FI67384C - Foerfarande foer framstaellning av farmaceutiskt anvaendbara 7-(2-(2-imino-4-tiazolin-4-yl)-2-hydroxiiminoacetamido)-3-cefem-4-karboxylsyraderivat - Google Patents

Description

l/'rm r., KUULUTUSJULKAISU S n-7 n Λ ^ ^1) UTLÄCCN1NGSSICRIFT 673 8 4 ^ ~ ^ (51) K*Jt/tacCL3 C 07 D 501/20 SUOMI—FINLAND (M) νμ«·ι^-νμιμβΜ( 771951 (22) ΗΛμΛ^ΙΜΙ—AiMekmngMfa« 22.06.77 (23) AHniptM—GlMflMtadag 22.06.77 (41) Τ·ΜκHUMkH — Bttvtt09.03.78 30.11.84 (32)(33)(31) FyydKty «mbIImu» prtorttat 08.09.76

Japani-Japan(jP) 108101/1976 Toteennäytetty-Styrkt (71) Takeda Chemical Industries, Ltd., 27, Doshomachi, 2-chome, Higashi-ku, Osaka, Japani-Japan(JP) (72) Mitsuo Numata, Takatsuki, Osaka, Isao Mi nami da , Nishikyo-ku, Kyoto, Susumu Tsushima, Suita, Osaka, Japani-Japan(JP) (74) Oy Borenius £ Co. Ab (54) Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisten 7-(2-(2-imino-4-tiatsoliini-4-yy1i)-2-hyd roks i-i minoasetam i do)-3 “ke feemi-4-ka rboksyy1i happo-johdannaisten valmistamiseksi - Förfarande för framstä11 ning av farmaceutiskt användbara 7-(2-(2-imino-4-t iazolin-4-y1)-2-hydrox i iminoacetamido)-3~ -cefem-4-karboxy1syrader ivat

Keksinnön kohteena on menetelmä uusien mikrobeja vastustavien yhdisteiden valmistamiseksi, jotka yhdisteet ovat arvokkaita tautien hoitamiseksi eläimissä, mukaanluettuina myös kotieläiminä käytetyt linnut, sekä ihmisissä. Keksinnön mukaan valmistetut yhdisteet soveltuvat erikoisesti sellaisten tartuntatautien estämiseksi tai niiden hoitamiseksi, jotka aiheutuvat gram-positiivisista ja qram-neqatiivisistä bakteereista.

Lähemmin määriteltynä tämän keksinnön kohteena on menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisen 7-/”2-(2-imino-4-tiatsoliini- 4-yyli)-2-hvdroksi-iminoasetamido J7-3-( substituoitu metyyli)- 3-kefeemi-4-karboksyylihappo-(syn)-isomeerin sekä tämän yhdisteen farmaseuttisesti hyväksyttävissä olevan suolan tai esterin valmistamiseksi, jonka yhdisteen kaava on: 2 67384 jossa kaavassa Y on vety, hydroksyyli, asetoksi, karbamoyylioksi, kvaternäärinen ammonium, jonka kaava on <5' jossa kaavassa Z on vety tai karbamoyyli, tai typpipitoinen heterosyklinen tioyhdiste, jonka kaava on N—N N__R2

, -S-CgJlgZ

R1 N N N —N N , ®Ov * -^oAr* · -O * R1 R1 r2 "SnJI tai “^IsAr5

V

joissa kaavoissa R^- on vety, tai tähde, jonka kaava on -(CH2)nP, jossa kaavassa n on kokonaisluku 1...3 ja P on vety, hydroksyyli, a lkoksi (Ci_4> , alkyyli (C]^) tio, asetyyliamino, guanidino, tähde, jonka kaava on -COOR^ (jossa kaavassa R^ on vety tai alkyyli (C^_4) , tähde, jonka kaava on

-CON

R6 (jossa kaavassa r5 ja R^ kumpikin on vety tai alkyyli(0^_4) ), tai tähde, jonka kaava on R5 -N^ R6 (jossa kaavassa R^ ja R^ tarkoittavat samaa kuin edellä määriteltiin), 3 , 67384 R2 on vety, amino, trifluorimetyyli, hydroksialkyyli(Ci_4)amino, mono- tai di-alkyyli(C^_4)amino-alkyyli(C^_4)amino, asetoksi-alkyyli (C]^_4> , karbamoyyli, tähde, jonka kaava on -NHCOOR? (jossa kaavassa R? on alkyyli(Ci_4) ), tähde, jonka kaava on -S-(CH2)nQ (jossa kaavassa n on kokonaisluku 1...3 ja Q on karboksyyli, hydroksyvli tai sulfo) tai tähde, jonka kaava on -(CH2)np (jossa kaavassa n ja P tarkoittavat samaa kuin edellä on määritelty), ja R3 on vety tai alkyyli(C^_4).

Keksinnön mukaan uudet arvokkaat yhdisteet voidaan valmistaa sinänsä tunnetuilla menetelmillä siten, että a) saatetaan syn-isomeerinen 7-(4-halogeeni-2-hydroksi-imino-3-oksobutyryyli amino)-3-(substituoitu metyyli)-3-kefeemi-4-karbok-syylihappojohdannainen, jonka kaava on ¥-CH2OOC-OONH _ ^V0H (II)

OOOH

jossa kaavassa W on kloori tai bromi, ja Y tarkoittaa samaa kun edellä on määritelty, tai sen suola reagoimaan tiokarbamidin kanssa, b) saatetaan syn-isomeer inen 7-/“2-(2-imino-4-tiatsoliini-4-yyli)-2-hydroksi-iminoasetamido _7-3-asyylioksimetyyli)-3-kefeemi- 4-karboksyylihappojohdannainen, jonka kaava on

0H OOOH

jossa kaavassa M on asyylioksi, tai sen suola, reagoimaan veden, kvaternääristä ammoniumia, jonka kaava on 4 67384 σ' jossa Ζ tarkoittaa samaa kuin edellä, vastaavan amiinin tai tiolin, joka vastaa edellä määritellyn substituentin Y mukaista typpipitoista heterosyklistä tioyhdistettä, tai sen suolan kanssa, tai c) asyloidaan 7-aminokefalosporiinijohdannainen, jonka kaava on ch2t (iv)

000 H

jossa kaavassa Y tarkoittaa samaa kuin edellä on määritelty, tai sen suola, saattamalla se reagoimaan asyloimisaineen kanssa, joka on johdettu syn-isomeerisestä 2-(4-tiatsoliini-4-yyli)-etikka-happo johdannaisesta, jonka kaava on Αϊίΐ HR ' C-OOOH (V) sv ^OR9 jossa kaavassa R® on vety tai suojaryhmä, ja R® on vety tai suojaryhmä, ja reaktiotuotteesta tarvittaessa lohkaistaan suoja-ryhmä, ja haluttaessa esteröidään reaktiotuote.

Seuraavassa keksinnön mukaan valmistetuista yhdisteistä käytetään sanontaa "keksinnön mukaiset yhdisteet".

67384

Nykyään tiedetään monentyyppisillä puolisynteettisillä kefalo-sporiineilla olevan laaja bakteereja vastustava spektri, niitä on saatavissa markkinoilla ja niitä on kliinisesti käytetty erilaisten tartuntatautien hoidossa. On kuitenkin esitetty, että nämä yhdisteet eivät käytännöllisesti katsoen ollenkaan tehoa kaikkiin niihin patogeenisiin bakteereihin, joita esiintyy kliinisissä tilanteissa. Esimerkkeinä mainittakoon, että eräät kannat bakteerista Escherichia coli, eräät Citrobacter-bakteerit, suurin osa sukuun Proteus kuuluvat indoli-positiiviset, patogeeniset bakteerit, suku Enterobacter, suku Serratia ja suku Pseudomonas ovat resistenttejä kefalosporiineihin nähden (Warren E. Wick, Cephalosporins and Penicillins; Chemistry and Biology, Chapter 11, edited by E.H. Flynn, Academic Press, 1972). Tästä syystä on jatkettu yrityksiä kehittää uusia kefalosporiineja, joita voidaan kliinisesti käyttää näitä tautia aiheuttavia bakteereja vastaan.

Näissä olosuhteissa on jatkettu yrityksiä kehittää lukuisia uusia kefalosporiinijohdannaisia ja tutkia niiden farmaseuttisia ominaisuuksia. Nyt on onnistuttu synteettisesti valmistamaan edellä mainittuja kefalosporiinijohdannaisia (I), niiden suoloja ja estereitä, ja on todettu, että näillä yhdisteillä on estävä vaikutus mitä monenlaisimpiin bakteereihin, mukaanluettuina gram-positiiviset bakteerit ja gram-negatiiviset bakteerit.

Erikoisesti ovat keksinnön mukaisten yhdisteiden mikrobeja vastustavien vaikutusten edulliset ominaisuudet seuraavat. Eräällä suositulla ryhmällä tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä on käytännöllisesti katsoen riittävä aktiviteetti gram-positiivisiin bakteereihin nähden, mukaanluettuna Staphylococcus aureus, mutta ne vaikuttavat myös gram-negatiivisten bakteerien laajaan spektriin, joista mainittakoon Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Proteus morganii, Proteus rettgeri, Citrobacter freundii, Enterobacter cloacae ja Serratia marcescens. Nämä ylivoimaiset ominaisuudet esiintyvät korostetusti niiden vaikutuksena edellä mainittujen bakteerien mutantteihin, joilla on fi-laktamaasi (kefalospr inaasi) .

67384

Kaavan (I) mukaisesti Y tarkoittaa vetyä, hydroksyyliä, asetok-sia, karbamoyylioksia, kvaternääristä ammoniumryhmää tai typpeä sisältävää heterosyklistä tioryhmää.

Asetoksirvhmää lähellä olevia yhdisteitä ovat esim: asetyvli-, propionyyli-, bentsvyli-ryhmä, sekä reaktiiviset asyyliryhmät, kuten ne, jotka on mainittu DE kuulutusjulkaisuissa 2607064 ja 2619243. Näistä reaktiivisista asyyliryhmistä mainittakoon mm. 3-oksibutyryyli, mandelyyli, 3-karboksipropionyyli, 2-kar-boksibentsoyvli, 2-(N-karbetoksikarbamoyyli)-bentsoyyli, 2-(N-karbetoksisulfamoyyli)-bentosyyli ja 2-karboksi-3-(tai6)-nitro-bentsoyyli. Vaikkakaan tällaiset reaktiiviset asyyliryhmät eivät yhtä paljon myötävaikuta mikrobeja vastustavaan tehoon kuin asetyyliryhmät, ovat nämä erittäin reaktiivisia veteen, kvaternäär istä ammoniumia vastaavaan amiiniin tai typpeä sisältävään heterosykliseen tioliin nähden, kuten seuraavassa selitetään.

Kvaternäärisenä ammoniumryhmänä voi olla substituoitu tai substi-tuoimaton pyriidi, jonka yleinen kaava on <2 (jossa kaavassa Z tarkoittaa vetyä, tai karbamovyliä, joista mainittakoon pyridiini, karbomoyylillä substituoitu pyridiini (esim. 3-karbamoyylipyridiini, 4-karbamoyylipyridiini, jne.). Kun keksinnön mukainen yhdiste sisältää kvaternäärisen ammoniumryh-män, voi sillä olla betaniinirakenne, esim.

® s HN_!L C-00NH --S \ - dbo* jossa kaavassa Z tarkoittaa samaa kuin edellä on määritelty.

67384 7 Y:n edustamana typpipitoisena heterosyklisenä tioryhmänä voi olla kaavan -S-Het-ryhmä, jossa Het on 5-jäseninen heterosyklinen ryhmä, joka sisältää 1...4 typpiatomia, ja joka valinnaisesti edelleen sisältää happi- tai rikkiatomin, ja mainitulla hetero-syklisellä ryhmällä voi valinnaisesti olla yksi tai kaksi substi-tuenttia. Tällaisena heterosyklisenä ryhmänä mainittakoon kaavan Y mukaiset viisijäseniset heterosykliset ryhmät, joissa on 2 typpiatomia (esim. imidatsolyyli, jne.), viisijäseniset heterosykliset ryhmät, joissa on yksi typpiatomi ja 1 rikkiatomi (esim. tiatsolyyli), viisijäseniset heterosykliset ryhmät, joissa on 2 typpiatomia ja 1 rikkiatomi (esim. 1,2,4-tiadiatsolyyli, 1,3,4-tiadiatsolyyli), viisijäseniset heterosykliset ryhmät, joissa on 2 typpiatomia ja 1 happiatomi (esim. 1,3,4-oksadiatsolyyli), viisijäseniset heterosykliset ryhmät, joissa on 3 typpiatomia (esim. 1,2,3-triatsolyyli, 1,2,4-triatsolyyli), ja viisijäseniset heterosykliset ryhmät, joissa on 4 typpiatomia (esim. lH-tetrat-solyyli). Tällaisissa heterosyklisissä ryhmissä voi sopivasti olla yksi tai kaksi substituenttia niiden heterosyklisessä renkaassa. Substituenttina voi esim. olla alkyyli, jossa on 1...4 hiiliatomia (esim. metyyli, etyyli, propyyli, isopropyyli, butyyli, isobutyyli, jne.); halogeenialkyyli, jossa on 1...4 hiiliatomia (esim. trifluorimetyyli); amino; karbamoyyli; tähde, jonka kaava on -X-7.1, jossa kaavassa X on alkyleeni, jossa on 1...4 hiiliatomia ja on hydroksyyli, amino, mono- tai dialkvy-liamino, jonka alkyyliosassa on 1...4 hiiliatomia (esim. dime-tyyliamino, monoetyyliamino, jne), guanidino, karboksyyli, karbamoyyli, alkoksikarbonyyli, jonka alkyylissä on 1...4 hiili-atomia (esim. metoksikarbonyyli, etoksikarbonyyli), mono- tai di-alkyylikarbamoyyli, jonka alkyylissä on 1...4 hiiliatomia (esim. Ν,Ν-dimetyylikarbamoyyli), alkoksi, jossa on 1...4 hiiliatomia (esim. metoksi, etoksi, n-propoksi), alkyylitio, jonka alkyylissä on 1...4 hiiliatomia (esim. metyylitio); tähde, jonka kaava on: -S-z2, jossa z2 on edellä määritelty tähde -X-z^, jolloin Z1 on -COOH, -OH tai -SO3H; tai tähde, jonka kaava on

-N

N* , 8 67384 jossa jokainen ja Z^ on vety tai alkyyli, jossa on 1...4 hiiliatomia, edellä määritelty tähde -X-Z*, jolloin Z1 on H tai CH3, alkoksikarbonyyli, jonka alkoksissa on 1...4 hiiliatomia (esim. metoksikarbonyyli).

Niinpä heterosyklisen ryhmän (Het) kaavan -X-Z^ mukaisena substi-tuenttina voi olla karboksimetyyli, karbamoyylimetyyli, mono- tai dialkyyli(Ci_4)karbamoyylimetyyli (esim. N,N-dimetyylikarbamoyylimetyyli ), hydroksialkyyli(C^_4) (esim. hydroksimetyyli, 2-hydroksietyyli), alkyyli(C^_4)karbonyylioksi-alkyyli(Cj_4> (esim. asetoksimetyyli, 2-asetoksietyyli), alkoksi(Ci_4)karbonyyli-metyyli (esim. metoksikarbonyylimetyyli), metyylitiometyyli, aminoetyyli, mono- tai dialkyyli(C^_4>amino-alkyyli(C^_4> (esim. Ν,Ν-dimetyyliaminometyyli, N-metyyliaminoetyyli, Ν,Ν-dimetyyli-aminoetyyli), guanyylimetyyli, guanyylietyyli, jne. Heterosyklisen renkaan (Het) kaavan -S-z2 mukaisena substituenttina voi olla 2-hydroksietyvlitio, karboksimetyylitio, 2-sulfoetyylitio, jne.

Heterosyklisen ryhmän (Het) substituenttina voi olla hydroksi-alkyyli(Ci_4)amino (esim. 2-hydroksietyyliamino), mono- tai di-alkyyli(Ci_4)aminoalkyyli(Ci_4)-amino (esim. 2-dimetyyliamino-etyyliamino), alkoksi(0^-4)-karbonyyliamino (esim. metoksikarbo-nyyliamino), jne.

Edellä esitetyssä "alkyyli (Ci_4) " ja "alkoksi (C]^_4) " tarkoittavat "alkyyliä, jossa on 1...4 hiiliatomia" ja "alkoksia, jossa on 1...4 hiiliatomia"; sama pätee myös seuraavassa.

Seuraavassa selitetään se mielenkiintoinen luokka, jossa substituenttina Y on vety, asetoksi, karbamoyylioksi tai edellä mainittu tärkeä luokka typpipitoisia heterosyklisiä tioryhmiä.

Substituentin Y eniten suosittuna luokkana on asetoksi, karbamo-yylioksi, 3-substituoitu-l,2,4-tiadiatsol-5-yylitio, 2-substitu-oitu-1,3,4-oksadiatsol-5-yylitio, l-substituoitu-imidatsol-2-yylitio, l-eubstituoitu-lH-tetrasol-5-vylitio, 2-substituoitu- l,3-4-tiadiatsol-5-yylitio, 3,4-disubstituoitu-l,2,4-triatsol-5- 9 67384 yylitio tai 3-substituoitu-tiatsol-5-yylitio, jolloin substi-tuenttina on metyyli, karboksimetyyli, hydroksimetyyli, hydroksi-etyyli, karbamoyylimetyyli, 2-N,N-dimetyyliaminoetyyli, metoksi-metyyli tai etoksikarbonyylimetyyli, jolloin 3,4-disubstituoitu- 1,2-4-triatsol-5-yylitio-yhdisteen molemmat substituentit ovat samanlaiset tai erilaiset. Bakteerien vastustamiseksi voidaan yhdistettä (I) käyttää vapaana amfoteerisenä ioniyhdisteenä tai muunmuotoisena, kuten farmaseuttisesti hyväksyttävänä suolana, esim. ei myrkyllisten kationien suoloina, joista mainittakoon natrium, kalium, jne.; emäksisten aminohappojen suolat, kuten arginiini, ornitiini, lysiini, histidiini, jne.; polyhydroksi-alkyyliamiinien suolat, kuten N-metyyliglukamiini, dietanoli-amiini, trietanoliamiini, trishydroksimetyyliamino, trishydrok-simetyyliaminometaani, jne.; epäorgaanisten happojen suolat, kuten kloorivetyhapon, rikkihapon, typpihapon, fosforihapon, jne., suolat; ja orgaanisten happojen suolat (esim. oksaalihapon, fumaarihapon, viinihapon, jne. suolat). Yhdistettä (I) tai sen edellä mainittua suolaa voidaan myös käyttää biologisesti aktiivisena esterijohdannaisena sen 4-karboksyylifunktion ansiosta, joka esterijohdannainen myötävaikuttaa korotettuun verenpaineeseen ja pidentyneeseen tehokkuuteen. Koska tämä esteri on hyödyllinen edellä mainittuun käyttötarkoitukseen, mainittakoon ryhmä, jonka muodostavat alkoksi(C1-4)metyyliesteri, alkoksi-(Ci_4)etyyliesteri, alkyyli(0χ_4)tiometyyliesteri, alkyyli(C^_4)-karbonyylioksimetyyliesteri tai alkoksi(C^_4>karbonyylioksi-alkyyli (C]^_4) ester i (esim. alkoksi(C1-4)karbonyylioksimetyyli, jne.). Lähemmin määriteltynä esterinä voi olla metoksietyyli-esteri, etoksimetyyliester i, isopropoksimetyyliesteri, o<-metok-sietyyliester i , o(-etoksietyyl iester i, etyylitiometyyliester i, isopropyylitiometyyliesteri, pivaloyylioksimetyyliesteri, a-ase-toksibutyyliesteri ja 1-(etoksikarbonyylioksi)-etyyliesteri, jne.

Keksinnön mukaiset yhdisteet voivat esiintyä lukuisina tauto-meerisinä muotoina, jolloin tautomeroituminen on kuvattu seuraa-vassa.

10 HN h2n 6 73 8 4 HN —C-CO-Ceph N_3-C-CO-Ceph » n

N

^ OH ^

, ^ OH

(tiatsoliinimuoto) (tiatsolimuoto) -HH _

(joissa kaavoissa I I

Ceph tarkoittaa 0 # N CH2Y

OOOH

jossa Y tarkoittaa samaa kuin edellä on määritelty. ) Tämäntyyppisten yhdisteiden esiintymismuotoja on tutkittu monien kirjoittajien taholta, ja kirjallisuudessa viitataan monessa tapauksessa tiatsoliinimuotoon (G.J. Kruger ja G. Gainer, Acta Cryst. B 27, 326 (1971); ja J.M. Vandenbelt ja 1. Doub, J.Am. Chem. Soc. 66 (1944) ) ja tiatsolimuotoisissa tapauksissa (l.M. Werbel, Chem. & Ind. (1966), 1634).

Eri määritysten perusteella luullaan kuitenkin, että tämän keksinnön mukaiset yhdisteet valtaosaltaan ovat tiatsoliinimuodossa, koska tämä erikoinen muoto stabiloituu edellä esitetyissä kaavoissa näytetyn vety-sidoksen muotavaikutuksella.

M

H ·· / N

'N 0-Cx 0H NCeph (jossa kaavassa symboli Ceph tarkoittaa samaa kuin edellä on määritelty). Kaikkien tällaisten tasapainotilojen yhteydessä on kuitenkin tunnettua, että edellä mainittu tasapainotila voi vaihtua jompaankumpaan suuntaan, riippuen erilaisista olosuhteista, joille keksinnön mukaiset yhdisteet voivat joutua alttiiksi, ja joista mainittakoon pH-arvo ja liuottimen polaarisuus, lämpötila, substituenttien tyypit ja muut parametrit.

Tästä syystä keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan merkitä millä tahansa 11 67384 niistä vaihtoehtoisista järjestelmistä tai käyttää vastaavia nimistöjä. Tässä selityksessä ja oheisissa patenttivaatimuksissa kaikkia tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä kutsutaan niiden tiatsoliinimuotoina.

Tämän keksinnön tarkoituksena on peittää kaikki edellä mainitut tauto-meerit.

Keksinnön mukaiset yhdisteet tehoavat gram-positiivisiin samoin kuin gram-negatiivisiin "bakteereihin, kuten edellä jo mainittiin. Niitä voidaan turvallisesti antaa, kuten tiedetään tunnettujen kefalosporii-nilääkkeiden yhteydestä, jauheena tai liuoksena, suspensiona, voiteena tai muina annostusmuotoina, jolloin ne tavalliseen tapaan on sekoitettu fysiologisesti siedettäviin kantimiin, siirtoaineisiin tai laimenti-miin. Näistä kantimista, siirtoaineista ja laimentimista mainittakoon vesi, fysiologinen suolaliuos ruiskeita tai liuoksia varten, sekä tärkkelys, laktoosi jauhetta varten. Varsinkin suositaan näiden joukosta fysiologista suolaliuosta.

Niinpä keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää turvallisina lääkkeinä sellaisten tartuntatautien estämiseksi tai hoitamiseksi, jotka aiheutuvat bakteereista, ja joista mainittakoon märkärakkula-taudit, hengitystiehyen tartunnat, mäksatiehyen tartunnat, suoliston tartunnat, virtsatiehyen tartunnat ja gynekologiset tarttumat. Kohteista, joille näitä tuotteita voidaan antaa, mainittakoon ihmiset, muut lämminveriset eläimet, mukaanluettuina rotat, hiiret, koirat, hevoset, jne.

Edellä mainittujen tautien,esim. virtsatiehyeiden tartuntojen hoidossa, voidaan käyttää mm. seuraavia esimerkkeinä mainittuja yhdisteitä keksinnön mukaisten yhdisteiden joukosta, jotka sopivasti annetaan lihaksensisäisesti tai laskimonsisäisesti siten, että päivittäinen annos on noin 1...20 mg/kg kehon painoa siinä tapauksessa, että on kyBymys täyskasvuisesta ihmisestä, jolloin tämä määrä jaetaan kolmeen... neljään annokseen päivässä.

