13,15 g (0,05 mól), a B) pontban leírt módon nyert termék elegyébe 25 percen át vízmentes sósavgázt vezetünk. Dietil-éterbe öntjük az elegyet és kiszűrjük, majd megszárítjuk a kivált csapadékot (9,9 g). 200 ml dimetil-formamidban feloldjuk ezt a sósavas sót, 0 C° hőmérsékletre hűtjük az oldatot, és hozzáadunk 9,9 ml (0,05 mól) diciklohexil-amint. 10 perces keverés után az elegyhez hozzáadunk 6,8 g (0,05 mól) 1-hidroxi-benzotriazolt,

13,3 g (0,05 mól) NMercier-butoxi-karbonil-L-fenil-alanint, majd 10,3 g (0,05 mól) N,N'-diciklohexil-karbodiimidet. 2 órán át 0 C“ hőmérsékleten, majd 48 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Utána ismét 0 C° hőmérsékletre hűtjük, kiszűrjük a kivált csapadékot és a szűrletröl csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Etil-acetátban feloldjuk a maradékként nyert olajat és egymás után 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, 0,75 normál citromsav-oldattal, majd végül megint vízzel mossuk az etíl-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszépítjük és ledesztilláljuk az oldószert..Dietil-éterből kristályosítjuk a maradékot, ily módon 16,4 g-nyi (80%) mennyiségben nyerjük a kívánt termeket, op.: 114—115 C“, [α]θ = —43,4° (c=0,5, metanol).

Analízis a C_2[)H₃|N₃O₄S képlet alapján (409,55): számított: C 58,65%; H 7,63%; N 10,26%; talált: C 58,76%-; H7,42%; N 10,30%.

D) N*-Tercier-butoxi-karbonil-L-tirozi|-D-alanil-gliciI-L-fenil-alanil-N^a-metil-L-metionil-amid ml jégecet, 2 ml anizol, 2 ml trietil-sziián és 3,5 g (8,56 millimól), a C) pontban leírt módon nyert termék elegyébe 25 percen át vízmentes sósavgázt vezetünk. Utána dietil-étert adunk az elegyhez, kiszűrjük a kivált sósavas sót és csökkentett nyomáson megszáritjuk. 5,0 g (8,47 millimól) N’-tercier-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-alanil-glicin-diciklohexil-ammónium-só 40 ml dimetil-formamiddal készült oldatát 0 C° hőmérsékletre hűtjük és hozzáadjuk a fenti módon nyert sósavas sót. Néhány percig 0 C^c hőmérsékleten kevertetjük az elegyet, majd hozzáadunk 1,1 g (8,47 millimól) 1-hidroxi-benzotriazolt és 1,7 g (8,47 millimól) N,N'-diciklohe>il-karbodiimidet. Utána 24 órán át 4 C° hőmérsékleten keverjük az elegyet. Ezután kiszűrjük a kivált csapadékot és a szűrletröl csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Etil-acetátban feloldjuk a maradékot és egymás után 1 normál vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldat16 tál, vízzel, hideg, 0,75 normál citromsav-oldattal és végül megint vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. G—62 jelzésű Grace Davidson-féle szilikagélen kromatografáljuk a maradékot, ily módon 4,1 g-nyi (69%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, [α]^ = — 13,1° (c 0,5, metanöl).

Analízis a C₃₄H_4gN₆O₈S képlet alapján (700,86): számított: C 58,27%; H 6,90%; N 11,99%; talált: C 58,05%; H 6,62%; N 11,73%.

Az aminosav-analízis talált értékei: tirozin: 1,00; aianin: 1,01; glicin: 0,99; fenil-alanin: 1,00, NH₃: 1,01.

