DK159783B

DK159783B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 7-oe2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-iminoacetamidoaa-3-(substitueret methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre-(syn)-isomere eller farmaceutisk acceptable salte eller estere deraf samt syn-isomere 2-(4-thiazolin-4-yl)-eddikesyrederivater

Info

Publication number: DK159783B
Application number: DK270377A
Authority: DK
Inventors: Mitsuo Numata; Isao Minamida; Susumu Tsushima
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Priority date: 1976-09-08
Filing date: 1977-06-17
Publication date: 1990-12-03
Also published as: AU2627177A; DE2760271C2; CH634578A5; SE464581B; DK621189D0; FR2408612A1; DE2727753C2; HU182053B; FR2408612B1; MX5198E; PH19543A; US4264595A; DK161081B; NL189354C; JPS6011713B2; PT66735A; FI67384B; DE2760448C2; FI771951A7; CH630923A5

Description

DK 159783B

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte (7-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)- 2-hydroxy-iminoacetamido ]-3-(substitueret methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre-(syn)-isomere med den almene formel

HN Q

Vi .

HN_l-C-CONH_,_/ \ N I i1»

Vh 0/~nnA

COOH

hvori Y betyder hydrogen, hydroxyl, acetoxy, carbamoyloxy, kva-ternært ammonium med formlen +'r^V'z -N ^A\ \=y hvori Z betyder hydrogen eller carbamoyl, eller Y betyder en nitrogenholdig heterocyclisk thiogruppe med formlen

N— N N_.-tt2 N—N N — N

-S-([ , -S-P *N , -S-P jl , -S-P jl , »1 Ά »n “ R1 K1 ft2 N—N N —N N / -S-^ , -S-([ H , -S-J In eller -S-P ^ S" Nr S^w3 E F ål hvori R1 betyder hydrogen eller en gruppe med formlen -(CH2)nP, hvori n er 1, 2 eller 3, og P betyder hydrogen, hydroxyl, C(l-4)- 2

DK 159783 B

alkoxy, C(1-4)-alkylthio, acetylamino, guanidino, en gruppe med formlen -COOR4, hvor betyder hydrogen, C(1-4)-alkyl, en gruppe med formlen R5 -CON^ ^r6 hvor R5 og R^ hver for sig betyder hydrogen eller C( 1-4)-alkyl, eller R^ betyder en gruppe med formlen R5 -ν' \r6 hvori R5 og R6 har den ovenfor angivne betydning, R2 betyder hydrogen, amino, trifluormethyl, hydroxy-C(l-4)-alkylamino, monoeller di-C(l-4)-alkylamino-C(l-4)-alkylamino, acetoxy-C(l-4)-alkyl, carbamoyl, en gruppe med formlen -NHCOOR?, hvori b7 betyder C(l-4)-alkyl, en gruppe med formlen -S-(CH2)nQ, hvor n er 1, 2 eller 3, og Q er carboxyl, hydroxyl eller sulfo, eller en gruppe med formlen -(0¾) n*r hvori n og P har de ovenfor angivne betydninger, og r3 betyder hydrogen eller C(1-4)-alkyl, eller farmaceutisk acceptable salte eller estere deraf.

Idag er adskillige typer halvsyntetiske cephalosporiner, som er kendt for at have brede antibakterielle spektre, tilgængelige på markedet og klinisk anvendt til behandling af forskellige infektionssygdomme. Imidlertid har det vist sig, at disse midler i praksis ikke er aktive mod alle de patogene bakterier, som træffes i kliniske situationer. F.eks. har det vist sig, at visse stammer af Escherichia coli, visse Citrobacter-bakterier, størstedelen af de indol-positive patogene bakterier af slægten Proteus, slægten Enterobacter, slægter Serratia og slægten Pseudomonas er cephalo-sporinresistente (Warren E. Wick, Cephalosporins and Penicillins, Chemistry and Biology, kapitel 11, udgivet af E.H. Flynn, Academic 3 DK^97836

Press, 1972). Derfor er der stadig et behov for nye cephalospo-riner, som er klinisk anvendelige mod disse patogener.

Fra DE offentliggørelsesskrift nr. 2.556.736 kendes cephem-forbindelser, som er nært beslægtede med forbindelserne med formlen I, og som har antibiotisk virkning. Det har vist sig, at de omhandlede forbindelser har en overraskende god antibakteriel virkning i forhold til de kendte cephemforbindelser, hvilket illustreres nærmere i det følgende.

De omhandlede forbindelser viser ikke kun en i praksis tilstrækkelig aktivitet mod gram-positive bakterier, herunder Staphylococcus aureus, men viser også aktivitet mod et bredt spektrum af gram-negative bakterier, herunder Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Proteus morganii, Proteus rettgeri, Citrobacter freundii, Enterobacter cloacae og Serratia marcescens. Disse overlegne karakteristika er udtalte i forbindelsernes aktivitet mod de mutanter af de førnævnte bakterier, som danner /3-lactamase (cephalosporinase).

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at man a) omsætter et syn-isomert 7-(4-halogen-2-hydroxy-imino-3-oxobu-tyrylamino)-3-(substitueret methyl)-3-cephem-4-carboxylsyrederivat med formlen

S

W'-CE.COC-CQNH-,_/ \ s π 1 (ii>

X0H # Nj^CEpI COOH

hvori W betyder chlor eller brom, og Y har den ovenfor angivne betydning, eller et salt deraf med et thiocarbamid, b) omsætter et syn-isomert 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hy-droxy-iminoacetamido ]-3-acyloxymethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre-derivat med formlen

DK 159783 B

4

™ S

Vil HN—'J-C-CONH__/ \ S I (HI) xoh 0λ~

GODH

hvori M betyder acyloxy, eller _et salt deraf med vand, en amin svarende til en kvatemær ammoniumgruppe med formlen ___ z hvor Z har den ovenfor angivne betydning, eller en thiol, som svarer til den nitrogenholdige, heterocycliske thiogruppe ifølge den ovenfor definerede substituent Y, eller et salt deraf eller c) acylerer et 7-aminocephalosporinderivat med formlen %-— ._N λ (IV) 0 I 2

GODH

hvori Y har den ovenfor angivne betydning, eller et salt deraf med et acyleringsmiddel afledt af et syn-isomert 2-(4-thiazolin-4-yl)-eddikesyrederivat med formlen s Y Ij (V)

HN_l-C-COOH

H

N

V·9 hvori r8 betyder hydrogen eller en beskyttelsesgruppe, og R^ betyder hydrogen eller en beskyttelsesgruppe, og, om ønsket, afspal- 5

DK 159783 B

ter beskyttelsesgrupper fra en dannet forbindelse og, om ønsket, esterificerer en dannet forbindelse.

Opfindelsen angår tillige syn-isomere 2-(4-thiazolin-4-yl)-eddikesyrederivater med ovenstående formel V, der er nyttige som udgangsmaterialer ved den omhandlede fremgangsmåde.

Når en forbindelse med formlen I indeholder en kvaternær ammoniumgruppe , kan den antage en betainstruktur, f.eks.:

HN S

Y)t HN -C-CONH_p -n n« C00" hvor Z har de ovenfor angivne betydninger. Ved anvendelse til bekæmpelse af bakterier kan forbindelsen I anvendes som den frie amfoion eller i andre former, såsom farmaceutisk acceptable salte, f.eks. saltene med ikke-toksiske kationer, såsom natrium og kalium, saltene af basiske aminosyrer, såsom arginin, ornithin, lysin og histidin; saltene af polyhydroxyalkylaminer, såsom N-methyl-glucamin, diethanolamin, triethanolamin, trishydroxymethylamino og trishydroxymethylaminomethan; saltene af uorganiske syrer, såsom saltsyre, svovlsyre, salpetersyre og phosphorsyre og saltene af organiske syrer (f.eks. oxalsyre, fumarsyre og vinsyre). Forbindelsen I eller dens ovennævnte salte kan også anvendes som biologisk aktive esterderivater i 4-carboxylfunktionen, hvilke esterderivater vil bidrage til et forhøjet indhold i blodet og en forøget varighed af virkningen. Som estere, der er nyttige til det ovennævnte formål kan f.eks. nævnes alkoxy(C^_^)methylestere, alkoxy(C-^_^)ethylestere, alkyl(C^_^)thiomethylestere, alkyl carbonylmethylestere og alk- oxy(C1_^) carbonyloxyalkyl(C^_^)estere (f.eks. alkoxy(C-^)carbonyl-

DK 159783 B

6 oxymethyl). Nærmere bestemt kan esterne f.eks. være methoxyethyl-estere, ethoxymethylestere, isopropoxymethylestere, a-methoxyethyl-estere, α-ethoxyethylestere, ethylthiomethylestere, isopropylthio-methylestere, pivaloyloxymethylestere, α-acetoxybutylestere og 1-(ethoxycarbonyloxy)ethylestere.

Forbindelserne med formlen I kan antage to tautomere former ved tautomeriseringen, som skildres herunder.

“L S h2n s y\ _ \i- HN—1-C-CO-Ceph N N_Ll-C-CO-Ceph tt ^ rr

N N

X0H N OH

(Thiazolinform) (Thiazolform)

S

hvori Geph betyder -NH-r —r ^

COOH

hvori I har den ovenfor angivne betydning.

Strukturen af denne type forbindelser er undersøgt af mange forskere, og litteraturen henviser til thiazolinformen i adskillige tilfælde (G.J. Kruger and G. Gafner, Acta Cryst. B 27} 326, 1971) og J.M. Vandenbelt and L. Doub, J. Am. Chem. Soc. 66, 1633, 1944) og thiazolformen i andre tilfælde (L.M. Werbel, Chem. &x Ind. (1966), 1634).

Baseret på de forskellige bestemmelser må de omhandlede forbindelser med formlen I formodes overvejende at antage thiazolin-formen, idet denne bestemte form stabiliseres ved bidrag fra hydrogenbindingen, som vist herunder.

7

DK 159783 B

HN S

ΥΪΙ /H-l H C=N \ / \

'O=C OH

\

Ceph hvori symbolet Ceph har den ovenfor angivne betydning. Som det er tilfældet ved enhver ligevægtsrelation af denne type, er den ovenstående ligevægt tilbøjelig til at forskydes i den ene retning som følge af de forskellige betingelser, hvorunder de omhandlede forbindelser kan anbringes, såsom pH og polaritet af opløsningsmidlets temperatur, typen af substituenter og andre parametre. De omhandlede forbindelser med formlen I kan derfor betegnes ved ethvert af disse alternative systemer eller dertil svarende nomenclaturer. I denne beskrivelse og de tilhørende krav er alle de omhandlede forbindelser imidlertid betegnet som deres thiazo-linformer. Den foreliggende opfindelse dækker alle de ovennævnte tautomere.

De omhandlede forbindelser med formlen I er aktive mod såvel grampositive som gram-negative bakterier, som nævnt ovenfor. De kan, ligesom de kendte cephalosporiner, administreres sikkert i form af pulvere eller som opløsninger, suspensioner, salver eller andre doseringsformer, som formuleres med fysiologisk acceptable bærere, grundlag eller excipienser på konventionel måde. De nævnte bærere, grundlag og excipienser omfatter vand, fysiologisk saltopløsning til injektion eller opløsning, og stivelser og lactose til pulvere. Blandt disse foretrækkes fysiologisk saltopløsning.

De omhandlede forbindelser med formlen 1 kan f.eks. anvendes som sikre lægemidler til forebyggelse eller terapi af infektionssygdomme, som forårsages af bakterier, herunder betændelsessygdomme, luftvejsinfektioner, galdegangsinfektioner, tarminfektioner, urin-rørsinfektioner og gynæko-obstetriciske infektioner. Værtsorganis 8

DK 159783 B

merne, hvortil forbindelserne skal administreres, omfatter mennesker og varmblodede dyr, herunder rotter, mus, hunde og heste.

Til terapien af de ovennævnte sygdomme, f.eks. urinrørsinfektionerne, administreres de følgende forbindelser, der er valgt som eksempler blandt de øvrige omhandlede slutprodukter, fortrinsvis intra-muskulært eller intravenøst i en daglig dosismængde på ca. 1 til 20 mg pr. kg legemsvægt for voksne mennesker, delt i 3 til 4 doser pr. dag.

Natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]- 3-methyl-3- cephem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-aeetamido]- 3-acetoxymethy1-3-cephem-4-carboxy1at (syn-isomer), natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]- 3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]- 3-(l-methyltetrazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer) , 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-[l-(2-N,N-dimethylamino ethyl)tetrazol-5-yl]thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer), natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]- 3-[1-(3-N,N-dimethylaminopropyl)tetrazol-5-yl]thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin~4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]- 3- (1-carbamoylmethylt etrazol-5-yl) thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]- 3-[1-(2-hydroxyethyl)tetrazol-5-yl]thiornethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[2-(2-imino-4~thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]- 3-(l,3,4-thiadiazol-2-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer) , 9

DK 159783 B

natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]- 3- (2-methyl-l,3,4-thiadiazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-i s omer), 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-[2-(2-Ν,Ν-dimethylaminoethyl)-1,3, 4-thiadiazol-5-yl]thiomethyl-3-cephem- 4- carboxylsyre (syn-isomer), natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]- 3-(2-hydroxymethyl-l,3,4-thiadiazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]- 3-(2-N,N-dimethylcarbamoylmethyl-lj3,4-thiadiazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]- 3- [2-(2-hydroxyethylthio-l,3)4-thiadiazol-5-yl]thiomethyl-3-cephem- 4- carboxylat (syn-isomer), dinatrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-(2-carboxymethyl-l,3 >4-thiadiazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4- carboxylat (syn-isomer), 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-(3-methyl-1,2,4-thiadiazol-3-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer), natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-(1,2,3-triazol-4-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-(4-methyl-l,2,4-triazol-3-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-(3)4-dimethyl-l,2,4-triazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[2-(2-imino-4-thiaz olin-4-yl)-2-hydroxyimino-acet amido]- 3- (3-hydroxymethyl-4-methyl-l,2,4-triazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem- 4- carboxylat (syn-isomer),

DK 159783B

10 natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-(2-methyl-l,3,4-oxadiaxzol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), dinatrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-(4-carboxymethylthiazol-2-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-(2-methoxymethyl-1,3,4-'thiadiazol-5-yl)-thiorne thyl-3-c ep hem-4-carboxylat (syn-isomer), natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-[2-(2-hydroxyethyl)-1,3,4-thiadiazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer)} natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]- 3- (2-ethoxycarbonylmethyl-l, 3,4-'thiadiazol-5-yl) thiomethyl-3-cephem- 4- carboxylat (syn-isomer).

Med hensyn til de antibakterielle egenskaber har forbindelsen I og et salt deraf højere antibakterielle aktiviteter end en ester af forbindelsen I som sådan. Imidlertid hydrolyseres esteren, f.eks. i værtens levende væv og omdannes til forbindelsen I eller et salt deraf.

Ved fremgangsmåde a) omsætter man en forbindelse med formlen II eller et salt eller en ester deraf med thiocarbamid. Saltene af forbindelserne II omfatter syreadditionssalte (f.eks. de salt-, svovl- og salpetersure salte) med den basiske funktion i forbindelsen II og baseadditionssalte (f.eks. natrium-, kalium-, pyri-din- og triethylaminsaltene) med den sure funktion i forbindelsen II. Esterne af forbindelsen II er sådanne, som svarer til de ovennævnte estere af forbindelserne I.

11

DK 159783 B

Mængden af thiocarbamid i forhold til forbindelsen II eller et salt eller en ester deraf er 1,0 til 5,0 mol pr. mol af forbindelsen II, dens salt eller dens ester. Reaktionen udføres normalt ved at blande forbindelsen II, dens salt eller dens ester med thiocarbamid ved en temperatur på 0 til 80°C. Reaktionen udføres fortrinsvis i et opløsningsmiddel. Opløsningsmidlet er ønskeligt som et opløsningsmiddel, der ikke interfererer med reaktionen. Med fordel anvendes fortrinsvis et af de såkaldte polære aprote opløsningsmidler, såsom dimethylformamid, dimethylacetamid, dime-thylsulfoxid, acetonitril og hexamethylphosphoramid, eller en blanding af disse. Reaktionstiden varierer med typen af udgangsmaterialet, reaktionstemperaturen, typen af opløsningsmidlet eller andre reaktionsbetingelser. Reaktionen fuldendes imidlertid i løbet af 0,5 time til 3 dage.

Ved fremgangsmåde b) omsætter man en forbindelse med formlen III med vand, en amin, som svarer til det kvaternære ammonium, eller en nitrogenholdig heterocyclisk thiol.

Saltene og esterne af forbindelsen III er af samme type som dem af forbindelsen II.

Acyloxygruppen M kan f.eks. være acetyloxy, 3-oxobutyryloxy, 3-carb-oxypropionyloxy, 2-carboxybenzoyloxy, mandelyloxy, 2-(N-carboethoxy-carbamoyl)-benzoyloxy, 2-(N-carboethoxysulfamoyl)benzoyloxy eller 2-carboxy-3 (eller 6)~nitrobenzoyloxy. Denne overføringsreaktion er, hvis den kun ses i sammenhæng med cephemringens 3-stillede gruppe, som skal overføres, en nucleofil substitutionsreaktion med 3-acyl-oxygruppen, og er som sådan i det væsentlige identisk med de nucleo-file substitutionsreaktioner, der er beskrevet i et antal af den kendte tekniks publikationer og patenter (f.eks. E. H. Flynn (red.) "Cephalosporins and Penicillins", kapital 4, del 5, 151, 1972, Academic Pressj japansk patentskrift nr. 17936/1964, nr. 26972/1964 og nr. 112$3/l96é). Derfor kan den ovennævnte reaktion udføres ved en af disse kendte fremgangsmåder eller enhver fremgangsmåde, som ligner disse.

12

DK 159783 B

Hvad. angår reaktionen mellem forbindelsen III, dens salt eller dens ester og vand forløber reaktionen i overensstemmelse med den kendte hydrolyse. Hydrolysereaktionen udføres normalt ved en temperatur på mellem -20°C og +50°C. Reaktionen forløber hurtigere under tilstedeværelse af en uorganisk base (f.eks. natriumhydroxid eller kaliumhydroxid). Reaktionen forløber fuldstændigt i løbet af 4$ timer.

Med hensyn til reaktionen mellem aminen og forbindelsen III eller dens salt, er aminen en sådan, som svarer til det kvaternære ammonium. Således kan aminen, som skal anvendes i reaktionen, være en pyridin-forbindelse med formlen O' hvori Z har den ovenfor angivne betydning. Mængden af aminen er 1,0 til 10 mol pr. mol af forbindelsen III eller dens salt deraf. Reaktionen udføres ved en temperatur på mellem 0 og 100°C. Reaktionen udføres med fordel under tilstedeværelse af et organisk eller uorganisk opløsningsmiddel. Opløsningsmidlet kan f.eks. være vand, deuteriumoxid, dimethylformamid, dimethylacetamid, dioxan, acetone, methanol, ethanol, dimethylsulfoxid, acetonitril eller tetrahydrofuran eller en blanding af disse. Reaktionen forløber fuldstændigt i løbet af 4$ timer.

Med hensyn til reaktionen mellem den nitrogenholdige heterocydiske thiol og forbindelsen III eller dens salt, er den nitrogenholdige heterocydiske thiol en thiol, som svarer til den ovenfor definerede nitrogenholdige heterocycliske thiogruppe. Den nitrogenholdige he- terocycliske thiol kan anvendes i fri form, men anvendes med fordel i form af et salt, såsom et alkalimetalsalt, f.eks. natrium- eller kaliumsaltet. Mængden af den nitrogenholdige heterocycliske thiol i forhold til forbindelsen III eller dens salt er 1,0 til 5,0 mol pr. mol af forbindelsen III eller dens salt. Reaktionen gennemføres fortrins 13

DK 159783 B

vis i et opløsningsmiddel. Opløsningsmidlet kan f.eks. være vand, deuteriumoxid eller et organisk opløsningsmiddel, som er letblandbart med vand og som ikke reagerer med udgangsmaterialerne, f.eks. dime-thylformamid, dimethylacetamid, dioxan, acetone, alkohol, acetonitril, dimethylfulfoxid eller tetrahydrofuran. Reaktionstemperaturen og -tiden afhænger bl.a. af udgangsmaterialet og opløsningsmidlet, og reaktionen udføres almindeligvis ved en passende temperatur på fra 0 til 100°C i en passende tid på nogle få minutter til adskillige dage. Reaktionen gennemføres omkring neutralitet, d.v.s. mellem pH 2 og pH $, fortrinsvis i området fra pH 5 til S. Reaktionen kan eventuelt gennemføres mere glat ved at indlemme et kvaternært ammoniumsalt med overfladeaktive egenskaber, såsom trimethylbenzylammoniumbromid, triethylbenzylammoniumbromid eller triethylbenzylammoniumhydroxid, i reaktionssystemet. Endvidere opnås fordelagtige resultater, når reaktionen gennemføres i en atmosfære af en inert gas, f.eks. nitrogen, således at oxidation med atmosfærisk luft forhindres.

Ved fremgangsmåde c) acylerer man en forbindelse med formlen IV eller et salt eller en ester deraf med et acyleringsmiddel afledt af en syn-isomerisk carboxylsyre med formlen V. Saltet eller esteren af forbindelsen IV er af samme type som dem af forbindelsen II. Beskyttelsesgruppen som repræsenteres af R8 er en let fraspaltelig beskyttelsesgruppe, der er velkendt fra peptidkemiens område. Således kan beskyttelsesgruppen R8 f.eks. være formyl, en al-kyl (Ci_4)carbonylgruppe (f.eks. acetyl eller propionyl), en substitueret alkyl(Ci_4)carbonylgruppe (f.eks. chloracetyl), en alkoxy(C^_4)carbonylgruppe (f.eks. tert.butoxycarbonyl), en alkoxy(Ci_4)alkyl(Ci_4)carbonylgruppe (f.eks. methoxyacetyl eller methoxypropionyl), en substitueret alkoxy(C^_4)carbonylgruppe (f.eks. trichlorethoxycarbonyl), en aralkyl(Cy_io)oxycarbonyl- gruppe (f.eks. benzyloxycarbonyl), eller en substitueret aralkyl (Cy-io)0^03^0^1^11??® (f.eks. p-nitrobenzyloxycarbonyl) eller et hydrogenatom.

