DK161081B

DK161081B - Syn-isomere 7-(4-halogen-2-hydroxy-imino-3-oxobutyrylamino)-3-(substitueret methyl)-3-cephem-4-carboxylsyrederivater til anvendelse som mellemprodukter samt salte og estere deraf

Info

Publication number: DK161081B
Application number: DK621189A
Authority: DK
Inventors: Mitsuo Numata; Isao Minamida; Susumu Tsushima
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Priority date: 1976-09-08
Filing date: 1989-12-08
Publication date: 1991-05-27
Also published as: DK159783C; FI67384C; ES470782A1; GR63635B; FR2408612A1; ATA442477A; US4264595A; FR2408612B1; AT352277B; ZA773775B; FI67384B; AU508551B2; DK270377A; NL7707129A; DK621189D0; SE7707176L; PT66735A; MX5198E; FI771951A7; CA1316171C

Description

i

DK 161081 B

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte syn-isomere 7-(4-halogen-2-hydroxy-imino-3-oxobutyryl-amino)-3-(substitueret methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre-5 derivater, som kan anvendes som mellemprodukter ved fremstillingen af 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-iminoacetamido ]-3-(substitueret methyl)-3-cephem- 4-carboxylsyre-(syn)-isomere med den almene formel HN c

VS

I i /s\ HN_U-C-CONH--( \ (I) s. Al

O \ CH Y

COOH

10 hvori Y betyder hydrogen, hydroxyl, acetoxy, carbamoyloxy, kvaternært ammonium med formlen hvori Z betyder hydrogen eller carbamoyl, eller Y betyder en nitrogenholdig heterocyclisk thiogruppe med formlen

N-N N-,-R2 N-N N-N

-s-t /' -s-JL

W XSX XSX \ 2 ΧΝ/χπ2

M K · , K

* E1 15

A

N-N N-·. -N N-A

—S- s. /v 91 ~S— , -S- N eller ~S— L . v o xr xr Nr XA xs ^rj hvori Ri betyder hydrogen eller en gruppe med formlen

DK 161081 B

2 -(CH2)nP, hvori n er 1, 2 eller 3, og P betyder hydrogen, hydroxyl, C(l-4)-alkoxy, C(1-4)-alkylthio, acetylamino, guanidino, en gruppe med formlen -COOR^, hvor betyder 5 hydrogen, C(1-4)-alkyl, en gruppe med formlen R5 -CON^ hvor r5 og R® hver for sig betyder hydrogen eller 10 C(1-4)-alkyl, eller R^ betyder en gruppe med formlen R5 <„ hvori r5 og R^ har den ovenfor angivne betydning, r2 15 betyder hydrogen, amino, trifluormethyl, hydroxy-C(l-4)-alkylamino, mono- eller di-(C(l-4)-alkylamino-C(l-4)-alkylamino, acetoxy-C(1-4)-alkyl, carbamoyl, en gruppe med formlen -NHCOOR?, hvori R? betyder C(1-4)-alkyl, en gruppe med formlen -S-(CH2)nQ/ hvor n er 1, 2 eller 3, og Q er 20 carboxyl, hydroxyl eller sulfo, eller en gruppe med formlen -(CH2)np/ hvori n og P har de ovenfor angivne betydninger, og R^ betyder hydrogen eller C( 1-4)-alkyl, eller farmaceutisk acceptable salte eller estere deraf.

Disse forbindelser har gunstig antimikrobiel virkning.

25 De syn-isomere 7-(4-halogen-2-hydroxy-imino-3-oxobutyryl-amino)-3-(substitueret methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre- derivater ifølge opfindelsen er ejendommelige ved, at de har formlen w-ch2coc-coijh-|_/S\ N. I (II) °v"V\ o Y ch9y

COOH

DK 161081 B

3 hvori W er chlor eller brom, og Y har den ovenfor anførte betydning, samt salte og estere deraf.

De heldige træk ved den antimikrobielle aktivitet af de 5 omhandlede forbindelser er især som beskrevet i det følgende. En foretrukken gruppe af de omhandlede forbindelser viser ikke kun en i praksis tilstrækkelig aktivitet mod gram-positive bakterier, herunder Staphylococcus aureus, men viser også aktivitet mod et bredt spektrum af 10 gram-negative bakterier, herunder Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Proteus morganii, Proteus rettgeri, Citrobacter freundii, Enterobacter cloacae og Serratia marcescens.

Disse overlegne karakteristika er udtalte i forbindelser-15 nes aktivitet mod de mutanter af de førnævnte bakterier, som danner β-lactamase (cephalosporinase).

Under henvisning til formlen I er Y hydrogen, hydroxyl, . acyloxy, carbamoyloxy, kvaternært ammonium eller nitrogen-holdig heterocyclisk thio.

20 Acyloxy er fortrinsvis en gruppe med formlen -OT, hvori T f.eks. kan være en aliphatisk eller aromatisk acylgruppe med 2-10 carbonatomer, såsom acetyl, propionyl og benzoyl, eller reaktive acylgrupper, såsom dem, der er nævnt i de tyske offentliggørelsesskrifter nr. 2.607.064 og nr.

25 2.619.243. Disse reaktive acylgrupper kan bl.a. være 3- oxobutyryl, mandelyl, 3-carboxypropionyl, 2-carboxy-benzoyl, 2-(N-carbethoxycarbamoyl)-benzoyl, 2-(N-carbeth-oxysulfamoyl)-benzoyl og 2-carboxy-3-(eller 6)-nitroben-zoyl. Skønt sådanne reaktive acylgrupper ikke bidrager så 30 meget til den antimikrobielle aktivitet som acetylgruppen, er de højreaktive over for vand, en amin svarende til det kvaternære ammonium eller en nitrogenholdig heterocyclisk thiol, som nævnt nedenfor.

Y er i betydningen kvaternært ammonium substitueret eller

DK 161081B

i usubstitueret pyridinium med den almene formel + *-» Jl hvori Z er hydrogen eller carbamoyl. Som kvaternært 5 ammonium foretrækkes pyridinium, som kan være substitueret med carbamoyl i 4-stillingen i pyridiniumringen. Når en omhandlet forbindelse indeholder en kvaternær ammoniumgruppe, kan den antage en betainstruktur, f.eks.

HN Sv \h coo ^ ^ 10 hvori Z har de ovenfor angivne betydninger.

Ved anvendelse til bekæmpelse af bakterier kan forbindelsen I anvendes som den frie amfoion eller i andre former, såsom farmaceutisk acceptable salte, f.eks. saltene med ikke-toksiske kationer, såsom natrium og kalium, saltene 15 af basiske aminosyrer, såsom arginin, ornithin, lysin og histidin; saltene af polyhydroxyalkylaminer, såsom N-methylglucamin, diethanolamin, triethanolamin, trishydr-oxymethylamino og trishydroxymethylaminomethan; saltene af uorganiske syrer, såsom saltsyre, svovlsyre, salpetersyre .

20 og phosphorsyre, og saltene af organiske syrer (f.eks. oxalsyre, fumarsyre og vinsyre). Forbindelsen I eller dens ovennævnte salte kan også anvendes som biologisk aktive esterderivater i 4-carboxylfunktionen, hvilke esterderivater vil bidrage til et forhøjet indhold i blodet og en 25 forøget varighed af virkningen. Som estere, der er nyttige

DK 161081B

5 til det ovennævnte formål, kan f.eks. nævnes alkoxy-(C(1-4))methylestere, alkoxy(C(1-4))ethylestere, alkyl-(C(l-4))-thiomethylestere, alkyl(C(1-4))carbonylmethyl-5 estere og alkoxy(C(1-4))carbonyloxyalkyl(C(1-4)estere (f.eks. alkoxy(C(1-4))carbonyloxymethyl). Nærmere bestemt kan esterne f.eks. være methoxyethylestere, ethoxymethyl-estere, isopropoxymethylestere, a-methoxyethylestere, a-ethoxyethylestere, ethylthiomethylestere, isopropylthio-10 methylestere, pivaloyloxymethylestere, o-acetoxybutyl-estere og l-(ethoxycarbonyloxy)ethylestere.

Forbindelserne med formlen I kan antage de to nedenstående tautomere former HN _ H2N g

Vs V\ h1_i, -C-CO-Ceph -> N-ί-C-CO-Ceph

Il "

N N

\ \

0H OH

(Thiazolinform) (Thiazolform) hvori Ceph betyder -NH- / :h2y

COOH

15 hvori Y har den ovenfor angivne betydning.

Strukturen af denne type forbindelser er undersøgt af mange forskere, og litteraturen henviser til thiazolin-formen i adskillige tilfælde [G.J. Kruger og G.Gafner,

Acta Cryst. B 27, 326 (1971) og J.M. Vandenbelt og L.

20 Doub, J. Am. Chem. Soc. 66, 1633, (1944) ] og thiazolformen i andre tilfælde [L.M. Werbel, Chem. & Ind. 1966, 1634].

DK 161081 B

6

Baseret på de forskellige bestemmelser må de omhandlede forbindelser med formlen I formodes overvejende at antage thiazolinformen, idet denne bestemte form stabiliseres ved 5 bidrag fra hydrogenbindingen, som vist herunder ΗΝγ\

M

Ceph hvori symbolet Ceph har den ovenfor angivne betydning. Som det er tilfældet ved enhver ligevægtsrelation af denne type, er den ovenstående ligevægt tilbøjelig til at 10 forskydes i den ene retning som følge af de forskellige betingelser, hvorunder de omhandlede forbindelser kan anbringes, såsom pH og polaritet af opløsningsmidlet, temperaturen, typen af substituenter og andre parametre.

De omhandlede forbindelser med formlen I kan derfor 15 betegnes ved ethvert af disse alternative systemer eller dertil svarende nomenklaturer. I denne beskrivelse og de tilhørende krav er alle de omhandlede forbindelser imidlertid betegnet som deres thiazolinformer. Den foreliggende opfindelse dækker alle de ovennævnte tautomere.

20 De omhandlede forbindelser med formlen I er aktive mod såvel gram-positive som gram-negative bakterier, som nævnt ovenfor. De kan, ligesom de kendte cephalosporiner, administreres sikkert i form af pulvere eller som opløsninger, suspensioner, salver eller andre doseringsformer, 25 som formuleres med fysiologisk acceptable bærere, grundlag eller excipienser på konventionel måde. De nævnte bærere, grundlag og excipienser omfatter vand, fysiologisk saltopløsning til injektion eller opløsning, og stivelser og lactose til pulvere. Blandt disse foretrækkes fysiologisk

DK 161081 B

7 saltopløsning.

De omhandlede forbindelser med formlen I kan f.eks. anvendes som sikre lægemidler til forebyggelse eller 5 terapi af infektionssygdomme, som forårsages af bakterier, herunder betændelsessygdomme, luftvejsinfektioner, galdegangsinfektioner, tarminfektioner, urinrørsinfektioner og gynæko-obstetriske infektioner. Værtsorganismerne, hvortil forbindelserne skal administreres, omfatter mennesker og 10 varmblodede dyr, herunder rotter, mus, hunde og heste.

Til terapien af de ovennævnte sygdomme, f.eks. urinrørsinfektionerne, administreres de følgende forbindelser, der er valgt som eksempler blandt de øvrige omhandlede slutprodukter, fortrinsvis intramuskulært eller intravenøst i 15 en daglig dosis på ca. 1 til 20 mg pr. kg legemsvægt for voksne mennesker, delt i 3 til 4 doser pr. dag.

. Natrium-7-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido ]-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[ 2-(2-imino-4-thiazolin~4-yl)-2-hydroxyimino-20 acetamido ]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido ]-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), 25 natrium-7-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido ]-(l-methyltetrazol-5-yl)-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), 7-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido ]- 3-[l-(2-N,N-dimethylaminoethyl)tetrazol-5-yl ]-thiomethyl-30 3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer), natrium-7-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido ]-3-[l-(3-N,N-dimethylaminopropyl)tetrazol-5-yl ]-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-35 acetamido ]-3-(l-carbamoylmethyltetrazol-5-yl)thiomethyl-3-

DK 161081B

8 cephem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido ]-3-[ l-(2-hydroxyethyl)tetrazol-5-yl ]-3-cephem-4-5 carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido ]-3-(l,3,4-thiadiazol-2-yl)thiomethy1-3-cephera-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-10 acetamido ]-3-(2-methyl-l,3,4-thiadiazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), 7-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido ]- 3-[2-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-l,3,4-thiadiazol-5-yl ]-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer), 15 natrium-7-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino- acetamido ]-3-(2-hydroxymethyl-1,3,4-thiadiazol-5-yl)-thio-methyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido ]-3-(2-N,N-dimethylcarbamoylmethyl-1,3,4-thiadi-20 azol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido ]-3-[ 2-(2-hydroxyethylthio-l,3,4-thiadiazol-5-yl ]thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), dinatrium-7-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-25 acetamido ]-3-(2-carboxymethyl-l,3,4-thiadiazol-5-yl)-thio-methyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), 7-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino7 acetamido ]-3-(3-methyl-l,2,4-thiadiazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer), 30 natrium-7-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido ]-3-(1,2,3-triazol-4-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido ]-3-(4-methyl-l,2,4-triazol-3-yl)thiomethyl-3-35 cephem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido ]-3-(3,4-dimethyl-l,2,4-triazol-5-yl)thiomethyl--3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer),

DK 161081B

9 natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido ]-3-(3-hydroxymethyl-4-methyl-l,2,4-triazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), 5 natrium-7-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido ]-3-(2-methyl-l,3,4-oxadiazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), dinatrium-7-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido ]-3-(4-carboxymethylthiazol-2-yl)thiomethyl-3-10 cephem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido ]-3-(2-methoxymethyl-l,3,4-thiadiazol-5-yl)-thio-methyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-15 acetamido ]-3-[ 2-(2-hydroxyethyl)-l,3,4-thiadiazol-5-yl ]-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido ]-3-(2-ethoxycarbonylmethyl-l,3,4-thiadizol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer).