E) L-Tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-N’-metil-L-metionil-amid-acetát ml tioanizolhoz hozzáadunk 8,3 g (0,012 mól), a D) pontban leírt módon nyert terméket. 0 C^c hőmérsékletre hűtjük az elegyet és hozzáadunk 50 ml hideg trifluor-ecetsavat. Fél órán át 0 C° hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd az elegy térfogatára számított többszörös mennyiségű dietil-éterrel hígítjuk. Kiszűrjük és megszárítjuk a kivált csapadékot, ily módon 8,0 g nyers trifluor-ecetsavas sót nyerünk. Annyi vizes puffer-oldatban (1% piridint és 0,05% ecetsavat tartalmazó víz) oldjuk ezt a sót, hogy az oldat össztérfogata 60 ml legyen. Acetát-formában levő DEAE—Sephadex A—25-tel töltött, 5 x 138 cm méretű, a fenti puffer-oldattal előzőleg egyensúlyba hozott oszlopra visszük fel az oldatot, és az oszlop mosása során nyert frakciókat a 280 mu. hullámhossznál mért UV-fényelnyelés alapján vizsgáljuk. A kívánt termék 1270 ml mosófolyadék átfolyatása után jelenik meg az oszlopról lejövő frakciókban és mennyisége 1950 ml mosófolyadék átfolyatása után csökken elhanyagolható mértékűre. Fagyasztva szárítjuk a terméket tartalmazó frakciókat. 1 normál ecetsav-oldatban feloldjuk a maradékot és fagyasztva szárítjuk az oldatot. Víz és acetonitril 3 : 1 arányú elegyéből végzett újabb fagyasztva szárítás után 6,64 g-nyi (83%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, [α!θ=4 21,7^Γ (c=1, normál sósav-oldat).

Analízis a C_3]H₄₄N_bO_gS képlet alapján (660,79): számított: C 56,35%; H6,7Í%; N 12,72%;

O 19,37%;

talált: C 56,50%; H 6,46%: N 12,62%;

O 19,25%.

Az aminosav-analízis talált értékei: tirozin: 1,00; alanin: 1,01: glicin: 1,00; fenil-alanin: 0,99; NH₃: 1,03.

10. példa

L-tirozil-D-alanil-glicil-L-fenilalanil-N’-metil-L-metionilamid acetátsó

A) L-tirozil-D-alanil-glicil-L-fenilalanil-N’-metil-L-metionil-benzhidrilamin gyanta trifluorecetsavas só

A peptid-gyanta vegyületet automatizált szilárd fázisú szintézissel állítottuk elő Beckman 990 peptid-szintetizátorban, 5,0 g benzhidrilamin gyantát alkalmazva. A gyantát 4%-os metilénkloridos diizopropiletilaminnal (DIEA) semlegesítettük, majd Boc-(N-Me)-V1et-16180723

-OH és DCC metilénkloridos oldatával kondenzálva állítottuk elő a Boc-(N-Me)-Met-szubsztituált gyantát. Ezután a peptid-gyanta vegyületre egymás után Boc-Phe-OH, Boc-Gly-OH, Boc-Ala-OH és Boc-Tyr-OH vegyületeket kapcsoltunk először az alábbi 1. sz. program szerint, majd ugyanazokat az aminosavakat az alábbi

2. sz. program szerint. A 2. sz. programot minden aminosav esetén egyszer végeztük el, kivéve az L-Phe-OH-t, melyet háromszor ismételtünk. A keletkezett Boc-pentapeptid-gyanta vegyületről az 1. sz. program 1—8. lépései szerint lehasitva a védőcsoportokat 6,13 g cím szerinti vegyületet kaptunk. Az 1. és 2. sz. program mosási műveleteit 1 g gyantára vonatkoztatva 10 ml oldószerrel végeztük.

1. sz. program

1. Háromszori mosás metilénkloriddal.

2. 5 perces kezelés trifluorecetsav-trietilszilán-metiléndiklorid 30 : 5 : 65 térfogatarányú elegyével.

3. A 2-es lépés ismétlése 30 percen át.

4. Kétszeri mosás metiléndikloriddal.

5. Mosás metanol-metiléndiklorid 1 : 1 arányú elegygyel-

6. Kétszeri metanolos mosás.

7. Mosás metanol-etiléndiklorid 1 : 1 arányú elegygyei.

8. Mosás kétszer metiléndikloriddal.

9. Négyszeri, egyenként 2 percig tartó kezelés 4%-os metiléndikloridos DIEA oldattal.

10. A 4—8. lépések ismétlése.

11. Kezelés a kívánt aminosav-származék 2,5 mólnyi mennyiségének metilén-dikloridos oldatával és 1,25 mólnyi DCC metilén-dikloridos oldatával 120 percen át.