14

DK 159783 B

Beskyttelsesgruppen R^ e* en letfraspaltelig, blandt kemikere velkendt beskyttelsesgruppe, som kan fjernes under milde betingelser. Beskyttelsesgruppen kan eksempelvis være en acylgruppe, såsom formyl, acetyl, chloracetyl, trifluoracetyl, methoxyacetyl, phenoxyacetyl, benzoyl, benzoylformyl, p-nitrobenzoyl, ethoxycarbonyl, β,β,β-tri-chlorethoxycarbonyl, β,β,β-tribromethoxycarbonyl og p-nitrophenoxy-carbonyl, og en substitueret alkylgruppe, såsom tetrahydrothiofura-nyl, methoxy, methoxytetrahydropyranyl, tetrahydropyranyl og 2-methoxyethoxymethyl og også en silylgruppe, såsom trimethylsilyl og dimethyl-tert.butylsilyl.

Ved denne fremgangsmåde anvendes forbindelsen V i fri form, som et salt eller i form af et reaktivt derivat, som acyleringsmiddel til acylering af aminogruppen i 7-stillingen i forbindelsen IV eller et salt eller en ester deraf. Således underkastes den frie syre V, et alkali- eller jordalkalimetalsalt af den frie syre V (f.eks. natrium-, kalium- eller calciumsaltet), et organisk aminsalt af den frie syre V (f.eks. trimethylamin- eller pyridinsaltet), eller et reaktivt derivat deraf (såsom et tilsvarende syrehalid (f.eks. et syrechlorid eller syrebromid), syreanhydrid, blandet syreanhydrid, aktivt amid eller en aktiv ester)) den førnævnte reaktion. Som eksempler på denne aktive ester kan nævnes p-nitrophenylester, 2,4-dinitrophenyl-ester, pentachlorphenylester, N-hydroxysuccinimidester og N-hydroxy-phthalimidester. Som eksempler på det blandede syreanhydrid kan nævnes et blandet syreanhydrid med en kulsyremonoester (f.eks. kul-syremonomethylester eller kulsyremonoisobutylester) og et blandet syreanhydrid med en lavere alkansyre med 1 til 5 carbonatomer, som kan være substitueret med halogen (f.eks. pivalinsyre eller tri-chloreddikesyre). Når carboxylsyren V anvendes som den frie syre eller i form af et salt, anvendes et egnet kondensationsmiddel. Som eksempler på dette kondensationsmiddel kan nævnes N,NT-di-substituerede carbodiimider, f.eks. N,Nf-dicyclohexyl-carbodiimid, azolider, f.eks. N,N,-carbonylimidazol og NjN’-thionyldiimidazol, dehydrerende midler, f.eks. N-ethoxycarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydroquinolin, phos-phoroxychlorid og alkoxyacetylen samt 2-halogenpyridiniumsalte (f.

15

DK 159783 B

eks. 2-ehlorpyridiniummethyliodid, 2-fluorpyridiniummethyliodid).

Når et sådant kondensationsmiddel anvendes, antages det at reaktionen forløber via det reaktive derivat af carboxylsyren V forbundet med kondensationsmi diet.

Denne reaktion mellem forbindelsen XV eller et salt eller en ester deraf og acyleringsmidlet forløber glat under i og for sig kendte betingelser. F.eks. kan reaktionen gennemføres under betingelser, der er analoge med dem i det tyske offentliggørelsesskrift nr.

P 2.461.47$. Reaktionen gennemføres sædvanligvis i et egnet inert opløsningsmiddel. Som eksempler på et sådant opløsningsmiddel kan nævnes halogenerede carbonhydrider, f.eks. chloroform eller methylen-chlorid, ethere, f.eks. tetrahydrofuran eller dioxan, dimethylform-amid, dimethylacetamid, acetone, vand og blandinger af sådanne opløsningsmidler. Mængden af acyleringsmidlet er normalt indenfor området 1 til 5, fortrinsvis 1 til 2, molækvivalenter, beregnet på forbindelsen IV eller et salt eller en ester deraf. Reaktionen udføres almindeligvis ved en temperatur i området fra -50°C til +40°C. Reaktionstiden vælges i området fra 1 til 10 timer, fortrinsvis 1 til 3 timer. I tilsætning til acyleringsreaktionen kan beskyttelsesgrupperne R og/eller R^ om ønsket fjernes. Fjernelsen af beskyttelsesgrupperne $ / 9 R og/eller R' kan almindeligvis gennemføres ved i og for sig kendte fremgangsmåder,(f.eks. ved fremgangsmåden, som er beskrevet i japansk offentliggørelsesskrift nr. 520$3/l975 og i Pure and Applied Chemistry, 7., 335 (1963)) eller en dermed analog fremgangsmåde.

Således kan f.eks. tert.butoxycarbonyl repræsenteret af R fjernes ved behandling med en vandig opløsning af en syre (f.eks. saltsyre g eller svovlsyre), og monochloracetyl repræsenteret af R kan fjernes ved behandling med thiourea. Formyl eller trifluoracetyl repræsente-9 ret af R kan fjernes ved behandling med kaliumhydrogencarbonat i 9 vandig methanol, og tetrahydropyranyl repræsenteret af R kan fjernes ved behandling med fortyndet saltsyre. Fjernelsen af beskyttelsesgruppen udføres under i og for sig kendte betingelser.

16

DK 159783 B

Når slutproduktet i forbindelsen I fremstilles i form af den frie syre, kan det omdannes til et farmaceutisk acceptabelt salt deraf ved en i og for sig kendt konventionel fremgangsmåde.

Når det omhandlede slutprodukt opnås i form af et salt, kan det omdannes til den frie form eller ethvert andet salt ved en i og for sig velkendt fremgangsmåde.

Når det omhandlede slutprodukt opnås i form af en fri carboxylsyre eller dens salt i 4-stillingen, kan det foresteres til en ester ifølge en konventionel fremgangsmåde, idet typen af esteren er detaljeret defineret i det ovenstående. Nærmere bestemt fremstilles esteren ved, at man omsætter en forbindelse I eller et salt eller et reaktivt derivat deraf med en forbindelse med formlen HO-R10 (VI) hvori R·^ er en estergruppe eller et reaktivt derivat deraf. Typen af saltet af forbindelsen I kan f.eks. være den samme som af forbindelsen II, og typen af det reaktive derivat af forbindelsen I er den samme som af forbindelsen V. Det reaktive derivat af forbindelsen VI kqn f.eks. være en forbindelse med formlen

Hal-R10* (VIM

hvori Hal er halogen og R"^ er alkoxy(C^_^)methyl, alkoxy(C-^_^) ethyl, alkyl(thiomethyl, alkyl(C-L_^)carbonyloxymethyl eller alk- oxycarbonyloxyalkyliC^^^)· Eksempler på disse grupper er detaljeret omtalt i det ovenstående med henvisning til forbindelsen I.

Symbolet Hal betyder chlor, fluor, brom eller iod, og Hal er fortrinsvis iod eller brom.

17

DK 159783 B

Således kan forbindelsen med formlen VI* eksempelvis være methoxy-methylchlorid, methylthiomethylchlorid, chlormethylacetat, brom-methylacetat, brommethylpivalat, iodmethylpivalat eller iodmethyl-ethoxycarbonat.

Når udgangsforbindelsen I anvendes i den form med en fri v carboxyl-gruppe i 4-stillingen, foretrækkes det at udføre reaktionen under tilstedeværelse af en base. Basen kan eksempelvis være en uorganisk base, såsom natriumhydrogencarbonat, kaliumhydrogencarbonat, lithium-carbonat, natriumcarbonat og kaliumcarbonat, og en organisk base, såsom dicyclohexylamin, morpholin, N-ethylanilin, N,N-diethylanilin, N-methylmorpholin, pyridin og triethylamin.

Reaktionen kan udføres i et opløsningsmiddel, såsom acetonitril, Ν,Ν-dimethylformamid, N,N-dimethylacetamid, Ν,Ν-dimethylformamid, dichlormethan, chloroform, dimethylsulfoxid, diethylether, tetrahy-drofuran, acetone, methylethylketon og flydende svovltrioxid. Blandt disse foretrækkes dimethylformamid, acetone, acetonitril og flydende svovltrioxid.

Mængden af base er sædvanligvis 1 ækvivalent i forhold til udgangsforbindelsen I eller dens salt.

Reaktionen udføres fortrinsvis ved en temperatur på mellem -20°G og +20°C. Når flydende svovltrioxid anvendes som opløsningsmiddel, er reaktionstemperaturen fortrinsvis en temperatur i området fra -20°G til -10°C.

Reaktionstiden varierer bl.a. med typen af udgangsmaterialet, reaktionstemperaturen og typen af opløsningsmidlet, men er sædvanligvis indenfor et område fra 10 minutter til 120 timer.

Efter enhver af de reaktioner, som giver de omhandlede forbindelser,

18 DK 159783 B

isoleres den ønskede forbindelse fra reaktionsblandingen ved i og for sig kendte fremgangsmåder. De omhandlede forbindelser kan renses ved kendte fremgangsmåder. Sådanne fremgangsmåder kan eksempelvis være ekstraktion, koncentration ved pH-indstilling, krystallisation, omkrystallisation og kromatografi.

Den omhandlede forbindelse I eller et salt eller en ester deraf har en hydroxylgruppe i syn-konfiguration til acetamidgruppen (d.v.s. -C0NH-) i 7~stillingen. Imidlertid er der tilfælde, hvor dannelsen af forbindelsen I ledsages af dannelsen af den anti-isomere med formlen HN q HN_J-C-CONH--/ \ (It) H(fW ^-V\ HU o I ch2y

COOH

hvori Y har den ovenfor angivne betydning, eller et tilsvarende salt eller en ester deraf, selv om kun den tilsvarende syn-isomere udgangsforbindelse er anvendt. Men ved den fremgangsmåde, der omfatter reaktion mellem 1) forbindelsen III eller et salt deraf og 2) vand, amin eller nitrogenholdig heterocyclisk thio, eller den fremgangsmåde, der omfatter reaktion mellem 1) forbindelsen II eller et salt eller en ester deraf og 2) thiourea, hvor udgangsmaterialet II eller III eller et salt eller en ester deraf er en i det væsentlige ren syn-isomer, overstiger udbyttet af anti-isomere I* ikke 10$ af det af forbindelsen I.

Når den syn-isomere udgangsforbindelse II, III eller Y anvendes i kombination med den tilsvarende anti-isomere forbindelse, indeholder reaktionsblandingen naturligvis forbindelsen I og I* (d.v.s. at den er en syn- og anti-isomerblånding). Dette er selvfølgelig også tilfældet, når et salt eller en ester af forbindelsen II, III eller Y anvendes som udgangsmateriale. Den omhandlede syn-isomer I eller et salt eller en ester deraf adskilles eller isoleres let fra blandingen ved velkendte fremgangsmåder, såsom kromatografi og fraktioneret

DK 159783 B

krystallisation.

Forbindelsen II eller et salt eller en ester deraf fremstilles efter det følgende skema, f.eks. ved de i de japanske offentliggørelsesskrifter nr. 95293/1975, nr. 11093/1975 og nr. 564^7/1976 eller i japansk patentansøgning nr. 1274/1976 beskrevne fremgangsmåder eller ved enhver fremgangsmåde, som ligner en af disse.

¥-|-Λ

0 ^ CH2Y

C00H

(ix) w2 CH2=C-CH2 WCH2C0CH2C0W <- q_q__o (VIII) (VII) s W-CH2C0CH2C0NH-j-^ \ 0^γ\Η2Υ

C00H

(X) nitroseringsmiddel

S

W-CH2C0CC0NH--/ \

l J— N

0H 0 X GH2Y

C00H

(II) hvori hvert af symbolerne ¥ og Y har den ovenfor angivne betydning.

Først omsættes brom eller chlor repræsenteret af ¥ med diketen, f. eks. med formlen VII, idet mængden af brom eller chlor er ækvimolær med diketenet. Derefter omsættes den således fremstillede forbindelse 20

DK 159783 B

! VIII med. forbindelsen IX eller et salt eller en ester deraf ved en på i og for sig kendt fremgangsmåde under dannelse af forbindelsen X eller et salt eller en ester deraf. Forbindelsen IX eller et salt eller en ester deraf kan fremstilles ved enhver kendt fremgangsmåde, f.eks. ved den fremgangsmåde, der er beskrevet i japansk offentliggørelsesskrift nr. 117^2/1976 og de tyske offentliggørelsesskrifter nr. P 2.6Ο7.Ο64 og nr. P 2.619.243 eller enhver anden dermed analog fremgangsmåde. Således kan forbindelsen IX eller et salt eller en ester deraf opnås ved omdannelse af den 3-stillede substituent i en 7-acylamino-3-acetoxymethyl-3-cephem-4~carboxylsyre eller 7-acyl-amino-3-hydroxymethyl-3-cephem-4“carboxylsyre, eller et salt eller en ester deraf til en ønsket -CHgY-gruppe og derefter fjernelse af 7-acylgruppen, eller alternativt ved at underkaste en 7-amino-3-aktiveret acyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (hvis aktiverede acyloxygruppe er beskrevet ovenfor) eller et salt deraf en direkte nucleofil substitution med vand, en amin svarende til det kvaternære ammonium eller den nitrogenholdige heterocydiske thiol.

Derefter omsættes forbindelsen X eller et salt eller en ester deraf med et nitroseringsmiddel, hvorved der opnås forbindelsen II, eller et salt eller en ester deraf. Med hensyn til saltet af forbindelsen X, hvor der f.eks. er en basisk gruppe til stede i substituenten T i forbindelsen X (f.eks. hvor T er l-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-lH-tetrazol-5-ylthio), kan forbindelsen X omsættes som et salt af denne basiske funktion med en syre, f.eks. et salt af en mineralsyre (f. eks. saltsyre, svovlsyre eller phosphorsyre) eller et salt af en organisk syre (f.eks. oxalsyre eller p-toluensulfonsyre). Hvor der er en stærkt sur gruppe til stede i substituenten Y i forbindelsen X (f.eks. hvor Y er 2-(2-sulfoethylamino)-l,3,4-'thiadiazol-5-ylthio)·, kan forbindelsen X omsættes som et uorganisk eller organisk salt af denne sure funktion, f.eks. et salt med et alkalimetal eller et jordalkalimetal (f.eks. lithium, natrium eller kalium) eller et salt af en organisk base (f.eks. triethylaminsaltet).

Som nitroseringsmiddel kan der normalt anvendes et middel valgt blandt salpetersyrlingestere, såsom methylnitrit, ethylnitrit og amylni-trit, og nitrosylchlorid. Salpetersyrling kan anvendes som det dannes i rekationssystemet ved reaktion mellem et alkalimetalnitrit og en syre, f.eks. saltsyre eller eddikesyre.

DK 159783 B

Nitroseringsreaktionen, d.v.s. reaktionen mellem forbindelsen X eller et salt eller en ester deraf og nitroseringsmidlet udføres fortrinsvis i et opløsningsmiddel. Ethvert opløsningsmiddel, som ikke påvirker reaktionen kan anvendes. Normalt anvendes dioxan, aceto-nitril, tetrahydrofuran, vand, eddikesyre eller en passende blanding af sådanne opløsningsmidler. Denne reaktion fremskyndes ved tilstedeværelse af en syre. Mest hensigtsmæssigt er denne syre saltsyre eller eddikesyre. Mængden af syren er 1 mol eller mere pr. mol af forbindelsen I. Normalt udføres nitroseringsreaktionen fortrinsvis ved stuetemperatur (25-35°C) eller under afkøling eller svag opvarmning. Således udføres reaktionen ved en temperatur på mellem -20°C og +50°C.

Ted denne nitroseringsreaktion kan hydroximforbindelsen II med synkonfiguration med hensyn til acylamidgruppen opnås i højt udbytte. Under visse omstændigheder opnås en stereoisomer med anti-konfigura-tion, som vist i formlen II* i noget mindre mængde, sammen med den førnævnte forbindelse II, men i mange tilfælde overstiger udbyttet af den stereoisomere II1 ikke 10$ af mængden af II.

S

WOEpCO-C-CONH-1_/ \ jri 1 <n*> H0 ΥΝη2Ϊ

COOH

hvori de anvendte symboler har de ovenfor angivne betydninger.

Dette er et særligt fordelagtigt træk ved den foreliggende opfindelse, som er rettet mod fremstillingen af en forbindelse I, som har syn-konfiguration ligesom forbindelsen II. Den således opnåede forbindelse II kan isoleres og renses ved konventionelle fremgangsmåder, såsom opløsningsmiddelekstraktion, pH-indstilling, faseoverførsel, krystallisation, omkrystallisation og kromatografi.

Den nitrogenholdige heterocydiske thiol (f.eks. den ovennævnte forbindelse med formlen HS-Het, hvori Het har den ovenfor angivne betydning) kan fremstilles 1) ved de i og for sig kendte fremgangsmåder, som f.eks. er beskrevet i kapitel 5 i Heterocydic Chemistry (A. R.

22 DK 1597838

Kat^itzky and J.M. Lagowsky, John Willey and Sons, i960), kapitel i i Heterocyclic Compounds, vol. 6 (R. C. Elderfield, John Willey and Sons, 1967), Advances in Heterocyclic Chemistry, vol. 9 (A.R. Katritzky and A. J. Boulton, Academic Press, 1966, side 165 til 209, og Dai Yuki Kagaku (Munio Kotake (red.), Asakura Shoten, vol. 15 eller ved fremgangsmåder, som er analoge med disse kendte fremgangsmåder, eller 2) ved at underkaste en nitrogenholdig heterocyclisk thiol, enten kendt eller fremstillet ved enhver af de ovennævnte fremgangsmåder 1), en i og for sig kendt kemisk modifikationsreaktion eller omsætning af en anden eller andre funktionelle grupper end thiolgruppen.

Forbindelsen med formlen V eller dens salt fremstilles ved en i og for sig kendt fremgangsmåde. Således fremstilles forbindelsen V eller et salt deraf ved en fremgangsmåde, hvorved man i en syn-isomerisk forbindelse med formlen

RS*N S

Y's HN_i-C-COOA (XI) ti

N

\ at OB/ gt ar hvori R er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe, R hydrogen eller en beskyttelsesgruppe og A en esterrest eller et salt deraf, spalter estergruppen. Esterresten A kan eksempelvis være alkyl(C^_^) (f.eks. methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl eller tert.butyl) eller alkyl (C-^) substitueret med phenyl (f.eks. benzhydryl).

Spaltningen af esteren udføres ved i og for sig kendte konventionelle måder, herunder hydrolyse, hydrogenolyse og spaltning med syre. Den foretrukne måde til spaltning af esteren er at bringe forbindelsen XI eller dens salt I kontakt med en blanding indeholdende trifluor-eddikesyre og anisol. Mængden af trifluoreddikesyre og af anisol er større end mængden af forbindelsen XI eller dens salt. Reaktionen udføres ved en temperatur på mellem -20°C og +30°C, og reaktionen forløber sædvanligvis fuldstændigt i løbet af 5 timer. Om ønsket kan forbindelsen XI anvendes i kombination med den tilsvarende anti- 23

DK 159783 B

isomer eller dens salt. Efter omsætningen kan den ønskede forbindelse V eller dens salt isoleres eller renses ved i og for sig kendte konventionelle fremgangsmåder, såsom koncentration, krystallisation og kromatografi. Imidlertid kan reaktionsblandingen, som indeholder forbindelsen V eller dens salt underkastes den næste reaktion uden rensning eller isolering. De ovennævnte reaktive derivater af forbindelsen V fremstilles ved i og for sig kendte fremgangsmåder af forbindelsen Y eller dens salt.

Forbindelsen XI eller dens salt fremstilles ved en i og for sig kendt fremgangsmåde eller ved fremgangsmåder, som beskrives i de følgende referenceeksempler.

Den foreliggende opfindelse belyses i yderligere detaljer nedenfor med henvisning til eksemplerne; det må dog forstås, at eksemplerne kun tjener til belysning af opfindelsen og ikke skal forstås som begrænsninger af denne, og at der indenfor opfindelsens omfang kan benyttes mange variationer.

Procenter er vægtprocenter, med mindre andet er angivet. De angivne NMR-spektre blev målt under anvendelse af et Varian Model XL-100A (100MHz) eller T-60 (60 MHz) spektrometer med tetramethylsilan som intern eller ekstern reference og alle -værdier er i ppm. Symbolet s står for en singlet, d en dublet, dd er dobbelt dublet, t en triplet, q en kvartet, m en multiplet og J en koblingskonstant.

Forsøg

De nedenstående tabeller 1-3 viser de minimale hæmningskoncentrationer (MIC) af nogle typiske forbindelser I som er fremstillet i de anførte eksempler, mod forskellige bakterier, i sammenligning med de sammenlignelige MIC-data for nogle af de cephalosporiner, som er kommercielt tilgængelige og klinisk accepterede (f.eks. The New England Journal of Medicine 294, 24 (1976) og Journal of

Pharmaceutical Science 64, 1899 (1975)), dvs.

