DK161201B

DK161201B - Cephalosporinderivater til anvendelse som mellemprodukt til fremstilling af cephalosporinderivater

Info

Publication number: DK161201B
Application number: DK076190A
Authority: DK
Inventors: Susumu Tsushima; Michiyuki Sendai; Mitsuru Shiraishi
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Priority date: 1975-02-24
Filing date: 1990-03-23
Publication date: 1991-06-10
Also published as: ES459261A1; DK159154C; DK160313B; SE435182B; ATA126476A; DK63990D0; CH625245A5; NO760590L; NL7601902A; BE838833A; DE2607064C2; HU179598B; DK44076A; DK76190A; ES445348A1; CA1092095A; DE2607064A1; PH16245A; DK76190D0; DK160313C

Description

i

DK 161201 B

Opfindelsen angår en forbindelse til anvendelse som mellemprodukt til fremstilling af en forbindelse med formlen

R NH -r—f j COOH

i hvilken R^ er en acylgruppe med formlen R4^ CHCO- R^ hvor R4 betyder acetyl, halogenacetyl, phenyl, p-hydroxyphenyl, thienyl, 2-imino-4-thiazolin-4-yl, 2-oxo-4-thiazolin-4-yl, tetra-zolyl, phenoxy eller 3-amino-3-carboxypropyl, og r5 betyder hydrogen, sulfo, amino eller hydroxy, og amino- og carboxylgruppen i R4 og r5 kan være beskyttet, og R^ er en rest af en nucleofil forbindelse, som er ejendommelig ved, at den har formlen i c R NH —j— y—n ch2ocow

iooH

i hvilken R^ har den ovenfor angivne betydning, og W betyder acetonyl (-CH2COCH3) eller -X-OH, hvor X betyder

Ock<

Cephalosporinderivater med en 3-hydroxymethyldel har hidtil kun kunnet opnås ved enzymatisk fraspaltning af 3-acetylgruppen fra 3-acetoxymethylcephalosporiner eller ved fraskillelse fra cepha-

DK 161201 B

2 losporin C-gæringsbiprodukter. For nylig er det blevet muligt at fremstille 7-(D-5-amino-5-carboxyvaleramido)-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (desacetylcephalosporin C, DCPC) i høj koncentration ved gæring (USA-patentskrift nr. 3.926.726, Nature New Biology, 246, 154 (1963)), og ved siden af cephalosporin C har dette stof tiltrukket opmærksomhed som udgangsmateriale for cephalosporinforbindelser med stærkere antibiotisk aktivitet.

Det har imidlertid været anset for vanskeligt at acylere 3-hydr-oxymethylgruppen i 3-hydroxymethylforbindelsen (cephalospo-radessyre). F.eks. rapporterede Heyningen [Van Heyningen: J.Med.Chem., 8, 22 (1965), Advan.Drug.Res., 4, 28 (1968)], at O-acyleringen af cephalosporadessyre kun var mulig med brugen af et stort overskud af aroylchlorid (udbytte 32-57%), og at brugen af keten, aliphatiske syrechlorider eller eddikesyreanhydrid ikke bevirkede O-acylering eller fremkaldte en lactonisering. Kukolja [J.Med.Chem. 13, 1114 (1970)] rapporterede en omvejsproces til syntese af O-acyloxymethylcephalosporiner, hvilken bestod i, at man O-acylerede en 3-hydroxymethyl-2-cephemforbinde1se og derpå isomeriserede denne til 3-cephemforbindelsen. USA-patentskrift nr. 3.532.694 og japansk patentpublikation nr. 33080/1975 omhandlede en fremgangsmåde, ved hvilken man for at forhindre lactoniserings-reaktionen først beskytter 4-carboxylgruppen i cephalosporadessyre, f.eks. ved forestring, og derpå udfører O-acyleringen. I den japanske fremlagte patentansøgning nr. 42792/1972 er omhandlet en fremgangsmåde, som består i at O-acylere cephalosporadessyre med azolid. Imidlertid er disse processer ikke kommercielt udnyttelige, f.eks. fordi de kun giver lave udbytter og/eller medfører besværlige og tidskrævende procedurer og/eller kostbare reagenser. Således kan f.eks. forestringen af cephalosporadessyre ikke udføres ved en almindelig forestringsproces, ved hvilken flytningen af dobbeltbindingen eller lactoniseringen dominerer. Selv om det er muligt at indføre sådanne begrænsede grupper som methyl, ethyl, diphenylmethyl, benzyl ved hjælp af diazoforbindelser som diazomethan, diazoethan, diphenyldiazomethan, phenyldiazomethan osv., er det vanskeligt efter 3-acyleringen at afesterificere forbindelsen uden ledsagelse af en eller anden sidereaktion, 3

