FI69473C - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara deivat av erytromycin - Google Patents

Description

1 69473

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten erytromysiini-johdannaisten valmistamiseksi

Keksinnön kohteena on menetelmä terapeuttisesti 5 käyttökelpoisten erytromysiinijohdannaisten valmistamiseksi, joiden kaava on (I) D_A_n CH„ K A V ί 3 N (CH t ) „ N ' | 3 2 10 Η3°\ί^|χ'0Η Ra0'''l2^1 H<> . J 1 HO _ (I) CH„ Xv XH,

3 ΗΧ'Ί / V

15 5 2 0 I

il '0H

0 H3C^ OCH3 jossa A on suoraketjuinen tai haarautunut, 1-6 hiili-20 atomia sisältävä alkyleeniryhmä, ja R on joko enintään 6 hiiliatomia sisältävä alkoksi- ryhmä, tai enintään 6 hiiliatomia sisältävä alkyyli-tioryhmä, jossa rikkiatomi voi olla hapetettu sulfoksi-25 diksi tai sulfoniksi, jolloin kumpikin mainituista ryhmistä voi olla substituoi-tu yhdellä tai useammalla seuraavista ryhmistä: hydroksi, 1-6 hiiliatomia sisältävä alkoksi, 1-6 hiiliatomia sisältävä alkyylitio, halogeeni, amino, metyyliamino, dimetyy-30 liamino, N-morfolino, tai fenyylioksi- tai bentsyylioksiryhmä, joka voi olla substituoitu halogeenilla, tai fenyylitioryhmä, joka voi olla substituoitu halogeenilla ja/tai jossa rikkiatomi voi olla hapetettu 35 sulfoksidiksi tai sulfoniksi, ___ - i;, ____ 4 .

2 69473 tai R on ryhmä -R1 -N X , ^R2 5 jossa R^ ja R2 , jotka voivat olla samoja tai erilaisia, tarkoittavat vetyatomia tai 1-6 hiiliatomia sisältävää alkyyliryhmää tai ja R^ muodostavat yhdessä sen typpi-atomin kanssa, johon ne ovat sitoutuneet, 1-piperidinyyli-, ^-metyylipiperatsin-l-yyli-, N-morfolino- tai 1-pyrroli-10 dinyyliryhmän tai R on syanoryhmä, tai R on halogeeniatomi, tai R on 1,2-epoksietyyliryhmä tai ryhmä, joka on muodostunut tämän ryhmän avauksesta nukleofiilisen rea-15 genssin avulla, tai R on suojattu formyyliryhmä, esteröity karboksyyliryhmä tai alkanoyyliryhmä,

Ra on vetyatomi tai alkanoyyliryhmä, ja aaltoviiva merkitsee sitä, että yhdisteet voivat 20 esiintyä sekä syn- että antimuotona tai syn- ja antimuo-don seoksena, sekä niiden happoadditiosuolojen valmistamiseksi epäorgaanisten ja orgaanisten happojen kanssa.

A:n merkityksistä voidaan mainita lineaariset al-kuleenit, kuten esim. metyleeni, etyleeni , trimetyleeni, 25 tetrametyleeni, pentametyleeni ja heksametyleeni, ja haa rautuneet alkyleeniradikaalit, kuten: 3 69473 CH~ CH0 I 3 I 3 ~ CH - ; - C - ; - CH„ - CH-; -CH0-C - ;

I I 2 I 2 I

CH3 ch3 ch3 ch3 5 CH0 I 3 - CH - CH - ; - CH(CH0)0- ; - C-(CH0)„- ; II I 2 2 I 22 CH3 ch3 ch3 ch3 10 fs - C - (CH0), - ; - CH - CH - (CH0)0- I 23 |l 22 ch3 ch3 ch3 15 R:n merkityksistä voidaan mainita seuraavat: a) R = 1-6 hiiliatomia sisältävä alkoksi: metoksi, etoksi, propyylioksi, isopropyylioksi, n-butyylioksi, isobutyylioksi, tert-butyylioksi, n-pentyylioksi, isopentyylioksi, sek-pentyylioksi, 20 tert-pentyylioksi, neopentyylioksi, n-heksyylioksi, sek-heksyylioksi, tert-heksyylioksi.

b) R = alkyylitio: voidaan luetella samat mer kitykset korvaamalla happiatomi rikkiatomilla, esimerkiksi: metyylitio, etyylitio... Edelleen rikkiatomi voi olla 25 hepettunur, esim.: metyylisulfinyyli, metyylisulfo- nyyli...

c) R = aryylioksi: fenyylioksi.

d) Vastaavia hapetettuja aryylitioryhmiä voidaan tietysti käyttää: fenyylitio, fenyylisulfonyyli, 30 fenyylisulfinyyli.

e) R = aralkyylioksi bentsyylioksi.

Ryhmät, jotka voivat esiintyä R:nä ja jotka on lueteltu edellä olevissa kohdissa a-e, voivat olla 35 substituoituja etenkin yhdellä tai useammalla seuraa- vista radikaaleista tai atomeista: , 69473 hydroksi, metyylioksi, etyylioksi, propyylioksi, isopropyylioksi, butyylioksi, s-butyylioksi, t-butyyli-oksi, metyylitio, etyylitio, propyylitio, isopropyylitio, butyylitio, s-butyylitio, t-butyylitio, fluori, kloori, 5 bromi, jodi, amino, metyyliamino, dimetyyliamino, di-etyyliamino.

f) Radikaali /R1

-N

10 """R2 joka voi esiintyä R:nä, voi olla amino- metyyliamino- di-metyyliamino-, hydroksietyyliamino-, dihydroksietyyliamino-, 1-piperidinyyli-, N-morfolino tai 1-pyrrolidinyyli-radikaali.

15 g) R voi olla fluori-, bromi-, kloori- tai jodi- atomi .

h) R voi olla myös 1,2-epoksietyyliradikaali -HC-CH„ , N' 20 tai radikaali, joka on syntynyt nukleofiilisen aineen avulla tapahtuneen epoksirenkaan avautumisen tuloksena.

Esimerkkeinä tällaisista radikaaleista voidaan mainita radikaalit, jotka on saatu amiinien, sulfidien, fenaattien alkoholaattien tai jonkin halogeenivetyhapon, 25 kuten esim. fluorivetyhapon vaikutuksesta. Siten saadaan esim. seuraavanlaisia rakenteita: /CH3

-CH-CH0N

30 OH ^H3

-CH - CH2 - S - Et OH

35 5 69473

Suojatuista formyyli-radikaaleista voidaan mainita erityisesti asetaali-tyyppiset radikaalit. Etusijalla ovat seuraavat radikaalit: 1,3-dioksolan- 2-yyli, dimetoksimetyyli, dietoksimetyyli.

5 Esteröidyistä karboksyyli-radikaaleista, jotka voivat olla R, voidaan mainita enintään 7 hiiliatomia sisältävä alkoksikarbonyyli-radikaalit, kuten esim. metoksikarbonyyli, etoksikarbonyyli, propyyiioksi-karbonyyli, isopropyylioksikarbonyyli , butyylioksi-10 karbonyyli.

Esimerkkeinä kaavan I mukaisten johdannaisten epäorgaanisten tai orgaanisten happojen kanssa muodostamista additiosuoloista voidaan mainita suolat, joiden muodostajina ovat etikka-, propioni-, trifluorietikka-, 15 maleiini-, viini-, metaanisulfoni-, bentseenisulfoni-, p-tolueenisulfoni-, kloorivety-, bromivety-, jodivety-, rikki-, fosfori- ja erityisesti steariini-, etyylimeri-pihka- ja lauryylirikkihappo.

Tämä keksintö käsittää kaavan I mukaisten yhdis-20 teiden valmistusmenetelmän, joissa R on alkyylioksi- tai alkyylitioryhmä, aryylioksi-, aralkyylioksi, joka mahdollisesti on substituoitu yhdellä tai useammalla seuraa-vista ryhmistä: 1-6 hiiliatomia sisältävä alkyylioksi- tai 25 alkyylitioryhmä, tai R on fenyylioksi- tai bentsyylioksiryhmä tai R on -Ri

-N

30 R2 jossa Rn ja R0 tarkoittavat samaa kuin edellä.

_L C.

Tämä keksintö käsittää erityisesti kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistusmenetelmän, joissa R on joko alkyylioksiradikaali, joka mahdollisesti on 35 substituoitu alkyylioksi- tai dialkyyliaminoradikaalilla; 6 69473 tai mahdollisesti halogeeniatomilla substituoi-tu fenyylioksi- tai bentsyylioksiradikaali; tai fenyylitio- tai alkyylitioradikaali, joka mahdollisesti on substituoitu halogeeniatomilla; 5 tai dialkyyliaminoradikaali; tai halogeeniatomi.

Tämän keksinnön erityisenä kohteena on menetelmä yhdisteiden valmistamiseksi, joiden kaava on (I'): 10 R’-(CH9) 0 CHo 2 : N(CH3)2 is H3C vT^k011 HO I ^0/^vCH3 Λ (I,) ^ H Cy'\ " ^ .✓*“) cl,

*q J Ό------/ J

I 3 k o >< '0H

H0C^ '0CH„ o j 25 jossa n on 1-6 ja R tarkoittaa joko korkeintaan 6 hiiliatomia sisältävää alkyylioksi- tai alkyylioksialkyylioksiradikaalia, - tai fenyylioksi- tai bentsyylioksiradikaalia, 30 joka mahdollisesti on substituoitu klooriatomilla, tai dialkyyliaminoradikaalia.

R' on vetyatomi tai 2-6 hiiliatomia sisältävä ci alkanoyyliradikaali, 7 69473 sekä menetelmä näiden yhdisteiden epäorgaanisten tai orgaanisten happojen kanssa muodostettujen addi-tiosuolojen valmistamiseksi, jolloin kaavan (I*) mukaiset yhdisteet vastaavat yhidsteitä, joiden kaava on I, 5 jossa A on tyydytetty alkyleeniradikaali -(Cl·^) > ^:llä on R':n merkitykset ja Railia R'a:n merkitykset, ja näistä yhdisteistä ne, joissa R* on joko radikaali CH~ - (CH„) - 0 , jossa o / n n^ on luku 0-3, 10 - tai radikaali CH0 - (CH0) -0 -(CH-) - 0 - 3 2 n^ 2 iij jossa n merkitsee samaa kuin edellä ja n^ on luku 1-3, sekä ne, joissa R' on radikaali <“’1 .

\p I

15 R 2 jossa R’^ ja R'^ ovat 1-3 hiiliatomia sisältäviä alkyyli-radikaalej a.

Yhdisteistä, jotka valmistetaan keksinnön mukaisesti voidaan aivan erityisesti mainita seuraavat: 20 Erytromysiinin 9-Zt)Z~(2-metoksietoksi)metyyli7- oksiimi/, epäorgaanisten ja orgaanisten happojen kanssa muodostettuine additiosuoloineen.

Erytromysiinin 9-/Ό-/Γ2-(dietyyliamino)etyyli7-oksiimiV, epäorgaanisten ja orgaanisten happojen kanssa 25 muodostettuine additiosuoloineen.

Erytromysiinin 9-/’0-Zj2-(dimetyyliamino ) e tyyli/-oksiimij epäorgaanisten ja orgaanisten happojen kanssa muodostettuine additiosuoloineen.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle yhdisteiden I 30 valmistamiseksi on tunnusomaista, että erytromysiini, jonka kaava on (II) 8 69473 CH3 ! n(ch.)0 I 3 2 H _ C 9 I >,0H H°''Y^VS s „o.^ !<ch3__ T Ϊ V^0'X^vCH3 (II)

o /0 C

V/ I Γ '-o-l.../ 3 10 L ^ I» J >r oh o H3c^ ''0CH3 15 saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on (III) H2N-0-A-R (III) 20 jossa A ja R tarkoittavat samaa kuin edellä, tai sen vahvan hapon kanssa muodostaman suolan kanssa, mahdollisesti emäksen läsnäollessa, sellaisen kaavan (I) mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa Ra on vetyatomi, 25 tai erytromysiini-9-oksiimi, jonka kaava on (IV) 9 69473 HO CH3 \ i r T91 H0

5 H.C >0H ''v^X

ho. y <-chq -----o_1 HO^ ^v0^>X-CH3 h.c-'^N, <^chq (IV) 10 HsC'2 ] ------ "i CHa

0 >< 'OH

H3c^ och3 15 jompana kumpana isomeerinään tai niiden seoksena, saate taan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on (V)

Hal-A-R (V) 20 jossa A ja R tarkoittavat samaa kuin edellä ja Hai on halogeeniatomi, sellaisen kaavan (I) mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa Ra on vetyatomi, joka yhdiste, kun R on halogeeniatomi tai halogeeniatomilla substi-tuoitu alkoksi- tai alkyylitioryhmä, tarvittaessa saate- 25 taan reagoimaan amiinin kanssa, jonka kaava on ^*2 jossa R ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä, sellai- 30 sen kaavan (I) mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa Ra on vetyatomi ja R on ryhmä ^R1 -N x ^R2 38 - - I...

10 69473 tai tällä ryhmällä substituoitu alkoksi- tai alkyyli-tioryhmä, jolloin ryhmä 5 tarkoittaa samaa kuin edellä, tai kun R on 1,2-epoksietyyliryhmä, yhdistettä 2q voidaan käsitellä nukleofiilisellä reagenssilla sellaisen kaavan (I) mukaisen yhdisteen saamiskesi, jossa Ra on vetyatomi ja R on epoksiryhmän avauksessa syntynyt ryhmä, ja että kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa Ra on vety-atomi, haluttaessa esteröidään sellaisen kaavan (I) mu-^5 kaisen yhdisteen saamiseksi, jossa Ra on alkanoyyliryh- mä, ja että kaavan (I) mukainen yhdiste haluttaessa muutetaan suolaksi.

Edellä olevan menetelmän parhaassa suoritusmuodossa kaavan (III) mukainen yhdiste käytetään suolana, 2q erityisesti hydrohalogenidina, edullisesti hydroklori- dina tai hydrobromidina.

Reaktio suoritetaan tällöin puskuroidussa ympäristössä, esimerkiksi kun läsnä on ylimäärä orgaanista amiini-emästä, kuten esimerkiksi trietyyliamiinia, tai 25 orgaanisen hapon ja tämän hapon maa-alkalisuolan seos ta, kuten esimerkiksi etikkahapon ja natriumasetaatin seosta.

Samoin voidaan toimia esimerkiksi natrium-tai kaliumkarbonaatin tai -bikarbonaattien tai kal-30 sium- tai bariumkarbonaatin läsnäollessa.

Reaktio suoritetaan edullisesti alkoholi-liuottimessa, kuten esimerkiksi metanolissa tai etanolissa ja edullisimmin vedettömässä ympäristössä.

33 Kaavan (V) mukaisen yhdisteen reaktio kaavan 11 69473 (IV) mukaisen yhdisteen kanssa suoritetaan edullisesti emäksen läsnäollessa, kuten esimerkiksi trietyyliamii-nin tai natrium- tai kaliumkarbonaatin tai -bikarbonaat-tien tai kalsium- tai bariumkarbonaatin läsnäollessa.

5 Samoin voidaan käyttää hydridiä, kuten esim.

natriumhydridiä.

Toimitaan edullisesti polaarisessa liuottimessa, kuten esimerkiksi asetonissa, dimetyyliformamidissa, dimetyylisulfoksidissa tai heksametyylifosfotriamidis-10 sa. Kuitenkin voidaan käyttää jotain eetteriä, kuten esim. etyylieetteriä, tetrahydrofuraania tai dioksaania.

Kahdessa edellä olevassa tapauksessa reaktiot voidaan suorittaa lämpötiloissa, jotka ovat ympäristön lämpötilan ja liuottimen palautusjäähdytyslämpötilan 15 välillä. Reaktiota voidaan pitkittää usean tunnin jopa usean päivän ajaksi, jotta reaktio kuluisi loppuun.

Mahdolliset esteröiminen ja suolanmuodostus suoritetaan tavanomaisten menetelmien mukaan.

Keksinnön erityisenä kohteena on menetelmä kaavan 20 (I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, jolle mene telmälle on tunnusomaista, että kaavan (II) mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan (III) mukaisen yhdisteen hydrokloridin tai -bromidin kanssa orgaanisen aminoemäksen tai maa-alkalimetallikarbonaatin läsnä-25 ollessa, tai että kaavan (V) mukaisen yhdisteen kanssa emäksen läsnäollessa, joka on natrium- tai kalium-karbonaatti tai natrium- tai kaliumbikarbonaatti tai tai kalsiuirr tai bariumkarbonaatti tai natriumhydridi.

Yleisen kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä on 30 erittäin hyvä antibioottinen vaikutus gram-positii- visiin bakteereihin, kuten esim. stafylokokkeihin, streptokokkeihin ja pneumokokkeihin.

