FI69069C - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara n-yan-n'-(2-((4-metyl-5-imidazolyl)metyltio)etyl)-n"-alkyny lganidiner - Google Patents

Description

\9λ**^7\ γβί Μ1. KUULUTUSJULKAISU 6906 9 LBJ ιΊΊ) utlAggningsskrift (45) Pa t: L :.:: .: ε ] *: ^ ^ ' (51) Kv.lk.4/lncQ.4 C 07 D 233/64 SUQM| FINLAND (21) Patenttihakemus — Patentansökning 781737 (22) Hakemispäivä — Ansökningsdag 31.05.78 (^) (23) Alkupäivä — Giltighetsdag 31.05.78 (41) Tullut julkiseksi — Blivit offentlig 04.12.78

Patentti- ja rekisterihallitus Nähtäväksipanon ja kuul.julkaisun pvm. — 30.08.85

Patent- och registerstyrelsen ' Ansökan udagd och utl.skriften publicerad (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus — Begärd prioritet 03.06.77 22.08.77, 07.11.77 USA(US) 803009, 826796, 848959 (71) Bristol-Myers Company, 345 Park Avenue, New York, New York 10022, USA(US) (72) Ronnie Ray Crenshaw, Dewitt, New York,

George Michael Luke, LaFayette, New York, USA(US) (74) Oy Koister Ab (54) Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten N-syaani-N'-{2-/(4-metyyli--5- im idät sol yy 1 i) metyy 1 i t io_/etyy 1 ij -N1'-a 1 kynyyi i guan id i in ien valmistamiseksi -^Förfarande för framstä11 ning av terapeutiskt användbara N--cyan-N 1 - ^-/^-mety 1 -5“imidazol y 1 )mety11 io7ety 1 r -N"-al kynylguan idiner Tämä hakemus koskee tiettyjä N-syaani-N'-{2-i (4-metyyli-5-imidatsolyyli) metyylitio/etyyli ’(-N"-alkynyyliguanidiine ja, jotka ovat I^-reseptoria salpaavia aineita, jotka ehkäisevät vatsahapon erittymitä ja jotka ovat hyödyllisiä haavaumia hoidettaessa.

Itsesulatushaavaumasairaiden hoidossa kliinisenä kohteena on vatsahapon erittymisen vähentäminen, perustuen periaatteeseen "ei happoa, ei haavaumaa". Perinnäiseen tapaan hoitaa itsesulatus-haavaumasairautta sisältyy ruokavalion valvonta ja happoa sitovien ja antikolinergisten aineiden käyttö.

On olemassa todisteita siitä, että histamiini voi olla lopullisena aiheena vatsahapon erittymisen kiihtymiseen. Tätä histamiinin vaikutusta välittävät H2-reseptorit eivätkä sitä estä klassiset antihistamiinit, jotka ovat -reseptorin salpaajia. Nykyisin 69069 tunnetaan useita spesifisiä ^-reseptoria salpaavia aineita (H2~ reseptori-antagonistit). Nämä yhdisteet ehkäisevät perushapon erittymistä, samoin kuin hapon erittymistä, johon ovat syypäänä muut tunnetut vatsahapon erittymistä kiihoittavat aineet, ja ovat käyttökelpoisia hoidettaessa itsesulatushaavaumia.

Histamiini-i^-reseptoriantagonisteja on kuvattu esimerkiksi seuraavissa patenttijulkaisuissa: US-patenttijulkaisussa 3 950 333 on esitetty inhibiittoreita, joiden kaava on xi—/ΓΛ s v U C-(CH-), Y(CH_) NHCNHR.

X_ ✓ 2 k 2 m l

2 A-—X

jossa A yhdessä hiiliatomin kanssa on tyydyttämätön heterosyklinen rengas, jossa on ainakin yksi N-atomi ja mahdollisesti lisäksi S-ja/tai 0-atomi, on mm. (alempi)alkyyli, X2 on mm. vety, k = 0-2, m = 2 tai 3 ja k+m = 3 tai 4, Y on 0, S tai NH, E on NR2, jossa R2 on vety nitro tai syaani,ja R^ on vety, (alempi)alkyyli tai di(alempi) alkyyliamino(alempi)alkyyli.

BE- patenttijulkaisussa 804 144 on kuvattu yhdisteitä, joiden kaava on

NCN

HET-(CH~) Z(CH_) NHCNHR.

2 m 2 n 1 jossa HET on 5- tai 6-jäseninen heterosyklinen rengas, joka sisältää typpeä ja joka voi olla substituoitu mm. alkyylillä, m ja n ovat 0-4, m+n = 2-4, Z on S, O, NH tai CH2, ja R^ on H tai (alempi)-alkyyli.

BE-patenttijulkaisussa 841 814 on esitetty yhdisteitä, joiden kaava on

X

HET-CH2Z(CH2)2NHCNHY

jossa HET on mm. imidatsoli, jossa voi olla mm. alkyylisubstituent-ti, Z on S tai CH2, x on S, CHNC>2, NCN tai NH, Y on NH2, (alempi)-alkyyliamino, di(alempi)alkyyliamino, (alempi)alkoksi, fenyylietyy-li, imidatsolyylietyyli, allyyli, trifluorietyyli tai (CH2>nR, n = 1-12 ja R on OH, (alempi)alkoksi, NH2 tai (alempi)alkyyliamino,

II

69069 jolloin X:n ollessa NH Y on trifluorimetyyli tai (CH0) R, ja X:n ollessa NCN Y ei ole amino tai (alempi)alkyyli.

US-patenttijulkaisussa 3 894 151 on kuvattu useita erilaisia yhdisteryhmiä käytettäviksi H^-histamiini-inhibiittoreina.

BE-patenttijulkaisussa 843 840 on esitetty yhdisteitä, joiden kaava on

X

CH_Z(CH„) NHC-NHY N-/ 2 2 n t 1

H CH2OH

jossa n = 2-3, Z on S tai CH2, Y on mm. (alempi)alkyyli ja X on mm. NCN.

Tämän keksinnön kohteena on menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten N-syaani-N' (4-metyyli-5-imidatsolyyli)metyyli- η tio_7etyylij-N"-alkynyyliguanidiinien valmistamiseksi, joiden kaava on jr h N 3 NCN 1

\ " 1 \N/ CH2SCH2CH2NHCNH-R H

jossa R1 on suora tai haarautunut C-.-C -alkynyyliryhmä, edullisesti 4 4 J y4 -CHC = CR tai “<CH2^n = CR ' 30;*-ssa R on H tai CH^ ja ch3 n on 1-6, ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien happoadditio-suolojen valmistamiseksi.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että a) yhdiste, jonka kaava on CH, SI-^ 3 | vii ''/'ay

H

tai sen happoadditiosuola, jossa kaavassa X on poistuva ryhmä, edullisesti halogeeni, saatetaan reagoimaan.yhdisteen kanssa, jonka kaava 4 69069

NCN

II 1

HSCH2CH2NHCNH-R VIII

jossa R merkitsee samaa kuin edellä, tai b) yhdiste, jonka kaava on N-

I II

^ CH„SCHnCH„NHRr H 1 tai sen happoadditiosuolaa, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on

R,NHR1 III

o joissa kaavoissa R merkitsee samaa kuin edellä, ja toinen symboleista Rj- ja Rg on vety ja toinen ryhmä, jonka kaava on

NCN

il

-C-SR

jossa R on sellainen substituentti, että -SR on poistuva ryhmä, ja saatu kaavan I mukainen yhdiste haluttaessa muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi happoadditiosuolaksi.