24

DK 159783 B

Cephalotin [ natrium-7- (2-thienylacetamido)-3-acetoxymethyl-3-ce-phem-4-carboxylat ], cephaloridin [7-(2-thienylacetamido)-3-(1-pyridyl)-methyl-3-ce-phem-4-carboxylsyre betain] og cefazolin [ natrium-7-(lH-tetrazol-l-yl)-acetamido-3-(2-methyl- 1,3,4-thiadiazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat ].

Foruden ovennævnte tre kommercielle cephalosporinprodukter anvendes i tabel 3 som sammenligningsforbindelser 6 forbindelser (forbindelser A-F), som er kendt fra ovennævnte DE offentliggørelsesskrift nr. 2.556.736, nemlig

Forbindelse A: Natrium-7/3 - ( 2 - amino thi azol - 4 -y lglycy 1 amido) ce -phalosporanat

Forbindelse B: Natrium-70-[ α-hydroxy-or- (2-aminothiazol-4-yl) -acetamido ]cephalosporanat

Forbindelse C: 7/3-[ a-Hydroxy-Q!-(2-aminothiazol-4-yl)-acetamido ]- 3- (l-methyl-lH-tetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem- 4- carboxylsyre-natriumsalt

Forbindelse D: Natrium-7|S-[ (2-aminothiazol-4-yl)glycylamido ]-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem- 4-carboxylat

Forbindelse E: Natrium-7/3-[ a-methoxyimino-a-(2-aminothiazol-4-yl)-acetamido ]cephalosporanat.

Forbindelse F: Natrium-7/3-[ a-methoxyimino-o:-(2-aminothiazol-4-yl)-acetamido ]-3-desacetylcephalosporanat.

25 DK 159783 B

---- ; ; j i j | j

, tø ' i VDOiCOOO OCOCDO

ro Φ ^3- ί o o o in rn t" s la

PrrjOcQCM OOO · ° ° · * * ° =ri S 2 hhh H o o o h o o h ^ .p Cd Φ EH Λ Λ Λ m S o______________ ! sraco LncomoQ mm cd Φ —* o o o cm t>- H c- m cm tn m ^OCQOqoo o o · o ° · · *

£-1 kJ Sh G OOJ _i _i —i VO O 0O O CM Ό r-i CM

Φ -H cd O WH Λ Λ Λ Η Η CO -Ρ g Ο Η _______ «3 111 m in ιλ in tn o o in o oo m in IHlJlS . . N o h cm o CM t-ino . · · · ° ° · ‘ CD CD a> CD C Y vo O O O O O O i—I o !h W ω ft S ^ ____ : CD ---——--------- +3 j pkj Co CD CM -=3- -=3· —

! Cd li-Hicd Ό VO Ό i—1 CM in CM inOOCM

i ,ω AH Srj inmin ο οοο ο cmcmo φ φ φ a Β . . .

ίφΗ"ΗβθΩ.._| Ο OOO O OOO I > W CD P. £ HrHrM v) ___________

j iH i I

43 ' -n cd in bO φ cn co m σ\ co m σ\

Φ 42 cd ·Η c— ooo cnt^-inrot—CMtnfO

£l O *rl rH S q q ία ο οοο o "CM* i to 42 o EH OOHOOVD o Η ΒΗΟϋ Λ CD___________________ rH Hi Φ Ο Ή j£2 Η H CM CM -=3’ CM ·=Γ

Cd P rH 0Π m VO iH rH CM r~I LO Ο O CM

E4 42 Cd -Η H HLnin OOOO O CMCMO

ϋ H rH I OOO o OO o o OO O

Ο ο ΓΠΡ4Η OOOO O OOO

WOO Vi Vi V! , •H js- -3- h cnmcMinocMOcrvcrvin £ . ™ in H in oohohooooo

OHH KO w ,η h o OO O o OO O

to 42 o Hb π WOOS __________ :--i ~ 1 o

H

>iCQW CTvCT\l£) σ\ CO CO CO CO COOiCO

φ 42 3 3 o cn rn m enc'-f-c— E-*t— oof-

> Pi O 0 -3- ooo Oooo OOOO

•H Cd Ο P CO OOrH OOOO oooo 43 41 O 2 H ^ •H ÉH CO o cd_______________ I to ω

O -rH O

Ph H H

j φ >> co ra oinm m ch σν co co cr\ m co £ .p ,¾ 3 P Ph CM O CO OO COOOD*— C— (O CO t*~ φ^ίίοΦΟΛ . . ο · o « · ”

Pii ιίϋΡ o ooo o o o o o o o o

Oo-POdCM ^ ^ CO o Cd _____________ cm vo tn m [— m

£2 inHrHHrHrHHCM

•H fi 42 Φ·Η γΗγΗγΗγΗγΗγΗγΗγΗ 43 43 i d Η ΦΦΦΦΦΦΦΦ

Φ1 OO’HO

!>rf rMH-PN g S' SS £ S £ £ φ·ηφ cdcd"Hcd φ φφ]φ φ φφ φ

Pi n ID 42 42 H ^ ED CD CD CO CD CQCD CD

Ρ,ΡηΗ a ft cd ^ 2*! -M 24 24 24 24 24

tH o æ Φ Φ O ® w W W W WWW

•étj Ph tH o co ____________:.

26 DK 159783 E

* I Ϊ '

O (33 C! O O O O LC\ 00 CO CO O

^ -p ^ t- O O O Η rH CVJ o t>~ t- H

p O <D tHH O O O * 0 · · ° e * * •ri Cd Sh -HS HHHOOOOOOOO O /2 *+h ΌΟ Λ Λ Λ βΗ •Η iCjtrt uo uo uo ο uo σο σο ο uo

q dj ς] » O O r-1 O 00 OO CM O

j-i-PrdcfNinocM · · - 0 ° · * *

4D O <L) OO CM UO H o O O O O O O O

•H Cd fcS O XltiO

~t Φ “ ^ ^ ooo LCO MD UO UD uo

CL) -P Cd CM O O O CM UO CM UO CMUOUO

-P O O i—I o o o · · ° »uo · · *

d ShS Η HH M2 HMD H W UD CM CM Η ,Ω O Η Λ Λ Λ HM

Kl l OO

3 gi OO Π"

<L) bO C— CMUOOOOOOOCM

ø 4_3 4-3 .ΞΓ O O O Ο Ο Η H CMOOCMO

i S Φ Ή 0 H HH o O O O O O O o (D ft Ih !h Λ Λ +3 · --------------------------- ,Lsj

JD 3 0 CXD CM CM CM CM CM -=T CM

0 bQ OO UD UD HHHHHCUUOH

ø JD 43 OO UO UO CM O O O O OOOO

J d m_|S Η HO O O O O OOOO

H 4DpL,J4S-l Vi Vi V ! VI VI vi V! ω cd-------------------------------- pQ hf) ro CO —J -~J*

ώ m ^ 4 VD OCMITNCMOO^ON

ΕΊ C <1) cd H O O O CM O O O CMCMOOOO

I -p bO ro O o o « · 0 ’ ° · “ *

S O £) ·Η O H HH O O O O OOOO

cd U O H fe A Λ

k Ph S C H

o________________________—-

§°HCr\ OO UO UO UO O o Ο o CO CAUO

0 o UO H CM CM O H CM Η HOO OOO

p cd m · · · · · · · »· * · o 03H- CO UD UD O O O o o o o o Η H ^ P4 £ H O _____

Cd to H oo , _

^j^H UOUOUOOO UD OO

øcd^r OOO o CM CM H uo H

p> bO-=r o o o cm · · ° ° * ° °

OHS H HH Η UD Ό OOuUOH OOUO

d) di O Λ Λ Λ P-l t>_____________

Kl 3 di CO UD uo OD uo uo o uo o o oo o 0) (d CO UO CMH O O Η O HH OOH -PfcOOo · · · · » “ 0 ° ° ° “ 0 H O oo H ud on O O O O o o o o & dfc 1 CU i> H______________ rj CM UD LC0 cO H" C~- U2 •H ! UOHHHHHH^ .id H C , , i i

1 “> ±s Cj ·γΗ γ-η H i—1 r~H H rH rH rH

Øl O O Η ® Φ ® ooD QjQi

j> £ HH

s-H ω cd cd φ n S S S I 8 S I I

f, X rn Γ* C1 C rrt CD CD CD CD <D<D CD CD

ο,^Η ftft-H<PCQ CQ m m m m o φ

CpOCD (DCD'CCDpkl M ^ ·τ*| f^Fn FnfM

^cS<S O O O® W S .H

27

DK 159783 B

Forbindelse Serra- Serra- Proteus Proteus Proteus Proteus tia tia vulgaris mirabi- morga- rettge- cens cens IFO lis nii ri IFO 12648 TN24 3988 GN4359 IF03168 TN338

CephalothM >100 >100 1,56 3,13 >100 1,56

Cephaloridin >100 >100 6,25 6,25 >100 1,56

Cefazolin >100 >100 3,13 6,25 100 £0,2

Forbindelse A 50 100 6,25 1,56 6,25 <0,2

Forbindelse B 50 >100 0,78 0,39 25 £0,2

Forbindelse C 12,5 25 £0,2 £0,2 1,56 £0,2

Forbindelse D 12,5 50 3,13 1,56 3,13 £0,2

Forbindelse E 12,5 3,13 0,20 1,56 50 £0,2

Forbindelse F 25 3,13 0,78 6,25 0,78 £0,2

Eksempel 5 6,25 1,56 0,05 0,05 0,20 <0,012

Eksempel .12 0,78 0,39 0,05 0,10 0,024 £0,012

Eksempel 16 3,13 0,78 0,10 0,20 0,05 £0,012

Eksempel 15 0,78 0,78 0,05 0,10 0,024 £0,012

Eksempel 13 12,5 1,56 0,10 0,10 0,20 £0,012

Eksempel 14 6,25 0,78 0,10 0,39 0,20 0,024

Eksempel 17 1,56 0,78 0,39 0,39 0,39 0,05

Eksempel 26 12,5 1,56 0,10 0,05 0,39 £0,012 28 DK 159783 B ' j b) Terapeutiske virkninger på inficerede mus (tabel 4 og 5)

Forsøgsdyr: Hanmus, ICR/SLG

En gruppe på fem dyr anvendtes pr. forbindelse.

Infektionsvej: Intraperitonealt

Inficerende bakterier: Escherichia coli 0-111

Observationens varighed: 7 dage

Administrationsmåde: Forbindelsen som skulle afprøves (1 mg, 10 mg, 100 mg eller 200 mg) blev opløst i steril saltopløsning (100 ml) og 0,2 ml opløsning administreredes subkutant (s.c.) som en enkelt dosis umiddelbart efter infektion. To gange fortyndinger af hver opløsning blev administreret til fem grupper på 5 mus.

Tabel 4.

Afprøvet for- Administrations- ED^q bindelse vej

Eksempel 5 s.c. 0,033

Eksempel 12 s.c. 0,02$

Cephaloridin s.c. 2,60

Tabel 5.

Afprøvet for- Administrations- ED^q mg/kg bindelse vej

Eksemp el 15 s.c. 0,016

Eksempel 16 s.c. 0*035

Cephaloridin s.c. 1,$1

Eksempel 1.

Fremstilling af 7-(4-brom-2~hydroxyimino-3-oxobutyrylamino)-3-me-thyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer.

29

DK 159783 B

Til en opløsning af 3,7 g 7-(4-brom-3-oxobutyrylamino)-3-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre i 37 ml eddikesyre sættes dråbevis under omrøring og isafkøling en opløsning af -0,953 g natriumnitrit i 4 ml vand i løbet af en time. Derefter omrøres blandingen ved stuetemperatur i yderligere 3 timer. Reaktionsblandingen omrystes med 100 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid og 200 ml ethylacetat, og det organiske lag skilles fra, vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, tørres og koncentreres. Til remanensen sættes ethylether, og blandingen omrøres. Det resulterende pulver isoleres ved filtrering. Ved denne fremgangsmåde opnås 1,34 g af titelforbindelsen.

IR(KB*, cm-1): 1770, 1695, 1660 mm(100 MHz, d6-DMS0, ): 2,02 (s, 3-CH^), 3,46 (ABq, J=19 Hz, 2-CH2), 4,59 (s, B*CH2-), 5,od (d, J=5 Hz, 6-H), 5,69 (dd, J=5 & SHz, 7-H), 9,22 (d, J=£Hz, C0NH), 13,07 (s, =N0H)

Elementæranalyse for G12H12BrN3°6S:

Beregnet: C 35,4$ H 2,9$ N 10,34

Fundet: C 34,91 H 3,25 N 10,14

Eksempel 2.

Fremstilling af natrium 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-imino-acetamido]-3-methyl-3-cephem-4~carboxylat (syn-isomer). 1 1,2 ml dimethylacetamid opløses 0,122 g 7-(4-brom-2-hydroxyimino-3-oxobutyrylamino)-3-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer) og 0,03 g thiourea, og den blandede opløsning omrøres ved stuetemperatur i 1,5 timer. Reaktionsblandingen omrøres med 10 ml ethylether og supernatanten dekanteres fra, hvorefter der tilsættes 10 ml ethylether. Den ovennævnte fremgangsmåde gentages to gange. Det resulterende pulver opsamles ved filtrering og opløses i 10 ml 5$*s natrium-carbonatopløsning. Opløsningen søjlekromatograferes på polystyrenharpiks (Amberlite XAD-2, Rohm & Haas Go.) og dexti’angel (Sephadex LH-20, Pharmacia) i den nævnte rækkefølge, idet der elueres med vand. Fraktionerne, som indeholdt det ønskede produkt, blev samlet og lyo-

30 DK 159783 B

filiseret. ITed denne fremgangsmåde opnåedes 0,09 g af titelforbindelsen.

IR(KB*, cm'1): 1760, 1590 NMR (100 MHz, d6-DMS0 + D20, ): 1,93 (s, 3-0¾), 3,25 (ABq, J=l3Hz, 2-0¾), 4,96 (d, J=5Hz, 6H), 5,57 (d, J=5Hz, 7H), 6,71 (s, thiazolin, 5H).

Elementæranalyse for 0i2%2^5^5^2^a*^2(“>:

Beregnet: G 33,99 H 3,95 N 15,24

Fundet: C 34,24 H 4,15 N 15,13

Eksempel 3«

Fremstilling af 7- (4-chlor-2-hydroxyimino-3-oxobutyrylarriino )-3-acetoxymethyl-3-cepbem-4-carboxylsyre (syn-isomer).

Til en blanding af 22,4 g (57,4 m mol) 7-(4-chlor-3-oxobutyrylamino)- 3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre og 200 ml eddikesyre sættes dråbevis under omrøring og isafkøling en opløsning af 5,5 g (79,7 mmol) natriumnitrit i 20 ml vand i løbet af 15 minutter. Isbadet fjernes og efter at blandingen har nået stuetemperatur, omrøres den i 3 1/2 time. Til reaktionsblandingen sættes 600 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, og blandingen ekstraheres fire gange med 250 ml portioner af ethylacetat. Ekstrakterne samles, vaskes med vand, tørres og koncentreres under reduceret tryk. Ovenstående fremgangsmåde giver 14,31 g krystaller af titelforbindelsen.

IR(KB*, cm"1): 1790 MR(100 MHz, d6-DMS0, ):2,05 (s, CH^OO), 3,43 og 3,66 (ABq, J=l3Hz, 2-0¾), 4,70 og 5,02 (ABq, J=13Hz, 3-0¾), 4,30 (x, 010¾), 5,15 (d, J=5Hz, 6h) , 5,79 (dd, J=5 og dHz, 7H), 9,23 (d, J=3Hz, COM), 13,17 (s, =N-0H).

El ementæranalys e for C^H-^ClN^OgS * HgO:

DK 159783 B

Beregnet: C 38,41 H 3,68 N 9,60

Fundet: C 38,53 H 3,31 N 9,32

Eksempel 4·

Fremstilling af 7-[2-(2-imino-4-thi a z olin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetami do]-3-ace t oxyme thyl - 3 - c ep hem-4- c arb oxyl syr e-hydro chlorid (syn-isomer).

I 50 ml dimethylacetamid opløses 10,4 g (24,9 mmol) 7-(4~chlor-2-hydroxyimino-3-oxo butyrylamino)-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxyl-syre (syn-isomer) og 1,89 g thiourea og opløsningen omrøres ved stuetemperatur 131/5 time. Opløsningsmidlet destilleres af under reduceret tryk og remanensen omrøres med ethylether. Supernatanten dekanteres fra. Ethylacetat sættes til remanensen og supernatanten kasseres. En sådan blanding af remanensen med ethylether og med ethylacetat udføres derefter fire gange. Det resulterende pulver isoleres ved vakuumfiltrering og tørres. "Fed denne fremgangsmåde opnås titelforbindelsen.

IR(KBr, cm'1): 1781 MR(100 MHz, d6-DMS0, ): 2,04 (s, CH^CO), 3,45 og 3,68 (ABq, J=l8Hz, 2-(CH2), 4,72 og 5,02 (ABq, J=13Hz, 3-0¾), 5,19 (d, J=5Hz, 6H), 5,79 (dd, J=5 og 8Hz, 7H), 6,88 (s, thiazolin, 5H), 8,8 (b*. s, H2if= °g thiazolin NH), 9,64 (d, J=8Hz, CONH), 12,41 (hr, s, =N-0H).

Eksempel 5.

Fremstilling af natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-imino-acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer).

1 ml dimethylacetamid opløses 0,209 g 7-(4~chlor-2-hydroxyimino- 3-oxobutyrylamino)-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer) og 0,038 g thiourea, og den blandede opløsning omrøres ved stuetemperatur i 2 1/2 time. Denne reaktionsblanding blandes med 10 ml ethylacetat, hvorefter et gummiagtigt produkt skilles fra. Supernatanten dekanteres fra og remanensen blandes med 10 ml ethylether.

32 DK 159783 B

Det resulterende pulver opsamles ved filtrering, opløses straks i en opløsning af 0,0$4 g natriumhydrogencarbonat i 10 ml vand og kroma-tograferes på en søjle af dextrangel (Sephadex LH-20, Pharmacia), med vand som elueringsmiddel. Fraktionerne, som indeholder det ønskede produkt samles og lyofiliseres. Ved denne fremgangsmåde opnåedes 0,09$ g af titelforbindelsen.

lR(KBr, cm"1): 1765 MR (100 MHz, d6-DMS0, ): 2,02 (s, CH^CO), 3,21 og 3,51 (ABq, J=lSHz, 2-0¾), 4,52 og 5,04 (ABq, J=13Hz, 3-0¾), 5,04 (d, J=5Hz, 6h), 5,66 (dd, J=5 og SHz, 7H), 6,64 (s, thiazolin, 5H), 7,11 (br. s, HN= og thiazolin NH), 9,35 (dd, J=5Hz, C0NH), 12,0 (br. =N-0H) MR(100 MHz, D20, ): 2,14 (s, CH3C0), 3,39 og 3,71 (ABq, J=l5Hz, 2-0¾), 4,74 og 4,94 (ABq, J=13Hz, 3-0¾), 5,25 (d, J=5Hz, 6H), 5,β6 (d, J=5Hz, 7H), 6,99 (s, thiazolin, 5H).

Elementæranalyse for 0^3Η-^^Ν30^32Νη·2Η2θ:

Beregnet: G 36,07 H 3,63 N 14,02

Fundet: C 35,7¾ H 3,57 N 14,13

Eksempel 6.

Fremstilling af natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-imino-acetamido]-3-acetox3niiethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer).

I en opløsning af 0,2 g natriumhydrogencarbonat i 4 ml vand opløses 0,619 g 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]- 3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-hydrochlorid. Opløsningen underkastes søjlekromatografi på dextrangel (Sephadex LH-20, Pharmacia), med vand som elueringsmiddel. Fraktionerne, som indeholder det ønskede produkt samles og lyofiliseres. Ved denne fremgangsmåde opnåedes 0,42 g af titelforbindelsen.

Med hensyn til IR og M&-spektrene er denne forbindelse i god over- 33

DK 159783 B

ensstemmelse med det i eksempel 5 opnåede produkt.

Eksempel 7«

Fremstilling af 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer).

Til en blanding af 0,309 g 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-imino-acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-hydrochlorid (syn-isomer) og 1 ml eddikesyre sættes en tilstrækkelig mængde 1 N saltsyre til fuldstændigt.at opløse førstnævnte. Denne opløsning underkastes søjlekromatografi på polystyrenharpiks (Amberlite XAD-2, Rohm & Haas Co.), ved elue*ing med vand og med 20$ *s ethanol i nævnte rækkefølge. Fraktionerne, som indeholder det ønskede produkt, samles, koncentreres og lyofiliseres. Ved denne fremgangsmåde opnåedes titelforbindelsen.

IB(KB*, cm"1): 1770 NMR(100 MHz, d6-DMS0, ): 2,04 (s, CEjCO), 3,3å og 3,62 (ABq, J=l#Hz, 2-0¾), 4,72 og 5,00 (ABq, J=13Hz, 3-0¾), 5,13 (d, J=5Hz, 6H), 5,7^ (dd, J=5 og BHz, 7H), 6,67 (s, thiazolin, 5H), 7,04 (b*. s, HN= og thiazolin NH), 9,37 (d, J=SHz, CONH).

Elementæranalyse for C^H-^N^OyS^’l, 5Η£θ:

Beregnet: C 3$,46 H 3,37 N 14,95

Fundet: C 3$,59 H 3,Si N 14,93

Eksempel 3.

Fremstilling af 7-(4-brom-2-hydroxyimino-3-oxobutyrylamino)-3-acet-oxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer).