12. Négyszeri mosás metilén-dikloriddal.

13. Az 5—7. lépések ismétlése.

14. Háromszori mosás metiléndikloriddal.

2. sz. program

1. Négyszeri, egyenként 2 percig tartó kezelés 4%-os metiléndikloridos DIEA oldattal.

2. Kétszeri mosás metiléndikloriddal.

3. Mosás metanol-metiléndiklorid 1 : 1 arányú elegygyei.

4. Kétszeri mosás metanollal.

5. Mosás metanol-metiléndiklorid 1 : 1 arányú elegygyei.

6. Kétszeri mosás metiléndikloriddal.

7. Háromszori mosás dimetil-formamid-metiléndiklorid 1 : 1 arányú eleggyel.

8. Kezelés a kívánt aminosav-származék 2,5 mólnyi mennyiségének dimetilformamid-metiléndiklorid 1 : 1 arányú elegyével készített oldatával és 1,25 mólnyi DCC metiléndikloridos oldatával 120 percen át.

9. Négyszeri mosás dimetil-formamid-metiléndikíorid 1 : 1 arányú elegyével.

10. A 4—6. lépések ismétlése.

B) L-tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-N’-metil-L-metionilamid hidrogénfluorid só

Az A) pontban előállított peptid-gyanta vegyületet folyékony vízmentes hidrogénfluoridban vákuum alkalmazása mellett 60 percen át 0 C° hőmérsékleten anizollal reagáltatjuk. A reakcióelegybőí az illékony komponenseket vákuumban eltávolítjuk és a peptid-gyanta vegyületet éterrel trituráíjuk, majd szűréssel eltávolítjuk a maradék hidrogénfluoridot és anizolt. A peptidet a gyantából !0%-os ecetsavval történő triturálással extraháljuk, szűrjük, 3 x 50 ml 10%-os ecetsavval mossuk és 1 iofilizálás után 940 mg nyers cím szerinti terméket kapunk.

C) A végtermék kromatográfiás tisztítása.

A B) pontban kapott 470 mg peptid-diasztereomer elegyet 3,8 x 58,5 cm méretű fordított fázisú (C₁₈) szilikagéllel töltött oszlopon alacsony nyomáson (7,17 kg/cm²) 25% acetonitriít tartalmazó, 0,1 n ammóniumacetát oldattal kromatografáljuk. 1 perces frakciókat szedünk és a 98—150 frakciókat egyesítjük, majd liofilizáíás után 360 mg terméket kapunk.

A B) pontban kapott nyers elegy maradékát a fentiek szerint kromatografálva további 320 mg terméket kapunk.

A fenti kapott liofilizált termékeket egyesítjük és 2,5 x 10,0 cm méretű Sephades G—10 oszlopon kromatografáljuk 0,2 n ecetsav alkalmazásával a maradék ammóniumacetát eltávolítására. A terméket tartalmazó frakciókat liofiíizálva 636,7 mg cím szerinti terméket kapunk.

[aj£>^s= + 19,7^C (c=0,5, 1 n sósav). [ag|₅a+71,70° (c=0,5, 1 n sósav). Analízis a C_3lH₄₃N₆O_sS képlet alapján: számított: C 56,35%; H 6,71%; N 12,72%;

S 4,85%.

mért: C 56,60%; H 6,43%; N 12,97%;

S 4,92%.

Az aminosav-analízis talált értékei: alanin 0,99, tirozin 1,01, gíicin 1,00, fenilalanin 1,01, NH₃ 1,10, peptid 9,31%; illetve alanin 1,00, tirozin 1,01, glicin 1,00, fenilalanin 0,97, NH₃ 1,02, peptid 90,5%.