Natrium-7-/~2-(2-imino-4-tiatsoliini-4-yyli)-2-hydroksi-imino-aset-amido_7**3-nietyyli-3-kef eemi-4-karboksylaatti (syn-i some eri); Natrium-7-^~2-(2-imino-4-tiatsoliin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-aset-amido _7-3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatti (syn-isomeeri); N atrium-7-/" 2-(2-imino-4-tiatsoliin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido ]- 3-karbamoyylioksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatti (syn-isomeeri)f 12 67384

Natrium-?-^** 2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yy li )-2-hydroksi-imino-asetamido_7- 3-(1-metyylitetratsol-5-yyli)-tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatti (syn-isomeeri); 7-/“2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7--3-^“1-(2-N,N-dimetyyliaminoetyyli)-tetratsol-5-yyli_7-tiometyyli-3-kef eemi-4-karboksyylihappo (syn-isomeeri);

Natrium-7-^“2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7- 3-/"’1-(3-N,N-dimetyyliaminopropyyli)-tetratsol-5-yyli_7-tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatti (syn-isomeeri);

Natrium-7-^”2-(2-imino-4-tiatsalinr4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7“ 3-(1-karbamoyylimetyylitetratsol-5-yyli)-tiometyyli-3-k efeemi-4-karboksylaatti (syn-isomeeri);

Natrium-7-^"’2-(2-imino-4-tiat80lin-4-yyli)“2-hydroksi-imino-asetamido_7“ 3-^”1- (2-hydroksietyyli)tetratsol-5-yyli_7-tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatti (syn-isomeeri);

Natrium-7-^“2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)--2-hydroksi-imino-asetaraido_>7- 3-(1,3,4-tiadiatsol-2-yyli)tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatti (syn-isomeeri);

Natrium-7-^""2-(2-imino-4-tiatsolin-4~yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_>7” 3-(2-metyyli-1,3,4-tiadiatsol-5-yyli)tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksy-laatti (syn-dsomeeri): 7-^"’2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7“3-^“2-(2-N,N-dimetyyliaminoetyyli)-1,3»4-tiadiatsol-5-yyli->7-'tiometyyli- 3-kef eemi-4-karboksyylihappo (syn-isomeeri);

Natrium-7“^”2- (2-imino-4~tiatsolin-4-yyli)“2-hydroksi-imino-asetamido_7- 3-(2-hydroksimetyyli-1,3,4-tiadiatsol-5-yyli)tioraetyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatti (syn-isomeeri);

Natrium-7-^”2- (2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7- 3- (2-N,N-dimetyylikarbamoyylimetyyli-1,3,4-tiadiatsol-5-yyli )tiometyyli-3~kef eemi-4-karboksylaatti (syn-isomeeri);

Natrium-7-£~2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7-3"^~2-(2-hydroksietyylito-1,3,4-tiadiatsol-5-yyli}7-tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatti (syn-isomeeri);

Dinatrium-7-/”2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)“2-hydroksi-imino-asetamido_7- 3-(2-karboksimetyyli-1,3,4-tiadiatsol-5-yyli)tiome tyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatti (syn-isomeeri): 7-/~2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7-3-(3-metyyli-1,2,4-tiadiatsol-5-yyli)tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksyyli-happo (syn-isomeeri)j i3 67 38 4

Natrium-7-^"" 2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-lmino-asetamido>_7- 3-(1,2,3-triatsol-4-yyli)tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatti (syn-isomeeri);

Natrium-7-/”2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamiclo_7- 3-(4-metyyli-1,2-4-triatsol-3-yyli)tiometyyli-3-ke£eemi-4-karboksylaatti (syn-isomeeri);

Natrium-7-7~2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7- 3-(3,4-dimetyyli-1,2,4-triatsol-5-yyli)tiometyyli-3-kefeemi-4~karboksy-laatti (syn-isomeerl);

Natrium-7-/"2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7- 3-(3-hydroksimetyyli-4-metyyli-1,2,4-triatsol-5-yyli)tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatti (syn-lsomeeri);

Natrium-7-*/"2- (2-imino-4-tiatsolin-4-yyli )-2-h.ydroksi-imino-asetamidot_7- 3- (2-metyyli-1,3,4-oksadiatsol-5-yyli)tiomΘtyyli-3-kefeemi-4-karboksy~ laatti (syn-isomeerl);

Dinatrium-7-/”2-(2-iraino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7- 3- (4-kaxboksimetyylitiatsol-2-yyli)tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatti (syn-lsomeeri);

Natrium-7-/"2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7- 3-(2-metoksimetyyli-1,3,4-tiadiatsol-5-yyli)tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatti (syn-isomeerl):

Natrium-7-/~2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7- 3- /”2-(2-hydroksietyyli)-1,3,4-tiadiatsol-5-yyli)tiometyyli-3-k efeemi- 4- karboksylaatti (syn-lsomeeri):

Natrium-7-/"2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli )-2-hydroksi-imino-asetamido_7- 3-(2-etoks ikarbonyylime tyyli-1,3,4-tiadiatsol-5-yyli)ti ome tyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatti (syn-isomeeri),

Ottaen huomioon niiden bakteereja vastustavat ominaisuudet voidaan tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä käyttää tarttumista estävänä aineena tai desinfioimisaineena bakteerien poistamiseksi, mukaanluettuina edellä mainitut tai alla mainitut bakteerit, kirurgisista välineistä tai sairaalahuoneista.

Niinpä kirurgiset kojeet pannaan edellä mainittua tarkoitusta varten kahdeksi päiväksi vesiliuokseen, jossa on 1000 yug/ml jotain tämän keksinnön mukaista yhdistettä.

Mitä bakteereja vastustaviin ominaisuuksiin tulee, on yhdisteellä (i) ja sen suoloilla suurempi bakteereja vastustava vaikutus kuin tämän H 67384 yhdisteen (I) esterillä sellaisenaan. Esteri tulee kuitenkin hydrolysoitumaan esim. kohteen elävässä kudoksessa, jolloin tämä esteri muuttuu yhdisteeksi (I) tai sen suolaksi.

Keksinnön mukaista yhdistettä (I), ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa tai esteriä voidaan valmistaa soveltamalla sinänsä tunnettuja menetelmiä.

Yhdistettä (I) tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa tai esteriä voidaan valmistaa soveltamalla menetelmää, jonka mukaan saatetaan seuraavan kaavan mukainen yhdiste

W-CH200C00NH

\h oJ-l/ ^ (II)

GOOH

jossa kaavassa W tarkoittaa klooria täi bromia ja Y tarkoittaa samaa kuin edellä on määritelty, tai sen suola, reagoimaan tiokarbamidin kanssa.

Yhdisteen (II) suoloista mainittakoon happoadditiosuolat, (esim. kloori-vetysuola, rikkihapposuola, typpihapposuola, jne) yhdisteen (II) emäksisen funktion luona, ja emäksiset additiosuolat (esim. natriumsuola, kaliumsuola, pyridiinisuola, trietyyliamiinisuola, jne.) yhdisteen (II) happofunktion luona.

Tiokarbamidin määrä yhdisteen (II), sen suolan suhteen on 1,0...5,0 moolia yhdisteen (II), sen suolan moolia kohden.

Reaktio suoritetaan normaalisti sekoittamalla yhdiste (il), tai sen suola, tiokarbamidin kanssa lämpötilassa, joka on rajoissa 0...80 °C, Reaktio suoritetaan sopivasti liuottimessa. liuottimena on sopivasti liuotin, joka ei vaikuta reaktioon. Sopivasti käytetään jotain ns. polaarista aproottista liuotinta, joista esimerkkeinä mainittakoon dimetyyliformajnidi, dimetyyiiasetamidi, dimetyylisulfoksidi, asetoni triili, heksametyylifosforiamidi, jne., tai näiden seosta. Reaktioaika vaihtelee lähtömateriaalin tyypin, reaktiolämpötilan, liuottimen tyypin tai muiden reaktio-olosuhteiden mukaan. Reaktio sujuu kuitenkin loppuun ajassa, joka on rajoissa 0,5 tuntia...3 päivää.

15 67384

Keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa soveltamalla jotain muuta menetelmää, esim. nukleofiilistä siirtoreaktiomenetelmää. Siinä tapauksessa, että Y kaavassa (I) tarkoittaa hydroksyyliä, kvatemääris-tä ammoniumryhmää tai typpipitoista heterosyklistä tioryhmäa, voidaan keksinnön mukaista yhdistettä valmistaa myös soveltamalla menetelmää, jonka mukaan seuraavan kaavan mukainen yhdiste:

HN

HN-—C-OONH “I-f > (III)

N 0^"N^ CKoM 011 COOK

jossa kaavassa M tarkoittaa asyloksiryhmää, tai sen suola saatetaan reagoimaan veden, kvaternääristä ammoniumryhmää vastaavan amiinin tai rikkipitoisen heterosyklisen tioliryhmän kanssa.

Yhdisteen (lii) suolojen tyyppi on sama kuin yhdisteen (il) suolojen tyyppi.

Asyloksiryhmänä M voi esim. olla jokin seuraava ryhmä: asetyylioksi, 3-oksobutyryylioksi, 3-karboksipropionyylioksi, 2-karboksibentsoyyli-oksi, mandelyylioksi, 2-(N-karboetoksikarbamoyyli)-bentsoyylioksi, 2- (N-karboetoksisulfamoyyli )bentsoyylioksi, 2-karboks.i-3- (tai 6 )-nitrobentsoyylioksi tai muu senkaltainen ryhmä. Tämä muuntoreaktlo, jota tarkastetaan tässä ainoastaan kefeemirenkaan 3 aseman yhteydessä, joka on muutettava, on 3-asyloksiryhmän nukleofiilinen substituutio-reaktio, ja on sellaisenaan identtisesti sama kuin ne nukleofiiliset substituutioreaktiot, jotka on selitetty useissa ennestään tunnetun tekniikan mukaisissa julkaisuissa ja patenteissa (ks. esim. E.H. Flynn (ed.) "Cephalosporins and Penicillins", Chapter 4, Part 5, 151, 1972, Academic Press; japanilainen patenttijulkaisu 17936/1964; japanilainen patenttijulkaisu 26972/1964; japanilainen patenttijulkaisu 11283/1968). Näin ollen edellä esitetty reaktio voidaan suorittaa soveltamalla jotain näistä ennestään tunnetuista menetelmistä, tai jotain samankaltaista menetelmää.

Mitä yhdisteen (III), sen suolan ja veden väliseen reaktioon tulee, edistyy tämä reaktio tunnetun hydrolyysin mukaan. Hydrolyysi-reaktio suoritetaan normaalisti -20...+50 °C:ssa. Reaktio edistyy 16 67334 nopeammin epäorgaanisen emäksen ollessa läsnä (esim. natriumhydroksidi, kaliumhydroksidi, jne.). Reaktio sujuu loppuun 48 tunnissa.

Mitä amiinin ja yhdisteen (III) tai sen suolan väliseen reaktioon tulee, vastaa amiini kvaternääristä ammoniurnryhmää. Täten reaktiossa käytettävään amiiniin sisältyy pyridliniyhdiste, jonka kaava on: O" jossa kaavassa Z tarkoittaa samaa kuin edellä on määritelty. Amiinin määrä on 1,0...10 moolia yhdisteen (III) tai sen suolan moolia kohden. Reaktio suoritetaan 0...100 °0:ssa, sopivasti orgaanisen tai epäorgaanisen liuottimen ollessa läsnä, liuottimen esimerkkeinä mainittakoon vesi, deuteriumoksidi, dimetyyliformamidi, dimetyyliasetamidi, dioksaani, asetoni, metanoli, etanoli, dimetyylisulfoksidi, asetonitriili, tetra-hydrofuraani, jne., tai näiden seokset. Reaktio sujuu loppuun 48 tunnissa.

Mitä typpipitoisen heterosyklisen tioliryhraän ja yhdisteen (III) ja sen suolan väliseen reaktioon tulee, on typpipitoisena heterosyklisenä tioliryhmänä tioliyhdiste, joka vastaa edellä määriteltyä typpipitoista heterosyklistä tioryhmää. Niinpä typpipitoisena heterosyklisenä tioliryhmänä voi olla seuraavan kaavan mukainen yhdiste: HS-Het jossa kaavassa Het tarkoittaa samaa kuin edellä on määritelty. Typpipitoista heterosyklistä tiolia voidaan käyttää vapaana tiolina sellaisenaan, mutta sopivasti sitä käytetään suolana, esim. alkalimetallisuolana, joista mainittakoon esim. natriumsuola tai kaliumsuola. Käytettävä määrä typpipitoista heterosyklistä tiolia suhteessa yhdisteeseen (III) tai sen suolaan on 1,0...5,0 moolia yhdisteen (III) tai sen suolan moolia kohden. Tämä reaktio suoritetaan sopivasti liuottimessa. Liuottimena voi esim. olla vesi. deuteriumoksidi, tai epäorgaaninen liuotin, joka helposti sekoittuu veteen ja ei reagoi lähtömateriaalien kanssa, ja joista mainittakoon esimerkkeinä dimetyyliformamidi, diraetyyliaseta-midi, dioksaani, asetoni, alkoholit, asetonitriili, dimetyylisulfoksidi, tetrahydrofuraani, jne. Reaktiolämpötila ja -aika riippuvat lähtö- 17 67384 materiaalista Ja liuottimesta, sekä muistakin tekijöistä, ja reaktio sujuu yleensä loppuun sopivassa lämpötilassa, joka on rajoissa Q...100 °C, jolloin reaktioaika on muutamista minuuteista vuorokausiin. Reaktio suoritetaan lähellä neutraalisuutta, esim. pH-arvojen 2 ja 8 välillä, ja sopivasti rajoissa 5...8. Reaktio voidaan valinnanvaraisesti suorittaa lievemmin lisäämällä kvat e määristä ammoniumsuo laa, jolla on pinta-aktiivisia ominaisuuksia, esim. lisäämällä reaktiojärjestelmään tri-metyylibentsyyliammoniumbromidia, trietyylibentsyyliammoniumbromidia, tai trietyylibentsyyliammoniumhydroksidia. lisäksi saavutetaan edullisia tuloksia siinä tapauksessa, että reaktio suoritetaan inertissä kaasussa, esim. typessä niin, että estetään hapettuminen ilmastollisen hapen vaikutuksesta.

Keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan myös valmistaa soveltamalla jotain muuta ennestään tunnettua menetelmää, esim. asyloimisreaktio-menetelmää.

Keksinnön mukaisia yhdisteitä valmistetaan soveltamalla menetelmää, jonka mukaan yhdiste, jonka kaava on H2N VT *1 (IV) 0J^^x>ch2y

000H

jossa kaavassa Y tarkoittaa samaa kuin edellä on määritelty, tai sen suolaa, saatetaan reagoimaan asyloimisaineen kanssa, joka on johdettu syn-isomeerisestä karboksyylihaposta, jonka kaava on

A A

—^ ir°°0H (v)

N

^ OR9 jossa kaavassa R8 on vetyatomi tai suojaxyhmä, ja R9 on vetyatomi tai suojaryhmä. Yhdisteen (IV) suola on samaa laatua kuin q yhdisteen (II) suola. Symbolin R° edustamana suojaryhmänä on helposti lohkaistavissa oleva suojaryhmä, joka on ennestään tunnettu

O

peptidikemian alalta. Niinpä suojaryhmänä R voi olla formyyli, alkyyli(C1_^)karbonyyliryhmä (esim. asetyyli, propionyyli, jne.), 18 67384 substituoitu alkyyli(C-j<<>^)karbonyyliryhmä (esim. klooriasetyyli, jne.), alkoksi(C^_^)kax‘bonyyliryhmä (esim. t-butoksikarbonyyli^ jne), alkoksi-(C^^alkyyliiC^^karbonyyliryhmä (esim. metoksiasetyyli, metoksi-propionyyli, jne), substituoitu alkoksi(C^^)karbonyyliryhmä (esim. trikloorietoksikarbonyyli, jne), aralkyyli( .j q )oksikarbonyyliryhmä (esim. bentsyylioksikarbonyyli, jne.), tai substituoitu aralkyyli(0γ_10)-oksikarbonyyliryhmä (esim. p-nitrobentsyylioksikarbonyyli, jne.), tai protoni.

Suojaryhmänä R^ on helposti lohkaistavissa oleva suojaryhmä, jonka kemistit hyvin tuntevat, ja joka voidaan poistata lievissä olosuhteissa. Suojaryhmän esimerkkeinä mainittakoon asyyliryhmä, esim. formyyli, asetyyli, klooriasetyyli, trifluoriasetyyli, metoksiasetyyli, fenoksi-asetyyli, bentsoyyli, bentsoyyliformyyli, p-nitrobentsoyyli, etoksi-karbonyyli, β , β , β -trikloorietoksikarbonyyli, β, [b, β -tribromietoksi-karbonyyli, p-nitrofenoksikarbonyyli, ja substituoitu alkyyli, kuten tetraihydrotiofuranyyli, metoksi, metoksitetrahydropyranyyli, jne., tetrahydropyranyyli ja 2-metoksietoksimetyyli, ja myös silyyliryhmä, kuten trimetyylisilyyli, dimetyyli-t-butyylisilyyli, jne.

Tässä menetelmässä käytetään yhdistettä (V) joko vapaana yhdisteenä (V), sen suolana tai reaktiivisena johdannaisena, asyloimisaineena yhdisteen (1Y) tai sen suolan 7-äsamassa olevan amino-ryhmän asyloimiseksi. Edellä mainittu reaktio kohdistetaan näin ollen vapaaseen happoon (V), tämän vapaan hapon (V) alkali- tai maa-alkali-me tai li suolaan (esim. natrium-, kalium- tai kalsium-suolaan), vapaan hapon (V) orgaaniseen amiinisuolaan (esim. trimetyyliamiini- tai pyridiinisuolaan) tai tämän reaktiiviseen johdannaiseen» Siinä tapauksessa, että karbokeyylihappoa (Y) käytetään vapaana happona tai smälsas% käytetään sopivaa koudeaso i*iaaine11a# Tällaisen kondensoimieainessi esimerkkeinä main! tia^ceehE,Ir-d lauhat ituoitu karbodi-imidi, esim. Ν,Ν'-disykloheksyyli-karbodi-imidi; atsolidit, esim. N,RT-karbonyyli-imidatsoli ja H,N*-tionyylidi-imidatsoli; vettä poistavat aineet, esim. N-etoksikarbonyyli-2-etokei-1,2-dihydrokinoliini, fosforioksikloridi ja alkoksiasetyleeni; 2-halogeenipyrldiinisuolat (esim. 2-klooripyridiinl-metyyli-jodidi, 2-fluoripyridiinimetyyli-jcdidi), jne· Tällaista fcon-densoimisainetta käytettäessä oletetaan, että reaktio edistyy karbok-syylihapon (Y) reaktiivisen johdannaisen kautta, kytkettynä kondensoi-misaineeseen.

19 67384 Tämä yhdisteen (IV), tai sen suolaa» reaktio äsyloimisaineen kanssa edistyy helposti sinänsä tunnetuissa olosuhteissa. Niinpä voidaan esimerkkinä mainita, että reaktio voidaan suorittaa vastaavanlaisissa olosuhteissa kuin on selitetty saksalaisessa kuulutusjulkaisussa (01S) No P 2461478. Reaktio suoritetaan tavallisesti sopivassa inertissä liuottimessa. Tällaisten liuottimien esimerkkeinä mainittakoon halogenoidut hiilivedyt, esim. kloroformi, metyleenikloridi, jne.; eetterit, esim. tetrahydrofuraani, dioksaani, jne.; dimetyyliformamidi; dimetyyliasetamidi; asetoni; vesi ja tällaisten liuottimien seokset. Mainitun asyloimisaineen määrä on normaalisti rajoissa noin 1...5, sopivasti 1...2 mooliekvivalenttia, laskettu yhdisteestä (IV) tai sen suolasta tai esteristä. Tämä reaktio suoritetaan yleensä lämpötila-alueella -50 °C...+40 °C. Reaktioaika valitaan yhden ja kymmenen tunnin välillä, sopivasti yhden ja kolmen tunnin välillä. Asyloimisreaktion

Q Q

jälkeen saojaryhmä R ja/tai R? voiaan haluttaessa poistaa* Suoja- o n ryhmän R ja/tai R^ poistaminen voidaan yleensä suorittaa sinänsä tunnettuja menetelmiä soveltaen, (esim. menetelmää, joka on selitetty japanilaisessa kuulutusjulkaisussa no 52083/1975 ja julkaisussa »Pure and Applied Chemistry”, 7, 335 (1963) ) tai soveltamalla jotain analogista menetelmää.

Q

Niinpä esim. symbolin R edustama t-butoksikarbonyyli voidaan poistaa käsittelemällä hapon (esim. kloorivedyn, rikkihapon, jne.) vesiliuok-

Q

sella, ja symbolin R edustama monoklooriasetyyli voidaan poistaa

Q

käsittelemällä tiokarbamidin avulla. Symbolin R edustama formyyli tai trifluoriasetyyli voidaan poistaa käsittelemällä kaliumbikarbonaatin

G

vettä sisältävällä metanoliliuoksella, ja symbolin R edustama tetra-hydropyranyyli voidaan poistaa käsittelemällä laimean kloorivetyhapon avulla. Suojaryhmän poistaminen suoritetaan sinänsä tunnetuissa olosuhteissa*

Siinä tapauksessa, että lopullinen tuote (I) valmistetaan vapaana happona, voidaan se muuttaa farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi sinänsä tunnettuja menetelmiä soveltaen.

20 67384

Kun Keksinnön mukainen lopullinen tuote saadaan suolana, voidaan se muuttaa vapaaseen muotoon tai joksikin muuksi suolaksi soveltamalla ennestään tunnettua menetelmää.

Siinä tapauksessa, että keksinnön mukainen lopullinen tuote saadaan vapaana karboksyylihappona tai sen suolana 4-asemassa, voidaan se esteröidä esteriksi tavanomaisia menetelmiä soveltaen, jolloin esterin laatu on edellä yksityiskohtaisesti määritelty. Lähemmin sanottuna esteri valmistetaan soveltamalla menetelmää, jonka mukaan yhdiste (I) tai sen suola tai reaktiivinen johdannainen saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on HO-R10 (VI) 10 jossa kaavassa R on esteritähde, tai sen reaktiivinen johdannainen. Yhdisteen (I) suolan luonne, mukaanluettuna yhdisteen (II) suolan luonne, ja yhdisteen (I) reaktiivisen johdannaisen luonne, ovat samat kuin yhdisteen (V). Yhdisteen (VI) reaktiivisena johdannaisena on kaava Hal-R^° (Ή*), jossa Hai on halogeeni ja R10*on alkoksi (C^^)-metyyli, alkoksi(tyyli, alkyyli(C.j_^)tiometyyli, alkyy 11(0^_^)-karbonyylioksimetyyli tai alkoksiiC^^JkarbonyylioksialkyyliCc^^). Näiden ryhmien esimerkit on edellä mainittu yksityiskohtaisesti yhdisteen (I) yhteydessä.

Symboli Hai tarkoittaa klooria, fluoria, bromia tai jodia, ja Hai on sopivasti jodi tai bromi.

Täten kaavan (VI’) raukaisen yhdisteen esimerkkeinä mainittakoon metoksi-metyylikloridi, metyylitiomityylikloridi, kloorimetyyliasetaatti, bromi-metyyliasetaatti, bromimetyylipivalaatti, jodimetyylipivalaatti, jodi-metyyli-etoksikarbonaatti, jne.

Siinä tapauksessa, että lähtöyhdistettä (I) käytetään vapaana karbok-syylihapponruotona 4-asemassa, suoritetaan reaktio sopivasti emäksen ollessa läsnä. Emäksen esimerkkeinä mainittakoon epäorgaaniset emäkset, kuten natriumbikarbonaatti, kaliumbikarbonaatti, litiumkarbonaatti, natriumkarbonaatti, kaliumkarbonaatti, jne., ja orgaaniset emäkset, 21 67384 kuten disykloheksyyliamiini, morfOliini, N-etyylianiliini, N,N-dietyyli-aniliini, N-metyylimorfOliini, pyridiini, trietyyliamiini, jne.

Reaktio voidaan suorittaa liuottimessa, joista mainittakoon aseto-nitriili, N,N-dimetyyliformamidi, N,N-dimetyyliasetamidi, N,N-dimetyyli-formamidi, dikloorimetaani, kloroformi, dimetyylisulfoksidi, dietyyli-eetteri, tetrahydrofuraani, asetoni, metyylietyyliketoni, nestemäinen rikkihappoanhydridi. Näistä käytetään varsin edullisesti dimetyyli-formamidia, asetonia, asetönitriiliä ja nestemäistä rikkihappoanhydri-diä.

Emäksen määrä on tavallisesti yksi ekvivalentti suhteessa lähtöyhdistee-seen (I) tai sen suolaan.

Reaktio suoritetaan sopivasti -20...20 °0:ssa. Nestemäistä rikkihappo-anhydridiä käytettäessä liuottimena on reaktiolämpötila sopivasti -20 °C...-10 °C.

Reaktioaika vaihtelee lähtömateriaalien, reaktiolämpötilan, liuottimen tyypin jne. mukaan,mutta on tavallisesti rajoissa 10 minuuttia...120 tuntia.

Sen jälkeen, kun on suoritettu reaktiot, joissa keksinnön mukaiset yhdisteet muodostuvat, eristetään haluttu yhdiste reaktioseoksesta sinänsä tunnettuja menetelmiä soveltaen. Keksinnön mukainen yhdiste voidaan puhdistaa soveltamalla ennestään tunnettuja menetelmiä. Näiden esimerkkeinä mainittakoon uuttaminen, pH-arvon säätö, konsentroiminen, kiteyttäminen, uudelleen kiteyttäminen, kromatografointi, jne.

Keksinnön mukaisessa yhdisteessä (I) tai sen suolassa tai esterissä on hydroksyyliryhmä syn-konfiguraatiossa asetamidoryhmään nähden (toisin sanoen -C0NH-) 7-asemassa. Esiintyy kuitenkin tapauksia, joissa yhdisteen (I) muodostumiseen liittyy anti-isomeerin muodostuminen, jonka kaava on

HN_LL C-CONH -7-f N

^ .lv»*- “·> * ooTh 22 67384 jossa kaavassa Y tarkoittaa samaa kuin edellä on määritelty, tai muodostuu vastaava suola tai esteri, siinäkin tapauksessa, että ainoastaan käytetään vastaavaa syn-isomeeristä lähtöyhdistettä. Mutta menetelmässä, jossa reaktio tapahtuu (1) yhdisteen (lii) tai sen suolan ja (2) veden, amiinin tai typpipitoisen heterosyklisen tioryhmän välillä, tai keksinnön mukaisessa menetelmässä, jossa reaktio tapahtuu (1) yhdisteen (II), sen suolan ja (2) tiokarbamidin välillä, ja kun lähtömateriaali (II)f (III) tai sen suola on pääasiallisesti puhdas syn-isomeerl. ei anti-lsomeerln (I*) tuotos ylitä 10 % yhdisteen (I) tuotoksesta.

Siinä tapauksessa, että syn-isomeeristä lähtöyhdistettä (II), (III), tai (Y) käytetään yhdessä vastaavan anti-isomeerisen yhdisteen kanssa, sisältää reaktioseos tietenkin yhdistettä (I) ja (I'), (toisin sanoen syn- ja anti-isomeeriseoksena). Näin on asianlaita tietenkin myös siinä tapauksessa, että yhdisteen (II), (III) tai (V) suolaa käytetään lähtömateriaalina. Tavoitteena oleva syn-isomeeri (I), sen suola tai esteri erotetaan tai eristetään helposti soveltamalla ennestään tunnettuja menetelmiä, kuten kromatografaintia, jakokiteyttämistä, jne.

Yhdistettä (II), tai sen suolaa, valmistetaan seuraavan kaavan mukaan soveltamalla menetelmiä, jotka on selitetty japanilaisissa kuulutusjulkaisuissa no 95295/1975, no 11095/1975 ja no 56487/1976 tai japanilaisessa patenttihakemuksessa no 1274/1976 tai esim. soveltamalla jotain näiden menetelmien kaltaista menetelmää.

23 67334 ν ΓΥ*')

COOH

w 2 CH2=C-CH2 WCH200CH200W *- 6-0=0 (VII) (VIII) 4

W-CH-COCH^CONH -r^S>S

w -.

COOH

(X) v nitrosoimisaine

W-CH200CC0NH

\H ^ CH2Y COOH

(II) (jossa kaavassa symbolit ¥ ja I tarkoittavat samaa kuin edellä on määritelty).