Til en blanding af 4,5 g 7-(4-brom-3-oxobutyrylamino)-3-acetoxy-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre og 10 ml eddikesyre sættes under omrøring og isafkøling 0,76 g natriumnitrit. Isbadet fjernes, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i en time. Eddikesyren destilleres 34

DK 159783 B

af under reduceret tryk og 200 ml ethylacetat og 100 ml vand sættes til remanensen. Blandingen indstilles til pH-værdi 2 med en tilstrækkelig mængde phosphorsyre og omrystes intensivt. Let organiske lag skilles fra, vaskes med vand, tørres og koncentreres til tørhed. Remanensen omrøres med en lille mængde ethylacetat, og det resulterende pulver opsamles ved filtrering. Ved denne fremgangsmåde opnåedes 2,0 g af titelforbindelsen.

IR(KBr, cm"1): 1790, 1710, 1655, 1550 MR(100 MHz, d6-DMS0, ): 2,05 (s, CH3C0), 3,44 og 3,67 (ABq, J=l3Hz, 2-0¾), 4,59 (s, BrCH2-), 4,70 og 5,02 (ABq, J=13Hz, 3-0¾), 5,14 (d, J=4,5Hz, 6H), 5,79 (dd, J=4,5 og 3,0Hz, 7H), 9,23 (d, J=3Hz, C0HH), 13,10 (s, =N-0H).

Elementæranalyse for O^H^BrN^OgS:

Beregnet: G 36,22 H 3,04 N 3,32

Fundet: G 37,36 H 3,14 N 3,32

Eksempel 9.

I 1 ml dimethylacetamid opløses 0,232 g 7-(4-brom-2-hydroxyimino-3-oxobutyrylamino)-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer) og 0,033 g thiourea, og den blandede opløsning omrøres ved stuetemperatur i 2 1/2 time. Reaktionsblandingen blandes med 10 ml ethylacetat, hvorefter et gummiagtigt produkt skilles fra. Supernatanten dekanteres fra og remanensen blandes med 10 ml ethylether. Det resulterende pulver opsamles ved filtrering og opløses straks i en opløsning af 0S034 g natriumhydrogencarbonat i 10 ml vand. Opløsningen underkastes søjlekromatografi på dextrangel (Sephadex 1H-20, Pharmacia) med vand som elueringsmiddel. Fraktionerne, som indeholder det ønskede produkt, samles og lyofiliseres. Ved denne fremgangsmåde opnåedes 0,112 g af titelforbindelsen.

Med hensyn til IR- og Mft-spektrene er dette produkt i god overens- 35

DK 159783 B

stemmelse med det i eksempel 5 opnåede produkt.

Eksempel 10.

Fremstilling af 7-(4-chlor-2-hydroxyimino-3-oxobutyrylamino)-3-(mandelyloxymethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer).

Til en opløsning af 0,47 g (1 mmol) 7-(4-chlor-3-oxobutyrylamino)-3-(mandelyloxymethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre i 2 ml eddikesyre sættes dråbevis under omrøring og isafkøling en opløsning af 0,1 g (1,5 mmol) natriumnitrit i 0,2 ml vand i løbet af en time. Blandingen omrøres derefter ved stuetemperatur i en time. Eddikesyren destilleres af under reduceret tryk og 50 ml ethylacetat og 30 ml vand sættes til remanensen. Blandingen omrystes kraftigt, og det organiske lag skilles fra, vaskes med en mættet vandig opløsning af natri-umchlorid og tørres. Opløsningsmidlet afdampes derefter, og der sættes 30 ml ether og 30 ml petroleumsether til remanensen, som gnides mod beholderens væg. Ved denne fremgangsmåde opnåedes 0,29 g af titelforbindelsen som et pulver.

IR (KB*·, cm"1): 1730, 1741, 1715 (skulder), 1075 (skulder), 1640 (skulder), 1540 mm (100 MHz, d6-DMS0, ): 3,24 (b*. s, 2-CH2), 4,77 og 5,07 (ABq, J=13Hz, 3-0¾), 5,04 (d, J=5Hz, 6H), 5,13 (s, -CH-), 5,79 (dd, J=5 og SHz, 7H), 7,3-7,5 (m, g6h5-), 9,26 (d, J=3HzJ -G0NH-), 13,10 (s, =N-0H).

Eksempel 11.

Fremstilling af 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-(mandelyloxymethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre-hydro-chlorid (syn-i somer).

2 ml dimethylacetamid opløses 0,24 g (0,5 mmol) 7-(4-chlor-2-hydroxyimino-3-oxobutyrylamino) -3- (mandelyloxymethyl) -3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer) og 0,042 g (0,55 mmol) thiourea, og den blandede opløsning omrøres ved stuetemperatur i 2 timer. Opløsningsmidlet destilleres af under reduceret tryk og 60 ml ethylacetat sæt-

36 DK 159783 B

tes til remanensen, hvorefter der omrøres. Det resulterende pulver opsamles ved filtrering, vaskes med ether og tørres. Ved denne fremgangsmåde opnås 0,26 g af titelforbindelsen som et pulver.

IR(KBr, cm"1): 1776, 1741, 1672, 1631, 1536 MR(100 MHz, d6-mS0, ): 3,26 (bl?, s, 2-0¾), 4,76 og 5,06 (ABq, J=13Hz, 3-0¾), 5,06 (d, J=5Hz, 6h), 5,Id (s, -CH-), 5,76 (dd, J=5 og éHz, 7H), 6,66 (s, this« zolin, 5H), 7,3-7,5 (mj C^H^-), 9,61 (d, J=6Hz, CONH).

Eksempel 12.

Fremstilling af natrium-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-imino-acetamido]-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem- 4- carboxylat (syn-isomer).

I 20 ml phosphonatpuffer (0,2 M, pH 6,4) opløses 0,6^3 g 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-hydrochlorid og 0,232 g 1-methyl-lH-tetrazol- 5- thiol og 0,336 g natriumhydrogencarbonat, og den blandede opløsning omrøres ved 70°C i 3 timer. Reaktionsblandingen underkastes sø j-lekromatografi på polystyrenharpiks (Amberlite XAD-2, Rohm and Haas Go.), med vand som elue^ingsmiddel. Fraktionerne, som indeholder det ønskede produkt, samles og lyofiliseres. Ved denne fremgangsmåde opnås 0,217 g af titelforbindelsen.

IR (KB*·, cm"1): 1763 MR (100 MHz, d6-DMS0, ): 3,41 og 3,66 (ABq, J=lSHz, 2-0¾), 3,93 (s, tetrazol-CH3), 4,26 og 4.46 (ABq, J=13Hz, 3-0¾), 5,04 (d, J=5, Hz, 6H), 5,77 (dd, J=5 og 6Hz, 7H), 6,64 (s, thiazolin, 5H), 7,12 (br. s, HN= og thiazolin NH), 9,36 (d, J=3Hz, G0WH), 11, $4 (br. s, =N0H).

MR(100 MHz, D20, ): 3.47 og 3,^2 (ABq, J=lSHz, 2-0¾), 4,05 (s, tetrazol-CE^), 4,06 og 4,34 (ABq, J=13Hz, 3-0¾), 5,22 (d, J=5Hz, 6H), 5,60 (d, J=5Hz, 7H), 6,96 (s, thiazolin,5H).

DK 159783 B

Elementær analyse for C^H-^N^O^S^Na'H^O:

Beregnet: C 33,52 H 3,00 N 23,45

Fundet: G 33,40 H 3,47 N 21,66

Eksempel 13.

Fremstilling af natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-imino-acetamido]-3-(1,2,3-triazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxyl at (syn-isomer).

I 20 ml phosphatpuffer (0,2 M, pH 6,4) opløses 0,333 g 7-[2-(2-imino- 4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-hydrochlorid (syn-isomer), 0,202 g 1,2,3-tria-zol-5-thiol og 0,336 g natriumhydrogencarbonat, og den blandede opløsning omrøres ved forhøjet temperatur på 70°C i 1 1/2 time. Reaktionsblandingen underkastes søjlekromatografi på polystyrenharpiks (Amberlite XAD-2-, Rohm and Haas Co.), med vand som elue*ings-middel.

Fraktionerne, som indeholder det ønskede produkt, samles og lyofili-seres. Ved denne fremgangsmåde opnåedes 0,12$ g af titelforbindelsen.

IR(KB*, cm"1): 1765 MR (100 MHz d^-IMSO, ) : 3,39 Og 3,53 (ABq, J=l3Hz, 2-0¾), 3,95 og 4,30 (ABq, J=13Hz, 3-CH2), 5,02 (d, J=5Hz, 6H), 6,66 (s, thiazolin, 5H), 7,19 (b*. s, HN= og thiazolin NH), 7,66 (triazol 4H).

Elementær analyse for G^^H^Ng0^S^Na*l, 5H20:

Beregnet: C 33,90 H 3,03 N 21,03

Fundet: C 33,91 H 3,63 N 19,27

Eksempel 14.

Fremstilling af natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-

38 DK 159783 B

imino-acetamido1-3-(3-methyl-1,2,4-thiadiazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer).

I 20 ml phosphatpuffer (0,2 M, pH 6,4) opløses 0,663 g 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-acetoxymethyl- 3- cephem-4-carboxylsyre-hydrochlorid (syn-isomer), 0,196 g 3-methyl- l,2,4-diadiazol-5-thiol og 0,252 g natriumhydrogencarbonat, og blandingen omrøres ved en forhøjet temperatur på 70°C i 3 l/2 time. Beaktionsblandingen underkastes søjlekromatografi på polystyrenharpiks (Amberlite XAD-2, Bohm and Haas Co.), idet er elueres med vand og 20$ ethanol i nævnte rækkefølge. Fraktionerne, som indeholder det ønskede produkt, samles og lyofiliseres. Ved denne fremgangsmåde opnås 0,142 g af titelforbindelsen.

IB(KBr, cm"1): 1767 NMB(100 MHz, d6-DMS0, ): 2,52 (s, thiadiazol-CH3), 3,35 og 3,64 (ABq, J=l6Hz, 2-0¾), 4,44 og 4,56 (ABq, J=13Hz, 3-CH2), 5,05 (d, J=5Hz, 6H), 5,66 (dd, J=5 og 6Hz, 7H), 6,64 (s, thiazolin, 5H), 7,11 (bi. s, HN= og thiazolin NH), 9,46 (d, J=6Hz, C0MH).

Elementæranalyse for C-j^H-^NyO^ S4Na*3H20:

Beregnet: C 32,59 H 3,42 N 16,63

Fundet: C 32,59 H 3,29 N 16,06

Eksempel 15.

Fremstilling af natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-imino-acetamido]-3-(4-methyl-1,2,4-triazol-3-yl)thiomethyl-3-cephem- 4- carboxylat (syn-isomer).

20 ml phosphatpuffer (0,2 M, pH 6,4) opløses 0,663 g 7-[2-(2-imino- 4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem- 4-carboxylsyre-hydrochlorid (syn-isomer), 0,23 g 4-methyl-l,2,4-triazol-3-thiol og 0,336 g natriumhydrogencarbonat, og den blandede opløsning omrøres ved en forhøjet temperatur på 70°C i 3 1/2 time. Beaktionsblandingen underkastes søjlekromatografi på polystyrenhar-

39 DK 159783 B

piks (Amberlite XAD-2, Rohm and Haas Go.), med vand som eluerings-middel. Fraktionerne, som indeholder det ønskede produkt, samles og lyofiliseres. Ved denne fremgangsmåde opnås 0,371 g af titelforbindelsen.

IR (KB*·, cm"1): 177 0 NMR(100 Mhz, d6-BMS0, ): 3,59 (s, triazol-GH^), 3,3$ og 3,62 (AMq, J=låHz, 2-0¾), 4,ld og 4,30 (ABq, J=13Hz, 3-0¾), 4,99 (d, J=5Hz, 6H), 5,64 (dd, J=5 og SHz, 7H), 6,64 (s, thiazolin 5H), 7,12 (br. s, HN= og thiazolin NH), $,4é (s, triazol, 5H), 9,43 (d, J=SHz, CONH), 12,0 (br. =N0H).

Elementær analyse for C^^H-L^N^0^S^Na*2,5H20:

Beregnet: G 34,10 H 3,5$ N 19,dd

Fundet: G 34,11 H 3,72 N 19,54

Eksempel 16.

Fremstilling af natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-imino-acetamido]-3-(2-methyl-l,3,4-thiadiazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer).

10 ml vand opløses 0,53 g (0,93 mmol) 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-(mandelyloxymethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre-hydrochlorid (syn-isomer), 0,2 g (1,5 mmol) 2-methyl- l,3,4-thiazol-5-thiol og 0,2$ g (3,4 mmol) natriumhydrogencarbonat, og den blandede opløsning omrøres ved 60°C i 50 minutter. Reaktionsblandingen underkastes søjlekromatografi på polystyrenharpiks (Amberlite XAD-2-, Rohm and Haas Go.), idet der elueres med vand og med ethanol i nævnte rækkefølge. Fraktionerne, som indeholder det ønskede produkt, samles, koncentreres og lyofiliseres. Det resulterende pulver opløses i 2 ml vand, og opløsningen kromatograferes på en søjle af dextrangel (Sephadex LH-20, Pharmacia), med vand som elue-ringsmiddel. Fraktionerne, som indeholder det ønskede produkt, samles og lyofiliseres* Ved denne fremgangsmåde opnåedes 0,19 g af titelforbindelsen.

40 DK 159783 B

IR(KB*, cm"1): 1767, 1666, 1600, 1542 MS(100 MHz, d6-DMSQ, ) : 2,68 (s, thiadiazol-CH3), 3,36 og 3,63 (ABq, J=l£Hz, 2-GH2), 4,35 og 4,56 (ABq, J=13Hz, 3-0¾), 5,04 (d, J=5Hz, 6H), 5,66 (dd, J=5 og 8Ez, 7H), 6,64 (s, thiazolin, 5H), 7,10 (br. s, HN= og thiazolin NII), 9,35 (d, J=3Hz, CONH), 11,92 (br. s, =N0H).

NMR (100 MHZ, D20, ): 2,73 (s, thiadiazol-CH3), 3,43 og 3,Bl (ABq, J=l£Hz, 2-GH2), 4,03 og 4,49 (ABq, J=13Hz, 3-0¾), 5,22 (d, J=5Hz, 6H), 5,^3 (d, J=5Hz, 7H), 6,99 (s, thiazolin, 5H).

Elementær analyse for O^^H^NyO^S^Na^HgO:

Beregnet: C 33,62 H 3,17 N 17,15

Fundet: G 33,H 3,20 N l6,B6

Eksempel 17.

Fremstilling af 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acet-amido 3-3-(4-carbamoylpyridiniummethyl)-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer).

En blanding af 0,S&3 g 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-imino-acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-hydrochlorid (syn-isomer), 0,492 g isonicotinamid, 2 g kaliumiodid, 0,l6B g na-triumhydrogencarbonat og en 0,2 M phosphatpuffer (pH 6,4) omrøres ved en forhøjet temperatur på 70°G i 3 l/2 time. Reaktionsblandingen underkastes søjlekromatografi på polystyrenharpiks (Amberlite XAD-2, Rohm and Haas Co.), og derefter på dextrangel (Sephadex LH-20, Pharmacia) i nævnte rækkefølge, med vand som elueringsmiddel. Fraktionerne, som indeholder det ønskede produkt, samles og lyofiliseres. Ved denne fremgangsmåde opnåedes 0,041 g af titelforbindelsen.

IR (KBr, cm-1): 1773 MR(100 MHz, d6-DMS0, ):

41 DK 159783 B

3,10 og 3,57 (ABq, J=l6Hz, 2-CH2), 5,OB (d, J=5Hz, 6H), 5,23 og 5,75 (ABq, J=14Hz, 3-CH2), 5,69 (dd, J=5 og 6Hz, 7H), 6,62 (s, thiazolin, 5H), 7,05 (bar. s, HN= og thiazolin NH), 6,17 og 6,74 (hver br. s, CONH2), 6,45 og 9,55 (ABq, J=6Hz, pyridinium ringprotoner), 9,32 (d, J=6Hz, CONH).

Elementær analyse for C-^^H2yNy0^S2*4H20:

Beregnet: G 39,65 H 4,36 N 17,04

Fundet: G 39,26 H 3,91 N 16,97

Eiksempel 16.

Fremstilling af natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-imino-acetamido]-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer).

I 5 ml vand opløses 0,57 g 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yi)-2-hydroxy~ imino-acetamido]-3-(mandelyloxymethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre-hydrochlorid (syn-isomer) og 0,17 g natriumhydrogencarbonat, og der tilsættes under omrøring og isafkøling af den blandede opløsning 0,55 ml 2 N natriumhydroxid. Blandingen omrøres ved denne temperatur i 3 timer og derefter ved stuetemperatur i en time. Reaktionsblandingen underkastes søjlekromatografi på polystyrenharpiks (Amberlite XAD-2, Rohm and Haas Go.), med vand som elueringsmiddel. Fraktionerne, som indeholder det ønskede produkt, samles og lyofiliseres. Ved denne fremgangsmåde opnås 0,19 g af titelforbindelsen.

IR(KBr, cm-'1'): 1766, 1662 (skulder), 1604, 1530 MR(100 MHz, D20, ): 3,46 og 3,72 (ABq, J=l6Hz, 2-CH2), 4,31 (s, 3-0¾), 5,25 (d, J=5Hz, 6H), 5,64 (d, J=5Hz, 7H), 7,01 (s, thiazolin, 5H).

Elementær analyse for Gi3Hq2%06S2Na’2%0:

Beregnet: C 34,14 H 3,53 N 15,31

Fundet: C 34,23 H 3,52 N 15,17

DK 159783 B

42

Eksempel 19.

Fremstilling af 7-(4-chlor-2-hydroxyimino-3-oxobutyrylamino)-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer).

Til en blanding af 22,3 g 7-(4-chlor-3-oxobutyrylamino)-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre og 200 ml eddikesyre sættes under omrøring og isafkøling en opløsning af 3,& g natriumnitrit i 20 ml vand, dråbevis i løbet af 15 minutter. Kølebadet fjernes, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 3 timer.

Denne reaktionsblanding fortyndes med 600 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid og ekstraheres fire gange med 250 ml portioner af ethylacetat. Ekstrakterne samles, vaskes med vand, tørres og koncentreres til tørhed under reduceret tryk. Remanensen omrøres med 200 ml ethylether, og det resulterende pulver opsamles ved filtrering. Ved denne fremgangsmåde opnås 19,0 g af titelforbindelsen.

IR(KBr, cm-1): 17^5 MR(100 MHz, d6-DMS0, ): 3,57 og 3,79 (ABq, J=lSHz, 2-0¾), 3,94 (s, tetrazol-CH3), 4,20 og 4,37 (ABq, J=13Hz, 3-0¾), 4,73 (s, 010¾), 5,13 (d, J=5Hz, 6H), 5,7S (dd, J=5 og SHz, 7H), 9,2δ (d, J=4Hz, C0NH).

Eksempel 20.

Fremstilling af natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-imino- acet amido ] -3 - (1-methyl-lH-1 etr azol- 5-yl) thiomethyl-3 - cephem- 4-carboxylat (syn-isomer). 1 1 ml dimethylacetamid opløses 0,23$ g 7-(4-chlor-2-hydroxyimino-3-oxobutyrylamino)-3-(1-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem- 4-carboxylsyre (syn-isomer) og 0,03# g thiourea, og den blandede opløsning omrøres ved stuetemperatur i 2 l/2 time. Reaktionsblandingen blandes med 10 ml ethylacetat, hvorefter en gummiagtig substans udskilles. Supernatanten dekanteres fra og remanensen blandes med 10 ml ethylether. Det resulterende pulver opsamles ved filtrering, opløses straks i en opløsning af 0,0^4 g natriumhydrogencarbonat i 10 ml

« DK 159783 B

vand og kromatograferes på en søjle af dextrangel (Sephadex LH-20, Pharmacia) med vand som elueringsmiddel. Fraktionerne, som indeholder det ønskede produkt, samles og lyofiliseres. Ved denne fremgangsmåde opnås 0,112 g af titelforbindelsen.

Med hensyn til IR- og NMR-spektrene er dette produkt i god overensstemmelse med det i eksempel 12 opnåede produkt.

Eksempel 21.

Fremstilling af 7-(4-brom-2-hydroxyimino-3-oxobutyrylamino)-3-(1-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer).

Til en blanding af 3,43 g 7-(4-brom-3-oxobutyrylamino)-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre og 24 ml eddikesyre sættes under omrøring og isafkøling dråbevis en opløsning af 0,532 g natriumnitrit i 2,5 ml vand. Blandingen omrøres i 10 minutter, og efter at isbadet er fjernet, i yderligere en time ved stuetemperatur, og blandingen omrystes kraftigt med 60 ml af en mættet opløsning af vand og 100 ml ethylacetat. Det organiske lag skilles fra, vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, tørres og koncentreres under reduceret tryk. Remanensen om^øres med 100 ml ethylether, og det resulterende pulver isoleres. Ved denne fremgangsmåde opnås 2,763 g af titelforbindelsen.

IR(KB*, cm-1): 17^0 NMR(100 MHz, d6-DMS0, ): 3557 og 3,79 (ABq, J=lSHz, 2-CH2), 3>96 (s, tetrazol-GH^), 4*23 og 4,39 (ABq, J-14HZ, 3-CH2), 4,79 (s, BrCH2-), 5,12 (d, J=5Hz, 6H), 5,76 (dd, J=5, SHz, 7H), 9,27 (d, J=2Hz, C0NH).

Eksempel 22.

Fremstilling af 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acet-amido]-3-(1-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxyl-syre-hydrobromid (syn-isomer).

44 DK 159783 β I 4 ml dimethylacetamid opløses 1,04 g 7-(4-brom-2-hydroxyimino-3-oxobutyrylamino)-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl) thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer) og 0,152 g thiourea, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 90 minutter. Til denne reaktionsblanding sættes 50 ml ethylether, og efter omrøring dekanteres supernatanten fra.