Edullisia keksinnön mukaisesti valmistettuja yhdisteitä ovat N-syaani —N'- (2-/'(4-metyyli-5-imidatsolyyli) metyylitio7etyyli) -N"-(2-butyn-1-yyli)guanidiini, N-syaani-N’ - (2-/~(4-metyyli-5-imidatsolyyli) metyylitio/etyyli) -N"-(3-butyn-1-yyli)guanidiini, N-syaani-N’-(2-Z(4-metyyli-5-imidatsolyyli)metyylitiq7etyyli)-N"-(4-pentyn-1-yyli)guanidiini, N-syaani-N ’ - (2-^'(4-metyyli-5-imidatsolyyli) metyylitio7etyyli) -N"-(3-butyn-2-yyli)guanidiini ja niiden myrkyttömät, farmaseuttisesti hyväksyttävät happoadditiösuolat.

69069

Erityisen edullinen yhdiste on N-syaani-N'-(2-Z"(4-metyyli- 5-imidatsolyyli)metyylitio/etyyli)-N"-propargyyliduanidiini ja sen myrkyttömät, farmaseuttisesti hyväksyttävät happoadditiosuolat.

Tämän edullisen yhdisteen valmistusta kuvaavat reaktiokaa-viot I ja II.

Kaavio I CH

N-^

NCN

^ CH2SCH2CH2NHC-SR + H2NCH2C2CH H

V

_/ CH3 N Γ

J 1 NCN

\ N Il N CHoSCH0CHoNHCNHCH„C=CH H 2 2 2 2

Reaktio suoritetaan inertissä liuottimessa lämpötilan ollessa huoneen lämpötilaa korkeamman. Kuten alan asiantuntijalle on ilmeistä, R voi olla mikä tahansa sellainen substituentti, että -SR on sopiva poistuva ryhmä. Täten R voi olla (alempi)alkyyli, aryyli, substituoitu aryyli (esim. p-nitrofenyyli), aralkyyli, -CH2CN, -CH2COOH, -CH2COOR', tai näiden kaltainen ryhmä. N-syaani-N' - (2-/’(4-metyyli-5-imidatsolyyli)metyylitio/etyyli) -S-R-isotio-urealähtöaineita voidaan valmistaa menetelmin, joita on selostettu BE-patenttijulkaisussa 804 144. Alkynyyliamiini-lähtöaineet ovat joko kaupan olevia aineita tai niitä voidaan valmistaa menetelmin, joita on selostettu artikkeleissa Bull. Soc. Chim. Fr. 490 (1958), Bull. Soc. Chim. Fr., 592 (1967) ja Annales de Chimie (Paris), 3, 656 (1958).

6 69069

Kaavio II

M ^ CH, N---f— 3

U i NCN

\ il xch2sch2ch2nh2 + rs-cnhch2c=ch

H

\/ N--^CH3

j I

NCN

\ ^ N II

N CH2SCH2CH2NHCNHCH2C^CH

Reaktio suoritetaan reagoimattomassa liuottimessa lämpötilan ollessa huoneen lämpötilaa korkeamman. Substituentti R voi olla edellä olevassa kaaviossa I mainittu substituentti. 2-^*(4-metyyli- 5-imidatsolyyli)metyylitio7etyyliamiini-lähtöainetta voidaan valmistaa US-patenttijulkaisussa 3 950 353 selostetulla tavalla. Di-substituoitua syaaniditioiminokarbonaattia, jota käytetään lähtöaineena valmistettaessa N-syaani-N'-propargyyli-SR-isotioureaa (katso esimerkin 2 vaihetta b), voidaan valmistaa menetelmin, joita on selotettu artikkelissa J.Org. Chem., 32, 1566 (1967).

Lisäksi on keksitty, että valmistettaessa N-syaani-N'-(2-/'(4-metyyli-5-imidatsolyyli)metyylitio7etyyli) -N"-propargyyligua-nidiinia reaktiokaavan I mukaisesti, valitsemalla menetelmän viimeisen vaiheen reaktio-olosuhteet edullisesti, tuotetta saadaan paljon paremmin saannoin tuotteen sisältäessä myös vähemmän epäpuhtauksia. Viimeksi mainitussa olosuhteissa saavutetaan se lisäetu, että raaka tuote voidaan eristää kiteisenä kiinteänä aineena, joka voidaan puhdistaa perusteellisemmin yksinkertaisesti kiteyttämällä uudelleen, jolloin vältytään raakatuotteen kromatografiselta puhdistami- li 7 69069 seita, jota aikaisemmin pidettiin edullisimpana muita reaktio-olosuhteita käytettäessä.

Edellä mainituissa reaktioissa käytetään liuottimena metano-lia. Reaktio suoritetaan konsentroidussa liuoksessa (noin 1 g subs-tituoitua isotioureaa 5 ml:aa kohden metanolia) typpikehässä ja käyttäen vastatislattua propargyyliamiinia.

Kokeet ovat osoittaneet, että typpihuhtelun käyttäminen estää kahden toistaiseksi identifioimattoman sivutuotteen muodostumisen, joita sivutuotteita muodostuu kun typpeä ei käytetä. Näitä sivutuotteita ei saatu poistetuksi kolonnikromatografisesti eikä uudelleen kiteyttämällä. Uskotaan, että typpihuuhtelu estää näiden sivutuotteiden muodostumisen poistamalla merkaptaanikaasua samalla nopeudella kun sitä muodostuu.

Menetelmävaihtoehdon a) reaktio suoritetaan inertissä orgaanisessa liuottimessa. Ensisijaisessa suoritusmuodossa kaavojen VII ja VIII mukaisia yhdisteitä käytetään ekvimolaarisina määrinä, ja reaktio suoritetaan emäksen läsnäollessa.

Alan asiantuntijat tuntevat hyvin tässä reaktiossa käytettäväksi soveltuvia poistuvia ryhmiä "X". Niitä ovat, esim. fluori, 2 2 kloori, bromi, jodi, -0_SR , jossa R on (alempi)alkyyli /esim. me- 1 3 taanisulfonaatti/, O3SR , jossa R on aryyli tai substituoitu aryy-li /esim. bentseenisulfonaatti, p-bromibentseenisulfonaatti tai p-tolueenisulfonaatti_7, O^SF, asetoksi ja 2,4-dinitrofenoksi. Mukavuuden vuoksi ja taloudellisista syistä käytetään edullisimmin kaavan VII mukaista yhdistettä, jossa X on kloori.

Tässä menetelmässä kaavan VII mukaista yhdistettä käytetään lähinnä happoadditiosuolan muodossa. Yhdiste VII on suhteellisen epästabiili vapaana emäksenä ja sen vuoksi sitä valmistetaan ja varastoidaan happoadditiosuolan muodossa. Vaikkakin kaavan VII mukainen yhdiste voidaan muuttaa emäkseksi ennen reaktion suorittamista, näin menetellen ei saavutetaan mitään etua. Alan asiantuntijoille on selvää, että kaavan VII mukaisen yhdisteen happoadditiosuolan muodostamiseksi voidaan käyttää mitä tahansa epäorgaanista happoa tai orgaanista happoa, esim. kloorivetyhappoa, sulfamiinihappoa, rikkihappoa, oksaalihappoa, bentsoehappoa, meripihkahappoa, etikka-happoa, typpihappoa, sitruunahappoa ym. Mukaavuuden vuoksi ja taloudellisista syistä käytetään tavallisesti kaavan VII mukaista yhdistettä hydrokloridisuolan muodossa.

8 69069

Yhdisteiden VII ja VIII välinen reaktio kaavan I mukaisen yhdisteen valmistamiseksi voidaan suorittaa missä tahansa inertissä orgaanisessa liuottimessa kuten alkanolissa, asetonitriilissä, di-metyyliformamidissa, dimetyylisulfoksidissa, asetonissa ja näiden kaltaisessa liuottimessa. Edullisia liuottimia ovat alkanolit kuten etanoli tai 2-propanoli.