20 På grund af deres antibakterielle egenskaber kan de omhandlede forbindelser med formlen I anvendes som antiinfektionsmidler eller som desinfektionsmidler til fjernelse af bakterier, herunder de oven- eller nedennævnte bakterier fra kirurgiske instrumenter eller hospitals-25 værelser.

Til dette formål anbringes f.eks. kirurgiske instrumenter i 2 dage i en vandig opløsning indeholdende 1000 /ig/ml af en af de omhandlede forbindelser.

Med hensyn til de antibakterielle egenskaber har forbin-30 delsen I og et salt deraf højere antibakterielle aktiviteter end en ester af forbindelsen I som sådan. Imidlertid hydrolyseres esteren, f.eks. i værtens levende væv, og omdannes til forbindelsen I eller et salt deraf.

Forbindelsen I eller et farmaceutisk acceptabelt salt

DK 161081 B

10 eller en ester deraf fremstilles ved, at man på i og for sig kendt måde omsætter en forbindelse ifølge opfindelsen med formlen

S

w-a^coc-cotm-,-/ N (ΪΙ) ' s \>h 0)-γ\„2Υ

COOH

hvori W er chlor eller brom, og Y har den ovenfor angivne betydning, eller et salt eller en ester deraf med thio-urinstof.

Saltene af forbindelserne II omfatter syreadditionssalte 10 (f.eks. de salt-, svovl- og salpetersure salte) med den basiske funktion i forbindelsen II og baseadditionssalte (f.eks. natrium-, kalium-, pyridin- og triethylamin-saltene) med den sure funktion i forbindelsen II. Esterne af forbindelsen II er sådanne, som svarer til de 15 ovennævnte estere af forbindelserne I.

Mængden af thiourinstof i forhold til forbindelsen II eller et salt eller en ester deraf er 1,0 til 5,0 mol pr. mol af forbindelsen II, dens salt eller dens ester. Reaktionen udføres normalt ved at blande forbindelsen II, 20 dens salt eller dens ester med thiourinstof ved en temperatur på 0 til 80°C. Reaktionen udføres fortrinsvis i et opløsningsmiddel. Opløsningsmidlet er ønskeligt et opløsningsmiddel, der ikke interfererer med reaktionen.

Med fordel anvendes fortrinsvis et af de såkaldte polære 25 aprote opløsningsmidler, såsom dimethylformamid, dimethylacetamid, dimethylsulfoxid, acetonitril og hexa-methylphosphoramid, eller en blanding af disse. Reaktionstiden varierer med typen af udgangsmaterialet, reaktionstemperaturen, typen af opløsningsmidlet eller 30 andre reaktionsbetingelser. Reaktionen fuldendes imidler-

XI

DK 161081 B

andre reaktionsbetingelser. Reaktionen fuldendes imidlertid i løbet af 0,5 time til 3 dage.

Når slutproduktet i forbindelsen I fremstilles i form af 5 den frie syre, kan det omdannes til et farmaceutisk acceptabelt salt deraf ved en i og for sig kendt konventionel fremgangsmåde.

Når det omhandlede slutprodukt opnås i form af et salt, kan det omdannes til den frie form eller ethvert andet 10 salt ved en i og for sig velkendt fremgangsmåde.

Når det omhandlede slutprodukt opnås i form af en fri carboxylsyre eller dens salt i 4-stillingen, kan det forestres til en ester ved en konventionel fremgangsmåde, idet typen af esteren er detaljeret defineret i det oven-15 stående. Nærmere bestemt fremstilles esteren ved, at man •omsætter en forbindelse I eller et salt eller et reaktivt . derivat deraf med en forbindelse med formlen HO-R^ (VI) hvori r!0 er en estergruppe eller et reaktivt derivat 20 deraf. Typen af saltet af forbindelsen I kan f.eks. være den samme som af forbindelsen II, og typen af det reaktive derivat af forbindelsen I er den samme som af forbindelsen V. Det reaktive derivat af forbindelsen VI kan f.eks. være en forbindelse med formlen 25 Hal-RiO' (VI') hvori Hal er halogen, og R^-O’ er alkoxy(C( 1-4))-methyl, alkoxy(C(1-4))-ethyl, alkyl(C(1-4))thiomethyl, alkyl- (C(1-4))carbonyloxymethyl eller alkoxy(C(l-4))carbonyl-oxyalkyl(C(l-4)). Eksempler på disse grupper er detaljeret 30 omtalt i det ovenstående med henvisning til forbindelsen I.

Symbolet Hal betyder chlor, fluor, brom eller iod, og Hal er fortrinsvis iod eller brom.

DK 161081 B

12 Således kan forbindelsen med formlen VI' eksempelvis være 5 methoxymethylchlorid, methylthiomethylchlorid, chlormeth-ylacetat, brommethylacetat, brommethylpivalat, iodmethyl-pivalat eller iodmethylethoxycarbonat.

Når forbindelsen I anvendes i den form med en fri carbox-ylgruppe i 4-stillingen, foretrækkes det at udføre 10 reaktionen under tilstedeværelse af en base. Basen kan eksempelvis være en uorganisk base, såsom natriumhydrogen-carbonat, kaliumhydrogencarbonat, lithiumcarbonat, natri-umcarbonat og kaliumcarbonat, og en organisk base, såsom dicyclohexylamin, morpholin, N-ethylanilin, N,N-diethyl-15 anilin, N-methylmorpholin, pyridin og triethylamin.

Reaktionen kan udføres i et opløsningsmiddel, såsom aceto-nitril, N,N-dimethylformamid, Ν,Ν-dimethylacetamid, N,N-dimethylformamid, dichlormethan, chloroform, dimethylsulf-oxid, diethylether, tetrahydrofuran, acetone, methylethyl-20 keton og flydende svovltrioxid. Blandt disse foretrækkes dimethylformamid, acetone, acetonitril og flydende svovltrioxid.

Mængden af base er sædvanligvis 1 ækvivalent i forhold til forbindelsen I eller dens salt.

25 Reaktionen udføres fortrinsvis ved en temperatur på mellem -20 og 20°C. Når flydende svovltrioxid anvendes som opløsningsmiddel, er reaktionstemperaturen fortrinsvis en temperatur i området fra -20 til -10°C.

Reaktionstiden varierer bl.a. med typen af udgangsmateri-30 alet, reaktionstemperaturen og typen af opløsningsmidlet, men er sædvanligvis inden for et område fra 10 minutter

DK 161081 B

13 til 120 timer.

Efter enhver af de reaktioner, som giver de omhandlede forbindelser, isoleres den ønskede forbindelse fra reak-5 tionsblandingen ved i og for sig kendte fremgangsmåder. De omhandlede forbindelser kan renses ved kendte fremgangsmåder. Sådanne fremgangsmåder kan eksempelvis være ekstraktion, koncentration ved pH-indstilling, krystallisation, omkrystallisation og kromatografi.

10 Den omhandlede forbindelse I eller et salt eller en ester deraf har en hydroxyl gruppe i syn-konfiguration til acet-amidgruppen (dvs. -C0NH-) i 7-stillingen. Imidlertid er der tilfælde, hvor dannelsen af forbindelsen I ledsages af dannelsen af den anti-isomere med formlen

HN Q

V\

T i A

15 HN -I -C-CONH--/ \ s _] 1 (i'>

Ht/ /

COOH

hvori Y har den ovenfor angivne betydning, eller et tilsvarende salt eller en ester deraf, selv om kun den tilsvarende syn-isomere udgangsforbindelse er anvendt. Med ved den fremgangsmåde, der omfatter reaktion mellem 1) 20 forbindelsen II eller et salt eller en ester deraf og 2) thiourinstof, hvori udgangsmaterialet II eller et salt eller en ester deraf er en i det væsentlige ren syn-isomer, overstiger udbyttet af anti-isomere I' ikke 10% af det af forbindelsen I.

25 Når den syn-isomere udgangsforbindelse II anvendes i kombination med den tilsvarende anti-isomere forbindelse, indeholder reaktionsblandingen naturligvis forbindelsen I

DK 161081B

14 og 1' (dvs. at den er en syn- og anti-isomerblanding).

Dette er selvfølgelig også tilfældet, når et salt eller en ester af forbindelsen II anvendes som udgangsmateriale.

5 Den omhandlede syn-isomer I eller et salt eller en ester deraf adskilles eller isoleres let fra blandingen ved velkendte fremgangsmåder, såsom kromatografi og fraktioneret krystallisation.

Forbindelsen II eller et salt eller en ester deraf frem-10 stilles efter det følgende skema, f.eks. ved de i de japanske offentliggørelseskrifter nr. 95293/1975, nr. 11093/1975 og nr. 56487/1976 eller i japansk patentansøgning nr. 1274/1976 beskrevne fremgangsmåder eller ved enhver fremgangsmåde, som ligner en af disse.

^r-A

COOH

(IX) W2 CH2=C-CH2 WCH2COCH2COW <- o-c=o (VIII) (VII) W-CH2COCH2CONH-.-/ \ )/ Νγ^0Η2Υ

COOH

(X) ^ ^ nitroseringsmiddel W-CH2COCCONH-j-/ \ \>H /-\j\

O T CH.Y

COOH

(II)

DK 161081 B

15 hvori hvert af symbolerne W og Y har den ovenfor angivne betydning.

Først omsættes brom eller chlor repræsenteret af med 5 diketen, f.eks. med formlen VII, idet mængden af brom eller chlor er ækvimolær med diketenet. Derefter omsættes den således fremstillede forbindelse VIII med forbindelsen IX eller et salt eller en ester deraf ved en i og for sig kendt fremgangsmåde under dannelse af forbindelsen X eller 10 et salt eller en ester deraf. Forbindelsen IX eller et salt eller en ester deraf kan fremstilles ved enhver kendt fremgangsmåde, f.eks. ved den fremgangsmåde, der er beskrevet i japansk offentliggørelsesskrift nr. 11782/1976 og de tyske offentliggørelsesskrifter nr. P 2.607.064 og 15 nr. P 2.619.243 eller enhver anden dermed analog fremgangsmåde. Således kan forbindelsen IX eller et salt eller en ester deraf opnås ved omdannelse af den 3-stiliede substituent i en 7-acylamino-3-acetoxymethyl-3-cephem- 4-carboxylsyre eller 7-acy1amino-3-hydroxymethyl-3-cephem-20 4-carboxylsyre, eller et salt eller en ester deraf til en ønsket -CHtøY-gruppe og derefter fjernelse af 7-acylgrup-pen, eller et alternativt ved at underkaste en 7-amino-3-aktiveret acyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (hvis aktiverede acyloxygruppe er beskrevet ovenfor) eller et 25 salt deraf en direkte nucleofil substitution med vand, en amin svarende til det kvaternære ammonium eller den nitro-genholdige heterocycliske thiol.

Derefter omsættes forbindelsen X eller et salt eller en ester deraf med et nitroseringsmiddel, hvorved der opnås 30 forbindelsen II, eller et salt eller en ester deraf. Med hensyn til saltet af forbindelsen X, hvor der f.eks. er en basisk gruppe til stede i substituenten Y i forbindelsen X (f.eks. hvor Y er l-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-lH-tetr-azol-5-ylthio), kan forbindelsen X omsættes som et salt af 35 denne basiske funktion med en syre, f.eks. et salt af en mineralsyre (f.eks. saltsyre, svovlsyre eller

DK 161081 B

16 pliosphorsyre) eller et salt af en organisk syre (f.eks. oxalsyre eller p-toluensulfonsyre). Hvor der er en stærkt sur gruppe til stede i substituenten Y i forbindelsen X 5 (f.eks. hvor Y er 2-(2-sulfoethylamino)-1,3,4-thiadiazol- 5-ylthio), kan forbindelsen X omsættes som et uorganisk eller et organisk salt af denne sure funktion, f.eks. et salt med et alkalimetal eller et jordalkalimetal (f.eks. lithium, natrium eller kalium) eller et salt af en 10 organisk base (f.eks. triethylaminsaltet).

Som nitroseringsmiddel kan der normalt anvendes et middel valgt blandt salpetersyrlingestere, såsom methylnitrit, ethylnitrit og amylnitrit, og nitrosylchlorid. Salpetersyrling kan anvendes, som det dannes i reaktionssystemet 15 ved reaktion mellem et alkalimetalnitrit og en syre, f.eks. saltsyre eller eddikesyre.

Nitroseringsreaktionen, dvs. reaktionen mellem forbindelsen X eller et salt eller en ester deraf og nitroserings-midlet, udføres fortrinsvis i et opløsningsmiddel. Ethvert 20 opløsningsmiddel, som ikke påvirker reaktionen, kan anven des. Normalt anvendes dioxan, acetonitril, tetrahydro-furan, vand, eddikesyre eller en passende blanding af sådanne opløsningsmidler. Denne reaktion fremskyndes ved tilstedeværelse af en syre. Mest hensigtsmæssigt er denne 25 syre saltsyre eller eddikesyre. Mængden af syren er 1 mol eller mere pr. mol af forbindelsen I. Normalt udføres nitroseringsreaktionen fortrinsvis ved stuetemperatur (25-35°C) eller under afkøling eller svag opvarmning. Således udføres reaktionen ved en temperatur på mellem -20 30 og 50°C.

Ved denne nitroseringsreaktion kan hydroximforbindelsen II med syn-konfiguration med hensyn til acylamidgruppen opnås i højt udbytte. Under visse omstændigheder opnås en stereoisomer med anti-konfiguration, som vist i formlen 35 II' i noget mindre mængde, sammen med den førnævnte for-

DK 161081 B

17 bindeIse II, men i mange tilfælde overstiger udbyttet af den stereoisomere II’ ikke 10% af mængden af II.

WCHoC0-C-C0NH- _/ 2 » (II') N ·κτ

*/ o>“VV

U i CH,Y

COOH " 5 hvori de anvendte symboler har de ovenfor angivne betydninger .