DK 161201B

såsom spaltning af β-laetamringen eller en flytning af dobbeltbindingen.

På den anden side medfører reaktionen, ved hvilken 3-acetoxy-methylgruppen i en cephalosporinforbindelse substitueres med et nukleofilt reagens, en samtidig uønsket dekomponering af udgangsmaterialet, mellemproduktet og produktet i sit forløb og en langvarig reaktionstid og derfor lavere udbytter [A.B. Taylor, J.Chem.Soc., 7020 (1965)]. Det har således været ønskeligt at disponere over et derivat, der har en gruppe, der vil være mere villig til substitution end acetoxygruppen.

For at klare de ovennævnte problemer er der blevet udført en omfattende forskning, som førte til det fund, at anvendelsen af diketen eller de nedenfor beskrevne forbindelser IV som acyle-ringsmidler gør det muligt at 0-acylere cephalosporadessyre i højt udbytte, og at de således fremstillede O-acylerede cephalosporiner kan undergå den ønskede substitution med en nukleofil forbindelse med stor lethed under dannelse af forskellige udmærkede cephalosporinantibiotika. Den foreliggende opfindelse er udviklet på basis af ovennævnte fund.

Amino- og/eller carboxygrupper i R^ og kan være beskyttet på egnet måde. Blandt beskyttelsesgrupper for aminogrupper kan således f.eks. nævnes aromatiske acylgrupper, såsom phthaloyl, benzoyl, p-nitrobenzoyl, toluoyl, naphthoyl, p-tert.butylbenzoyl, p-tert.butylbenzensulfonyl, phenylacetyl, benzensulfonyl, phenoxyacetyl, toluensulfony1 eller chlorbenzoyl, aliphatiske acylgrupper, som acetyl, valeryl, capryl, n-decanoyl, acryloyl, pivaloyl, camphersulfonyl, methansulfonyl eller chloracetyl, forestrede carboxylgrupper, såsom tert.butoxycarbonyl, ethoxy-carbony, isobornyloxyearbonyl, phenyloxycarbonyl, trichlorethoxy-carbonyl, benzyloxycarbonyl eller β-methylsulfonylethoxycarbonyl, carbamoylgrupper, såsom methylcarbamoyl, phenylcarbamoyl eller naphthylcarbamoyl, de tilsvarende thiocarbamoylgrupper, 2-meth-oxycarbonyl-l-methylvinyl. Som beskyttelsesgrupper for carboxyl-grupperne i nævnte acylgrupper R1 og 4-carboxylgruppen i cephem- 4

DK 161201B

ringen kan f.eks. nævnes methyl, ethyl, tert.butyl, tert.amyl, benzyl, p-nitrobenzyl, p-methoxybenzyl, benzhydryl, 1-indanyl, phenacyl, phenyl, p-nitrophenyl, methoxymethyl, ethoxymethyl, benzyloxymethyl, acetoxymethyl, pivaloyloxymethyl, /3-methylsulfo-nylethyl, methylthiomethyl, trityl, β,β,β-trichlorethyl, silylgrupper, såsom trimethylsilyl, dimethylsilyl. Disse carboxylgrupper kan også foreligge i. form af uorganiske eller organiske salte med alkalimetaller, som lithium, natrium og kalium, magnesium, jordalkalimetaller, som calcium, eller forskellige aminer, såsom dicyclohexylamin, tethylamin, tribu- tylamin, di-n-butylamin, di-n-propylamin m.fl.