Nämä ominaisuudet tekevät edellä mainitut farma- 12 69473 seuttisesti hyväksyttävät tuotteet soveliaiksi käytettäviksi lääkkeinä mikrobien aiheuttamien sairauksien hoidossa ja erityisesti stafylokokkien aiheuttamissa, kuten esimerkiksi stafylokokki-verenmyrkytyksissä, 5 pahanlaatuisissa kasvojen tai ihon stafylokokki-infektioissa, pyodermiiteissä (=märkäisissä, ihotulehduksissa), tartunnallisissa ja märkivissä haavoissa, paiseissa, pernarutossa, ajotulehduksissa, ruusuissa, ankarissa primitiivisissä tai influenssan jälkeisissä 10 stafylokokki-infektioissa, katarri-keuhkokuumeessa, keuhkomärkimisessä (suppuration pulmonaire), streptokokki-infektioissa kuten esimerkiksi ankarissa angiinoissa, korva- ja sivuontelotulehduksissa, tuli-rokossa, pneumokokki-infektioissa, kuten keuhkokuumeis-15 sa, keuhkoputkentulehduksissa, luomitaudissa, kurkkumädässä, tippurissa. Tämän keksinnön mukaiset tuotteet ovat myös tehokkaita mikrobien aiheuttamia infektioita vastaan, kuten esimerkiksi Haemophilus influanzae:n (erilaisia tulehduksia aih.), Haemophilus Pertussis:en 20 (hinkuyskäbakteerin), Rickettsies:in (riketsia-baktee-ri), Mycoplasma pneumoniae:n (keuhkokuume-bakteeri) aiheuttamiin.

Keksinnön mukaisista lääkkeistä voidaan mainita erityisesti edellä määritellyt farmaseuttisesti hyväk-25 syttävät, parhaina pidetyt kaava (I):n mukaiset tuotteet sekä niiden suolat.

Esimerkeissä kuvatuista tuotteista parhaimpina lääkeaineina pidettyjä ovat seuraavat tuotteet: Erytromysiinin 9-/0/(2-metoksietoksi)metyyli/oksiimi/ 30 samoin kuin tämän tuotteen epäorgaanisten ja orgaanisten happojen kanssa muodostamat farmaseuttisesti hyväksyttävät additiosuolat; erytromysiinin 9-/0/2-(dime-tyyliamino)etyyli/oksiimi, samoin kuin tämän tuotteen epäorgaanisten ja orgaanisten happojen kanssa muodosta-35 mat, farmaseuttisesti hyväksyttävät additiosuolat, ja 69473 13 erytromysiinin 9-/0/(dietyyliamino)etyyli/oksiimi samoin kuin tämän tuotteen epäorgaanisten ja orgaanisten happojen kanssa muodostamat farmaseuttisesti hyväksyttävät additiosuolat.

5 Kaavan (I) mukaisia tuotteita samoin kuin nii den happojen kanssa muodostamia farmaseuttisesti hyväksyttäviä additiosuoloja voidaan käyttää sellaisten farmaseuttisten yhdisteiden valmistamiseen, jotka vaikuttavana aineenaan sisältävät vähintäin yhtä näistä 10 tuotteista.

Näitä yhdisteitä voidaan määrätä annettaviksi suun tai peräaukon kautta, parenteraalisesti (ruoansulatuskanavan ulkopuolelle), tai paikallisesti iholle tai limakalvoille voidellen.

15 Parhaana tapana pidetään suun kautta antamista.

Nämä voivat olla kiinteitä tai nestemäisiä ja esiintyä ihmislääkityksessä yleisesti käytetyissä farmaseuttisissa muodoissa, kuten esimerkiksi yksinkertaisina tabletteina tai pastilleina hyytelöinä, 20 rakeina, peräpuikkoina, injektoitavina valmisteina, salvoina, voiteina, vaahtoina: ne valmistetaan tavanomaisia metodeja käyttäen. Vaikuttavat aineet voidaan niissä sekoittaa tällaisissa farmaseuttisissa yhdisteissä tavallisesti käytettyihin 25 täyteaineisiin, kuten esim. talkkiin, arabikumiin, maitosokeriin, tärkkelykseen, magnesiumstearaattiin, kaakaovoihin, vesipitoisiin tai vedettömiin liuottimiin, kasvi- tai eläinkunnasta peräisin oleviin rasvoihin, parafiini-johdannaisiin, glykoleihin, tai eri-30 laisiin kosteuttaviin, dispergoiviin tai emulsoiviin aineisiin, säilöntäaineisiin.

Samoin nämä yhdisteet voivat olla jauheena, jonka tarkoituksena on tulla tarvittaessa liuotetuksi sopivaan liuottimeen, esimerkiksi pyrogeenivapaaseen 35 steriilin veteen.

_______ -- τπ: ..

m 69473 Käytetyn annoksen suuruus vaihtelee riippuen hoidettavasta sairaudesta, hoidon tarkoituksesta, antotavasta ja valitusta tuotteesta. Se voi olla esimerkiksi esimerkissä 1 tai 5 kuvattua tuotetta 0,250 g -5 4,000 g päivää kohti suun kautta annettuna ihmiselle.

Tuotteilla, jotka on saatu tämän vaatimuksen kohteena olevan menetelmän mukaan, on in vitro samankaltaisia ominaisuuksia kuin erytromysiinillä.

In vivo tämän vaatimuksen mukaisella menetelmäl-10 lä saaduilla tuotteilla on kaksi hyvin mielenkiintoista etua: - toisaalta pienemmät annokset kuin on tarvittu erytromysiiniä tai erytromysiinipropionaattia takaavat suojan kokeellisesti infektoidulle eläimelle, 15 - toisaalta farmakokineettiset tulokset esiin tuovat selvän paremmuuden verrattuna erytromysiiniin.

Kaavan (III) mukaisia tuotteita voidaan valmistaa esimerkiksi yleisen valmistusmenetelmän mukaan, joka on kuvattu julkaisussa Angew.Chem. 68, (Angewandte 20 Chemie) 1956 N:o 8 sivu 303.

Kaavan (IV) mukainen erytromysiinioksiimi on kuvattu brittiläisessä patentissa 1 100 504.

Kaavan (V) mukaiset tuotteet ovat tunnettuja ja niitä voidaan valmistaa tunnetuilla menetelmillä.

25 Jäljessä tulevien esimerkkien lisäksi, jotka valaisevat keksintöä sitä mitenkään rajoittamatta, voidaan myös mainita parhaisiin kuuluvina tuotteina ne, joiden substituenteilla R ja A on seuraavat arvot: is 694 7 3 iR Ra

i3-(ch2)3-o- H

>r-0- H

:h-ch„-s-ch. h I l i

)H

:h-ch~-nhch., h

I Z O

Sh CH3-0- h

Br H

Et

%- H

iPr

^N- H

/ iPr'

-NH CH3 H

nPr

^N- H

/ H' H2N- h __ -- τ 16 69473 Pätsi tässä vaatimuksessa esitetyn menetelmän mukaisesti saatuja erytromysiini-A:sta johdettuja tuotteita, on ilmeistä, että voidaan valmistaa myös vastaavia erytromysiini-B:n ja -C:n johdannaisia.

5 Erytromysiini-B:stä johdetuissa tuotteissa hydroksyy-li-ryhmän asemassa 12 on korvattu vety-atomilla, erytromysiini-C:n johdannaisissa metoksiryhmä asemassa 3" on korvattu hydroksyylillä.

Esimerkki 1: Erytromysiinin 9-/0-(2-metoksietoksi)me-10 tyylioksiimi 3

Liuotetaan 1,87 g erytromysiinin oksiimia 25 cm :im asetonia, lisätään 0,94 g natriumbikarbonaattia ja 0,3 3 cm /(metoksi)etoksi/metyylikloridia, minkä jälkeen pidetään palautusjäähdyttäjässä inertissä ilmakehäs- 3 15 sä 16 tuntia lisäten yhden kerran 0,3 cm /(metoksi)-etoksi/metyylikloridia. Liukenematon osa sentrifugoi-daan, suodos konsentroidaan 1/3:aan tilavuudestaan, lisätään natriumbikarbonaattiliuosta ja ekstrahoidaan etyylieetterillä, kuivataan ja konsentroidaan kuivaksi.

20 Jäännös käsitellään kromatograafisesti piidioksidilla. Eluoidaan bentseeni-trietyyliamiini-seoksella (15:1) ja saadaan 1,29 g haluttua tuotetta.

°< D = -77,5° + 2° (konsentraatio: 0,45% kloroformia)

Rf = 0,2 (bentseeni-trietyyliamiini 9-1, pylväs = 25 piidioksidi)

Analyysi: Η?6 N2 0-^,- = 837 arvioitu: C% 58,8 H% 9,16 N% 3,35

Saatu: 59 9,20 3,30.

Esimerkki 2: Erytromysiinin 9-/0-/2-(4-kloori-fenoksi)-30 etyylioksiimi

Liuotetaan 11,4 g (para-kloorifenoksi)-2-etoksi- 3 amiinia 2 30 cm :nn vedetöntä metanolia, lisätään 18,5 3 cm 3,25-normaalista kloorivedyn metanoli-liuosta ja sekoitetaan 30 minuutin ajan ympäröivässä lämpötilassa.

35 Lisätään 21 g erytromysiiniä, 11 g bariumkarbonaat- tia ja 35 cm metanolia ja sekoitetaan 18 tuntia ympä- 69473 17 röivässä lämpötilassa. Liukenematon osa suodatetaan, 3 . 3 kaadetaan suodos 750 cm :iin vettä, jossa on 75 cm väkevää ammoniakkia, ekstrahoidaan kloroformilla, pestään 10 %:seksi laimennetulla ammoniakki-liuoksella, 5 kuivataan, konsentroidaan, ja saadaan 35 g hartsimais-ta ainetta.

Käsittelemällä kromatograafisesti piidioksidilla ja eluoimalla kloroformi-trietyyliamiini-seoksella (9-1) saadaan 1,925 g haluttua tuotetta ja 2,03 g 10 epäpuhdasta tuotetta, joka puhdistetaan kromatogra-foimalla piidioksidilla bentseeni-trietyyliamiini-seoksen (15-1) avulla. Tällöin saadaan 1,42 g haluttua tuotetta.

D = 7 9,5° + 2,5° (c = 1% etanolia).

15 Esimerkki 3: Erytromysiinin 9-/0-(2-etoksietyyli)oksiimi 3 . .

Liuotetaan 3,7 g erytromysiimä 2 5 cm :nn vedetöntä metanolia, lisätään 1,4 cm trietyyliamiima, sitten 2,8 g 0-(2-etoksietyyli)hydroksyyliamiini kloorihydraattia. Seosta sekoitetaan 96 tuntia ympä-20 röivässä lämpötilassa inertissä ilmakehässä, minkä jäl- 3 keen se kaadetaan laimennettuun ammoniakkiin (12 cm 28 %:sta väkevää ammoniakkia 50 cm :ssä vettä) ja jäähdytetään jäävedellä. Saatu sakka pestään vedellä ja otetaan metyleenikloridiin. Orgaaninen faasi pestään 25 kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella, kuivataan, konsentroidaan kuivaksi, ja saadaan 3,83 g raakaa tuotetta, joka puhdistetaan käsittelemällä kroma-tograafisesti piidioksidilla, eluoidaan bentseeni-trietyyliamiini-seoksella (15-1) ja saadaan eristetyk-30 si 1,9 g haluttua tuotetta.

- - 73° + 3° (C = 0,6 % CHC13).

_ - ['.. - ..

k: is 6 94 7 3

Esimerkki 4: Erytromysiinin 9-/0/2-etoksietoksimetyy-li/oksiimi

Liuotetaan 1,89 g erytromysiinin oksiimia 25 3 cm :iin asetonia, lisätään 1 g natriumbikarbonaattia 5 ja 0,36 g l-(kloorimetoksi)2-etoksietaania ja sekoitetaan ensin 24 tuntia ympäröivässä lämpötilassa ja sitten • . . n 3 palautusjäähdyttäjässä 75 tuntia lisäten kerran 0,2 cm 3 ja toisen kerran 0,15 cm 1-(kloonmetoksi)-2-etoksi-etaania. Liukenematon osa suodatetaan, kaadetaan 3 10 suodos 100 cm :iin vettä ja ekstrahoidaan etyylieette-rillä, kuivataan, konsentroidaan kuivaksi alipaineessa, ja saadaan 2,5 g raakaa tuotetta. Tämä käsitellään kromatograafisesti piidioksidilla eluoiden bentseeni-trietyyliamiini-seoksella (9-1) ja saadaan 1,72 g 15 haluttua tuotetta.

= -79° + 2° (C = 0,7 % etanolia).

Esimerkki 5: Erytromysiinin 9-(Q/2-(dimetyyliamino)-etyyli/oksiimi

Liuotetaan 5,6 g erytromysiinin oksiimia 80 3 20 cm :iin asetonia, lisätään 6,3 g natriumbikarbonaattia ja 1,65 g dimetyyliaminokloorietaani kloorihydraat-tia ja pidetään palautusjäähdyttäjässä 4 ja puoli päivää lisäten 4 kertaa 3,3 g dimetyyliamino kloorietaani kloorihydraattia. Suodatetaan liukenematon osa, konsent-25 roidaan suodos, joka kiteytyy ja saadaan 4,5 g tuotet- 3 ta. Emäliuos kaadetaan 100 cm :iin vettä ja ekstrahoidaan etyylieetterillä. Eetterifaasi pestään kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella, kuivataan ja konsentroidaan kuivaksi. Sakka ja edellä saatu kitey-30 tynyt tuote käsitellään kromatograafisesti piidioksidilla. Eluoidaan kloroformi-trietyyliamiini-seoksel-la (100-15) ja saadaan 4,38 g haluttua tuotetta.

P = - 99,5° + 2° (1 % etanolia).

69473 19

Esimerkki 6; Erytromysiinin 9-/0-(2-metoksietoksi)-metyylioksiiimi

Liuotetaan 99,6 g erytromysiinin oksiimia 1000 3 cm :iin vedetöntä asetonia. Kun on lisätty 56 g kide- 3 5 vedetöntä natriumbikarbonaattia ja 15,2 cm /(metoksi)-etoksi/metyylikloridia, seosta pidetään 15 tuntia palautus jäähdyttäjässä sekoittaen ja pitäen sitä typpi- 3 ilmakehässä. Sitten lisätään 7,6 cm /(metoksi)etoksi/-metyylikloridia, ja seosta pidetään uudelleen palautus- 3 10 jäähdyttäjässä 8 tuntia. Lopuksi kolmatta, 5 cm :n lisäystä samaa tuotetta seuraa 15 tunnin pitäminen palautusjäähdyttäjässä. Tämän jälkeen seos jäähdytetään, liukenematon aine suodatetaan ja huuhdotaan asetonilla.

Asetoni-pitoinen suodos haihdutetaan kuiviin ja saadaan 3 15 hartsimaista ainetta, joka hierretään hienoksi 500 cm :ssä konsentroitua natriumbikarbonaatti-liuosta.

Saatu amorfinen tuote suodatetaan, huuhdotaan vedellä ja kuivataan kuivatusuunissa. Tämä valmistusprosessi toistetaan kolme kertaa. Saadaan yhteensä 335,6 g 20 raakaa tuotetta kvantitatiivisenä tuottona.

Saadut 335,6 g tuotetta liuotettiin 1,5 litraan puhdasta asetonia. Lisättiin 15 g aktiivihiiltä ja 15 g piimaata. Sekoitettiin muutamia minuutteja, minkä jälkeen suodatettiin, huuhdottiin ja pestiin noin 300 3 25 cm :llä asetonia. Sama käsittely toistettiin käyttäen 3 g aktiivihiiltä ja 15 g piimaata.

Suodatuksen jälkeen saatiin kirkas liuos, pes- 3 tiin, huuhdeltiin 300 cm :llä asetonia, suodos konsentroitiin vakuumissa noin 1,5 litraksi. Lisättiin kuu-3 30 massa 800 cm tislattua vettä jolloin alkoi kiteytyminen. Annettiin kiteytymisen jatkua 20-25°:ssa ja kiteiden keräännyttyä sakaksi jäähdytettiin 0-+5°C:ssa valmistetulla liuoksella.

Saatiin ensimmäinen suihke 134,5 g ja toinen 35 75,9 g, lopuksi kolmas suihke 15,3 g, yhteensä 225,7 g.

___ - τ 20 69473 215 g edellä saatua tuotetta kiteytettiin 3 uudelleen liuottamalla se 645 cm :iin asetonia. Lisättiin taas 5 g piimaata. Sekoitettiin muutamia minuutteja, minkä jälkeen suodatettiin. Saatiin kirkas väri- . 3 5 tön liuos. Lisättiin vähitellen 525 cm tislattua vettä. Kiteytyminen pantiin alulle itujen ja hankaa-misen avulla. Annettiin kiteytymisen jatkua 20-25°C:ssa. Kahden tunnin kuluttua kiteet olivat muodostaneet sakan. Jäähdytettiin 0-+5°C:ssa ja annettiin seistä siinä 10 yhden yön. Kiteet suodatettiin, huuhdottiin ja pes- 3 tiin 100 cm :llä 40 %:sta asetonin vesiliuosta. Kuivattiin 40°C:ssa vakuumissa. Saatiin 170 g tuotetta. Toinen suihke 16 g ja kolmas 9,5 g kiteytyivät emäliuok-sista. Saatiin yhteensä 195,5 g puhdasta tuotetta.