Dette er et særligt fordelagtigt træk ved den foreliggende opfindelse, som er rettet mod fremstillingen af en forbindelse I, som har syn-konfiguration ligesom forbindelsen 10 II. Den således opnåede forbindelse II kan isoleres og renses ved konventionelle fremgangsmåder, såsom opløsningsmiddelekstraktion, pH-indstilling, faseoverførsel, krystallisation, omkrystallisation og kromatografi.

Den nitrogenholdige heterocycliske thiol H-Y, hvor Y 15 betyder en nitrogenholdig, heterocyclisk thiogruppe som angivet ovenfor, kan fremstilles 1) ved de i og for sig kendte fremgangsmåder, som f.eks. er beskrevet i kapitel 5 i Heterocyclic Chemistry (A.R. Katritzky og J.M. Lagowsky,

John Wiley and Sons, 1960), kapitel 1 i Heterocyclic 20 Compunds, Vol. 8 (R.C. Elderfield, John Wiley and Sons, 1967), Advances in Heterocyclic Chemistry, Vol. 9 (A.R. Katritzky og A.J. Boulton, Academic Press, 1968, side 165-209, og Dai Yuki Kagaku (Munio Kotake (red.), Asakura Shoten, Vol. 15 eller ved fremgangsmåder, som er analoge 25 med disse kendte fremgangsmåder, eller 2) ved at underkaste en nitrogenholdig heterocyclisk thiol, enten kendt eller fremstillet på enhver af de ovennævnte fremgangsmåder 1), en i og for sig kendt kemisk modifikationsreaktion eller omsætning af en eller flere funktionelle grup-30 per end thiolgruppen.

DK 161081B

i

18 I

Den foreliggende opfindelse belyses i yderligere detaljer nedenfor med henvisning til eksemplerne; det må dog forstås, at eksemplerne kun tjener til belysning af 5 opfindelsen og ikke skal forstås som begrænsninger af denne, og at der inden for opfindelsens omfang kan benyttes mange variationer.

Procenter er vægt-%, medmindre andet er angivet. De angivne NMR-spektre blev målt under anvendelse af et 10 Varian Model XL-100A (100 MHz) eller T-60 (60 MHz) spektrometer med tetramethylsilan som intern eller ekstern reference, og alle δ-værdier er i ppm. Symbolet s står for en singlet, d en dublet, dd er dobbelt dublet, t en triplet, q en kvartet, m en multiplet og J en koblings-15 konstant.

Forsøg

De nedenstående tabeller 1 og 2 viser de minimale inhibi-toriske koncentrationer (MIC) af nogle typiske forbindelser I, der kan fremstilles ud fra mellemprodukterne 20 ifølge opfindelsen, under henvisning til fremstillingseksemplerne, mod forskellige bakterier, i sammenligning med de sammenlignelige MIC-data for nogle af de cephalo-sporiner, som er kommercielt tilgængelige og klinisk accepterede (f.eks. The New England Journal of Medicine 25 294, 24 (1976) og Journal of Pharmaceutical Science 64, 1899 (1975)), dvs.

cephalotin [ natrium-7-(2-thienylacetamido)-3-acetoxymeth-yl-3-cephem-4-carboxylat ], cephaloridin [7-(2-thienylacetamido)-3-(1-pyridyl)-methyl-30 3-cephem-4-carboxylsyre-betain ] og cefazolin [ natrium-7-(lH-tetrazol-l-yl)-acetamido-3-(2-methyl-1,3,4-thiadiazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carb-oxylat ].

19

DK 161081B

De terapeutiske virkninger af adskillige repræsentative forbindelser I og af cephaloridin på inficerede mus er også vist i tabellerne.

5 a) Minimale inhibitoriske koncentrationer (tabel 1 og 2) Fremgangsmåde: Agar seriefortynding Medium: TSA

Inoculums størrelse: 107/ml.

20

DK 161081 B

i tn ιο σι 10 <d <u m ro tn c u in ^ o o o » » »

H li k (J « O O O i-H O H

O) -H id (U Z rH rHH

M +) S O B Λ Λ Λ i tn in æ id <u oo oo o- m M o to ^ o oo--» n <d M G O iQ o o o ιο o og

Q) -ri td ti) H OO i—! i—I i—I i—I

CO 4-> S O H rH -Λ Λ Λ in 0) Ο (d co m in o in

it. i-Hro in moiOHO

ΛΗ SCI - - - ' ' ' (DQ) 01 Ο δ m OO 10 o o o

H Tl Id c g ΰ Η H

W tn .-h ft • 0) oo *a<

II I id ID 10 ID rH CM CN

rQ ·—i s -Ή m mmooo Φ0) tu c - ·. ^ k ^ k

MH-HidCO&O Η HHO OO

οι ϋ inn ftg Q vl

•H

Μ I

0) -H

+J U

X <u o oo σι id ί id ή οο-ο Λϋ-ΗΗΓ- O O O - -- .1/j.Coi ο ο in ο ο ο 0) Η Ο Ο Ε-ι Η ι-Ι > Λ

•ri I

4J -Η id C oo oo ^

Dia) rH O 10 10 i—I i—I OI

H <U Æl Id Ή H H ininooo C O *r| i—I i—I - ' ' ' ' '

Η Ι01ΛΟΙ O ι-H rH O O O

<D β w o o O v I v I

Λ Ιβ Π) c

Eh 15 ·Η oo

I rH I

•H 0 U sf k o 4 otoooinin tu in rH in o o o iCitJK - » » » » » ϋ-rlh) OO O rH o o o

tn x H rH

H O S

i o

rH

>i in tn Λ S S o oi to m to co ftCJtuo o o in o r- o- idOM^i - » 0) 4-> O S 00 O O rH o o o > ra o id ri

•H •P

-ri Μ I

tn tu o

0 *r| rH

ft c >i t n t n ituÆSC o ni oi di oi æ £5 4-1 ft O CD ft OO OOOOO- id ϋ koi - -

Mid-POSO O O O O O O

U X3 co o id oo 0) C O 10 tn -H in oo oi

rH x C

-U tu -C I -H rH I-H 1-H

(u-d o o Hiuiutu > G rH i—I 0 ft ft ft «.-H ididCNgse

Jh Λ ί ί-Η I« Hl 1) dl ft m ft ft Ό m in in in 4H0 (U tU -Η II ΐ M Al <MH ΟϋΜΟΗΗΗ

DK 161081 B

21 Ή *i“i I P Ό CD „ _ _

0 0) d O O O O

μ 4J ^ O O O f—1 H 1—I

4J O 0) H O O O * - »

H (ti P 3 H HHOOO

CJ Λ Η U Λ A Λ Η 1 <u rr) m in m in o i c » O o o ρ +) ρ σι 1n o <n - * a·

+100)01 CN in H O O O

H «Ui 2 o λ m o * 0) 0 p iti <n in co p 0) u 00 cn m in <D +J (d CN o O O ' ' '

+) O 0 H O O O ID H CN

0 « H 2 H HH H

Bi 08 A Λ Λ Η ΜΗ ø 0) η Ο) Οι η cn m cn +)-01-^ ο ο ο ο ο ο 0 +) ^ ο ο ο * * * +40)13 Η Η Η Ο Ο Ο

+4 ft Η Ο Λ A

α; Η +4 Η

CN 0) Μ +4 CN CN CN

+J +3 0) ID CD ΗΗΗ η α; 0) en oo m m cn ο ο ο

•Ο) rd-P-Pm ' * „C

+3 +3 ο -Ρ m η Η ο ο ο ο

(d Μ ρ ο Ε ν I ν I ν I ν I

ΕΗ 0) Ρι Η Εη > •Η +) η οο id in ή co

Cn ø G Η ^ ^ _ Φ α) ιβ ro ο cn οι c+jtn ο ο ο cn ο· ro 1 ΟΡΟ ο ο ο ·* - * S Μ Ο ί+ Η ΗΗΟΟΟ

(3 PU Β Η Λ A

Η Ο m 1 ø η σι _ j) fl tn η inminom

+)ld Γ0 H CNCNOHO

0 H M 'J}1 - ' - ' ' '

p Η H & ro id CD O O O

ft S ri O

w ω ·η

ø p ro ID

a) td H in cn +> Cn "tf ο Ο Ο > “

0 Η "Cf ο OOCNCDO

Η I) 2 Η ΗΗΗ ιη p4 > Ο ΑΛΑ Η) ιη η ρ Ρ 0) id cd mromino

+)0100 in CNHOOH

OHOCO " - ^ A- _A ,A

p P &4 Ol H CD Γ0 Ο Ο O

0) > H ro

0) 0 O CD

0) HI in CN CN

H +h Η P

+JQ; +) p ΗΠΗΗ 0)03 00 H 0) Q) 0) >q HH OOiOiPl

•&H rd Of NSSS

PD) 0!Λ cd 0) <1) 0) η,ρ pi PiGHinincn +40 3) 0) H 0) A! Å! Ai c+l O U Ό Ο Η H W ' b) Terapeutiske virkninger på inficerede mus (tabel 3)

Forsøgsdyr: Hanmus, ICR/SLC

DK 161081B

22

En gruppe på fem dyr anvendtes pr. forbindelse.

5 Infektionsvej: Intraperitonealt

Inficerende baketerier: Escherichia coli 0-111

Observationens varighed: 7 dage

Administrationsmåde: Forbindelsen, som skulle af prøves (1 mg, 10 mg, 100 mg eller 200 mg), blev opløst i 10 steril saltopløsning (100 ml), og 0,2 ml opløsning administreredes subkutant (s.c.) som en enkelt dosis umiddelbart efter infektion. To gange fortyndinger af hver opløsning blev administreret til fem grupper på 5 mus.

Tabel 3 15 Afprøvet forbindelse Administrationsvej ED50 mg/kg

Eksempel 5 s.c. 0,033

Eksempel 20 s.c. 0,028

Cephaloridin s.c. 2,60 20 -:-

Af de følgende eksempler illustrerer eksemplerne 1, 3, 8, 10, 19, 21, 24 og 25 fremstillingen af forbindelserne med formlen II ifølge opfindelsen, medens eksemplerne 2, 4, 9, 11, 20, 22, 24 og 26 illustrerer deres omdannelse til 25 forbindelser med formlen I, og referenceeksemplerne illustrerer fremstillingen af udgangsforbindelser.

Eksempel 1

Fremstilling af 7-(4-brom-2-hydroxyimino-3-oxobutyrylami-no)-3-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer) 30 Til en opløsning af 3,7 g 7-(4-brom-3-oxobutyrylamino)- 3-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre i 37 ml eddikesyre sættes

DK 161081 B

23 dråbevis under omrøring og isafkøling en opløsning af 0,953 g natriumnitrit i 4 ml vand i løbet af 1 time. Derefter omrøres blandingen ved stuetemperatur i 5 yderligere 3 timer. Reaktionsblandingen omrystes med 100 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid og 200 ml ethylacetat, og det organiske lag skilles fra, vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, tørres og koncentreres. Til remanensen sættes ethylether, og 10 blandingen omrøres. Det fremkomne pulver isoleres ved filtrering. Ved denne fremgangsmåde opnås 1,34 g af titelforbindelsen.

IR(KBr, cm"1): 1770, 1695, 1660 NMR(100 MHz, d6-DMS0, δ): 2,02 (s, 3-CH3), 3,46 (ABq, J=19 15 Hz, 2-CH2), 4,59 (s, BrCH2-), 5,08 (d, J=5 Hz, 6-H), 5,69 (dd, J=5 & 8 Hz, 7-H), 9,22 (d, J=8 Hz, CONH), 13,07 (s, =NOH)

Elementæranalyse for C^H^BrNøOgS:

Beregnet: C 35,48 H 2,98 N 10,34 20 Fundet: C 34,91 H 3,25 N 10,14

Eksempel 2

Fremstilling af natrium-7-Γ2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido ]-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer)

25 I 1,2 ml dimethylacetamid opløses 0,122 g 7-(4-brom-2-hydroxyimino-3-oxobutyrylamino)-3-methyl-3-cephem-4-carb-oxylsyre (syn-isomer) og 0,03 g thiourinstof, og den blandede opløsning omrøres ved stuetemperatur i 1,5 timer. Reaktionsblandingen omrøres med 10 ml ethylether, og 30 supernatanten dekanteres fra, hvorefter der tilsættes 10 ml ethylether. Den ovennævnte fremgangsmåde gentages to gange. Det fremkomne pulver opsamles ved filtrering og opløses i 10 ml 5%'s natriumcarbonatopløsning. Opløsningen søjlekromatograferes på polystyrenharpiks ("Amberlite 35 XAD-2"®, Rohm & Haas Co.) og dextrangel ("SEPHADEX

DK 161081 B

24 LH-20"®, Pharmacia) i den nævnte rækkefølge, idet der elueres med vand. Fraktionerne, som indeholdt ønskede produkt, blev samles og lyofiliseret. Ved denne frem-5 gangsmåde opnåedes 0,09 g af titelforbindelsen.

IR(KBr, cm-1): 1760, 1590 NMR(100 MHz, dg-DMSO + D20, δ): 1,93 (s, 3-CH2), 3,25 (ABq, J=18Hz, 2-CH2), 4,96 (d, J=5Hz, 6H), 5,57 (d, J=5Hz, 7H), 6,71 (s, thiazolin, 5H).

10 Elementæranalyse for Ci3Hi2N505S2Na*3H20:

Beregnet: C 33,99 H 3,95 N 15,24

Fundet: C 34,24 H 4,15 N 15,13

Eksempel 3

Fremstilling af 7-(4-chlor-2-hydroxyimino-3-oxobutyryl-15 amino)-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (synis omer )

Til en blanding af 22,4 g (57,4 mmol) 7-(4-chlor-3-oxo-butyrylamino)-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre og 200 ml eddikesyre sættes dråbevis under omrøring og 20 isafkøling en opløsning af 5,5 g (79,7 mmol) natriumnitrit i 20 ml vand i løbet af 15 minutter. Isbadet fjernes, og efter at blandingen har nået stuetemperatur, omrøres den i 3 1/2 time. Til reaktionsblandingen sættes 600 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, og blandingen 25 ekstraheres fire gange med 250 ml-portioner af ethylace-tat. Ekstrakterne samles, vaskes med vand, tørres og koncentreres under reduceret tryk. Ovenstående fremgangsmåde giver 14,31 g krystaller af titelforbindelsen.