Az I általános képletű vegyületeket fájdalomcsillapítókként hasznosíthatjuk. Egéren a „hot plate”-(forrólap-)módszerrel mutattuk ki az I általános képletű vegyíilctck fájdalomcsillapító hatását. E módszer szerint egy függőlegesen álló plexihenger aljára tesszük a kísérleti egeret, amely hengert alul egy 52 C° hőmérsékleten tartott forró lap zár le. Az egérnek a vizsgálandó anyag valamely alkalmas vivőanyaggal készült oldatából vagy szuszpenziójából előre meghatározott mennyiséget adunk be szubkután (bőr alá adott) injekció formájában. A vizsgálandó anyag beadása után meghatározott ideig várunk, majd az egeret rátesszük a forró lapra és feljegyezzük, hogy a vizsgált anyag beadásának hatására a kontrolihoz képest mennyivel később következik be az alábbi két, egymástól független jelenség: először mérjük, hogy hány másodperc múlva nyalja meg az egér a hátsó talpát, másodszor pedig azt mérjük, hány másodperc múlva próbál az egér kiugrani a hengerből. Fájdalomcsillapító szerek hatására c két jelenség lényegesen késleltetve következik be, a csak vivőanyagot tartalmazó injekcióval kezelt kontrollcsoport állatainak hasonló értékeihez képest. E késleltetésnek olyan dózisszinteknél kell bekövetkeznie, amelyek hatására az állatok mozgása még nem lesz rendezetlen, ill. mozgásképességük nem csökken. A következő táblázatban a találmány szerinti vegyületeknek a fenti módszerrel mért hatását mutatjuk be, egyrészt a kontrollcsoporttal, másrészt természetes enkefalinnal, ill. az amidjává alakított természetes enkefalinnal összehasonlítva. Az I. táblázat tartalmazza a hátsó talp megnyalás késleltetésére vonat: kozó adatokat, a II. táblázat a menekülő ugrás késlel17

-17180723 tetésének adatait, a III. táblázatban pedig megadjuk, hogy áz egyes csoportokban levő állatok hány százalékán jelentkezett fájdalomcsillapító hatás. Pozitívnak tekintettük a fájdalomcsillapító hatást, ha a hátsó talp megnyalás vagy a menekülő ugrás késleltetése egyenlő vagy nagyobb, mint a kontrollcsoportnál megfigyelt késleltetés, plusz az átlagos rendszeres hiba kétszerese. Az I. és II. táblázat valamennyi értéke mellett megadjuk a mérés átlagértékét, plusz vagy mínusz á rendszeres hibát. A III. táblázatban szereplő adatokat legalább 9 és 5 legfeljebb 40 egeret tartalmazó csoportokon végzett mérések alapján adjuk meg.

f. táblázat

Fájdalomcsillapító hatás

A hátsó talp megnyalás késleltetése, másodperc

Vegyíiletc	A vizsgált anyag beadása és a vizsgálat megkezdése között eltelt idő, perc	Kontroll	Dózis, mg/kgtf
1	3
Met5-enkefalinfc	5	29,5 ±2,6
	10	33,9 ±4,5	—	—
Met5-enkefalin-amid	5	33,1 ±1,1	—	—
	15	33,3 ±0,8	—	—
A	5	33,1 ±1,1	—	43,2 ±3,2'
	15	33,3 ±0,8	30,3 ± 1,5	38,6 ±2,2'
	30	32,9 ±1,8	—	34,5 ±1,6
B	5	33,1 ±í,t	—	—
	15	33,3 ±0,8	—	—
	30	32,9 ± 1,8	—	—
C	15	33,3 ±0,8	33,3 ±2,7	32,8 ± 1,0
D	5	33,1 ± 1,1	—	· —
	15	33,3 ±0,8	34,2 ± 2,2	39,9 ±2,0'
	3G	32,9 ±1,8	• -	... _ '
E	5	33,1 ± Í,1	—	—
	1.5	33,3 ±0,8	31,0 ±3,5	31,9 ±2,5
	30	32,9 ±1,8	' —	—
F	15	32,8 ±2,9	—	43,7 ±3,2'
	Í5.	35,7 ± 3,9	—	—
G	15	30,0 ± 2,4	34,0 ± 2,4^	—
	15	27,2 ± 2.2*	—	34,7 ±2,1'