15 Esimerkki 7: Erytromysiinin 9-/0-(fenyylimetoksDme- tyyli/oksiimi 3

Liuotetaan 1,9 g 25 cm :iin erytromysiinin oksiimia asetonia, lisätään 1,2 g natriumbikarbonaat-3 tia ja 0,5 3 cm kloonmetyylibentsyylieetteriä. Sekoi-20 tetaan sitten 1 tunti ympäröivässä lämpötilassa typpi-virrassa. Lietettä pidetään palautusjäähdyttäjässä asetonissa 60°C:ssa 25 tuntia. Lisätään 0,25 cm^ kloori-metyylibentsyylieetteriä, 41 tunnin 30 minuutin kuluttua lisätään sama määrä ja reaktio pysäytetään 45 tun-25 nin kuluttua.

Liukenematon aine suodatetaan ja se huuhdotaan 3 asetonilla. Kaadetaan 100 cm :iin vettä ja saadaan mai- 3 tomainen liuos. Ekstrahoidaan kolme kertaa 200 cm :llä etyylieetteriä. Eetterifaasit pestään kyllästetyllä 30 natriumkloridi-liuoksella. Kuivataan, haihdutetaan kuiviin alipaineessa ja saadaan 3,4 g hartsimaista ainetta, joka puhdistetaan seuraavalla tavalla: Käsitellään kromatograafisesti piidioksidilla eluentilla, joka on bentseeni-trimetyyliamiini-seos 35 (9-1). Otetaan 1,2 g puhdistettua tuotetta. Tämä tuote 3 liuotetaan 20 cm :iin asetonia ja liuos konsentroidaan 21 69473 3 3 sitten 2 cm :n tilavuuteen. Lisätään kylmässä 60 cm petrolieetteriä (kp = 64 - 75°C). Kun tuote on kiteytynyt, se suodatetaan ja huuhdotaan petrolieetterillä. Saadaan 0,715 tuotetta.

3 5 Tämä tuote liuotetaan uudestaan noin 100 cm :iin asetonia ja sekoitetaan noin 50°C:ssa aktiivihiilen kanssa 10 minuutin ajan. Suodatetaan kuumassa.

3

Asetoniliuos konsentroidaan 2 cm :ksi ja tähän lisätään sitten 100 cm3 petrolieetteriä (kp = 64 - 75°C).

10 Tuote kiteytyy uudestaan. Kiteet suodatetaan, huuhdotaan petrolieetterillä ja kuivataan 60°C:ssa vakuu-missa. Saadaan 0,585 g puhdasta tuotetta.

C ^ -Q - ~ 74,5° + 3° (0,25 % etanolia).

Analyysi: H?6 0χ4 = 869,1 15 Arvioitu: C% 62,19 H% 8,81 N% 3,22 Saatu: 62,1 8,8 3,1.

Esimerkki 8: Erytromysiinin 9-/0-/2-(dimetyyliamino)-etyyli/oksiimi 3

Liuotetaan 11,2 g erytromysiinin oksiimia 160 cm :im 20 asetonia, lisätään sitten 3,6 g natriumkarbonaattia minkä jälkeen lisätään 3,24 g dimetyyliaminokloorietaa-ni kloorihydraattia. Sekoitetaan palautus jäähdyttämässä 93 tuntia. Jäähdyttämisen jälkeen liukenematon aine suodatetaan, huuhdotaan asetonilla. Haihdutetaan 3 25 alipaineessa osa asetonista kunnes seosta on 150 cm .

Tuote kiteytyy. Jätetään +5°C:een ja suodatetaan kiteet jotka pestään. Saadaan 2,45 g kiteitä = frak- . 3 tio A. Liukenemattomaan osaan lisätään uudestaan 200 cm asetonia ja sekoitetaan puolisen tuntia. Suodatetaan, 30 haihdutetaan kaksi kolmasosaa asetonista. Kun tuote on kiteytynyt, saadaan 0,864 g tuotetta = fraktio B. Operaatio toistetaan useita kertoja ja saadaan fraktio C = 3,37 g. Liukenemattomaan osaan lisätään uudestaan 200 cm3 asetonia ja lämmitetään sitten 50°:een se-35 koittaen puolen tunnin ajan. Suodatetaan kuumassa, haihdutetaan kaksi kolmasosaa asetonista ja jäähdyte- -- - Si.. __ 22 69473 tään. Kiteet suodatetaan, huuhdotaan kylmällä asetonilla ja kuivataan. Saadaan fraktio D = 2,64 g. Kerätään vielä 0,661 g tuotetta lähtien fraktion A emäliuok-sista, saadaan yhteensä 9,989 g kiteitä.

5 Tuotteet kiteytetään uudelleen seuraavalla tavalla: 3

Saadut 9,989 g liuotetaan noin 800 cm :iin asetonia 1 g:n aktiivihiiltä läsnäollessa. Sekoitetaan 50°C:ssa 15 minuutin ajan ja suodatetaan. Saadaan . · 3 kirkas ja väritön liuos. Konsentroidaan noin 250 cm :iin.

10 Tuote kiteytyy. Jäähdytetään, suodatetaan kiteet, pestään ne, kuivataan, ja saadaan ensimmäinen suihke 8,27 g sitten toinen 0,714 g haluttua tuotetta.

- _86° 1 2° (1 % kloroformi).

Tuote on identtinen esimerkin 5 tuotteen kanssa.

15 Esimerkki 9: Erytromysiinin 9-/0-(2-(dimetyyliamino)- etyyli/oksiimi/ 3

Sekoitetaan argonissa 40 cm heksametyylifosfo-triamidin ja etyylieetterin seosta (3-1) ja 2,247 g erytromysiinioksiimia, sitten lisätään useina kertoi-20 na 0,159 g natriumhydridiä 50 %:sena öljysuspensiona.

Sekoitetaan 15 minuuttia, sitten lisätään tipoit- 3 tain 21 cm heksametyylifosfotnamidiliuosta, 0,518 g dimetyyliaminoetyylikloridi kloorihydraattia ja 0,173 g natriumhydridiä ja sekoitetaan 20 minuuttia. Reaktio 3 25 lopetetaan 4 tunnin kuluttua. Kaadetaan 30 cm :iin vettä, joka on kyllästetty 60 g:11a ammoniumasetaattia, ekstrahoidaan eetterillä, pestään vedellä, kuivataan, haihdutetaan kuiviin. Laimennetaan vedellä, ekstrahoidaan tolueenilla, kuivataan, haihdutetaan alipaineessa, 30 otetaan minimimäärään pentaania, reaktio käynnistetään äsken saadulla tuotteella, sekoitetaan 3 tuntia ympäröivässä lämpötilassa, sentrifugoidaan ja kuivataan 60°C:ssa. Saadaan 0,21 g haluttua tuotetta.

Sp. 233°C. Eri emäliuoksia ei käsitelty. Tuote on ident-35 tinen esimerkeissä 5 ja 8 saatujen tuotteiden kanssa.

23 69473

Esimerkki 10: Erytromysiinin 9-/0-/2-(dimetyyliamino)-etyyli/oksiimi/

Korvataan esimerkin 9 valmistusmallissa käytetty heksametyylifosfotriamidi-eetteri-seos dimetyyli- 3 5 formamidilla. 3,5 cm :iin dimetyyliformamidia lisätään 0,75 g erytromysiinioksiimia. Lisätään 53 mg natriumhydridiä 50 %:isena öljyseoksena. Sekoitetaan 15 minuuttia ja lisätään 0,158 g dimetyyliamino-etyylikloridi kloorihydraattia ja 53 mg natriumhydri-10 diä 50 %-sena öljysuspensiona. 4:n tunnin ympäröivässä lämpötilassa pitämisen jälkeen lisätään 29 mg dimetyy-liaminoetyylikloridi kloorihydraattia ja 11 mg natriumhydridiä 50 %:sena öljysuspensiona. Sekoitetaan yhden yön ajan, kyllästetään hiilidioksidilla, kaade- 3 15 taan 35 cm :im vettä, sentrifugoidaan, pestään, otetaan kloroformiin, kuivataan ja haihdutetaan. Sakka 3 kiteytyy 2 cm :iin pentaania. Saadaan 0,428 g haluttua tuotetta. Emäliuosten käsittelyn jälkeen saadaan toinen suihke 210 mg tuotetta, joka on identtistä esi-20 merkeissä 5, 8 ja 9 saatujen tuotteiden kanssa.

Esimerkki 11; Erytromysiinin 9-/0-/(4-kloorifenoksi)-metyyli/oksiimi 3 60 cm :iin etyylieetteriä lisätään 2,247 g erytromysiinioksiimia ja lisäksi useina kertoina 0,159 g 25 natriumhydridiä 50 %-sena öljysuspensiona. Sekoitetaan 3 vielä lisäksi 15 minuuttia ja lisätään sen jälkeen 6 cm heksametyylifosfotriamidia. Sen jälkeen lisätään ti- 3 poittain 15 minuutin ajassa 0,45 cm p-kloorianisoli- 3 kloridia 6 cm :nä eetteriliuostaan. Reaktio on täydel- 3 30 Imen 40 minuutin kuluttua. Kaadetaan 30 cm :iin 60 g:11a ammoniumasetaattia kyllästettyä vettä, ekstrahoi- 3 daan 3 kertaa 15 cm :llä eetteriä, pestään vedellä. Ilmaantuu sakka. Laimennetaan etyyliasetaatilla kunnes sakka on täydellisesti liuennut dekantoidaan, pestään 35 vedellä ja sitten kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella,

- I

24 69473 kuivataan, haihdutetaan liuotin kuiviin, otetaan pen-taaniin ja sekoitetaan 16 tuntia ympäröivään lämpötilassa. Sentrifugoidaan, pestään pentaanilla, kuivataan ja saadaan 1,99 g haluttua tuotetta. Tuote puh-5 distetaan seuraavalla tavalla:

Sekoitetaan 1,89 g tuotetta 3,8 g:n kanssa . . . 3 aktivoitua magnesiumsilikaattia 40 cm :ssä bentseeniä 3 1 tunnin ajan, sentrifugoidaan, pestään 5 cm :llä bentseeniä ja haihdutetaan kuiviin. Operaatio uudis- 3 10 tetaan. Lisätään 5 cm pentaania ja sekoitetaan 1 yön ajan ympäröivässä lämpötilassa. Sentrifugoidaan, pes- 3 tään 0,5 cm :llä pentaania, kuivataan, ja saadaan 0,903 g haluttua tuotetta. Kp. 90°C.

= -64,5° + 2,5° (c = 0,5 % etanolia) 15 RMN: CDClg ppm CH3 2,27 (Ny/>/^ ) ^ch3 5,65 (d,d, 7 hz)-N 0CH20 Analyysi: 20 Arvioitu: C% 59,41 H% 8,27 N% 3,15 Cl% 3,98 Saatu: 59,5 8,4 3,0 4,0.

Esimerkki 12: Erytromysiini 9-0(syanometyyli)oksiimi Sekoitetaan argonissa 80 cm asetonia ja 3 g erytromysiinioksiimia ja lisätään useina kertoina 0,21 g 25 natriumhydridiä öljysuspensiona, sekoitetaan 15 minuuttia, lisätään sitten 0,384 asetonitriilikloridia 3 liuotettuna 1 cm :iin asetonia. 20 minuutin kuluttua lisätään vielä 0,141 natriumhydridiä, sitten 10 minuutin kuluttua 0,256 g asetonitriilikloridia. 10 minuu-30 tin kuluttua lisätään 70 mg natriumhydridiä ja 0,125 g asetonitriilikloridia. Kyllästetään hiilidioksidilla 1 1/2 tunnin ajan, haihdutetaan kuiviin alipaineessa, kuivataan. Käsitellään kromatograafisesti piidioksidilla eluoiden eetteri-trietyyliamiini-seoksella (85-15).

25 69473

Kootaan fraktiot, haihdutetaan kuiviin, kiteytetään petrolieetterissä (kp: 65-75°C). Sentrifugoinnin, pesun ja kuivaamisen jälkeen saadaan 1,8 g haluttua tuotetta. Sp. 140°.

5 (ti)= -74,5 + 2,5° (c = 0,6%, CHClg)

Analyysi

Arvioitu: C% 59,45 H% 8,83 N% 5,33 Saatu: 59,2 9,0 5,0.

Esimerkki 13: Erytromysiinin 9-/0-(2-etyylitioetyyli)-10 oksiimi 3 1. Sekoitetaan argonissa 90 cm metyylietyyli- 3 ketonia ja 10 cm 2-kloorietyyli-etyylisulfidia ja 12,9 g natriumjodidia. Pidetään palautusjäähdyttä-jässä 1 tunnin ajan, jäähdytetään, sentrifugoidaan 15 kunnes muodostunut natriumkloridi on eliminoitunut.

Suodos säilytetään hermeettisesti suljetussa pullossa.

2. Sekoitetaan argonsuihkussa 3,75 g erytro- 3 mysiinioksiimia 24 cm :iin heksametyylifosfotriamidi-eetteriliuosta (1-1). Eetteri haihdutetaan alipainees-20 sa minkä jälkeen lisätään 0,26 g natriumhydridiä öljy-suspensiona. Sekoittamista jatketaan 15 minuuttia ja 3 lisätään 20 minuutin ajassa 50 cm kohdassa 1. saatua liuosta.

Lisätään useina kertoina 0,6 g natriumhydridiä.

25 50 minuutin kuluttua lisätään vielä 0,59, natriumhydri- 3 diä. 60 minuutin kuluttua reaktioseos kaadetaan 240 cm :im 3/4 kyllästettyä natriumkloridin vesiliuosta, joka sisältää 10 g natriumbikarbonaattia. Sekoitetaan 10 minuuttia ympäröivässä lämpötilassa, sentrifugoidaan 30 muodostunut sakka ja liuotetaan se kloroformiin, kuivataan se, haihdutetaan kuivaksi, ja saadaan 5 g nestettä, joka käsitellään kromatograafisesti piidioksidilla (eluentti tolueeni-trietyyliamiini 9-1). Homogeeniset fraktiot yhdistetään ja haihdutetaan kuiviin. Saadaan 1,1 g 35 hartsimaista ainetta, joka hierretään hienoksi petro- 69473 26 lieetterissä (kp: 65-75°). Kuivataan ja saadaan 1,036 g haluttua tuotetta. Sp. 110°C.

= 72,5° + 2° (c = 1 % CHC1: ssä).

Analyysi: 5 Arvioitu: C% 58,83 H% 9,15 N% 3,35 S% 3,83 Saatu: 58,8 9,3 3,3 3,7

Esimerkki 14: Erytromysiinin 9-/0-(2-syanoetyyli)oksiimi 3

Sekoitetaan argonissa 10 cm heksametyylifosfo-triamidia ja 3 g erytromysiinioksiimia. Kun liukenemi-10 nen on tapahtunut, lisätään 0,2 g natriumhydridiä öljy- 3 suspensiona ja tipoittain 0,4 cm puhdistettua bromi-propionitriiliä. 45 minuutin kuluttua lisätään fraktioimalla noin 0,1 g natriumhydridiä ja 4 tippaa bro-mipropionitriiliä. Operaatio uudistetaan lisäten 3 15 vielä 0,7 g natriumhydridiä 3a 0,42 cm bromipropio- 3 nitriiliä. Seos kaadetaan 240 cm :iin 3/4:ksi kyllästettyä natriumkloridin vesiliuosta, jossa on 2,4 g natriumbikarbonaattia. Yhden tunnin sekoittamisen jälkeen sentrifugoidaan suodattimen kanssa, pestään kyl- 20 lästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella. Sakkaan 3 lisätään 200 cm kloroformia, sekoitetaan 1 tunti, sitten sentrifugoidaan liukenematon aine ja pestään se kloroformilla. Suodos ja pesunesteet yhdistetään ja sitten dekantoidaan. Kloroformipitoinen fraktio kuiva-25 taan, suodatetaan, haihdutetaan kuiviin alipaineessa.

Saadaan 3,26 g raakaa tuotetta amorfisena jauheena. 2 g tätä tuotetta käsiteltiin kromatograafisesti piidioksidilla ja eluoitiin kloroformi-trietyyliamiini-seoksel-la (95-5). Homogeeninen fraktio antoi 1,348 g hartsi-30 maista ainetta, joka otettiin pentaaniin ja tätä sekoitettiin 16 tuntia. Haihdutettiin kuiviin alipai- 3 neessa, lisättiin 10 cm pentaania, sekoitettiin 1/2 tuntia ja sitten sentrifugoitiin, pestiin ja kuivattiin. Saatiin 0,766 g valkeita kiteitä. Sp. = 210°C.

Mk 27 694 7 3 C*)™ = -77,5° + 1,5° (c = 1% CHC13: ssa)

Analyysi:

Arvioitu: C% 59,9 H% 8,92 N% 5,24

Saatu: 59,6 9,0 5,5.

5 Esimerkki 15: Erytromysiinin 9-/0-(3,3-dimetyyli-2- oksobutyyli)oksiimi 3 10 cm :iin heksametyylifosfotriamidia lisätään argonissa useana kertana 3 g erytromysiinioksiimia.