Af forbindelserne I kan forbindelserne, hvori W er acetonyl, fremstilles ved, at man omsætter en forbindelse med den almene formel R2nh —i-S s '''i • I di) A- —ch2oh

O T

COOH

hvori R2 er hydrogen eller en acylgruppe, med diketen. Diketenet kan også anvendes i form af et addukt med acetone, acetophenon eller lignende. Dette er en ækvimolær reaktion, hvilket betyder, at den ønskede reaktion kan udføres ved at anvende II og diketen i ækvimolære forhold. For at kompensere for den mulige dekompone-ring af diketen, som ville finde sted i nærværelse af vand eller alkohol, kan der imidlertid anvendes et overskud af diketen. Normalt kan denne reaktion med held udføres ved at lade en 3-hydr-oxymethylcephalosporin II og diketen indvirke på hinanden i et egnet indifferent opløsningsmiddel ved en temperatur på -30 til 40°C. Som indifferente opløsningsmidler kan der f.eks. anvendes dichlormethan, chloroform, dichlorethan, dimethylformamid, dimethylacetamid, tetrahydrofuran, acetonitril, ethylacetat, acetone, dioxan eller ether og forskellige blandinger af sådanne opløsningsmidler. Reaktionen af diketen med 3-hydroxymethyl-cephalosporin II foregår med høj hastighed, men i betragtning af

DK 161201 B

5 det forhold, at reaktionshastigheden i nogen grad afhænger af reaktionstemperaturen, og for at sikre, at reaktionen bliver ført til ende, udføres denne reaktion sædvanligvis i et tidsrum på 0,5 til 15 timer. Om nødvendigt kan en amin, såsom triethylamin, sættes til reaktionssystemet, eller når udgangsmaterialet II er et alkalimetalsalt, kan et ækvivalent af f.eks. triethylaminhydro-chlorid tilsættes for at udføre en saltudveksling, før den ønskede reaktion finder sted.

Når W står for -X-OH, kan forbindelsen fremstilles ved, at man omsætter en 3-hydroxymethylcephalosporin II med en forbindelse med den almene formel X . o (IV) hvori X har den ovenfor angivne betydning.

Betingelserne ved reaktionen mellem forbindelsen II og forbindelsen IV ligner dem, der anvendes til de tidligere beskrevne reaktioner. Når udgangsmaterialet II har en ubeskyttet aminogruppe, kan reaktionen deraf med diketen eller forbindelsen IV udføres således, at både 3-hydroxy- og aminogruppen acyleres samtidig med de samme acylgrupper.

De resulterende forbindelser I reagerer let med en nukleofil forbindelse til indførelse af resten af den nukleofile forbindelse i 3-methylgruppen af cephalosporinen, hvorved der fås forbindelser med formlen R^NH -1-' S V.

^— N - CH2R

C00H

6

DK 161201B

hvori r3 står for en rest af en nukleofil forbindelse, og det andet symbol har den ovenfor angivne betydning. Som nukleofil forbindelse, der anvendes til denne reaktion, kan der anvendes enhver forbindelse, der er i stand til at erstatte 3-acetoxygrup-perne i cephalosporiner. Endvidere forløber reaktionen med en hastighed, der er fra 4 til 16 gange større end hastigheden for 3- acetoxyforbindelsen, og næsten kvantitativt.

De fremkomne forbindelser I, hvori betyder den nævnte acyl-gruppe, kan omdannes til tilsvarende forbindelser, hvori r! betyder hydrogen, ved fraspaltning af 7-acylgruppen på i og for sig kendt måde, f.eks. enhver af de procedurer, der er angivet i japansk patentpublikation nr. 13862/1966 og nr. 40899/1970, fremlagte japanske patentansøgninger nr. 34387/1972, nr. 95292/ 1975 og nr. 96591/1975, japansk patentpublikation nr. 35079/1975, USA-patentskrift nr. 3.632.578.