Reaktiolämpötilalla ei ole ratkaisevaa merkitystä; reaktio voidaan suorittaa lämpötilojen ollessa välillä noin 0 - noin 200°. Alhaisissa lämpötiloissa reaktio on hidas, kun taas korkeissa läm-pötiloissa muodostuu vähemmän puhtaita tuotteita johtuen hajaantumisesta ja sivutuotteiden muodostumisesta. Yleensä pidämme edullisena reaktion suorittamista huoneen lämpötilassa.

Yhdisteiden VII ja VIII välinen reaktio yhdisteen I valmistamiseksi suoritetaan lähinnä emäksen läsnäollessa, mikä helpottaa reaktiota emäksen toimiessa happoa sitovana aineena. Sopivia tässä reaktiossa käytettäviä emäksiä ovat sekä epäorgaaniset että orgaaniset emäkset kuten NaOH, KOH, LiOH, trietyyliamiini, dimetyyliani-liini, natriumetylaatti ja näiden kaltaiset emäkset.

Keksinnön mukaisessa menetelmässä käytetty kaavan VIII mukainen välituote NCN H 1

hsch2ch2nhcnh-r' VIII

jossa R on suora- tai sivuketjuinen alkynyyliryhmä, jossa on 3-9 hiiliatomia, on uusi yhdiste.

1 4 4

Kaavassa Vili R on edullisesti -CHC=CR , jossa R on vety

CH

4 4

tai metyyli tai -(CH,,) C-CR , jossa n on kokonaisluku 1-6 ja R

2 n on vety tai metyyli;.

Esimerkkejä R^:n edullisista merkityksistä kaavassa Vili ovat 2-butyn-l-yyli, 3-butyn-l-yyli, 4-pentyn-l-yyli. Edullisin merkitys on propargyyliryhmä.

Kaavan VIII mukaisia välituotteita li 69069 NCN 11 1

HSCH2CH2NHCNH-R VIII

valmistetaan saattamalla yhdiste, jonka kaava on

p-sch2chnh2 IX

jossa P on mikä tahansa ryhmä, joka soveltuu sulfhydryyli-suoja-ryhmäksi, reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on

NCN

II

RSCNCH2C=CH X

ja poistamalla saadun yhdisteen sulfhydryyli-suojaryhmä.

Lähtöaineena N-syaani-N'-alkynyyli-S-metyyli-isotioureayh-disteiden valmistuksessa käytettyä dimetyylisyaaniditio-iminokarbo-naattia voidaan valmistaa menetelmällä, joka on selostettu artikkelissa J. Org. Chem., 32, 1566 (1967). Alkynyyliamiinilähtöaineet ovat joko kaupan olevia tai niitä voidaan valmistaa menetelmin, joita on selostettu artikkeleissa Bull. Soc. Chim. Fr., 490 (1958); Bull. Soc. Chim. Fr., 592 (1967) ja Annales de Chimie (Paris), 2, 656 (1958).

Histamiini-H2-reseptori-antagonistit ovat osoittautuneet tehokkaiksi vatsahapon erittymisen estäjiksi eläimillä ja ihmisllä, Brismblecombe ym., J. Int. Med. Res., 3, 86 (1975). Histamiini-H2-reseptori-antagonistin simetidiinin kliininen tutkimus on osoittanut sen olevan tehokas terapeuttinen aine hoidettaessa itsesulatus-haavaumatautia, Gray ym., Lancet, 1 (8001), 4 (1977). Alla olevissa esimerkeissä 1 ja 2 valmistettua yhdistettä (seuraavassa käytetty nimitystä BL-5641) on verrattu simetidiiniin erilaisissa kokeissa ja sen on todettu olevan paljon tehokkaamman kuin simetiidiini sekä histamiini-H2-reseptori-antagonistina eristetyissä marsun eteisissä että vatsahapon erittymisen ehkäisijänä rotilla ja koirilla. Lisäksi vatsahapon erittymiskokeet koirilla osoittavat, että BL-5641:n vaikutusaika on yhtä suurina annoksina pitempi kuin simetidiinin.

1 o 69069

Histamiini-H2-reseptori-antagonismi -

Eristetyllä marsun eteisellä suoritettu koe

Histamiini aiheuttaa konsentraatiosta riippuvaa supistumis-nopeuden lisääntymistä eristetyssä, spontaanisesti lyövässä marsun oikeassa eteisessä. Black ym., Nature, 236, 385 (1972), sanovat reseptoreita, joilla on tämä histamiinin vaikutusmuoto, histamiini-H2~reseptoreiksi ilmoittaessaan burimamidin ominaisuuksista, joka aina kilpailee näiden reseptorien antagonistina. Myöhemmät tutkimukset, joita ovat suorittaneet Hughes ja Coret. Proc. Soc. Exp.

Biol. Med., 148,127 (1975) ja Verma ja McNeill, J. Pharmacol. Exp. Ther., 200,352 (1977), tukevat Black'in ja hänen työtoveriensa päätelmää, että positiivista sykintää säätävää histamiinin vaikutusta eristetyssä marsun oikeassa eteisessä välittävät histamiini-H2~re-septorit. Black ym., Agents and Actions, 3, 133 (1973) ja Brimble-comge ym., Fed. Proc., 35, 1931 (1976) ovat käyttäneet eristettyä marsun oikeata eteistä keinona verrata histamiini-H2-reseptori-anta-gonistien vaikutuksia. Nämä vertailevat tutkimukset suoritettiin käyttämällä menetelmämuunnelmaa, jota ovat selostaneet Reinhardt ym., Agents and Actions, 4, 217 (1974).

Urospuoliset Hartley-rotuiset marsut (350-450 g) tapettiin iskemällä päähän. Sydän leikattiin pois ja sijoitettiin Petri-mal-jaan, jossa oli hapetettua (95 % O2, 5 % C0o), modifioitua Krebs'in liuosta (g/litra: NaCl 6,6, KC1 0,35, MgS04· 7 H20 0,295, KH2P04 0,162, CaCl2 0,238, NaHCO^ 2,1 ja dekstroosia 2,09).

Spontaanisesti sykkivästä oikeasta eteisestä leikeltiin irti muut kudosket ja kumpaankin päähän sidottiin silkkisäie (4-0). Eteinen suspendoitiin 20 ml:n lihaslokeroon, joka sisälsi 32°C:n lämpötilassa pidettyä hapetettua, modifioitua Krebs'in liuosta. Eteisen supistumat taltioitiin isometrisesti Grass FT 0,03-voimansiirtomuutti-men avulla ja supistumisvoima- ja nopeus-reksiteröinnit suoritettiin Beckman RP Dynograph-laitteella.

Eteisen lepojännityksenä käytettiin 1 g:n voimaa ja sen annettiin tasapainoittua tunnin ajan. Tasapainotusajan päätyttyä kylpyyn lisättiin lähes maksimaalinen määrä histamiini-dihydrokloridia (3 x 10 6) ja pestiin kudoksen pöhjustamiseksi. Sitten kylpyyn lisättiin histamiinia lisääntyvin määrin käyttämällä 1/2 log 10-inter- valleja siten, että kylvyn lopullisiksi moolikonsentraatioiksi saa--7 -5 tiin 1x10 -3x10 . Histamiinin indusoiman eteisen nopeuden an- li nettiin tasaantua enenn seuraavan perättäisen määrän lisäämistä.

Maksimireaktio tapahtui muuttumattomasti konsentraation ollessa -5 11 69069 3x10 M. Histamiinia pestiin pois useaan kertaan ja eteisen annettiin palautua kontrollinopeuteen. Sitten lisättiin kokeiltavaa -5 yhdistettä (1 x 10 M) ja 30 minuutin itämisajan kuluttua hista-miini-konsentraatio-reaktio uusittiin lisäämällä tarpeen mukaan suurempia konsentraatioita.