Saatuun liuokseen lisätään 0,22 g natriumhydridiä 10 öljysuspensiona. Jäähdytetään 10°C:een ja lisätään 3 tipoittain 0,6 cm 3,3-dimetyyli-2-oksobutyylibromi- dia. Reaktion annetaan jatkua 10-12°C:ssa 25 minuut- 3 . .

tia. Kaadetaan hitaasti 200 cm :im 3/4:ksi kyllästettyä natriumkloridin vesiliuosta, jossa on 1,6 g 15 natriumbikarbonaattia. Pestään 3/4:ksi kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella. Sekoitetaan 20 minuuttia, sentrifugoidaan muodostunut sakka, liuotetaan se kloroformiin, dekantoidaan orgaaninen faasi, pestään se, kuivataan, haihdutetaan kuiviin alipaineessa, 20 ja saadaan 3,28 g epäpuhdasta tuotetta. Saadut 3,28 g yhdistettiin 5,1 g:aan samalla tavalla saatua tuotetta. Näin saatu 8,38 g tuotetta käsiteltiin kromatograafi-sesti piidioksidilla eluoiden tolueeni-kloroformi-trietyyliamiini-seoksella (6-4-1). Yhdistettiin homo- 25 geeniset fraktiot, haihdutettiin kuiviin alipaineessa, 3 sekoitettiin 3 cm :iin pentaania, sentrifugoitiin muo- 3 dostunut sakka, pestiin se 0,3 cm :llä pentaania. Kuivattiin vakiopainoiseksi ja saatiin 0,67 g valkoista jauhetta. Sp. 146°C.

30 = -63,5° + 1,5° (c = 1% CHCl^ssa)

Analyysi:

Arvioitu: C% 60,97 H% 9,28 N% 3,31 Saatu: 60,8 9,3 3,2.

- ' F

28 69473

Esimerkki 16: Erytromysiinin 9-/0-(3-etyylitio-2-hydroksipropyyli)oksiimi Sekoitetaan 34 cm eetteri-heksametyylifosfo-triamidiseosta (1-1) ja 5 g erytromysiinioksiimia.

5 Eetteri haihdutetaan alipaineessa, sitten lisätään useana kertana argonissa 0,352 g natriumhydridiä 50 %:sena öljysuspensiona, sekoitetaan 15 minuuttia, sitten lisätään 1,25 g 3-etyylitio-2-hydroksipropyyli-kloridia. 15 minuutin kuluttua lisätään vielä 0,352 g 10 natriumhydridiä. Kun reaktio on päättynyt (reaktion kehitystä seurataan ohuella kerroksella kromatografoi- 3 maila), kaadetaan reaktioseos 400 cm :iin 3/4:ksi kyllästettyä natriumkloridin vesiliuosta, jossa on 1,7 g natriumbikarbonaattia. Sakka sentrifugoidaan, liuote-15 taan kloroformiin, kuivataan ja haihdutetaan kuiviin alipaineessa. Saadaan 3,6 g hartsimaista ainetta, joka yhdistettiin 3,7 g:aan samanlaisessa kokeessa saatua ainetta ja käsiteltiin ne kromatograafisesti piidioksidilla eluoiden kloroformi-trietyyliamiini-20 seoksella (9-1). Yhdistettiin homogeeniset fraktiot, haihdutettiin kuiviin, ja saatiin 2,7 g valkoista hartsimaista ainetta. Se käsiteltiin uudelleen kroma-tograafisesti piidioksidilla eluoiden kloroformi-meta-noli-seoksella (1-1). Yhdistettiin haluttua tuotetta 25 sisältävät fraktiot, haihdutettiin kuiviin, saadaan 1,116 g valkoista hartsia, joka kiteytettiin sekoitta-3 maila 2 0 cm :im pentaania. Sakka sentrifugoitun, pestiin pentaanilla ja kuivattiin vakiopainoiseksi. Saatiin 0,93 g haluttua tuotetta. Sp. 142°C.

30 = -76,5° + 2,5° (c = 0,8% CHCl^ssa).

Analyysi:

Arvioitu: C% 58,17 H% 9,07 N% 3,23 S% 3,7 Saatu: 58,0 9,1 3,2 3,6.

29 6947 3

Esimerkki 17: Erytromysiinin 9-/0-/2-(2-hydroksietoksi)-etyyli/oksiimi 3

Sekoitetaan argonissa 10 cm heksametyylifosfo-triamidia ja 3 g erytromysiinioksiimia. Sekoite-5 taan 25 minuuttia ja lisätään useina kertoina 0,212 g natriumhydridiä 50 %-sena öljysuspensiona ja 15 minuutin sekoituksen jälkeen lisätään 0,6 g 2-(2-kloorietok-si)etanolia. 15 minuutin kuluttua lisätään vielä 0,212 g natriumhydridiä, sitten 0,6 g 2-(2-kloorietoksi)eta-10 nolia. 15 minuutin kuluttua lisätään taas 0,212 g natriumhydridiä, sitten 0,6 g 2-(2-kloorietoksi)-etanolia. Yhden tunnin kuluttua reaktio pysäytetään 3 kaatamalla seos hitaasti 240 cm :iin 3/H:ksi kyllästettyä liuosta, joka sisältää 3 g natriumbikarbonaattia.

15 Sekoitetaan 10 minuuttia, sentrifugoidaan muodostunut tuote, liuotetaan se kloroformiin, pestään kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella, kuivataan haihdutetaan kuiviin alipaineessa, ja saadaan 3,5 g hartsi-maista ainetta, joka käsitellään kromatograafisesti 20 piidioksidilla (eluentti: tolueeni-trietyyliamiini 9-1). Haihdutetaan kuiviin fraktiot, jotka sisältävät haluttua tuotetta 2,9 g valkoisena hartsina, joka kro-matografoidaan uudelleen piidioksidilla (eluentti: kloroformi-trietyyliamiini 12,5-7,5). Saadaan 1,8 g 25 haluttua tuotetta, joka puhdistetaan seuraavalla tavalla: 1,063 g saatua hartsimaista ainetta hierotaan jau- 3 heeksi, dekantoidaan sitten 3 kertaa peräkkäin 5 cm :llä kyllästettyä natriumkloridi-liuosta. Liukenematon aine sentrifugoidaan, pestään puoliksi kyllästetyllä nat-30 riumkloridi-liuoksella ja sitten vedellä. Kuivataan ja saadaan 0,718 g valkoista jauhetta. Sp. = 132°C.

C = “83,5° + 2° (c = 1% CHClg: ssa) .

Analyysi:

Arvioitu: C% 58,83 H% 9,15 N% 3,35 35 Saatu: 59,0 8,9 3,2.

30 69473

Esimerkki 18: Erytromysiinin 9-/0-/(4-kloorifenyylitio)- metyyli/oksiimi • 3

Sekoitetaan argonissa 80 cm etyylieetteriä ja 2,99 g erytromysiinioksiimia. Kun liukeneminen on ta-5 pahtunut, sekoittaen, lisätään 0,212 g natriumhydri- 3 diä 50 %-sena öljysuspensiona, sitten 8 cm heksame- 3 tyylifosfotriamidia ja 0,6 cm 4-kloorifenyylitiome- 3 tyylikloridia. 65 tunnin kuluttua lisätään taas 0,15 cm kloridia ja 4 tuntia myöhemmin kaadetaan seos liuok- 3 10 seen, jossa on 100 g amyyliasetaattia ja 60 cm vettä. Ekstrahoidaan eetterillä, eetteripitoiset uutteet pestään vedellä, kuivataan ja haihdutetaan kuiviin alipaineessa. Saadaan 3 g hartsimaista ainetta. Nämä 3 g käsitellään kromatograafisesti piidioksidilla (elu-15 entti: tolueeni-trietyyliamiini 9-1). Fraktiot yhdistetään, kuivataan ympäröivässä lämpötilassa. Saadaan 0,89 g amorfista kiinteää ainetta. 0,852 g tätä . . . . 3 ainetta sekoitettiin 13 cm :ssä kanssa pentaania 2 tuntia. Sentrifugoitiin ja pestiin 3 kertaa pentaanilla.

20 Kuivattamisen jälkeen saatiin 0,753 g valkoista jauhetta. Sp. = 12 6°C.

C**)= -32,5° + 1,5° (c = 0,8 % CHCl3:ssa)

Analyysi:

Arvioitu: C% 58,36 H% 8,13 N% 3,093 S% 3,54 Cl% 3,91 25 Saatu: 58,6 8,1 3,0 3,7 4,2.

Esimerkki 19: Erytromysiinin 9-/0-/2-(1,1-dimetyyli-etoksi)-2-oksoetyyli/oksiimi 3

Liuotetaan 3 g erytromysiinioksiimia 80 cm :iin vedetöntä eetteriä. Liuos upotetaan 10°C:iseen hautee- 30 seen ja lisätään pieninä fraktioina, sekoittaen, 0,216 g natriumhydridiä 50 %-isena öljysuspensiona. 8 minuu- 3 tm kuluttua lisätään tipoittain 0,6 cm t-butyyli- monoklooriasetaattia ja palataan ympäröivään lämpöti- 3 laan. Lisätään 8 cm vedetöntä dimetyyliformamidia.

35 2 tunnin kuluttua lisätään 0,044 g natriumhydridiä 3 31 69473 ja 0,12 cm tributyyli-monokloonasetaattia. 1 tunnin kuluttua johdetaan hiilidioksidia kunnes seos on saatu neutraaliksi. Seos sentrifugoidaan, konsentroidaan, 3 ja jäännös kaadetaan, sekoittaen, 160 cm :nn kylläs-5 tettyä natriumkloridin vesiliuosta. Sekoitetaan 1 tunnin ajan, sakka sentrifugoidaan ja pestään kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella, sitten kuivataan vakuumissa. Saadaan 3,85 g valkoista kiinteätä ainetta. 3,7 g tätä tuotetta käsiteltiin kromatograa-10 fisesti piidioksidilla eluoimalla tolueeni-trietyyli-amiini-seoksella (9-1). Homogeeninen osa haihdutettiin kuiviin, saatu amorfinen sakka hierottiin jauheeksi pentaanissa ja liuotin haihdutetaan kuiviin alipaineessa. Saatiin 1,73 g valkoista jauhetta.

Λ 15 Sp. = 214°C. Saatuihin 1,73 g:aan lisättiin 5,1 cm pentaania, sentrifugoitiin ja pestiin 2 kertaa pentaa-nilla. Kuivaamisen jälkeen vakuumissa saatiin 1,599 g valkoista jauhetta. Sp. = 214°C.

- -71,5° + 2° (1 % kloroformissa) 20 Analyysi:

Arvioitu: C% 59,84 H% 9,11 N% 3,23 Saatu: 60,1 9,4 3,1.

Esimerkki 20: Erytromysiinin 9-/0-(etoksimetyyli)oksiimi 3 . .

Lisätään 3 g erytromysiinioksiimia 10 cm :un 3 25 heksametyylifosfotriamidia. Huuhdotaan 2 cm :llä hek-sametyylifosfotriamidia. Liukenemisen tapahduttua lisätään 3:na fraktiona 0,22 g natriumhydridiä 50 %-isena öljysuspensiona. Sitten lisätään voimakkaasti sekoit- 3 taen 0,41 cm kloorimetyylietyylieetteriä. Annetaan 3 . .

30 vaikuttaa yhteensä 2 tuntia. Kaadetaan 250 cm :iin 3/4:ksi kyllästettyä natriumkloridiliuosta, jossa on 3 2 g natriumbikarbonaattia. Pestään 20 cm :llä 3/4:ksi kyllästettyä natriumkloridiliuosta. Sekoitetaan 30 minuuttia ja jätetään lepäämään. Saatu sakka sentrifugoi-35 daan ja pestään samalla liuoksella, liuotetaan klorofor- 32 69473 miin, dekantoidaan ja eliminoidaan liukenematon aine sentrifugoimalla. Suodos pestään, kuivataan, käsitellään 0,8 g:lla aktiivihiiltä, liuotin haihdutetaan alipaineessa, ja saadaan 3,01 g keltaista hartsimais-5 ta ainetta. Tämä tuote käsitellään kromatograafisesti piidioksidilla (eluentti: tolueeni-kloroformi-tri-etyyliamiini 6-4-1). Homogeeniset faasit yhdistetään ja haihdutetaan alipaineessa. Saadaan 2 g valkoista hart simaista ainetta, joka kiinteytetään hieromalla 3 cm : 10 ssä isopropyylieetteriä 20 minuutin ajan. Tuote sentri-fugoidaan, pestään, kuivataan, ja saadaan 1,54 g valkoista tuotetta. Sp. 123°C.

- -78° + 2,5° (c = 1% kloroformissa).

Analyysi: 15 Arvioitu: C% 59,53 H% 9,01 N% 3,48 Saatu: 59,8 9,3 3,3.

Esimerkki 21: Erytromysiinin 9-/0-/(2-kloorietoksi)-metyyli/oksiimi

Liuotetaan argonissa 3 g erytromysiinioksiimia 20 80 cm^riin vedetöntä eetteriä. Liuos upotetaan 10°C:iseen hauteeseen ja siihen lisätään 5 minuutin ajassa annoksittain 0,216 g natriumhydridiä 50 %-isena öljysuspen- 3 siona, sitten 0,44 cm 1-kloonetyyli-kloorimetyyli-eetteriä. Seoksen annetaan seistä 5 tuntia 30 minuut-25 tia ympäröivässä lämpötilassa minkä jälkeen siihen johdetaan hiilidioksidia. Haihdutetaan kuiviin alipaineessa, jäännös otetaan petrolieetteriin (kp: 65-75°), sekoitetaan puolisen tuntia, sen jälkeen sentrifugoi-daan ja pestään petrolieetterillä. Kuivattamisen jäl-30 keen saadaan 3,54 g raakaa tuotetta. 3,47 g tätä tuo- 3 tetta otettiin 17,5 cm :iin asetonia. Suspensio sent-rifugoitiin, suodosta sekoitettiin puolen tunnin ajan 150 mg:n kanssa aktiivihiiltä, sitten sentrifu-goitiin. Suodos käsiteltiin uudelleen aktiivihiilellä 35 ja konsentroitiin kuivaksi. Saatiin 3,21 g tuotet- 33 69473 ta. 2,93 g tätä tuotetta sekoitettiin puolen tunnin . 3 ...

ajan 15 cm :n kanssa 10 %-sta etanolin vesiliuosta.

Seos sentrifugoitiin ja pestiin samalla liuoksella 3 (1,5; 1 ja 1 cm ). Kuivattamisen jälkeen saatiin 2,67 g 5 tuotetta. Sp. noin 129°C.

~ "78,5° + 3° (c = 0,5% kloroformissa) .

Analyysi:

Arvioitu: C% 57,04 H% 8,74 Cl% 4,21 N% 3,33 Saatu: 56,8 8,7 4,3 3,2.

10 Esimerkki 22: Erytromysiinin 9-/0-/(dimetyyliaminoetok- si)metyyli/oksiimi

Sekoitetaan 8,86 g dimetyyliamiinia ja 3 g erytromysiinin 9-/0-/(2-kloorietoksi)metyyli/oksiimia, joka on saatu esimerkin 21 mukaan ja jäähdytetty jää-15 hauteessa. Suljetaan hermeettisesti, upotetaan 30-32°C: iseen hauteeseen. Liukenemisen tapahduttua täydellisesti jätetään seisomaan 74 tunniksi tähän lämpötilaan. Jäähdyttämisen jälkeen jäähauteessa reaktioastia avataan. Dimetyyliamiini eliminoidaan. Jäännös kuivataan 20 vakuumissa ja saadaan 3,286 g valkoista kiinteätä 3 ainetta. 3,256 g tätä tuotetta otettiin 100 cm :iin etyyliasetaattia, johon oli lisätty vähän eetteriä, ja pestiin vedellä 6 kertaa, sen jälkeen 3 kertaa kyllästetyllä natriumkloridi-liuoksella. Orgaaninen liuos 25 kuivattiin, haihdutettiin, minkä jälkeen sakka kuivattiin vakuumissa. Saatiin 3,1 g tuotetta. 3 g tätä tuo- 3 tetta sekoitettiin 2 tuntia 10 cm :n kanssa pentaania. Sentrifugoimalla, pesemällä ja sitten kuivaamalla saatiin 2,79 g tuotetta. Sp. = 162°C.

30 C= _78° + 2° (1 %, kloroformi).

Analyysi:

Arvioitu: C% 59,34 H% 9,37 N% 4,94 Saatu: 59,3 9,5 4,6.

_____ ι· 69473

Esimerkki 23: Erytromysiinin 9-/0-/<2-dietyyliamino- etoksi)metyyli/oksiimi

Esimerkin 21 mukaan saatua erytromysiinin 9-/0-/(2-kloorietoksi)metyyli/oksiimia 2,5 g 3 5 ja 10 cm dietyyliamiinia pannaan pullaan, joka suljetaan hermeettisesti. Tätä pidetään 70°C:ssa 48 tuntia, minkä jälkeen siirretään ympäröivään lämpötilaan. Haihdutetaan kuiviin alipaineessa. Saadaan 3,1 g hartsimaista ainetta, joka käsitellään kromatograafisesti piilo dioksidilla (eluentti: tolueeni-kloroformi-trietyyli- amiini 6-4-1). Homogeeniset fraktiot yhdistetään, haihdutetaan kuiviin alipaineessa, ja saadaan 1,5 g val- 3 koista hartsimaista ainetta, joka kiteytetään 5 cm :ssä isopropyylieetteriä. Saadaan ensimmäinen suihke 0,924 g 15 valkoista jauhetta. Sp. 135°C. Konsentroidut ja jätetyt emäliuokset antoivat toisen suihkeen 0,22 g.