Til remanensen sættes ethylether, og samme fremgangsmåde gentages. Denne cyclus gentages nogle få gange, og det resulterende pulver isoleres ved vakuumfiltrering og tørres. Yed denne fremgangsmåde opnås 1,05$ g af titelforbindelsen.

IR(KB*, cm"1): 17&L

MR(100 MHz, d6-DMS0, ): 3,53 og 3,30 (ABq, J=l3Hz, 2-0¾), 3,95 (s, tet*azol-CH3), 4,23 og 4,40 (ABq, J=14Hz, 3-0¾), 5,15 (d, J=5Hz, 6H), 5,75 (dd, J=5 og 3Hz, 7H), 6,33 (s, thiazolin, 5H), 9,53 (d, J=3Hz, COM), 12,20 (br. s, =N-0H).

Eksempel 23.

Fremstilling af natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-imino-acetamido]-3-(1-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem- 4-carboxylat (syn-isomer).

I en opløsning af 0,163 g natriumhydrogencarbonat i 4 ml vand opløses 0,573 g 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-hydrobromid. Opløsningen underkastes søjlekromatografi på dextrangel (Sephadex LH-20, Pharmacia), med vand som elueringsmiddel. Fraktionerne, som indeholder et ønskede produkt, samles og lyofiliseres. Yed denne fremgangsmåde opnås 0,267 g af titelforbindelsen.

Med hensyn til IR- og M&-spektrene var dette produkt i overensstemmelse med det i eksempel 12 opnåede produkt.

Eksempel 24.

Fremstilling af 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acet-amido]-3-nitrogenholdig heterocyclisk thiomethyl-3-cephem-4-carboxyl-

45 DK 159783 B

syre (I), -hydrochlorid, -betain eller -natriumsalt (syn-isomer).

En af de følgende fremstillingsfremgangsmåder 1 til 4 blev valgt til fremstilling af de i tabel 5 opførte forbindelser. Forbindelsernes fysiske egenskaber er vist i den samme tabel.

Generel fremstillingsfremgangsmåde 1.

I 40 ml phosphatpuffer (0,1 M, pH 6,4) opløses 0,956 g (2 mmol) 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-acetoxy-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre-hydrochlorid (syn-isomer), 2,2 mmol af en nitrogenholdig heterocyclisk thiol og 0,504 g (6 mmol) natrium-» hydrogencarbonat, og opløsningen omrøres ved en forhøjet temperatur på 60-65°C i 7 til S timer. Reaktionsblandingen koncentreres under reduceret tryk til ca. 20 ml, og efter indstilling til pH-værdi 6,5 med 10$ natriumhydrogencarbonatopløsning eller 10$ phosphorsyre, om nødvendigt underkastes koncentratet søjlekromatografi på polystyrenharpiks (Amberlite XAD-2, Rohm and Haas Co.), idet der elueres med vand, 5$ ethanol og 10$ ethanol i nævnte rækkefølge. Fraktionerne, som indeholder det ønskede produkt, samles og ethanolet destilleres af under reduceret tryk. Til sidst lyofiliseres remanensen. Ved denne fremgangsmåde opnås titelforbindelsen, d.v.s. 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-nitrogenholdig heterocyclisk thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre, -hydrochlorid, -betain eller -natrium (syn-isomer).

Generel fremstillingsfremgangsmåde 2.

I 20 ml vand opløses 1,14 g (2 mmol) 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-(mandelyloxymethyl)-3-cephem-4-carb-oxylsyre-hydrochlorid (syn-isomer), 2,2 mmol af en nitrogenholdig heterocyclisk thiol og 0,52 g (6,2 mmol) natriumhydrogencarbonat, og den blandede opløsning omrøres ved en forhøjet temperatur på 60°C i 50 minutter. Efter indstilling til pH-værdi 6,5 med 10$ natriumcarbo-natopløsning eller 10$ phosphorsyre, om nødvendigt underkastes ovenstående opløsning søjlekromatografi på polystyrenharpiks (Amberlite XAD-2, Rohm and Haas Go.), idet der elueres med vand, 5$ ethanol og 10$ ethanol i nævnte rækkefølge. Fraktionerne, som indeholder det ønskede produkt, samles og ethanolet destilleres af under reduceret

46 DK 159783 B

tryk. Remanensen lyofilise*es. Ved denne fremgangsmåde opnås den angivne forbindelse, d.v.s. 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-nitrogenholdig heterocyclisk thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre, -hydrochlorid, -betain eller -natrium (syn-isomer).

Generel fremstillingsfremgangsmåde 3.

(1) I 40 ml vand opløses 10,7 g (30 mmol) 7-acetoacetamido-3-acetoxy-methyl-3-cephem-4-earboxylsyre, 5,04 g (60 mmol) natriumhydrogen-carbonat og 30 mmol af en nitrogenholdig heterocyclisk thiol. Efter indstilling til pH-værdi 7,0 med 10$ natriumhydroxidopløsning omrøres den ovenstående opløsning ved forhøjet temperatur på 60-65°C i 4 timer. Efter afkøling tilsættes 2,31 g (33 mmol) hydroxylaminhydro-chlorid. Derefter indstilles pH-værdien til 3,6 med en tilstrækkelig mængde 1 N saltsyre. Opløsningen henstår i 16 timer ved stuetemperatur. De resulterende krystaller opsamles ved filtrering, vaskes med acetone og tørres. Når den omhandlede forbindelse er vandopløselig og ikke udfældes, indstilles reaktionsblandingen til pH-værdi 3,3 °g koncentreres under reduceret tryk til ca. 50 ml. Til remanensen sættes 1500 ml ethanol, og blandingen omrøres under isafkøling i 4 timer. De resulterende krystaller opsamles ved filtrering, vaskes med ethanol og tørres. Ved denne fremgangsmåde opnås en 7-amino-3-nitro-genholdig heterocyclisk thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre.

(2) Til en opløsning af 1,03 g (13 mmol) diketen i 5 ml methylen-chlorid, der er afkølet til -30°C, sættes dråbevis 15 g af en opløsning af 1 mol ehlor i 15 mmol carbontetrachlorid eller en opløsning af 2,24 g (14 mmol) brom i 5 ml methylenchlorid. Særskilt opløses en 7-amino-3-nitrogenholdig heterocyclisk thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (10 mmol) og 2,02 g (20 mmol) triethylamin i 20 ml methylen-chlorid, og der afkøles til -20°G. Derefter sættes den ovennævnte reaktionsblanding dråbevis hurtigt til denne afkølede opløsning. I flere tilfælde udvikles der varme, hvilket bringer blandingen til ca. 0°C. Væskens temperatur forøges gradvis til stuetemperatur, hvorved blandingen omrøres i 15 minutter. Til reaktionsblandingen sættes 150 ml ethylacetat og 100 ml 10$ phosphorsyre, og blandingen omrøres kraftigt. Det organiske lag skilles fra, vaskes med vand, tørres og koncentreres. Remanensen løsnes med ether. Ved denne fremgangsmåde 47

DK 159783 B

opnås pulverformet 7-[4-chlor-(når chlor anvendes) eller brom (når brom anvendes)-3-oxobutyrylamino]-3-nitrogenholdig heterocyclisk thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre.

(3) Til en blanding af 7 mmol af en 7-(4-chlor- eller brom-3-οχο-butyrylamino)-3-nitrogenholdig heterocyclisk thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre og 24 ml eddikesyre sættes dråbevis under omrøring og isafkøling en opløsning af 0,532 g (7,7 mmol) natriumnitrit i 2,5 ml vand« Denne blanding omrøres i 10 minutter, og efter at isbadet er fjernet, ved stuetemperatur i en time. Til denne reaktionsblanding sættes 60 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid og 100 ml ethylacetat, og blandingen omrystes kraftigt. Det organiske lag skilles fra, tørres og koncentreres til tørhed. Remanensen løsnes med ethylethe*·, og det resulterende pulver opsamles ved filtrering og tørres. Ved denne fremgangsmåde opnås en 7-(4-chlor- eller brom- 2-hydroxyimino-3-oxobutyrylamino)-3-nitrogenholdig heterocyclisk thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer).

(4) I 4 ml dimethylacetamid opløses 2 mmol af en 7-(4-chlor- eller brom-2-hydroxyimino-3-oxobutyrylamino)-3-nitrogenholdig heterocyclisk thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer) og 0,152 g (2 mmol) thiourea, og den blandede opløsning omrøres ved stuetemperatur i 90 minutter. Til denne blandede opløsning sættes 50 ml ethylether, og efter omrøring dekanteres supernatanten fra. Derefter sættes ethyl-ether til remanensen, og blandingen behandles på samme måde. Den ovenstående fremgangsmåde gentages nogle få gange, og det resulterende pulver opsamles ved filtrering. Pulveret opløses i 20 ml vand, og efter indstilling til pH-værdi 6,5 underkastes opløsningen kromatografi på polystyrenharpiks (Amberlite XAD-2, Rohm and Haas Go.), idet der elueres med vand og 10$ ethanol i nævnte rækkefølge. Fraktionerne, som indeholder det ønskede produkt, samles, koncentreres og lyo-filiseres. Ved denne fremgangsmåde opnås den angivne 7-[2-(2-imino- 4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-nitrogenholdige hete-rocycliske thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-betain eller -natrium (syn-isomer).

Generel fremstillingsfremgangsmåde 4» (1)1 300 ml vand opløses 31,4 g (0,1 mmol) 7-amino-3-(3-oxobutyryl-

48 DK 159783 B

oxy)methyl-3-cephem-4-carboxylsyre, 13,5 g (0,22 mmol) natriumhydro-gencarbonat og 0,1 mmol af en nitrogenholdig heterocyclisk thiol, og efter indstilling til pH-værdi 5}5 opvarmes den blandede opløsning til 60°G i en time. Efter afkøling vaskes reaktionsblandingen én gang med dichlormethan og det vandige laf indstilles til pH-værdi 3,3, og omrøres under isafkøling i en time. Bundfaldet opsamles ved filtrering, vaskes med vand, methanol og acetone i nævnte rækkefølge og tørres. Ved ovenstående fremgangsmåde opnås en 7-amino-3-nitrogenholdig heterocyclisk thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre. Ba den omhandlede forbindelse er vandopløselig og ikke udfældes, indstilles reaktionsblandingen til pH-værdi 3 >3 og koncentreres under reduceret tryk til ca. 50 ml. Til remanensen sættes 1500 ml ethanol, og blandingen omrøres under isafkøling i 4 timer. De resulterende krystaller opsamles ved filtrering, vaskes med ethanol og tørres. Ved denne fremgangsmåde opnås en 7-amino-3-nitrogenholdig heterocyclisk thio-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre.

(2) Ved anvendelse af den ovenfor opnåede 7-amino-3-nitrogenholdige heterocydiske thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre og fremgangsmåderne i de generelle fremstillingsfremgangsmåder 3-(2), (3) og (4) opnås den ønskede 7-C2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acet-amido]-3-nitrogenholdige heterocydiske thiomethyl-3-cephem-4-carb-oxylsyre-betain eller -natrium (syn-isomer).

Tabel 5.

HN n Y]| —J-C-CONH--/ \ H K i_N 1 0H 0 Y ch2sr

COOM

DK 159783 B

49

IR

bin! ' R M L·tam NMR 6PPra Jr«-· delse (KBr5 gangs- nr. cm"”!) måde (100MHzsD20):3.40 & M__w 3.79(ABqs J=l8Hzs2- , 1 |l II Na 1763 & ^-52 A / (ABq, J=13Hzs3-CH2)s 2 7 XS 5.19(dJJ=5HzJ6-H)s 5.80(d,J=5Hz,7-H), 3 6.99(s3thiazolin 5-H) 4 50

DK 159783 B

(100MHz,D20):2.55(s, , N—N oxadiazol -CHo),3.41 & n li II Ws ·, nco 3.84 (ABq,J=l8Hz,2-CH2), 2 2 X /\ Na 1763 3.98 & 4.49(ABq,J=13Hz, _ ; 0 CH0 3-CH2)35.21(dsJ=5Hzs 3 3 6-H)35.82(d9J=5Hz,7-H)s 4 j ;6.98(s 3 thiazolin 5-H) ................. .....—................μ- 1 ........-— ; t j .. .. ; (100MHz,D?0):3.44 & η ! 3.79(ABq, J=l8Hz92-CH2) j I |l ! 4.04 & 4.25(ABq,J=13Hz, 2 3 Na 1766|3-CH2)} 5.21(d,J=5Hz, - V 6-H), 5.82(d,J=5Hz,7-H), 3 H 6.99(s3thiazolin 5-H), 4 8.36(s,triazol 5-H) --ri---------- „ „ (100MHz,D20):2.51(s, , ,, ,| triazol 3-CHo),3.42 & |i jl 3.96 (ABq,J=18hz,2-CH2 ), 2 4 /Vv/Xra Na 1763 3-68(s,triazol 4-CH3), ~ " 0ii3 3.75 & 4.38(ABq,J=l4Hz, 3 CEL 3-CH2),5.23(d,J=4Hz, 4 3 6-H),5.83(d,J=4Hz,7-H), 6.99(s,thiazolin 5-H) (100MHz,D20): 3.31 & 3.86(ABq,J=18Hz,2-CH2), 1 ' N-j 3-64 & 4.32(ABq,J=13Hz, ? II j 3-CH2), 3.78(s, c- Å / Mq -i 7<cn imidazol l-CHg), 5.22 3 5 / N Na 1760 (d,J=5Hzs6-H),5.82 u ' (d,J=5Hz37-H)3 6.99 (s jthiazoline 5-H),7.14 & 7*30(hver djJ^lHz, imidazol 4- & 5-H) 1 — i'—'— ........... — — ' — i t (100MHz,D20): 3-55 & i N N 3.88(ABq,J=l8Hz,2~CH2), j * x A »*«3 yyj:8»S®' , / S CP. 6-H),5.92(d,J=5Hz,7-H), h 3 6.99(s 3thiazolin 5-H) |

__I

51 DK 159783 B

( (100MHz,D20): 2.34 & CH_ 2.7β(hver s3 thiazole 1 M / 3 4- & 5-CHo)3 3=40 & p 7 N,j Π Na 1760 3=82(ABq3J=l8Hz92-CH?)3

Jl Λ 3=90 & 4.49(ABq,J=13 Hz, , S CH- 3-CH2)s 5.25(d,J=5Hz, 3 6~H),5-90(d,J=5Hz,7-H), 6.98(s,thiazolin 5-H) (100MHz,D20):2.55(s, „ thiazol · 5”CHo)33.4l " li & 3»87(ABq3J=X8Hz32-CH2), 8 ,1· 1 Na 1760 3.91 & 4.59(ABq3J=l4Hz3 4 / S/ CH, 3-CH2)s5*26(d, Jr=5Hz, 3 6-H)35.88(d3J=5Hz97-H)3 6.98(s,thiazolin 5-H), 7.51(s,thiazol. 4-H) (100MHz3dg-DMSO): 2.32 (s,thiazol 4-CH3 ),3-46 CH0 & 3.73(ABq,J=l8Hz32-CH2)3 / 3 4.11 & 4.49(ABq3J=13Hz, ? ”,—7 3~CH2), 5»20(d,J=5Hz, 9 Η 1 H 1760 6-H), 5«75(dd. J=5 & 3 8Hz, 7-H), 6.23( s., thiazol .

b 5-H), 6.67(s,thiazolin 5- H), 7.l(br.s,=NH & thiazolin NH)3 9.38 (d,J=8Hz,CONH) (ΙΟΟΜΗζ,ϋρΟ) :3-41 & N_N 3.78(ABq,J=l8Hz3 2-CH2)» 10 I I) Na 1758 3.99 & 4.32 (ABq,J=13Hz, 2 Λ X 3~CH2)35·25(d3J=5Hz,6-H), ή / N 5.87(d,J=5Hz37-H),6.98 » (s3thiazolin 5-H)

Na (100MHz,D2O): 3.43 & _ 3«86(ABq, J=l8Hz,2~CH2), 1 ,, . I 1760 3»9° & 4.48(ABq,J=13Hz, 11 I I Na 1760 3“CH2), 5.30(d,J=5Hz, 2 6- H), 5.90(d,J=5Hz,7-H), b nh2 6.99(s»thiazolin 5-H) t - ______ - ----- ’ 52

DK 159783 B

(100MHz3D20): 3.46 & M .. 3.90(ABq3J=18Hx,2-CH2)·, 1 , i, 3.90(s,OCH3)s 3.92 & 2 12 I Na 1760 4.49(ABq9J=13Hz93-CHp), K'KSsSKr ; thiazolin 5-H) (100MHz5D2O):3.12 & 1 KT « 3.29(hver, N(CH3)2)9 2 , 3.53 & 3»87(ABq3J=l8Hz9 i ! η7ςβ 2-ch2),4.19 & 4.58(ABq9 3 13Λ /V cm(c„ , Na 175ΰ J=14Hz93-CH2)s 5.33(d, 4 / S CH2CON(CH3)2 J=5Hzs6-H)s5.93(d9J=5Hz 7-H)9 6.99(sjthiazolin 5-H) (100MHz3D20):3-55 & N—N 3·94(ABq 3J=18Hz9 2-CH2)3 1 ih I '1 Wa 1761 4.16(s9CH2CO)9 4.19 & 2 14 λ Λ Na 1761 4.60(ABq 3 J=13Hz 93-CH2)9 * S CHoC00Na 5.35(d9J=5Hz36-H)95.94 4 d (d9J=5Hz97-H)9 6.99(s3 thiazolin 5-H) ΛΤ w (100MHz9D20): 3.51 & , , 3.89(ABq9J=l8Hz92-CH2)9 x ις I I Na 176o 3.9Ks-,OCH3), 4.19 & % 2 15 ΛβΑΓΚ coorR Na 1750 4.56(ABq9J=13Hz93-CH2)9 S CH2COOCH3 5.31(d9J=5Hz96~H)9 5.90 5 (d9J=5Hz97-H)3 6.99 4 (s9thiazolin 5-H) (100MHz3D20): 3-50 & 1 ,{ π 3*88 (ABq9 J=l8Hz9 2-CH2) 3 p 16 Å /\ Λ 1762 5-W * VI^t,J™3H8· , / pomn 3“CH2) s 5 · SO(&3<Τ-~5Ηζ5 3 s ch2conh2 6~h)9 5<90(dsJ=5HZi7_H)} 6.98(s,thiazolin 5-H) .

DK 159783 B

53 (100MHz3D20): 2.24(s, „ „ CHoS)s 3.52 & 3.87(ABqs · N—N J=l8Hz,2-CH2)3 4.21 (s, 17 I II Na 1762 CH2S)3 4.26 & 4.57(ABq, 2 ΛςΑ J=l4Hzs3-CH2)3 5;31(d, 3 / S CH2SCH3 J=5Hz,6-H), 5-93(d,J= ^ 5Hzj7-H)s 6.99(s, 4 thiazolin 5-H) (100MHzjD20); 3.36(ss N__N OCH3), 3.28 & 3.84(ABq, 1 i i J=18Hz,2-CH2), 3.98 & p 18 li L Na 1763 4.36(ABqsJ=l4Hzs3-CH2), /VS/XCHo0CHo 4.76(s jCH20)s 5.07(d, 3 2 3 J=5Hz3 6-H), 5-67(d3 u J=5Hz,7-H), 6.99(s3 thiazolin 5-H) N-N (60MHz3D20): 3-35 & 3-74 1 -,η l! Il t rrco (ABq, J=loHz,2--CH2 ) 3 3-97 2

Ji λ Na 1763 & 4,38(ABq3J=sl4Hzs 3-CH2) 3 2 X S X SCHoC00Na 5.19(d,J*5Hz,6-H), 5.78 3 2 (d,J=5Hz,7-H), 6.98(s3 , thiazolin 5-H) „ „ (60MHz,D20):3·4-3-8(m, N'—,N 2 x CH2), 3.95(t,J=6Hz, _ ~ \ M ,7**- CH20)3 4.01 & 4.38 (ABq, 2 20 Λ Λ Na 1765 J=l4Hz,3-CH2), 5-l6(d3 3 S SCH2CH2OH j=5Hz36-H)3 5.77(d3J= * 5Hz,7-H)3 6.99(s3 4 thiazolin 5-H) (100MHz3CFoCOOH): 3.79 „ (s,2-CH2), 4.45 & 4.84 N:—f1 (ABq3J=I4Hz33-CH2), 2 21 I I NH H 1765 5.l4(d,J=7Hz3CH2NH)3 A«ArH ly.mpwH 5.36(d,J=5Hz, 6fH), 4 S CH2NHCNH2 5.99(dd, J=5 & 8Hz37-H), 6.4-6.9(br.3guanyl 4 x Η), 6.99(s3 thiazolin 5-H) 54