IR(KBr, cm-1): 1790 30 NMR( 100 MHz, dg-DMSO, δ): 2,05 (s, CH3C0), 3,43 og 3,66 (ABq, J=18Hz, 2-CH2), 4,70 og 5,02 (ABq, J=13 Hz, 3-CH2), 4,80 (x, C1CH2), 5,15 (d, J=5Hz, 6H), 5,79 (dd, J=5 og 8Hz, 7H), 9,28 (d, J=8Hz, CONH), 13,17 (s, =N-0H).

Elementæranalyse for Cj^H^ClNgOgS · H20:

DK 161081B

25

Beregnet: C 38,41 H 3,68 N 9,60

Fundet: C 38,53 H 3,31 N 9,32

Eksempel 4 5 Fremstilling af 7-Γ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-imino-acetamido 1-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-hydrochlorid (syn-isomer) I 50 ml dimethylacetamid opløses 10,4 g (24,9 mmol) 7- (4-chlor-2-hydroxYimino-3-oxobutyrylami.no) -3-acetoxy-10 methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer) og 1,89 g thiourinstof, og opløsningen omrøres ved stuetemperatur i 3 1/5 time. Opløsningsmidlet destilleres af under reduceret tryk, og remanensen omrøres med ethylether. Super-natanten dekanteres fra. Ethylacetat sættes til remanen-15 sen, og supernatanten kasseres. En sådan blanding af remanensen med ethylether og med ethylacetat udføres derefter fire gange. Det fremkomne pulver isoleres ved vakuumfiltrering og tørres. Ved denne fremgangsmåde opnås titelforbindelsen.

20 IR(KBr, cm-1): 1781 NMR( 100 MHz, dg-DMSO, δ): 2,04 (s, CH3C0), 3,45 og 3,68 (ABq, J=18Hz, 2-(CH2), 4,72 og 5,02 (ABq, J=13Hz, 3-CH2), 5,19 (d, J=5Hz, 6H), 5,79 (dd, J=5 og 8Hz, 7H), 6,88 (s, thiazolin, 5H), 8,8 (br. s, H2N+= og thiazolin NH), 9,64 25 (d, J=8Hz, CONH), 12,41 (br. s, =N-0H).

Eksempel 5

Fremstilling af natrium-7-Γ2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido 1-3-acetoxymethy1-3-cephem-4-carb-oxylat (syn-isomer) 30 I 1 ml dimethylacetamid opløses 0,209 g 7-(4-chlor-2-hydr-oxyimino-3-oxobutyrylamino)-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer) og 0,038 g thiourinstof, og den

DK 161081B

26 blandede opløsning omrøres ved stuetemperatur i 2 1/2 time. Denne reaktionsblanding blandes med 10 ml ethyl-acetat, hvorefter et gummiagtigt produkt skilles fra.

5 Supernatanten dekanteres fra, og remanensen blandes med 10 ml ethylether. Det fremkomne pulver opsamles ved filtrering, opløses straks i en opløsning af 0,084 g natriumhydrogencarbonat i 10 ml vand og kromatograferes på en søjle af dextrangel ("Sephadex LH-20"®, Pharmacia), med 10 vand som elueringsmiddel. De fraktioner, som indeholder det ønskede produkt, samles og lyofiliseres. Ved denne fremgangsmåde opnåedes 0,098 g af titelforbindelsen.

IR(KBr, cm"1): 1765 NMR( 100 MHz, dg-DMSO, δ): 2,02 (s, CH3C0), 3,21 og 3,51 15 (ABq, J=18Hz, 2-CH2), 4,82 og 5,04 (ABq, J=13Hz, 3-CH2), 5,04 (d, J=5Hz, 6H), 5,66 (dd, J=5 og 8Hz, 7H), 6,64 (s, thiazolin, 5H), 7,11 (br. s, HN= og thiazolin NH), 9,35 (dd, J=8Hz, CONH), 12,0 (br. =N-0H) NMR( 100 MHz, D20, δ): 2,14 (s, CH3CO), 3,39 og 3,71 (ABq, 20 Js=18Hz, 2-CH2), 4,74 og 4,94 (ABq, J=13Hz, 3-CH2), 5,25 (d, J=5Hz, 6H), 5,86 (d, J=5Hz, 7H), 6,99 (s, thiazolin, 5H).

Elementæranalyse for Ci5Hi4N507S2Na*2H20:

Beregnet: C 36,06 H 3,63 N 14,02 25 Fundet: C 35,78 H 3,57 N 14,13

Eksempel 8

Fremstilling af 7-(4-brom-2-hydroxyimino-3-oxobutyryl-amino)-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-iso-mer) 30 Til en blanding af 4,5 g 7-(4-brom-3-oxobutyrylamino)-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre og 10 ml eddikesyre sættes under omrøring og isafkøling 0,76 g natriumnitrit. Isbadet fjernes, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 1 time. Eddikesyren destilleres af under reduceret tryk, 35 og 200 ml ethylacetat og 100 ml vand sættes til remanen-

DK 161081B

27 sen. Blandingen indstilles til pH-værdi 2 med en tilstrækkelig mængde phosphorsyre og omrystes intensivt. Det organiske lag skilles fra, vaskes med vand, tørres og koncen-5 treres til tørhed. Remanensen omrøres med en lille mængde ethylacetat, og det fremkomne pulver opsamles ved filtrering. Ved denne fremgangsmåde opnåedes 2,0 g af titelforbindelsen.

IR(KBr, cm-1): 1790, 1710, 1655, 1550 10 NMR( 100 MHz, dg-DMSO, δ): 2,05 (s, CH3C0), 3,44 og 3,67 (ABq, J=18Hz, 2-CH2), 4,59 (s, BrCH2-), 4,70 og 5,02 (ABq, J=13Hz, 3-CH2), 5,14 (d, J=4,5Hz, 6H), 5,79 (dd, J=4,5 og 8,0Hz, 7H), 9,28 (d, J=8Hz, CONH), 13,10 (s, =N-0H).

Elementær analyse for C^H^BrNgOgS: 15 Beregnet: C 36,22 H 3,04 N 8,82

Fundet: C 37,36 H 3,14 N 8,82

Eksempel 9

Fremstilling af natrium-7-f2-(2-imino-4-thiazolim-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido 1-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carb-20 oxy1at (syn-isomer) 1 1 ml dimethylacetamid opløses 0,232 g 7-(4-brom-2-hydr-oxyimino-3-oxobutyrylamino)-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer) og 0,038 g thiourinstof, og den blandede opløsning omrøres ved stuetemperatur i 2 1/2 25 time. Reaktionsblandingen blandes med 10 ml ethylacetat, hvorefter et gummiagtigt produkt skilles fra. Supernatan-ten dekanteres fra, og remanensen blandes med 10 ml ethyl-ether. Det fremkomne pulver opsamles ved filtrering og opløses straks i en opløsning af 0,084 g natriumhydrogen-30 carbonat i 10 ml vand. Opløsnignen underkastes søjlekromatografi på dextrangel ("Sephadex LH-20"®, Pharmacia) med vand som elueringsmiddel. Fraktionerne, som indeholder det ønskede produkt, samles og lyofiliseres. Ved denne fremgangsmåde opnåedes 0,112 g af titelforbindelsen.

DK 161081 B

28

Med hensyn til IR- og NMR-spektrene er dette produkt i god overensstemmelse med det i eksempel 5 opnåede produkt.

Eksempel 10 5 Fremstilling af 7-(4-chlor-2-hydroxyimino-3-oxobutyryl-amino)-3-(mandelyloxymethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer)

Til en opløsning af 0,47 g (1 mmol) 7-(4-chlor-3-oxobut-yrylamino)-3-(mandelyloxymethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre i 10 2 ml eddikesyre sættes dråbevis under omrøring og isaf køling en opløsning af 0,1 g (1,5 mmol) natriumnitrit i 0,2 ml vand i løbet af 1 time. Blandingen omrøres derefter ved stuetemperatur i 1 time. Eddikesyren destilleres af under reduceret tryk, og 50 ml ethylacetat og 30 ml vand 15 sættes til remanensen. Blandingen omrystes kraftigt, og det organiske lag skilles fra, vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid og tørres. Opløsningsmidlet afdampes drefter, og der sættes 30 ml ether og 30 ml petroleumsether til remanensen, som gnides mod beholde-20 rens væg. Ved denne fremgangsmåde opnåedes 0,29 g af titelforbindelsen som et pulver.

IR(KBr, cm“l): 1780, 1741, 1715 (skulder), 1675 (skulder), 1640 (Skulder), 1540 NMR( 100 MHz, dg-DMSO, δ): 3,24 (br. s, 2-CH2), 4,77 og 25 5,07 (ABq, J=13Hz, 3-CH2), 5,04 (d, J=5Hz, 6H), 5,18 (s, >CH-), 5,79 (dd, J=5 og 8Hz, 7H), 7,3-7,5 (m, C6H5-), 9,26 (d, J=8Hz, -C0NH-), 13,10 (s, =N-0H).

Eksempel 11

Fremstilling af 7-Γ2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-30 imino-acetamido 1-3-(mandelyloxymethyl)-3-cephem-4-carboxyl-syre-hydrochlorid (syn-isomer) I 2 ml dimethylacetamid opløses 0,24 g (0,5 mmol)

DK 161081 B

29 7-(4-chlor-2-hydroxyimino-3-oxobutyrylamino)-3-(mandelyl-oxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer) og 0,042 g (0,55 mmol) thiourinstof, og den blandede opløsning omrø-5 res ved stuetemperatur i 2 timer. Opløsningsmidlet destilleres af under reduceret tryk, og 60 ml ethylacetat sættes til remanensen, hvorefter der omrøres. Det fremkomne pulver opsamles ved filtrering, vaskes med ether og tørres. Ved denne fremgangsmåde opnås 0,26 g af titelfor-10 bindeisen som et pulver.

IR(KBr, cm-1): 1776, 1741, 1672, 1631, 1536 NMR( 100 MHz, dg-DMSO, δ): 3,26 (br. s, 2-CH2), 4,78 og 5,08 (ABq, J=13Hz, 3-CH2), 5,08 (d, J=5Hz, 6H), 5,18 (s, >CH-), 5,78 (dd, J=5 og 8Hz, 7H), 6,86 (s, thiazolin, 15 5H), 7,3-7,5 (m, C6H5-), 9,61 (d, J=8Hz, CONH).

Eksempel 19

Fremstilling af 7-(4-chlor-2-hydroxyimino-3-oxobutyryl-amino)-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem- 4-carboxylsyre (syn-isomer) 20 Til en blanding af 22,3 g 7-(4-chlor-3-oxobytyrylamino)- 3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carbox-ylsyre og 200 ml eddikesyre sættes under omrøring og isafkøling en opløsning af 3,8 g natriumnitrit i 20 ml vand, dråbevis i løbet af 15 minutter. Kølebadet fjernes, og 25 blandingen omrøres ved stuetemperatur i 3 timer. Denne reaktionsblanding fortyndes med 600 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid og ekstraheres fire gange med 250 ml-portioner af ethylacetat. Ekstrakterne samles, vaskes med vand, tørres og koncentreres til tørhed under 30 reduceret tryk. Remanensen omrøres med 200 ml ethylether, og det fremkomne pulver opsamles ved filtrering. Ved denne fremgangsmåde opnås 19,0 g af titelforbindelsen.

IR(KBr, cm-1): 1785 NMR(100 MHz, dg-DMSO, δ): 3,57 og 3,79 (ABq, J=18Hz, 35 2-CH2), 3,94 (s, tetrazol-CH3), 4,20 og 4,37 (ABq, J=13Hz,

DK 161081 B

30 3-CH2), 4,73 (S, C1CH2), 5,13 (d, J=5Hz, 6H), 5,78 (dd, J=5 og 8Hz, 7H), 9,28 (d, J=8Hz, CONH).

Eksempel 20 5 Fremstilling af natrium-7-r2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido ~|-3-( l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer) I 1 ml dimethylacetamid opløses 0,238 g 7-(4-chlor-2-hydroxyimino-3-oxobutyrylamino)-3-(1-methyl-lH-tetrazol-10 5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer) og 0,038 g thiourinstof, og den blandede opløsning omrøres ved stuetemperatur i 2 1/2 time. Reaktionsblandingen blandes med 10 ml ethylacetat, hvorefter en gummiagtig substans udskilles. Supernatanten dekanteres fra, og 15 remanensen blandes med 10 ml ethylether. Det fremkomne pulver opsamles ved filtrering, opløses straks i en opløsning af 0,084 g natriumhydrogencarbonat i 10 ml vand og kromatograferes på en søjle af dextrangel ("Sephadex LH-20"®, Pharmacia) med vand som elueringsmiddel. Frak-20 tionerne, som indeholder det ønskede produkt, samles og lyofiliseres. Ved denne fremgangsmåde opnås 0,112 g af titelforbindelsen.

Med hensyn til IR- og NMR-spektrene er dette produkt i god overensstemmelse med et på anden måde fremstillet produkt, 25 der har følgende data: IR(KBr, cm-1): 1763 NMR( 100 MHz, dg-DMSO, δ): 3,41 og 3,66 (ABq, J=18Hz, 2- CH2), 3,93 (s, tetrazol-CH3), 4,28 og 4,46 (ABq, J=13Hz, 3- CH2), 5,04 (d, J=5Hz, 6H), 5,77 (dd, J=5 og 8Hz, 7H), 30 6,64 (s, thiazolin, 5H), 7,12 (br. s, HN= og thiazolin NH), 9,38 (d, J=8Hz, CONH), 11,84 (br. s, =N0H).

NMR(100 MHz, D20, S): 3,47 og 3,82 (ABq, J=18Hz, 2-CH2), 4,05 (s, tetrazol-CHø), 4,08 og 4,34 (ABq, J=13Hz, 3-CH2), 5,22 (d, J=5Hz, 6H), 5,80 (d, J=5Hz, 7H), 6,98 (s, thi-

DK 161081 B

31 azolin, 5H).