Sp. = 12 2 °C.

- -74° + 1,5° (c = 1% kloroformissa).

Analyysi: 20 Arvioitu: C% 60,18 H% 9,53 N% 4,78 Saatu: 60,4 9,6 4,7.

Esimerkki 24: Erytromysiinin 9-/0-/(2-aminoetoksi)-metyyli/oksiimi 2,5 g esimerkin 21 mukaan saatua erytromysiinin 25 9-/0-/(2-kloorietoksi)metyyli/oksiimia jäähdytetään asetoni-hiilihappojää-seoksella, ja kondensoidaan argonissa ammoniakilla 2/3:aan astiasta. Suljetaan hermeettisesti, pidetään 50°C:ssa 20 tuntia minkä jälkeen jäähdytetään asetoni-hiilihappojää-hauteessa ennen 30 avaamista ja ammoniakin poistamista. Sakka otetaan kloroformiin, liuotin haihdutetaan alipaineessa, ja saadaan 2,3 g valkoista hartsimaista ainetta, joka käsitellään kromatograafisesti piidioksidilla eluoiden klo-rofromi-trietyyliamiini-seoksella (9-1). Homogeeniset 35 6 9 4 7 3 fraktiot yhdistetään. Haihdutetaan kuiviin, saadaan 1,3 g hartsimaista ainetta, jota sekoite- 3 taan 20 minuuttia 3 cm :ssä pentaania. Liukenematon 3 aine kiinteytetään, sentrifugoidaan, pestään 0,3 cm :llä 5 pentaania, kuivataan vakiopainoiseksi, ja saadaan 0,92 g valkoista jauhetta. Sp. 195°C.

- -7 3° + 2° (c = 1% kloroformissa).

Analyysi:

Arvioitu: C% 58,44 H% 9,19 N% 5,11 10 Saatu: 58,1 9,3 4,9.

Esimerkki 25: Erytromysiinin 9-/0-/(2-metyyliamino)-etoksi/metyyli/oksiimi Jäähdytetään -70°C:een 2,5 g esimerkin 21 mukaan saatua erytromysiinin 9-/0-/(2-kloorietoksi)-15 metyyli/oksiimia ja kondensoidaan 13,5 g metyyliamii-nia hermeettisesti suljetussa astiassa ja annetaan lämpötilan nousta ympäröivään lämpötilaan. Annetaan reaktion jatkua 41 tuntia. Jäähdytetään uudelleen -70°C:een, avataan astia ja sisällöin annetaan sekoit-20 taen palautua ympäröivään lämpötilaan. Metyyliamiini haihtuu. Kuivataan alipaineessa ja saadaan 2,7 g valkoista hartsimaista ainetta, joka käsitellään kroma-tograafisesti piidioksidilla (eluentti: kloroformi-trietyyliamiini 92,5-7,5). Homogeeniset fraktiot yh-25 distetään ja haihdutetaan alipaineessa. Saadaan 2,2 g 3 valkoista hartsimaista ainetta, joka kiteytetään 3 cm : 3 ssä etanolia. Sakka sentrifugoidaan, pestään 0,3 cm :llä etanolia, kuivataan, ja saadaan 1,7 g valkoista jauhetta. Sp. = 132°C.

30 ~ ”79° + 2° (c = 1% kloroformissa).

Analyysi:

Arvioitu: C% 58,9 H% 9,28 N% 5,03 Saatu: 59,1 9,4 5,0.

36 69473

Esimerkki 2 6: Erytromysiinin 9-/0-//2-(morfolin-4-yyli)-etoksi/metyyli/oksiimi

Sekoitetaan 2,5 g esimerkin 21 mukaan saatua erytromysiinin 9-/0-/(2-kloorietoksi)metyyli/oksiimia . 3 5 sekoittaen 10 cm :iin morfolunia hermeettisessä astiassa ja liuosta sekoitetaan 6 päivää ympäröivässä lämpötilassa. Haihdutetaan kuiviin ja saadaan 3 g valkoista hartsimaista ainetta, joka käsitellään kromatograa-gisesti piidioksidilla (eluentti: tolueeni-kloroformi-10 trietyyliamiini 6-4-1). Homogeeniset fraktiot yhdistetään ja haihdutetaan kuiviin alipaineessa. Saadaan 2,4 g valkoista hartsimaista ainetta, joka kiinteytetään 3 hieromalla 3 cm :ssä pentaani-isopropyylieetteri-seosta (1-) 20 minuuttia. Saatu tuote sentrifugoidaan, 3 15 pestään 0,3 cm :llä samaa pentaani-isopropyylieette-ri-seosta ja kuivataan. Saadaan 1,72 g valkoista jauhetta. Sp. 130°C.

ζ = -72° + 1,5° (c = 1% kloroformissa).

Analyysi: 20 Arvioitu: C% 59,24 H% 9,15 N% 4,71 Saatu: 58,9 9,1 4,5.

Esimerkki 27: Erytromysiinin 9-/0-/(metyylitio)metyy-li/oksiimi 3 g erytromysiinioksiimia sekoitetaan argonis- 3 25 sa 80 cm :im etyylieetteriä. Kun aine on liuennut, lisätään 0,212 g natriumhydridiä 50 %-sena öljysuspen-siona ja sekoitetaan vielä 15 minuuttia. Sitten lisätään yhdellä kertaa 0,386 g kloorimetyyli-metyylisulfi- 3 dia liuotettuna 1 cm :nn eetteriä. 30 minuutin kulut- 3 30 tua lisätään 8 cm dimetyyliformamidia. Puolentoista . 3 tunnin kuluttua lisätään vielä 8 cm dimetyyliformamidia. Yhden yön kuluttua lisätään 70 mg natriumhydridiä ja 0,129 g kloorimetyyli-metyylisulfidia. Puolentoista tunnin kuluttua kyllästetään hiilidioksidilla sitä 35 voimakkaasti johtaen puolentoista tunnin ajan ja saoste- 3 37 69473 taan 300 cm :llä kyllästettyä natriumkloridi-liuosta. Liukenematon aine sentrifugoidaan, otetaan kloroformiin, pestään natriumkloridi-liuoksella, kuivataan ja haihdutetaan kuiviin. Saadaan H,045 g raakaa tuotetta, 5 joka käsitellään kromatograafisesti piidioksidilla (eluentti: tolueeni-trietyyliamiini 9-1). Homogeeniset fraktiot kootaan ja haihdutetaan kuiviin vakuumis- sa, ja saadaan 1,3 g valkoista hartsimaista ainetta, . 3 joka kiteytetään hieromalla 7 cm :ssä petrolieette- 10 riä (kp. 65-75°C). Muodostunut tuote sentrifugoidaan, 3 pestään 0,7 cm :llä petrolieettenä ja kuivataan. Saadaan 0,93 g valkoista jauhetta. Sp. 132°C.

= ~75,5° + 2,5° (c = 0,45% kloroformissa). Analyysi: 15 Arvioitu: C% 57,9 H% 8,97 N% 3,46 S% 3,96 Saatu: 57,6 8,9 3,4 4,0.

Esimerkki 28: Erytromysiinin 9-/0-/(fenyylitio)me-tyyli/oksiimi

Liuotetaan 3 g erytromysiinioksiimia seokseen, 3 3 20 jossa on 10 cm eetteriä ja 10 cm heksametyylifosfo- triamidia. Eetteri haihdutetaan pois alipaineessa. Asetetaan argoniin ja lisätään useina kertoina ympäristön lämpötilassa 0,212 g 50 %-ista natriumhydridiä. Sekoi- 3 tetaan 15 minuuttia ja lisätään tipoittain 0,6 cm 25 kloorimetyyli-fenyylisulfidia. Reaktio keskeytetään 1 tunti 10 minuuttia lisäyksen loppumisesta kaatamal- 3 la seos 240 cm :iin 3/4:ksi kyllästettyä natriumkloridi-liuosta, jossa on 1 g natriumbikarbonaattia. Sekoitetaan 15 minuuttia ympäröivässä lämpötilassa, 30 muodostunut sakka sentrifugoidaan ja pestään 1 kerran vedellä. Se liuotetaan kloroformiin, pestään kyllästetyllä natriumkloridi-liuoksella, kuivataan ja haihdutetaan kuiviin alipaineessa. Saadaan 4,48 g vaalean keltaista hartsimaista ainetta, joka käsitellään kromato- ' ---- il . _ 38 6 9 4 7 3 graafisesti piidioksidilla (eluentti: kloroformi-tri- etyyliamiini 9-1). Homogeeniset fraktiot yhdistetään ja haihdutetaan kuiviin. Saadaan 3,2 g valkoista hart- 3 simaista ainetta, joka kiteytetään 10 cm :ssä pentaa-5 nia. Sekoitetaan 30 minuuttia ympäröivässä lämpötilassa, muodostunut tuote sentrifugoidaan ja pestään 0,5 3 cm :llä pentaania. Kuivataan ] a saadaan 2,39 g valkoista jauhetta. Sp. 198°C.

= "2,5° ί 1° = 0>5 % kloroformissa).

10 Analyysi:

Arvioitu: C% 60,6 H% 8,6 N% 3,3 S% 3,7 Saatu: 60,66 8,56 3,21 3,68.

Esimerkki 29: Erytromysiinin 9-/0-(2,2-dimetoksietyyli)-oksiimi 15 Liuotetaan 3 g erytromysiinioksiimia seokseen, 3 3 jossa on 10 cm eetteriä 3a 9,6 cm heksametyylifosfo-triamidia. Eetteri haihdutetaan kuiviin vakuumissa ja seos palautetaan ympäröivään lämpötilaan. Sitten lisätään useina kertoina 0,212 g natriumhydridiä 50 %:sena 20 öljysuspensiona, sekoitetaan 15 minuuttia ja lisätään 3 tipoittain 0,6 cm bromiasetaldehydi-dimetyyliasetaa- lia. Reaktio pysähdytetään 2 tunnin kuluttua kaatamal- 3 . .

la se 2 40 cm : iin 3/4:ksi kyllästettyä natriumklondi- liuosta, jossa on 1 g natriumbikarbonaattia. Sekoite-25 taan 10 minuuttia, sakka sentrifugoidaan, huuhdotaan 3/4:ksi kyllästetyllä natriumkloridi-liuoksella, pestään niin suurella määrällä kloroformia, että orgaaninen osa liukenee. Suodos kuivataan, haihdutetaan kuiviin alipaineessa, ja saadaan 5 g valkoista hart-30 simaista ainetta, joka käsitellään kromatograafisesti piidioksidilla (eluentti: tolueeni-trietyyliamidi- seos 9-1). Saadaan 3 g hartsimaista ainetta, joka kitey-3 tetään 5 cm :ssä pentaania. Muodostunut tuote sentri- 3 fugoidaan, huuhdotaan 0,5 cm :llä pentaania, kuivataan 35 alipaineessa, ja saadaan 1,912 g haluttua tuotetta.

Spx = 146°C, sp2 = 186°C.

39 69473 = -80° + 2,5° (c = 0,6 % kloroformissa).

Analyysi :

Arvioitu: C% 58,83 H% 9,15 N% 3,35 Saatu: 59,0 9,3 3,3.

5 Esimerkki 3 0: Erytromysiinin 9-/ 0-/ (1,3-dioksolan-2- yyli)metyyli/oksiimi 0 60 cm :iin eetteriä lisätään 3 g erytromysn-nioksiimia. Sitten lisätään useina kertoina 0,212 g 3 natriumhydridiä 50 %:sena öljysuspensiona, sitten 6 cm 10 dimetyyliformamidia. Sekoittamista jatketaan 15 minuut- 3 tia, sitten lisätään tipoittain 0,6 cm 2-bromime-tyyli-1,3-dioksolaania. 3 tunnin kuluttua haihdutetaan 3 eetteri argonissa ja huuhdotaan 1 cm :llä dimetyyliformamidia. Jätetään 1 yöksi ympäristön lämpötilaan 15 sekoittaen. Reaktion jatkuttua 19 tuntia lisätään 0,106 g 3 natriumhydridiä ja 0,15 cm 2-bromimetyyli-l,3-dioksolaania. 5 tunnin kuluttua reaktio pysäytetään johtamal- 3 · · la 1 tunnin a^an, sitten kaadetaan 140 cm :im kyllästettyä natriumkloridiliuosta. Sekoitetaan 10 mi-20 nuuttia, muodostunut sakka sentrifugoidaan ja liuotetaan kloroformiin. Liuos kuivataan, haihdutetaan kuiviin alipaineessa, ja saadaan 3,7 g hartsimaista ainetta, joka käsitellään kromatograafisesti piidioksidilla (eluentti:tolueeni-trietyyliamiini 9-1). Homogee-25 niset fraktiot yhdistetään ja haihdutetaan kuiviin.

Saadaan 1,55 g valkoista hartsimaista ainetta, joka 3 kiinteytetään 5 cm :ssä pentaania. Kuivattamisen jälkeen saadaan 1,227 g tuotetta. Sp^ = 140°C, sp2 = 208°C.

- -67,5° + 1,5° (c = 1% kloroformissa).

30 Analyysi:

Arvioitu: C% 58,91 H% 8,93 N% 3,35 Saatu: 59 8,9 3,3.

_ - Γ ho 69473

Esimerkki 31: Erytromysiinin 9-/0-/2-(dietyyliamino)-etyyli/oksiimi . 3

Liuotetaan 5,62 g erytromysiinioksiimia 50 cm :iin 3 tetrahydrofuraania, lisätään 1 cm 0,OH-molaansta 5 natriumkarbonaatti-liuosta, sitten 2,58 g 2-kloori-l-dietyyliamino-etaani kloorihydraattia. Reaktioseosta pidetään palautusjäähdyttäjässä 16 tuntia. Liukenematon aine eliminoidaan ja suodos käsitellään aktiivi-hiilellä ja konsentroidaan sitten kuivaksi, saadaan 6,21 g 10 raakaa tuotetta. Uudelleenkiteyttämisen jälkeen isopro-panoli-vesi-seoksessa saadaan 5,82 g värittömiä kiteitä. Sp = noin 220°C.

= "83° + 2,5° (c = 0,7% ,EtOH) .

Analyysi: H81 Ng 0χ3 15 Arvioitu: C% 60,9 H% 9,6 N% H,95 Saatu: 61,0 9,8 H,8.

Esimerkki 32: Erytromysiinin 9-/0-/2-(pyrrolidin-l-yyli)etyyli/oksiimi 3

Liuotetaan 2,25 g erytromysiinioksiimia 50 cm :iin 20 vedetöntä asetonia, lisätään 0,720 g natriumkarbonaattia ja 0,76 g N-C/3 -kloorietyyli)pyrrolidiini) kloorihydraattia. Pidetään palautusjäähdyttäjässä 6 päivää.

3

Lisätään HO cm asetonia ja liukenematon aine suoda- 3 tetaan kuumassa. Suodokseen kaadetaan 100 cm tislat-25 tua vettä ja sentrifugoimalla saadaan 2 g raakaa tuotetta, joka puhdistetaan ajamalla piidioksidin läpi eetteri-trietyyliamiini-seoksella (9-1). Saadaan 1,72 g haluttua tuotetta.

£oOd = -83° + 2° (c = 1% Et OH) .

30 Esimerkki 33: Erytromysiinin 9-/0-(metoksimetyyli)oksiimi 3

Liuotetaan 3,7 5 g erytromysiinioksiimia 7 5 cm :nn asetonia, lisätään 2,1 g natriumbikarbonaattia ja 1,3 g kloorimetyyli metyylieetteriä. Seosta pidetään palautus jäähdyttäjässä H päivää lisäten 17 tunnin 30 mi- 3 35 nuutin ja H8 tunnin kuluttua, kaksi kertaa 0,H5 cm 3 reagenssia. Reaktioseos kaadetaan 100 cm :un vettä ja 41 69473 ekstrahoidaan kloroformilla. Orgaaninen faasi pestään kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella, kuivataan, konsentroidaan kuivaksi alipaineessa. Sakka käsitellään kromatograafisesti piidioksidilla, eluoidaan bentseeni-5 kloroformi-trietyyliamiini-seoksella (5-4-1), ja saadaan 2,06 g haluttua tuotetta.

= -80,5° + 2,5° (c = 0,6%, etanoli) Kloorimetyyli-metyylieetteri valmistettiin seuraavalla tavalla: 3 3 10 Sekoitettiin 45 cm dimetoksimetaama ja 1,2 cm 3 vedetöntä metanolia ja lisättiin tipoittain 35,3 cm asetyylikloridia pitäen lämpötilaa noin 20°C:ssa. Sekoitettiin näin 3 päivää minkä jälkeen saatu reagenssi käytettiin sellaisenaan.

15 Esimerkki 34: Erytromysiinin 9-/0-/2-(piperidin-1-yyli)- etyyli/oksiimi 3

Liuotetaan 2,25 g erytromysiinioksiimia 50 cm :iin vedetöntä asetonia, lisätään 0,72 g natriumkarbonaattia ja 0,830 g 2-kloorietyyli N-piperidiinikloori-20 hydraattia. Seosta pidetään palautusjäähdyttäjässä 4 3 päivää. Sitten lisätään 40 cm asetonia, pidetään uudelleen palautusjäähdyttäjässä, liukenematon aine suodatetaan kuumassa ja suodos haihdutetaan kuivaksi. Sakka käsitellään kromatograafisesti piidioksidilla, eluoi-25 daan bentseeni-kloroformi-trietyyliamiini-seoksella (5-4-1), ja saadaan 1,7 g haluttua tuotetta.