Ensin saatetaan symbolin W2 edustama bromi tai kloori reagoimaan diketeenin, esim. kaavan (VII) mukaisen diketeenin kanssa, jolloin bromin tai kloorin määrä on ekvimoolinen diketeenin kanssa. Tämän jälkeen täten muodostunut yhdiste (VIII) saatetaan reagoimaan yhdisteen (IX) kanssa tai sen suolan kanssa sinänsä tunnetulla tavalla siten, että saadaan muodostumaan yhdiste (X) tai sen suola. Yhdistettä (IX) tai sen suolaa voidaan valmistaa millä tahansa tunnetulla tavalla, esim. soveltamalla menetelmää, joka on selitetty japanilaisessa kuulutusjulkaisussa no 11782/1976, saksalaisissa kuulutusjulkaisuissa no P 2607064 ja no P 2619243 tai soveltamalla jotain muuta analogista menetelmää. Niinpä voidaan kaavan (IX) 24 67384 mukaista yhdistettä ja sen suolaa tai esteriä valmistaa muuttamalla 7-asyyliamino-3--asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappn 3-asemassa oleva substituentti tai 7-asyyliamino-3-hydroksimetyyli-3-kefeemi- 4-kärboksyylihappo tai sen suola halutuksi -CHgY-ryhmäksi ja tämän jälkeen poistaa 7-asyyliryhmä tai vaihtoehtoisesti voidaan 7-amino-3-akvitoitu asyloksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappoon (josta aktivoitu asyloksiryhmä selitetään seuraavassa) tai sen suolaan suoraan kohdistaa nukleofiilinen substituutioreaktio veden, kvatemää-ristä ammoniumryhmää vastaavan amiinin, tai typpipitoisen heterosykli-sen tioliryhmän avulla.

Tämän jälkeen yhdiste (X) tai sen suola saatetaan reagoimaan ' nitrosoimisaineen kanssa siten, että saadaan yhdiste (II), tai sen suola. Mitä yhdisteen (X) suolaan tulee esim. siinä tapauksessa, että emäksinen ryhmä on läsnä yhdisteen (X) substituentissa Y, (esim. siinä tapauksessa, että Y on 1-(2-N,N-dimetyyliaminoetyyli)-1H-tetrat-sol-5-yylitio), voidaan yhdiste (X) saattaa reagoimaan happosuolana tämän emäksisen funktion luona, jolloin esimerkkeinä mainittakoon mine-raalihapon (kuten kloorivetyhapon, rikkihapon tai fosforihapon) suolan tai orgaanisen hapon (esim. oksaalihapon tai p-tolueenisulfonihapon) suolan. Siinä tapauksessa, että voimakkaasti hapan ryhmä on läsnä yhdisteen (X) substituentissa Y (esim. siinä tapauksessa, että Y on 2-(2-sulfoetyyliamino)-1,3,4-tiadiatsol-5-yylitio)), voidaan yhdiste (X) saattaa reagoimaan tämän happofunktion epäorgaanisena tai orgaanisena suolana, esim. alkalimetalli- tai maa-alkalimetallisuolana (esim. litium, natrium tai kalium) tai orgaanisen emäksen suolana (esim. trietyyliamiinisuolana).

Mainittuna nitrosolmisaineena voidaan normaalisti käyttää jotain sellaista ainetta, kuten typplhapoketta, typpihappoestereitä, kuten metyylinitriittiä, etyylinitriittiä, amyylinitriittiä, jne. esim. nitrosyylikloridia. Typplhapoketta voidaan käyttää sellaisena kuin sitä kehittyy reaktiojärjestelmässä siinä tapauksessa, että alkali-metallini triitti reagoi hapon, esim. kloorivetyhapon tai etikkahapon kanssa.

Nitrisointireaktio, toisin sanoen yhdisteen (X), sen suolan ja nitrosoimisaineen välinen reaktio, suoritetaan sopivasti liuotti-messa. Voidaan käyttää mitä tahansa sellaista liuotinta, joka ei vaikuta haitallisesti reaktioon. Normaalisti liuottimena käytetään 25 6 7 3 8 4 esim. dioksaania, asetonitriiliä, tetrahydrofuraania, vettä, etikka-happoa tai näiden liuottimien sopivaa 3eosta. Reaktiota voidaan nopeuttaa siten, että läsnä on happoa. Sopivasti käytetään happona tällöin kloorivetyhappoa tai etikkahappoa. Hapon määrä on yksi mooli tai enemmän happoa yhdisteen (I) moolia kohden. Normaalisti nitrosoin-tireaktio suoritetaan huoneenlämmössä (25...35 °C) tai jäähdyttäen tai hiukan lämmittäen. Täten reaktio suoritetaan lämpötilassa, joka on rajoissa -20 °G...50 °G.

Tämän nitrosointireaktion avulla voidaan kaavan (II) mukainen hydrok-siimiyMiste, jolla on syn-konfiguraatio asyyliamidiryhmään nähden, saada suurin tuotoksin. Määrätyissä olosuhteissa saadaan stereo-isomeeriä, jolla on anti-konfiguraatio, kuten kaava (ll‘) näyttää, pienehköin määrin, sekä yhdessä edellä mainitun yhdisteen (II) kanssa, mutta monissa tapauksissa stereoisomeerin (II*) tuotos ei ylitä 10 prosenttia yhdisteen (II) määrästä.

WCHpGO-C-OONH / ^ K Τί 2 (n·) m' o οη2ϊ

GOOH

(jossa kaavassa käyteyt symholit tarkoittavat samaa kuin edellä on määritelty).

Tämä on keksinnön eräs erikoisen edullinen tunnusmerkki, joka koskee yhdisteen (I) mukaista valmistusta, jolla on syn-konfiguraatio. kuten yhdisteellä (II). Täten saatu yhdiste (II) voidaan eristää ja puhdistaa soveltamalla tavanomaisia menetelmiä, kuten uuttamalla liuottimien avulla, säätämällä pH-arvoa, vaihesiirtoa, kiteyttämistä, uudelleen-kiteyttämistä, kromatografointia jne.

Typpipitoinen heterosyklinen tioli (esim. edellä mainittu kaavan HS-Het mukainen yhdiste, jossa Het tarkoittaa samaa kuin edellä on määritelty) voidaan valmistaa 1) soveltamalla sinänsä tunnettuja menetelmiä, jotka on selitetty esim. luvussa 5, Heterocyclic Chemistry (A.R. Katritzky and J.M. lagowsky, John Willey and Sons, I960), luku 1 julkaisussa Heterocyclic Compounds, Voi. 8 (R.C. Elderfield, John Willey and Sons, 1967), Advances in Heterocyclic Chemistry, Voi. 9 (A.R. Katritzky and A.J. Boulton, Academic Press, 1968, sivut 165...209, ja Dai Yuki Kagaku 26 , , s 67384 (Munio Kotake (ed.), Asakura Shoten, Vol. 15, tai soveltamalla näiden tunnettujen menetelmien analogisia menetelmiä, tai 2) kohdistamalla typpipitoiseen heterosykliseen tioliin, riippumatta siitä, onko se ennestään tunnettu tai onko se valmistettu jonkin edellisen menetelmän 1) mukaan, sinänsä tunnettu kemiallinen modifiointireaktio tai minkä tahansa yhden tai useamman funktionaalisen ryhmän reaktiot tioliryhmää lukuunottamatta.

Kaavan (V) mukaista yhdistettä tai sen suolaa valmistetaan sinänsä tunnetun menetelmän avulla. Niinpä voidaan kaavan (V) mukaista yhdistettä tai sen suolaa valmistaa soveltamalla meietelmää, jonka mukaan kohdistetaan seuraavan kaavan mukaiseen syn-isomeeriseen yhdisteeseen 8' Rö N .3^ (a)

HN-C-COOA

N

\ 9' 0Ry 8 ’ 9 * jossa kaavassa R tarkoittaa vetyä tai suojaryhmää, R tarkoittaa vetyä tai suojaryhmää ja A tarkoittaa esteritähdettä, tai tämän yhdisteen suolaan de-esteröimisreäktiota. Esteritähteen A esimerkkinä alkyyli(C^_^) (esim. metyyli, etyyli, n~propyyli, i-propyyli, t-butyyli, jne.), alkyyli(0^^), joka on substituoitu fenyylillä (esim. bents-hydryyli, jne.).

De-esteröimisreaktio suoritetaan soveltamalla sinänsä tunnettua menetelmää, mukaanluettuna hydrolyysi, hydrogenolyysi, lohkaistu hapon avulla, jne. De-esteröimisreaktio suoritetaan sopivasti siten, että kaavan (XI) mukainen yhdiste tai sen suola saatetaan kosketukseen seoksen kanssa, joka sisältää trifluorietikkahappoa ja anisolia. Tri-fluorietikkahappoa ja anisolia käytetään kumpaakin ylimäärin yhdisteeseen (XI) tai suolaan verrattuna. Reaktio suoritetaan lämpötila-alueella -20 °C..,50 °C, ja sujuu tavallisesti loppuun 5 tunnissa. Haluttaessa voidaan yhdistettä (XI) käyttää yhdessä vastaavan anti-isomeerin tai sen suolan kanssa. Reaktion jälkeen haluttu yhdiste (V) tai sen suola voidaan eristää tai puhdistaa soveltamalla sinänsä tunnettua menetelmää, kuten konsentroimalla, kiteyttämällä, kromatogra-foimalla, jne. Yhdistettä (V) tai sen suolaa sisältävään reaktioseok-seen voidaan- kuitenkin myös kohdistaa seuraava reaktio välillä puhdista- 27 67384 matta tai eristämättä. Edellä mainittuja kaavan (V) mukaisen yhdisteen reaktiivisia johdannaisia valmistetaan sinänsä tunnetuin menetelmin yhdisteestä (V) tai sen suolasta.

Yhdistettä (XI) tai sen suolaa valmistetaan soveltamalla sinänsä tunnettua menetelmää, tai menetelmiä, jotka on selitetty seuraavissa vertailuesimerkeissä.

Keksintö havainnollistetaan seuraavassa lähenmin eräiden esimerkkien perusteella.

Kaikki prosenttimäärät tarkoittavat painoa ellei muuta erikoisesti mainita. Ydinmag-neettiset spektrit, jotka on esitetty niissä, mitattiin käyttämällä Varian Model XL-10QA (100 MHz)-tyyppistä kojetta tai T-60-tyyppistä (60 MHz) spektrometriä, jolloin tetrametyylisliaania käytetään sisäpuolisena tai ulkopuolisena vertailuna, ja kaikki <$-arvot tarkoittavat ppm = miljoonasosia, Synfooli s tarkoittaa singlettiä, d= dub-lettia, dd= kaksoisdublettia, t= triplettiä, c[= kvartettia, m- multiplettiä ja J kytkentävakiota.

Kokeet

Seuraavissa taulukoissa on esitetty eräiden keksinnön kaavan (I) mukaisten tyypillisten yhdisteiden estävä minimikonsentraatio (MIC) niiden tulosten perusteella, jotka on saavutettu työesimerkeissä, ja tutkittu vaikutusta erilaisiin bakteereihin, jota vaikutusta on verrattu eräiden kaupan saatavien ja kliinisesti hyväksyttyjen kefalo-sporiinien vastaaviin MIC-arvoihin (The New England Journal of Medicine 294, 24 (1976) ja Journal of Pharmaceutical Science 64 1899 (1975), jne.

"Cephalothin" £ natrium-7- (2-t ienyyliasetamido)-3-asetoks imetyyli-3-kef eemi-4- karbo ksylaatti_7; "Cephaloridine” £7- (2-tienyyliasetamido) -3- (1-pyridyyli) -metyyli-3-kefeemi-4-karbdcs^ylihappo-betaniinij7; ja "Cefalozin" £natrium-7-(IH-tetrasoI-l-vyli)asetamido-3-(2-metyyli-l,3,4- tiadiatsol-5-yy!1)tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksylaattiJ.

Taulukoissa on myös esitetty useiden keksinnön mukaisten edustavien yhdisteiden (I) ja "Cephaloridine”:in terapeuttinen vaikutus tartunnan saaneisiin hiiriin.

(a) Estävät minimikonsentraatiot (taulukot 1 ja 2)

Menetelmä: Agar-sarjalaimennus

Väliaine: TSA

Ynppäysnaärä: loVml

Vertailutaulukossa on esitetty osittain samoja arvoja kuin taulukoissa 1 - 2 ja verrattu näitä tuloksia DE-julkaisun A 2 556 736 läheisten yhdisteiden arvoihin. Taulukosta ilmenee selvästi keksinnön mukaisten yhdisteiden oarenpi antibakteerinen vaikutus.

67384 28

I ι ’ I

Jjp ; Ό Ov co co vo cncDvo !^4>-=r ooo ooo S H " C i" rH rH H rH O O O H OO r-t rn p g Hi t-1 Λ Λ Λ UJ So________________ _ _

ίίΐΛ>5 LO CO ΓΟ OO LO VO

U O W VO SS S CNi ^ M Oi LO LO

^ O ro O W VO* H oi CO -P e O M Λ Λ Λ rH rH

-------- -. - - -_ .

•H

^ (rt rt) ^

V I I rt ^ tn IA LH LA O O IP O CO VO LA

0) n 2 Α·ϊ°° · · CM O rH C\J O PJ C— AO

^ w w......

^ Γ-ί-HCO1 rH i I VO O OO O O O rH O

JS * » Q· E Q__________;_________f_________ ra Q Jh O .H VO VO VD rH OI LO OJ LO O O C\i

-H O φ <y C En LO LO lo O OO O O Oi Oi O

•H V’ m o. P rH rH rH O O O O O O O O

•H -W ^_______________-VL,_____________________________ -P 1 M Ή «0 c.

fco S

© H H .rH O- CO CO VO OO LO ΟΛ

T- Co-rtll l OOO Hl t LO CO C— CV LO OO

I OT S o Oi O O LO........

° ί ΓΗ O O rH rH O O >—I O O VO O

| s i--------\~—-H—-—1---------l-t·- d g h c\j cm .=» oj ^r

CtJ c («rl □ m VO VO rH rH OJ rH LO O O CM

EH Ο'ηΙηΙ rH LO LO O O O O O CM OJ O

ωθ8° CO rH rH O O O O O OO O

w w vi vi v: *£ -=r

j! . nj n~t \o CJ LO O (Vi O O"! CT\ LO

-C ca *H OI LO rH LO O O rH O ,Η ΓΟΓΟ O

w !q o CVJ ΓΟ rH oooooooo _ W o O 2 1-1 Ϊ -i - 1 CQ ^ •h σν σν lo CO QO CO CO oo co en oo 5 äo® i· ^ °7 ^ ^ ^ ^

O 3 H O O r—I OOOOOOOO

£ -P w o et} ra h · ~ ^---------------------

0 U O

P) ra ς<

1 ,¾ H H CL, O LO σ> <o CO o\ CO CO C\ Oi CTJ

Im do φ o pj o ro cncorot- t- on en t- il’0 3 ° OOO O O O o O ei o o .' en o <h__ ——— t | . " ‘ *“ 1 —

C *H CVI VO LO fO -rf O- VO

ä) rlH ΑΙΓ\»"τ-τ-τ-τ·τ·Ν ^ »H «h ® ΉΌΐ·Η·Η·Η·Η·Η·Η·ΗιΗ·Η 3 iti"3äaäaääää Ä oompppppppp ¢0 H H -P (H® © Φ © © © © © «j <a <e a a a a a a a a o ^h Vh *h ·η·η·η·η·η·η ·η <h M rarararamrarammrara __ M X t» _H cq pq pq pq pq pq pq 67384 2$ ! I h I vo) ' ο Φ C o o o o m oo co co o

^ μ 3 t"- O OO rH H rg O t— Γ— C- rH

| P Ο Φ τΗγΗ o o o

'rH id Ή5 rH I—I r—I O O O Ό O O O O

Ο A <M ΌΟ Λ Λ Λ

•H

•H

la ia la o la ct> ct, o ia

o 0) C · O O I—I Ο CO m CM O

ί-, P 3 CT, LA O CM

μ o ¢) σ\ cm la.h o o o o o o o o h co p £3

O £1 <M O

Ί φ r

O 54 (il (M

5h <U O oo IA VO LA VO LA

(D μ ¢) (\J O OO C\1 UV cg IA CM IA IA

P O O rH O O O · · · · (A

S3 CC? rH rH rH r*l VO i—1 VO i—I CM VO CM CM

M A O tH Λ Λ Λ rHrH

co l oo !| " p 3 Φ oo p· -=r

.p 0) bO f- CM LA O O O CTV O CJ

OPP-n- O OO O O H rH CMOOCMO φΟ-ΡΚΟΟΟ

Q) £ιφ*ΗΟ »H i—If—I O O O O 0.0 O O

CM Sh ίπ Λ Λ

O CO I

3 0 OO CM CM CM CM CM P CM

p <D bO PO Ά VO rH rH rH rH rH CM IA rH

φ.O pm IA LA CM O O O O O O O O

to o g·5 Ά · · · · · · ....

H £4 φ *H tH /—I 1—I O O O O O O O O O

V> CL, k SH vl VI VI VI V! VI VI

^ .p n , co ~ p p o P 3 I VO O CM IA (M OOCACTi 34 cJ <0 cc? f h o 00 cm o o o CM CM m m 34 bo p bO 00 o 00

3 Φ O Γ-t -H O rH «H rH O O O O OOOO

H ö rl O H p4 Λ Λ ^ » pL, e c h EH § W Γ

h 3 -H (TV 00 LA LA LA O O O O CT, CT\ LA

O ΦΑΙΑ rH CM CM O rH CM rH rH CO OO O

P rt PO * ·· · * · * *" "I* o £4 w =t mvooooo o 00 00 £4 ·Η Ή 1*3

Pi Eho

CO

co ·Η m

3 Sh rH IA LA IA 0O ' VO OO

φ rt P O O O CM · CM rH LA rH

P LOp Ο O O CM · - - O · O

OH2 rH rH rH rH VO VO OA LA rH m LA

in 3 O Λ Λ Λ _ &4_ >________________________________1_____

co CO -H

3 5-4 CO VO LAPOlA la O la OO CT, O GrtCC LA CMrH O O rH O rHrH OOrH

μ bO CT, « ·· · . · · ·· · « o rH o co rH vo m o o o o 00 o o k 0 Ph |_P-r > M__ _______

•rH

fi *H CM VO LA fA Ή- Γ— VO

<D -H-HÖLAt-·»— t-t-t-i— CM

P S3 -H -H

CO tH H Ή Ή ·Η ! Ή -rH »H -rl Ή 3 SSSäääilääää

A OOCQM^iHfHhfHfHfH

S γΗγΗΡΦΦΦΟΦΦΦΦ φ «jcöoigssösaEs

O *H cp cp -p -rH -H ·Η Ή -H ·Η -H

S4 <DO<ycocococococorom

L___ «I w w 53 M p4 | 1¾ M

30 67384

Vertai 1utaulukko (meg/ml)

1-^-Γ—^--1 I I

Serra· Serra- l \ tia tia Proteus \ Proteus Proteus Proteus j vhdiste marces- rnarc-es- vulgaris jmlrabi- morga- rettge- y c.ens cens IFO ! lis nli rl

IFO ΦH2U 3988 Ϊ GM4359 IF03168 TM33S

1 2 O M O I___

Kefalo tiini >100 >100 *-56 j 3-13 >100 1.56

Kefaloridiini >100 >100 6,25 6.25 >100 1.56

Kefatsoliini >10° >10° 3-13 | 6.25 100 <0.2 ^ ... ^ ________1 -—~____I______ * ' \ l

Esirn 5 6.25 1.56 0.05 0.05 0.20 <0.012 ' ' -.n -n " —————

Esim 12 0.78 0.39 0.05 0.10 0.024 <0.012 ^ Esim 16 3>13 0>78 0.10 0.20 0.05 <0.012 O)------------___ (/) * Esim 15 0#78 0.73 0.05 0.10 0.024 <0.012 .

--------------1___I__ rs * Esim 13 ]2S 1>56 I 0>10 0.10 0.20 <0.012 :0 ‘ c Esim 14 6.25 0.78 | °·10 °-39 0.20 0.024 •f— _ ____ . > % Esim 17 1.56 0.78 0.39 0.39 0.39 0.05 1*: L____________________„______,_.[ ! Esim 26 1 2. 5 1.56 j_0.10 0.05 0.39 <0.012 j t ----------I---1)----------[-----j----

Esim 2 50 100 6.25 1.56 6.25 |< 0.2 , ^ EsiiT1 5 50 >1 00 0.78 0.39 25 *0.2 CO —.....-M.·,,·,.----------------------------- ^ Esim 41 12.5 25 <0.2 <0.2 1.56 < 0.2 LO " ' " ---——--------- ^ Esim 47 12.5 50 3.13 1.56 3.13 *0.2 ® Esim 61 12.5 3.13 0.20 1.56 50 < 0.2

Esim 62 25 3.13 0.78 6.25 0.78 < 0.2 1 . .

3i 6 7 3 8 4 (b) Terapeuttinen vaikutus tartunnan saaneisiin hiiriin (taulukot 3 ja 4)

Koe-eläin; koiraspuollnen hiiri, ICR/SLC

Viiden eläimen ryhmää käytettiin lääkettä kohden.

Tartuttamistapa: intraperitoniaalisesti

Tartutusbakteeri: Escherichia coli 0-111

Havaintoajän pituus: 7 vuorokautta

Antotapa: Kokeiltavaa yhdistettä (1 mg, 10 mg, 100 mg ja 200 mg) liuotettiin steriiliin suolaliuokseen (100 ml) ja 0,2 ml liuosta annettiin ihonalaisesti yhtenä annoksena välittömästi tartuttamisen jälkeen. Jokaisen liuoksen kahdenkertainen laimennus annettiin viidelle ryhmälle hiiriä, joissa jokaisessa oli 5 hiirtä.

Taulukko 3

Koeyhdiste Antotapa ED^q, ms/kg

Esimerkki 5 ihonalaisesti 0,033

Esimerkki 12 ihonalaisesti 0,028

Kefaloridiinl ihonalaisesti 2,60

Taulukko 4

Koeyhdiste Antotapa ED^q, mg/kg

Esimerkki 15 ihonalaisesti 0,016

Esimerkki 16 Ihonalaisesti 0,035

Kefaloridiini ihonalaisesti 1,81

Esimerkki 1 a 7~(4-bromi-2-hydroksi-imino-3-oksobutyryyliamino)-3- raetyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihapon valmistus (syn-isomeerl) lisättiin tiputtaen tunnin aikana liuokseen, jossa oli 3,7 g 7-(4-bromi-3-oksobut,yryyliamino-3-metyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa 37 ml:ssa etikkahappoa sekoittaen ja jään avulla jäähdyttäen liuos, jossa oli 0,953 g natriumnitriittiä 4 ml:ssa vettä.

Tämän jälkeen seosta sekoitettiin edelleen huoneenlämmössä 3 tuntia. Reaktioseos kaadettiin liuokseen, jossa oli 100 ml kyllästynyttä natriumkloridin vesiliuosta ja 200 ml etyyliasetaattia, ja täten 32 6 7 3 8 4 saatua seosta ravistettiin, minkä jälkeen orgaaninen kerros otettiin talteen, pestiin natriumkloridin kyllästyneellä vesiliuoksella, kuivattiin ja konsentroitiin. Jäännökseen lisättiin etyylieetteriä ja seosta sekoitettiin. Muodostunut jauhe otettiin talteen suodattamalla. Tällä tavoin saatiin 1,34 g otsikossa mainittua yhdistettä.

IR(Or, cm"1): 1770, 1695, 1660 NMR(100 MHz, dg-IMSO, 6 ): 2.02(s, 3-CEj), 3.46(ABq, J=19 Hz, 2-CH2), 4.59(s, BrCHg-), 5.08(d, J=5 Hz, 6-H), 5.69(dd, J=5 & 8 Hz, 7-H), 9.22(d, J* 8 Hz, OONH), 13.07(s, =N0H)

Alkuaineanalyysi laskettu yhdisteelle C^H-j 2^^3^6^ C 35.48; H 2.98; N 10.34 Saatu C 34.91; H 3.25; N 10.14

Esimerkki Ib

Natrium-7-^*’2-(2-imino-4-tiatsolin-4*-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7- 3-metyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatin valmistus (s^n-isomeeri)

Liuotettiin 1,2 ml:aan dimetyyliasetamidia 0,122 g 7-(4-bromi-2-hydroksi-iraino-3-oksobutyryyliamino)-3-metyyli-3-kefeemi-4-karboksyyli-happoa (syn-isomeeri) ja 0,03 g tiokarbamidia, ja tätä liuosta sekoitettiin huoneenlämmössä 1,5 tuntia. Reaktioseokseen lisättiin sekoittaen 10 ml etyylieetteriä ja pinnalle nouseva neste poistettiin dekan-toimalla, minkä jälkeen lisättiin 10 ml etyylieetteriä. Tämä menettely toistettiin kahdesti. Saatu jauhe otettiin talteen suodattamalla ja liuotettiin 10 ml;11a 5% natriumkarbonaattiliuosta. Liuos pylväs-kromatografoitiin käyttämällä polystyreenihartsia (Amberlite XAD-2,

Rohm & Haas Co.) ja dekstraanigeeliä (Sephadex LH-20, Pharmacia) tässä mainitussa järjestyksessä ja kehitettiin vedellä. Praktiot, jotka sisälsivät haluttua tuotetta, yhdistettiin ja lyofiloitiin. Tällä tavoin saatiin 0,09 g otsikossa mainittua yhdistettä.

IR(KBr, cm”1): 1760, 1590 NMR (100 MHz, dg-LMSO + DgO, b): 1.93(s, 3-CH5), 3.25(ABq, J=18 Hz, 2-CH2), 4.96 (d, J=5 Hz, 6-H), 5.57(d, J=5 Hz, 7-H), 6.71(s, tiatsoliini 5-H)

Alkuaineanalyysi: laskettu yhdisteelle C^H-j 2^0^82^^3^0 G 33.99; H 3.95; N 15.24; todettu C 34.24; H 4.15; N 15.13.