Histamiinin ED5Q-arvot (histamiinin konsentraatio, joka lisäsi supistumisnopeutta 50 % maksimista) ja 95 %:n varmuusrajat ennen ja jälkeen koeyhdisteen lisäämistä, saatiin regressioanalyysin avulla, jota on selostanut Finney, Probit Analysis, 3rd ed., Cambridge (1971). Konsentraatio-reaktiokäyrän siirtymäkertoimet laksettiin seuraavasti: ED50 histamiini + yhdiste

Siirtymäkerroin = - ED50 histamiini yksinään BL-5641:llä saatu kerroin ilmoitettiin sitten simetidiinillä saadun kertoimen suhteena.

BL-5641:n siitymäkerroin -1

Aktiivisuussuhde = - simetidiinin siirtymäkerroin -1 Näissä tutkimusissa saadut tulokset on koottu taulukkoon 1. Sime-tidiini ja BL-5641 siirsivät histamiini-konsentraatio-reaktiokäy-rää oikealle kertoimien ollessa 6,6 ja vastaavasti 32,7. Konsentraatio-reaktiokäyrän siirtymäkertoimien perusteella BL-5641 oli noin 5,7 kertaa aktiivisempi kuin simetidiini histamiini-H2-reseptori-antagonistina eristetyssä marsun oikeassa eteisessä.

<1 2 69069

Taulukko 1

Simetidiini ja BL-5641:n suhteellisen aktiivisuus eristetyssä marsun oikeassa eteisessä

Histamiinin ED50 Korisentraatio- Aktiivi-

Yhdiste N Konsentraatio reateidteyrä suus suh- 95 % Oug/ml). siirtymäker- de _____roin__

Histamiini 0,21 kontrolli 3 (0,18 - 0,25) -- --- 1,39

Simetidiini 3 1 x 10-5M (1,08 - 1,85) 6,6 1,0

Histamiini 0,38 kontrolli 2 (0,27 - 0,53) 12,44 BL-5641 2 1 x 10"5M (7,81 - 20,28) 32,7 5,7 N = kokeiden lukumäärät.

Vatsahapon erittymistä ehkäisevän vaikutuksen määrittäminen rotilla mahanportin ollessa sidottuna kaksi tuntia (Shay) Mahanportin sitomisemenettelyn rotilla olivat suunnitellut Shay ym., Gastroenterology, 5, 53 (1945) mahahaavaumien puhkeamis-tutkimuksia varten; menetelmän tultua tunnetuksi sitä käytettiin kuitenkin keinona vatsahapon erittymisen tutkimiseksi rotilla,

Shay ym., Gastroenterology, 26, 906 (1954), Brodie, D. A., Am. J.

Dig. Dis., 11, 231 (1966). Tämän menetelmän muunnelma on käytetty viivyttelemättä pyrittäessä arvioimaan yhdisteiden kykyä ehkäistä vastahapon erittymistä.

Kokeissa on käytetty Long Evans-urosrottia, 280-300 g. Eläimet pannaan erillisiin häkkeihin ja niitä paastotetaan 24 tuntia antamalla vapaasti vettä. Eetterinukutuksen alaisena vatsaan päästään käsiksi avaamalla keskiviivaa myöten ja mahanportin ympäri sijoitetaan puuvillakankainen side. Haavan sulkemisen jälkeen eetterin

II

13 69069 anto lopetetaan ja vatsaontelon sisäisesti annetaan joko BL-5641:tä, simetidiiniä tai väliainetta määrin 1 mg/kg. BL-5641 ja simetidiini on liuotettu yhden ekvivalentin kanssa HCl:a ja tilavuus saatettu sopivaksi vedellä. Eläimet palautetaan häkkeihinsä, joista vesipullot on poistettu ja kaksi tuntia myöhemmin ne tapetaan eetterillä. Vatsalaukku poistetaan ja kahden tunnin mahakasauma valutetaan asteikolla varustettuun koeputkeen tilavuuden määrittämiseksi. Titrat-tavissa oleva happamuus mitataan titraamalla 1 ml:n näyte pH-arvoon 7,0 0,02 norm. NaOHilla käyttämällä itsetoimivaa byreettiä ja potentiometristä pH-mittaria (radiometri). Titrattava vapautunut happo lasketaan mikroekvivalentteina kertomalla tilavuus millilitroina hapon konsentraatiolla milliekvivalentteina litraa kohden. Hapon vapautumisen estymisprosentti lasketaan seuraavasti:

Hapon vapautumisen estymis-% = vapautunut happo-kontrolli - vapautunut happo - lääke χ ^ qq vapautunut happo-kontrolli BL-5641:llä ja simetidiinillä saadut tulokset on esitetty taulukossa 2.

Nämä tulokset osoittavat, että preparaatissa, jona käytettiin kaksi tunita sidottuna ollutta rotan mahanporttia, BL-5641 ehkäisee ainakin yhtä tehokkaasti vatsahapon muodostumista kuin simetidiini.

14 69069

Taulukko 2 BL-5641:n ja simetidiinin vaikutus vatsahapon muodostumiseen kahden tunnin ajan sidottuna olleessa rotan mahanportissa

Yhdiste Annos (ip)a Hapon muodostumisen ED50 _AJmoolia/kg mg/kg estymis-%__/jmooliaAg BL-5641 40 11,1 80 20 5,53 61 ~11 10 2,76 37

Simetidiini 40 10 66 20 5 60 rs» 14 10 2,5 40 5 1,25 34 aKunkin annoksen osalta käytettiin ainakin viittä eläintä.

Vatsahapon erittymistä ehkäisevän vaikutuksen määrittäminen koiran vatsa-avanteessa

Thomas-tyyppiset ^Thomas, J.E., Proc. Soc. exp. Biol.

Med., 46 260 (1944)_7 ruostumattomat teräskanyylit sijoitetaan jänis-koirien (10-12 kg) vatsoihin juuri mahanportin rauhasen alueen kohdalle lähelle mahalaukun isokaarretta pitkäaikaisen vatsa-avanteen aikaansaamiseksi. Eläinten annetaan palautua ainakin kaksi kuukautta ennen kuin suoritetaan mitään kokeita. Ennen kutakin koetta koiria paastotetaan yön ajan (»~18 tuntia) antamalla kuitenkin vapaasti vettä. Koirat pannaan siteisiin ja lääkkeen antoa varten jalkalaskimoon viedään kahdeksan tuuman sisäneulakatetri (C. R. Baird, Inc.), jossa on kahden tuuman 17 gaugen neula. Mahaeritykset kootaan koka 15 minuutti valuttamalla avatusta kanyylistä. Peruseritykset kootaan kahdesta peräkkäisestä 15 miinuutin erästä ja jos nämä osoittautuvat liian suuriksi (>4 ml/15 min.; pH<5,0), eläimiä ei käytetä. Tällöin noudatettiin menetelmämuunnelmaa, jota ovat selostaneet Grossman ja Konturek, Gastroenterology, 66, 517 (1974). Heti toisen peruserän kokoamisen jälkeen ruiskutetaan 90 minuutin ajan histamiinia (100 /ug/kg/t) Harvard Infusion Pump-kojeella 6 ml/t. Tänä ajankohtana li 15 69069 ruiskutetaan nopeasti (30 sekunnin kuluessa), 0,1 mg/kg joko BL-5641:tä, simetidiiniä (tehty liukoiseksi yhdellä ekvialenttilla HCl:a ja saatettu sopivan tilavuiseksi tavallisella suolaliuoksella) tai tavallista suolaliuosta ja sen jälkeen histamiinin ruiskuttaminen jatkuu vielä 150 minuutin ajan (kokonaisruiskutusaika on 4 tuntia) . Kukin 15 minuutin mahanestenäyte mitataan lähemmin 0,5 ml:n kohdalle ja titrattavissa oleva happamuus 0,02 norm. NaOHta vastaan (loppukohta pH 7,0) mitataan itsetoimivan byretin ja pH-mittarin (radiometri) avulla. Hapon erittymisen ehkäistymisprosentti lasketaan kuten on selostettu menetelmän yhteydessä, jossa käytettiin rotan sidottua mahanporttia.