- -7 8° + 2,5° (c = 0,6% etanoli).

Esimerkki 35: Erytromysiinin 9-/0-/2-(morfolin-4-yyli)-etyyli/oksiimi 3 30 60 cm :iin asetonia liuotetaan 2,25 g erytro mysiinioksiimia, lisätään 0,93 g natriumkarbonaattia ja 1,120 g N—/*-kloorietyyli morfoliinikloorihydraattia. Reaktioseosta pidetään palautusjäähdyttäjässä 6 päi- 3 vää. Lisätään 30 cm asetonia, pidetään uudelleen pa-35 lautusjäähdyttäjässä, liukenematon aine suodatetaan kuu- ....

42 69473 massa ja suodos konsentroidaan kuivaksi alipaineessa. Sakka otetaan kylmään asetoniin ja suodatetaan raaka tuote. Asetoniin liuottamisen, pieneen tilavuuteen konsentroimisen ja eetterin lisäämisen jälkeen sentri-5 fugoidaan, kuivataan, ja saadaan 1,45 g haluttua tuotetta.

= -7 3,5° + 3° (c = 0,5 % etanoli).

Analyysi: Hyg N3 0χΐ| = 862,112

Arvioitu: C% 59,9 H% 9,2 N% 4,87 10 Saatu: 59,9 9,3 4,7.

Esimerkki 36: Erytromysiinin 9-/0-(2-(dimetyyliamino)- 1-metyylietyyli/oksiimi . 3

Liuotetaan 20 g erytromysiinioksiimia 300 cm :iin asetonia, lisätään 6,4 g natriumkarbonaattia ja 60,35 g 15 2-kloori-l-dimetyyliaminopropaania. Reaktioseosta pide- 3 tään palautusjäähdyttäjässä 3 päivää. Lisätään 100 cm asetonia ja liukenematon aine suodatetaan. Suodos 3 käsitellään aktiivihiilellä ja lisätään 500 cm vettä. Kiteytynyt tuote suodatetaan ja saadaan 19,8 g ha-20 luttua tuotetta.

~ -96° (c = 0,75% etanoli).

Analyysi: C,^ H?g Ng 0^3 = 834,10 Arvioitu: C% 60,48 H% 9,54 N% 5,03 Saatu: 60,3 9,6 5,0.

25 Esimerkki 37: Erytromysiinin 9-/0-/(3-dimetyyliamino)- propyyli/oksiimi . 3 . .

Liuotetaan 3,7 5 g erytromysiinioksiimia 4 0 cm :nn vedetöntä asetonia, lisätään 1,2 g natriumkarbonaattia ja 1,22 g 3-kloori-dimetyyliaminopropyyli-kloorihyd- 30 raattia. Reaktioseosta pidetään palautusjäähdyttäjäs- . 3 sä 7 päivää. Lisätään 50 cm asetonia, kuumennetaan uudelleen ja suodatetaan liukenematon aine kuumassa.

3 3

Suodos konsentroidaan noin 5 cm :iin, lisätään 100 cm petrolieetteriä (kp: 60-80°C) ja sentrifugoidaan raa- 3 . .

35 ka tuote. Se liuotetaan noin 60 cm :iin asetonia, käsi- 4 3 69473 tellään aktiivihiilellä 40°C:ssa, suodatetaan. Suodos konsentroidaan pieneen tilavuuteen, lisätään vähitellen (petrolieetteriä kp: 60-80°), sitten annetaan jäähtyä ympäröivässä lämpötilassa. Sentrifugoimalla 5 saadaan 1,30 g haluttua tuotetta.

= -70° + 2° (c = 1% CHC13).

Analyysi: H7g Ng 0^g = 834,109

Arvioitu: C% 60,5 H% 9,5 N% 5,0 Saatu: 60,6 9,7 4,9.

10 Esimerkki 38: Erytromysiini 9-/0-(2-bromietyyli)oksiimi Sekoitetaan 5,62 g erytromysiinioksiimia ja 100 3 cm eetteriä. Lisätään 0,75 g natriumhydridiä ja eette- . 3 rm haihduttamisen jälkeen 15 cm 1,2-dibromietaania.

Reaktioseosta pidetään palautusjäähdyttäjässä 16 tun-15 tia, jäähdytetään 20°C:een natriumhydridin lisäämistä varten, 0,75 g, sitten kuumennetaan uudestaan palautus-jäähdyttäjässä 6 tuntia. Seos jäähdytetään noin 0°C:een, lisätään 100 cm metyleenikloridia ja tipoittain, se- 3 koittaen, 3 cm etikkahappoa. Sitten annetaan palau- 20 tua ympäröivään lämpötilaan ja reaktioseos kaadetaan 3 3 50 cm :iin vettä, jossa on 4 cm 28 %-sta ammoniakkia. Orgaaninen faasi erotetaan, vesifaasi ekstrahoidaan metyleenikloridilla. Orgaaniset faasit yhdistetään, pestään vedellä, kuivataan ja konsentroidaan kuivaksi.

25 Saatu sakka käsitellään kromatograafisesti piidioksidilla, eluoidaan metyleenikloridi-trietyyliamiini-seok-sella (25 - 0,5), ja saadaan 4,78 g haluttua tuotetta. (<JD = -87° + 2,5° (c = 0,5% Et OH).

Analyysi: C3g H71 Br N2 0^3 = 855,9 30 Arvioitu: C% 54,7 H% 8,3 N% 3,27 Br 9,3 Saatu: 54,6 8,3 3,2 9,2.

69473

Esimerkki 39: Erytromysiinin 9-/0-/2-/(metyylietyyli)-amino/etyyli/oksiimi 2,58 g erytromysiinin 9-/0-(2-bromietyyli)-oksii-3 mia ja 12 cm isopropyyliamiinia sekoitetaan 15 tuntia 5 ympäröivässä lämpötilassa ja inertissä atmosfäärissä.

3

Reaktioseos kaadetaan 600 cm :im vettä, saatu sakka sentrifugoidaan, pestään vedellä, kuivataan, ja saadaan 2,29 g raakaa tuotetta. Se puhdistetaan käsittelemällä kromatograafisesti piidioksidilla eluoiden 10 metyleenikloridi-trietyyliamiini-seoksella (25-0,5). Saadaan 1,60 g haluttua tuotetta.

C*)-q = -78,5° (c = 0,5% Et OH) .

Analyysi: Ng 0^g = 834

Arvioitu: C% 60,5 H% 9,55 N% 5,04 15 Saatu: 60,6 9,5 4,9.

Esimerkki 40: Erytromysiinin 9-/0-/(2-metyylipropoksi)-metyyli/oksiimi 3

Liuotetaan 4,49 g erytromysimioksiimia 40 cm : iin asetonia, lisätään 2,52 g natriumbikarbonaattia 20 ja 0,76 g kloorimetyyli-isobutyylieetteriä. Reaktioseos-ta pidetään palautusjäähdyttäjässä 41 tuntia lisä- 3 ten 18 tunnin ja 26 tunnin kuluttua 2 kertaa 0,4 cm kloorimetyyli-isobutyylieetteriä. Liukenematon aine suodatetaan ja suodos konsentroidaan kuivaksi. Sakka 3 2 5 otetaan 2 0 cm :nn kyllästettyä natriumbikarbonaatin vesiliuosta, liukenematon aine sentrifugoidaan, puhdistetaan käsittelemällä kromatograafisesti piidioksidilla, eluoiden bentseeni-trietyyliamiini-seoksel-la (15-1). Saadaan 3,07 g haluttua tuotetta.

30 = _79’5° ί 3° (c = 0,5% Et OH).

Analyysi: H?g N2 014 = 835

Arvioitu: C% 60,4 H% 9,4 N% 3,35 Saatu: 60,7 9,7 3,5.

3 69473 45

Esimerkki 41: Erytromysiinin 9-/0-/2-/bis(1-metyyli-etyyli)amino/etyyli/oksiimi

Liuotetaan 5,62 g erytromysiinioksiimia 50 cm :iin tetrahydrofuraania, lisätään 5,04 g natriumbikarbo-5 naattia ja 1,25 g 2-kloori-l-/bis(1-metyylietyyli)-aminoetaani kloorihydraattia. Reaktioseosta kuumennetaan palautusjäähdyttäjässä 4 päivää lisäten 64 tunnin kuluttua 0,82 g 2-kloori-l-/bis(1-metyylietyyli)-aminoetaani kloorihydraattia. Liukenematon aine suoda-10 tetaan ja suodos konsentroidaan kuivaksi. Saatu sekka käsitellään kromatograafisesti piidioksidilla. Eluoi-daan metyleenikloridi-trietyyliamiini-seoksella (25-05) ja saadaan 4,37 g haluttua tuotetta.

= -7 3° + 3° (c = 0,5% EtOH) .

15 Analyysi: C^g Hgg Ng 0^g = 876 Arvioitu: C% 61,7 H% 9,8 N% 4,8 Saatu: 61,7 9,9 4,7.

Esimerkki 42: Erytromysiinin 9-/0-/2-(dietoksi)etyy-li/oksiimi 20 Liuotetaan 5,62 g erytromysiinioksiimia seok- 3 seen, jossa on 18 cm heksametyylifosfotriamidia 3 ja 5 cm etyylieetteriä. Lisätään 0,4 g natriumhydri-diä 50 %-sena öljysuspensiona, sekoitetaan 15 minuut- 3 tia minkä jälkeen lisätään tipoittam 1,55 cm bromi-25 asetaldehydi dietyyliasetaalia. Sekoitetaan 3 tuntia 30 minuuttia 20°C:ssa, sitten kaadetaan 500 cm^:iin 2 g natriumbikarbonaattia sisältävää natriumkloridin vesiliuosta. Ekstrahoidaan eetterillä, pestään eette-rifaasi suolavedellä, kuivataan ja konsentroidaan kui-30 vaksi. Saadaan 6,35 g raakaa tuotetta, joka käsitellään kromatograafisesti piidioksidilla eluoiden bentseeni-trietyyliamiini-seoksella (9-1) ja sitten bentseeni-kloroformi-trietyyliamiini-seoksella (7-2-1), ja saadaan 1,7 g haluttua tuotetta.

45 69473 (*)-q = -75,5° + 2,5° (c = 0,65 % etanoli).

Analyysi: C^3 Hgg N2 0^ = 865,120 Arvioitu: C% 59,70 H% 9,32 N% 3,23 Saatu: 60,1 9,4 3,3.

5 Esimerkki 43: Erytromysiinin 9-/0-/2-(4-metyylipiperatsin- 1-yyli)etyyli/oksiimi

Liuotetaan 2,31 g esimerkin 38 mukaan saatua 3 . . . , bromipitoista johdannaista 10 cm :nn N-metyylipiper- atsiinia ja sekoitetaan 20°C:ssa 20 tuntia. Kaadetaan 3 . .

10 50 cm :iin vettä, jossa on 0,5 g kaliumkarbonaattia, sakka suodatetaan, pestään vedellä, kuivataan, ja saadaan 1,99 g raakaa tuotetta. Tuote liuotetaan mety-leenikloridiin, pestään natriumkarbonaatin vesiliuoksella, kuivataan, konsentroidaan kuivaksi, otetaan iso-15 propyylieetteriin, suodatetaan, liuotin eliminoidaan ja sakka pestään pentaanilla. Saadaan 0,94 g haluttua tuotetta.

= -81° + 2° (c = 1% etanoli).

Analyysi: C44 Hq2 N4 013 = 875,2 20 Arvioitu: C% 60,4 H% 9,45 N% 6,40 Saatu: 60,5 9,4 6,2.

Esimerkki 44: Erytromysiinin 9-/Q-/2-(etyyliamino)-etyyli/oksiimi

Pannaan 2,31 g esimerkin 38 mukaan saatua bromi-. 3 25 pitoista johdannaista 50 cm :in suuruiseen astiaan, jäähdytetään asetoni-hiilihappojää-seoksella minkä jälkeen lisätään mono-etyyliamiinia 2/3-tilavuuteen asti.

Suljetaan hermeettisesti, annetaan palautua ympäröivään lämpötilaan sekoittaen, jatketaan sekoittamis-30 ta 20 tuntia, jäähdytetään, avataan astia, eliminoidaan monoetyyliamiini, otetaan sakka veteen, suodatetaan, pestään vedellä, kuivataan, ja saadaan 2,3 g raakaa tuotetta, joka käsitellään kromatograafisesti piidioksidilla eluoiden metyleenikloridi-trietyyliamiini-seok-35 sella (25-0,5), ja saadaan 1,76 g haluttua tuotetta.

47 69473 - -82° + 2° (c = 1%, etanoli).

Analyysi: 0-^3 = 820

Arvioitu: C% 60,05 H% 9,47 N% 5,12 Saatu: 60,5 9,5 4,7.

5 Esimerkki 45: Erytromysiinin 9-/0-(2-aminoetyyli)oksiimi

Pannaan 4,5 g esimerkin 38 mukaan saatua bromi- 3 piioista johdannaista 50 cm :in suuruiseen astiaan. Jäähdytetään asetoni-hiilihappojää-seoksella ja lisä- 3 .

tään 20 cm ammoniakkia. Suljetaan hermeettisesti, an-10 netaan palautua 20°C:een ja jatketaan sekoittamista 68 tuntia. Jäähdytetään, eliminoidaan ammoniakki, otetaan metyleenikloridiin, pestään vedellä, kuivataan ja haihdutetaan kuiviin. Saadaan 3,97 g raakaa tuotetta, joka käsitellään kromatograafisesti piidioksidilla 15 eluoiden metyleenikloridi-trietyyliamiini-seoksella (19-1). Saatu tuote otetaan uudestaan metyleenikloridiin, liuos pestään natriumkarbonaatin vesiliuoksella, kuivataan ja konsentroidaan kuiviin. Sakka käsitellään uudelleen kromatograafisesti piidioksilla elu-20 oiden kloroformi-trietyyliamiini-seoksella (15-1), ja saadaan 1,67 g haluttua tuotetta. f°(JP = -76° + 2° (c = 0,8% etanoli)

Analyysi: C3g H73 Ng 0^ = 792 Arvioitu: C% 59,1 H% 8,3 N% 5,3 25 Saatu: 59,4 9,4 5,2.

Esimerkki 46: Erytromysiinin 9-/0-/2-(dietyyliaminoNiinet yylietyy li/oksi imi 3

Liuotetaan 2 g erytromysiinioksiimia 3 0 cm :nn asetonia. Lisätään 0,64 g natriumkarbonaattia, sit-30 ten 0,8 g l-dietyyliamino-2-klooripropaani kloorihydraat-tia ja pidetään palautusjäähdyttäjässä 23 tuntia. Epäorgaaniset suolat suodatetaan, lisätään suodokseen vettä, sentrifugoidaan kiteet, pestään ne asetoni-vesi-seoksella, kuivataan, ja saadaan 1,9 g haluttua tuotetta.

^ 69473 C**)-Q - -84° + 2,5° (c = 0,75% etanoli).

Analyysi: C44 Hg3 Ng 0 = 862,164

Arvioitu: C% 61,3 H% 9,7 N% 4,87 Saatu: 61,4 9,7 4,8.

5 Esimerkki 47: Erytromysiinin 9-/0-(oksiramyylimetyyli)- oksiimi 3 . .

Liuotetaan 5 g erytromysiimoksiimia 2 3 cm :nn dimetyyliformamidia, sitten lisätään hitaasti 354 mg natriumhydridiä 50 %-sena öljysuspensiona, sekoite- 3 10 taan 15 minuuttia, sitten lisätään tipoittain 1 g 1 cm : iin dimetyyliformamidia liuotettua epibromihydriiniä. Tämän jälkeen neutraloidaan johtamalla hiilidioksidia, 3 kaadetaan seos 250 cm :iin kyllästettyä natriurnkloridm vesiliuosta, sekoitetaan 10 minuuttia minkä jälkeen 15 muodostunut sakka sentrifugoidaan. Se huuhdellaan vedellä ja liuotetaan sitten kloroformiin, kuivataan, käsitellään aktiivihiilellä, konsentroidaan kuivaksi, ja kiteytetään pentaanissa. Saadaan 4,1 g raaka tuotetta, joka käsitellään kromatograafisesti piidioksidilla elu-20 oiden kloroformi-trietyyliamiinilla (9-11). Kiteyt-tämisen jälkeen pentaanissa saadaan 0,87 g haluttua tuotetta. Sp. = 154°C.

= “79° + 2,5° (o - 0,5% kloroformi).

Analyysi: C4Q H?2 N2 03l+ = 805 25 Arvioitu: C% 59,68 H% 9,01 N% 3,48 Saatu: 59,6 6,1 3,5.

Esimerkki 48: Erytromysiinin 9-/0-/3-(dimetyyliamino)- 2-hydroksipropyyli/oksiimi Pannaan 2,5 g esimerkin 47 mukaan saatua tuotet-30 ta astiaan, joka suljetaan hermeettisesti ja jäähdytetään jäähauteessa. Lisätään nopeasti 2,8 g dimetyy-liamiinia, suljetaan astia uudestaan, ja sekoitetaan 20°C:ssa 4 tuntia 10 minuuttia. Jäähdytetään uudestaan, avataan astia ja eliminoidaan dimetyyliamiini.