33 6 7 3 8 4

Esimerkki 2a 7-(4-kloori-2-hydroksi-imino-3-oksobutyryyliamino)-3-asetoksimetyyli- 3-ke£eemi-4-karboksyylihapon valmistus (syn-isomeeri)

Seosta, jossa oli 22,4 g (57,4 mM) 7-(4-kloori-3-oksobutyryyliamino)-3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa ja 200 ml etikkahappoa, sekoitettiin jäällä jäähdyttäen, ja lisättiin tiputtaen neljännestunnin aikana liuos, jossa oli 5,5 g (79,7 mM) natriumnitriittiä 20 ml:3sa vettä* Tämän jälkeen jääkylpy poistettiin, ja reaktioseoksen saavutettua huoneenlämmön sekoitettiin sitä 3,5 tuntia. Reaktioseokseen lisättiin 600 ml natriumkloridin kyllästynyttä vesiliuosta, ja seos uutettiin neljästi 250 ml määrillä etyyliasetaattia. Uutokset yhdistettiin, pestiin vedellä, kuivattiin ja konsentroitiin alennetussa paineessa. Tällä tavoin saatiin 14,31 g otsikossa mainittua yhdistettä kiteinä. IR(KBr, cm*”1)ϊ 1790 NMR(100 MHz, dg-UMSO, b ): 2.05(s, CH300), 3.43 & 3.66(ABq, J-18 Hz, 2-CH2), 4.70 & 5.02(ABq, J-13 Hz, 3-0H2), 4.80(s, OlOHg), 5.15(d, J=5 Hz, 6-H), 5.79(dd, J=5 & 8 Hz, 7-H), 9.28(d, J»=8 Hz, CONH), 13.17(s, -N-0H). Alkuaineanalyysi, laskettu aineelle °14H14C:m308S*H20 C 38.41; H 3.68; N 9.60 saatu G 38.53; H 3.31; N 9.32

Esimerkki 2b 7-^~2-(2-imino-4-tiatsolin-4-’yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7-3-asetoksimetyyli-3“kefeemi-4-karboksyylihappo-hydrokloridin valmistus (syn-isomeeri)

Liuotettiin 50 ml:aan dimetyyliasetamidia 10,4 g (24,9 mM) 7-(4-kloori- 2-hydroksi-imino-3“Oksobutyryyliamino)-3-asetok6imetyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa (syn-isomeeri) ja 1,89 g tiokarbamidia, ja liuosta sekoitettiin huoneenlämmössä 3,5 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, ja jäännökseen lisättiin sekoittaen etyyli-eetteriä. Pinnalle nouseva neste poistettiin dekantoimalla. Jäännökseen lisättiin etyyliasetaattia, ja pinnalle nouseva neste hylättiin. Tämän jälkeen lisättiin jäännökseen etyylleetteriä ja etyyliasetaattia vuoron perään neljästi. Muodostunut jauhe otettiin talteen imusuodatta-malla ja kuivattiin. Tällä tavoin saatiin otsikossa mainittua yhdistettä .

IR(KBr, cm-1): 1781 34 NMR (100 MHz, dg-BMSO, 6 ): 67384 2.04(s, CH^OO), 3.45 & 3.68 (ABq, J= 18 Hz, 2-0¾), 4.72 & 5.02 (ABq, J*13 Hz, 3-0H2), 5.19(d, J=5 Hz, 6-H), 5.79 (dd, J=5 & 8 Hz, 7-H), 6.88(s, tiatsoliini 5-H), 8.8(br. s, H2N= & tiatsoliini NH), 9.64(d, J=8 Hz, CONH), 12.41(br, s, =N-OH).

Esimerkki 3

Natrium-7-/ 2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-i!nino-asetamido 7- 3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatin valmistus (syn-lsomeeri)

Liuotettiin 1 ml:aan dimetyyliformamidia 0,209 g 7-(4-kloori-2-hydroksi-imino-3-oksobutyryyliamino)-3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksyyli-happoa (syn-lsomeeri) ja 0,038 g tiokarbamidia, ja täten saatua seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 2,5 tuntia. Saatuun reaktioseokseen sekoitettiin 10 ml etyyliasetaattia, jolloin erottui kumimainen tuote. Pinnalle nouseva neste poistettiin dekantoimalla ja jäännökseen sekoitettiin 10 ml etyylieetteriä. Tuloksena saatu jauhe otettiin talteen suodattamalla, liuotettiin välittömästi liuokseen, jossa oli 0,084 g natriumbikarbonaattia 10 ml:ssa vettä ja kromatografoitiin pylväässä, jossa oli dekstrangeeliä (Sephadex 1H-20, Pharmacia), sekä kehitettiin vedellä. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot kerättiin ja lyofiloitiin Tällä tavoin saatiin 0,098 g otsikossa mainittua yhdistettä.

IR(Or, cm"1): 1765 NMR (100 MHz, d6-DMS0, 6): 2.02(s, CH3C0), 3.21 & 3.51(ABq, J=18 Hz, 2-CH2), 4.82 & 5.04 (ABq, J=13 Hz, 3-CHg), 5.04 (d, J=5 Hz, 6-H), 5.66 (dd, J=5 & 8 Hz, 7-H), 6.64 (s, tiatsoliini 5-H), 7.11 (br. s, HN= & tiatsoliini NH), 9.55 (d, J=8 Hz, CONH), 12.0 (br. =N-0H) NMR (100 MHz, LgO, b ): 2.14 (s, CH300), 3.39 & 3.71 (ABq, J*18 Hz, 2-CH2), 4.74 & 4.94 (ABq, J=13 Hz, 3-CH2), 5.25 (d, J=5 Hz, 6-H), 5.86 (d, J=5 Hz, 7-H), 6.99 (s, tiatsoliini 5-H).

Alkuaineanalyysi laskettu kaavalle G^H^N^O^SgNa. 2H20 0 36.07? H 3.63; N 14.02 saatu C 35.78; H 3.57; N 14.13.

Esimerkki 4

Natrium-7-/"*2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7-3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatin valmistus (syn-isomeeri) 35 6 7 3 8 4

Liuokseen, jossa oli 0,2 g natriumbikarbonaattia 4 ml:ssa vettä, liuotettiin 0,619 g 7-/~2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7”3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihapon hydrokloridia. Liuos pylväskromatografoitiin käyttämällä dekstraani-geeliä (Sephadex LH-20, Pharmacia) ja kehitettiin vedellä. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot otettiin talteen ja lyofiloitiin. Tällä tavoin saatiin 0,42 g otsikossa mainittua yhdistettä.

Infrapuna- ja ydinmagneettisen resonanssispektrin mukaan tämä yhdiste todettiin samaksi kuin esimerkissä 5 saatu yhdiste.

Esimerkki 5 7-/”2- (2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7~3>-asetokslmetyyli-3-kefeemi-4~karboks;yylihapcn valmistus (syn-isomeeri)

Seokseen, jossa oli 0,309 g 7-^~2-(2-imino-4-tlatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7“3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksyyli-hapon hydrokloridia (syn-isomeeri) ja 1 ml etikkahappoa, lisättiin riittävä määrä 1 N kloorivetyhappoliuosta siten, että edellinen täydellisesti liukeni. Tämä liuos pylväskromatografoitiin käyttämällä poly-styreenihartsia (Amberlite XAD-2, Rohm & Haas Co) ja kehitettiin vedellä ja etanolin 20% liuoksella tässä mainitussa järjestyksessä. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin, konsentroitiin ja lyofiloitiin. Tällä tavoin saatiin otsikossa mainittua yhdistettä. IR(KBr, onf1)s 1770 NMR (100 MHz, dg-IMSO, b ): 2.04(s, CH300), 3.38 & 3.62 (ABq, J=18 Hz, 2-CH2), 4.72 & 5.00 (ABq, J=13 Hz, 3-CH2), 5.13 (d, J«5 Hz, 6-H), 5.78(dd, J=5 & 8 Hz, 7-H), 6.67 (s, tiatsoliini 5-H), 7.04(br. s, HN= & tiatsoliini NH), 9.37(d, J*=8 Hz, OONH),

Alkuaineanalyysi yhdisteelle Ci S2 * 1 · 5H20 laskettu C 38.46; H 3.87; N 14.95 saatu C 38.59; H 3.81; N 14.93.

Esimerkki 6a 7. (4*-bromi-2-hydroksi-iraino-3-oksobutyryyliamino )-3-asetoksime tyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihapon valmistus (syn-jsomeeri)

Sekoitettiin jään avulla jäähdyttäen seosta, jossa oli 4,5 g 7-(4-bromi-3-oksobutyryyliamino)-3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa 36 67384 ja 10 ml etikkahappoa, ja lisättiin 0,76 g natriumnitriittiä. Jää-kylpy poistettiin, ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä tunnin ajan. Etikkahappo poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja lisättiin jäännökseen 200 ml etyyliasetaattia ja 100 ml vettä. Seoksen pH säädettiin arvoon 2 riittävällä määrällä fosforihappoa ja ravistettiin perusteellisesti. Orgaaninen kerros otettiin talteen, pestiin vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin. Jäännökseen lisättiin sekoittaen pieni määrä etyyliasetaattia, ja saatu jauhe otettiin talteen suodattamalla. Tällä tavoin saatiin 2,0 g otsikossa mainittua yhdistettä.

IB. (KBr, cm”1): 1790, 1710, 1655, 1550 NMR (100 MHz, dg-IMSO, b)i 2.05(s, CH300), 3.44 & 5.67 (ABq, J*18 Hz, 2-CHg), 4.59(s, BrCH2-), 4.70 & 5.02(ABq, J=13 Hz, 3-CH2), 5.14(d, J*4.5 Hz, 6-H), 5.79 (dd, J=4.5 & 8.0 Hz, 7-H), 9.28 (d, J=8 Hz, CONH), 13.10(s, -N-OH). Alkuaineanalyysi laskettu yhdisteelle c14H14M3°8s C 36.22; H 3.04; N 8.82 saatu G 37.56; H 3.14; N 8.82

Esimerkki 6b 7-^“2-(2-imino-4“-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7“5“ asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatin valmistus (syn-isomeeri)

Liuotettiin 1 ml:aan dimetyyliasetamidia 0,232 g 7-(4-bromi-2-hydroksi-imino-3-oksobutyryyliamino)-3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksyyli-happoa (syn-isomeeri) ja 0,038 g tiokarbamidia, ja täten saatua seka-liuosta sekoitettiin huoneenlämmössä 2,5 tuntia. Reaktioseokseen sekoitettiin 10 ml etyyliasetaattia, minkä jälkeen erottui kumimainen tuote. Pinnalle noussut neste poistettiin dekantoimalla ja jäännökseen sekoitettiin 10 ml etyylieetteriä. Muodostunut jauhe koottiin suodattamalla ja liuotettiin välittömästi liuokseen, jossa oli 0,084 g natriumbikarbonaattia 10 ml:ssa vettä. Liuos pylväskromatografoitiin dekstraa-nigeeliä käyttäen (Sephadex LH-20, Pharmacia) ja kehitettiin vedellä. Otettiin talteen fraktiot, jotka sisälsivät haluttua tuotetta ja lyofi-loitiin. Edellä selitetyllä tavalla saatiin 0,112 g otsikossa mainittua yhdistettä.

Infrapunaspektrin ja ydinmagneettisen resonanssispektrin mukaan tämä tuote oli samaa kuin se tuote, joka saatiin esimerkissä 5.

Esimerkki 7a 7-(4-kloori-2-hydroksi-imino-3-oksobutyryyliamino)-3-niandelyylioksi- 37 6 7 3 8 4 metyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihapon valmistus (syn-isomeeri)

Sekoitettiin jäähdyttäen liuosta, jossa oli 0,47 g (1mM) 7-(4-kloori-3-oksobutyryyliamino)-3-(mandelyylioksiraetyyli)-3-kefeemi-4-karboksyyli-happoa 2 ml:saa vedetöntä etikkähappoa, ja lisättiin tiputtaen tunnin aikana liuos, jossa oli 0,1 g (1,5 mM) natriumnitriittiä 0,2 ml:ssa vettä. Tämän jälkeen seosta sekoitettiin huoneenlämmössä tunnin ajan. Etikkahappo poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, ja jäännökseen lisättiin 50 ml etyyliasetaattia ja 30 ml vettä. Seosta ravistettiin voimakkaasti, ja orgaaninen kerros otettiin talteen, pestiin natriumkloridin kyllästyneellä vesiliuoksella ja kuivattiin. Tämän jälkeen liuotin poistettiin haihduttamalla, jäännökseen lisättiin 30 ml eetteriä ja 30 ml petrolieetteriä, ja raavittiin astian seinämää uudelleen. Täten saatiin 0,29 g otsikossa mainittua yhdistettä jauheena. IR(KBr, cm"1): 1780, 1741, 1715(sh.), 1675(sh.), 1640(sh.), 1540 NMR(100 MHz, dg-IMSO, 6): 3.24(br, s, 2-CH2), 4.77 & 5.07(ABq, J=13 Hz, 3-CH2), 5.04(d, J=5 Hz, 6- H), 5.18(s, -CH-), 5.79(dd, J*5 & 8 Hz, 7-H), 7.3-7.5(m, C^-), 9.26(d, J=8 Hz, -00NH-), 13.10(s, =N-0H).

Esimerkki 7b 7- ^”2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_>7-3- (mandeiyylioksimetyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihappo-hydrokloridin valmistus (syn-isomeeri) liuotettiin 2 mliaan dimetyyliasetamidia 0,24 g (0,5 mM) 7-(4-klöori-2-hydroksi-imino-3-oksobutyryyliamino)-3-(mandelyylioksimetyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa (syn-isomeeri) ja 0,042 g (0,55 mM) tio-karbamidia, ja tätä liuosta sekoitettiin huoneenlämmössä 2 tuntia, liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännökseen lisättiin 60 ml etyyliasetaattia, minkä jälkeen sekoitettiin. Muodostunut jauhe otettiin talteen suodattamalla, pestiin eetterillä ja kuivattiin. Tällä tavoin saatiin 0,26 g otsikossa mainittua yhdistettä jauheena.

IR(KBr, cm"’1): 1776, 1741, 1672, 1631, 1536 NMR (100 MHz, dg-IMSO, & ): 3.26(br. s, 2-CH2), 4.78 & 5.08(ABq, J=13 Hz, 3-CH2), 5.08(d, J- 5 Hz, 6-H), 5.18(s, -CH-), 5.78(dd, J=5 & 8 Hz, 7-H), 6.86(s, tiatsoliini 5-H), 7.3-7.5(m, CgHj-), 9.61(d, J=8 Hz, CONH).

38 67384

Esimerkki 8 Q ' ° ° (2-imino-4-tiatsolin*-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7-3-(1-me tyyli-1H-tetratsol-5-yyli )-tiome tyyli-3-kef eemi-4-karboksylaatin valmistus (syn-isomeeri)

Liuotettiin 20 ml:aan fosfaattipuskuria (0,2 M, pH 6,4) 0,883 g 7-/”2-(2-imino-4**tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7-3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappohydrokloridia ja 0,232 g 1-metyyli-1H-tetratsol-5-tiolia ja 0,336 g natriumbikarbonaattia, ja täten saatua liuosta sekoitettiin 70 °C:ssa 3 tuntia. Reäktioseos pylväskromatografoitiin käyttämällä polystyreenihartsia (Amberlite XAL-2, Rohm and Haas Co.), ja kehitettiin vedellä. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot otettiin talteen ja lyofiloitiin. Täten saatiin 0,217 g otsikossa minittua yhdistettä.

IR(KBr, cm"1): 1763 MR(100 MHz, d6-DMS0, &): 3.41 & 3.66(ABq, J=18 Hz, 2-CH2), 3.93 (s, tetratsoli-CH^), 4.28 & 4.46 (ABq, J=13Hz, 3-0¾)f 5.04 (d, J=5 Hz, 6-H), 5.77(dd, J-5 & 8 Hz, 7-H), 6.64 (s, tiatsoliini 5-H), 7.l2(br. s, HN = & tiatsoliini NH), 9.38(d, J=8 Hz, CONH), 11.84(to, s, -NOH).

NMR(100 MHz, DgO, 8): 3.47 & 3.82(ABq, J=18 Hz, 2-CH2), 4.05(s, tetrat soli-(3¾), 4.08 & 4.34(ABq, J=13 Hz, 3-CH2), 5.22(d, J=5 Hz, 6-H), 5.80(d, J- Hz, 7-H), 6.98(s, tiatsoliini 5-H).

Alkuaineanalyysi laskettu kaavalle C^H1^Ng0^S^Na»H20 C 33.52; H 3.00; N 23.45 saatu C 33.40; H 3.47; N 21.66.

Esimerkki 9 7-^”2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-h.ydroksi-iraino-asetamido_7-3-(1,2,3-triatsol-5-yyli)tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatin valmistus (syn-isomeeri)

Liuotettiin 20 ml: aan fosfaattipuskuria (0,2 M, pH 6,4) 0,883 g 7-/”2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7”3-asetoksi-metyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappo-hydrokloridia (syn-isomeeri) ja 0,202 g 1,2,3-trlatsoli-5-tiolia ja 0,336 g natriumbikarbonaattia, ja reaktioseosta sekoitettiin korotetussa lämpötilassa eli 70 °C:ssa 1,5 tuntia. Reäktioseos pylväskromatografoitiin käyttämällä polystyreenihartsia (Amberlite XAD-2, Rohm and Haas Co.) ja kehitettiin vedellä.

39 6 7 3 8 4

Haluttua yhdistettä sisältävät fraktiot otettiin talteen ja lyofnoitiin. Tällä tavoin saatiin 0,128 g otsikossa mainittua yhdistettä. IR(KBr, cm"1); 1765 NMR(100 MHz dg-EMSQ, 8); 3.39 & 3.58(ABq, J-18 Hz, 2-GH2), 3.95 & 4.30(ABq, J-13 Hz, 3-CH2), 5.02 (d, J=5 Hz, 6-H), 6.66(s, tiatsoliini 5-H), 7.19(hr. s, HN = & tiatsoliini NH), 7.66(triatsoliini 4-H)

Alkuaineanalyysi yhdisteelle C^H^NgO^S^Na» 1,5H20 laskettu C 33.90; H 3.03; N 21.08 saatu G 33.91; H 3.68; N 19.27

Esimerkki lp 7-^”2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7-3-(3-metyyli-1,2,4-tiadiatsol-5-yyli)tiometyyli-3-kefeemi-3-karboksylaatin valmistus (syn-isomeeri) liuotettiin 20 ml;aan fosfaattipuskuria (0,2 M, pH 6,4) 0,663 g 7-^”2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7-3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappo-hydrokloridia (syn-isomeeri) ja 0,198 g 3-metyyli-1,2,4-tiadiatsoli-5-tiolia ja 0,252 g natriumbikarbonaattia, minkä jälkeen reaktioseosta sekoitettiin 70 °C; ssa 3,5 tuntia. Reaktioseos pylväskromatografoitiin käyttämällä poly-styreenihartsia (Amberlite XAD-2, Rohm and Haas Co.), ja kehitettiin vedellä ja etanolin 20% liuoksella tässä mainitussa järjestyksessä. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot otettiin talteen ja lyofiloitiin. Tällä tavoin saatiin 0,142 g otsikossa mainittua yhdistettä.

IR(KBr, cm"1); 1767 NMR (100 MHz, dg-BMSO, 6): 2.52(s, tiadiatsoli-CHj), 3.35 & 3.64(ABq, J*18Hz, 2-CHg), 4.44 & 4.58 (ABq, J=13 Hz, 3-CH2), 5.05(d, J*5 Hz, 6-H), 5.66(dd, J=5 & 8 Hz, 7-H), 6.64(s, tiatsoliini 5-H), 7.11(br. s, HN= & tiatsoliini NH), 9.46(d, J*8 Hz, OONH)

Alkuaineanalyysi kaavalle C^H^N^O^S^NaOIigO

laskettu C 32.59; H 3.42; N 16.63; saatu C 32.59; H 3.29; N 16.08

Esimerkki 11

Natrium-7-^"2~(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido__7“ 3-(4-metyyli-1,2,4-triatsol-3-yyli)tiometyyli-3-kefeemi-4-kaxboksylaatin valmistus (s^n-isomeeri) 40 67384

Liuotettiin 20 ml:aan fosfaattipuskuria (0,2 M, pH 6,4) 0,883 g 7-/~2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7-3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappo-hydrokloridia (syn-isomeeri) sekä 0,23 g 4-metyyli-1,2,4-triatsoli-3-tiolia ja 0,336 g natriumbikarbonaattia, minkä jälkeen reaktioseosta sekoitettiin 70 °C: ssa 3,5 tuntia. Reaktioseos pylväskromatografoitiin käyttämällä poly-styreenihartsia (Amberlite XAD-2, Rohm and Haas Co) ja kehitettiin vedellä. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot otettiin talteen ja lyofiloitiin. Tällä tavoin saatiin 0,371 g otsikossa mainittua yhdistettä.

IR(KBr, cm"1): 1770 MR (100 MHz, dg-DMSO, b ): 3.59(s, triatsoli-CH3), 3.38 & 3.62(ABq, J*18 Hz, 2-CH2), 4.18 & 4.30(ABq, J- 13 Hz, 3-CH2), 4.99(d, J-5 Hz, 6-H), 5.64(dd, J- 5 &

8 Hz, 7-H), 6.64(s, tiatsoliini 5-H), 7.12(br. s, HN« & tiatsoliini NH), 8.48(s, triatsoli 5-H), 9.43(d, J«8 Hz, CONH), 12.0(br. «NOH). Alkuaineanalyysi kaavalle C^H^NgO^S^Na^.SHgO

laskettu C 34.10, H 3.58, N 19.88 saatu C 34.11, H 3.72, N 19.54

Esimerkki 7 c

Natrium-7-^-2-(2-imino-4-tHttsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7-3-(2-metyyli-1,3,4-tiadiatsol-5-yyli)tiometyyli-3-kefeeml-karboksy-laatin valmistus (syn-isomeeri) liuotettiin 10 raitaan vettä 0,53 g (0,93 mM) 7-^”2-(2-imino-4-tiatso-lin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7-3-(mandelyylioksimetyyli)-3-kefeemi-4-karboksyjfrlihappohydrokloridia (syn-isomeeri). ja 0,2 g (1,5 mM) 2-me tyyli-1,3,4-tiadiatsoli- 5-tiolia ja 0,28 g (3,4 mM) natriumbikarbonaattia, ja reaktioseosta sekoitettiin 60 °C:ssa 50 minuuttia. Reaktioseos pylväskromatografoitiin käyttämällä polystyreenihartsia (Amberlite XAL-2, Rohm and Haas Co) ja kehitettiin vedellä ja etanolin 10$ liuoksella tässä mainitussa järjestyksessä. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot koottiin, konsentroitiin ja lyofiloitiin. Saatu jauhe liuotettiin 2 ml:aan vettä, ja liuos kromatografoitiin dekstraani-geelipylväasä (Sephadex 1H-20, Pharmacia), kehiteliuoksena käytettiin vettä. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot otettiin talteen ja lyofiloitiin. Tällä tavoin saatiin 0,19 g otsikossa mainittua yhdistettä.

IR(KBr, cm~^): 1767, 1666, 1600, 1542 , 41 67384 NMR (100 MHz, dg-BMSO, fc); 2.68(s, tiadiatsoliini-(¾), 3.36 & 3.63 (ABq, J» 18 Hz, 2-CH2), 4.35 & 4.56(ABq, J-13 Hz, 3-CH2), 5.04(d, J*5 Hz, 6-H), 5.66(dd, J=5 & 8 Hz, 7-H), 6.64(s, tiatsoliini 5-H), 7.10(br, s, HN« & tiatso-liini NH), 9.35(d., J= 8 Hz, OONH), 11.92(br. s, -NOH) NMR( 100 MHz, D20, b): 2.73(s, tiadiatsoli-CH3), 3.43 & 3.81 (ABq, J*18 Hz, 2-CH2), 4.03 & 4.49(ABq, J»13Hz, 3-¾), 5.22(d, J=5 Hz, 6-H), 5.83(d, J=*5 Hz, 7-H), 6.99(s, tiatsoliini 5-H)

Alkuaineanalyysi kaavalle 016HuH705S4Ha.2H20 laskettu C 33.62, H 3.17, N 17.15 saatu C 33.88, H 3.20, N 16.86

Esimerkki 12 7-^”2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7“3-(4-karbamoyylipyri diniummstyyli )-3-kefeemi-4-karboksylaatin valmistus (syn-isomeeri)

Seosta, jossa oli 0,883 g 7-^“2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imlno-asetamido_7“3-asetoksimetyyli-4-kefeemi-4-karboksy$lihappohydro-kloridia (syn-isomeerl). 0,492 g isonikotiiniamidia, 2 g kaliumjodidia, 0,168 g natriumbikarbonaattia ja 0,2 M-fosfaattipuskuria (pH 6,4) sekoitettiin 70 °C:ssa 3,5 tuntia. Reaktioseos pylväskromatografoltiin käyttämällä polystyreenihartsia (Amberlite XAB-2, Rohm and Haas Co.) ja tämän jälkeen dekstraanigeeliä (Sephadex 1H-20, Pharmacia) tässä mainitussa järjestyksessä, minkä jälkeen kehitysliuottimena käytettiin vettä. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot koottiin ja lyofiloitiin. Tällä) tavoin saatiin 0,041 g otsikossa mainittua yhdistettä.

IR(KBr, cnT1): 1773 NMR(100 MHz, dg-IMSO, b): 3.10 & 3.57(ABq, J= 18 Hz, 2-GHg), 5.08(d, J- 5 Hz, 6-H), 5.23 & 5.75(ABq, J=14 Hz, 3-CH2), 5.69(dd, J«5 & 8 Hz, 7-H), 6.62(s, tiatsoliini 5-H), 7.05(br. s, HN= & tiatsoliini NH), 8.17 & 8.74 (kumpikin br, s, C0NH2), 8,45 & 9.55(ABq, J=6 Hz, pyridiinirenkaan protonit), 9.32(d, J-8 Hz, OONH)

Alkuaineanalyysi kaavalle Ci 9^17^7^6^2 * ^2® laskettu C 39.65, H 4.38, N 17.04 saatu C 39.28, H 3.91, N 16.97.

42 6 7 3 8 4

Esime rkki 13

Natrium-7-^-2- (2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7-3-hydroksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatin valmistus (syn-isomeeri)

Liuotettiin 5 ml:aan vettä 0,57 g 7-^”2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)- 2- hydroksi-imino-asetamido_i7-3-(mandelyylioksime tyyli )-3-kefeemi-4-karboksyylihappo-hydrokloridia (syn-isomeeri), sekä 0,17 g natriumbikarbonaattia ja lisättiin sekoittaen ja jäällä jäähdyttäen 0,55 ml 2 N natriumhydroksidia. Seosta sekoitettiin tässä lämpötilassa 3 tuntia ja tämän jälkeen huoneenlämmössä tunnin ajan. Reaktioseos pylväskroma-tografoitiin käyttämällä polystyreenihartsia (amberlite XAD-2, Rohm and Haas Co) ja kehitettiin vedellä. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot koottiin ja lyofiloitiin. Täten saatiin 0,19 g otsikossa mainittua yhdistettä.