Viidelle erilaiselle koiralle annettiin ekvimolaariset annokset BL-5641:tä ja simetidiiniä ja saadut tulokset on esitetty taulukossa 3.

Sekä BL-5641 että simetidiini vaikuttivat heti ehkäisevästi vatsahapon erittymiseen. Ekvimolaarisina annoksina BL-5641:llä eh-käisyprosentti oli johdonmukaisesti suurempi ja vaiktusaika pitempi kuin simetidiinillä. Nämä tulokset osoittavat, että korilla histamiinilla aiheutetun vatsahapon muodostumisen ehkäisijänä BL-5641 on tehokkaampi ja/tai kauemmin vaikuttava kuin simetidiini.

16 69069 ε o oj m -s- m cm οο ο ο νο σ\ I '— Cr— (—I ΙΛ ΙΛ r-i d ω +-> m > — in ^ π1 2 ^ d cm ° -=r co οο cm m r-ι ^ r-i <7\ in cm cm Ή > o\<

Q) I

I—I

° 1 £l (O 00 VO Ji- CM CO f- CO m t*-

C μ ’ ΟΛ-q- C*- m m H X" CM

d v.

S %

CO X

• H ΐ , 3 r ^ fj; co in cm c- m o h in •h-* g c I cr\ un c- vo rc\ *—j m fnm

z I

qj o o l en vo in c·— -=ϊ o cv cv co r— « » -g voi en t- en vo m J* cm Sh o e a X 3 £ -¾ -h e rH w g 3 -8 ra ^1 2> σ> en m vom m o co .=*·

d O * ·=Η CV CO OV N (Λ H in VO QJ CM

H 3 e e o , !* S g> en en vo en e— cmc·- co o J2 cloven even in cm s in <λη

tJ

m 4-* d > in! vo m cm -sr o m cm m ho ω hI md ko coco vo o s inin 3

-H

3

•H

5 σν vo vo in in m m >d mm h h oo oven m in -.3.hh vo vo vo vo co oo in in .b o o ·*? -^ cm cm mm -=r -sr mm

£ X, C CM CM CM CM CM CM CMCM CM CM

rl ·

•H d X) H *H rH

-μ -h <D μ 6 -h _ '-'in •h o —- in e— U) M CM -—N V r-> _ π vo m '-'H in o Π3 ^ CO LO N- HH Q^1 λ ·Η ^ .h ^ _J * , K ,

Λ li O 5 Ä 5 as is s H

SS äk: 3 3 h S h jg h3 h ΐ

Sd φ<ϊ S S SS Sd δ S SS

§ s a ^ ^ £ vn ω m CJ in %

m id 3 J' 'H d -h ti -h ti -H ti -H

m 10 pq.co «ω pq en mw li 17 69069

Seuraavat esimerkit kuvaavat keksintöä.

Esimerkki 1 N-syaani-N' - (2-^'( 4-metyyli-5-imidatsolyyli)metyylitio7·" etyy1i-N"-propargyy1iguanidiini /CH3 N "

11 NCN

\ . '\ Il

^N' λCH2SCH2CH?NHC-SCH3 + H2NCH2C=CH

V

/CH3 N-^

l* i NCN

\ N I»

H CH2SCH2CH2NHCNHCH2C=CH

Seosta, jossa oli N-syaani-N'-(2-Z~(4-metyyli-5-imidatsolyy-li)-metyylitio7etyyli)-S-metyyli-isotioureaa (3,00 g, 0,0111 moolia) ja propargyyliamiinia (2,50 g, 0,045 moolia) asetonitriilissä (60 ml) sekoitettiin kiehuttaen 65 tuntia, ja sen jälkeen lämmitettiin ruostumattomasta teräksestä valmistetussa paineastiassa 120-130°:ssa 38 tuntia. Reaktioseos jäähdytettiin, dekantoitiin erilleen tervasta, ja haihdutettiin sitten kuiviin, jolloin jäljelle jäi hartsia (3,57 g). Tämä aine pantiin silikageelin (100-200 mesh) joukkoon ja eluoitiin metyleenikloridin (97 osaa) ja metanolin (3 osaa) seoksella. Välifraktiosta saatu tuote kiteytettiin trituroi-malla asetonitriiilin alla, ja sitten kiteytettiin uudelleen ase-tonitriilistä, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (0,236 g; 7,7 %); sp. 146-149,5°.

ir 18 69069

Analyysi, laskettu yhdisteelle C12**16^6S: C, 52,15; H, 5,83; N, 30,41; saatu: C, 51,86; H, 5,81; N, 30,70.

Esimerkki 2 N-syaani-N' - (2-/~( 4-metyyli-5-imidatsolyyli) metyylitio7“ etyyli)-N"-propargyyliguanidiini (ch3s)2c=ncn + h2nch2c=ch n/

NCN

II

CH3SCNHCH9C=CH

A

CH0 N--/ h i n " \

nCH2SCH2CH2NH2 + A

V

CK

N-

Jl NCN

^N ' \ Il

„ CH^SCHnCH-NHCNHCH0C=CH M L· Z Z Z

19 69069 a. N-syaani-N'-propargyyli-S-metyyli-isotiourea (A)

Liuosta, jossa oli dimetyyli-syaaniditio-iminokarbonaattia (16,00 g, 0.,109 moolia) ja propargyyliamiinia (6,03 g, 0,109 moolia) asetonitriilissä (320 ml) sekoitettiin kiehuttaen 4 tuntia, ja sitten 25°:ssa 12 tuntia. Jatkokäsiteltäessä saatiin otsikon yhdistettä A (13,58 g 81 %), sp. 160-164°.

b. N-syaani-N1 -(2-/f( 4-metyyli-5-imidatsolyyli) metyylitio7-etyyli-N"-propargyyliguanidiini

Liuosta, jossa oli yhdistettä A (11,71 g, 0,0765 moolia) ja 2-/'(4-metyyli-5-imidatsolyyli)metyylitio7etyyliamiinia (13,10 g, 0,0765 moolia) metanolissa (250 ml) lämmitettiin kiehuttaen 64 tuntia. Liuotin poistettiin haihduttamalla kuiviin, jäännös lisättiin silikageelin (100-200 mesh) joukkoon ja kromatografioitiin gradient-tieluointia käyttäen metyleenikloridi/metanoli-seoksella; jälkimmäisistä fraktioista saatiin 4,0 g otsikon yhdistettä. Kiteyttämällä uudelleen asetonitriilistä saatiin puhdasta tuotetta, sp. 150-152,5°, joka oli identtistä (ir, nmr, tie) esimerkissä 1 valmistetun tuotteen kanssa.