DK 159783 B

(100MH2sD20): 3-43 & „ w 3·8l(ABq,J=l8Hz3 2-CH2)3 1

22 , Na 1765 4.07 & 4.56(ABq3J=13Hz P

I II 3"CHp)s 4.96(s3CH20)3 λ A 5.23(daJ=5Hz36-H)s 4 s ch2oh 5.84(d9J=5Hzs7»H)a 6.99 (s3thiazolin 5-H) (100MHz3D20):2.51(ss N-N N(CHo)25 3.43 & 3.80 1 I II Na 176p (ABq9J=l8Hz32-CH2)s 4.11 2 23 X /k Na 17b2 & 4.50(ABq,J=13H2,3-CH2), 2 S CH0N(CHO5 4.21 (s 5 thiadiazol 4 2 3 2 -CH2N), 5.21(d3J=5Hz3 6-h1, 5.82(d,J=5Hz97“H)s 6.98(sjthiazolin · 5-H) (60MHz3D20): 3.1-3.8 (m36 x H)3 4.02 & ·, N.—,N 4.25(ABq9J=13Hz,3“CH2), oli ί Ma 176, 5.lHd,J=5Hz,6-H), 5.73 2 • 7 S SCH5CH5SO,Na wa 11 3 (d3J=5Hz37-H)3 6.99(s3 n 223 thiazolln 5-H) „ M (100MHz,D20): 2.93(ts i J=6Hz3thiadiazol -CHp);, 1 I Η 17fi0 3-3-4.0(m34 x H)3 4.08 25 nw Na 1750 & 4.56(ABq3J=14Hz33-CHp) 3 S CH2CH2OH 5.23(dsJ=5Hz36“H)3 5-84 3 (d3J=5Hz37-H)3 6.99(s3 u thiazolin 5-H) (lOOMHZjDpO): 3-02 N—N (s5N(CH3)2)3 3-45 & o of- I II 17™ 3.82(ABq3 J=l8Hz32“CHp)3 26 / I Na 1768 3.67(br.SjCH2CH2), H.07 3 7 S CHoCHoN(0H,)q & 4.52(ABq3J=13Hz33-CH2)s h

22 32 5o27(d3J=5Hz36-H)3 5-84 H

(d3J=5Hz37-H)3 6.99(s3 thiazolin 5-H) 55

DK 159783 B

-1------- - ' —I

(100MHz3D20): 3=39 & N-N 3.83(ABq,J=l8Hzs2-CH2)s 1 27 I I Na 1760 3.7^(8,0^), 3.71 & ? i1 I 4.31(ABq3J=13Hzs3“CH2)3 ^ITCH^H 4o82(s3CH20)j 5.17(d3J= 4 ' 2 5Hz36-H)3 5.79(d3J=5Hz3 0il3 7“H)3 6 „99(s3thiazolin 5-H) (100MHz,D20); 2 c 24(s 3 N-N CH3CO)3 3-41 & 3 »72(ABq, 1 » il »* >«« ! / N CH.OAc 4.30(ABqsJ=13Hz3 3”CH2)3 4 ' 2 5.28(d3J=5Hz36-H)3 5·36 CH3 (s3CH20)3 5.83(d,J=5H-zs 7--H)s 6o99(s3thiazolln· 5-H)__ (100MHzsD20): 3.01(s, N—N N(CH3)2)3 3.47 & 3.79 λ II IJ. (ABq3J=l8Hz32-CH2)3 ? 29 A./N w 0 1768 3.78(t3J=6Hz9CH2NMe2)9 N “ 4.10 & 4.25(ABq9J=13Hz3 4 (CH0)dN(CH,)? 3“CH2)9 5·20(d3J=5Hz36-H)9 22 32 5.76(d9J=5Hz97-H)9 6.99 0 (s9thiazolin 5-H) (100MHz3D20): 2.4(m9 N-N C-CH2-C), 2.95(s9N η j It (CH3)2), 3.3(m9 cH2NMe2)3 30 Λ -N Na 1760 3.45 & 3.8l(ABq9 <T=l8Hz3 p N 2“CH2)3 4.12 & 4.33(ABq9 s N,CH , J=13Hz93-CH2)9 4.42(t ^ (CH2;3ncch3;2 j=7Hz9tetrazol -CH2-C)3 5.20(d3J=5Hz36-H)9 5.80 (d9J=5Hz97-H) 9 6.98(s9 thiazolin 5-H) 56

DK 159783 B

(lOOMHZjDpO): 2.96(s3 N—N NCH3), 3·ο2& 3.95(ABq, o-i II II .ΗΓη H 1770 J=1«HZ32-CH2)3 3.83 & 2 31 J N Η05, iH 1770 4.94(hver tf J=6llz9 / N/ I CH2CH2)9 5.33(d,J-4o5Hzs (h \ μHPH ! 6“H>> 5.87(d9J=4.5Hz3 ^^2^2^^3 7“H)a 6.99(sjthiazolin 5-H) (lOOMHZjDpO): 2.02(s9 M M CHoCO)s 3.51 & 3.83(ABqs J=18Hz92-CH2)9 3.73(t, 1 oo 11 *t<3 i7ft J=6Hz3CH2NAc)9 4.21 & 32 /n..n Na 1765 4.41(1¾. J.13HZ.3- · 2 V CH2)s 4.6l(t9J=6Hz9 CH~CHoNHC0CHo tetrazol -CH2-C)9 5.28(d, 4 22 3 J=5Hz,6-H)9 5.85(d,J*5Hz, 7-H)5 6.98(s3thiazolin 5-H) (100MHz,DpO + NaHCOo): N—N 3.44 & 3.76 (ABqj J= li i| l8Hz92-CH2)9 3.46-3.8(m9 33 .(I N ~) 1765 tetrazol ”C-CH2N)9 4.0- 2 /\/ _ 5.0(m9 3-CH2 & , (+} tetrazol -CH2), 5.20(d3 (CH0)0NH0 J=4.5Hz9 6-H), 5.77(ds 2 2 ^ J=4.5Hz97-H)s 6.98(s 9 thiazolin 5-H) (100MHz9D20): 3.45(ss N-N OCH3)9 3-45 & 3.8l(ABq, ol. I l| Wa 177n J=loHz92-CH2)9 4.17 & p 34 1* N N 1770 4.42(ABq9J=13Hz93-CH2)9 2 / / 5.21(d,J=4,5Hz96-H)3 u , 5,77(s9tetrazol -CH20), CHo0CHo 5.8l(d,J»4.5Hz97-H)9 2 3 6.9 8(s3thiazolin 5-H) 57

DK 159783 B

„ „ (lOOMHZjDpO): 2.22(s, N,—N SCH2)3 3.44 & 3»79(ABq,

Il J=18Hz32-CH2)3 4.21 & 35 Λ / Na 1765 4.42(ABq3J=13Hz33-CH2)3 2 / n 5.22(d9J=5Hz56-H)3 . 4 ' 5.47(s3tetrazol—CHpS), CH2SCH3 5.8l(d3J=5Hz37-H)3 6.98 (s3thiazolin 5-H) (lOOMHZjDpO): 3-42 & N—n 3.78(ABq37=l8Hz32“CH2)3 1 ^ li Wfl Ί7κη 4o03(t9J=6Hz3CH20)3 2 36 n K 1760 4.12 & 4.36(ABq3J=13Hz3 λ / 3~CH2)3 4.55(t3J=6Hz3 4 ' $ tetrazol -CHp-c), 5· 19 s nH (d3J=5HZj6-H)3 5.78(d3 (CH2)2OH j=5Hz37-H)3 6.98(s3 thiazolin 5-H) N-N (100MHz3D20): 3»51 & 1 i || 3.85(ABq3J=l8Hz,2-CH2)3 I n 17f-t- 4.23 & 4.46(ABq3J=13Hzs 2 37 A / Na 3765 3..CH2), 5.29(d,J=5Hz, 2 ' N 6“H)3 5»42(s3tetrazol u CHoC0NHo -CHpCO)3 5·89(d9J=5Hzs 2 2 7-H), 6.99(s3 thiazolin 5-H) (lOOMHZjdg-DMSO + DpO): 1 N-N 3.42 & 3»o8(ABq3J=loHz 38 i 1 Na 1761 2-CH2)3 4.21 & 4.37(ABq3 2

Ah/N J=13H2i3-CH2)s 4.70 N (s3tetrazole -CH2C0)3 4 CHoC00Na 5.07(d3J=5Hz36-H)3 2 5.73(d3Js5Hz37-H)3 6.99(s,thiazolin 5-H) 58

DK 159783 B

(100MHz9D20): 3.41 & N—N 3.72(ABqs J=l8Hz,2-CH2)9 , i i 3.60(sjtriazol “CH3)a I 1 „ , r,rn 3.78(sstriazol 9 39 /^CH„C00Na Na 1760 ~CH2C02)9 3-85 & 4.30 * 2 (ABq9 J=13Hz9 3-CH2)9 , CH3 5·17(dj J=5Hz9 6-H) 5.79(d9J=5Hz97»H)9 6.99(s9thiazolin 5-H) (IOOMHZjDoO): 1.37(t, N-N J=7Hz9CHo19 3.08(q9 J= 1 i i 7Hz9CH2CHo)9 3.50 & 40 A L Na 1765 3.62(ABq, J«l8Hz,2-CH2), 2 / S^CHoCH- 4.03 & 4.34(ABq9 J=13Hz9 d 5 3”CH2)9 5.l8(d9J=5Hz9 3 6-H), 5.80(d9J=5Hz97“H)9 6.99(ssthiazolin 5-H) (100MHz9D90) : 3.44 & J 3.97(ABq/j=l8Hz92-CH2)9 1 I 1 3.57(sjtriazol -CH,) 41 /\M/VWW Na 1760 3.67 & 4.33(ABq, J=f3Hz9 2 Γ NH2 3-CH2), 5.26(d,J=5Hz,6- CH, H). 5.85(d,J=5Hz,7-H), ^ 6.§8(s9thiazolin 5-H) (100MHz9D20): 2.88(t, „ „ J=7Hz9CH2C02)9 3.51 & η

Nt—3983(ABq9 J=l8Hz92-

i' .. CH2)9 4.14 & 4.38(ABq, P

1,2 /\ / Na 1765 J=13Hzs3-0H2), H.6l(t, 2 / XN J=7Hz9tetrazol n ' rnmTa -CHpC), 5.23(d,J*5Hz, CH2CH2COONa 6-H), 5.84(d9J=5Hz9 7“H), 6.99(sa thlazolin 5-H.

59

DK 159783 B

(lOOMHZj D20): 3-43 & CHoC00Na 3« 84 (ABq3 J=l8llz52-CH2) 2 ,T / ά 3.76(ssCH2CO)9 3.98 & 43 Ni i Na 1763 4.54 (ABq3J=l4Hz33-CH2)3 3 I Ij 5.24(d3J=5Hz36~H)3 5.85 (cL3J=5Hz37“H)3 6.98 4 (Sjthlazolln 5-H)3 7.35(ssthiazol 5-H) N-N (60MHz3 t)20): 3.3-4.0 44 j tf Nå 1765 ^4Π3 x CIH2) ,4-i53(ABq? 3-, 2 S ^ NHCHoCHo0H 0¾) * 5.06(d, J=5Hz, 6-H), ^ ^ 5.68(d?J-5Hz,7-H),6.99 (Sjthiazolin 5-H)

.. (60MHz3D20): 2.95(s3N

Ν~~Ν (CH3)2),3.56(m, 2 x CH2) HP- I I Ha 17fi0 3.96(m.2-CH2). 4.34(01. 2 /%'Wtt ΓΗ wrrH 1 76 3-ch2), 5.i3(a.J=5HZ, S NHCH2CH2N(CH3)., 6-H).T 5.70(a,J=5Hz, 7~H)3 6.99(s3thiazolln 5-H) (100MHz3D20): 3.03 & 3.21(hver s3 N(CH2)2)3 « N — i 3.42 & 3.76(ABq3 J= * 46 '' Na 1763 l8Hz32=CH2)3 4.15 & 4.37 4 λ ,N (ABq3 J=14Hz33~CH2)3 N 5.21(d3 J=5Hz36«"H)3 pn PnwfPH ϊ 5'30 & 5.53(Hver s3 C^CONtCH^ ;2 tetrazol -CH2)3 5«79 (d3J=5Hz37-H)3 6.99 (s pthiazolin· 5-H) (60MHz3D20): 3.4-4.0 N— N (m3 2-CH2s trlazol » /U'^cohh : N CONHg (s3 thiazolin 5-H) -CH,-L-:-;- 60

DK 159783 B

Eksempel 25«

Fremstilling af 7-(4-brom-2-hydroxyimino-3-oxobutyrylamino)-3-carbamoyl oxymethyl-3 -cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer).

Til en opløsning af 0,15 g 7-(4~brom-3-oxo butyrylamino)-3-carbamoyl-oxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre i 2 ml eddikesyre sættes under omrøring ved stuetemperatur 0,03 g natriumnitrit dråbevis i løbet af fem minutter. Derefter omrøres blandingen i yderligere 20 minutter, hvorefter den koncentreres til tørhed under reduceret tryk. Det resulterende glasagtige faste stof anbringes på en Merck silicagel-plade nr. 5715 og elueres med ethylacetat-eddikesyre-vand (£:1:1). Farvereaktionen med en 0,5$*s opløsning af kobberchlorid giver en enkelt gul plet ved Bf=0,327· Derfor antages produktet i det væsentlige at være titelforbindelsen og underkastes den næste reaktion.

Eksempel 26.

Fremstilling af natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-imino-acetamido]-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer) .

I 1 ml dimethylacetamid opløses den rå 7-(4-brom-2-hydroxyimino~3-oxobutyrylamino)-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4“carboxylsyre (syn-isomer) og 0,03 g thiourea. Den blandede opløsning omrøres ved stuetemperatur i en time. Reaktionsblandingen omrøres med 50 ml ethyl-ether og supernatanten dekanteres fra. Til remanensen sættes 50 ml ethylether, og blandingen behandles som ovenfor. Det resulterende pulver opsamles ved filtrering og opløses i 5 ml af en 5%1s vandig opløsning af natriumhydrogencarbonat. Opløsningen underkastes søjlekromatografi på polystyrenharpiks (Amberlite XAD-2, Rohm and Haas Co.), med vand som elueringsmiddel. Fraktionerne, som indeholder det ønskede produkt, samles og lyofiliseres. Ved denne fremgangsmåde opnås 0,063 g af titelforbindelsen.

IR(KBr, cm"1): 3400, 176Ο, 1710, 1010, 1530, 1400, 1360, 1330 (carbamoyl C-N) MNR(100 MHz, d6~DMS0, ): 4,72 og 4,£6 (ABq, J=12Hz, 3-0¾), 4,93 (d, J=5Hz, 6H), 5,63 (dd,

61 DK 159783 B

J=5 og 9Hz, 7H), 6,44 (b*. s, C0NH2), 6,72 (s, thiazolin, 5H), 7,1 (br., NH= og thiazolin -NH-).

Eksempel 27«

Fremstilling af pivaloyloxymethyl-7-[2-(2-imino-4-'thiazolin-4-yl)- 2-hydroxyimino-acetamido]-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer).

10,9 g natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4~yl)-2-hydroxyimino-acet-amido]-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxyl-at (syn-isomer) opløses i 60 ml dimethylformamid, og 4,9 g iodmethyl-pivalat opløst i 5 ml dimethylformamid sættes dråbevis i løbet af 10 minutter til opløsningen under omrøring og isafkøling. Derefter omrøres blandingen i yderligere 10 minutter, og 700 ml ethylacetat tilsættes. Den resulterende blanding vaskes med vand (150 ml x 3) og tørres over magnesiumsulfat.

Den tørrede opløsning koncentreres under reduceret tryk og 400 ml diethylether sættes til remanensen, hvorefter denne bliver pulverformet. Pulveret opsamles ved filtrering og tørres under reduceret tryk, hvorved der opnås det ovenfor identificerede produkt. Udbytte 7,602 g.

IR (KBr, cm”1): 1766 mm{100 MHz, i d^-DMSO, ): I, 19 (s, (CH3)3), 3,62 og 3,02 (ABq, J=l6Hz, 2-0¾), 3,94 (s, tet*a-zol-CH3), 4,16 og 4,45 (ABq, J=14Hz, 3-0¾), 5,16 (d, J=5Hz, 6H), 5,76 og 5,93 (ABq, J=6Hz, OCH^O-pivaloyl), omkring 5,6 (m, 7H), 6,67 (s, thiazolin, 5H), 7,10 (br. s, NH-C(=NH)~), 9,42 (d, J=6Hz, C0NH), II, 32 (br. s, =N0H).

Elementæranalyse for C21H23N907S3·0·5Η20:

Beregnet: G 40,64 H 4,22 N 20,31

Fundet: C 40,72 H 4,20 N 19,45 62

DK 159783 B

Eksempel 2S.

Fremstilling af pivaloyloxymethyl-7-[2- (2-imino-4-thiazolin-4-yl) - 2-hydroxyimino-acetamido]-3-(2-methyl-l,3,4-thiadiazol-5-yl)thio-methyl-3-eephem-4-carboxylat (syn-isomer).

0,143 g natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-a c e t-amido]-3-(2-methyl-l,3,4-thiadiazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer) opløses i 1 ml dimethylformamid, og opløsningen afkøles med is og omrøres. Til opløsningen sættes dråbevis 0,071 g iodmethylpivalat opløst i 1 ml dimethylformamid. Len resulterende blanding omrøres i 10 minutter, hvorefter der tilsættes 5 ml vand og 50 ml ethylacetat. Blandingen omrøres kraftigt. Det organiske lag skilles fra, vaskes med vand (10 ml x 3) °g tørres over magnesiumsulfat. Den tørrede opløsning koncentreres under reduceret tryk for at fjerne opløsningsmidlerne. 10 ml diethylether sættes til remanensen, hvilket giver et pulver. Pulveret opsamles ved filtrering og tørres,hvorved der opnås det ovenfor identificerede produkt. Udbytte 0,07 g.

IR (KB**, cm"1): 17$2 NMR(100 MHz, i d6-LMS0, ): 1,19 (s, CH^)^C), 2,70 (s, thiadiazol, 2-CRj), 3,61 og 3,S3 (ABq, J=lBHz, 2-0¾), 4,17 og 4,57 (ABq, J=14Hz, 3-0¾), 5,19 (d, J=5Hz, 6H), 5,^0 og 5,95 (ABq, J=6Hz, OC^O-pivaloyl), omkring 5,S (m, 7H), 6,69 (s, thiazolin, 5H), 9,94 (d, J=$Hz, CONH), 11,41 (br. s, =N-0H).

Elementæranalyse for C22H25N7°7S4*H20:

Beregnet: C 40,92 H 4,21 N 15,1$

Fundet: G 41,20 H 4,25 N 15,20

Eksempel 29»

Fremstilling af pivaloyloxymethyl-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)- 2-hydroxyimino-acetamido]-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer).

0,5 g natrium-[7-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acet-

63 DK 159783 B

ami do]-3-carbamoyloxymethy1-3-c ephem-4-carb oxy1at (syn-isomer) opløses i 3 ml dimethylformamid. 0,242 g iodmethylpivalat i 2 ml dimethylformamid sættes lidt efter lidt til denne opløsning under omrøring og isafkøling. Reaktionsblandingen omrøres i 10 minutter, hvorefter der tilsættes 5 ml vand og 60 ml ethylacetat. Den resulterende blanding omrystes kraftigt. Det organiske lag skilles fra, vaskes med vand (10 ml x 3) og tørres over .natriumsulfat. Den tørrede opløsning koncentreres under reduceret tryk for at fjerne opløsningsmidlerne, og 10 ml diethylether sættes til remanensen, hvilket giver et pulver. Pulveret opsamles ved filtrering og tørres under reduceret tryk, hvorved der opnås det ovenfor identificerede produkt. Udbytte 0,327 g.

IR (KB*·, cm"1): 1795 NMR(100 MHz, i d6-DMS0, ): 1,13 (s, CH^C), 3,46 og 3,66 (ABq, J=l3Hz, 2-0¾), 4,53 og 4,35 (ABq, J=13Hz, 3-CH2), 5,19 (d, J=5Hz, 6H), 5,32 (dd, J=5 og 3Hz, 7H), 5,79 Og 5,92 (ABq, J=6Hz, OCHgO-pivaloyl), 6,5 (b-, s, 0C0NH2), 6,66 (s, thiazolin, 5H), 7,04 (b*. s, NH-C(=NH)-), 9,40 (d, J=3Hz, C0NH), 11,29 (br. s, =N0H).

Elementæranalyse for C20H24N6°9S2’°*^H20:

Beregnet: C 42,47 H 4,46 N 14,36

Fundet: G 42,79 H 4,60 N 14,47

Eksempel 30.

Fremstilling af 1-(ethoxycarbonyloxy)ethyl-7-[2-(2-imino-4-thiazolin- 4-yl) - 2- hy dr oxy imino - a c e t ami do ] - 3 - c arb amoyl oxyme t hyl - 3 - c ep hem- 4-carboxylat (syn-isomer).

1,0 g natrium-[7-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acet-amido]-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer) opløses i 6 ml dimethylformamid. 1,37 g 1-(ethoxycarbonyloxy)ethyliodid sættes til opløsningen, og blandingen omrøres i 5 dage. Til blandingen sættes 150 ml vand og 200 ml ethylacetat, hvorefter der omrøres kraftigt. Det organiske lag skilles fra, vaskes med vand (100 ml x 2) og tørres over mangesiumsulfat. Den tørrede opløsning koncentreres

64 DK 159783 B

under reduceret tryk og 100 ml petroleumsether sættes til remanensen, hvilket giver et pulver. Pulveret opsamles ved filtrering, hvorved der opnås det ovenfor identificerede produkt. Udbytte 0,07 g.

IR(KBr, cm"1): 1790 NMR(100 MHz, i d^-DMSO, ): 1,14 (t, J=7Hz, -CH2CH3), 1,51 (d, J=5Hz, 0CH(CH3)0), 3,46 og 3,63 (ABq, J=l3Hz, 2-0¾), 4,18 (q, J=7Hz, -0^0¾), 4,60 og 4,35 (ABq, J=13Hz, 3-CH2), 5,10 (d, J=5Hz, 6h), 5,86 (dd, J=5 og 3Hz, 7H), 6,55 (b*. s, 0C0NH2), 6,66 (s, thiazolin, 5H), 6,74 (q, J=7Hz, -CH(GH3)-), 7,04 (br. s, NH-(C=NH)-), 9,38 (d, J=3Hz, C0NH), 11,23 (br. s, =N0H).

Eksempel 31.