IR(KBr, cm”^): 1766, 1662(sh.), 1604, 1530 NMR(100 MHz, I>20, S): 3.64 & 3.72(ABq, J- 18 Hz, 2-OHg), 4.31(s, 3-CH2), 5.25(d, J=5 Hz, 6-H), 5.84(d, J=5 Hz, 7-H), 7.01(s, tiatsoliini 5-H)

Alkuaineanalyysi kaavalle C13H12N5°6S2Iia*2H2° laskettu C 34,14, H 3.53, N 15.31 saatu C 34.23, H 3.52, N 15.17

Esimerkki .14a 7-(4-kloori-2-hydroksi-imino-3-oksobutyryyliamino)-3-(1-metyyli-1H-tetratsol-5yyli)tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihapon valmistus (syn-isomeeri)

Sekoitettiin jään avulla jäähdyttäen seosta, jossa oli 22,3 g 7-(4-kloo-ri-3-oksobutyryyliamino)-3-(1-metyyli-1H-tetratsol-5-yyli)-tiometyyli- 3- kefeemi-4-karboksyylihappoa ja 200 ml etikkahappoa, ja lisättiin tiputtaen 15 minuutin aikana liuos, jossa oli 3,8 g natriumnitriittiä 20 ml:ssa vettä. Jääkylpy poistettiin, ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 3 tuntia. Tämä reaktioseos laimennettiin 600 ml:11a natrium-kloridin kyllästynyttä vesiliuosta, ja uutettiin neljästi 250 ml määrillä etyyliasetaattia. Uutokset koottiin, pestiin vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa. Jäännökseen lisättiin sekoittaen 200 ml etyylieetteriä ja muodostunut jauhe otettiin talteen suodattamalla. Tällä tavoin saatiin 19,0 g otsikossa mainittua yhdistettä.

43 IR(KBr, cm”1): 1785 673 8 4 NMR(100 MHz, dg-IMSO, b): 3.57 & 3.79(ABq, J=18 Hz, 2-CH2), 3.94(s, tetratsoli-CH^), 4.20 & 4.37(ABq, J»13 Hz, 3-CH2), 4.73(s, C1CH2), 5.13(d, J=5 Hz, 6-H), 5.78(dd, J=5 & 8 Hz, 7-H), 9.28(d, J=8 Hz, CONH).

Esimericki 14b

Natrium-7-^”2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2~hydroksi-imino-asetamido_7- 5—(1—metyyli-1H-tetratsol-5-yyli)tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatin valmistus (syn-isomeeri)

Liuotettiin 1 ml:aan dimetyyliasetamidia 0,238 g 7-(4-kloori-2-hydroksi-imino-3-oksobutyryyliamino )-3- (1-me tyyli- 1H-tetratsol-5-yyli )-tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa (syn-isomeeri), sekä 0,038 g tiokarbami-dia. Reaktioseokseen lisättiin 10 ml etyyliasetaattia, jolloin erottui kumimainen aine. Pinnalle nouseva neste poistettiin dekantoinaalla, ja jäännökseen lisättiin 10 ml etyylieetteriä. Muodostunut jauhe otettiin talteen suodattamalla, liuotettiin välittömästi liuokseen, jossa oli 0,084 g natriumbikarbonaattia 10 mljssa vettä, ja kromato-grafoltiin pylväässä, jossa oli dekstraanigeeliä (Sephadex LH-20, Pharmacia), sekä kehitettiin vedellä. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot koottiin ja lyofiloitiin. Täten saatiin 0,112 g otsikossa mainittua yhdistettä.

Infrapunaspektrin ja ydinmagneettisen resonanssispektrin perusteella tämä tuote oli samaa kuin esimerkin 12 mukaan saatu tuote.

Esime riski 15a 7-(4-bromi~2-hydroksi-imino-3-oksobutyryyliamino)-3-(1-metyyli-1H-tetratsol-5-yyli)tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihapon valmistus (syn-isomeeri)

Sekoitettiin ja jäähdytettiin jään avulla seosta, jossa oli 3.43 g 7-(4-bromi-oksobutyryyliamino)-3-(1-metyyli-1H-tetratsol-5-yyli)tiome tyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa ja 24 ml etikkahappoa, ja lisättiin tiputtaen liuos, jossa oli 0,532 g natriumnitriittiä 2,5 ml:ssa vettä. Seosta sekoitettiin 10 minuuttia, minkä jälkeen jääkylpy poistettiin ja sekoitettiin edelleen tunnin ajan huoneenlämmössä. Seokseen lisättiin sitten voimakkaasti ravistaen 60 ml vettä ja 100 ml etyyliasetaattia. Orgaaninen kerros otettiin talteen, pestiin natriumklori-din kyllästyneellä vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin alenne- <* 67384 tussa paineessa. Jäännökseen lisättiin sekoittaen 100 ml etyylieette-riä, ja muodostunut jauhe otettiin talteen. Täten saatiin 2.763 g otsikossa mainittua yhdistettä.

IR(KBr, cm"1): 1780 NMR(100 MHz, dg-IMSO, b): 3.57 & 3.79(ABq, J-18 Hz, 2-CH2), 3.96(s, tetratsoli-CH^), 4.23 & 4.39(ABq, J-14 Hz, 3-CH2), 4.79(s, BrCHg-), 5.12(d, J-5 Hz, 6-H), 5.76(dd, J-5 & 8 Hz, 7-H), 9.27(d, J-8 Hz, CONH),

Esimerkki 15b 7-^”2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido-7-3-(1-me tyyli-1H-tetratsol-5-yyli)tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksyyli-happohydrobromidin valmistus (syn-jsomeerl) liuotettiin 4 ml:aan dimetyyliasetamidia 1,04 g 7-(4-hromi-2-hydroksi-imino-3-oksobutyryyliamino)-3-(1-metyyli-1H-tetratsol-5-yyli)-tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa (syn-isomeeri). sekä 0,152 g tiokarbami-dia, ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 90 minuuttia. Tähän reaktioseokseen lisättiin 50 ml etyylieetteriä, sekoitettiin, minkä jälkeen pinnalle noussut neste poistettiin dekantoimalla. Jäännökseen lisättiin etyylieetteriä ja sama menettely toistettiin. Tämä jakso toistettiin muutamia kertoja, minkä jälkeen muodostunut jauhe otettiin talteen imusuodattamalla ja kuivattiin. Tällä tavoin saatiin 1,058 g otsikossa mainittua yhdistettä.

IR(KBr, cm"1): 1781 NMR(1QQ MHz, dg-UMSO, δ)ί 3.58 & 3.80(ABq, J-18 Hz, 2-CH2), 3.95(s, tetratsoli-CH^), 4.23 & 4.40 (ABq, J-14 Hz, 3-GH2), 5.15(d, J-5 Hz, 6-H), 5.75(dd, J-5 & 8 Hz, 7-H), 6.83(s,tiatsoliini 5-H), 9.58(d, J-8 Hz, OONH), 12.20 (leveä s, = N-OH).

Esimerkki 16 7-^”2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7- 3-(1-metyyli-1H-tetratsol-5-yyli)tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatin valmistus (syn-lsomeeri) liuokseen, jossa oli 0,168 g natriumbikarbonaattia 4 ml:ssa vettä, liuotettiin 0,578 g 7-/~2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamiöo_7-3-(1-metyyli-1H-tetratsol-5-yyli)tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappo-hydrobromidia, liuos pylväskromatografoi-tiin käyttämällä dekstraanigeeliä (Sephadex 1H-20, Pharmacia) ja kehitys suoritettiin vedellä. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot otettiin talteen ;ja lyofiloitiin. Tällä tavoin saatiin 0,267 g otsikossa 45 mainittua yhdistettä. 6 7 3 8 4

Infrapunaspektrin ja ydinmagneettisen resonanssispektrin avulla tämä tuote todettiin samaksi kuin esimerkin 12 mukaan saatu tuote.

Esimerkki 17 7-^”2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido-i7-3-typpipitoisen heterosyklinen tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihapon (I), -hydrokloridin, -betaiinin tai -natriumsuolan valmistus (syn-isomeeri)

Jokin seuraavista valmistusmenetelmistä 1...4 valittiin taulukossa 5 lueteltujen yhdisteiden valmistamiseksi. Tässä taulukossa on myös esitetty yhdisteiden fysikaaliset ominaisuudet.

Yleinen valmistusmenetelmä 1

Liuotettiin 40 ml:aan fosfaattipuskuria (0,1 M, pH 6,4) 0,963 g (2 mM) 7-^~2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)“2-hydrok8i-iminoa8etamido_7-3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappo-hydrokloridia (syn-isomeeri) sekä 2,2 mM typpipitoista heterosyklistä tiolia ja 0,504 g (6 mM) natriumbikarbonaattia, minkä jälkeen liuosta sekoitettiin 60...65 °C:ssa 7...8 tuntia. Reaktioseos konsentroitiin alennetussa paineessa noin 20 mlsaan, pH säädettiin arvoon 6,5 natriumbikarbonaatin 10% vesiliuoksella tai fosforihapon 10% liuoksella tarpeen vaatiessa, konsentraatti säädettiin sopivaksi pylväskromatografointia varten, johon käytettiin polystyreenihartsia (Amberlite XAL-2, Rohm and Haas Co.), ja kehitys suoritettiin vedellä sekä edelleen etanolin 5-prosent-tisella että 10-prosenttisella liuoksella tässä mainitussa järjestyksessä. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot otettiin talteen ja alkoholi tislattiin pois alennetussa paineessa. Lopuksi jäännös lyofiloitiin. Tällä tavoin saatiin otsikossa mainittua yhdistettä, toisin sanoen 7-^”2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7-3-typpipitoinen heterosyklinen tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa, -hydrokloridia, -betaiinia, tai -natriumsuolaa (syn-isomeerl).

Yleinen valmistusmenetelmä 2

Liuotettiin 20 mliaan vettä 1,14 g (2 mM) 7-Z”2-(2-imino-4-tiatsolin- 46 6 7 3 8 4 4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7-3“(mandelyylioksimetyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihappo-hydrokloridia (syn-lsomeeri). sekä 2,2 li typpipitoista heterosyklistä tiolia ja 0,52 g (6,2 mM) natriumbikarbonaattia. Tätä liuosta sekoitettiin 60 °C:ssa 50 minuuttia. pH säädettiin arvoon 6,5 natriumkarbonaatin 1096 liuoksella tai fosforihapon 10% liuoksella tarpeen vaatiessa, ja reaktioliuos pylväskromatografoitiin käyttämällä polystyreenihartsia (Amberlite XAD-2, Rohm and Haas Co), ja kehitettiin vedellä, etanolin 5% ja etanolin 10% liuoksella tässä mainitussa järjestyksessä. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot otettiin talteen, ja alkoholi poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös lyofiloitiin. Tällä tavoin saatiin osoitettua yhdistettä, toisin sanoen 7-^~2-(2-imino-4-tiatsolin-4~yyli)-2~hydroksi-imino-asetamido_7~5-typpipitoinen heterosyklinen tiometyyli-3-kefeemi- 4-karboksyylihappo, -hydrokloridi, -betalini tai -natriurasuolaa (syn-isomeeri).

Yleinen valmistusmenetelmä 5 (1) liuotettiin 40 ml:aan vettä 10,7 g (30 mM) 7-asetoasetamidi-3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa sekä 5,04 g (60 mM) natriumbikarbonaattia ja 30 mM typpipitoista heterosyklietä tiolia. pH säädettiin arvoon 7,0 natriumhydroksidin 10% liuoksella, ja saatua liuosta sekoitettiin 60...65 °C:ssa 4 tuntia. Reaktioseoksen jäähdyttyä lisättiin siihen 2,31 g (33 mM) hydroksyyliamiini-hydrokloridia. Tämän jälkeen pH säädettiin arvoon 3,6 riittävällä määrällä 1 N kloorivety-happoa. Liuoksen annettiin seistä huoneenlämmössä yli yön. Muodostuneet kiteet otettiin talteen suodattamalla, pestiin asetonilla ja kuivattiin. Siinä tapauksessa, että tavoiteltu yhdiste oli vesiliukoinen eikä saostunut, säädettiin reaktioseoksen pH arvoon 3,3 ja konsentroitiin alennetussa paineessa noin 50 ml:aan. Jäännökseen lisättiin 1500 ml etanolia, minkä jälkeen seosta sekoitettiin jäällä jäähdyttäen 4 tuntia. Muodostuneet kiteet otettiin talteen suodattamalla, pestiin etanolilla ja kuivattiin. Tällä tavoin saatiin 7-amino-3-typpipitoi~ nen heterosyklinen tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappo.

(2) Jäähdytettiin -30 °C:een liuos, jossa oli 1,03 g (13 mM) diketee-niä 5 ml:s3a metyleenikloridia, ja lisättiin tiputtaen 15 g liuosta, jossa oli 1 mooli (paino-osina) klooria hiilitetrakloridissa (15 mM) tai liuos, jossa oli 2,24 g (14 mM) bromia 5 ml:ssa metyleenikloridia. Erikseen liuotettiin 10 mM 7-amino-3-typpipitoinen heterosyklinen 47 67384 tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa ja 2.02 g (20 mM) trie tyyli-amiinia 20 ml:aan metyleenikloridia ja jäähdytettiin -20 °C:een.

Tämän jälkeen edellä mainittu reaktioseos lisättiin tiputtaen nopeasti tähän jäähdytettyyn liuokseen. Monissa tapauksissa kehittyi lämpöä siten, että seos lämpeni noin O °C:een. Liuoksen lämpötila nostettiin vähitellen huoneenlämpöön, jossa seosta sekoitettiin 15 minuuttia.

Tähän reaktioseokseen lisättiin 150 ml etyyliasetaattia ja 100 ml 'IQrt fosforihappoa ja seosta sekoitettiin voimakkaasti. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin vedellä, kuivattiin ja konsentroitiin. Jäännökseen lisättiin eetteriä. Täten saatiin jauheena 7-^~4-kloori (jos klooria käytettiin) tai -bromi (jos bromia käytettiin)-3-oksobutyryyliamino_7- 3- typpipitöinen heterosyklinen tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa.

(3) Sekoitettiin jään avulla jäähdyttäen seosta, jossa oli 7 mM 7-(4-kloori- tai bromi-3-oksobutyryyliamino)-3-typpipitoinen heterosyklinen tiometyyli-3-kei'eemi-4-karboksyylihappoa ja 24 ml etikkahappoa, ja lisättiin tiputtaen liuos, jossa oli 0,532 g (7,7 mM) natriumnitriit-tiä 2,5 ml:ssa vettä. Tätä seosta sekoitettiin 10 minuuttia, minkä jälkeen jääkylpy poistettiin, ja sekoittamista jatkettiin huoneenlämmössä tunnin ajan. Tähän reaktioseokseen lisättiin 60 ml natrium-kloridin kyllästynyttä vesiliuosta ja 100 ml etyyliasetaattia, ja seosta sekoitettiin voimakkaasti. Orgaaninen kerros otettiin talteen, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin. Jäännökseen lisättiin etyyli-eetteriä, ja saatu jauhe otettiin talteen suodattamalla ja kuivattiin. Tällä tavoin saatiin 7-(4-kloori- tai bromi-2-hydroksi-imino-3-okso-butyryyliamino)-3-typpipitoinen heterosyklinen tiometyyli-3-kefeemi- 4- karboksyylihappoa (s^n-isomeeri).

(4) Liuotettiin 4 ml:aan dimetyyliasetamidia 2 mM 7-(4-kloori- tai bromi-2-hydroksi-imino-3-oksobutyryyliamino)-3-typpipitoinen heterosyklinen tiometyyli-3-kefeenii-4-karboksyylihappoa (syn-jsomeeri), sekä 0,152 g (2mM) tiokarbamidia, ja liuosta sekoitettiin huoneenlämmössä 90 minuuttia. Tähän liuokseen sekoitettiin 50 ml etyylieetteriä, sekoitettiin, ja poistettiin dekantoimalla pinnalle nouseva neste. Jäännökseen lisättiin sitten etyylieetteriä, ja seosta käsiteltiin samalla tavoin. Edellä mainittu käsittely toistettiin muutamia kertoja, ja muodostunut jauhe otettiin talteen suodattamalla. Jauhe liuotettiin 20 ml:aan vettä ja pH säädettiin arvoon 6,5, minkä jälkeen liuos pylväskromatografoitiin käyttämällä polystyreenihartsiä (Amberlite XAD-2, Rohm and Haas Oo) ja kehitykseen käytettiin vettä ja etanolin 48; 67384 10% liuosta tässä mainitussa järjestyksessä. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot otettiin talteen, konsentroitiin ja lyofiloitiin. Tällä tavoin saatiin mainittua 7-^~2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7”3-typpipitoinen heterosyklinen tiometyyli-3-kefeemi- 4-karboksyylihappoa, -betaiinia tai natriumsuolaa (syn-lsomeeri).

Yleinen valmistusmenetelmä 4 (1) Liuotettiin 300 ml:aan vettä 31»4 g (0,1 moolia) 7-amino-3-(3-oksobutyryy Iloksi )metyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa, 18,5 g (0,22 moolia) natriumbikarbonaattia ja 0,1 moolia typpipitoista hetero-syklistä tiolia, minkä jälkeen pH säädettiin arvoon 5,5 ja liuos lämmitettiin 60 °C:een tunnin ajaksi. Liuoksen jäähdyttyä reaktioseos pestiin kerran dikloorimetaanilla, minkä jälkeen vesikerroksen pH säädettiin arvoon 3,3 ja sekoitettiin jäällä jäähdyttäen tunnin ajan. Sakka otettiin talteen suodattamalla, pestiin vedellä, metanolilla ja asetonilla tässä mainitussa järjestyksessä ja kuivattiin. Täten saatiin 7-amino-3-typpipitoinen heterosyklinen tiometyyli-3-kefeemi- 4-karboksyylihappoa. Siinä tapauksessa, että tavoiteltu yhdiste oli vesiliukoista eikä saostunut, säädettiin reaktioseoksen pH arvoon 3,3 ja haihdutettiin alennetussa paineessa noin 50 ml:aan. Jäännökseen lisättiin 1500 ml etanolia, ja seosta sekoitettiin jäällä jäähdyttäen 4 tuntia. Muodostuneet kiteet otettiin talteen suodattamalla, pestiin etanolilla ja kuivattiin. Tällä tavoin saatiin 7-amino-3-typpipitoinen heterosyklinen tiome tyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa.

(2) Käyttämällä edellisen kohdan mukaan saatua 7-amino-3-typpipitoinen heterosyklinen tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa sovellettiin yleistä valmistusmenetelmää 3-(2), (3) ja (4), jolloin saatiin haluttua 7-^”2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-iminoasetamido_7-3-typpipitoinen heterosyklinen tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa, -betaiinia tai -natriumsuolaa (syn-lsomeeri).

49

Taulukko 5 *67384

HN

K--!L C-CONH-T—f ^ fl/ \ S "ν^ΟΗ,Μ

0H COOM

Yhdiste IR Mene- R M la;taa . NMR 6 ppm telmä (K3r, cm~i) ---------%—^ ---------, - _______1_________ CL00MHz,D2O):3.40 & m__u 3.79(ABq, J=l8Hz,2- , 1 || H Ha 1763 ^),4.10 & 4.52 1 A / (ABq, J*13Hz,3-C1I2), 2 S 15.l9(d,J=5Hc,6-H), 5.80(d,J=5Hz, 7-H), 3 6.99(s ,tiatsoliini 5~H) 4 (100MHs,Dyj):2.55(R, η Ή—N oksadiatsoIi-CH^) ,3.41 & x 2 11 I] Na i7go 3.»4(ABq,J«l8Hs,2-CH2)f 2 y\ y\ m L{b5 3.98 & 4 .49(ABq>J=13Ks, - C CH 3-CH2),5.21(d,J=5Hz, 5 3 6-H),5.82(d,J=5Hs,7-K), 4 ! 6.98(s ,tiatsoliini 5~H) vj_„ (ΙΟΟΜΗζ,ΕρΟ):3.44 & * V, n 3.79(ABq,J*l8Hz,2-CH2), jj I! 4.04 l 4.25(ABq,J=13Hz, 2 3 »a 1766 3-CK2), 5.21(d,J=5Hz, , V 6-H), 5-82(d,J=5Hs,7-H), 5 H 6.99(s, tiatsoliini 5-H), 4 8.36(s, triatsoli 5~H) N_N (100MHz,D20):2.51(s, , j, m triatsoli 3-CH3),3.42 & x , J* A 3.96(ABq,J=l8Rz,2~CH2), 2 4 - ia γη Ma 1763 3.68(s,triatsoli 4-CHq), 3 73 3.75 6 4.38(ABq,J=l4Hz, 5 CH, 3-CH2),5.23(d,J=4Hz, 4 3 6-H),5.83(d,J=4Hz,7-H), ö.SSUjttatsoliini . 5-H) 50 6 7 3 8 4 (100MHz,DpO): 3.31 & ί M 3.86(ABq,J*1SHz ,2-CHp)» 1 1 ί-Π 3-64 * 4.32(ABq,J*=13Hz, 0 I II 3-CH2>, 3.78(5, 2 5 A/ Na 1760 (Ä^l-CH?)S25.22 3 cL (d,J*5Hz,7-H), 6.99 * 3 (s , tiatsoliinl 5-H),7.14 & 7..3D(joka d,J=lHz, ! imidatsoli 4- & 5~H) ---— - - ___ _____ __ ' (100MHz,D20): 3-55 & |

?-3.88(ABq,J=l8Hz,2~CH2), -. I

6(1 Na 1763 ^-31 $ 4.67(ABq,J=13Hz, 1 I

ΛΛ 3-CH2),5.30(d,J=5Kz, 2 s CF 6~H),'5.92(d,J=!5Hz,7-H), ,.

J 6.99(b, tiatsoliini 5-K) q .

I----—--------- (100MKz,D?0}: 2.34 & CH_ 2.76(joka s, tiatsoli 1 m__/ 3 4- & 5~CHo), 3.40 & , 7 jj >1 Na 1760 3.82(ABq,J=l8Hz,2-CK:)), £

A A 3.90 & 4.49(ABq,J=13 Hz, L

S CH, 3-CH2),9.25(d,J-=5Hz, 4 3 6-H),5.90(d,J=5Hs,7~H), 6.9 8 (s tiatsoliini 5-H) (100MHz,D20):2.55(s, U_ tiatsoli 5 -CHo ),3.41 I, II & 3.87(ABq,J=l8Hz,2-CH2), 8 /11 A Na 1760 3.91 & 4.59(ABq,J=l4Hz, 4 ^ S CH- 3-CH2),5.26(0,J=5Kz, 3 6-H),5.88(d,J=5Hz,7-H), 6,98(s ,tiatsoliini 5-H), 7.51(s, tiatsoli 4-H) . (100MHzvdfi-DMSO): 2.32 (s.tiatsoli 4-(^3),3.46 , > | CH- & 3.73(ABq,J=18Hz,2-CH2), 1 1 i N__J 4.11 & 4.49(ABq,J=13Hz, , 1 ,} j| 3-CH2>, 5.20(d,J*5Hz, ^ 9 i; \ H 1760 6-11), 5.75(dd. J=5 & 3 ' δΗζ, 7-H),6.. 23(s* tiatsoli ,, 5-H), 6.67(s, tiatsoliini 5-H), 7.1(br.s,=NH δ tiatsoliini KH), 9.38 (d,J~8Hz,C0NH) (100MHz,D-0):3-41 & , N—N 3.78(ABq,J=l8Hz,2-CHp), 1 10 H !( Na 1758 3-99 & 4.32 (ABq,J=l§Hz, 2 A ^ 3-CH2),5.25(d,J=5Hz,6-H), h N 5.87(d,J=5Hz,7-H),6.98 * (s, tiatsoliini 5-H) 51 67384 (100MHz,D20): 3.43 & N_N Β.δβίΑΒς,^ΙδΗζ^-ΟΗρ), 1 11 11 Π Na 1760 3*90 & 4.48(ABq,J=13Hz, J[ X ' 3-CH2), 5.30(d,J=5Hz, 2 ^NH9 6~«19 5 ;?°t (d A5Hz’7-H), 2 6.99(s, tiatsolum 5-H) | (100MHz,D20): 3-46 & »__H 3.90(ABq,j=18Hx,2-CH2yt 1 1, 3.90(s,OCH3), 3.92 & 0 12 f li Na 1760 4. 49(ABq,J=13Hz,3~CH2), 2 ^s/^NHCOOCH 5·30(d, J-5iIz,6-Ii),5.9° 3 3 (d,J=5Hz,7-H),6.99(s, .

tiatsolilrii 5-H) . q (100MHz,DpO):3.12 & 1 m__H 3.29(j°to N(CH3)2), ? H 11 3-53 & 3-87(ABq,J=l8Hz, * 13 A Λ H. 1758 V?^5· 3

' y s ch2con(ch3)2 iÄ-5™i!$3<Äte H

7-H), 6.99(s, tiatsoliini 5-H) (100MHz,D20):3.5$ & N — N 3.94(ABg,J=l8Hs,2-CH2), 1 li. Il « Na 1761 ?·I6(s,CH2C0), 4.19 & ? A A ' 4.60(ABq,J=13Hz,3-CHo), 2 S CH?COONa 5.35(d,J=5Kz,6-H),5.94 4 (d,J=5Hz,7-H), 6.99(s, tiatsoliini 5-H) m___m (100MHz,D20): 3-51 & , 1« M 3.89(ABq,J=l8Hz,2-CH2), 1 15 1' '1 1760 3.9Ks ,Ο0Η3), 4.19 & 2