Esimerkki 3 N-syaani-N' - (2-/'( 4-metyyli-5-imidatsolyyli) metyylitio7-etyyli)-N"-(2-butyn-1-yyli)guanidiini (CH,S)„C=NCN + HnNCH»C-CCH^ 3 2 δ 2 3

NCN

H Ύ CH3SCNHCH2C=CCH3

B

_____ ί! 20 69069 CH^ N--^ I i I i ^ \

H CH2SCH2CH2NH2 + B

! j Ψ CH3 N- i* Ji \νΛ !?cn H CH-SCH„CH^NHCNHCH~C2CCH-, 2. 2. δ 2 3 a. N-(2-butyn-1-yyli)-N1-syaani-S-metyyli-isotiourea (B)

Liuosta, jossa oli dimetyyli-syaaniditioiminokarbonaattia (10,00 g, 0,0684 moolia) ja 2-butyn-1-yyliamiinia (4,73 g, 0,0684 moolia) asetonitriilissä (200 ml) sekoitettiin 25°:ssa 0,5 tuntia, ja sitten kiehutettiin 2,5 tuntia. Seos jäähdytettiin, sitten suodatettiin, jolloin saatiin otsikon yhdistettä B, sp. 180-183°.

b. N-syaani-N1 - (2-^~(4-metyyli-5-imidatsolyyli)metyylitio7~ etyyli)-N"-(2-butyn-1-yyli)guanidiini

Liuosta, jossa oli yhdistettä B (6,82 g, 0,0407 moolia) ja 2-Z”(4-metyyli-5-imidatsolyyli)metyyltio7etyyliamiinia (6,98 g, 0,0407 moolia) metanolissa (140 ml) lämmitettiin kiehuttaen 40 tuntia. Edellä esimerkissä 2 selostetulla tavalla suoritetun jatkokäsittelyn ja kromatografioinnin jälkeen saatiin otsikon yhdistettä. Kun ostikon yhdistettä valmistettiin esimerkin 1 yleismenetel-män mukaisesti, se suli 128-130°:ssa.

Esimerkki 4 N-syaani-N'-(2-£( 4-metyyli-5-imidatsolyyli)metyylitio7etyyli)- -N"-(4-pentyn-1-yyli)guanidiini

Toistetaan esimerkin 1 mukainen yleismenettely, mutta siinä käytetty propargyyliamiini korvataan ekvimoolimäärällä 4-pentyn- 21 69069 1-yyliamiinia, ja näin saadaan valmistetuksi otsikon tuotetta; sp. 99-103°.

Esimerkki 5 N-syaani-N'-(2-f{ 4-metyyli-5-imidatsolyyli)metyylitio?- etyyli)-N"-(2-butyn-1-yyli)guanidiini

Seosta, jossa oli N-syaani-N' - (2-/'( 4-metyyli-5-imidatsolyyli) -metyylitio_/etyyli)-S-metyyli-isotioureaa (3,00 g, 0,0111 moolia) ja 2-butyn-1-yyliamiinia (3,07 g, 0,0445 moolia) 60 ml:ssa propio-nitriiliä, sekoitettiin kiehuttaen 40 tuntia. Reaktioseoksesta otetun tasaosanäytteen levykromatograafinen analyysi osoitti siinä olevan jälkiä isotiourea-lähtöaineesta, joten seosta kiehutettiin vielä 6 tuntia ja sen jälkeen sekoitettiin 64 tuntia huoneen lämpötilassa. Liuotin (ja sen kera ylimääräinen amiini) poistettiin va-kuumissa ja jäljelle jäänyt hartsi lisättiin silikageelin (100-200 mesh) joukkoon ja eluoitiin metyleenikloridin (97 osaa) ja metano-lin (3 osaa) seoksella. Välifraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 1,81 g keltaista hartsia. Hartsi liuotettiin 20 ml:aan etyyliasetaattia ja kiteytettiin -15°C:ssa. Saatu vaaleankeltainen kiinteä aine (1,2 g) liuotettiin 11 ml:aan kuumaa asetonitriiliä ja kiteytettiin uudelleen -15°C:ssa; saanto 1,072 g, sp. 128-130°C.

Analyysi, laskettu yhdisteelle C^H^NgS: C, 53,77; H, 6,25; N, 28,94; S, 11,08 saatu: C, 53,72; H, 6,29; N, 29,62; S, 11,34

Esimerkki 6 N-syaani-N' - (2-/'(4-metyyli-5-imidatsolyyli) metyylitio_7- etyyli)-N"-(3-butyn-1-yyli)guanidiini

Seosta, jossa oli N-syaani-N'-(2-/'(4-metyyli-5-imidatsolyy-li)-metyylitio/etyyli)-S-metyyli-isotioureaa (3,00 g, 0,0111 moolia) ja 3-butyn-1-yyliamiinia (3,13 g, 0,0453 moolia) 60 ml:ssa propionitriiliä, sekoitettiin kiehuttaen 40 tuntia. Liuotin haihdutettiin pois, jolloin saatiin 5,40 siirappia, joka lisättiin 70 g:n joukkoon silikageeliä (100-200 mesh) ja kromatografioitiin gradienttieluointia käyttäen metyleenikloridi/metanoliseoksella.

22 6 9 0 6 9

Fraktio Eluointiseos Tilavuus Paino 1 99 CH2C12/1 MeOH 100 ml 2 " 70 ml 3 " 50 ml 0,117 g 4 " 30 ml 5 " 75 ml 0,067 g 6 " 150 ml 0,080 g 7 " 325 ml 0,168 g 8 98 CH2Cl2/2 MeOH 50 ml 9 " 150 ml 0,125 g 10 " 250 ml 0,811 g 11 " 250 ml 0,72 g 12 97 CH2Cl2/3 MeOH 175 ml 0,125 g 13 " 225 ml 0,133 g 14 " - 0,027 g 15 " 225 ml 1 f 0,002 g

16 " 200 mlJ

17 95 CH2Cl2/5 MeOH 250 ml 0,035 g 18 " 250 ml 0,236 g

Levykromatografinen analyysi (silikageeli, 90 CH2C12/10 MeOH) osoitti, että fraktiot 9-12 olivat puhtaita ja voitiin yhdistää. Fraktioissa 1-8 esiintyi nopeasti liikkuvia epäpuhtauksia. Fraktioissa 13-14 esiintyi hiukan mukana kulkeutuvia epäpuhtauksia. Fraktiot 9-12 yhdistettiin ja haihdutettiin 1,72 grammaksi keltaista hartsia. Hartsi liuotettiin 11 ml:aan nitrometaania ja kiteytettiin -15°C:ssa; vaaleankeltaista kiinteätä ainetta, 1,18 g, joka kitetytettiin uudelleen 9 ml:sta nitrometaania, jolloin saatiin 0,987 g tuotetta; sp. 86-89°C (pehmiää 85°C:ssa. Infrapuna ja NMR (100 MHz) olivat puhtaat ja yhdenmukaiset toivotun rakenteen kanssa. NMR osoitti, että tuote oli solvatoitunut suunnilleen 0,08 moolin kanssa nitrometaania.

Analyysi, laskettu yhdisteelle C^Hi0NgS. 0,08 (CH^NC^) : C, 53,21; H, 6,22; N, 28,84; S, 10,86; saatu: C, 52,68; H, 6,28; N, 29,39; S, 11,22.

52,87; H 6,02; N, 29,50.

I! 23 69069

Esimerkki 7 N-syaani-N*- (2-^f(4-metyyli-5-imidatsolyyli)metyylitio_7-etyyli)-N"-(4-pentyn-1-yyli)guanidiini

Seosta, jossa oli N-syaani-N'- (2-^'(4-metyyli-5-imidatsolyy-li) -metyylitio_7etyyli) -S-metyyli-isotioureaa (3,00 g, 0,0111 moolia) ja 4-pentyn-1-yyliamiinia (3,69 g, 0,0455 moolia) 60 ml:ssa asetonitriiliä, sekoitettiin kiehuttaen 24 tuntia, ja sen jälkeen sen annettiin olla paikoillaan huoneen lämpötilassa 96 tuntia. Liuotin ja ylimääräinen amiini poistettiin vakuumissa ja jäljelle jäänyt keltainen hartsi puhdistettiin kormatografioimalla 50 grammalla 100-200 mesh'in silikageeliä käyttämällä gradienttieluoin-nissa metyleenikloridi/metanoli-seosta (99:1 - 96:4). Välifraktiot, jotka osoittautuivat levykromatografisessa analyysissä puhtaiksi, yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 1,91 g keltaista hartsia, joka kiteytettiin -15°C:ssa 18 ml:sta etyyliasetaattia. Saatu valkea kiinteä aine (1,25 g) kiteytettiin uudelleen -15°C:ssa 10 ml:sta asetonitriiliä, jolloin saatiin 1,063 g tuotetta, sp. 99-103°C.