Eksempel 21

Fremstilling af 7-(4-brom-2-hydroxyimino-3-oxobutyryl-5 amino)-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem- 4-carboxylsyre (syn-isomer)

Til en blanding af 3,43 g 7-(4-brom-3-oxobutyrylamino)-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carb-oxylsyre og 24 ml eddikesyre sættes under omrøring og is-10 afkøling dråbevis en opløsning af 0,532 g natriumnitrit i 2,5 ml vand. Blandingen omrøres i 10 minutter, og efter at isbadet er fjernet, i yderligere en time ved stuetemperatur, og blandingen omrystes kraftigt med 60 ml af en mættet opløsning af vand og 100 ml ethylacetat. Det orga-15 niske lag skilles fra, vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, tørres og koncentreres under reduceret tryk. Remanensen omrøres med 100 ml ethylether, og det fremkomne pulver isoleres. Ved denne fremgangsmåde opnås 2,763 g af titelforbindelsen.

20 IR(KBr, cm"1): 1780 NMR(100 MHz, dg-DMSO, δ): 3,57 og 3,79 (ABq, J=18Hz, 2- CH2), 3,96 (s, tetrazol-CHø), 4,23 og 4,39 (ABq, J=14Hz, 3- CH2), 4,79 (s, BrCH2_), 5,12 (d, J=5Hz, 6H), 5,76 (dd, J=5 og 8Hz, 7H), 9,27 (d, J=8Hz, CONH).

25 Eksempel 22

Fremstilling af 7-\ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-imino-acetamido 1-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl- 3-cephem-4-carboxylsyre-hydrobromid (syn-isomer) 4 ml dimethylacetamid opløses 1,04 g 7-(4-brom-2-hydr-30 oxyimino-3-oxobutyrylamino)-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer) og 0,152 g thiourinstof, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i

DK 161081 B

32 90 minutter. Til denne reaktionsblanding sættes 50 ml ethylether, og efter omrøring dekanteres supernatanten fra. Til remanensen sættes ethylether, og samme fremgangs-5 måde gentages. Denne cyklus gentages nogle få gange, og det fremkomne pulver isoleres ved vakuumfiltrering og tørres. Ved denne fremgangsmåde opnås 1,058 g af titelforbindelsen.

IR(KBr, cm-1): 1781 10 NMR(100 MHz, dg-DMSO, 5): 3,58 og 3,80 (ABq, J=18Hz, 2- CH2), 3,95 (s, tetrazol-CH3), 4,23 og 4,40 (ABq, J=l4Hz, 3- CH2), 5,15 (d, J=5Hz, 6H), 5,75 (dd, J=5 og 8Hz, 7H), 6,83 (s, thiazolin, 5H), 9,58 (d, J=8Hz, CONH), 12,20 (br. s, =N-0H).

15 Eksempel 24

Fremstilling af 7-Γ2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-imino-acetamido 1-3-nitrogenholdig heterocyclisk thiometh-yl-3-cephem-4-carboxylsyre (I), -hydrochlorid, -betain eller -natriumsalt (syn-isomer) 20 En af de følgende generelle fremstillingsfremgangsmåder 3 og 4 blev valgt til fremstilling af de i tabel 5 opførte forbindelser med formlen I. Forbindelsernes fysiske egenskaber er vist i den samme tabel.

Generel fremstillingsfremgangsmåde 3 25 (1) I 40 ml vand opløses 10,7 g (30 mmol) 7-acetoacetami- do-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre, 5,04 g (60 mmol) natriumhydrogencarbonat og 30 mmol af en nitrogen-holdig heterocyclisk thiol. Efter indstilling til pH-værdi 7,0 med 10% natriumhydroxidopløsning omrøres den ovenstå-30 ende opløsning ved forhøjet temperatur på 60-65°C i 4 timer. Efter afkøling tilsættes 2,31 g (33 mmol) hydroxyl-aminhydrochlorid. Derefter indstilles pH-værdien til 3,6 med en tilstrækkelig mængde 1 N saltsyre. Opløsningen hen-

DK 161081 B

33 står i 16 timer ved stuetemperatur. De fremkomne krystaller opsamles ved filtrering, vaskes med acetone og tørres.

Når den omhandlede forbindelse er vandopløselig og ikke 5 udfældes, indstilles reaktionsblandingen til pH-værdi 3,3 og koncentreres under reduceret tryk til ca. 50 ml. Til remanensen sættes 1500 ml ethanol, og blandingen omrøres under isafkøling i 4 timer. De resulterende krystaller opsamles ved filtrering, vaskes med ethanol og tørres. Ved 10 denne fremgangsmåde opnås en 7-amino-3-nitrogenholdig heterocyclisk thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre.

(2) Til en opløsning af 1,03 g (13 mmol) diketen i 5 ml methylenchlorid, der er afkølet til -30°C, sættes dråbevis 15 g af en opløsning af 1 mol chlor i 15 mmol carbontetra- 15 chlorid eller en opløsning af 2,24 g (14 mmol) brom i 5 ml methylenchlorid. Særskilt opløses en 7-amino-3-nitrogen-holdig heterocyclisk thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (10 mmol) og 2,02 g (20 mmol) triethylamin i 20 ml methylen- chlorid, og der afkøles til -20eC. Derefter 20 sættes den ovennævnte reaktionsblanding dråbevis hurtigt til denne afkølede opløsning. I flere tilfælde udvikles der varme, hvilket bringer blandingen til ca. 0°C. Væskens temperatur forøges gradvis til stuetemperatur, hvorved blandingen omrøres i 15 minutter. Til reaktionsblandingen 25 sættes 150 ml ethylacetat og 100 ml 10% phosphorsyre, og blandingen omrøres kraftigt. Det organiske lag skilles fra, vaskes med vand, tørres og koncentreres. Remanensen løsnes med ether. Ved denne fremgangsmåde opnås pulverformet 7-[4-chlor- (når chlor anvendes) eller brom-30 (når brom anvendes)-3-oxobutyrylamino ]-3-nitrogenholdig heterocyclisk thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre. 1

Til en blanding af 7 mmol af en 7-(4-chlor- eller brom-3-oxobutyrylamino)-3-nitrogenholdig heterocyclisk thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre og 24 ml eddikesyre 35 sættes dråbevis under omrøring og isafkøling en opløsning af 0,532 g (7,7 mmol) natriumnitrit i 2,5 ml vand. Denne

DK 161081B

34 blanding omrøres i 10 minutter, og efter at isbadet er fjernet, ved stuetemperatur i 1 time. Til denne reaktionsblanding sættes 60 ml af en mættet vandig opløsning af 5 natriumchlorid og 100 ml ethylacetat, og blandingen omrystes kraftigt. Det organiske lag skilles fra, tørres og koncentreres til tørhed. Remanensen løsnes med ethylether, og det fremkomne pulver opsamles ved filtrering og tørres.

Ved denne fremgangsmåde opnås en 7-(4-chlor- eller brom-10 2-hydroxyimino-3-oxobutyrylamino)-3-nitrogenholdig hetero-cyclisk thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer).

(4) I 4 ml dimethylacetamid opløses 2 mmol af en 7-(4-chlor- eller brom-2-hydroxyimino-3-oxobutyrylamino)- 3-nitrogenholdig heterocyclisk thiomethyl-3-cephem-4-carb-15 oxylsyre (syn-isomer) og 0,152 g (2 mmol) thiourinstof, og den blandede opløsning omrøres ved stuetemperatur i 90 minutter. Til denne blandede opløsning sættes 50 ml ethylether, og efter omrøring dekanteres supernatanten fra. Derefter sættes ethylether til remanensen, og blandingen 20 behandles på samme måde. Den ovenstående fremgangsmåde gentages nogle få gange, og det fremkomne pulver opsamles ved filtrering. Pulveret opløses i 20 ml vand, og efter indstilling til pH-værdi 6,5 underkastes opløsningen kromatografi på polystyrenharpiks ("Amberlite XAD-2"®, 25 Rohm & Haas Co.), idet der elueres med vand og 10% ethanol i nævnte rækkefølge. De fraktioner, som indeholder det ønskede produkt, samles, koncentreres og lyofiliseres. Ved denne fremgangsmåde opnås den angivne 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido ]-3-nitrogenholdige 30 heterocycliske thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-betain eller -natriumsalt (syn-isomer).

Generel fremstillingsfremgangsmåde 4 (1) I 300 ml vand opløses 31,4 g (0,1 mmol) 7-amino-3-(3-oxobutyryloxy)methyi-3-cephem-4-carboxylsyre, 18,5 g (0,22 35 mmol) natriumhydrogencarbonat og 0,1 mmol af en nitrogen-

DK 161081 B

35 holdig heterocyclisk thiol, og efter indstilling til pH-værdi 5,5 opvarmes den blandede opløsning til 60°C i 1 time. Efter afkøling vaskes reaktionsblandingen én gang 5 med dichlormethan, og det vandige lag indstilles til pH-værdi 3,3, og omrøres under isafkøling i 1 time. Bundfaldet opsamles ved filtrering, vaskes med vand, methanol og acetone i nævnte rækkefølge og tørres. Ved ovenstående fremgangsmåde opnås en 7-amino-3-nitrogen-10 holdig heterocyclisk thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre.

Da den omhandlede forbindelse er vandopløselig og ikke udfældes, indstilles reaktionsblandingen til pH-værdi 3,3 og koncentreres under reduceret tryk til ca. 50 ml. Til remanensen sættes 1500 ml ethanol, og blandingen omrøres 15 under isafkøling i 4 timer. De fremkomne krystaller opsamles ved filtrering, vaskes med ethanol og tørres. Ved denne fremgangsmåde opnås en 7-amino-3-nitrogenholdig heterocyclisk thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre.

(2) Ved anvendelse af den ovenfor opnåede 7-amino-3-nitr-20 ogenholdige heterocycliske thiomethy1-3-cephem-4-carboxyl-syre og fremgangsmåderne i de generelle fremstillingsfremgangsmåder 3-(2), (3) og (4) opnås den ønskede 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido ]-3-nitrogenholdige heterocycliske thiomethyl-3-cephem-4-carb-25 oxylsyre-betain eller -natriumsalt (syn-isomer).

Tabel 5 HN _ Y) N_U-C-CONH- -/ \ h/ l A a

0 I CH2SR

COOM

DK 161081 B

36

For- R . M IR NMR Sppm Frem- bin- (3- gangs- delse lactam måde nr. (KBr, cm ) (100MHz,D O): 3-40 & 3 II-II λτ 3-7^ 3.79 (ABq, J—18Hz, 2- 1 JLJ Na 1763 CH ),4.ίθ & 4.52 ^ (ABq, J=13Hz,3-CH ), 5.19(d,J=5Hz,6-H)7 5.80(d,J=5Hz, 7-H), J3 6.99(s,thiazolin 5- H) 4 N_N (100MHz,D2O):2.55(s, 2 II || Na 1763 oxadiazol -CH ) ,3.41 & I I 3.84(ABq,J=18Ez, 2-CH ), ^ \ 3.98 & 4.49(ABq,J=13 Hz, CH3 3-CH ),5.21(d,J=5Hz, 33 6- H,5.82(d,J=5Hz,7-H), o4 6.98(s, thiazolin 5-H) (100MHz,D O) :3.44 & N-N 3.79(ABq,J=18Hz,2-CH2), 3 Η [I Na 1766 4.04 & 4.25 (ABq, J=13Hz, y\ / 3-CH ) , 5,21 (d,J=5Hz, N 6-H)7 5.82(d,J=5Hz, 7-H), 3 6,99(s,thiazolin 5-H), 4 8.36 (s,triazol 5-H) N-N (100MHz,D O):2.51(s,

4 II 1 Ha 1763 trlazol 3-CB ),3.42 S

"'VX 3.96(ABq,J=18Hz,2-CH„), , CH 3.68(s,triazol 4-CH f» 3 3 3.75 & 4.38 (ABq,J=14Hz, °°3 3-CH ),5.23(d,J=4Hz, 4 6-H)75.83(d,J=4Hz,7-H), 6.99(s,thiazolin 5-H) N_. ' (100MHz,D O): 3.31 & || I 3.86 (ABq, J=18Hz,2-CH2) , ^\ / Na 1760 3.64 & 4.32(ABq, J=13Hz), ? 3-CH ), 3,78(s, CH imidazol 1-CH-), 5.22 3 3 (d,J=5Hz,6-H),5.82 (d,J=5Hz,7-H), 6.99 4 (s,thiazolin 5-H),7.14 & 7.30(hver d,J=lHz, imidazol 4- & 5-H)

DK 161081 B

37 (100MHz,D„0):3.55 & N-N 3.88(ABq,J=18Hz,2-CH ), 6 (J II Na 1763 4.31 & 4.67(ABq,J=13Hz, ΛΛ 3-CH ),5.30(d,J=5Hz, S CF 6-H)75.92(d,J=5Hz,7-H), 4 6.99 (.s, thiazolin 5-H) (100MHz,D O): 2.34 & 3 2.76(hver s, thiazol :i-/ 4- & 5-CH ) , 3.40 & 7 I ] Na 1760 3.82(ABq,J=18Hz,2-CH ), ’ J 3.90 & 4.49(ABq,J=13Hz, 4 '"'s'x 3-CH„) 5.25 (d,J=5Hz, CH3 6-H) ,5..90(d,J=5Hz,7-H) , 6.98(s,thiazolin 5-H) (ΙΟΟΜΗζ,ϋ-Ο):2.55(s, thiazol 5-CH ),3.41 & 3.87(ABq,J=18Hz,2-CH„), „ h „ 3.91 & 4.59 (ABq, J=14Hz, 4 8 Μ "a 1760 3-CH ) ·, 5.26(d, J=5Hz, ΛΛ 6-H),5.88(d,J=5Hz,7-H), ' 6.98(s,thiazolin 5-H), CH3 7.51(s,thiazol 4-H) (100MHz,dg-DMSO): 2.32 CH (s,thiazol 4-CH ),3.46 N-3 & 3.73(ABq,J=18Hz,2-CH ), 9 || Na 1760 4.11 & 4.49(ABq,J=13Hz7 3 J J 3-CH ) ,, 5.20 (d, J=5Hz, 6- H) , 5.75 (dd, J=5 & 8Hz, 7- H),6.23(s,thiazol 5-H), 4 6.67(s,thiazolin 5-H), 7.1(br,s,=NH & thiazolin NH), 9.38(d,J=8Hz,CONH) (ΙΟΟΜΗζ,ϋ-Ο):3.41 & 3.78(ABq,J=18Hz,2-CH ), N-N 3.99 & 4.32 (ABq,J=13Hz, 10 || || Na 1758 3-CH )„5.25(d,J=5Hz,6-H), 4 N N 5.87Td,J=5Hz,7-H),6.98 ^N^ (s,thiazolin 5-H)