De sidstnævnte forbindelser kan omdannes til forbindelser af den tidligere nævnte art, hvori R^ betyder nogen af de som 6- eller 7-substituenter, som sædvanligvis findes i penicillin- eller cephalosporinforbindelser, ved forud at aktivere den samme på kendt måde. Således kan f.eks. forbindelsen, hvori r! er 4-halo-gen-3-oxobutyryl, fås ved at omsætte den nævnte forbindelse med et 4- halogen-3-oxo-butyrylhalogenid, som på sin side kan omsættes med thiourinstof til dannelse af den tilsvarende 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-acetamido ]-forbindelse. Selv om det afhænger i nogen grad af typen af 3-substituenten, viser disse forbindelser altid fortrinlig antibiotisk aktivitet. F.eks. er forbindelsen med 1-methyltetrazol-5-ylthiomethyl i 3-stilling særlig nyttig, idet der opnås omtrent samme virkning med denne forbindelse i en dosis på omkring en femtedel af dosen af cephazolin.

Den foreliggende opfindelse illustreres yderligere af de følgende eksempler. I denne beskrivelse er harpikser benævnt "Amberlite" produkter fremstillet af Rohm & Haas Co. i USA. "Celite" og "Sephadex" markedsføres af henholdsvis Johns-Manvilla Sales Corp. og Pharmacia A.B. Alle temperaturerne er ukorrigeret, og procen- 7

DK 161201B

terne er alle på vægtbasis, medmindre andet er angivet. De angivne NMR-spektre blev målt under anvendelse af et Varian Model HA 100 (100 MHz)- eller T60 (60 MHz)-spektrometer med tetramethyl-silan som intern reference, og alle δ-værdier er i ppm. Symbolet s står for singlet, d for dublet, t for triplet, q for kvartet, m for multiplet og J for en koblingskonstant.

Eksempel 1.

I dichlormethan (50 ml) opløses 7β-[D-5-phthalimido-5-carboxy-valer ami do]-3-^ydroxymethyl-3-c ephem-4-c arboxylsyre-ditri ethyl amin-sait (7,05 g), hvorpå der tilsættes diketen (0,92 g). Reaktionen udføres ved stuetemperatur i 3 timer. Efter at reaktionen er afsluttet, afdestilleres opløsningsmidlet under reduceret tryk, og remanensen fortyndes med vand og indstilles på pH 6,0 med natriumhydrogencarbo-nat. Den vandige opløsning vaskes to gange med ethylacetat, bringes ned på pH 2,0 med4NHClog ekstraheres tre gange med ethylacetat. Ethylacetatopløsningen vaskes med en mættet vandig opløsning af na-triumchlorid, behandles med magnesiumsulfat og filtreres. Opløsningsmidlet afdestilleres så under reduceret tryk. Til remanensen sættes ether, og det resulterende pulver filtreres fra, vaskes med ether og tørres. Den ovennævnte procedure giver 7p-[D-5-phthalimido-5-carboxy-valeramido]-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (5,48 g. (udbytte 93,2$).

IR(KBr): 3350, 1775, 1740, 1715, 1640, 1530 cm"1.

NMR(6 i dg-dimethylsulfoxid): 1,30-2,40(6H,m), 2,17(3H,s), 3,46(2H, ABq, J = 18Hz), 3,60(2H,s), 4,72(lH,t), 4,90(2H,ABq, J =12Hz), 5,01 (lH,d, J = 5Hz), 5,62(1H,dd, J = 5 og 8Hz), 7,88(4H,s), 8,80(lH,d, J = 8Hz).