35 Sakka käsitellään kromatograafisesti piidioksidilla elu- 49 69473 oiden kloroformi-trietyyliamiini-seoksella (9-1), ja pentaanilla kiteyttämisen ja kuivaamisen jälkeen saadaan 1,21 g haluttua tuotetta. Sp. = 144°C. ζ - -84,5 + 2,5° (c = 0,6 %, kloroformi).

5 Analyysi: H?g 0^ = 850,10

Arvioitu: C% 59,34 H% 9,37 N% 4,94 Saatu: 59,1 9,4 4,8.

Esimerkki 49: Erytromysiinin 9-/0-/2-(dietyyliamino)-etyyli/oksiimi 10 (Toinen oksiimi-isomeeri kuin esimerkin 31 mu kainen tuote).

Lähtöaineena on 4,5 g erytromysiinioksiimia (toista isomeeriä kuin esimerkissä 31 käytetty), joka 3 liuotetaan 45 cm :iin tetrahydrofuraania. Lisätään 2,6 g 15 natriumkarbonaattia, sitten 2,1 g dietyyliaminoetyyli-kloridi kloorihydraattia. Pidetään palautusjäähdyitä-jässä 5 tuntia 30 minuuttia. Suodatetaan, suodos konsentroidaan kuiviin, ja sakka käsitellään kromatograafisesti piidioksidilla eluoiden bentseeni-kloroformi-20 trietyyliamiini-seoksella (5-4-1), sitten metyleeni- kloridi-trietyyliamiini-seoksella (15-1). Saadaan 0,5 g haluttua tuotetta.

= -52° + 2,5° (c = 0,5 % etanoli).

Analyysi: C43 Hgi Ng 0χ3 25 Arvioitu: C% 60,89 N% 9,62 N% 4,95 Saatu: 61,2 9,7 4,9.

___ - ΤΓ . ____ so 69473

Esimerkki 50: Erytromysiinin 9-/£)7(2-metoksietoksi)- metyylijoksiimi 3,6 g erytromysiinioksiimia, joka on ohutkalvokroma- 3 tografoitaessa eniten polaarista, liuotetaan 36 cm :iin 5 asetonia, liuokseen lisätään 2,7 g natriumkarbonaattia 3 ja 1 cm metoksietoksimetyylikloridia. Reaktioseosta keitetään palautusjäähdyttäen 18 h ajan. Liukenemattomat suolat suodatetaan pois ja suodos haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös kromatografoidaan piidi-10 oksidikolonnissa bentseeni/kloroformi7trietyyliamiini-seoksella (5:4-:1) eluoimalla. Tällöin saadaan 1,5 g haluttua yhdistettä kahtena jakeena.

L&-2-Q = - 52° + 2 (c = 0,5 % etanoli)

Rf = 0,25 (bentseeni/Tclorof ormijtrietyyliamiini: 15 55 : 35 : 10)

Esimerkki 51: Erytromysiinin 9-/0(propoksimetyyli)- oksiimi 212 mg natriumhydridiä lisätään suspensioon, jossa . . 3 on 3 g erytromysiinioksiimia, 10 cm dimetyyliformamidia 3 20 ja 5 cm etyylieetteriä. Seosta sekoitetaan 15 min ajan . . 3 huoneen lämpötilassa, sitten lisätään 1 cm kloorimetyyli- propyylieettenä. Sen jälkeen lisätään 10 cm eetteriä ja suspensiota sekoitetaan 6 h ajan huoneen lämpötilassa.

. 3

Reaktloseos kaadetaan 75 cm :iin natriumkloridin vesi-3 25 liuosta 23 cm :n kanssa natriumkarbonaatin kyllästettyä vesiliuosta. Muodostunut saostuma suodatetaan ja pestään vedellä. Saostuma kuivataan, jolloin saadaan 3,6 g raakatuotetta. Tämä kromatografoidaan piidioksidikolon-nissa käyttämällä eluointiaineena bentseeni/kloroformi? 30 trietyyliamiini-seosta 55 : 35 : 10. Tällöin saadaan 0,895 g haluttua yhdistettä. Toinen jae 0,971 g puhdistetaan uudelleen (bentseeni/ikloroformi/trietyyliamiini-seos 35 : 55 : 10). Tällöin saadaan 0,41 g lisää yhdistettä.

L cl·]-Q - -81,5 + 2,5° (c = 0,75 % etanoli) 35 Rf = 0,4 (bentseeni£kloroformi7trietyyliamiini 5:4:1)

Rf = 0,2 (eetteri/trietyyliamiini 9 : 1) 51 69473

Esimerkki 52: Erytromysiinin 9/-0/2-(dietyyliamino)-1,1- dimetyylietyylioksiimi/ 2,99 g erytromysiinioksiimia liuotetaan typpivirras- 3 sa 30 cm asetonia, sitten lisätään 1,06 g natriumkarbo-5 naattia ja sen jälkeen 1,2 g N,N-dietyyli-2-kloori-2-me-tyylipropyyliamiinihydrokloridia. Seosta keitetään palautus jäähdyttäen ja sekoittaen typpivirrassa. 20 h jälkeen lisätään 0,3 g N,N-dietyyli-2-kloori-2-metyylipropyyli-amiinihydrokloridia ja refluksointia jatketaan 6 h ajan.

10 Epäorgaaniset suolat suodatetaan pois, huuhdellaan asetonilla ja asetonisuodos haihdutetaan kuiviin. Jäännös 3 otetaan 20 cm :iin asetonia ja saostus suoritetaan lisää- 3 mällä 50 cm vettä. Tällöin saadaan 3,5 g amorfista 3 . .

kiinteätä ainetta, joka liuotetaan 60 cm :nn asetonia.

3 15 Liuosta keitetään palautusjäähdyttäen ja lisätään 35 cm kuumaa vettä. Jäähdyttyään liuos kiteytyy. Annetaan seistä 2 h ajan huoneen lämpötilassa ja sitten 2 h ajan 0-5°C:ssa. Seos suodatetaan ja pestään asetonin ja veden seoksella 1:1, jolloin saadaan 2,756 g haluttua yhdis-20 tettä.

foi/d = -68,5° + 2,3° (c = 0,5 % etanoli)

Analyysi C^Hg^O^

Laskettu: C % 61,8 H%9,8 N % 4,8 Löydetty: 62 9,8 4,7 2 5 Esimerkki 53: Erytromysiinin 9-/0-/2-(dietyyli) (oksido)amino/etyyli/oksiimi ... ... . 3 . .

3 g erytromysiinioksiimia liuotetaan 30 cm :nn tetrahydrofuraania ja liuokseen lisätään 2,12 g natrium-karbonaattia ja 1,5 g l-kloori-2-Z(dietyyli)(oksido)-30 amino7etyylihydrokloridia. Seosta keitetään palautus-jäähdyttäen 76 h ajan. Sitten epäorgaaniset suolat suodatetaan pois ja huuhdellaan tetrahydrofuraanilla. Suo- 3 dos haihdutetaan tilavuuteen 15-20 cm . Sitten laimenne- 3 . . 3 taan 70 cm :llä asetonia ja lisätään 180 cm vettä.

35 Saadaan saostuma, joka suodatetaan ja huuhdellaan veden ___________ - Γ 52‘ 69473 ja asetonin seoksella (2:1). Saostuma pestään, jolloin saadaan 3 g raakatuotetta, joka kromatografoidaan piidi- oksidikolonnissa (eluointiaine: bentseeni/fkloroformi7tri- etyyliamiiniseos 55 : 35 : 10). Ensimmäinen jae otetaan 3 5 100 cm :nn pentaania. Saadaan 1,12 g tuotetta, 0,41 g hartsia ei kiteydy. Otetaan toinen 0,077 g:n fraktio ja 0,41 g kiteytymätöntä ainetta. Kromatografoidaan piidi-oksidikolonnissa (eluointiaine: bentseeni/trietyyliamiini-seos 9:1), jolloin saadaan 0,35 g lisää haluttua yhids-10 tettä.

L^J-q - -72° +_ 3° ( c = 0,5 etanoli)

Analyys 1 C43H81N3°14

Laskettu: C % 59,77 H % 9,45 N % 4,86 Löydetty: 59,3 9,5 4,8 15 Esimerkki 54: Erytromysiinin 9-/0-/(fenyylisulfinyyli)- metyyli/oksiimi/ ... 3 11,23 g erytromysiinioksixmia liuotetaan 50 cm :ixn heksametyylifosfotriamidia ja lisätään 900 mg natrium- hydridia 50-prosenttisena suspensiona. Seosta sekoite- 20 taan 10 min ajan ja sitten lisätään 5,3 g jodimetyyli- fenyylisulfoksidia. Seosta sekoitetaan 2 h ajan huoneen lämpötilassa typpivirrassa. Reaktioseos kaadetaan 200 3 . .

cm :im vettä, saostuma suodatetaan, pestään vedellä 3a 3 tnturoidaan 50 cm :ssä heksaania. Sitten kuivataan, 25 jolloin saadaan 10,05 g tuotetta, joka kromatografoidaan piidioksidikolonnissa (eluointiaine kloroformi/trietyyli-amiini-seos (21:1). Tällöin saadaan 8,6 g tuotetta, jota kuivataan 16 h uunissa alennetussa paineessa. Kahden isomeerin seos voidaan erottaa bentseeni/_kloroformi_7trietyyli-30 amiini-seoksessa (55:35:10)

Rf = 0,18 - 0,20 tai dikloorimetyyli/metanolij ammoniakkiseoksessa (95:10:1)

Rf = 0,24 - 0,29 Analyysi: 35 Laskettu: C%59,6 H%8,4 N%3,2 S%3,6 Löydetty: 59,6 8,5 3,2 3,6 53 69473 Lähtöaineena käytetty jodimetyyiifenyylisulfoksidi on kuvattu artikkeleissa Synthesis 1971, 2_, 90 ja 1976 , 10, 598.

Esimerkki 55: Erytromysiinin 9-/0-(2,3-dlhydroksipropyyli)- 5 oks iimi 1,5 g erytromysiinin 9-/0-(3-asetyylioksi-2-hydroksi- 3 . .

propyylioksiimia liuotetaan 20 cm :iin etanolia. Liuok- 3 3 seen lisätään 10 cm vettä, sitten 3 cm väkevää ammoniak- 3 kiliuosta (38-prosenttista) ja sen jälkeen 5 cm vettä.

10 Reaktioseosta kuumennetaan 50°C:ssa 3 h 15 min ajan ja sen jälkeen sekoitetaan 16 h ajan huoneen lämpötilassa.

3 3

Reaktioseokseen lisätään 100 cm ja sitten 100 cm kloroformia. Sitten lisätään natriumkloridia ja kloroformi-faasi erotetaan. Hydrokloridifaasit pestään natrium-15 kloridin kyllästetyllä vesiliuoksella ja pestään. Suodatetaan, haihdutetaan kuiviin, jolloin saadaan 1,42 g raakatuotetta, joka puhdistetaan kromatografoimalla pii-dioksidikolonnissa (eluointiaine : kloroformi/metanoli./ ammoniakki 9:20:1). Saadaan 1,08 g puhdasta yhdistettä.

20 ZV/D = +68° + 2,5° (c = 0,5 % etanoli)

Analyysi: C40H?l+N2015 = 823,04

Laskettu: C % 58,37 H % 9,06 N % 3,4 Löydetty: 58,3 9,0 3,5 Lähtöaineena käytetty erytromysiinin 9-/0-(3-asetyy-25 löksi-2-hydroksipropyyli)oksiimi valmistetaan seuraavasti: 5 g erytromysiinin 9-/0-(oksiranyylimetyyli)oksiimia 3 . .

liuotetaan 125 cm :un dimetyyliformamidia ja liuokseen lisätään 2,5 g kaliumasetaattia. Reaktioseosta sekoitetaan 90°C:ssa 16 h. Seos kaadetaan 500 cm3:iin jäävettä 30 ja uutetaan sitten kloroformilla. Kloroformifaasit pestään natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella ja kuivataan. Suodatetaan ja liuotin haihdutetaan pois alennetussa paineessa, jolloin saadaan 3,5 g raakatuotetta, joka kromatografoidaan piidioksidikolonnissa (eluointi-35 aine: kloroformi/trietyyliamiini-seos 9:1). Tällöin 5" 69473 saadaan 1,35 g tuotetta, joka kromatografoidaan uudelleen piidioksikolonnissa Celuointiaine: metyleenikloridi/meta-noli/ammoniakkiseos 95 : 10 : 1). Tällöin saadaan 0,888 g haluttua yhdistettä.

5 Cctj^ = -76,5° + 3°

Analyysi: ^42^76^2^16 =

Laskettu: C%58,3 H % 8,85 N % 3,23 Löydetty: 58,1 8,9 3,2

Esimerkki 56: Erytromysiinin 9-/0//2-(metoksi)etoksi/- 10 metyyli/oksiimiglutamaatti 1 g erytromysiini-9/0//2-metoksi)etoksi/metyyli/- . 3 . .

oksiimia liuotetaan 4 cm :nn etanolia ja liuokseen lisä- ... 3 tään 0,175 g glutamunihappoa 8 cm :ssa tislattua vettä. Reaktioseos suodatetaan ja haihdutetaan kuiviin alennetus-15 sa paineessa, jolloin saadaan 1,04 g yhdistettä.

= -55° (c = 0,1 % etanoli)

Analyysi ^41^76^2^15 = ^84,19 Laskettu: C % 56,m H % 8,70 N % 4,27 55,8 8,7 4,4 20 Esimerkki 57: erytromysiinin L-9-/0(2-dietyyliamino)- etyylioksiimi/-tartraatti 1,696 erytromysiini-9/0(2-dietyyliamino)etyylioksii-3 .

mia liuotetaan 8 cm :nn etanolia ja liuokseen lisätään 0,3 g tartraattihappoa. Reaktioseos suodatetaan ja haih-25 dutetaan kuiviin alennetussa paineessa, jolloin saadaan 2,026 g yhdistettä /.o^7d = -56,5° (c = 1 % etanoli)

Analyysi C43H8iN3°i3 = 998,22 Laskettu: C % 56,55 H % 8,78 N % 4,21 30 Löydetty: 56,4 8,8 4,0 55 69473

Esimerkki 58: Erytromysiinin 9-/0/(2-metoksi)etoksl/- metyyli/oksiimi/-2'-propanoaatti Liuokseen, jossa on 8,37 g erytromysiini-9-/0//2- _ 3 .

metoksi)etoksi/jnetyyli/oksiimia 30 cm :ssä asetonia, li- 3 ~ ...

sätään 1,6 cm propionihappoanhydridiä ja sekoitetaan 3 5 huoneen lämpötilassa 2 h ajan. Sitten lisätään 1,7 cm 3 28-prosenttista ammoniakkia laimennettuna 40 cm :ssa vet- 3 .

tä. Koko seos kaadetaan 100 cm :nn vettä. Suodatetaan, 3 . .

huuhdellaan vedellä, kuivataan, liuotetaan 30 cm :nn . 3 asetonia ja saostetaan 100 cm vettä. Tällöin saadaan 10 7,2 g tuotetta, joka kiteytetään uudelleen sykloheksaa- nista, saadaan4,33 g haluttua yhdistettä.

Cc^jp = -78,5° _+ a,5° (c = 0,7 % etanoli)

Analyysi: Ci44H8oN20l6 = 893’12

Laskettu: C % 59,2 H % 9,0 N % 3,1 15 Löydetty: 58,9 9,0 3,1

Farmakologinen tutkielma keksinnön mukaisista tuotteista A) Teho in vitro:

Laimennusmenetelmä nestemäisessä ympäristössä: Järjestetään sarja putkia, joihin jaetaan sama mää-20 rä steriiliä ravintoalustaa. Jokaiseen putkeen pannaan nouseva määrä tutkimuksen alaisena olevaa tuotetta, minkä jälkeen jokaiseen putkeen istutetaan bakteerikanta.

Kahdenkymmenen neljän tunnin idättämisen jälkeen kuivatus-uunissa 37°C:ssa kasvun estyminen arvioitiin 25 läpivalaisemalla, mikä tekee mahdolliseksi minimaaliset 3 estäjäkonsentraatiot (C.M.I.) ilmaistuina ug/cm :ssä.