Ag/^cH cooch. 3 2 3 5·31(d,J=5Hz,6-H), 5.90 3 (d,J=5Hz,7-H), 6.99 4 . (s,tiatsoliini 5-H) N—m (100MHz,D20): 3.50 & 1 || h 3-88(ABq, J=18Hz,2-CH2 ), 0 16 /1 Na 1762 ^19 & <»-55<ABq,J=13Hz, 2 5' CH CONF 3-CH2), 5 30(d,J=5Hz, 3 * Ui2LOHK2 6-H)f 5.90(d.J»5Hz,7-H), h 6.98(s, tiatsoliini 5_h) h 52 673 8 4 ~ Γ ΓΰθΟΜΗζ,ϋ20): 2.24(0, ~Ί Ν_n CH3S), 3-52 & 3.87(ABq, Ί , „ J-I8Hz,2-Ci!2), 4.21(8, 1 17 Jl Jl Na 1762 CK2S), 4.26 & 4.57(ABq, 2 /"s' ΓΗ sph J=l4Hz,3-CHp), 5.31(d, 0 S CH2SCH3 J=5Hz,6-H),5*93(d,J= 3 5Hz,7-H), 6.99(s, 4 tiatsoliihi 5-H) (10°MHz,D20): 3-36(s, N--* OCHq), 3.28 Sr 3.84(ABq, 1 II I J=l8Hz,2-CH2), 3.98 & 0 16 Jl X Na 1763 4.36(ABq,J=I4Hz,3-CH2), 2 / s'xCHpOCH~ 4.76(s,CH20), 5.07(d, 3 3 J=5Hz, 6-H), 5·67(d, b J=5Hz,7-H), 6.99(s, q tiatsoliihi 5-H) N-N (60MHz,D20): 3-35 & 3.74 1

19 li H Na 1763 (ABq,J~16Hz,2-CH2), 3-97 P

A A 73 & 4.38(ABq,J=l4Hz,3-CH2), 2 S SCHpCOONa 5-19(d,J=5Hz,6~H), 5.78 3 (dsJ=5Hz,7-H), 6.98(s, h tiatsoliini 5~H) ^ m_m (60MHz,D20):3.4-3-8(m, , il II 2 x CH2), 3.95(t,J=6Hz, 20 Jl X Na 1765 5¾¾. ;·« 5 ^38CAB,. 2 8 S0H2CH2°H 3 5Hz,7-H), 6.99(5, 4 tiatsoliini 5-H) (lOOMHz,CF3COOH): 3.79 m_m (s ,2--CH2), 4.45 & 4.84 ,1 I (ABq, J=I4Hz, 3-CH2), 2 21 il \\ NH H 1765 5.l4(d,J = 7Hz,CH0NK), / c/'r'H νηγνη 5«36(d,J=5Hz, 6--H), 4 S CH2NHLNri2 5,99(dd, J=5 & 0Hz,7-H), 6.4-6.9(br . £uanyyli 4 x H), 6.99(5, tiatsoliini 5-H) 53 67384 (100MHz.D20): 3-43 & m___m 3.8l(ABq,J*l8Hz,2-CII2), 1 22 ,, j| Na 1765 4.07 & 4.56(ABq,J=13Hz 0 1« l] 3-CHp), 4.96(s,CH20), ^ oh 5.23(d,J=5Hz,6-H), 4 S CH20H 5.84(d,J=5Hz»7-H)» 6.99 (s ,tiatsOliini 5”H) (ΙΟΟΜΗζ,ΟηΟ):2.51(5, N—N N(CH3)2, 3.43 & 3.80 1 23 II II Na 1762 '<ABq,J-l8Ha,2-CH2), ».11 - 3 yK A a ' d i ».50(ABq,J=13Hz,3-«I2), 2 S CHpN(CH^)p 4. 21 (s ,tiadiatsoli / 3 -CH2N), 5.21(d,J=5Hz, 6-H;, 5.82(d,J=5Hz,7-H), 6.98(s, tiatsollini 5.-H) r J # “ 1 (60MHz,D20): 3.1-3.8 (m,6 x H), 4.02 & , 4.25(ABq,J=13Hz,3-CH2), 2i| A X Na 1763 5.l4(d,J«5Hz,6-H), 5.73 2 / S ^ SCHpCHpSO-Na Na 1{b3 (d,J=pHz.7-H), 6.99(sf b d 5 'tiatsollini 5_H) ^

m N (lOOMHz.DpO): 2.93(t, I

m II J" 6 Hz ,tiadiatsoli -CHp), 1 25 l1 *1 Na 1?60 3.3-4.0(m,4 x H), 4.08 asacwh 1 (d,J*5Hz,7-H), 6.99(s, h tiateoliini 5-H) ^ (100MHz,DP0): 3.02 N~“N (s,N(CH3)2), 3.45 & p ! 26 11 11 Na 1768 3.82(ABq,J=l8Hz,2“CH2), A /Λ Na ifbv 3.67(br.s,CH2CH2), 4707 3 | S CHpCHpN(CH-.)p & 4.52(ABq,J=13Hz,3-CH2), 3 5.27(d,J=5Hz.6-H), 5.84 * (d,J=5Hz,7'H), 6.99(5, tiatsoliini 5-H) k 54 6 7 3 8 4 " __lX ' ' ' ' - ~ *"**' . . I, —~»· ... Ii, . 1 —N—,··— .— -- - I -»ί—.— 1. .........f I , .-. 1

* I

(100MHz,D20): 3.39 & ! N-N 3·83(ADq,J=l8Hz>2~CHp), 1 27 II I Na 1760 3.74(s,CH3), 3-71 & - Λ X 4.31(ABq,J-13Kz,3-CHp), 2 N CH20H 4.82(s,CH20), 5.17(d,J= 4 CH 5Hz,6-H), 5.79(d,J=5Hz, 3 7-H), 6.99(s,tiatsoliini 5-H) (100I4Hz,D20): 2.24(s, N--N CH3CO), 3.ill & 3.72(ABq, 1 28 1 Jl Ha 1760 Siu*ziS’5,33!i^i 2 / N CHpOAc i|.30(ABq,J=13Hz,3“CH2), i| CH 5.28(d,J=5Hz.6-H), 5-36 j 3 (s,CH20), 5.83(d,J=5Hz, | 7-H), 6.99(s,tiatsoliini ___.___5-H) (100MHz,D20): 3.01(s, N-N N(CH3)2), 3.47 & 3-79 χ i! N _ (ABq,J-18Hz, 2-CHp), 9 29 Η Θ 1768 3.78(t,J=6Hz,CH2NMe2), 2 . . 4.10 & i| .25(ABq,J=13Hz, 4 (CHp)pN(CH^)p 3-CHp), 5·20(d, J=5Hz,6-H), 5.76(d,J«5Ha,7-H), 6.99 φ (s, tiatsoliini 5-H) (100MHz,D20): 2.4 (m, N---N C-CHp-C), 2.95(s,N , ! ·! (CH3)2), 3.3(m, CH2HMe2), 1 30 Na 1760 3.il5 & 3 *8l (ABq, j=l8Hz, „ N 2-CH2), i4.12 & 4.33(ABq, 2 (CH ) N(CH ) J=13Hz, 3-CH2), 4.4 2(t, j.

VUiV3 ^ 3;2 J=7Ha,tetratsoli -CH2-C), 4 5.20(d,J=5Hz,6-H), 5.80 }(d,J=5Hz,7-H), 6.98(s, j tiatsoliini 5-H) « 55 67384 (ΙΟΟΜΗζ,ϋρΟ): 2.96(s, N—N NCHO, 3·δ2& 3-95(ABq, 31 II H .«Ci H 1770 J=lSlIz,2-CII2), 3.83 & 2 31 . M M HC£ H 1^70 joka jb6Hz. 2 / N CH2CH2), 5.33(d,J-i.5Hz, fCH ) muck 6-H), 5 · 87(d,·5Ηζ, lun2;2NLOh3 7-H), 6.99 (s, tiatsoliini 5 "H 3 - (ΙΟΟΜΗζ,ϋρΟ): 2.02(s, N_N CH3CO), 3t51 & 3.83(ABq, ,, n J=I8Hz,2-CH2), 3.73(t, 1 ‘ 32 J1 N Na 176*5 J=6Hz,CH2HAc ), ή.21 &

Na li£>5 *i.*Jl(ABq, J=13Hz,3~ 2 V CH2), Ji.6l(tsJ=6Hz,

CHpCHpNHCOCH- tetratsoli -CHp-C), 5.28(d, H

0 J=5Hz,6-H), 5.85(d,J=5Kz, 7-H), 6.98(s, tiatsoliini 5-H) (ΙΟΟΜΗζ,ϋρΟ + NaHCOo): N—N 3·^^.& 3-76 (ABq, J= il H 18Hz,2-CH2), 3.^6-3.8(m, 33 N 1765 tetratsoli -C-CH2N), 4.0- 2 /\/ ^ I 5.0(m, 3-CK2 & , C±) tiatsoliini -C^), 5-20(d, (CH?)pNH_ J=i}.5Hz, 6-H), 5.77(d, J J=^.5Hz,7-H), 6.98(s .

tiatsoliini 5-H) (ΙΟΟΜΗζ,ϋρΟ): 3-^5(s, ,

N-N OCH3), 3.^5 6 3.81(ABq, X

jj Π Ma 1770 ^=^Hz, 2-CHp), ^4.17 & P

Ji .N Na 1(70 i4./|2(ABq,J=13Hz,3-CH2), 2 n 5.21(d,J=i|.5Hz?6-K), h t 5.77(s,tetratsoli -CHpO), q CHpOCHo 5.8l(d,J=i|.5Hz,7“H), 6.98(s , tiatsoliini 5-H) % m 56 6 7 3 8 4 " \ m___N (100MHz,DpO): 2.22(s, π π SCH3), 3-44 & 3.79(ABq, , I m J<L8Hz,2-CH.p), 4.21 & 1 35 A / Na 1765 4.42(ABq,J=l3Hz,3-CKp), 2 N 5.22(d,J=5Hz,6-H), 7 h pu cpu 5*47(s, tetratsoli —CHpS).

CH2SCH3 5.8l(d,J=5Hz,7-H). 6.9¾ (s ,tiatsolllnl 5-H) (100MHz,DP0): 3-42 & N—N 3.78(ABq,J=l8Hz,2-CH2), 1 36 M Wa 1760 ^ · ®3 (t, «Τ^όΗζ, CH20), ~ A N Ka 1760 Hei2 4 i.36(ABq,J=13Hz, 2 A / 3-CHp), 4.55(t,J=6Hz, 4 N tetratsoli -CHp-C), 5.19 (iH ) OH <d,J=5Hz,6-H), 5.78(d, j ' 2;2um Jj=5Hz,7-H) , 6.98(s, ’ tiatsoliini 5-H) j N-N (100MHz,D20): 3-51 & , j II 3.85(ABq,J=l8Hz,2-CH;>), 1 37 X N Ma 176s 4.23 & 4.46(Α3ς,,1=13Ηζ, » U A*' 7 5 3-CK2,);, 5.29W,JT5.Hi,· 2 » 1 6-H), 5- 42 (s ,tetratsoli ,.

CHpCONHp -CHpCO), 5.89(d,J=5Hz, 4 7-H7, 6.99(s , tiatsoliini 5-H) ________________ i

--- I

j N__M (100MHz,d<-DMSO + DpO): 1 ,, „ 3.42 & 3.b8(ABq,J=18Hz 38 II ' Na 1761 2-CH2), 4.21 & 4.37(ABq, 2

An/ J=13Hz,3-CHp), 4.70 ., (s, tetratsoli -CHoCO), 4 CHpCOONa 5.07(d,J=5Hz,6-H), 5.73(d,J-5Hz,7-H), 6.99(s . tiatsoliini 5-H) * 57 6 7 3 8 4 (100HHz,D20): 3*41 & N-N 3.72(ABq, J=l8Hz,2-CH2), n || || 3 · 60 (s, tiratsoli -CK3), χ ?o ii A No I7<n 3.78(s, tiratsoli p 3* /^N /CHpCOONa Na 1/t>u -CH2CO2), 3.85 & ή.30 d

Ah (ABq, J=13Hz, 3-CH2), n 3 5.17(d,J=5Hz,6-II) 4 5*79(d,J=5Hz,7-H)', 8.99(s> tiatsoliini 5-H) (100MHz,D90): 1-37(t, N-N J=7Hz,CHo1, 3-08(q, J= 1

Il I] 7Hz,CH2CHo), 3.50 & *0 λ il Na 1765 3*62(ABq, J=l8Hz,2-CH2), 2 x S/ CHpCH, 11.03 & 4.34(ABq, J=13Hs, 3 3~CH2), 5-l8(d,J=5Kz, 3 6- H), 5.80(d,J=5Hz,7-H), 6.99(5 , tiatsoliini 5-H) « __N (100MHz,DpO): 3*44 & V" n ' 3.97(ABq/j=l8Hz,2-CH2), 1

Ij 1| 3-57(8,11^318011 -CH-j) 41 Am/\„ Na 1760 3.67 ft 4.33(ABq, J=?3Hz, 2 7 n2 3-CH2). 5*26(d,J=5Kz,6- CH, H), 5*85(d,J-5Hz,7-H), 3 6.98(g, tiatsoli 5-K) (100MHz,D20): 2.88(t, u__N J=7Hz>CH2C02), 3*51 & Ί |. 'n 3»83(ABq, J~-l8Hz,2- 1 »2 il H Na 1765 2 A / J=13Hz,3-CH2), 4.6l(t, H J=7H z tetratsoli CH2CH2COONa 7- H). 6.99(s, ilatsoliini 5-H' 58 6 7 3 8 4 (lOOMHz, DpG): 3.43 & CHpCOONa 3.84 (ABq, J*l8JIs,2-CH2) 2 , ,0 n--r 3.76(s,CH2CO). 3.98 & : 43 j| ΤΓ Ha 1763 4.54 (ABq,J=14Hz,3-CH2), 3 A V 5-2*4 (d,J=5Hz.6-H), 5.85 S (d,J=5Hz,7~H), 6.98 *4 tiatsoliini 5-H), 7-35(s, tiatsoli 5-H) H----N (60MHz, t)20): 3-3-4.0 j *4*4 i! Jl Na 1765 x CH ),4.33(ABq,3- 2 | S ^ NHCHpCHpOH CH2), 5.06(d, J=5Hz, 6-H), 5.68(d, J=5Hz,7-HK6.99 (s, tiatsoliini 5_H) U__N (60MHz,D20): 2.95(ε?Ν li il (ch3^2) j3.56(ra, 2 x CH2) ?|5 } j . Na 1760 j-cHi1”’ 2 3 ™ch2ch2n<ch3)., 6Ιη)^5.70(11%η^ ’ 7-H), 6,99 (s , tiatsoliini 5--H) (lOOMHz.DpO): 3-03 &'

jyf_n 3.21( joka s, N(CHo)2), P

M 3 .*»2 & 3.76(ABq, ί~ 46 ' Na 1763 X8Hz,2-CH2), 4.15 & 4.37 h A / (ABq, J=14Ks,3~CH2), 4 N 5.21(d,J=5Hz96-H), CHpC0N(CH3 )0 ?'+3°+ & ,? '53ÄSk^ 2 3 2 tetratsoli ~CH2), 5-79 (d,J=5Hzs7-H), 6.99 (s , tiatsoliini 5-H) (60MHz,D?0): 3-4-4.0 N— N (m, 2-CH2, triatsoli ή7 H II ,1, 1765 oh3)» 5.1-5.25(1». 6-H). 2 , conn, 5.7-5-8(-. 7-H). 6;99 „ ' H 2 (c, tiatsoliini 5-H) ---—------^------------ ft / 59 67384

Esimerkki 18a 7-(4-bromi-2-hydroksi-imino-3-oksobutyryyliamino)-3-karbamoyyli-oksimetyyli-3-ke£eemi-4-karboksyylihapon valmistus (syn-isomeeri)

Sekoitettiin huoneenlämmössä liuosta, jossa oli 0,15 g 7-(4-bromi-3-oksobutyryyliamino)-3-karbamoyylioksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksyyli-happoa 2 ml:ssa etikkahappoa, ja lisättiin tiputtaen viiden minuutin kuluessa 0,03 g natriumnitriittiä. Tämän jälkeen seosta edelleen sekoitettiin 20 minuuttia, minkä jälkeen liuos konsentroitiin kuiviin alennetussa paineessa. Muodostunut lasimainen kiinteä aine sijoitettiin Merck-tyyppiselle piidioksidigeelilevylle no 5715 ja kehitettiin etyyliasetaatin, etikkahapon ja veden seoksella ($:1:1)i Kupariklori-din 0,596 liuoksella suoritettu värireaktio antoi tulokseksi yhden ainoan keltaisen täplän Rf= 0,327. Tämän perusteella tuotteen todettiin olevan pääasiallisesti otsikossa mainittua yhdistettä, jota käytettiin seuraavassa reaktiossa.

Esimerkki 18b

Natrium-7-^”2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7-3-karbamoyylioksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatin valmistus (syn-isomeeri) liuotettiin 1 ml:aan dimetyyliasetamidia raakaa 7-(4-bromi-2-hydroksi-imino-3“Oksobutyiyyliamino)-3-karbamoyylioksimetyyli~3-kefeemi-4-karboksyylihappoa (syn-isomeeri) ja 0,03 tiokarbamidia. Täten saatua liuosta sekoitettiin huoneenlämmössä tunnin ajan. Reaktioseokseen lisättiin sekoittaen 50 ml etyylieetteriä, ja pinnalle nouseva neste poistettiin dekantoimalla. Jäännökseen lisättiin 50 ml etyylieetteriä, ja seosta käsiteltiin kuten edellä. Saatu jauhe otettiin talteen suodattamalla ja liuotettiin 5 ml:aan natriumbikarbonaatin 5% vesi-liuosta. liuos pylväskromatografoltiin käyttämällä polystyreeni-hartsia (Amberlite XAD-2, Rohm & Haas, Co) ja kehitettiin vedellä. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot koottiin ja lyofiloitiin. Täten saatiin 0,063 g otsikossa mainittua yhdistettä.

IR(KBr, cm”1): 3400, 1760, 1710, 1610, 1530, 1400, 1360, 1330 (karbamoyyli-C-N) NMR(100 MHz, dg-IMSO, b): 4.71 & 4.86(ABq, J*12 Hz, 3-CH2), 4.98(d, J«5 Hz, 6-H), 5.63(dd, J=5 & 9 Hz, 7-H), 6.44(br. s, 00NH2), 6.72(s, tiatsoliinl 5-H), 7.1 (br., NH= & tiatsoliini -NH-).

60 6 7 3 8 4

Esimerkki 19

Pivaloyylioksimetyyli-7-/"*2- (2-imino-4-tiatsolin-4-yyli )-2-hydroksi-imino-asetamido_7-3-(1-metyyli~1H-tetratsol-5-yyli)-tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatin valmistus (syn-isomeeri)

Liuotettiin 10,9 g natrium-7-^_2-(2-imino-4--tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi- imino-ase t amido_7-3- (1 -metyyli-1 K- te tratsoi-5-yyli) tiome tyyli-3-kefeemi-4-karboksylaattia (syn-lsomeeri) 60 ml:aan dimetyyliformami-dia, ja lisättiin tiputtaen 10 minuutin kuluessa liuos, jossa oli 4,9 g jodimetyylipivalaattia liuotettuna 5 ml:aan dimetyyliformamidia, jolloin sekoitettiin ja jäähdytettiin jääkylvyn avulla. Tämän jälkeen seosta vielä sekoitettiin 10 minuuttia ja lisättiin siihen 700 ml etyyliasetaattia. Saatu seos pestiin vedellä (150 ml x 3) ja kuivattiin magnesiumsulfaatin avulla.

Kuivattu liuos konsentroitiin alennetussa paineessa ja lisättiin jäännökseen 400 ml dietyylieetteriä, jolloin muodostui jauhetta.

Jauhe otettiin talteen suodattamalla ja kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin edellä mainittua yhdistettä. Tuotos 7.802 g.

IR(KBr, cm"1): 1786 NMR(100 MHz, d6-MS0:ssa, 6): I. 19(s, (CH3)5C), 3.62 ja 3.82(A£q, J*18 Hz, 2-CH2), 3.94(s, tetratsoli-CH3), 4.18 ja 4.45 (ABq, J=14 Hz, 3~CH2), 5.16(d, J=5 Hz, 6-H), 5.78 ja 5.93(ABq, J=6 Hz, OCHgO-pivaloyyli). lähellä 5.8(m, 7-H), 6.67 (s,tiatsoliini 5-H), 7.10(leveä s, NH-C(=NH)-), 9.42(d, J=8 Hz, OONH), II, 32(leveä s, =N0H)

Alkuaineanalyysi kaavalle ^1^25^9^7¾ laskettu C 40.64, H 4.22, N 20.31 saatu C 40.72, H 4.20, N 19.46

Esimerkki 20

Pivaloyylioksimetyyli-7-^~2-(2-imino-4-'täat6olin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7-3“(2-metyyli-1,3,4-tiadiatsol-5-yyli)tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatln valmistus (syn-lsomeeri)

Liuotettiin 0,143 g natrium-7-/”2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyll)-2-hydroksi-imino-asetamido-7-3-(2-metyyli-1,3,4-tiadiatsol-5-yyli)-tlometyyli-3-kefeemi-4-karboksylaattia (syn-isomeeri) 1 ml:aan dimetyyliformamidia, ja liuosta jäähdytettiin jään avulla ja sekoitettiin. Liuokseen lisättiin tiputtaen 0,071 g jodimetyylipivalaattia, joka oli ei 6 73 8 4 liuotettu 1 ml:aan dimetyyliformamidia. Muodostunutta seosta sekoitettiin 10 minuuttia, minkä jälkeen lisättiin 5 ml vettä ja 50 ml etyyliasetaattia. Seosta sekoitettiin voimakkaasti. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin vedellä (10 ml x 3) ja kuivattiin magnesiumsulfaatin avulla. Kuivattu liuos konsentroitiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi. Jäännökseen lisättiin 10 ml dietyylieette-riä, jolloin saostui jauhetta. Jauhe kerättiin suodattamalla ja kuivattiin, jolloin saatiin 0,07 g edellä mainittua tuotetta.

IR(KBr, cm"1): 1782 NMR(100 MHz, d6-LMS0:ssa, £): 1.19(s, (CH5)3C), 2.70(s, tiadiatsoli 2-CH3), 3.61 & 3.83 (ABq, J= 18 Hz, 2-CH2), 4.17 & 4.57 (ABq, J=14 Hz, 3-CH2), 5.19(d, J=5 Hz, 6-H), 5.80 & 5.95 (ABq, J= 6 Hz, OCHgO-pivaloyyli), lähellä 5.8(m, 7-H), 6.69(s, tiatsoliini 5-H), 9.94(d, J«8 Hz, CONH), 11.41(leveä s, =N-0H).

Alkuaineanalyysi kaavalle C22H23H^0^S^»H20 laskettu C 40.92, H 4.21, N 15.18 saatu C 41.20, H 4.25, N 15.20

Esimerkki 21

Pivaloyylioksimetyyli-7-J/”2-(2-imino-4-tiatsolin-4'*yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7“3-karbamoyylioksimetyyli-3-kefeemi-4-karhoksylaatin valmistus (syn-isomeeri) liuotettiin 0,5 g natriura-7-^”2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7-3-karhamoyylioksimetyyli-3-kefeemi-4-kar'boksylaattia (syn-jsomeeri) 3 ml:aan dimetyyliformamidia. Lisättiin tiputtaen 0,242 g jodimetyylipivalaattia, joka oli liuotettu 2 ml:aan dimetyyliformamidia, jolloin samalla sekoitettiin ja jäähdytettiin jään avulla. Reaktioseosta sekoitettiin 10 minuuttia, minkä jälkeen lisättiin 5 ml vettä ja 60 ml etyyliasetaattia. Saatua seosta sekoitettiin voimakkaasti. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin vedellä (10 ml x 3) ja kuivattiin natriumsulfaatin avulla. Kuivattu liuos haihdutettiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi, ja jäännökseen lisättiin 10 ml dietyylieetteriä siten, että kiteytyi jauhetta. Jauhe otettiin talteen suodattamalla ja kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 0,327 g edellä mainittua tuotetta.

IR(KBr, cm”1): 1795 NMR(100 MHz, d6-BMS0:ssa, &): 1.18(s, (CH3)3C), 3.46 ja 3.66(ABq, J-18 Hz, 2-CH2), 4.58 ja 4.85 62 67384 (ABq, J-13 Hz, 3-0¾), 5.19 (d, J*5 Hz, 6-H), 5.82(dd, J»5 & 8 Hz, 7-H), 5.79 ja 5.92(ABq, J=6 Hz, 0CH20-pivaloyyli), 6.54(ieveä s, 0C0NH2) 6.66(s, tiatsoliini 5-H), 7.04(leveä s, NH-C(=NH)-), 9.40(d, J=8 Hz, CONH), 11.29(leveä s, »NOH)

Alkuaineanalyysi kaavalle ^20^24^6^9 laskettu C 42.47, H 4.46, N 14.86 saatu C 42.79, H 4.60, N 14.47

Esimerkki 22 1 - (etoksikarbonyylioksi )etyyli-7-^**2- (2-imino-4- tiatsolin-4-yyli )-2-hydroksi-imino-asetamido_7-3-karbamoyylioksimetyyli~3-kefeemi- 4-karboksylaatin valmistus (syn-isomeeri)

Liuotettiin 1,0 g natrium-7-^”2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_/-3-karbamoyylioksimetyyli-3-kefeemi-4~ karboksylaattia (syn-isomeeri) 6 ml:suin dimetyyliformamidia siten, että muodostui liuos. Tähän liuokseen lisättiin 1,37 g 1-(etoksi-karbonyylioksimetyyli-jodidia, ja seosta sekoitettiin 5 vuorokautta. Seokseen lisättiin 150 ml vettä ja 200 ml etyyliasetaattia, minkä jälkeen sekoitettiin voimakkaasti. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin vedellä (100 ml x 2) ja kuivattiin magnesiumsulfaatin avulla. Kuivattu liuos konsentroitiin alennetussa paineessa, ja jäännökseen lisättiin 100 ml petrolieetteriä, jolloin muodostui jauhetta. Jauhe kerättiin suodattamalla, jolloin saatiin 0,07 g edellä mainittua tuotetta.