Analyysi, laskettu yhdisteelle C-|4H20N6S: C, 55,24? H, 6,52; N, 27,61? S, 10,53? saatu: C, 55,43; H, 6,58; N, 28,26? S, 10,97.

Esimerkki 8 N-syaani-N' - (2-/7 4-metyyli-5-imidatsolyyli)metyylitio/-etyyli-N"-propargyyliguanidiini

Seosta, jossa oli N-syaani-N'- (2-/"(4-metyyli-5-imidatsolyy-li)-metyylitio7etyyli)-S-metyyli-isotioureaa (10,0 g; 0,0371 moolia) ja tislattua propargyyliamiinia (20 ml; 0,325 moolia) metano-lissa (50 ml), sekoitettiin kiehuttaen positiivisen typpipaineen suojaamana (typpihuuhtelu) 20,5 tuntia. Sen jälkeen liuotin ja ylimääräinen amiini poistettiin haihduttamalla kuiviin, jolloin jäljelle jäi keltaisenruskeata öljyä, joka kiteytyi helposti. Tritu-roimalla raakatuotetta ispropanolin alla (30 ml) saatiin otsikon yhdistettä kermanvärisenä, hauraana kiinteänä aineena (8,11 g, 79 %); sp. 146-148,5°.

24 69069

Esimerkki 9 N-syaani-N' - (2-/'( 4-metyyli-5-imidatsolyyli) metyylitio/-etyyli)-N"-propargyyliguanidiini

Seosta, jossa oli N-syaani-N'-(2-/f(4-metyyli-5-imidatsolyy-li)metyylitio7etyyli)-S-metyyli-isotioureaa (100 g; 0,371 moolia) ja tislattua propargyyliamiinia (150 ml. 2,44 moolia) metanolissa (500 ml) sekoitettiin kiehuttaen positiivisen typpipaineen suojaamana (typpihuuhtelu) 22 tuntia. Reaktioseos jäähdytettiin, ja liuotin ja ylimääräinen amiini poistettiin haihduttamalla kuiviin, jolloin jäljelle jäli kullanruskeata öljyä, joka kiteytyi helposti. Raakatuotetta trituroitiin isopropanolin alla (250 ml), jäähdytettiin 0°:ssa 2 tuntia ja tuote koottiin talteen suodattamalla. Suo-datinkakku pestiin kylmällä isopropanolilla ja kuivattiin vakuumis-sa Ρ2<3,-:η päällä 16 tunnin ajan. Kuivattu otsikon tuote oli lähes valkeata, tiivistä, kiinteätä ainetta; saanto 73,5 g (71,7 %), sp. 147-149°.

Esimerkki 10 N-syaani-N' - (2-/~(4-metyyli-5-imidatsolyyli) -metyylitio7-etyyli)-N"-propargyyliguanidiinin uusintakiteytys Esimerkeissä 11 ja 12 saadut lopputuotteet yhdistettiin (kokonaispaino 81,3 g), liuotettiin kuumaan isopropanoliin (1000 ml), suodatettiin "Super-Cel"-valmisteen läpi ja annettiin jäähtyä huoneen lämpötilassa noin 68 tuntia. Saatu kiteinen tuote otettiin talteen suodattamalla, pestiin kylmällä isopropanolilla, jauhettiin hienoksi ja kuivattiin lämmitetyssä eksikaattorissa suurvakuumissa noin 45 tunnin ajan. Saanto 72,4 g (saatu takaisin 89 %); sp. 149-151°. HPLC-määritys osoitti puhtauden olevan noin 99,5 %:sen.

NMR (100 MHz)-spektri oli puhdas ja laadultaan yhdenmukainen. Analyysi, laskettu yhdisteelle C12H16N6S: C, 52,15? H, 5,83; N, 30,41; S, 11,60? saatu: C, 52,42; H, 5,94; N, 30,51; S, 11,35.

Esimerkki 11 N-syaani-N' - (2-/‘(4-metyyli-5-imidatsolyyli) metyylitio7-etyyli)-N"-propargyyliguanidiini A. N-syaani-N1-propargyyli-S-metyyli-isotiourea Liuosta, jossa oli dimetyyli-syaaniditio-iminokarbonaattia (16,00 g, 0,109 moolia) ja propargyyliamiinia (6,03 g, 0,109 moolia)

II

69069 asetonitriilissä (320 ml) sekoitettiin kiehuttaen 4 tuntia ja sitten 25°:ssa 12 tuntia. Seos jäähdytettiin ja suodatettiin, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (13,58 g, 81 %) sp. 160-164°.

B. N-syaani-N'-propargyyli-N"-(2-merkaptoetyyli)guanidiini Seosta, jossa oli 1,136 g (10 mmoolia) kysteamiini-hydroklo- ridia, 1,53 g (10 mmoolia) edellä olevan vaiheen A tuotetta ja 0,055 g hydrokinonia 10 mlrssa DMF:a, lämmitettiin lievästi liuoksen aikaansaamiseksi. Tähän liuokseen lisättiin 10 ml 1-norm. nat-riumhydroksidin vesiliuosta ja liuoksen läpi johdettiin kuplina typpeä. Reaktioseoksen oltua huoneen lämpötilassa paikoillaan 17 tuntia, se haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin otsikon tuotteen ja natriumkloridin seosta. Otsikon tuote uutettiin erilleen tästä seoksesta 10 ml:11a etanolia ja etanoliliuosta käytettiin alla olevassa vaiheessa C.

C. N-syaani-N' - (2-^’(4-metyyli-5-imidatsolyyli) metyylitiqj-etyy1i)-N"-propargyyliguanidiini

Edellä esitetyn vaiheen B tuotteen (noin 10 mmoolia) etanoliliuosta lisättiin liuokseen, jossa oli typen suojaamana 4°C:ssa 0,46 g natriumia (0,02 g-atomia) 10 ml:ssa etanolia. 5 minuutin kuluttua lisättiin liuos, jossa oli 1,67 g (10 mmoolia) 4-metyyli- 5-kloorimetyyli-imidatsoli. HCl:a 14 ml:ssa etanolia ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa typen suojaamana 70 minuuttia. Reaktioseos suodatettiin Celite-suodatinpatjän läpi erpäorgaanisten suolojen poistamiseksi ja Celite pestiin etanolilla. Suodos haihdutettiin kuiviin ja tuote puhditettiin kromatografioimalla silika-geelikolonnissa (20 g piidoksidia, 3,2 x 4,5 cm:n patja) käyttämällä liuottimina etanolikloroformi-seoksia. Etanolipitoisuutta lisättiin asteettain 2:sta 15 prosenttiin. Eluaatti haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 1,906 g kiteistä tuotetta. Kiteyttämällä uudelleen 2-propanolista saatiin 1,49 g (54 %) otsikon yhdistettä, sp. 144-145°C.