VegyüleK	ld<5. 1	Dózis, mg/kga
perc |	10	30	| 100	200

Met’-enkefalin'1	5 10	—	—	33,3 ±2,2	30,1 ±2,6
Met5-enkefalin-amid	5	—	--	33,6 ±2,2	43, í ±2,9'
	15	35,0 ±1,8	34,5 ±2,2	28,6 ± 2,2	39,1 ±3,7'
A	5	48,9 ±6,9'	56,8 ±9,7'	— · ·	—
	15	40,6 ±1,7'	67,7 ±9,3'	—	—
	30	43,8 ±2,3'	48,7 ±3,5'	—	—
B	5	37,4+2,52	35,8 ±3,5	46,3 ±3,0'	—
	15	38,8 ±2,3'	35,1 +2,1	—	—
	30	—	29,3 ±1,2	—	—
C	15	38,4 + 1,9'	40,6 ±2,1'	—	—
D	5	—	37,6 ±2,7	—	—
	15	35,4 ±2,8	37.4 ±2,82	—	—
	30	—	30,7 ±2.8	—	—
E	5	-	35,3 ±2,9	—	—
	15	36,8 +2,5	44,5 ±3,1'	—	—
	30	—	30,2 ±2,4	—	—
F	15		—	—	—
	15	50,2 ±5,3'	—	—	—
G	15	—	—	—	—
	15	34,4 + 1,4'	—	. —

-18180723

II. táblázat

Fájdalomcsillapító hatás

A menekülő ugrás késleltetése, másodperc

Vegyűletf	A vizsgált anyag beadása és a vizsgálat megkezdése között eltelt idő, perc	Kontroll	Dózis, mg/kge
1	3
Met5-enkefalinft	5	79,5 ±9,6	—	—
	10	64,2 ± 10,4	—
Met5-enkefalin-amid	5	70,8 ±4.7	_	_
	15	73,0 ±2,4	—.	s, J' - :
A	5	70,8 ± 4,7	—	140,4 ±14,5'
	15	73,0 ±2,4	96,7 ±8,0'	131,3 ±7,9'
	30	92,4 ±7,0	—	83,6 ±6,5
B	5	70,8 ±4,7	—	—
	15	73,0 ±2,4	—	_
	30	92,4 ± 7,0	—	_
C	15	73,0 ±2,4	89,2 ± 20,0	113,7 ±7,2'
D	5	70,8 ±4.7	—	—.
	15	73,0 ±2,4	80,7 ± 6,8	102,8 ±9,5'
	30	92,4 ±7,0		—
E	5	70,8 ±4,7	—	—
	15	73,0 ±2,4	79,9 ±12,1	103,1 ± 12,4'
	30	92,4 ± 7.0	—	_
F	15	75,6 ±9,9	182,4 ±21,3'	_
	15	57,3 ±6,0	—	_
G	15	72,3 ±8,5	130,5 ±12,51?. ..
	15	53,8 ±6,7	—-	128,2 ±20,4'

< r

VegyüleK	Idő, perc	Dózis, mg/kgi»;. ’
10	30	100	200
Met5-enkefaliné	5	_		82,2 ±5,2	__ Ϊ
	10	—	—	_	92,8 ±8,92
Met5-enkefal in-amid	5	—	—	95,6 ± 10,6'	96,8 ±7,7'
	15	77,3 ±6,8	82,8 ±9,1	103,6 ± 10,4'	105,8 ± 10,4'
A	5	165,3 ±20,2'	194,8 ±22,1'	__	_
	15	157,6 ±7,0'	214,3 ±7,5'	—	____.
	30	109,4 ±7,1	143,0 ±8,8'	_____________
B	5	118,5 ±11,2'	125,0 ± 14,0'	163,9 ±12,0'	_
	15	92,4 ±8,2'	113,3 ±6,1'	___________________'	_
	30	—	83,8 ±11,6	_	_
C	15	121,2 ± (3,11	162,3 ±19,1'	_	__
D	5	—	80,2 ±14,3	_	_
	15	107,0 ± 12,3'	115,6 ± 13,9'	------------------'	_
	30	—	70,8 ±4,42	_
E	5	—	97,7 ± 14,32	—	__,
	15	116,4 ±9,6'	158,1 ± 13,7'	—	_
	30	—	63,2 ±8,92	—	_
F	15	—	—	_
	15	215,8 ± 12,8'	—.	_
G	15	—	_
	15	159,9 ±22,7'	—	—	—

-linoii9m-J-lini>li;-linát-J-liaily-Iíni>ío-G-liv>-i:T-J κίΧ áblórj f.) b'inHoibirl-bimo!