On saatu seuraavia tuloksia: -- ' r se 69473 I I I I I —j-r-1- ! -H ™ | j ^ j O ! r ! r ί r

i W ^ O I r- I o i ο ί o ! o ! O

i-^-j-!--i-!-- w ! j { o ! o ! O ! in e ^ | ο ι ο ι ο ι o L*__j_I i'i 1 ! - ; i ^ ! ! t . J j j ο i m i cm i m I ^ j m I o I ο ί o ! o -s--1_1_I_l I !_

co _ I I I I f I

• Ό | ^ j <- i cm i cm i cm

.¾ ° J I o j O I o ! o’* ! O

en 'lii --- !-i_i_L_

04 _ I CM I I I

- ! J ^ j o J r- 1 ,- t CM

I ° i " I ° i i °! °"! ° _ i πη i I— I o j « j . , o j d j o j o ——KH—M— I till I ! o ! ! I ! ! i": ! ! ! : a 1 IS! I i i ! o II I I <,

t) j I ϊ= I -r- 1 C\J I

Φ / ·, I VO i *-\ ! fc, I π 4-> I P? 'c- i * i IT\ I <} ί I u~t s / < i .¾ ! £ί < i ·"j si * fij ' ... * I ! tO W I j) I n £ I % g ; « j ? ί ή I -ί o m / g £: h fc5 ' '· i υ t 2 § 3 Si R! S i S I “ .5 » ! m S I « I α I i " I d P / Ο !':'+-' :31ϋ5ί’Λ!ίΟ|-Ρ

p / ^ icjcioi3i3r ~ci_Q

-p /¾ ? ί o o I υ I O I U I b i 3

C O-PIO+^IOIO O O W

5 / I §| o “ I Si si si gi a H I >| 1 ?, » ! £ I 5 I S I ί ί = _· / 8> o.< ! & e I o. 1 S' I « I S'! 3 " % -SS I SS! S! fj “ 0 cj 1 »» SI S! s| j| s »—-!_t 1 1 1 t_ 57 694 7 3 _ *“H IA to

^ ‘Ί ^ ·* O 0_ <D

^ ° O o o o' o' o'

*“H LA

<f Ί -* ^ O O -, CN

w ° O o' o' o' o" o'

V

0 ^ 0_ ~< tNi ^ ° -4 o o o o' o' - . —i vn tn

cs - ^ Om O^ O CN

™ ° 0 Ο Ο o' O* o' μ v/ cu ----------------

(U

^ tN Ο —I

8 N ° ° o o O o 1 -μ

CO Q ^ ^ ^ —♦ CN

’jj ^ c °' o o' o' o' o' g - *- o ~ - * Ο o ooooo"

Oi ιΛ Η Ό ^ £. "C O. ^ ° ° O o' o' o' ~ m ^ ^ Ί 1 ^ Ό ° -1 Ο O o o' o' <r °i 'C ^ O ~ o <r ^ 0 ® ooooo * CM .-1 ~]~ o "C £. '* °„ ο -H sr ^ ° O o o' o' o' o' o *—( «3 ^ rrt ^ ^ —* D _ ^ ^ 04 U, in μ 3 ~ ^ ^ ^ b 2 ^ ^ £

nH -I O OJ

5 3 .g « 3 .3 .2 .s C ^ P 2 « *« « « g +, g g 3 §* s s a S j! 03 α .μ 10 >-> m co ca μ j— .,-} Cu u-} u_t u_, 4-) C 2 “ 4_j « ^ y u o^r!2WWo> ^ -B o H(UU33D3

CNJ -ri 2 4-.^4-10 O o o U

H ° :¾ ° ω ο Ο ο Ο 0

& O ^ A ^ 2 ° 0 O Q

H <u ° t) ® CO 0 o O 0 0 -H T* a; o' aj —· O 0 0 0 • S >» λ « o S £ S fy ί,·5ι*= o· cu cu a.

cq ™ £ £ £ 2· φ <u « S- . 2 53 <o ai 0 k u, u u w w - w cn to CO £ '- ---------Γ -- !.

58 6 9 4 7 3 νο *Ί ^ 'K O - H m ° ° ° ° ° o' o' o v _ m «Λ» » Ό O tN < ^ ° - 9* o 0* o" - ST * * ^ ° - S es ^ ° ° o o' o* o' o" --------------------;*_______________ _ es

ΓΛ » 'Ί ° — —i CS

•jj ° ° O o O O o +1 8 es OOO-HCV4

^ ° - O o O O O

en --------------- 3 t. g

-¾ <-t « O —I

£ ,ΡΊ ° —· ήο o o' 1 e ____ oi I o * * 2 * I'00 o O O o" O* « σ\ ^ ^ sr es " ° - 0 0 0 0 - CO ^°. o S CM CM <r N ° o o o o o o

vO ^ — Ό — <N CS

N ° ° o" o o' ο- νο sr

—H

rrt oo «» ;£ S «N U-, ^ ^ H — m £ t* | Ξ g * « 2 £ 2 * % 3 g s .2 .2 .2 .5 g g S 5 ^ -

I S 3 3 g i 8 S S

3 S ** -μ ^ <0 <o <q -M S m «TJot-0* ^ ^ a· -5 o 2 C 3 « «w« es -H O 1>53H 3 333 ^ 8^8^°¾ 888 M S °| o -S 8 8 8 8 8 a 1 J i 2 2 2 2 o H 2 δ 2 8 8 2 2 s &., a * s.. a., a. a £ 69473 in oo ^ o <r *-η ° Ο Ο Ο* θ' ο* —, ^ ^ Ο <Ν cm ομ ° ° ο" θ' θ" Ο* ο" ti 1) -------------------------- -Μ — 4-J - . _ H LT\ Q ο ^ ^ <3 0.-.

-Ρ ^ ° ° ο ο" ο ο” Ο Ν* -Ρ 0) --------------- 10 ---------------------- d o r;

{Q ΙΤ> Μ ^ CM

3 ^ ° -· -ιο o' ο o' Β g -------------------------------------- fj '-•m go «s o sr ^ w - o o' o' o" 3 ^ tn .______ W m

_ Ό o CM CM

° -« —I O O o 1 CT, ^ ^ O O O i—» ^ ° O θ' o' O* o" o“ ___ V/

VO

» <r ^ cm m -h S _ Z! ^ CM ex. in 3 3 o. Z! o p Oo 5* ^ ^ o\ <r ij X <1 ^ o m *h ^ ς> 1 ti - 5 « « 2 .2 .2 .2 22 .5 ti g g 3 o ä S ä § S « <o ti w ^ ^ ^ .h 3 3 ti 3 3 332 ~ I s| §.a § S S s s H ' f Jl Ϊ S 22£ s “ Il f i Ϊ s- s- s· 6 _ M ft M & w W H w £ 60 69473 ,>

Teho in vivo

Kokeellinen infektio Staphylococcus aureus-bakteerilla. exp.n:o 54 146.

Tutkittiin muutamien esimerkkien mukaisten 5 tuotteiden ja erytromysiinin vaikutusta

Staphylococcus aureus-bakteerilla hiirille aikaansaatuun kokeelliseen infektioon.

Infektoitiin kymmenen koinashiiren eriä, hiirten painon ollessa keskimäärin 21 g, ruiskuttamalla vatsa- 3 10 onteloon 0,5 cm Staphylococcus aureus-kannan n:o 54 146 22 tunnin lihaliemiviljelmää, jonka pH=7, liuotettuna fysiologiseen keittosuolaliuokseen 1:6.

l:n, 5:n ja 24:n tunnin kuluttua infektoimises-ta annettiin suun kautta määrätty määrä tuotetta.

15 Todettiin kuolleisuutta 8:ntena päivänä.

Tulokset olivat seuraavat:

Annokset Elossa olevat hiiret - 8:ntena päivänä_

Tuotteet_0,25mg 0,5mg 0,75 mg 1 mg 1,5 mg 2 mg_

Tuote esim.l 7 10 ^ Tuote esim. 3 7 9 9

Tuote esim. 4 0 4 9 10

Tuote esim. 5 2 8 10

Tuote esim. 15 1 9 10

Tuote esim.20 2 4 10 2 5 Tuote esim. 21 0 6 10

Tuote esim. 29 2 8 9 10

Tuote esim. 30 2 7 10

Tuote esim. 31 4 10

Tuote esim. 33 7 10 30 Tuote esim. 35 2 89 10

Tuote esim. 36 3 9 10

Tuote esim. 41 9 10

Erytromysiini 5 9 9 10 61 69473 b) Kokeellinen infektio Streptococcus pyogenes A 561-bakteerilla.

Tutkittiin esimerkeissä 1 ja 5 selostettujen tuotteiden vaikutusta Streptococcus pyogenes A 5 61-5 bakteerilla aikaansaatuun infektioon hiirillä.

Infektoitiin 10:n keskimäärin 21 g:n painoisen 3 koirashiiren eriä ruiskuttamalla vatsaonteloon 0,5 cm Streptococcus pyogenes A 561-kannasta valmistettua 22 tunnin Todd Hewitt-lihaliemi (pH = 7,8)-viljelmää laimen-10 nettuna 1/1000:ksi fysiologisella keittosuolaliuoksella.

l:n, 5:n ja 24:n tunnin kuluttua infektoimisesta annettiin suun kautta määrätty määrä tuotetta.

Todettiin kuolleisuutta 5:ntenä päivänä.

Tulokset olivat seuraavat: 15

Annokset Elossa olevat hiiret 5:ntenä päivänä_

Tuotteet_0,1 mg 0,5 mg 1 mg

Esim. l:n tuote 2 10

Esim. 5:n tuote 10

Claims (9)

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten erytromysiinijohdannaisten valmistamiseksi, joiden kaava 5 on (I) R-A-CL ?H3 , V \ N(CH ) * “"Λ "<> k-·™..» i 1 HO Vv'0'^XCHo CI) ^112 1 3

15 Y 3 Ύ" CH3 o H3c'^ ^0CH3 20 jossa A on suoraketjuinen tai haarautunut, 1-6 hiili-atomia sisältävä alkyleeniryhmä, ja R on joko enintään 6 hiiliatomia sisältävä aikoksi- ryhmä, tai enintään 6 hiiliatomia sisältävä alkyyli-25 tioryhmä, jossa rikkiatomi voi olla hapetettu sulfoksi-diksi tai sulfoniksi, jolloin kumpikin mainituista ryhmistä voi olla substituoi-tu yhdellä tai useammalla seuraavista ryhmistä: hydroksi, 1-6 hiiliatomia sisältävä alkoksi, 1-6 hiiliatomia sisäl-30 tävä alkyylitio, halogeeni, amino, metyyliamino, dimetyy-liamino, N-morfolino, tai fenyylioksi- tai bentsyylioksiryhmä, joka voi olla substituoitu halogeenilla, tai fenyylitioryhmä, joka voi olla substituoi-35 tu halogeenilla ja/tai jossa rikkiatomi voi ollahapetettu sulfoksidiksi tai sulfoniksi, 69473 63 tai R on ryhmä /R1 -N R2 5 ]ossa ja R2, jotka voivat olla samoja tai erilaisia, tarkoittavat vetyatomia tai 1-6 hiiliatomia sisältävää alkyyliryhmää tai R^ ja R2 muodostavat yhdessä sen typpi" atomin kanssa, johon ne ovat sitoutuneet, 1-piperidinyyli"? 4-metyylipiperatsin-l-yyli-, N-morfolino- tai 1-pyrroli-10 dinyyliryhmän tai R on syanoryhmä, tai R on halogeeniatomi, tai R on 1,2-epoksietyyliryhmä tai ryhmä, joka on muodostunut tämän ryhmän avauksesta nukleofiilisen rea-15 genssin avulla, tai R on suojattu formyylirybmä, esteröity karboksyyliryhmä tai alkanoyyliryhmä, Ra on vetyatomi tai alkanoyyliryhmä, ja aaltoviiva merkitsee sitä, että yhdisteet voivat 20 esiintyä sekä syn- että antimuotona tai syn- ja antimuo-don seoksena, sekä niiden happoadditiosuolojen valmistamiseksi epäorgaanisten ja orgaanisten happojen kanssa, tunnettu siitä, että erytromysiini, jonka kaava on (II) 25 CH~ ! N(CH„)0 | d £ H C 9 /OH HO Λ > 30 ---0-l HO ^0^^CH3 (II) H-C'' Yn Λ5 CH„ 3hsc,''[ '- 0.1.-./ X/ 3 τ'"· kX,

0 H3C'" 'OCH3 64 69473 saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on (III) H2N-0-A-R (III) 5 jossa A ja R tarkoittavat samaa kuin edellä, tai sen vahvan hapon kanssa muodostaman suolan kanssa, mahdollisesti emäksen läsnäollessa, sellaisen kaavan (I) mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa Ra on vetyatomi, tai erytromysiini-9-oksiimi, jonka kaava on (IV) 10 HO CH~ V I n(ch.)9 N.v I I 3 z ho , C H_C JOH ''> x5 HO, 3 <^CH3 HO ^0^^CH3 H,C''^> <^"CH0 A Pu (IV) 3 u Γ'Ί Γ" - 3 ch_ n5C2 'Q I Ό------/ 3 o 3 >< '0H H3C^ '0CH3 jompana kumpana isomeerinään tai niiden seoksena, saate-?5 taan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on (V) Hal-A-R (V) jossa A ja R tarkoittavat samaa kuin edellä ja Hai on 30 halogeeniatomi, sellaisen kaavan (I) mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa Ra on vetyatomi, joka yhdiste, kun R on halogeeniatomi tai halogeeniatomilla substi-tuoitu alkoksi- tai alkyylitioryhmä, tarvittaessa saatetaan reagoimaan amiinin kanssa, jonka kaava on

35 R HN / 2 65 6 9 4 7 3 jossa R^ ja tarkoittavat samaa kuin edellä, sellaisen kaavan (I) mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa Ra on vetyatomi ja R on ryhmä ^R1

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan (II) mukainen yhdis-25 te saatetaan reagoimaan kaavan (III) mukaisen yhdisteen hydrokloridin tai -bromidin kanssa orgaanisen aminoemäk-sen tai maa-alkalimetallikarbonaatin läsnäollessa, tai että kaavan (IV) mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan (V) mukaisen yhdisteen kanssa emäksen läsnäollessa, 30 joka on natrium- tai kaliumkarbonaatti tai natrium- tai kaliumbikarbonaatti tai kalsium- tai bariumkarbonaatti tai natriumhydridi.

3·. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lähtöaineena käytetään kaa-35 van (Ill)tai (V) mukaista yhdistettä, jossa R on alkoksi-, tai alkyylitioryhmä, joka voi olla substituoitu yhdellä 66 69 47 3 tai useammalla seuraavista ryhmistä: 1-6 hiiliatomia si sältävä alkoksi- tai alkyylitioryhmä, halogeeni; tai R on fenyylioksi-, bentsyylioksi- tai fenyyli-tioryhmä, joka voi olla substituoitu halogeenilla, 5 tai R on ryhmä ^R1 -N ^R2 10 jossa R^ ja R^ tarkoittavat samaa kuin patenttivaatimuksessa 1.

4. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lähtöaineena käytetään kaavan (III) tai (V) mukaista yhdistettä, jossa R on joko 15 alkoksiryhmä, joka voi olla substituoitu alkoksi- tai di-alkyyliaminoryhmällä, tai fenyylioksi-, bentsyylioksi- tai alkyylitioryhmä, joka voi olla substituoitu halogeenilla, tai dialkyyliaminoryhmä 20 tai halogeeniatomi.

5 -N , ^R2 jossa ja R^ tarkoittavat 1-3 hiiliatomia sisältävää alkyyliryhmää.

5. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lähtöaineena käytetään kaavan (III) tai (V) mukaista yhdistettä, jossa R on joko enintään 6 hiiliatomia sisältävä alkoksi-25 tai alkoksialkoksiryhmä, tai fenyylioksi- tai bentsyylioksiryhmä, joka voi olla substituoitu kloorlatomilla, tai dialkyyliaminoryhmä, ja A on tyydytetty alkyleeniryhmä, ts. -(CI^) - ·

5 -N ^R2 tai tällä ryhmällä substituoitu alkoksi- tai alkyylitio-ryhmä, jolloin ryhmä

10 R ./°1 -N Λ ^R2 tarkoittaa samaa kuin edellä, 15. tai kun R on 1,2-epoksietyyliryhmä, yhdistettä voidaan käsitellä nukleofiilisellä reagenssilla sellaisen kaavan (I) mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa Ra on vetyatomi ja R on epoksiryhmän avauksessa syntynyt ryhmä, ja että kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa Ra on vetyato-20 mi, haluttaessa esteröidään sellaisen kaavan (I) mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa Ra on alkanoyyliryhmä, ja että kaavan (I) mukainen yhdiste haluttaessa muutetaan suolaksi.

6. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetel mä, tunnettu siitä, että lähtöaineena käytetään kaavan (III) tai (V) mukaista yhdistettä, jossa R on joko CHg-Ch^^ "0-, jossa n^ on 0-3,. 35. tai CH0-(CH9) -0-(CHo) -0- , 3. n^ 2 n3 jossa n-j^ tarkoittaa samaa kuin edellä ja n^ on 1-3. 67 69473

7. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lähtöaineena käytetään kaavan (III) tai (V) mukaista yhdistettä, jossa R on ^R1

8. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetel-10 mä, tunnettu siitä, että lähtöaineena käytetään kaavan (III) tai (V) mukaista yhdistettä, joka on valittu siten, että valmistetaan jokin seuraavista kaavan I mukaisista yhdisteistä: erytromysiinin 9-/1)-^( 2-met oksiet oksi) me tyyli/- 15 oksiimi/, erytromysiinin

9-Z'Ö-Z'2~(dimetyyliamino)etyyli.7- oksiimi/, erytromysiinin 9-ZÖ-^-(dietyyliamino)etyyli/- oksiimi? , 20 sekä näiden yhdisteiden epäorgaanisten tai orgaanisten happojen kanssa muodostamia additiosuoloja. 68 69473