Fremstilling af 7-[2-(2-chloracetylimino-4-thiazolin-4-yl)-2-acet-oxyimino-acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer).

70 ml methylenchlorid suspenderes 2,14 g 2-acetoxyimino-2-(2-chloracetylimino-4-thiazolin-4-yl)-eddikesyre (syn-isomer), hvorefter der tilsættes 1,70 g Ν,Ν-dimethylanilin. Medens blandingen omrøres ved stuetemperatur tilsættes der 1,47 g phosphorpentachlorid i små portioner. Blandingen omrøres i en time. Methylenchloridet destilleres af under reduceret tryk og 21 ml Ν,Ν-dimethylacetamid tilsættes. Efter tilsætning af 0,347 g N,N-dimethylanilin tilsættes 1,90 g 7-aminocephalosporansyre. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i en time. Ved tilsætning af ether udskilles et sirupsagtigt produkt. Etheren dekanteres fra og remanensen opløses ved tilsætning af vand og ethylacetat. Ethylacetatlaget vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumehlorid og ekstraheres med en l$*s vandig opløsning af natriumhydrogencarbonat. Det vandige alkaliske lag indstilles til pH-værdi 2 med phosphorsyre og ekstraheres med ethylacetat. Ethylacetatlaget vaskes med en mættet vandig opløsning af natrium-chlorid og tørres over magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet destilleres af under reduceret tryk, og remanensen blev efter tilsætning af ether, gnedet mod beholderens væg, hvorefter der opnåedes et pulver. Pulveret isoleres ved filtrering og tørres. Ved denne fremgangsmåde opnås 1,770 g 7-[2-(2-chloracetylimino-4-thiazolin-4-yl)-2-acetoxy-

65 DK 159783 B

imino-acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer).

IR(KB*, cm-1): 17$4 NMR(100 MHz, d^-DMSO, ): 2.06 (s, CH2OCOCH3), 2,22 (s, =N-0C0CH3), 3,49 og 3,71 (ABq, J=16Hz, 2-0¾), 4,39 (S, C1CH2), 4,72 og 5,03 (ABq, J=13Hz, 3-0¾), 5,23 (d, J=5Hz, 6H), 5,39 (dd, J=5 og BHz, 7H), 7,76 (s, thiazolin, 5H), 9,93 (d, J=3Hz, CONH), 12,96 (b*. s, thiazolin, 3H).

Eksempel 32.

Fremstilling af 7-[2-(2-amidinothioacetylimino-4-thiazolin-4-yl)-2-acetoxyimino-acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-hydrochlorid (syn-isomer).

I 4 ml N,N-dimethylacetamid opløses 1,120 g 7-[2-(2-chloracetylimino- 4-thiazolin-4-yl)-2-acetoxyimino-acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (syn-isomer), og under omrøring ved stuetemperatur tilsættes 0,152 g thiourea. Blandingen omrøres ved stuetemperatur 131/2 time, hvorefter der tilsættes ether, og et olieagtigt produkt udskilles. Etheren dekanteres fra og remanensen bliver efter tilsætning af ethylacetat gnedet mod beholderens væg. Det resulterende pulver isoleres ved filtrering, vaskes med ethylacetat og tørres. Ved denne fremgangsmåde opnås 1,395 g af titelforbindelsen.

Dette produkt indeholder en mindre mængde ethylacetat og N,N-dimethylacetamid.

IR(KB*·, cm"1): 1779 NMR(100 MHz, d6-DMS0, ): 2.06 (s, CH20G0GH3), 2,22 (s, =N-0C0CH3), 3,49 og 3,73 (ABq, J-lBHz, 2-CH2), 4,41 (s, SCH2C0), 4,72 og 5,03 (ABq, J=13Hz, 3~CH2), 5,23 (d, J=5Hz, 6H), 5,3$ (dd, J=5 og 3Hz, 7H), 7,76 (s, thiazolin, 5H), 9,37 (br. s, H2M-G=m*HGl), 9,94 (d, J=3Hz, C0WH), 13,00 (br. s, thiazolin, 3H).

Eksempel 33»

Fremstilling af natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-

66 DK 159783 B

imino-acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylat.

Til en blanding af 10 ml vand og 10 ml tetrahydrofuran sættes 0,350 g 7-[2-(2-amidinothioacetylimino-4-thiazolin-4-yl)-2-acetoxy-iminoacetamido]-3»acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-hydrochlorid (syn-isomer), og derefter 139 mg natriumhydrogencarbonat. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 25 timer og derefter ved 40°C i 6 timer. Tetrahydrofuranet fjernes under reduceret tryk, og remanensen underkastes søjlekromatografi på polystyrenharpiks (Amberlite XAD-2, Rohm and Haas Co.), med vand som elueringsmiddel. Fraktionerne som indeholder det ønskede produkt samles og lyofiliseres. Ved denne fremgangsmåde opnås 0,116 g af titelforbindelsen. Med hensyn til IR, ΝΜΛ og elementæranalyse er dette produkt i fuldstændig overensstemmelse med den i eksempel 5 opnåede forbindelse.

Eksempel 34.

Fremstilling af natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-imino-acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer). 1 en blanding af 10 ml tetrahydrofuran og 10 ml vand opløses 0,300 g 7-[2-(2-chloracetylimino-4-thiazolin-4-yl)-2-acetoxyimino-acetamido]- 3-acetoxymethyl-3-eephem-4-earboxylsyre, hvorefter der tilsættes 0,136 g natriumhydrogencarbonat og 0,053 g thiourea. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 24 l/2 time og derefter ved en forhøjet temperatur på 40°C i 6 l/2 time under omrøring. Tetrahydrofuranet destilleres af under reduceret tryk, og remanensen underkastes søjlekromatografi på polystyrenharpiks (Amberlite XAD-2, Rohm and Haas CO.) med vand som elueringsmiddel. Fraktionerne som indeholder det ønskede produkt samles og lyofiliseres. Ved denne fremgangsmåde opnås 0,09 g af titelforbindelsen. Med hensyn til IR, HMR, elementæranalyse og tyndtlagskromatografi er dette produkt i fuldstændig overensstemmelse med den i eksempel 5 opnåede forbindelse.

Eksempel 35.

Fremstilling af natrium-[7-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer).

DK 159783 B

I 20 ml vand suspenderes 0,525 g 7-[2-(2-amidinothioacetylimino-4-thiazolin-4-yl)-2-acetoxyimino-acetamido] - 3-acetoxymethyl-3-cephem- 4-carboxylsyre-hydrochlorid (syn-isomer), hvorefter der tilsættes 0,252 g natriumhydrogencarbonat. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 15 timer. Reaktionsblandingen som sådan underkastes søjlekromatografi på polystyrenharpiks (Amberlite XAD-2, Rohm and Haas Co.), og fraktionerne, som indeholder det ønskede produkt, samles og lyo-filiseres. Ved denne fremgangsmåde opnås 0,121 g natrium-7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylat (syn-isomer).

Den foregående forbindelse er i fuldstændig overensstemmelse med produktet fra eksempel 5 med hensyn til IR, NM&, elementæranalyse og TCL.

Eksempel 36.

Fremstilling af 7-[2-(2-chloracetylimino-4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxyimino-ac etamido]-3-acetoxymethyl-3-cep hem-4-carboxylsyre (syn-isomer).

68

DK 159783 B

2,05 (s, CH3), 3,43 og 3,66 (ABq, J=l&iz, 2-0¾), 4,33 (s, 010¾), 4,70 og 5,02 (ABq, J=13Hz, 3-0¾), 5,17 (d, J=5Hz, 6H), 5,^5 (dd, J=5 og 3Hz, 7H), 7,37 (s, thiazolin, 5H), 9,4^ (d, J=3Hz, CONH), 11,53 (b*. s, =N-0H), 12,7 (br., thiazolin, 3H).

Refe^enceeksempel 1.

Fremstilling af 7-(4-brom-3-oxobutyrylamino)-3-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre.

En opløsning af 2,2 g diketen i 5 ml methylenchlorid afkøles til -40°C og 4,4 g brom tilsættes dråbevis. Særskilt opløses 4,23 g 7-aminodesacetoxycephalosporansyre og £,0 g n-dibutylamin i 120 ml methylenchlorid, og blandingen afkøles. Den ovennævnte reaktionsblanding sættes dråbevis til denne blandede opløsning. Temperaturen af blandingen forøges til stuetemperatur i løbet af 30 minutter, hvorefter blandingen omrøres i yderligere 30 minutter. Opløsningsmidlet destilleres af under reduceret tryk, og remanensen omrystes kraftigt med 200 ml ethylacetat og 40 ml 40$* s phosphorsyre. Det organiske lag skilles fra, vaskes med vand, tørres og koncentreres til tørhed under reduceret tryk. Til remanensen sættes ethylether, hvorefter der omrøres. Det resulterende pulver opsamles ved filtrering og tørres. Ved denne fremgangsmåde opnås 3,7 g af titelforbindelsen.

Referenceeksempel 2.

Fremstilling af 7-(4-brom-3-oxobutyrylamino)-3-(mandelyloxymethyl)- 3-cephem-4-carboxylsyre.

En opløsning af 1,34 g (0,013 mol) diketen i 10 ml methylenchlorid afkøles til -30°G, og der tilsættes dråbevis en opløsning af 3,14 g (0,014 mol) brom i 10 ml methylenchlorid. 3,6 g (0,01 mol) 7-amino-3-(mandelyloxymethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre og 2,S ml (0,02 mol) triethylamin opløses særskilt i 50 ml methylenchlorid og afkøles til -20°C. Den ovennævnte reaktionsblanding sættes dråbevis til denne blandede opløsning i løbet af 10 minutter, hvorefter køleapparatet fjernes. Efter at blandingen har nået stuetemperatur omrøres den i 30 minutter. Methylenchloridet destilleres af under reduceret tryk og remanensen omrystes kraftigt med 30 ml 10$* s phosphorsyre, 100 ml

69 DK 159783 B

vand, 20 ml tetrahydrofuran og 250 ml ethylacetat. Let organiske lag skilles fra, vaskes med vand, tørres og destilleres under reduceret tryk for at fjerne opløsningsmidlet. Til remanensen sættes 200 ml ether og den gnides mod beholderens væg, hvorved der opnås 4, 5 g af titelforbindelsen som et pulver.

IB(KBr, cm"1): 3370, 1782, 1736, 1672, 1648, 1539 MR(100 MHz, d6-BMS0, ); 3,24 (bf. s, 2-CH2), 3,63 (s, CH2CQ), 4,69 (s, BrCH2-), 4,77 og 5,05 (ABq, J=14Hz, 3-GH2), 5,04 (d, J=5Hz, 6h), 5,17 (s, -CH-), 5,08 (dd, J=5 og 8Hz, 7H), 7,3-7,5 (m, 0^-),9,02 (d, J=8Hz, COWH).

Referenceeksempel 3.

Fremstilling af 7-(4-chlor-3-oxobutyrylamino)-3-(1-methyl-lH-tetra-zol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre.

Til en opløsning af 166,5 g (1,96 mol) diketen i 830 ml methylen-chlorid, som omrøres under afkøling til en intern temperatur på -25 til -30°C ledes der 140 g (1,97 mol) chlorgas i løbet af 100 minutter. Derefter omrøres opløsningen ved denne temperatur i yderligere 30 minutter. 500 g (1,52 mol) 7-amino-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl) thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre og 394 g (3,05 mol) dibutylamin opløses særskilt i 3 liter methylenchlorid og afkøles til -10 til -20°C. Den ovennævnte reaktionsblanding sættes dråbevis til denne blandede opløsning i løbet af 30 minutter, hvorefter blandingen omrøres ved den samme temperatur i 40 minutter. Reaktionsblandingen sættes til en blanding af 6 lite* ethylacetat og 6 liter 10$Ts phosphor-syre. Efter intens omrøring skilles det organiske lag fra, vaskes med vand, tørres og koncentreres til tørhed under reduceret tryk. Remanensen løsnes ved tilsætning af ether. Ved denne fremgangsmåde opnås 644 g af titelforbindelsen som et pulver.

IR(KB*, cm"1): 17$3, 1732, 1679 NMR(100 MHz, d6-DMS0, ): 3,57 Og 3,79 (ABq, J=l8Hz, 2-CH2), 3,56 (s, COCHgCO), 3,91 (s, tet*a-zol-GH^),4,20 og 4,37 (ABq, J=13Hz, 3-0¾), 4,52 (s, C1CH2), 5,07 (d, J=5Hz, 6H), 5,67 (dd, J=5 og 8Hz, 7H), 9,05 (d, J=8Hz, -C0NH-).

DK 159783 B

Referenceeksempel 4.

Fremstilling af 7-(4-brom-3-oxobutyrylamino)-3-(1-methyl-lH-tetra-zol-5-yl(thiomethyl-3-cephem-carboxylsyre.

En opløsning af 1,03 g (0,01 mol) diketen i 5 ml methylenchlorid afkøles til -30°C og en opløsning af 2,24 g (0,01 mol) brom i 5 ml methylenchlorid tilsættes dråbevis. 3,29 S (0,01 mol) 7-amino-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre og 2,02 g triethylamin opløses særskilt i 20 ml methylenchlorid og afkøles til -20°C. Ovenstående reaktionsblanding sættes hurtigt dråbevis til denne blandede opløsning, hvorefter væskens temperatur når 0°C.

Væskens temperatur forøges gradvis til stuetemperatur, hvorefter blandingen omrøres i 15 minutter. Reaktionsblandingen sættes til en blanding af 150 ml ethylacetat og 100 ml 10%1s phosphorsyre, hvorefter der omrøres intenst. Det organiske lag vaskes med vand, tørres og koncentreres under reduceret tryk. Remanensen løsnes med ether.

Ved denne fremgangsmåde opnås 4,1 g af titelforbindelsen som et pulver.

IR(KB*, cm”1): 1730, 1725, 1674 MR(100 MHz, d6-MS0, ): 3,59 og 3,31 (ABq, J=l3Hz, 2-0¾), 3,63 (s, COCHgCO), 3,93 (s, tetrazol-CH3), 4,21 og 4,33 (ABq, J=13Hz, 3-0¾), 4,3^ (s, BrCH2), 5,07 (d, J=5Hz, 6H), 5,67 (dd, J=5 og 3Hz, 7H), 9,06 (d, J=3Hz, CONH).

Referenceeksempel 5.

Fremstilling af 7-(4-brom-3-oxobutyrylamino)-3-carbamoyloxymethyl- 3-cephem-4-carboxylsyre.

En opløsning af 0,101 g diketen i 2 ml methylenchlorid afkøles til -30°C, og der tilsættes dråbevis en opløsning af 0,203 g brom i 1,3 ml carbontetrachlorid. 0,303 g 7-amino-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre og 0,303 g triethylamin opløses særskilt i 4 ml methylenchlorid og afkøles. Ovenstående reaktionsblanding sættes dråbevis til denne blandede opløsning, og efter at køleapparatet er fjernet for at lade væskens temperatur stige til stuetemperatur, om

DK 159783 B

røres der i 30 minutter. Methylenchloridet destilleres af under reduceret tryk og remanensen omrystes kraftigt med 20 ml lOfo1 s phosphor syre, 30 ml methylethylketon og 5 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid. Det organiske lag skilles fra, vaskes med 5 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid og tørres. Opløsningsmidlet fjernes under reduceret tryk og efter tilsætning af 5 ml ether til remanensen, bliver denne gnedet mod beholderens væg, hvorefter titelforbindelsen opnås som et pulver. Udbytte 0,14$ g· IH(KBr, cm-1): 3390, 3000, 17$0, 1740, 1550, 1400, 1330 UV max ( , i vand): 202 nm (0,$9 x 10^) MH(100 MHz, d6-DMS0, ): 3,4$ og 3,66 (ABq, J=l$Hz, 2-0¾), 3,64 (s, COCE^CO), 4,40 (s, BrCH2), 4,64 og 4,93 (ABq, J=13Hz, 3-0¾), 5,11 (d, J=5Hz, 6H), 5,6$ (dd, J=5 og 9Hz, 7H), 6,5 (br. s, OCONHg), 9,04 (d, J=9Hz, CONH).

Elementær analyse for C-, ~ΗΊ , I\L0„SBr: J-3 J-m- 5 1

Beregnet: C 35,79 H 3,23 N 9,61

Fundet: C 35,$4 H 3,25 N $,26

Hefe^enceeksempel 6.

Fremstilling 2f 7-(4-chlor-3-oxobutyrylamino)-3-(mandelyloxymethyl)- 3-cephem-4-carboxylsyre.

En opløsning af 0,26 g (3 mmol) diketen i 3 ml methylenchlorid afkøles til -30°C, og der tilsættes dråbevis en opløsning af 0,21 g (3 mmol) chlor i 3 ml methylenchlorid. 1,09 g (3 mmol) 7-amino-3-(mandelyloxymethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre og 0,$4 ml (6 mmol) tri-ethylamin opløses særskilt i 15 ml methylenchlorid og afkøles til -20°C. Ovennævnte reaktionsblanding sættes dråbevis til denne blandede opløsning, og efter at køleapparatet er fjernet for at lade væskens temperatur stige til stuetemperatur, omrøres blandingen i 30 minutter. Methylenchloridet destilleres af under reduceret tryk, og remanensen omrystes kraftigt med 10 ml 10$Ts phosphorsyre, 30 ml vand, 10 ml tetrahydrofuran og 100 ml ethylacetat. Det organiske lag skilles fra, vaskes med vand og tørres. Opløsningsmidlet fjernes un

72 DK 159783 B

der reduceret tryk, og der tilsættes 100 ml ether til remanensen, som gnides mod beholderens væg. Ted denne fremgangsmåde opnås 1,20 g af titelforbindelsen som et pulver.

lR(KBr, cm"1): 1734, 1741, 1663, 1533 MR(100 MHz, d^-DMSO, ): 3,25 (br. s3 2-CH2), 3,53 (s, COCE^CO), 4,56 (s, C1CH2-), 4,73 og 5,07 (ABq, J=13Hz, 3-¾), 5,06 (d, J=5Hz, 6H), 5,13 (s, -CH-), 5,63 (dd, J=5 og 3Hz, 7H), 7,3 til 7,5 (m, C^-), 9,02 (d, J=3Hz, -C0NH-).

Refe^enceeksempel 7»

Fremstilling af l-methoxymethyl-lH-tetrazol-5-thiol.

En blanding af 3,2 g natriumazid, 6 ml ethanol og 16 ml vand opvarmes under tilbagesvaling og omrøring, og der tilsættes dråbevis en opløsning af 5,2 g methoxymethylisothiocyanat i 2 ml ethanol. Blandingen tilbagesvales i 45 minutter. Ethanolet fjernes derefter under reduceret tryk, og remanensen gøres sur med 1 N saltsyre og ekstra-heres med ethylacetat. Ekstrakten tørres og koncentreres til tørhed, og den krystallinske remanens omrøres med n-hexan og filtreres. Krystallerne omkrystalliseres fra toluen. Ved denne fremgangsmåde opnås 1,4 g af titelforbindelsen. Smp. 30-32°C.

lR(KBr, cm-1): 1503, 1360, 1030 MR(60 MHz, d6-DMS0, ): 3,36 (s, CH3), 5,43 (s, CH2).

Elementæranalyse for C^H^N^OS:

Beregnet: C 24,66 H 4,14 N 33,35

Fundet: C 24,71 H 4,06 N 37,24

Referenceeksempel 3.

På samme måde som i referenceeksempel 7 omsættes natriumazid med de tilsvarende isothiocyansyreestere for at opnå de følgende 1-substi-tuerede lH-tetrazol-5-*thiolforbindelser, der tjener som eksempler.

73 DK 159783 B

(1) 1-(2-N,N-Bimethylaminoethyl)-IH-tetrazol-5-thiol med smp. 217-219°C (omkrystalliseret fra vandig ethanol).

MR. (60 MHz, D20 + NaHCO^, ): 3,03 (s, N(CH3)2), 3,55 (t, GH2), 4,70 (t, 0¾).

(2) 1-Methylthiomethyl-lH-tetrazol-5-thiol.

IR (KB*·, cm-1): 1495, 1351 MR (60 MHz, d6-DMS0, ) : 2,25 (s, SCEj), 5,35 (s, CH2), 10,1 (b*\ s, tetrazol-WH).

Referenceeksempel 9.

Fremstilling af l-W,N~dimethylcarbamoylmethyl-lH-tetrazol-5-thiol.

(1) En blanding af 6,64 g glycin-N,N-dimethylamid, 9,35 ml triethyl-amin og 150 ml methyl en chl or id omrøres, og der tilsættes 5,09 g carbondisulfid og 9,51 g methyliodid i den nævnte rækkefølge. Blandingen omrøres derefter ved stuetemperatur i en time. Denne reaktionsblanding omrystes kraftigt med 200 ml af en 5%1s vandig opløsning af phosphorsyre, og det organiske lag skilles fra, vaskes med vand, tørres og koncentreres under reduceret tryk. Den krystallinske remanens omrøres med n-hexan, isoleres ved filtrering og tørres. Yed denne fremgangsmåde opnås 12,2 g me thyl-2- (ϋΓ,Ν-dimethyl carbamoyl-methyl )-dithiocarbamat.

IR-(KB*1, cm"1): 1626, 1543 MR.(60 MHz, d6~DMS0, ) : 2,62 (s, CH3S), 3,02 (s, N(CH3)2), 4,42 (d, J=4Hz, CH2), 5,30 (b*. s, NH).