.nádiábrám ¢0,0 > ^CI

-imu‘4 firma;·:·! ii> mim ,gszm. /4+1 + +--% κ bniM

-19180723

TIT. táblázat

Fájdalomcsillapító hatás

A fájdalomcsillapító hatást mérő teszten válaszreakciót mutató állatok százalékos aránya

	A vizsgák	Dózis, mg/kgrt.<í
	anyag beadása		I		3	in
Vegyület*·	és a vizsgálat
megkezdése
	perc	HTM	MU	HTM	MU	HTM	MU
Met5-enkefalin	5	_	_	_	_	_	_
	10	—	—	—	—	—	—
Met5-enkefalin-amid	5	—	—	—	—	—	— .
	15	—	—	—	—	14	0
A	5	—	—	40	60	50	80
	15	5	21	28	55	40	82
	30	—	—	10	10	53	50
B	5	—	—	-	—	25	50
	15	—	—	—	—	35	21
	30	—	—	—-	—	—	—
C	15	11	11	0	50	25	38
D	5	—	—	—	—	—	—
	15	11	0	31	25	22	22
	30	—	—	—	—	—	—
E	5	—	—	—	—	—	—
	15	11	11	6	31	31	56
	30	—	—	—	—	—	—
F	—	—	—	30	70	40	100
G	15	10	30®	44	60	10	70

Vegyület**	A vizsgált anyag beadása és a vizsgálat megkezdése között eltelt idő, perc	Dózis, mg/kgtf.d
30	100	200
HTM	MU	HTM	MU	HTM	MU
MeÉ-enkefalin0	5			0	0
	10	—-	—	—	—	11	22
Met5-enkefalin-amid	5	—	—	12	24	38	1.9
	15	28	13	13	24	31	25
A	5	60	80	—	—	—	—
	15	85	100	—	—	—	—
	30	57	67	—	—	—	—
B	5	19	50	50	81	—	—
	15	20	40	—	—	—	—
	30	0	20	—	—	—	—
C	15	33	89	—	—	—	—
D	5	13	22	—	—	—	—
	15	25	33	—	—	—	—
	30	11	0	—	—	—	—
E	5	22	33	—	—	—	—
	15	44	78	—	—	—	—
	30	11	0	-	—	—	—
F	—	—	—	—	—	—	—
G	15	—	—	—	—	—	—

Megjegyzés:

^a Mindazon esetekben, ahol külön nem adtuk meg, 60 fiziológiás sóoldattal kezeltük a kontrollcsoportot. Az „l”-es és „2”-es felső index azt jelzi, hogy az eredmény szignifikáns, mégpedig P <0,01, ill. P <0,05 mértékben.

^b Mind a vizsgálandó anyag, mint a kontroll gumiarábikummal készült, a vizsgálandó anyag szuszpen zió formájában volt jelen.

^c Az egyes betűk a következő vegyületeket jelentik:

A) L-TiroziI-D-alanil-glicil-L-feniI-alanil-N^a-metil-L-metionil-amid-hidroklorid (1. példa);

B) L-Tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-L-metionil65 -amid-hidroklorid (3. példa);

-20180723

C) L-Tirozil-D-akinil-L-alanil-L-fenil-alanil-N’-metil-L-metionil-amid-1,25-hidroklorid-monoacetát (5. példa);

D) L-Tirozil-D-leucil-glicil-L-feHiI-aIanil-N^a-metiI-metionil-amid-szeszkvihidroklorid-monoacetát (2. példa);

E) L-Tirozil-D-alanil-glicil-N’-metil-L-fenil-alanil-N’-metil-L-metionil-amid-hidroklorid-trihidrát (4. példa);

F) L-Tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-N’-metil-L-leucil-amid-acetát (7. példa);

G) L-TiroziI-D-alanil-glicil-L-feniI-aIaniI-N^a-metiI-S-étil-ciszteihil-amid-acetát (6. példa);

^d HTM: hátsó talp megnyalás;

M U: menekülő ugrás.