Na N N (100MHz,D O): 3.46 & 12 [f Na 1760 3.90(ABq,J=18Hz,2-CH ),

Ji 3.90(s,OCH_) ,3.92 & 'IS'' 4.49(ABq,J=L3Hz,3-CH ) , NHCOOCH_ c rctT c c 2n o 3 5.30(d,J=5Hz,6-H),5.90 3 (d,J=5Hz,7-H),6.99(3, thiazolin 5-H) 4

DK 161081 B

38 N-N (100MHz,D20):3.12 & ; 13 11 II Na 1758 3.29 (hver N(CH ) J / J! - Il 3.53 & 3.87(ABq, J=18Hz,

Vv C0N(CH Λ 2-CH ),4.19 & 4.58 (ABq, 3 S CH2CON(CH3)2 J=14iz,3-CH ), 5.33(d, 4 J=5Hz,6-H),5.93(d,J=5Hz 7-H),6.99(s,thiazolin

5-HJ

_(ΙΟΟΜΗζ,ϋ O):3.55 &' ri i 3.94 (ABq,J=18Hz,2-CH ) , 14 (I 4 Na 1761 4.16(s,CH2CO), 4.19 & -A 4.60(ABq,J=13Hz,3-CH ) , PH rooKfe 5.35(d,J=5Hz,6-H), 5794 4 CH2COONa (d,J=5Hz,7-H), 6.99(s, thiazolin 5-H) N-N (ΙΟΟΜΗζ,ϋ O): 3.51 & 3.89 g| (ABq,J=18 HZ,2-CH ), ! Na 1760 3.91 (s,OCH ), 4.19 & ^ Nr \ 4.56(ABq,J=13Hz,3-CH ), 3 CH2COOCH3 5.31(d,J=5Hz,6-H), 5.90 (d,J=5Hz,7-H), 6.99 4 (s,thiazolin 5-H) N-N (ΙΟΟΜΗζ,ϋ O): 3.50 & 16 || Na 1762 3.88(ABq,J=18Hz,2-CH2), J 4.19 & 4.55(ABq,J=13Hz, N‘S/\ 3-CH ), 5.30(d,J=5Hz, 3 CH2CONH2 6-H)7 5.90(d,J=5Hz,7-H), 6.98(s,thiazolin 5-H) 4 N—N (100MHz,D2O): 2.24(s, 17 || Na 1762 CH S), 3.52 & 3.87(ABq, 1 Jl J=l8Hz,2-CH ), 4.21(s, NS \ __ CHS), 4.26 & 4.57 (ABq, 23 J =14HZ,3-CH ), 5.31(d, J=5Hz,6-H), 5.93(d,J= 3 5Hz,7-H), 6.99(s, 4 * thiazolin 5-H) N-N (ΙΟΟΜΗζ,ϋ O): 3.36(s, Λ I OCH ) , 3.28 & 3.84(ABq,

Jl Na 1763 J=18Hz,2-CH ),3.98 & SX\ 4.36 (ABq, J= 14Hz,3-CH ) , CH OCH ’ 4.76(s,CH20), 5.07(d,2 3 1 3 J=5Hz, 6-H), 5.67(d, J=5Hz, 7-H), 6.99(s, 4 thiazolin 5-H) N-N (60MHz,D20): 3.35 & 3.74 I I (ABq,J=16Hz,2-CH2), 3.97 19 Jl A Na 1763 & 4.38 (ABq, J=14Hz,3-CH ) , 5.19 (d,J=5Hz, 6-H) , 5.78 3 SCH„COONa ,. _ n . a aa .

2 (d,J=5Hz,7-H), 6.98(s, thiazolin 5-H) 4 39

DK 161081 B

-N (60 MHz,DO): 3.4-3.8(m, I Na 1765 2 x CH ) , 3.95(t,J=6Hz, Ϊ CH O), 4.01 & 4.38 (ABq, y''sS/\ J=I4Hz,3-CH ), 5.16 (d, SCH CH OH J=5Hz,6-H),5.77(d,J= 3 5Hz,7-H), 6.99(s, 4 thiazolin 5-H) (100MHz,CF_COOH): 3.79 N-N (s,2-CH ), 4.45 & 4.84 9i II I w n« (ABqrJ=l4Hz, 3-CH ), 21 Jl i m 5.14<a,J-7Hz,CH_lA, XS^\ ,, 5.36(d,J=5Hz, 6-H), 4 CH2NHCNH2 5.99(dd, J=5 & 8Hz,7-H), 6.4-6.9(br., guanyl 4 x H) , 6.. 99 (s, thiazolin 5- H) -N (100MHz,D2O): 3.43 & || 3.81 (ABq, J=18Hz, 2-CH ),

Jl Na 1765 4.07 & 4.56(ABq,J=13Hz^ '^N'SX\ 3-CH J, 4.96 (s,CH O) , CH OH 5.23Xd,J=5Hz,6-H)7 4 2 5.84(d,J=5Hz,7-H), 6.99 (s,thiazolin 5-H) N-N (100MHz,D O) : 2.51(s, 23 II Na 1762 N(CH .) ) » 3.43 & 3.80 I . (ABq«T=18Hz,2-CH ) , 4.11 S%(CE,) , ‘ 4.5D(SB,,J-13Hz.3-CH2) .

2 32 4.21(s,thiadiazol 4 -CH N), 5.21(d,J=5Hz, 6- H), 5.82(d,J=5Hz,7-H), 6.98(s,thiazolin 5-H) N-N (60MHz,D O): 3.1-3.8 1| (m,6 x H), 4.02 & 8 Na 1763 4.25 (ABq,J=13Hz,3-CH ), 5.14(d,J=5Hz,6-H) , 5773 SCH CH SO Na (d,J=5Hz,7-H), 6.99(s, 4 thiazolin 5-H) N-N (100Mhz,D O): 2.93(t, Λ I J=6Hz,thiadiazol -CH„), I 3.3-4-0(m,4 x H), 4.08 s'x Na 1760 & 4.56(ABq,J=14Hz,3-CH ), CH2CH2OH 5.23(d,J=5Hz,6-H),5.84^ 3 (d,J=5Hz,7-H), 6.99(s, 4 thiazolin 5-H)

DK 161081B

40 N-—N (ΙΟΟΜΗζ,ϋ O): 3.02 Π Π (s,N(CH3)“), 3.45 & 26 A Λ Na 1768 3.82 (ABq, 'J=18Hz, 2-CH*) t 3.67 (br. s,CH_CHp) , 4.07 3 CH2CH2N(CH3)2 & 4.52(ABq,J=13Hz,3-CH ), 4 5.27(d,J=5Hz,6-H), 5.84 (d,J=5Hz,7-H), 6.99(s, thiazolin 5-H) N-N (100MHz,D20): 3.39 & Λ I 3.83(ABq,J=18Hz,2-CH ), i 3.74(s,CH ), 3.71 & z/ ** Yh OB Na 1760 4.31(ABq,J=13Hz,3-CH ) , 4.82(s,CH O), 5.17(d7J= 4 CH3 5Hz,6-H), 5.79(d,J=5Hz, 7-H), 6.99(s,thiazolin 5-H) N-N (ΙΟΟΜΗζ,ϋ O): 2.24(s,

Il || CH CO) , 3741 & 3.72 (ABq, i* Jl J=I8Hz,2-CH ) , 3.76(s, 28 \ Na 1760 triazol -o/) , 3.85 & CH2OAc 4.30(ABq,J=13Hz,3-CH ), 4 CH3 5.28(d,J=5Hz,6-H), 5.36 (s,CH20), 5.83(d,J=5Hz, ..... 7-H), 6.99(s,thiazolin 5-H) (100MHz,D2O): 3.01(s, N--N N(CH )2)/3.47 & 3.79 I || (ABq,J=18Hz,2-CH2) , N 3.78 (t, J=6Hz, CH2ÉiTe ) , 29 Η Θ 1768 4.10 & 4.25 (ABq7J=13Hz, 4 A2 2 l~iX: jtålli-lTl'.tT' (s,thiazolin 5-H) (ΙΟΟΜΗζ,ϋ O): 2.4(m,

N-N C-CH2-C),^2.95(s,N

|| || (CHJ ),3.3(m, CHNMe ), I' N 3.45 & 3.81 (ABq, J=18Hz, 30 Na 1760 2-CH ), 4.12 & 4.33(ABq, ίΓΗ 1 NfCH 1 J=13Éz,3-CH ), 4.42(t, ' T3V 3’2 J=7Hz, tetrazol -CH -C) , 4 5.20(d,J=5Hz,6-H),Z5.80 (d,J=5Hz,7-H), 6.98(s, thiazolin 5-H)

DK 161081 B

41 N-N (10QMHz,D2O); 2.02(s, J|| CH CO) , 3751 & 3.03 (ABq, N J=I8Hz,2-CH ) , 3.73(t, 32 /Xn/ Na 1765 J=6Hz,CH NAc) , 4.21 & CH CH NHCOCH 4.41(ABq, J=13Hz,3-CH_), 22 3 4.61(t, J=6Hz,tetrazol -CH -C), 5.28(d, J=5Hz, 4 6-H), 5.85(d,J=5Hz, 7-H)·, 6.98 (s,thiazolin 5-H) N-N (100MHz,D O): 3.45(s, |j OCH ) , 3.45 & 3.81 (ABq,

Jl N J=18Hz,2-CH2) , 4.17 & '\i/ 4.42(ABq,J=13Hz,3-CH2), 34 * Na 1770 5.21(d,J=4.5Hz,6-H), CH2OCH3 5.77(s,tetrazol -CH20), 4 5.81(d,J=4.5Hz,7-H), 6.98(s,thiazolin 5-H) \N—-N (100MHz,D„0) : 2.22(s, A [J SCH-), 3.44 & 3.79(ABq, N J=18Hz,2-CH_), 4.21 & ^ Ny „ 4.42 (ABq, J=13Hz,3-CH_) ,

Ah SCH 5.22W,J=5HZ,6-H), 2 23 5.47(s,tetrazol-CH S), 4 5.81(d,J=5Hz,7-H) Γ6.98 (s,thiazolin 5-H) N-N (100MHz,D O): 3.42 & »Il 3.78,(ABq,J=18Hz,2-CH2) , N 4.03'(t,J=6Hz,CH O) , 36 Na 1760 4.12 & 4.36(ABq7J=13Hz, / . 3-CH„), 4.55(t,J=6Hz, 4 CH2 2°H tetrazol -CH -C), 5.19 (d,J=5Hz,6-H), 5.78(d, J=5Hz,7-H), 6.98(s, thiazolin 5-H) _ (100MHz,D„0): 3.51 & ?| n 3.85{ABq,J=18Hz,2-CH ) , 37 II Jl Na 1765 4.23 & 4.46(ABq,J=13Hz, y\ / 3-CH ), 5.29 (d, J=5Hz, , 6-H), 5.42(s,tetrazol CH CONH„ -CH CO), 5.89(d,J=5Hz, 4 7-H), 6.99(s,thiazolin 5-H)

DK 161081 B

42 N_N (100MHz,d -DMSO + D O): f η 3.42 & 3.68(ABq,J=18fiz J I 2-CH ), 4.21 & 7.37(ABq, 38 Na 1761 J=13Hz,3-CH2) , 4.70 , (s,tetrazol -CH„CO), 4 CH COONa 5.07(d,J=5Hz,6-H), 5.73(d,J=5Hz,7-H), 6.99(s,thiazolin 5-H) N_N (100MHz,D O): 3.41 & I J 3.72(ABq, J=18Hz,2-CH ), 39 I Na 1760 3.60(s,triazol -CH ) , ^\™/\ 3.78(s,triazol -CH„CO ) , , CH2COONa 3.85 & 4.30(ABq, J=13Hz, 4 CH 3-CH ), 5.17(d,J=5Hz,6-H), 5.79Td,J=5Hz,7-H), 6.99(s,thiazolin 5-H) ' _N (100MHz,D O): 1.37(t, I J=7Hz, CBZ), 3.08(q, J= 40 I Na 1765 7Hz,CH CH^), 3.50 & ΛΛ 3.62(ABq,iJ=18Hz,2-CH2), CH CH 4.03 & 4.34(ABq, J=13Hz, 3-CH ), 5.18(d,J=5Hz, 3 6-H)7 5.80(d,J=5Hz,7-H), 6.99(s,thiazolin 5-H) N-N (100MHz,D O): 2.88(t, I [[ J=7Hz,CH CO ), 3.51 & N 3,83(ABq, J=18Hz, 2- ^n/ CH ), 4.14 & 4.38 (ABq, 42 CH CH COONa "* 3 4.61 (t, -CH C), 5.23(d,J=5Hz, 4 6- H), 5.84(d,J=5Hz, 7- H), 6.99(s,thiazolin 5-H) CH COONa (100MHz, D O): 3.43 & „ .CH2COONa 3.84(ABq, J=18Hz,2-CH ) I il 3.76(s,CH CO) , 3.98 &2 43 I I Na 1763 4.54 (ABq,J=14Hz,3-CH ), 3 y\„/ 5.24(d,J=5Hz,6-H) , 5.85 S (d,J=5Hz,7-H), 6.98 4 (s,thiazolin 5-H), 7.35(s,thiazol 5-H)

DK 161081B

43 (100MH-z,D20) : 3.03 & N-N 3.21 (hver s, N(CH ) ),

As I ΙΓ ™ 3.42 & 3.76 (ABq, J= 46 1 N 63 18Hz,2-CH ), 4.15 & 4.37 4 ^ N' (ABq, J=14Hz,3-CH ),

Qi CON (CH ) 5'21 {<^'J=5J*Z '6~E) ' 2 32 5.30 & 5.53(hver s, tetrazol -CH ) , 5.79 (d,J=5Hz,7-H), 6.99 (s,thiazolin 5-H) (60MHz-,D O) : 3.4-4.0 N-N (m, 2-θφ triazol

Il I CH ), 5.1-5.25 (m, 6-H) , 47 il m 17f-, 5.7-5.8 (m, 7-H), 6.99 ^ ΊΓ XCONH (s, thiazolin 5-H) 4 “3

DK 161081B

44

Eksempel 25

Fremstilling af 7-(4-brom-2-hydroxyimino-3-oxobutyryl-amino)-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre 5 (syn-isomer)

Til en opløsning af 0,15 g 7-(4-brom-3-oxobutYrylamino)- 3- carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre i 2 ml eddikesyre sættes under omrøring ved stuetemperatur 0,03 g natriumnitrit dråbevis i løbet af 5 minutter. Derefter 10 omrøres blandingen i yderligere 20 minutter, hvorefter den koncentreres til tørhed under reduceret tryk. Det fremkomne glasagtige faste stof anbringes på en Merck silicagelplade nr. 5715 og elueres med ethylacetat-eddike-kesyre-vand (8:1:1). Farvereaktionen med en 0,5%'s opløs-15 ning af kobberchlorid giver en enkelt gul plet ved Rf=0,327. Derfor antages produktet i det væsentlige at være titelforbindelsen og underkastes den næste reaktion.