(2) En blanding af 10 g methyl-2-(N,N-dimethylcarbamoylmethyl) dithiocarbamat, 3,7 g natriumazid og 50 ml ethanol omrøres under opvarmning til 50°C 161/2 time. Reaktionsblandingen indstilles til pH-væ^di 2,5 med 1Of saltsyre og koncentreres til tørhed under reduceret tryk. Remanensen ekst^aheres med 100 ml methanol. Den methanol-ske ekstrakt behandles med aktiveret carbon og koncentreres til tør

DK 159783 B

hed, og det tilbageblivende pulver omkrystalliseres fra vand. Ved denne fremgangsmåde opnås 6,7 g af titelforbindelsen, smp. 195-19&°G (dekomp.).

WMR-(60 MHz, d6-DMSO, ): 2,37 og 3,07 (hver s, N(CH3)2), 5,21 (s, gh2go).

Elementæranalyse for C^HyN^S:

Beregnet: G 32,07 H 4,85 N 37,41

Fundet: C 32,11 H 4,90 N 37,74

Referenceeksempel 10.

Fremstilling af 1- (2-carboxyethyl)-lH-tetrazol-5-thiol-.

(1) I 100 ml methylenchlorid suspenderes 10,6 g β-alanin-benzylester-p-toluensulfonat, og der tilsættes efter omrøring 6,06 g triethyl-amin og 2,2d g carbondisulfid i den nævnte rækkefølge. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 40 minutter. Derefter tilsættes 4,26 g methyliodid, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i yderligere 2 timer. Denne reaktionsblanding vaskes med vand, tørres og koncentreres til tørhed under reduceret tryk, hvorved der opnås &,3 g methyl-2-(2-benzyloxycarbonylethyl)dithiocarbamat som et olieagtigt produkt.

IR (rent, cm-1): 3300, 1730 MR (60 MHz, CDC13, ): 2,57 (s, CH3S), 2,76 (t, J=6Hz, CH2C0), 4,03 (m, NHGH2), 5,17 (s, Ph-C.H2), 7,25 (s, C6H5), 7,7 (br. s, HH).

(2) En blanding af d,3 g methyl-2-(2-benzyloxyca^bonylethyl)dithiocarbamat, 1,95 g natriumazid, 10 ml ethanol og 40 ml vand omrøres ved en forhøjet temperatur på d0°G i en time. Efter afkøling fortyndes reaktionsblandingen med 100 ml vand og omrystes med ethylacetat. Det vandige lag skilles fra, indstilles til pH-værdi 1 med 10% saltsyre og ekstraheres med ethylacetat. Ekstrakten vaskes med vand, tørres og koncentreres til tørhed under reduceret tryk. Ved denne fremgangsmåde opnås 3,34 g 1-(2-benzyloxycarbonylethyl)-lH-tetrazol-5-

DK 159783 B

thiol som et olieagtigt produkt.

IR (rent, cm"1): 1725 NMR (60 MHz, CHC13, ): 3,09 (t, J=6Hz, CH^GO), 4,54 (t, J=6Hz, tetrazol-CH2), 5,15 (s, Ph-C.H2), 7,33 (s, G6H5-).

(3) En blanding af 3,$4 g 1-(2-benzyloxycarbonylethyl)-lH-tetrazol-5~ thiol, 30 ml tetrahydrofuran og 29 ml 1 N natriumhydroxid henstår ved stuetemperatur i 2 timer. Reaktionsblandingen vaskes med ethyl-acetat, og det vandige lag indstilles til pH-værdi 1 med 10$ saltsyre og ekstraheres med ethylacetat. Ekstrakten vaskes med en vandig opløsning af natriumchlorid, tørres og koncentreres til tørhed. Ved denne fremgangsmåde opnås 1,9 g af titelforbindelsen som et pulver.

IR (Nu jol, cm"1): 170$ NMh·· (60 MHz, d^-DMSO, ) : 2,$$ (t, J=7Hz, CH2C0), 4,40 (t, J=7Hz, tetrazol-CHg), 12,2 (br. s, NH og C02H).

Referenceeksempel 11.

Fremstilling af l-(carbamoylmethyl)-lH-tetrazol-5-thiol.

Reaktionerne som er beskrevet i referenceeksempel 10 (l) og (2) udføres under anvendelse af glycin-benzylester-p-toluensulfonat i stedet for β-alanin-benzylester-p-toluensulfonat, hvilket giver 1-benzyloxycarbonylmethyl-lH-tetrazol-5-thiol, som derefter omdannes med alkoholisk ammoniak til titelforbindelsen.

Referenceeksempel 12.

Fremstilling af 2-methoxymethyl-l,3,4-thiadiazol-5-thiol.

(1) En opløsning af 4,9 g kaliumhydroxid i 30 ml methanol omrøres under isafkøling og der tilsættes $,56 g methoxyacetylhydrazid og 5,3 ml carbondisulfid. Blandingen omrøres under afkøling i 30 minutter og derefter ved stuetemperatur i 30 minutter. Methanolet fjernes

DK 159783 B

under reduceret tryk, og remanensen løsnes med ethanol, hvorved der opnås et krystallinsk pulver. Pulveret isoleres ved filtrering og tørres. Ved denne fremgangsmåde opnås 10,5 g kalium-3-(methoxyacetyl) dithiocarbazinat.

(2) I 40 ml isafkølet koncentreret svovlsyre opløses 10,5 g kalium- 3-(methoxyacetyl)dithiocarbazinat, og opløsningen omrøres under isafkøling i 10 minutter. Den hædes derefter over 150 g is og omrøres, hvorefter der udskilles krystaller. Disse krystaller opsamles ved filtrering, vaskes med koldt vand og tørres. Ved denne fremgangsmåde opnås 4,3 g af titelforbindelsen.

NMR (60 MHz, CDCl^, ): 3,46 (s, CH^), 4,60 (s, CH2), 12,33 (hr. s, thiadiazol-NH).

Elementæranalyse for

Beregnet: G 29,61 H 3,73 N 17,27

Fundet: C 29,43 H 3,93 N 17,34

Beferenceeksempel 13.

Fremstilling af 3-hydroxymethyl-4-methyl-l,2,4-'triazol-5-thiol.

En blanding af 9 g glycolsyrehydrazid, 7,3 g methylisothiocyanat, 50 ml methanol og 50 ml ethanol opvarmes under tilbagesvaling i 5 timer. Efter tilsætning af 2,3 g metallisk natrium tilbagesvales blandingen i yderligere 24 timer. Reaktionsblandingen koncentreres under reduceret tryk, og remanensen opløses i 150 ml vand og indstilles til pH-værdi 2,5 med phosphorsyre. De resulterende krystaller opsamles ved filtrering og omkrystalliseres fra ethanol. Ved denne fremgangsmåde opnås 5,2 g af titelforbindelsen. Smp. 199-201°C.

MB- (60 MHz, d6-DMS0, ): 3,54 (s, CH^), 4,56 (s, CH20).

Elementæranalyse for C^HyN^O^S:

Beregnet: G 33,0¾ H 4,36 N 2$, 94

Fundet: C 32,99 H 4,90 N 2$,65

DK 159783 B

R-eferenceeksempel 14.

Fremstilling af 3-carbamoyl-4-methyl-l,2,4-triazol-5-thiol.

I 100 ml ethanol opløses 5,3 g 4-methylthiosemicarbazid, 5,9 g ethyl-oxaminat og 1,6 g metallisk natrium, og opløsningen opvarmes under tilbagesvaling i 4$ timer. Efter afkøling fortyndes reaktionsblandingen med 100 ml vand og gøres sur med phosphorsyre. De resulterende krystaller opsamles ved filtrering og omkrystalliseres fra vand. Ved denne fremgangsmåde opnås 2,0 g af titelforbindelsen.

JMR (60 MHz, d6-DMS0, ): 3,67 (s, CH3), 7,90 og g,13 (hver s, C0NH2), 3,30 (s, SH), 12,5 (s, triazol-NH).

R-eferenceeksempel 15«

De funktionelle grupper i de nitrogenholdige heterocycliske thioler som blev opnået i de ovenstående referenceeksempler underkastes hver især en per se kendt kemisk overføringsreaktion for at fremstille de følgende nitrogenholdige heterocycliske thioler.

(1) l-Carboxymethyl-lH-tetrazol-5-thiol.

l-N,N-Dimethylcarbamoylmethyl-lH-tetrazol-5-thiol hydrolyseres med en opløsning af natriumhydroxid. Smp. 156-l60°C (dekomp.).

IR. (KBr, cm'1): 1713 NMR (60 MHz, dg-BMSO, ) : 5,03 (s, CH2C0), 12,09 (br. s, NH og -C00H).

(2) 1-(2-Hydroxyethyl)-lH-tetrazol-5-thiol.

l-Benzyloxycarbonylmethyl-lH-tetrazol-5-thiol reduceres med lithium-aluminiumhydrid-tetrahydrofuran. Smp. 137-139°C.

HMR. (60 MHz, d^-BMSO, ): 3,$ (m, CH^O), 4,2 (m, tetrazol-CHg-).

78 DK 159783 B

(3) 2-(2-N,N-Bimethylaminoethyl)-l,3,4-thiadiazol-5-thiol.

2-(N,W-Dimethylcarbamoylmethyl)-l,3>4-thiadiazol-5-thiol reduceres med borhydrid-tetrahydrofuran.

MMH (60 MHz, B20, ): 2,47 (s, N(CH3)2, 3,0-3,3 ^Bg-mønste* m.

ch2gh2).

Heferenceeksempel 16.

Fremstilling af benzhydryl-4-brom-3~oxobutyrat.

I 10,5 ml methylenchlorid opløses 2,1 g diketen og ved en temperatur, som ikke overstiger -30°C sættes en opløsning af 4,0 g brom i 12,5 ml methylenchlorid dråbevis til opløsningen under omrøring. Efter at den dråbevise tilsætning er fuldført, holdes blandingen ved 0°C i 10 minutter. 3,6β g benzhydrol opløses særskilt i 25 ml methylenchlorid, og der tilsættes derefter 2,02 g triethylamin. Under omrøring ved en temperatur, som ikke overstiger -30°C tilsættes den ovenfor fremstillede opløsning af bromacetoacetylbromid dråbevis. Efter denne dråbevise tilsætning omrøres blandingen ved 0°G i 40 minutter, hvorefter den vaskes med vand. Efter tørring over magnesiumsulfat destilleres opløsningsmidlet af under reduceret tryk, hvorefter der opnås 6,99 g benzhydryl-4-brom-3-oxobutyrat.

IH- (cnT^, rent): 1743 WMH (60 MHz, CDC13, ): 3,63 (s, COCHgCO), 3,37 (s, BrCHg), 6,32 (s, CH), 7,21 (s, aromatisk H).

Heferenceeksempel 17.

Fremstilling af benzhydryl-4-brom-2-hydroxyimino-3-oxobutyrat.

I 30 ml eddikesyre opløses 6,94 g benzhydryl-4-brom-3-oxobutyrat, og der tilsættes dråbevis under afkøling og omrøring en opløsning af 1,533 g natriumnitrit i 6 ml vand. Blandingen omrøres ved denne temperatur i yderligere 20 minutter og ekstraheres efter tilsætning af 60 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid med ethylace-tat. Ethylacetatlaget vaskes med en mættet vandig opløsning af na-

79 DK 159783 B

triumchlorid og tørres over magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet fjernes under reduceret tryk, og der isoleres 7,56 g af titelforbindelsen.

IR (cm’’'*", rent): 1742 NMR (60 MHz, CBC13, ): 4,29 (s, BrCH2), 7,19 (s, CH), 7,34 (s, aromatisk H), 9,79 (br. s,. N=OH).

Referenceeksempel 18.

Fremstilling af benzhydryl-2-acetoxyimino-4-brom-3-oxobutyrat.

Til 50 ml eddikesyreanhydrid sættes 26,2 g benzhydryl-4-brom-2-hydroxyimino-3-oxobytyrat, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 100 minutter. Det overskydende eddikesyreanhydrid og den ved reaktionen dannede eddikesyre destilleres af under reduceret tryk. Ved denne fremgangsmåde opnås 26,7 g af titelforbindelsen.

IR (cm-1, rent): 1B09, 1730 NMR (60 MHz, CDC13, ): 1,94 (s, GE^), 4,44 (s, BrCH^), 7,11 (s, CH), 7,30 (s, aromatisk H).

Referenceeksempel 19.

Fremstilling af benzhydryl-2-acetoxyimino-2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)acetat.

I 20 ml Ν,Ν-dimethylacetamid opløses 26,5 g benzhydryl-2-acetoxy-imino-4-brom-3-oxobytyrat, og der tilsættes under isafkøling og omrøring 4,61 g thiourea. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 3 timer og 15 minutter, hvorefter den vaskes grundigt med 80 ml ether. Etheren dekanteres fra. Denne fremgangsmåde udføres endnu en gang, og blandingen hældes i 100 ml vand, hvorefter der udskilles krystaller. Efter løsning isoleres krystallerne ved filtrering, og de vaskes med ether, en lille mængde ethylacetat og ether i nævnte rækkefølge. Ved denne fremgangsmåde opnås 10,73$ g krystaller af titelforbindelsen.

IR (cm-1, Nujol): 1790, 1746 80

DK 159783 B

NM&-(100 MHz, d6-DMS0, ): 1,92 (s, CH^), 7,12 og 7,21 (live*· s, CH og thiazolin, 5H), 7,42 (m, aromatisk H).

Refe**enceeksempel 20.

Fremstilling af benzhydryl-2-acetoxyimino-2-(2-chloracetylimino-4-thiazolin-4-yl)acetat.

I 100 ml N,N-dimethylformamid suspenderes 19,7 g benzhydryl-2-acet-oxyimino-2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)acetat, hvorefter der tilsættes 6,02 g triethylamin. Under isafkøling og omrøring tilsættes dråbevis 4,9$ ml chloracetylchlorid. Blandingen omrøres ved denne temperatur i yderligere 10 minutter, og derefter ved stuetemperatur i 20 minutter. Derefter tilsættes dråbevis 1,50 ml chloracetylchlorid, og blandingen omrøres i 20 minutter. Reaktionsblandingen hældes i en opløsning af 4,4 g nat^iumhydrogencarbonat i 200 ml vand og ekstrahe-res med 500 ml ethylacetat i tre portioner. Ethylacetatlagene samles, vaskes to gange med 100 ml af en l$Ts vandig opløsning af natri-umhydrogencarbonat og vaskes yderligere med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid. Tørring med magnesiumsulfat og affarvning med aktiveret kul udføres samtidig, og efter filtrering destilleres opløsningsmidlet af. Til remanensen sættes 20 ml ethylacetat, og blandingen henstilles. De resulterende krystaller isoleres ved filtrering og tørres. Ved denne fremgangsmåde opnås 12,7 g benzhydryl-2-acetoxyimino-2-(2-chloracetylimino-4-thiazolin-4-yl)acetat (syn-isomer). Dette produkt indeholder en mindre mængde af anti-isomer, som fjernes ved den følgende fremgangsmåde.

I 50 ml tetrahydrofuran opløses 12,0 g af de ovenfor opnåede rå krystaller, der tilsættes 100 ml ethylacetat, og blandingen filtreres. Filtratet destilleres under reduceret tryk for at fjerne opløsningsmidlet, og 20 ml ethylacetat sættes til remanensen. De resulterende krystaller opsamles ved filtrering og tørres. Ved denne fremgangsmåde opnås 6,142 g benzhydryl-2-acetoxyimino-2-(2-chloracetylimino)- 4-thiaxolin-4-yl)acetat (syn-isomer).

IR (cm"1, Nujol): 1760, 1747, 1550

81 DK 159783 B

Λ(100 MHz, d6-DMS0, ): 1,93 (s, CH3), 4,41 (s, C1CH2), 7,Id (s, GH), 7,2-7,6 (m, aromatisk H), 7,90 (s, thiazolin, 5H), 12,90 (br. s, NH).

Elementæranalyse for C22HléG1W3D5S:

Beregnet: C 55,90 H 3, $4 N S,90

Fundet: C 56,19 Η 3,$3 N M4

Referenceeksempel 21.

I 16,5 ml anisol suspenderes 6,10 g benzhydryl-2-acetoxyimino-2-(2-chloracetylimino-4-thiazolin-4-yl)acetat (syn-isomer), og der tilsættes dråbevis under isafkøling og omrøring 65,7 ml trifluoreddikesyre. Blandingen omrøres ved denne temperatur i 15 minutter, hvorefter trifluoreddikesyren destilleres af under reduceret tryk. Til remanensen sættes n-hexan, hvorefter et. olieagtigt produkt udskilles. Produktet vaskes grundigt med n-hexan og n-hexanet dekanteres fra. Denne fremgangsmåde udføres endnu en gang. Til den olieagtige remanens sættes ether, hvorefter et krystallinsk pulver udskilles. Efter denne tilsætning af en lille mængde ether opsamles det krystallinske pulver ved filtrering, og det vaskes med en lille mængde ether og tørres. Ved denne fremgangsmåde opnås 3,125 g 2-acetoxyimino-2-(2-chloracetylimino-4-thiazolin-4-yl)-eddikesyre (syn-isomer).

IR (cm"1, Nujol): 1792, 1694 NM&(100 MHz, d6-DMS0, ): 2,22 (s, CH^), 4,41 (s, C1CH2), 7,90 (s, thiazolin, 5H), 12,95 (b*\ s, NH).

Elementæranalyse for G^HgGlN^O^S:

Beregnet: C 35,36 H 2,64 N 13,75

Fundet: C 35,30 H 2,64 N 13,75

Claims

82 DK 159783 B

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af 7-[2-(2-imino- 4-thiazolin-4-yl)-2-hydroxy-iminoacetamido ]-3-(substitueret me thyl )-3-cephem-4-carboxylsyre-(syn)-isomere med den almene formel ®v s Vi HN_U-C-CONH-,-/ \ N ' (I) "OH , COOH hvori Y betyder hydrogen, hydroxyl, acetoxy, carbamoyloxy, kvater-nært ammonium med formlen hvori Z betyder hydrogen eller carbamoyl, eller Y betyder en ni-trogenholdig heterocyclisk thiogruppe med formlen N—N N ,-K2 N—N N—N -3.M1, -s.fi , -s-K .·=Λΐ Sk -s/ νν^\2 k1 S1 K2 Η— H K-. , H U-/ -S-l[ (Ϊ , -S-(l jj , -8-1 li eller -S-l^ * -ο'Χ,,Ζ Vn' S- jj3 fi P ål hvori R-*· betyder hydrogen eller en gruppe med formlen -(CH2)nP,

83 DK 159783 B hvori n er 1, 2 eller 3, og P betyder hydrogen, hydroxyl, C( 1-4)-alkoxy, C(1-4)-alkylthio, acetylamino, guanidino, en gruppe med formlen -COOR4, hvor R4 betyder hydrogen, C(1-4)-alkyl, en gruppe med formlen R5 -CON^ \r6 hvor r5 og R^ hver for sig betyder hydrogen eller C(l-4)-alkyl, eller R4 betyder en gruppe med formlen R5 -N XR6 hvori r5 og R® har den ovenfor angivne betydning, R^ betyder hydrogen, amino, trifluormethyl, hydroxy-C(l-4)-alkylamino, monoeller di-C(l-4)-alkylamino-C(l-4)-alkylamino, acetoxy-C(l-4)-alkyl, carbamoyl, en gruppe med formlen -NHCOOR?, hvori R? betyder C(1-4)-alkyl, en gruppe med formlen -S-(CH2)nQ/ bvor n er 1, 2 eller 3, og Q er carboxyl, hydroxyl eller sulfo, eller en gruppe med formlen -(CH2)nP, hvori n og P har de ovenfor angivne betydninger, og r3 betyder hydrogen eller C(1-4)-alkyl, eller farmaceutisk acceptable salte eller estere deraf, kendetegnet ved, at man a) omsætter et syn-isomert 7-(4-halogen-2-hydroxy-imino-3-oxo-butyrylamino)-3-(substitueret methyl)-3-cephem-4-carboxylsyrederivat med formlen S .W-CH-COC-CONH-,_/ \ * Π (ii) noh / GH2I COOH

84 DK 159783 B hvori W betyder chlor eller brom, og Y har den ovenfor angivne betydning, eller et salt deraf med et thiocarbamid, b) omsætter et syn-isomert 7—[ 2—(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-2-hy-droxy-iminoacetamido ]-3-acyloxymethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre-derivat med formlen s Y'h -J-C-CONH | / \ \ /1 oh ctyi COOH hvori M betyder acyloxy, eller et salt deraf med vand, en amin svarende til en kvaternær ammoniumgruppe med formlen .ør’ hvor z har den ovenfor angivne betydning, eller en thiol, som svarer til den nitrogenholdige, heterocycliske thiogruppe ifølge den ovenfor definerede substituent Y, eller et salt deraf eller c) acylerer et 7-aminocephalosporinderivat med formlen H2N-|-(A 0-.AvAch2y ™ GOQH hvori Y har den ovenfor angivne betydning, eller et salt deraf med et acyleringsmiddel afledt af et syn-isomert 2-(4-thiazolin-4-yl)-eddikesyrederivat med formlen DK 15978SB »> bsn s Ύ 'll (?) HN_U-C-COOH tt N \ q ORa hvori r8 betyder hydrogen eller en beskyttelsesgruppe, og R9 betyder hydrogen eller en beskyttelsesgruppe, og, om ønsket, afspalter beskyttelsesgrupper fra en dannet forbindelse og, om ønsket, esterificerer en dannet forbindelse.

2. Syn-isomere 2-(4-thiazolin-4-yl)-eddikesyrederivater til anvendelse, som udgangsmateriale ved fremgangsmåde c) ifølge krav 1, kendetegnet ved, at de har formlen rsn s Y ^ (τ) HN_U-C-COOH n N \ Q OR hvori r8 betyder hydrogen eller en beskyttelsesgruppe, og R9 betyder hydrogen eller en beskyttelsesgruppe, samt salte deraf.