' 0,3 mg/kg-os dózisban vizsgálva a hátsó talp megnyalás késleltetése 33,9 + 2,3 másodperc, a menekülő ugrás késleltetése 129,0 ±11,5 másodperc volt és a fájdalomcsillapító hatást mutató állatok százalékos aránya a hátsó talp megnyalás késleltetését mérve 10% és a menekülő ugrás késleltetését mérve 60% volt.

Claims (10)

Szabadalmi igénypontok

1. Eljárás az (I) általános képletü, ahol

R₄ metil- vagy legfeljebb 4 szénatomos szekunder alkilcsoport ;

R₅. ^R6 és R₇ egymástól függetlenül hidrogénatom vagy metilcsoport; és

W izopropil-, metiltio-metil-, etiltio- vagy p-metoxi-benziltiocsoport, azzal a megkötéssel, hogy ha W izopropilcsopori, akkor R₇ metilcsoport, pentapeptid-származékok és ezek gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sói előállítására, azzal jellemezve, hogy a peptidkémiában ismert módon védett és adott esetben szilárd gyantához kapcsolt (I) általános képletü vegyületeket vízmentes savas közeggel kezelünk, és kívánt esetben egy keletkezett peptidet gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sójává alakítunk. (Elsőbbsége: 1977. IX. 26.)

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja az (1) általános képletü, ahol

R₄ metil- vagy legfeljebb 4 szénatomos szekunder alkilcsoport ;

R₅, R₆ és R₇ egymástól függetlenül hidrogénatom vagy metilcsoport; és

W izopropil-, metiltio-metil-, etiltio- vagy p-metoxi-benziltiocsoport, azzal a megkötéssel, hogy ha W izopropilesöpört, akkor R₇ metilcsoport, pentapeptid-származékok és ezek gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sói előállítására, azzal jellemezve, hogy a peptidkémiában ismert módon védett (I) általános képletü vegyületeket vízmentes savas közeggel kezelünk és kívánt esetben egy keletkezett peptidet gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sójává alakítunk. (Elsőbbsége: 1977. VI. 20.)

3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja olyan (1) általános képletü, ahol

R₄ metil- vagy legfeljebb 4 szénatomos szekunder alkilcsoport ;

^R5, ^Rb és R₇ egymástól függetlenül hidrogénatom vagy metilcsoport; és

W metiltio-metilcsoport, pentapeptid-származékok és ezek gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sói előállítására, azzal jellemezve, hogy a peptidkémiában ismert módon védett (T) általános képletü vegyületeket vízmentes savas közeggel kezelünk és kívánt esetben egy keletkezett peptidet gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sójává alakítunk. (Elsőbbsége: 1976. IX. 27.)

4. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy vízmentes savas közegként trifiuor-ecetsavat használunk. (Elsőbbsége: 1976. IX. 27·)

5. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az említett, vízmentes savas közegként jégecet és vízmentes sósavgáz elegyét használjuk. (Elsőbbsége: 1976. IX. 27.)

6. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy vízmentes savas közegként 98%-os hangyasavat használunk. (Elsőbbsége: 1976. IX. 27.)

7. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a védett (I) általános képletü vegyületként valamely, annak szűkebb körét képező (II) általános képletü, ahol

Z' —CO—NH₂ csoport vagy egy szilárd gyanta maradéka, benziloxi-karbonil-, tercier-butoxi-karbonil-, tercier-amiloxi-karbonil-, p-metoxi-benziloxi-karbonil-, adamanliloxi-karbonil- vagy izoborniloxi-karbonil-csoport, és

R₄, R₃, R_t, R₇ és W az 1. igénypontban megadott, pentapeptid-származékot használunk. (Eésőbbsége: 1977. IX. 26.)

8. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja az 1 -tirozil-D-alanil-glicil-L-feniI-alanil-N^a-metiI-L-metionil-amid-hidroklorid előállítására, azzal jellemezve, hogy jégecettel és vízmentes sósav-gázzal kezeljük az N’-tercier-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-N’-metil-L-metionil-amidot. (Elsőbbsége: 1976. IX. 27.)

9. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja az L-tirozil-D-leucil-glicil-L-fenil-alanil-N’-metil-L-metionil-amid-szeszkvihidroklorid-monoacetát előállítására, azzal jellemezve, hogy az N'Mercier-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-leucil-glicil-L-fenil-alanil-N’-metil-L-metionil-amidot jégecettel és vízmentes sósav-gázzal kezeljük, majd az ily módon nyert termék vizes-ecetsavas oldatát fagyasztva szárítjuk. (Elsőbbsége: 1976. IX. 27.)

10. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja az L-tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-L-metionil-amid-hidroklorid előállítására, azzal jellemezve, hogy az N’-tercier-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-L-metionil-amidot jégecettel és vízmentes sósav-gázzal kezeljük. (Elsőbbsége: 1976. IX. 27.)

11. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja az L-tirozil-D-alanil-glicil-N’-metil-L-fenil-alanil-N’-metil-L-metionil-amid-hidroklorid-trihidrát előállítására, azzal jellemezve, hogy az N’-tercier-butoxi-karbonil-L-tiroziI-D-alanil-glici!-N’-metil-L-feniI-alaniI-N~-metil-L-metionil-amidot jégecettel és vízmentes sósav-gázzal kezeljük. (Elsőbbsége: 1976. IX. 27.)

12. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja az L-tirozil-D-alanil-L-alanil-L-fenil-alanil-N^-metil-L-metioniI-amid-l,25-hidroklorid-monoacetát előállítására, azzal jellemezve, hogy az N’-tercier-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-alanil-L-alanil-L-feniJ-alani]-N'^,-me-

-21180723 til-L-metionil-amidot jégecettel és vízmentes sósav-gázzal kezeljük. (Elsőbbsége: 1976. TX. 27.)

13. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja az L-tírozil-D-alanil-glicil-L-feni(-alanil-N^:'-metil-S-etil-L-ciszteinil-amid-acetát előállítására, azzal jellemezve, hogy az N^a-tercier-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-N’-metil-S-etil-L-ciszteinil-amidot jégecettel és vízmentes sósav-gázzal kezeljük, majd az ily módon nyert termék ecetsavas oldatát fagyasztva szárítjuk. (Elsőbbsége: 1977. VI. 20.)

14. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja az L-tirozil-D-alanil-gIicil-L-fenil-alanil-N^a-metil-leucil-amid-acetát előállítására, azzal jellemezve, hogy az bP-tercier-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-N^a-metil-leucil-amidot hangyasav val kezeljük, majd az ily módon nyert termék ecetsavas oldatát fagyasztva szárítjuk. (Elsőbbsége: 1977. VI. 20.)

15. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja az L-tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-S-(p5 -meto.xi-benzil)-L-ciszteinil-amid-hidroklorid előállítására, azzal jellemezve, hogy az N’-tercier-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-alaniI-glicil-L-fenil-aIanil-S-(p-metoxi-benzil)-L-ciszteinil-amidot jégecettel és vízmentes sósav-gázzal kezeljük. (Elsőbbsége: 1977. VT. 20.)

10 16. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja az L-tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-N’-metil-L-metionil-amid-acetát előállítására, azzal jellemezve, hogy az N’-tercier-butoxi-katbonil-L-tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-N’-metil-L-metionil-amidot tri15 fluor-ecetsavval kezeljük, majd az ily módon nyert termék ecetsavas oldatát fagyasztva szárítjuk. (Elsőbbsége: 1976. IX. 27.) (3 rajz)

A kiadásért fele!: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója

841272.66-42 Alföldi Nyomda, Debrecen — Felelős vezető: 8e:ikő fstván igazgató (I)

Nemzetközi osztályozás: C 07 C 103/52