Eksempel 26

Fremstilling af natrium-7-Γ 2-(2-amino-4-thiazolin-4-yl)-2-20 hydroxyimino-acetamido 1-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer) I 1 ml dimethylacetamid opløses den rå 7-(4-brom-2-hydr-oxyimino-3-oxobutyrylamino)-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem- 4- carboxylsyre (syn-isomer) og 0,03 g thiourinstof. Den 25 blandede oløsning omrøres ved stuetemperatur i 1 time.

Reaktionsblandingen omrøres med 50 ml ethylether, og supernatanten dekanteres fra. Til remanensen sættes 50 ml ethylether, og blandingen behandles som ovenfor. Det fremkomne pulver opsamles ved filtrering og opløses i 5 ml af 30 en 5%'s vandig opløsning af natirumhydrogencarbonat. Opløsningen underkastes søjlekromatografi på polystyrenharpiks ("Amberlite XAD-2"®, Rohm & Haas Co.), med vand som elueringsmiddel. De fraktioner, som indehol-

DK 161081 B

45 der det ønskede produkt, samles og lyofiliseres. Ved denne fremgangsmåde opnås 0,063 g af titelforbindelsen.

IR(KBr, cm-1): 3400, 1760, 1710, 1610, 1530, 1400, 1360, 5 1330 (carbamoyl C-N) NMR( 100 MHz, dg-DMSO, δ): 4,72 og 4,86 (ABq, J=12Hz, 3-CH2), 4,98 (d, J=5Hz, 6H), 5,63 (dd, J=5 og 9 Hz, 7H), 6,44 (br. s, CONH2), 6,72 (s, thiazolin, 5H), 7,1 (br., NH= og thiazolin -NH-).

10 Referenceeksempel 1

Fremstilling af 7-(4-brom-3-oxobutyrylamino)-3-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre

En opløsning af 2,2 g diketen i 5 ml methylenchlorid afkøles til -40°C, og 4,4 g brom tilsættes dråbevis.

15 Særskilt opløses 4,28 g 7-aminodesacetoxycephalosporansyre og 8,0 9 n-dibutylamin i 120 ml methylenchlorid, og blandingen afkøles. Den ovennævnte reaktionsblanding sættes dråbevis til denne blandede opløsning. Temperaturen af blandingen forøges til stuetemperatur i løbet af 30 20 minutter, hvorefter blandingen omrøres i yderligere 30 minutter. Opløsningsmidlet destilleres af under reduceret tryk, og remanensen omrystes kraftigt med 200 ml ethyl-acetat og 40 ml 40%’s phosphorsyre. Det organiske lag skilles fra, vaskes med vand, tørres og koncentreres til 25 tørhed under reduceret tryk. Til remanensen sættes ethyl-ether, hvorefter der omrøres. Det fremkomne pulver opsamles ved filtrering og tørres. Ved denne fremgangsmåde opnås 3,7 g af titelforbindelsen.

DK 161081B

46

Referenceeksempel 3 j

Fremstilling af 7-(4-chlor-3-oxobutyrylamino)-3-(1-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre 5 Til en opløsning af 166,5 g (1,98 mol) diketen i 830 ml methylenchlorid, som omrøres under afkøling til en intern temperatur på -25 til -30°C, ledes der 140 g (1,97 mol) chlorgas i løbet af 100 minutter. Derefter omrøres opløsningen ved denne temperatur i yderligere 30 minutter. 500 10 g (1,52 mol) 7-amino-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thio-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre og 394 g (3,05 mol) di-butylamin opløses særskilt i 3 1 methylenchlorid og afkøles til -10 til -20eC. Den ovennævnte reaktionsblanding sættes dråbevis til denne blandede opløsning i løbet 15 af 30 minutter, hvorefter blandingen omrøres ved den samme temperatur i 40 minutter. Reaktionsblandingen sættes til en blanding af 6 1 ethylacetat og 6 1 10%’s phosphorsyre.

Efter intens omrøring skilles det organiske lag fra, vaskes med vand, tørres og koncentreres til tørhed under 20 reduceret tryk. Remanensen løsnes ved tilsætning af ether.

Ved denne fremgangsmåde opnås 644 g af titelforbindeIsen som et pulver.

IR(KBr, cm-1): 1783, 1732, 1679 NMR( 100 MHz, dg-DMSO, δ): 3,57 og 3,79 (ABq, J=18Hz, 25 2-CH2), 3,56 (s, C0CH2C0), 3,91 (s, tetrazol-CH3), 4,20 og 4,37 (ABq, J=13Hz, 3-CH2), 4,52 (s, C1CH2), 5,07 (d, J=5Hz, 6H), 5,67 (dd, J=5 og 8Hz, 7H), 9,05 (d, J=8Hz, -CONH-).

Referenceeksempel 4 30 Fremstilling af 7-(4-brom-3-oxobutyrylamino)-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-carboxylsyre

En opløsning af 1,03 g (0,01 møl) diketen i 5 ml methylenchlorid afkøles til -30°C og en opløsning af 2,24 g (0,01

DK 161081 B

47 mol) brom i 5 ml methylenchlorid tilsættes dråbevis. 3,29 g (0,01 mol) 7-amino-3-(1-methyl-IH-tetrazol-5-yl)thio-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre og 2,02 g triethylamin 5 opløses særskilt i 20 ml methylenchlorid og afkøles til -20°C. Ovenstående reaktionsblanding sættes hurtigt dråbevis til denne blandede opløsning, hvorefter væskens temperatur når 0°C. Væskens temperatur forøges gradvis til stuetemperatur, hvorefter blandingen omrøres i 15 10 minutter. Reaktionsblandingen sættes til en blanding af 150 ml ethylacetat og 100 ml 10%’s phosphorsyre, hvorefter der omrøres intenst. Det organiske lag vaskes med vand, tørres og koncentreres under reduceret tryk. Remanensen løsnes med ether. Ved denne fremgangsmåde opnås 4,1 15 g af titelforbindelsen som et pulver.

IR(KBr, cm-1): 1780, 1725, 1674 NMR( 100 MHz, dg-DMSO, δ): 3,59 og 3,81 (ABq, J=18Hz, 2- CH2), 3,63 (s, C0CH2C0), 3,93 (s, tetrazol-CH3), 4,21 og 438 (ABq, J=13Hz, 3-CH2), 4,38 (s, BrCH2), 5,07 (d, J= 20 5Hz, 6H), 567 (dd, J=5 og 8Hz, 7H), 9,06 (d, J=8Hz, CONH).

Referenceeksempel 5

Fremstilling af 7-(4-brom-3-oxobutyrylamino)-3-carbamoyl-oxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre

En opløsning af 0,101 g diketen i 2 ml methylenchlorid 25 afkøles til -30eC, og der tilsættes dråbevis en opløsning af 0,208 g brom i 1,3 ml carbontetrachlorid. 0,303 g 7-amino-3-c arbamoy1oxymethy1-3-cephem-4-carboxy1syre og 0,303 g triethylamin opløses særskilt i 4 ml methylenchlorid og afkøles. Ovenstående reaktionsblanding sættes 30 dråbevis ti denne blandede opløsning, og efter at køle-apparatet er fjernet for at lade væskens temperatur stige til stuetemperatur, omrøres der i 30 minutter. Methylen-chloridet destilleres af under reduceret tryk, og remanensen omrystes kraftigt med 20 ml 10%'s phosphorsyre, 30 ml 35 methylethylketon og 5 ml af en mættet vandig opløsning af

DK 161081 B

48 natriumchlorid. Det organiske lag skilles fra, vaskes med 5 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid og tørres. Opløsningsmidlet fjernes under reduceret tryk, og 5 efter tilsætning af 5 ml ether til remanensen bliver denne gnedet mod beholderens væg, hvorefter titelforbindelsen opnås som et pulver. Udbytte 0,148 g.

IR(KBr, cm"3·): 3390, 3000, 1780, 1740, 1550, 1400, 1330 UV Xmax (e, i vand): 262 nm (0,89 x 10^) 10 NMR( 100 MHz, dg-DMSO, δ): 3,48 og 3,66 (ABq, J=18Hz, 2-CH2), 3,64 (s, C0CH2C0), 4,40 (s, BrCH2), 4,64 og 4,93 (ABq, J=13Hz, 3-CH2), 5,11 (d, J=5Hz, 6H), 5,68 (dd, J=5 og 9Hz, 7H), 6,5 (br. s, OCONH2), 9,04 (d, J=9Hz, CONH). Elementæranalyse for Ci3Hi4N307SBr: 15 Beregnet: C 35,79 H 3,23 N 9,61

Fundet: C 35,84 H 3,25 N 8,26

Referenceeksempel 6

Fremstilling af 7-(4-chlor-3-oxobutyrylamino)-3-(mandel-yloxymethy1)-3-cephem-4-carboxylsyre 20 En opløsning af 0,26 g (3 mmol) diketen i 3 ml methylenchlorid afkøles -30°C, og der tilsættes dråbevis en opløsning af 0,21 g (3 mmol) chlor i 3 ml methylenchlorid.

1,09 g (3 mmol) 7-amino-3-(mandelyloxymethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre og 0,84 ml (6 mmol) triethylamin opløses 25 særskilt i 15 ml methylenchlorid og afkøles til -20°C. Ovennævnte reaktionsblanding sættes dråbevis til denne blandede opløsning, og efter at køleapparatet er fjernet for at lade væskens temperatur stige til stuetemperatur, omrøres blandingen i 30 minutter. Methyienchioridet 30 destilleres af under reduceret tryk, og remanensen omrystes kraftigt med 10 ml 10%'s phosphorsyre, 30 ml vand, 10 ml tetrahydrofuran og 100 ml ethylacetat. Det organiske lag skilles fra, vaskes med vand og tørres. Opløsningsmidlet fjernes under reduceret tryk, og der 35 tilsættes 100 ml ether til remanensen, som gnides mod

DK 161081B

49 beholderens væg. Ved denne fremgangsmåde opnås 1,20 g af titelforbindelsen som et pulver.

IR(KBr, cm"1): 1784, 1741, 1668, 1538 5 NMR( 100 MHz, dg-DMSO, δ): 3,25 (br. s, 2-CH2), 3,58 (s, COCH2CO), 4,56 (s, C1CH2-) , 4,78 og 5,07 (ABq, J=13Hz, 3-CH2), 5,06 (d, J=5Hz, 6H), 5,18 (s, >CH-), 5,68 (dd, J=5 og 8Hz, 7H), 7,3 til 7,5 (m, C6H5-), 9,02 (d, J=8Hz, -C0NH-).

10 Referenceeksempel 7

Fremstilling af l-methoxymethyl-lH-tetrazol-5-thiol

En blanding af 3,2 g natriumazid, 6 ml ethanol og 16 ml vand opvarmes under tilbagesvaling og omrøring, og der tilsættes dråbevis en opløsning af 5,2 g methoxymethyliso-15 thiocyanat i 2 ml ethanol. Blandingen tilbagesvales i 45 minutter. Ethanolet fjernes derefter under reduceret tryk, og remanensen gøres sur med 1 N saltsyre og ekstraheres med ethylacetat. Ekstrakten tørres og koncentreres til tørhed, og den krystallinske remanens omrøres med n-hexan 20 og filtreres. Krystallerne omkrystalliseres fra toluen.

Ved denne fremgangsmåde opnås 1,4 g af titelforbindelsen.

Smp. 80-82°C.

IR(KBr, cm"1): 1503, 1360, 1080 NMR(60 MHz, dg-DMSO, δ): 3,36 (s, CH3), 5,48 (s, CH2).

25 Elementær analyse for C3HgN40S:

Beregnet: C 24,66 H 4,14 N 38,35

Fundet: C 24,71 H 4,06 N 37,24

Referenceeksempel 8 På samme måde som i referenceeksempel 7 omsættes natrium-30 azid med de tilsvarende isothiocyansyreestere for at opnå de følgende 1-substituerede lH-tetrazol-5-thiolforbindel-ser, der tjener som eksempler.

DK 161081B

50 (1) l-(2-N,N-Dimethylaminoethyl)-lH-tetrazol-5-thiol med smp. 217-219°C (omkrystalliseret fra vandig ethanol).