IR(KBr, cm”1): 1790 NMR(100 MHz, d6-EMS0:ssa, b): 1.14(t, J»7 Hz, -CH20H3), 1.51 (d, J=5 Hz, 0CH(CH5)0), 3.46 & 3.68 (ABq, J-18 Hz, 2-0¾), 4.18(q, J» 7Hz, -CH2CH3), 4.60 & 4.85(ABq, J=13 Hz, 3-CH2), 5.10 (d, J»5 Hz, 6-H), 5.86(dd, J=5 & 8 Hz, 7-H), 6.55(leveä s, 0C0NH9), 6.66(s, tiatsoliini 5-H), 6.74 (q, J=7 Hz, -CH(CH5)-), 7.04(leveä s, NH-(C=NH)-), 9.38(d, J-8 Hz, OONH), 11.28 (leveä s, »NOH)

Esimerkki 23a 7-/”2-(2-klooriasetyyli-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-asetokei-iniino-asetamido-7-3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihapon valmistus (syn-isomeeri)

Suspendoitiin 70 ml:aan metyleenikloridia 2.14 g 2-asetoksi-imino-2-(2-klooriasetyyli-imino-4-tiatsolin-4-yyli)etikkahappoa (syn-isomeeri).

63 67384 minkä jälkeen lisättiin 1,70 g Ν,Ν-dimetyylianiliinia. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä ja lisättiin pienin erin 1,47 g fosforipenta-kloridia. Seosta sekoitettiin tunnin ajan. Metyleenikloridi tislattiin pois alennetussa paineessa, ja lisättiin 21 ml N,N-dimetyyli-asetamidia. Tämän jälkeen lisättiin 0,847 g Ν,Ν-dimetyylianiliinia, ja sitten 1,90 g 7-aminokefalosporaanihappoa. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä tunnin ajan. lisättiin eetteriä, jolloin erottui siirappimainen tuote. Eetteri poistettiin dekantoimalla, ja jäännös liuotettiin lisäämällä vettä ja etyyliasetaattia. Etyyliasetaatti-kerros pestiin natriumkloridin kyllästyneellä vesiliuoksella ja uutettiin natriumbikarbonaatin 1% vesiliuoksella. Alkalisen vesikerroksen pH säädettiin arvoon 2 fosforihapolla ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros pestiin natriumkloridin kyllästyneellä vesi-liuoksella ja kuivattiin magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, lisättiin eetteriä jäännökseen, ja hierrettiin astian seinämää, jolloin saatiin jauhetta. Jauhe otettiin talteen suodattamalla ja kuivattiin. Täten saatiin 1,770 g 7-^**2-(2-klooriasetyyli-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-asetoksi-imino-asetamido_7-3-asetoksimetyyli-3-kefeerai-4-hydroksyylihappoa (syn-isomeeri).

IR(cm"1, KBr): 1784 NMR( 100 MHz, d6-LMS0, 6): 2.06(s, CH20C0CH5), 2,22(s, =N-0C0CH5), 3.49 & 3.71 (ABq, J=18 Hz, 2-CH2), 4.39(s, 01CH2), 4.72 & 5.03 (ABq, J=13 Hz, 3-CH2), 5.23 (d, J=5 Hz, 6-H), 5.89(dd, J=5 & 8 Hz, 7-H), 7.76(s, tiatsoliini 5-H), 9.93(d, J=8 Hz, CONH), 12.96(br. s, tiatsoliini 3-H).

Esimerkki 2.3b 2-(2-amidinotioasetyyli-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2~asetoksi-imino-asetamido_7-3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappo-hydrokloridin valmistus (syn-isomeeri)

Liuotettiin 4 ml:aan N,N-dimetyyliasetamidia 1,120 g 7-/”2-(2-klcori~ asetyyli-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-asetoksi-imino-asetamido_7-3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa (syn-isomeeri). ja sekoittaen huoneenlämmössä lisättiin 0,152 g tiokarbamidia. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 3,5 tuntia, minkä jälkeen lisättiin eetteriä, jolloin erottui öljymäinen tuote. Eetteri poistettiin dekantoimalla, jäännökseen lisättiin etyyliasetaattia, ja hierrettiin astian seinämää. Muodostunut jauhe otettiin talteen suodattamalla, 64 67384 pestiin etyyliasetaatilla ja kuivattiin. Tällä tavoin saatiin 1.595 g otsikossa mainittua yhdistettä. Tämä tuote sisälsi pienen määrän etyyliasetaattia ja N,N-dimetyyllasetamidia.

IR(KBr, cm"1): 1779 NMR(100 MHz, dg-EMSO, &): 2.06(s, CH^OOCH^), 2.22 (s, »N-OCOCHj), 3.49 & 3.73(ABq, J«18 Hz, 2-0¾), 4.41(s, SCHgCJO), 4.72 & 5.03 (ABq, J=13 Hz, 3-CH2), 5.23(d, J-5 Hz, 6-H), 5.88(dd, J«5 & 8 Hz, 7-H), 7.76(s, tiatsoliini 5-H), 9.37(br. s, Η2Ν-0*ΝΗ·Η01), 9.94(d, J=8 Hz, OONH), 13.00(br. s, tiatsoliini 3-H).

Esimerkki 23c

Natrium-7-^”2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7-3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatin valmistus

Seokseen, jossa oli 10 ml vettä ja 10 ml tetrahydrofuraania, lisättiin 0,350 g 7-^~2-(2-amidinotioasetyyli-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-asetoksi-imino-asetamido_7-3-asetoksimetyyli-3--kefeemi-4-karboksyyli-happo-hydrokloridia (syn-isomeeri). minkä jälkeen lisättiin 139 mg natriumbikarbonaattia. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 25 tuntia, minkä jälkeen sekoitettiin 40 °C:ssa 6 tuntia. Tetrahydrofuraani poistettiin alennetussa paineessa tislaamalla, ja jäännös pylväskroma-tografoitiin käyttämällä polystyreenihartsia (Amberlite XAD-2, Rohm & Haas Co.), minkä jälkeen kehitettiin vedellä. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot otettiin talteen ja lyofiloitiin. Täten saatiin 0,116 g otsikossa mainittua yhdistettä. Infrapunaspektrin, ydin-magneettisen resonanssispektrin ja alkuaineanalyysin perusteella tämän tuotteen todettiin olevan samaa kuin esimerkin 5 mukaan saatu yhdiste.

Esimerkki 24

Natrium-7-/~2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-a8etamido_7“ 3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatin valmistus (syn-isomeeri)

Seokseen, jossa oli 10 ml tetrahydrofuraania ja 10 ml vettä, liuotettiin 0,300 g 7-/"’2-(2-klooriasetyyli-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-asetokei-imino-asetamido_7-3-asetok8imetyyli-3-kefeemi-4-karboksyyli-happoa, minkä jälkeen lisättiin 0,136 g natriumbikarbonaattia ja 0,053g 65 6 7384 tiokarbamidia. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 24,5 tuntia, ja tämän jälkeen sekoitettiin 6,5 tuntia 40 °C:ssa. Tetrahydrofuraani poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, ja jäännös pylväskroma-tografoitiin käyttämällä polystyreenihartsia (Amberlite XAD-2, Rohm and Haas Co,), minkä jälkeen kehitettiin vedellä. Haluttua yhdistettä sisältävät fraktiot otettiin talteen ja lyofiloitiin. Täten saatiin 0,09 g otsikossa mainittua yhdistettä. Infrapunaspektrin, ydin-magneettisen resonanssispektrin ja alkuaineanalyysin perusteella sekä ohutkerroskromatografoinnin avulla todettiin tämän tuotteen olevan samaa kuin esimerkin 5 mukaan saatu yhdiste.

Esimerkki .25

Natrium-7-£’’2~(2-imino-4~tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido j-3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatin valmistus (syn-isomeeri)

Suspendoitiin 20 ml:aan 0,525 g 7-^*"2-(2-amidinotioasetyyli~imino~4-tioatsolin-4-yyli)-2-asetoksi-imino-asetamido_7-3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappohydrokloridia (syn-isomeeri), tämän jälkeen lisättiin 0,252 g natriumbikarbonaattia. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 15 tuntia. Koko reaktloseos pylväskromatografoitiin käyttämällä polystyreenihartsia (Amberlite XAD-2,Rohm & Haas Co), ja haluttua yhdistettä sisältävät fraktiot otettiin talteen ja lyofiloitiin.

Tällä tavoin saatiin 0,121 g natrium-7-^**2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asatamido_7-3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksy-laattia (syn-isomeeri).

Tämä yhdiste vastasi täydellisesti infrapunaspektrin, ydinmagneettisen resonanssispektrin, alkuaineanalyysin ja ohutkerroskromatografoinnin perusteella esimerkin 5 mukaista tuotetta.

Eslmerickl 26

Natrium-7-^ 2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-hydroksi-imino-asetamido_7“3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karbokslylaatin valmistus (syn-isomeeri) 66 67384

Seokseen, jossa oli 10 ml tetrahydrofuraania ja 10 ml vettä, liuotettiin 0,350 g Esimerkin 23a mukaan saatua 7-/2-(2-kloori-asetyyli-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2-asetoksi-imino-asetamidq/- 3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa (syn-isomeeri), ja tämän jälkeen lisättiin 0,105 g natriumbikarbonaattia. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 13,5 tuntia, ja tämän jälkeen 40 °C:ssa 20,5 tuntia, ja lopuksi 50 °C:ssa 10 tuntia. Tetra-hydrofuraani poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin etyyliasetaatilla. Emäksisen vesikerroksen pH säädettiin arvoon 2, ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyli-asetaattikerros otettiin talteen, pestiin natriumkloridin kyllästyneellä vesiliuoksella ja kuivattiin. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin jauhemainen jäännös. Tämän jälkeen lisättiin eetteriä, ja jauhe otettiin talteen suodattamalla ja kuivattiin. Täten saatiin 0,114 g 7-/2-(2-klooriasetyyli-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-2~ hydroksi-iminoasetamidq7-3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karbok-syylihappoa.

IR(KBr, cm-1): 1780 NMR(100 MHz, dg-DMSO, <S ): 2.05 (s, CH3), 3.43 & 3.66 (ABq, J=18 Hz, 2-CH2), 4.38 (s, C1CH2), 4.70 & 5.02 (ABq, J=13 Hz, 3-CH2), 5.17 (d, J=5 Hz, 6-H), 5.85 (dd, J=5 & 8 Hz, 7-H), 7.37 (s, tiatsoliini 5-H), 9.48 (d, J=8 Hz, CONH), 11.58 (br, s, =N-OH), 12.7 (br.f tiatsoliini 3-H).

0,100 g edellä valmistettua yhdistettä liuotettiin seokseen, jossa oli 3 ml tetrahydrofuraania ja 3 ml vettä, jonka jälkeen siihen lisättiin 0,042 g natriumvetykarbonaattia ja 0,016 g tiokarbamidia. Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 24,5 tuntia ja tämän jälkeen 40 °C:seen korotetussa lämpötilassa 6,5 tuntia. Tetrahydrofuraani poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännöksellä suoritettiin pylväskromatografointi polystyreenihartsilla, jolloin kehitys suoritettiin vedellä. Halutun tuotteen sisältävät fraktiot kerättiin ja jäähdytys-kuivattiin. Tällä tavalla saatiin 0,028 g otsikkona esitettyä 67384 67 yhdistettä. Tämän yhdisteen IR, NMR, alkuaineanalyysi ja TLC arvot olivat täysin yhtäpitävät esimerkissä 3 saadun tuotteen kanssa.

Vertailuesimerkki 1 7-(4-bromi-3-oksobutyryyliamino)-3-metyyli-3-kefeemi-4-karbok-syylihapon valmistus

Liuos, jossa oli 2,2 g diketeeniä 5 ml:ssa metyleeniklorid ia, jäähdytettiin -40 °C:een, ja lisättiin tiputtaen 4,4 g bromia. Erikseen liuotettiin 4,28 g 7-aminodesasetoksikefalosporaani-happoa ja 8,0 g n-dibutyyliamiinia 120 mitään metyleeniklorid ia ja jäähdytettiin. Edellä mainittu reaktioseos lisättiin tiputtaen tähän sekoitettuun liuokseen. Seoksen lämpötilan annettiin nousta huoneenlämpöön 30 minuutin kuluttua, minkä jälkeen seosta sekoitettiin vielä 30 minuuttia. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännökseen lisättiin 200 ml etyyliasetaattia ja 40 ml 40% fosforihappoa ja ravistettiin voimakkaasti. Orgaaninen kerros otettiin talteen, pestiin vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa. Jäännökseen lisättiin etyylieetteriä, minkä jälkeen sekoitettiin. Muodostunut jauhe otettiin talteen suodattamalla ja kuivattiin. Täten saatiin 3,7 g otsikossa mainittua yhdistettä.

Vertailuesimerkki 2 7-(4-bromi-3-oksobutyryyliamino)-3-(mandelyylioksimetyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihapon valmistus

Liuos, jossa oli 1,34 g (0,013 moolia) dikeeniä 10 ml:ssa metyleenikloridia, jäähdytettiin -30 °C:een, ja lisättiin tiputtaen liuos, jossa oli 3,14 g (0,014 moolia) bromia 10 mlsssa metyleenikloridia. Erikseen liuotettiin 3,6 g (0,01 moolia) 7-amino-3-(mandelyvlioksimetyyli)-3-kefeemi-4-karbok-syylihappoa ja 2,8 ml (0,02 moolia) trietyyliamiinia 50 raitaan metyleenikloridia ja jäähdytettiin -20 °C:een. Edellä mainittu reaktioseos lisättiin tiputtaen tähän sekoitettuun liuokseen 68 67384 10 minuutin kuluttua, minkä jälkeen jäähdytin poistettiin. Seoksen lämmettyä huoneenlämpöön sekoitettiin sitä 30 minuuttia. Metyleeni-kloridi poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, ja jäännökseen lisättiin 30 ml 10% fosforihappoa, 100 ml vettä, 20 ml tetrahydrofuraa-nia ja 250 ml etyyliasetaattia, ja sekoitettiin voimakkaasti. Orgaaninen kerros otettiin talteen, pestiin vedellä, kuivattiin ja tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi. Jäännökseen lisättiin 200 ml eetteriä ja astian seinämää raavittiin, jolloin saatiin 4,5 g otsikossa mainittua yhdistettä jauheena.

IR(KBr, cm”"*): 3370, 1782, 1736, 1672, 1648, 1539 NMR(100 MHz, dg-DMSO, b): 3.24(hr. s, 2-CH2), 3.63(s, CH200), 4.89(s, BrCH2-), 4.77 & 5.05(ABq, J-14 Hz, 3-CH2), 5.04(d, J=5 Hz, 6-H), 5.17(s, -GH-), 5.08(dd, J=5 & 8 Hz, 7-H), 7.3-7.5(m, C^-), 9.02(d, J=8 Hz, CONH).

Vertailuesimerkki 3 7-(4-kloori-3-oksobutyryyliamino)-3-(1-metyyli-1H-tetratsol-5-yyli)-tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihapon valmistus

Liuosta, jossa oli 166,5 g (1,98 moolia) diketeeniä 830 mlissa mety-leenikloridia, sekoitettiin jäähdyttäen siten, että sisäinen lämpötila 011 -25...-30 °G. Lisättiin 100 minuutin kuluessa 140 g (1,97 moolia) kloorikaasua. Tämän jälkeen liuosta sekoitettiin edelleen huoneenlämmössä 30 minuuttia. Erikseen liuotettiin 500 g (1,52 moolia) 7-amino-3-(1-metyyli-1H-tetratsol-5-yyli)tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa ja 394 g (3,05 moolia) dibutyyliamiinia 3 litraan metyieenikioridia, ja jäähdytettiin -10...-20 °C:een. Edellinen reaktio3eos lisättiin tiputtaen 30 minuutin kuluessa tähän sekoitettuun liuokseen, minkä jälkeen seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 40 minuuttia. Reaktioseos lisättiin seokseen, jossa oli 6 1 etyyliasetaattia ja 6 1 10% fosforihappoa. Sekoitettiin perusteellisesti, minkä jälkeen orgaaninen kerros otettiin talteen, pestiin vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa. Jäännökseen lisättiin eetteriä. Tällä tavoin saatiin jauheena 644 g otsikossa mainittua yhdistettä.

IR(KBr, cm“1): 1783, 1732, 1679 NMR(100 MHz, dg-MSO, 6): 69 67384 3.57 & 3.79 (ABq, J-18 Hz, 2-CH2), 3.56(s, OOCHgCO), 3.91(s, tetratsoli-CH3), 4.20 & 4.37(ABq, J=13 Hz, 3-CH2), 4.52(s, C1CH2), 5.07(d, J» 5 Hz, 6- H), 5.67 (dd, J= 5 & 8 Hz, 7-H), 9,05 (d, J=8 Hz, «τ-ΟΟΝΗ»)

Vertailuesimerkkl 4 7- (4.-bromi-3-oksobutyryyliamino)-3-(1-nietyyli-lH-tetratsol-5-yyli)tiometyyli-3-kefeemi-karboksyylihapon valmistus liuos, jossa oli 1,03 g (0,01 moolia) diketeeniä 5 ml:ssa metyleeni-kloridia, jäähdytettiin -30 °C:een, ja lisättiin tiputtaen liuos, jossa oli 2,24 g (0,01 moolia) bromia 5 ml:ssa metyleenikloridia. Erikseen liuotettiin 3.29 g (0,01 moolia) 7-amino-3-(1-metyyli-1H-tetratsol-5-yyli)tiometyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa ja 2,02 g trietyyliamiinia 20 ml:aan metyleenikloridia ja jäähdytettiin -20 °C: een. Edellä mainittu reaktioseos lisättiin tiputtaen nopeasti tähän sekoitettuun liuokseen, minkä jälkeen nesteen lämpötila nousi O °C:een. Nesteen lämpötilan annettiin vähitellen nousta huoneenlämpöön, jossa seosta sekoitettiin 15 minuuttia. Reaktioseos lisättiin seokseen, jossa oli 150 ml etyyliasetaattia ja 100 ml Ί0% fosforihappoa, minkä jälkeen sekoitettiin voimakkaasti. Orgaaninen kerros pestiin vedellä, kuivattiin ja konsentroitiin alennetussa paineessa. Jäännökseen lisättiin eetteriä. Täten saatiin jauheena 4,1 g otsikossa mainittua yhdistettä.

IR(KBr, cm”1): 1780, 1725, 1674 NMR(100 MHz, dg-IMSO, ): 3.59 & 3.81 (ABq, J=18 Hz, 2-CH2), 3.63(s, C0CH200), 3.93(s, tetratsoli-CH3), 4.21 & 4.38(ABq, J=13 Hz), 3-CH2), 4.38(s, BrCH2), 5.07(d, J=5 Hz, 6- H), 5.67(dd, J=5 & 8 Hz, 7-H), 9.06(d, J=8 Hz, OONH).

Vertailuesimerkki 5 7- (4-bromi-3-oksot>utyryyliamino )-3-karbamoyylioksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihapon valmistus liuos, jossa oli 0,101 g diketeeniä 20 mljssa metyleenikloridia jäähdytettiin -30 °C:een,ja lisättiin tiputtaen liuos, jossa oli 0,208 g bromia 1,3 ml:ssa hiilitetrakloridia. Erikseen liuotettiin 0,303 g 7-amino-3-karbamoyylioksimetyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa ja 0,303 g trietyyliamiinia 4 ml:aan metyleenikloridia ja jäähdytettiin. Edellä mainittu reaktioseos lisättiin tiputtaen tähän sekoitettuun liuokseen, ja jäähdytin poistettiin niin, että nesteen lämpötila nousi huoneenlämpöön, minkä jälkeen sekoitettiin 30 minuuttia. Metyleeni- 7o 673 8 4 kloridi poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, ja jäännökseen lisättiin 20 ml 10% fosforihappoa, 30 ml metyylietyyliketonia ja 5 ml natriumkloridin kyllästynyttä vesiliuosta, jolloin ravistettiin voimakkaasti. Orgaaninen kerros otettiin talteen, pestiin 3 ml:lla natriumkloridin kyllästynyttä vesiliuosta ja kuivattiin, liuotin haihdutettiin alennetussa paineessa, lisättiin 5 ml eetteriä jäännökseen ja hierrettiin astian seinämää, jolloin saatiin 0,148 g otsikossa mainittua yhdistettä jauheena.

IR(KBr, cm"1): 3390, 3000, 1780, 1740, 1550, 1400, 1330 UV λ max(t ,vedessä): 262 nm (0.89 x 10^) NMR(100 MHz, dg-UMSO, 8): 3.48 & 3.66(ABq, J=18 Hz, 2-CH2), 3.64(s, C0CH2C0), 4.40(s, BrCH2), 4.64 & 4.93(ABq, J=13 Hz, 3-CH2), 5-11(d, J=5 Hz, 6-H), 5.68(dd, J=5 & 9 Hz, 7-H), 6.5(br. s, OOONH2), 9.04(d, J=9Hz, CONH)

Alkuaineanalyysi kaavalle C^H.^N^O^SBr laskettu C 35.79, H 3.23, N 9.61 saatu C 35.84, H 3.25, N 8.26

Vertailueslmerkki 6 7-(4-kloori-3-oksobutyryyliamino)-3-(mandelyylioksiraetyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihapon valmistus liuos, jossa oli 0,26 g (3 mM) diketeeniä 3 ml:ssa metyleeniklorldia, jäähdytettiin -30 °G:een, ja lisättiin tiputtaen liuos, jossa oli 0,21 g (3 raM) klooria 3 ml:ssa metyleeniklorldia. Erikseen liuotettiin 1,09 g (3 mM) 7-amino-3-(mandelyylioksimetyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa ja 0,84 ml (6 mM) trietyyliamiinia 15 ml:aan mety-leenikloridia ja jäähdytettiin -20 °C:een. Edellä mainittu reaktio-seos kaadettiin tiputtaen tähän sekoitettuun liuokseen, jäähdytin poistettiin siten, että nesteen lämpötila nousi huoneenlämpöön, ja seosta sekoitettiin 30 minuuttia. Metyleenikloridi poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, ja jäännökseen lisättiin 10 ml 10% fosfo-rihappoa, 30 ml vettä, 10 ml tetrahydrofuraania ja 100 ml etyyliasetaattia ja ravistettiin voimakkaasti. Orgaaninen kerros otettiin talteen, pestiin vedellä ja kuivattiin, liuotin poistettiin alennetussa paineessa, lisättiin 100 ml eetteriä jäännökseen, ja hierrettiin astian seinämää. Täten saatiin jauheena 1.20 g otsikossa mainittua yhdistettä.

IR(KBr, cm"1): 1784, 1741, 1668, 1538 NMR(100 MHz, dg-BMSO, k): 71 67384 3.25(br. s, 2-0¾). 3.58(s, COCH2CO), 4.56 (s, CICHg-), 4.78 & 5.07 (ABq, J=13 Hz), 3-0¾), 5.06 (d, J=5 Hz, 6-H), 5.18(s, -OH-), 5.68 (dd, J=5 & 8 Hz, 7-H), 7.3-7.5(m, 0^-), 9.02(d, J=8 Hz, -OONH-).

Vertailuesimerkki 7 1-metoksimetyyli-1H-tetratsoli-5-tiolin valmistus

Keitettiin seosta, jossa oli 3,2 g natriumatsidia, 6 ml etanolia ja 16 ml vettä, palautustislausta soveltaen ja sekoittaen, ja lisättiin tiputtaen liuos, jossa oli 5,2 g metoksimetyyli-isotiosyanaattia 2 mlissa etanolia. Seosta keitettiin palautustislausta soveltaen 45 minuuttia. Tämän jälkeen etanoli poistettiin alennetussa paineessa, ja jäännös tehtiin happameksi 1 N kloorivetyhapon avulla ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uutos kuivattiin ja konsentroitiin kuiviin ja kiteiseen jäännökseen lisättiin n-heksaania, sekoitettiin ja suodatettiin. Kiteet kiteytettiin uudelleen tolueenissa. Tällä tavoin saatiin 1,4 g otsikossa mainittua yhdistettä, sulamispiste 80...82 °C.

IR(KBr, cm”1): 1503, 1360, 1080 NMR(60 MHz, dg-IMSO, S): 3.36(s, CH3), 5.48(s, 0¾)

Alkuaineanalyysi kaavalle C^H^N^OS

laskettu C 24.66, H 4.14, N 38.35 saatu C 24.71, H 4.06, N 37.24.

Vertailuesimerkki 8

Samalla tavoin kuin vertailuesimerkissä 7 saatettiin natriumatsidi reagoimaan vastaavan Isotiasyynihappoesterin kanssa, jolloin saatiin esimerkkinä mainittuja vastaavia 1-substituoidut 1H-tetratsoli-5~tioli-yhdisteitä.

(1) 1-(2-N,N-dimetyyliaminoetyyli)-1H-tetratsoli-5-tioli, sulamispiste 217...219 °C (kiteytetty uudelleen etanolin vesiliuoksesta). NMR(6Q MHz, DgO + NaHC03, 6)i 3.03(s, N(CH3)2), 3.58(t, CH2), 4.70(t, CH2) (2) 1-metyylitiometyyli-1H-tetratsoli-5-tioli IR(KBr, cm"1): 1495, 1351 NMR (60MHz, dg-IMSO, £): 2.25(s, SCH3), 5.35(s, CHg), 10,1(hr. s, tetratsoli-UH).

72 67384

Vertailuesimerkki 9 1-N,N-dimetyylikarbamoyylimetyyli-lH-tetratsoli-5-tiolin valmistua (1) Seosta, jossa oli 6,84 g glysiini-N,N-dimetyyliamidia, 9,38 ml trietyyliamiinia ja 150 ml metyleenikloridia, sekoitettiin ja lisättiin tässä mainitussa järjestyksessä 5.09 g hiilidisulfidia ja 9,51 g metyylijodidia. Seosta sekoitettiin tämän jälkeen huoneenlämmössä tunnin ajan. Tähän reaktioseokseen lisättiin 200 ml 5% fosforihapon vesiliuosta, ravistettiin voimakkaasti, ja otettiin orgaaninen kerros talteen, pestiin se vedellä, kuivattiin ja konsentroitiin alennetussa paineessa. Kiteiseen jäännökseen lisättiin n-heksaania, sekoitettiin ja otettiin jäännös talteen suodattamalla ja kuivattiin. Tällä tavoin saatiin 12,2 g metyyli~2-(N,N-dimetyylikarbamoyylimetyyli)-ditiokarba-maattia.

IR(KBr, cm"1): 1626, 1543 NMR(60 MHz, dg-XMSO, b)i 2.62(s, CH^S), 3.02(s, N(CH3)2), 4.42 (d, J=4 Hz, CH2), 8.30(br. s, NH) (2) Seosta, jossa oli 10 g metyyli-2-(N,N-dimetyylikarbamoyylimetyyli)-ditiokarbamaattia, 5,7 g natriumatsidia ja 50 ml etanolia, sekoitettiin 80 °C:ssa 6,5 tuntia. Reäktioseoksen pH säädettiin arvoon 2,5 10% kloorivetyhapolla ja haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa.