Esimerkki 12 N-syaani-N' - (2-/'(4-metyyli-5-imidatsolyyli)metyylitio7-etyyli)-Nn-(2-butyn-1-yyli)guanidiini A. N-syaani-N'-(2-butyn-1-yyli)-S-metyyli-isotiourea Liuosta, jossa oli dimetyylisyaaniditioiminokarbonaattia (10,00 g, 0,0684 moolia) ja 2-butyn-1-yyliaraiinia (4,73 g, 0,0684 moolia) asetonitriilissä (200 ml) sekoitettiin 25°:ssa 0,5 tuntia, 26 6 9 0 6 9 ja sitten kiehuttaen 2,5 tuntia. Seos jäähdytettiin, minkä jälkeen se suodatettiin, jolloin saatiin otsikon yhdistettä, sp. 180-183°.

B. N-syaani-N1 -(2-butyn-1-yyli)-N"-(2-merkaptoetyyli)-guani-diini

Toistetaan esimerkin 11 B mukainen yleismenettely, mutta siinä käytetty N-syaani-N'-propargyyli-S-metyyli-isotiourea korvataan ekvimoolimäärällä N-syaani-N1 -(2-butyn-1-yyli)-S-metyyli-isotio-ureaa, ja näin saadaan otsikon tuotetta.

C. N-syaani-N'-(2-/14-metyyli-5-imidatsolyyli)metyylitiq7-etyyli)-N"-(2-butyn-1-yyli)guanidiini

Toistetaan esimerkin 11 C mukainen yleinen menettely, mutta siinä käytetty N-syaani-N'-propargyyli-N"-(2-merkaptoetyyli)guanidiini korvataan ekvimoolimäärällä N-syaani-N'-(2-butyn-1-yyli)-N"-(2-merkaptoetyyli)guanidiinia, ja näin saadaan valmistetuksi otsikon tuotetta.

Esimerkki 13 N-syaani-N'-(2-/14-metyyli-5-imidatsolyyli)metyylitio7~ etyyli)-N"-(3-butyn-1-yyli)guanidiini A. N-syaani-N'-(3-butyn-1-yyli)-N"(2-merkaptoetyyli)guanidiini Toistetaan esimerkin 11 vaiheitten A ja B mukaiset yleiskä- sittelyt, mutta vaiheessa A käytetty propargyyliamiini korvataan ekvimoolimäärällä 3-butyn-1-yyliamiinia, ja näin saadaan valmistetuksi otsikon tuotetta.

B. N-syaani-N'-(2-/l4-metyyli-5-imidatsolyyli)metyylitio7-etyyli) -N’’- (3-butyn-1 -yyli) guanidiini

Toistetaan esimerkin 11 C mukainen yleinen menettely, mutta siinä käytetty N-syaani-N'-propargyyli-N"-(2-merkaptoetyyli)guanidiini korvataan ekvimoolimäärällä N-syaani-N'-(3-butyn-1-yyli)-N"-(2-merkaptoetyyli)guanidiinia, ja näin saadaan valmistetuksi otsikon tuotetta, sp. 86-89°C.

Esimerkki 14 N-syaani-N'-(2-/14-metyyli-5-imidatsolyyli)-metyylitio/-etyyli-N"-(4-pentyn-1-yyli)guanidiini A. N-syaani-N'-(4-pentyn-1-yyli)-N"-(2-merkaptoetyyli)guanidiini

Toistetaan esimerkin 11 vaiheissa A ja B käytetyt yleiset menettelytavat, mutta vaiheessa A käytetty propargyyliamiini korvataan ekvimoolimäärällä 4-pentyn-1-yyliamiinia, ja näin saadaan valmistetuksi otsikon tuotetta.

li 27 69069 B. N-syaani-N'-(2-^(4-metyyli-5-imidatsolyyli)metyylitio7-etyyli)-N"-(4-pentyn-l-yyli)guanidiini

Toistetaan esimerkin 11 C mukainen yleinen menettely, mutta siinä käytetty N-syaani-N'-propargyyll-N"-(2-merkaptoetyyli)-guanidiini korvataan ekvimoolimäärällä N-syaani-N'-(4-pentyn-l-yyli ) -N"- ( 2-merkaptoetyyli )guanidiinia, ja näin saadaan valmistetuksi otsikon tuotetta.

Esimerkki 15 N-syaani-N'-(2-£(4-metyyli-5-imidatsolyyli)metyylitifi7-etyyli)-N"-(3-butyn-2-yyli)guanidiini A. N-syaani-N'-(3-butyn-2-yyli)-N"-(2-merkaptoetyyli)guanidiini

Toistetaan esimerkin 11 vaiheiden A ja B mukaiset yleiset käsittelyt, mutta vaiheessa A käytetty propargyyliamiini korvataan ekvimoolimäärällä 1-metyyli-propargyyliamiinia, ja näin saadaan valmistetuksi otsikon tuotetta.

B. N-syaani-N'-(2-/J4-metyyli-5-imidatsolyyli)metyylitio7-etyyli)-N"-(3-butyn-2-yyli)guanidiini

Toistetaan esimerkin 11 yleinen menettely, mutta siinä käytetty N-syaani-N'-propargyyli-N"-(2-merkaptoetyyli)guanidiini korvaan ekvimoolimäärällä N-syaani-N'-(3-butyn-2-yyli)-N"-(2-merkaptoetyyli)guanidiinia, ja näin saadaan valmistetuksi otsikon tuotetta, sp. 125-128°C.

Claims (2)

1. 28 69069 Patenttivaatimus Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten N-syaani-N'- 4-metyyli-5-imidatsolyy li) metyylitio7 etyyli}-N"-alkynyyli-guanidiinien valmistamiseksi, joiden kaava on CH3 ,S--f I I NCN τ ^ CH-SCH-CH-NHCNH-R1 H 2 jossa on suora tai haarautunut C^-CQ-alkynyyliryhmä, edulli-4 4 J y 4 sesti -CHC=CR tai -(CH2)nC^CR , joissa R on H tai CH^ ja n on 1-6, ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien happoadditiosuo-lojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että a) yhdiste, jonka kaava on ch3 N-^ 5 [l I VII H X CB2X tai sen happoadditiosuola, jossa kaavassa X on poistuva ryhmä, edullisesti halogeeni, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on NCN HSCI^CI^NHCNH-R1 VIII jossa R^" merkitsee samaa kuin edellä, tai b) yhdiste, jonka kaava on ^ c«3 ex \N^ ^CH2SCH2CH2NHR5 tai sen happoadditiosuola, saatetaan reagoimaan yhdisteen kans sa, jonka kaava on 29 6 9 0 6 9 RgNHR1 III joissa kaavoissa R^ merkitsee samaa kuin edellä, ja toinen symboleista R(. ja Rg on vety ja toinen ryhmä, jonka kaava on NCN II -C-SR jossa R on sellainen substituentti, että -SR on poistuva ryhmä, ja saatu kaavan I mukainen yhdiste haluttaessa muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi happoadditiosuolaksi. 69069 30 Förfarande för framställning av terapeutiskt användbara N-cyan-N'- f2-/J4-mety1-5-imidazoly1)metyltio7etyl)-N"-alkyny1-guanidiner med formeIn CH~ N- [| I NCN I TT CH-SCH-CH-NHCNH-R1 H z z A väri R3, är en rak eller förgrenad C,-CQ-alkynylgrupp, företrädes-
2. 4. J 4 vis -CHC^CR eller -(CH0) C=CR , väri R är H eller CH-, och n är l i n 3 ch3 1-6, och farmaceutiskt godtagbara syraadditionssalter därav, kännetecknat därav, att man a) omsätter en förening med formeln CH, X 3 N-- i 11 VII ^ tr'''- ch,x H eller ett syraadditionssalt därav, i vilken formel X är en av-gäende grupp, företrädesvis halogen, med en förening med formeln NCN HSCH 2CH jNHCNH-R1 VIII väri R3, anger samma som ovan, eller b) omsätter en förening med formeln ^CH3 N-1 Us H CH2SCH2CH2NHR5