NMR(60 MHz, D20 + NaHC03, δ): 3,03 (s, N(CH3)2), 3,58 5 (t, CH2), 4,70 (t, CH2).

(2) l-Methylthiomethyl-lH-tetrazol-5-thiol.

IR(KBr, cm”1): 1495, 1351 NMR(60 MHz, dg-DMSO, δ): 2,25 (s, SCH3), 5,35 (s, CH2), 10,1 (br. s, tetrazol-NH).

10 Referenceeksempel 9

Fremstilling af l-N,N-dimethylcarbamoylmethyl-lH-tetrazol- 5-thiol (1) En blanding af 6,84 g glycin-N,N-dimethylamid, 9,38 ml triethylamin og 150 ml methylenchlorid omrøres, og der 15 tilsættes 5,09 g carbondisulfid og 9,51 g methyliodid i den nævnte rækkefølge. Blandingen omrøres derefter ved stuetemperatur i 1 time. Denne reaktionsblanding omrystes kraftigt med 200 ml af en 5%’s vandig opløsning af phos-phorsyre, og det organiske lag skilles fra, vaskes med 20 vand, tørres og koncentreres under reduceret tryk. Den krystallinske remanens omrøres med n-hexan, isoleres ved filtrering og tørres. Ved denne fremgangsmåde opnås 12,2 g methyl-2-(N,N-dimethylcarbamoylmethyl)-dithiocarbamat.

IR(KBr, cm-1): 1626, 1543 25 NMR(60 MHz, dg-DMSO, δ): 2,62 (s, CH3S), 3,02 (s, N(CH3)2), 4,42 (d, J=4Hz, CH2), 8,30 (br. s, NH). 1

En blanding af 10 g methyl-2-(N,N-dimethylcarbamoylmethyl) -dithiocarbamat, 3,7 g natriumazid og 50 ml ethanol omrøres under opvarmning til 80°C i 6 1/2 time. Reaktions- 30 blandingen indstilles til pH-værdi 2,5 med 10% saltsyre og koncentreres til tørhed under reduceret tryk. Remanensen ekstraheres med 100 ml methanol. Den methanoliske ekstrakt behandles med aktiveret carbon og koncentreres til tørhed,

DK 161081B

51 og det tilbageblivende pulver omkrystalliseres fra vand.

Ved denne fremgangsmåde opnås 6,7 g af titelforbindelsen, smp. 195-198°C (dekomp.).

5 NMR (60MHz, d6-DMSO, δ): 2,87 og 3,07 (hver s, N(CH3)2), 5,21 (s, CH2CO).

Elementæranalyse for C5H7N5S:

Beregnet: C 32,07 H 4,85 N 37,41

Fundet: C 32,11 H 4,90 N 37,74 10 Referenceeksempel 10

Fremstilling af l-(2-carboxyethyl)-lH-tetrazol-5-thiol (1) I 100 ml methylenchlorid suspenderes 10,6 g β-alanin-benzylester-p-toluensulfonat, og der tilsættes efter omrøring 6,06 g triethylamin og 2,28 g carbondisulfid i 15 den nævnte rækkefølge. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 40 minutter. Derefter tilsættes 4,26 g methyl-iodid, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i yderligere 2 timer. Denne reaktionsblanding vaskes med vand, tørres og koncentreres til tørhed under reduceret tryk, 20 hvorved der opnås 8,3 g methyl-2-(2-benzyloxycarbonyl-ethyl)dithiocarbamat som et olieagtigt produkt.

IR(rent, cm“l): 3300, 1730 NMR(60 MHz, CDCI3, δ): 2,57 (s, CH3S), 2,76 (t, J=6Hz, CH2C0), 4,03 (m, NHCH2), 5,17 (s, Ph-CH2), 7,25 (s, 25 C6H5), 77 (br. s, NH). 1

En blanding af 8,3 g methyl-2-(2-benzyloxycarbonyl-ethyl)dithiocarbamat, 1,95 g natriumazid, 10 ml ethanol og 40 ml vand omrøres ved en forhøjet temperatur på 80°C i 1 time. Efter afkøling fortyndes reaktionsblandingen med 100 30 ml vand og omrystes med ethylacetat. Det vandig lag skilles fra, indstilles til pH-værdi 1 med 10% saltsyre og ekstraheres med ethylacetat. Ekstrakten vaskes med vand, tørres og koncentreres til tørhed under reduceret tryk.

DK 161081 B

52

Ved denne fremgangsmåde opnås 3,84 g l-(2-benzyloxycarb-onylethyl)-lH-tetrazol-5-thiol som et olieagtigt produkt.

IR(rent, cm“l): 1725 5 NMR(60 MHz, CDCI3, δ): 3,09 (t, J=6Hz, CH2CO), 4,54 (t, J=6Hz, tetrazol-CH2), 5,15 (s, Ph-CH2), 7,33 (s, CgHs-).

(3) En blanding af 3,84 g l-(2-benzyloxycarbonylethyl)-lH-tetrazol-5-thiol, 30 ml tetrahydrofuran og 29 ml 1 N natriumhydroxid henstår ved stuetemperatur i 2 timer.

10 Reaktionsblandingen vaskes med ethylacetat, og det vandige lag indstilles til pH-yærdi 1 med 10% saltsyre og ekstra-heres med ethylacetat. Ekstrakten vaskes med en vandig opløsning af natriumchlorid, tørres og koncentreres til tørhed. Ved denne fremgangsmåde opnås 1,9 g af titelfor-15 bindeisen som et pulver.

IR(Nujol, cm“l): 1708 NMR(60 MHz, dg-DMSO, δ): 2,88 (t, J=7Hz, CH2CO), 4,40 (t, J=7Hz, tetrazol-CH2), 12,2 (br. s, NH og C02H).

Referenceeksempel 11 20 Fremstilling af l-(carbamoylmethyl)-lH-tetrazol-5-thiol

Reaktionerne som er beskrevet i referenceeksempel 10 (1) og (2) udføres under anvendelse af glycin-benzylester-p-toluensulfonat i stedet for (3-alanin-benzylester-p-toluensulfonat, hvilket giver 1-benzyloxycarbonylmethyl-25 lH-tetrazol-5-thiol, som derefter omdannes med alkoholisk ammoniak til titelforbindelsen.

Referenceeksempel 12

Fremstilling af 2-methoxymethyl-l,3,4-thiadiazol-5-thiol (1) En opløsning af 4,9 g kaliumhydroxid i 30 ml methanol 30 omrøres under isafkøling, og der tilsættes 8,56 g methoxyacetylhydrazid og 5,3 ml carbondisulfid. Blandingen

DK 161081B

53 omrøres under afkøling i 30 minutter og derefter ved stuetemperatur i 30 minutter. Methanolet fjernes under reduceret tryk, og remanensen løsnes med ethanol, hvorved 5 der opnås et krystallinsk pulver. Pulveret isoleres ved filtrering og tørres. Ved denne fremgangsmåde opnås 10,5 g kalium-3-(methoxyacetyl)-dithiocarbazinat.

(2) I 40 ml isafkølet koncentreret svovlsyre opløses 10,5 g kalium-3-(methoxyacetyl)dithiocarbazinat, og opløsningen 10 omrøres under isafkøling i 10 minutter. Den hældes derefter over 150 g is og omrøres, hvorefter der udskilles krystaller. Disse krystaller opsamles ved filtrering, vaskes med koldt vand og tørres. Ved denne fremgangsmåde opnås 4,8 g af titelforbindelsen.

15 NMR( 60 MHz, CDCI3, δ): 3,46 (s, CH3), 4,60 (s, CH2), 12,33 (br. s, thiadiazol-NH).

Elementæranalyse for C4H6N2S2:

Beregnet: C 29,61 H 3,73 N 17,27

Fundet: C 29,43 H 3,98 N 17,34 20 Referenceeksempel 13

Fremstilling af 3-hydroxymethyl-4-methyl-l,2,4-triazol- 5-thiol

En blanding af 9 g glycolsyrehydrazid, 7,3 g methyliso-thiocyanat, 50 ml methanol og 50 ml ethanol opvarmes under 25 tilbagesvaling i 5 timer. Efter tilsætning af 2,3 g metallisk natrium tilbagesvales blandingen i yderligere 24 timer. Reaktionsblandingen koncentreres under reduceret tryk, og remanensen opløses i 150 ml vand og indstilles til pH-værdi 2,5 med phosphorsyre. De fremkomne krystaller 30 opsamles ved filtrering og omkrystalliseres fra ethanol.

Ved denne fremgangsmåde opnås 5,2 g af titelforbindelsen.

Smp. 199-201°C.

NMR (60 MHz, dg-DMSO, δ): 3,54 (s, CH3), 4,56 (s, CH20). Elementæranalyse for C4H7N3O3S: S*·

DK 161081 B

54

S

Beregnet: C 33,08 H 4,86 N 28,94 |

Fundet: C 32,99 H 4,90 N 28,65 j

Referenceeksempel 14 5 Fremstilling af 3-carbamoyl-4-methyl-l,2,4-triazol-5-thiol I 100 ml ethanol opløses 5,3 g 4-methYlthiosemicarbazid, 5,9 g ethyloxaminat og 1,6 g metallisk natrium, og opløsningen opvarmes under tilbagesvaling i 48 timer. Efter afkøling fortyndes reaktionsblandingen med 100 ml vand og 10 gøres sur med phosphorsyre. De fremkomne krystaller opsamles ved filtrering og omkrystalleres fra vand. Ved denne fremgangsmåde opnås 2,0 g af titelforbindelsen.

NMR (60 MHz, dg-DMSO, δ): 3,67 (s, CH3), 7,90 og 8,13 (hver s, CONH2), 3,30 (s, SH), 12,5 (s, triazol-NH).

15 Referenceeksempel 15

De funktionelle grupper i de nitrogenholdige heterocycli- ; ske thioler, som blev opnået i de ovenstående referenceeksempler, underkastes hver især en per se kendt kemisk overføringsreaktion for at fremstille de følgende 20 nitrogenholdige heterocycliske thioler.

(1) l-Carboxymethyl-lH-tetrazol-5-thiol.

1-N,N-DimethylcarbamoylmethYl-lH-tetrazol-5-thiol hydrolyseres med en opløsning af natriumhydroxid. Smp. 156-160°C (dekomp.).

25 IR(KBr, cm-1): 1713 NMR( 60 MHz, dg-DMSO, δ): 5,03 (s, CH2C0), 12,09 (br. s, NH og -C00H).

(2) l-(2-Hydroxyethyl)-lH-tetrazol-5-thiol. l-Benzyloxycarboriylmethyl-lH-tetrazol-5-thiol reduceres

DK 161081 B

55 med lithiumaluminiumhydrid-tetrahydrofuran. Smp.

137-139°C.

NMR (60 MHz, dg-DMSO, δ): 3,8 (m, CH20), 4,2 (m, tetr-5 azol-CH2-).

(3) 2-(2-N,N-Dimethylaminoethyl)-1,3,4-thiadiazol-5-thiol.

2-(N,N-Dimethylcarbamoylmethyl)-1,3,4-thiadlazol-5-thiol reduceres med borhydrid-tetrahydrofuran.

NMR (60 MHz, D20, δ): 2,47 (s, N(CH3)2, 3,0-3,3 (A2B2-møn-10 ster m. CH2CH2).

Claims

DK 161081 B .PATENTKRAV Syn-isomere 7-(4-halogen-2-hydroxyimino-3-oxobutyryl-amino)-3-(substitueret methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre-5 derivater til anvendelse som mellemprodukter ved fremstillingen af 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-iminoacetamido ]-3-(substitueret methyl)-3-cephem- 4-carboxylsyre-(syn)-isomere med den almene formel HN ς vs I s\ HN_ll-C-CONH--^ > (I) ΝΧ°Η VNYSch2y COOH 10 hvori Y betyder hydrogen, hydroxyl, acetoxy, carbamoyloxy, kvaternært ammonium med formlen ; ^ hvori Z betyder hydrogen eller carbamoyl, eller Y betyder en nitrogenholdig heterocyclisk thiogruppe med formlen N-N N-.-R2 N-N N-N i II li II |I II i I -SV ' "s_sV2 tv r1 r1 15 /r2 N-N N- -;N N-f -s-KX^· 's'U' -s‘Un eiier _s· Vr3 R3 > DK 161081 B hvori R1 betyder hydrogen eller en gruppe med formlen ~(CH2)nP, hvori n er 1, 2 eller 3, og P betyder hydrogen, hydroxyl, C(l-4)-alkoxy, C(l-4)-alkylthio, acetylamino, 5 guanidino, en gruppe med formlen -C00R4, hvor R4 betyder hydrogen, C(1-4)-alkyl, en gruppe med formlen R5 -CON^ r6 10 hvor r5 og R® hver for sig betyder hydrogen eller C(1-4)-alkyl, eller R4 betyder en gruppe med formlen R5 -< >6 15 hvori R5 og R® har den ovenfor angivne betydning, R2 betyder hydrogen, amino, trifluormethyl, hydroxy-C(l-4)-alkylamino, mono- eller di-(C(l-4)-alkylamino-C(l-4)-alkylamino, acetoxy-C(1-4)-alkyl, carbamoyl, en gruppe med formlen -NHCOOR7, hvori R7 betyder C(l-4)-alkyl, en gruppe 20 med formlen -8-(0¾ )nQ, hvor n er 1, .2 eller 3, og Q er carboxyl, hydroxyl eller sulfo, eller en gruppe med formlen -(CH2)nP, hvori n og P har de ovenfor angivne betydninger, og R^ betyder hydrogen eller C(1-4)-alkyl, eller farmaceutisk acceptable salte eller estere deraf, 25 kendetegnet ved, at de har den almene formel W-CH-COC-CONH-,_/ \ N I (II) \h >-\A O T CH Y COOH DK 161081B | 58 | hvori,W er chlor eller brom, og Y har den ovenfor anførte betydning, samt salte og estere deraf. j i i i |