Jäännös uutettiin 100 ml:11a metanolia. Metanoliuutos käsiteltiin aktiivihiilellä, minkä jälkeen haihdutettiin kuiviin ja kiteytettiin jäännöksenä saatu jauhe uudelleen vedestä. Tällä tavoin saatiin 6,7 g otsikossa mainittua yhdistettä, sulamispiste 195...198 °C (hajoaa).

NMR (SO MHz, d6-IMS0, 6): 2.87 & 3.07 (jokainen s, N(CH5)2), 5.21 (s, CH200)

Alkuaineanalyysi kaavalle G^H^N^S

laskettu C 32.07, H 4.85, N 37.41 saatu C 32.11, H 4.90, N 37.74

Vertailuesimerkki 10 1-(2-karboksietyyli)-1H-tetratsoli-5-tiolin valmistus (1) Suspendoitiin 100 ml:aan metyleenikloridia 10,6 g β-alaniini-bentsyyliesteri-p-tolueenisulfonaattia, sekoitettiin ja lisättiin tässä mainitussa järjestyksessä 6,06 g trietyyliamiinia ja 2,28 g hiilidisulfidia. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 40 minuuttia.

Tämän jälkeen lisättiin 4,26 g metyylijodidia, ja seosta sekoitettiin edelleen huoneenlämmössä 2 tuntia. Tämä reaktioseos pestiin vedellä, 73 6 7 3 8 4 kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 8,3 g metyyli-2-(2-bentsyylioksikarbonyylietyyli)-ditiokarba-maattia öljymäisenä tuotteena.

IR(puhdas, cm-1): 3300, 1730 NMR(60 MHz, CDCl^, 6): 2.57(s, CH5S), 2.76(t, J=6 Hz, CH2C0), 4.03(m, ΝΗ^2), 5.17(s, Ph-CH2), 7.25(s, C6H5), 7.7(hr. s, NH) (2) Seosta, jossa oli 8,3 g metyyli-2-(2-bentsyyliok.sikarbonyyli- etyyli)ditiokarhamaattia, 1,95 g natriumatsidia, 10 ml etanolia, ja 40 ml vettä, sekoitettiin 80 °C:ssa tunnin ajan. Reaktioseoksen jäähdyttyä se laimennettiin 100 ml:11a vettä ja lisättiin etyyliasetaattia sekä ravistettiin. Vesikerros otettiin talteen, sen pH säädettiin arvoon 1 10% kloorivetyhapolla ja uutettiin etyyliasetaatilla.

Uutos pestiin vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa. Täten saatiin 3,84 g 1-(2-bentsyylioksikarbonyylietyyli)-1H-tetratsoli-5-tiolia öljymäisenä tuotteena.

IR(puhdas, cm-1): 1725 NMR(60 MHz, CDC15, b ): 3.09(t, J=6 Hz, CHgOO), 4.54 (t, J=6 Hz, tetrasoli-CH2), 5.15(s, Ph-CH2), 7.33(s, C6H5-).

(3) Seos, jossa oli 3.84 g 1-(2-bentsyylioksikarbonyylietyyli)-1H-tetratsoli-5-tiolia, 30 ml tetrahydrofuraania ja 29 ml 1 N natrium-hydroksidia, annettiin seistä huoneenlämmössä 2 tuntia. Reaktioseos pestiin etyyliasetaatilla ja vesikerroksen pH säädettiin arvoon 1 10% kloorivetyhapolla, minkä jälkeen uutettiin etyyliasetaatilla.

Uutos pestiin natriumkloridin vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin. Täten saatiin 1,9 g otsikossa mainittua yhdistettä jauheena.

IR(nujoli, cm-1): 1708 NMR(60 MHz, dg-MSO, δ ) 2.8S(t, J=7 Hz, CH200), 4.40(t, J*7 Hz, tetratsoli-CH2), 12.2 (br, s, NH & 002H).

Vertalluesimerkki 11 1-(karbaraoyylimetyyli)-1H-tetratsoli-5-tiolin valmistus

Toistettiin vertailuesimerkissä (1) ja (2) selitetyt reaktiot käyttämällä glysiinibentsyyliesteri-p-tolueenisulfonaattia fi-alaniini-bentsyyliesteri-p-tolueenisulfonaatin asemesta, jolloin saatiin valmistetuksi 1-bentsyylioksikarbonyylimetyyli-1H-tetratsoli-5-tiolia, joka 74 6 7 3 8 4 tämän jälkeen muutettiin ammoniakin alkoholiliuoksella otsikossa mainituksi yhdisteeksi.

Vertailueslmerkki 12 2- metoksimetyyli-1,3,4-tiadiatsoli-5-tiolin valmistus (1) liuosta, jossa oli 4*9 g kaliumhydroksidia 30 ml:saa metanolia, sekoitettiin jäässä jäähdyttäen, ja lisättiin 8,56 g metoksi.asetyyli-hydroatsidia ja 5,5 ml hiilidisulfidia. Seosta sekoitettiin jäähdyttäen 30 minuuttia ja tämän jälkeen huoneenlämmössä vielä 30 minuuttia. Metanoli poistettiin alennetussa paineessa, ja jäännökseen lisättiin etanolia, jolloin muodostui kiteistä jauhetta. Jauhe otettiin talteen suodattamalla ja kuivattiin. Täten saatiin 10,5 g kalium-3-(metoksi-asetyyli)ditiokarbatsinaattia.

(2) Liuotettiin 40 ml:aan jäällä jäähdytettyyn konsentroituun rikkihappoon 10,5 g kalium-3-(metoksiasetyyli)-ditiokarbatsinaattia, ja liuosta sekoitettiin jäällä jäähdyttäen 10 minuuttia. Tämän jälkeen liuos kaadettiin 150 g:aan jäätä ja sekoitettiin, jolloin tapahtui kiteytymistä. Nämä kiteet otettiin talteen suodattamalla, pestiin kylmällä vedellä ja kuivattiin. Täten saatiin 4,8 g otsikossa mainittua yhdistettä.

NMR (60 MHz, CDClj, 6) 3.46(s, CEj), 4.60(s, CHg), 12.33 (hr. s, tiadiatsoli-NH) Alkuaineanalyysi: kaavalle C^HgNgSg laskettu C 29.61, H 3.73, N 17.27 saatu C 29.43, H 3.98, N 17.34

Vertailueslmerkki 13 3- hydroksimetyyli-4-metyyli-1,2,4-triatsoli-5-tiolin valmistus

Keitettiin palautustislausta soveltaen 5 tuntia seosta, jossa oli 9 g glykolihappohydratsidia, 7,3 g metyyli-isotiosyanaattia, 50 ml metanolia ja 50 ml etanolia. Tämän jälkeen lisättiin 2,3 g natrium-metallolia, minkä jälkeen seosta edelleen keitettiin palautustislausta soveltaen 24 tuntia. Reaktioseos konsentroitiin alennetussa paineessa, ja jäännös liuotettiin 150 ml:aan vettä, ja sen pH säädettiin arvoon 2,5 fosforihapolla. Muodostuneet kiteet otettiin talteen suodattamalla ja kiteytettiin uudelleen etanolista. Täten saatiin 5,2 g otsikossa mainittua yhdistettä, sulamispiste 199...201 °C.

75 67384 NMR (60 MHz, dg-IMSO, ό): 3.54(s, GHj), 4.56(s, CH20)

Alkuaineanalyysi yhdisteelle C^H^N^O^S

laskettu C 33.08, H 4.86, N 28.94 saatu C 32.99, H 4.90, N 28,65

Vertailuesimerkki 14 3-karbamoyyli-4-metyyli-1,2,4-triatsoli-5-tiolin valmistus liuotettiin 100 ml:aan etanolia 5,3 g 4-metyylitio-semikarbatsidia, 5,9 g etyylioksaminaattia ja 1,6 g natriummetallia, ja liuosta keitettiin palautustislausta soveltaen 48 tuntia. Reaktioseoksen jäähdyttyä se laimennettiin 100 ml:11a vettä ja tehtiin happameksi fosforihapon avulla. Muodostuneet kiteet otettiin talteen suodattamalla ja kiteytettiin uudelleen vedestä. Täten saatiin 2,0 g otsikossa mainittua yhdistettä.

NMR(60 MHz, dg-MSO, ): 3.67(e, CH5), 7.90 & 8.13(jokainen s, C0NH2), 3.30(s, SH), 12.5 (s, triatsoli-NH).

Vertailuesimerkki 15

Edellä mainittujen vertailuesimerkkien mukaan saatujen typpipitoisten heterosyklisten tiolien funktionaalisiin ryhmiin kohdistettiin kemiallinen rauuntoreäktio sinänsä tunnetulla tavalla siten, että saatiin valmistetuiksi seuraavia typpipitoisia heterosyklisiä tioleja.

(1) 1-karboksimetyyli-1H-tetratsoli-5-tioli 1-N,N-dimetyylikarbamoyylimetyyli-1H-tetratsoli-5-tiolia hydrolysoitiin natriumhydroksidiliuoksella. Sulamispiste 156...160 °G (hajoaa).

IR (KBr, cm"1): 1713 NKR(60 MHz, d.g-mSO, 6): 5.C3(s, CH200), 12.09 (hr. s, NH & -C00H) (2) 1-(2-hydroksietyyli)-1H-tetratsoli-5-tioli 1- bentsyylioksikarbonyylimetyyli-1H-tetratsoli-5-tiolia pelkistettiin litiumalumiinihydridin ja tetrahydrofuraanin avulla, sulamispiste 137...139 °C.

(3) 2-(2-N,N-dimetyyliaminoetyyli)-1,3,4-tiadiatsoli-5-tioli 2- (N,N-dimetyylikarbamoyylimetyyli )-1,3,4-tiadiatsoli-5-tiolia pelkis- 76 67384 tettiin boorihydridin 3a tetrahydrofuraanin avulla.

NMR (60 MHz, D20, 6): 2.47(s, N(CH5)2), 3.0...3.3(A2B2-kuvio m.CH2CH2).

Vertailuesimerkki 16a

Bentshydryyli-4-bromi-3-oksobutyraatin valmistus

Liuotettiin 10,5 ml:aan metyleenikloridia 2,1 g diketeeniä, ja jäähdyttäen -30 °C:een lisättiin liuos, jossa oli 4,0 g bromia 12,5 ml:ssa metyleenikloridia, tiputtaen liuokseen, jota sekoitettiin ja pidettiin huoli siitä, että lämpötila ei päässyt nousemaan mainitusta arvosta. Tiputtaen suoritetun lisäyksen jälkeen seos pidettiin 0 °C:ssa 10 minuuttia. Erikseen liuotettiin 3,68 g bentshydryyliä 25 ml:aan metyleenikloridia, minkä jälkeen lisättiin 2,92 g trietyyliamiinia. Sekoittaen pidettiin huoli siitä, että lämpötila ei ylittänyt arvoa -30 °C, ja lisättiin tiputtaen edellisen kohdan mukaan valmistettu bromiaseto-asetyylibromidiliuos. Tämän tiputtaen suoritetun lisäyksen päätyttyä sekoitettiin saosta O °C:ssa 40 minuuttia, minkä jälkeen se pestiin vedellä. Kuivattiin magnesiumsulfaatin avulla, minkä jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 6,99 g bentshydryyli-4-bromi-3-oksobutyraattia.

IR(cm-^, puhdas): 1743 NMR(60 MHz, CDClj, ö): 3.68(s, 000H200), 3.87(s, BrCH2), 6.82(s, CH), 7.21 (s, aromaattinen H). Yertailuesimerkkl 16,b

Bentshydryyli-4-bromi-2-hydroksi-imino-3-oksobutyraatin valmistus

Liuotettiin 30 ml:aan etikkahappoa 6,94 g bentshydryyli-4-bromi-3-oksobutyraattia, jäähdytettiin jään avulla ja sekoitettiin ja lisättiin tiputtaen liuos, jossa oli 1,558 g natriumnitriittiä 6 ml:ssa vettä. Seosta sekoitettiin edelleen tässä lämpötilassa 20 minuuttia, minkä jälkeen lisättiin 60 ml natriumkloridin kyllästynyttä vesiliuosta.

Tämän jälkeen seos uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros pestiin natriumkloridin kyllästyneellä vesiliuoksella ja kuivattiin magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 7,56 g otsikossa mainittua yhdistettä.

IR(cm“\ puhdas): 1742 NMR (60 MHz, CDCl^, £,): 4.29 (s, BrCH2), 7.19(s, CH), 7.34(s, aromaattinen H), 9.79 (br. s, N=0H) 77 6 7 3 8 4

Vertailuesimerkki X6c

Bentshydryyli-2-asetoksi-imino-4-bromi-3-oksobutyraatin valmistus

Lisättiin 50 ml:aan etikkahappoanhydridia 26,2 g bentshydryyli-4-bromi-2~hydroksi-imino-3“Oksobutyraattia, ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 100 minuuttia. Ylimääräinen etikkahappoanhydridi ja reaktiossa muodostunut etikkahappo tislattiin pois alennetussa paineessa. Täten saatiin 26,7 g otsikossa mainittua yhdistettä.

IR(cm“1, puhdas): 1809, 1750 NMR (60 MHz, CDC15, b): 1.94(s, 0H5), 4.44(s, BrCH2), 7.11(s, CH), 7.50(s, aromaattinen H) Vertailuesimeikki 16d

Bentshydryyli-2-asetoksi-imino-2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-asetaatin valmistus

Liuotettiin 20 ml:aan N,N-dimetyyliasetamidia 26,5 g bentshydryyli- 2-asetoksi-imino-4-bromi-3-oksobutyraattia, jäähdytettiin jään avulla ja sekoitettiin ja lisättiin 4,81 g tiokarbamidia. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 3 tuntia ja 15 minuuttia, minkä jälkeen seos pestiin perusteellisesti 80 ml:11a eetteriä. Eetteri poistettiin dekantoimal-la. Edellä mainittu käsittely toistettiin vielä kerran, ja seos kaadettiin 100 ml:aan vettä, jolloin tapahtui kiteytymistä. Kiteet otettiin talteen suodattamalla, ja pestiin eetterillä, pienellä etyyli-asetaattimäärällä ja eetterillä tässä mainitussa järjestyksessä. Tällä tavoin saatiin 10,738 g otsikossa mainittua yhdistettä kiteinä.

IR(cnf1, nujoli): 1790, 1746 NMR (100 MHz, dg-DMSO, 6) 1.92(s, CH5), 7.12 & 7.21 (jokainen s, CH & tiatsoliini 5-H), 7.42 (m, aromaattinen H).

Vertailuesimerkki 16e

Bentshydryyli-2-asetoksi-imino-2-(2-klooriasetyyli-imino-4-tiatsolin- 4-yyli)-asetaatin valmistus

Suspendoitiin 100 ml:aan N,N-dimetyyliformamidia 19,7 g bentshydryyli- 2-asetoksi-imlno-2-(2-imino-4-tiatsolin-4-yyli)asetaattia, minkä jälkeen lisättiin 6,02 g trietyyliamiinia. Jäähdytettiin jään avulla ja sekoitettiin, ja lisättiin tiputtaen 4,98 ml klooriasetyylikloridia. Seosta sekoitettiin vielä tässä lämpötilassa 10 minuuttia, ja tämän 78 6 /384 jälkeen huoneenlämmössä 20 minuuttia. Tämän jälkeen lisättiin tiputtaen 1,50 ml klooriasetyylikloridia, ja seosta sekoitettiin 20 minuuttia. Reaktioseos kaadettiin liuokseen, jossa oli 4,4 g natriumbikarbonaattia 200 ml:ssa vettä, ja uutettiin 500 ml:11a etyyliasetaattia kolmasti. Etyyliasetaattikerrokset koottiin, pestiin kahdesti 100 ml:11a natriumbikarbonaatin 1% vesiliuosta ja pestiin edelleen natrium-kloridin kyllästyneellä vesiliuoksella. Kuivattiin magnesiumsulfaatin avulla ja väri poistettiin aktiivihiilen avulla, mitkä molemmat käsittelyt suoritettiin samanaikaisesti. Suodattamisen jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla. Jäännökseen lisättiin 20 ml etyyliasetaattia, ja seoksen annettiin seistä. Muodostuneet kiteet otettiin talteen suodattamalla ja kuivattiin. Täten saatiin 12,7 g bentshydryyli-2-asetoksi-imino-2-(2-klooriasetyyli-imino-4-tiatsolin-4-yyli)asetaattia (syn-isomeeri). Tämä tuote sisälsi pienen määrän anti-isomeeriä, jota poistettiin seuraavalla tavalla.

liuotettiin 50 ml:aan tetrahydrofuraania 12,0 g edellisen kohdan mukaan saatuja raakoja kiteitä, minkä jälkeen lisättiin 100 ml etyyliasetaattia, ja suodatettiin seos. Suodos tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi, ja jäännökseen lisättiin 20 ml etyyliasetaattia. Muodostuneet kiteet otettiin talteen suodattamalla ja kuivattiin. Täten saatiin 8,142 g bentshydryyli-2-asetoksi-imino- 2-(2-klooriasetyyli-imino-4-tiatsolin-4-yyli)asetaattia (syn-isomeeri). IR(cm"1, nujoli): 1760, 1747, 1550 NMR(100 MHz, dg-EMSO, fc) 1.93(s, CHj), 4.41(s, CICHg)» 7.18(s, CH), 7.2-7.6(m, aromaattinen H), 7.90(s, tiatsoliini 5-H), 12.90(hr, s, NH)

Alkuaineanalyysi kaavalle C22H18G1N305S

laskettu C 55.90, H 3.84, N 8.90 saatu 0 56.19, H 3.83, N 8.84.

Vertailuesimerkki 16 f

Suspendoitiin 16,5 ml:aan anisolia 6,10 g bentshydryyli-2-asetoksi-imino-2-(2-klooriasetyyli-imino-4-tiatsolin-4-yyli)asetaattia (syn-isomeeri), jäähdytettiin jään avulla ja sekoitettiin, ja lisättiin tiputtaen 65,7 ml trifluorietikkahappoa. Seosta sekoitettiin tässä lämpötilassa 15 minuuttia, minkä jälkeen trifluorietikkahappo poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännökseen lisättiin n-heksaania, jolloin erottui öljymäistä tuotetta. Tämä tuote pestiin 79 673 8 4 perusteellisesti n-heksaanilla, minkä jälkeen n-heksaani poistettiin dekantoimalla. Tämä käsittely toistettiin vielä kerran. Öljymäiseen jäännökseen lisättiin eetteriä, minkä jälkeen erottui kiteistä jauhetta. Lisättiin pieni määrä eetteriä, minkä jälkeen kiteinen jauhe otettiin talteen suodattamalla, pestiin pienellä määrällä eetteriä ja kuivattiin. Täten saatiin 5,125 g 2-asetoksi-imino-2-(2-kloori-asetyyli-imino-4-tiatsolin-4-yyli)-etikkahappoa (syn-isomeeri). IR(cnf1, nujoli): 1792, 1694 NMR (100 MHz, dg-LMSO, 6): 2.22(s, CH^), 4.41(s, CICHg), 7.90(s, tiatsoliini 5-H), 12.95(hr. s, NH)

Alkuaineanalyysi kaavalle CnHoCBi20r-S

yö 55 laskettu C 35.56, H 2.64, N 13.75 saatu G 35.30, H 2.64, N 13.75

Claims (1)

1. 80 673 84 Patenttivaatimus Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisen 2-(2-imino-4-tiatso- liini-4-yyli)-2-hydroksi-iminoase tamido _7-3-( substituoitu metyyli )-3-kefeemi-4-karboksyylihappo-(syn)-isomeerin sekä tämän yhdisteen farmaseuttisesti hyväksyttävissä olevan suolan tai esterin valmistamiseksi, jonka yhdisteen kaava on: ώ-Ο-ΜΗ-τγ5') (I) 'Ό- jossa kaavassa Y on vety, hydroksvyli, asetoksi, karbamoyylioksi, kvaternäärinen ammonium, jonka kaava on σ jossa kaavassa Z on vety tai karbamovvli, tai typpipitoinen hetero-syklinen tioyhdiste, jonka kaava on N—9 H -R2 N—* . -sis^R2 f R1 N N N —N N 1 . -4.A,= . -O · R1 R1 * ύ - -SJ* i1 joissa kaavoissa R^- on vety, tai tähde, jonka kaava on 81 67384 -(CH2)nP jossa kaavassa n on kokonaisluku 1...3 ja P on vety, hydroksyyli, alkoksi (Ci_4) , alkyyli (C]_4)tio, asetyyliamino, guanidino, tähde, jonka kaava on -COOR4 (jossa kaavassa R4 on vety tai alkyyli(C]_4), tähde, jonka kaava on r5 -CON r6 (jossa kaavassa R5 ja R^ kumpikin on vety tai alkyyli (C1-.4) ), tai tähde, jonka kaava on R^ -N XRe (jossa kaavassa R3 ja R® tarkoittavat samaa kuin edellä määriteltiin), R2 on vety, amino, tr if luor imetyyl i , hydroksialkyyli(0χ_4)-amino, mono- tai di-alkyyli (<3χ_4) amino-alkyyli (<3χ_4) amino, asetoksi-alkyyli(C^_4) , karbamoyyli, tähde, jonka kaava on -NHCOOR7 (jossa kaavassa R7 on alkyyli(Οχ.4) ), tähde, jonka kaava on -S-(CH2)nQ (jossa kaavassa n on kokonaisluku 1...3 ja Q on karboksyyli, hydrok-syyli tai sulfo) tai tähde, jonka kaava on -(CH2)np (jossa kaavassa n ja P tarkoittavat samaa kuin edellä on määritelty), ja R3 on vety tai alkyyli(0χ_4), tunnettu siitä, että a) saatetaan syn-isomeerinen 7-(4-halogeeni-2-hydroksi-imino-3-okso-butyryyliamino)-3-(substituoitu metyyli)-3-kefeemi-4-karboksyylihap-pojohdannainen, jonka kaava on W-CH2CDC~aONH _ OOOH jossa kaavassa W on kloori tai bromi, ja Y tarkoittaa samaa kun edellä on määritelty, tai sen suola reagoimaan tiokarbamidin kanssa, b) saatetaan syn-isomeer inen 7-/~2-(2-imino-4-tiatsoliini-4-yyli)- 2-hydroksi-iminoasetamido^7-3-asyylioksime tyyl i) -3-ke f eemi-4-kar-boksyylihappojohdannainen, jonka kaava on 82 67384 ‘JljL .O-ODNH η— SNoh 0H OOOH jossa kaavassa M on asyylioksi, tai sen suola, reagoimaan veden, kvaternääristä ammoniumia, jonka kaava on -σ jossa Z tarkoittaa samaa kuin edellä, vastaavan amiinin tai tiolin, joka vastaa edellä määritellyn substituent in Y mukaista typpipitoista heterosyklistä tioyhdistettä, tai sen suolan kanssa, tai c) asyloidaan 7-aminokefalosporiinijohdannainen, jonka kaava on 0-»-'n/· CHjY OOOH jossa kaavassa Y tarkoittaa samaa kuin edellä on määritelty, tai sen suola saattamalla se reagoimaan asyloimisaineen kanssa, joka on johdettu syn-isomeerisestä 2-(4-tiatsoliini-4-yyli)-etikka-happojohdannaisesta, jonka kaava on HN.......C-OOOH (V) Sv ^OR9 jossa kaavassa RS on vety tai suojaryhmä, ja R^ on vety tai suoja-ryhmä, ja reaktiotuotteesta tarvittaessa lohkaistaan suojaryhmä, ja haluttaessa esteröidään reaktiotuote. 67384 83 Förfarande för framställning av farmaceutiskt användbar l-£ 2-(2-imino-4-tiazolin-4-yl) -2-hydroxi-iminoacetamido _7-3- ( substituerad metyl)-3~c efem-4-karboxylsyra- (syn) -isomer samt dess farmaceutiskt acceptabla salt och ester, vilken förening har formeln : i£—L o-ooHH η—f'*'] (I) ’O» V i vilken formel Y är väte, hydroxyl, acetoxi, karbamoyloxi, kvaternär ammonium, med formeln : -σ' i vilken formel Z är väte eller karbamoyl, eller en kvävehaltig heterocyklisk tioförening med formeln : N—H V -H2 H—M -*CT . -S-ts^H2 R1 N—N N_N N-, -Uv. . -u. R1 R1 --N N__^ r2 ® Ό «· -®CXr5 * 1 R' i vilka formler Rl är väte, eller en rest med formeln : -(CH2)np 84 67384 i vilken formel n är ett belt tal 1...3 och P Sr vSte, hydroxyl, alkoxi (Ci_4), alkyl(C^_4)tio, acetylamino, guanidino, en rest med formeln -COOR^ (i vilken formel R* Sr väte eller alkyl(Ci_4), en rest, med formeln r5 / -CON r6 (i vilken formel R^ och R*> vardera Sr vSte eller alkyl(C^_4) ), eller en rest, med formeln R5 -N/ V (i vilken formel R^ och R® betecknar sarnma som ovan definierats) R3 Mr vSte, amino, trifluormetyl, hydroxialkyl(0^-4) amino, mono- eller di-alkyl(C^_4)amino-alkyl(C^_4)amino, acetoxialkyl-(C1-4)f karbamoyl, en rest, med formeln -NHCOOR7 (i vilken formel R7 Sr alkyl(C]._4) ), en rest, med formeln -S-(CH2)nQ (i vilken formel n Mr ett helt tal 1...3 och Q Mr karboxyl, hydroxyl eller sulfo) eller en rest, med formeln -(CH2)nP (i vilken formel n och P betecknar sarnma som ovan definierats)och R3 Sr vSte eller alkyl (C1..4), kMnnetecknat dSrav att a) man bringar ett syn-isomert 7-(4-halogen-2-hydroxi-imino-3-oxo-butyrylamino)-3- (substituerad metyl) -3-cefem-4-karboxylsyr ader ivat med formeln *-oh2ooo-oonh __ Sv0H ο>“Κ^**ϊ (II) OOOH i vilken formel W Sr klor eller brom, och Y betecknar samma som ovan definierats, eller dess salt att reagera med en tiokarbamid, b) man bringar ett syn-isomert 2-(2-imino-4-tiazolin-4-yl)-2- hydroxi-iminoacetamido_7-3-acyloximetyl)-3-cefem-4-karboxylsyraderi-vat med formeln Sh v (III)