Referenceeksempel 1 (l) I vand (50 ml) opløses 7P-[D~5-phthalimido-5-carboxyvaleramido]- 3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (5,88 g) sammen med 5-mercapto-l-methyl-IH-tetrazol (1,50 g) og natriumhydrogencarbo-nat (2,10 g). Efter tilsætning af natriumchlorid (15,0 g) indstilles opløsningen på pH 5,0 og omsættes så ved 60°C i 50 minutter. Efter afkøling tilsættes en mættet vandig opløsning af natriumchlorid (50 ml), og blandingen indstilles på pH 1,5 med4N HC1. Det resul-

8 DK 161201 B

terende faste bundfald filtreres fra, vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid (20 ml) og opløses i ethylacetat (100 ml)-vand (20 ml). Efter fraskillelse tørres ethylacetatopløsningen; der tilsættes toluen (50 ml) og koncentreres. Det faste bundfald filtreres fra, vaskes med toluen-ether og tørres. Proceduren giver 7β-[Β-5-phthalimido-5-carboxyvaleramido] -3-(l-methyl-lH-t etrazol-5-yl) -tbio -methyl-3~cephem-4-carboxylsyre (5,75 g) (udbytte 95,5$).

IR (KBr): 3325, 1780, 1730, 1715, 1650, 1545 cm-1.

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,40-1,76 (2H,m), 2,0-2,4 (4H,m), 3,64 (2H, ÅBq, J =19Hz), 3,93 (3H,s), 4,30 (2H, ABq, J =15Hz), ! 4,73 (lH,t, J = 8Hz), 5,01 (lH,d, j = 5Hz), 5,62 (lH,dd, J = 5 og 9Hz), 7,85 (4H,s), 8,80 (d, j =9Hz).

(2) 1 vand (60 ml) opløses 7P-[D-5-pbtbalimido-5-carboxyvaleramido]-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cepbem-4-carboxylsyre (5,88 g) sammen ; med 2-(2-hydroxyetbylthio)-5-mercapto-l,3,4-thiadiazol (2,90 g) og i natriumhydrogencarbonat (2,20 g). Efter tilsætning af natriumbromid (30 g) indstilles opløsningen på pH 5,5 og omsættes ved 60°C i 50 minutter. Efter at reaktionen er afsluttet, fortyndes reaktionsblandingen med vand (40 ml) og indstilles på pH 5,0. Den vandige opløsning vaskes to gange med ethylacetat, bringes ned på pH 2,0 med 4 N HC1 og ekstraheres tre gange med en blanding af ethylacetat og tetrahydro-furan (4:1). Det organiske lag vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, tørres over magnesiumsul·fat, filtreres og destilleres under reduceret tryk for at fjerne opløsningsmidlet. Til remanensen sættes ethylacetat-ether, og det resulterende pulver filtreres fra, vaskes med ether og tørres. Proceduren giver 7P-[D-5-phthalimido- ; 5-carboxyvaleramido] -3-[ 2-( 2-hydroxyethylthio) -1,3,4-thiadiazol-5-yl]- j thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (6,56 g) (udbytte 96,6$).

IR (KBr): 3325, 1780, 1715, 1645, 1530 cm-1.

HMR (dg-dimethylsulfoxid): δ 1,30-2,40 (6H,m), 3,20-3,80 (6H,m), j 4,27 (2H,ABq,J=12Hz), 4,65 (IH,t,J=9Hz), 4,96 (lH,d,J=5Hz), 5,55 ; (lH,dd,J=5 og 8Hz), 7,87 (4H,s), 8,70 (lH,d,j=8Hz). ; (3) i en blanding af vand ('50 ml) og tetrahydrofuran (30 ml) opløses ! 7β-[ D-5-phthalimi do-5-c arboxyval eramido ] - 3-( 3-o xobutyrylo xy)-me thyl-3-cephem-4-carboxylsyre (5,88 g) sammen med 2-carbamoylmethylthio-5-mercapto-1,3,4-thiadiazol (2,28 g) og natriumhydrogencarbonat (2,20 g) Opløsningen indstilles på pH 5,8 og omsættes derpå ved 60°C i 70 minutter. Efter afkøling tilsættes vand (30 ml), og den vandige ορίζει

9 DK 161201B

ning indstilles på pH 5,0, vaskes to gange med ethylacetat og bringes ned på pH 2,0 med 4NHC1. Den ekstraheres så tre gange med en opløsningsmiddelblanding af ethylacetat og tetrahydrofuran (2:1), og det organiske lag vaskes med en mættet vandig opløsning af natrium-chlorid og tørres over magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet afdestille-res under reduceret tryk, og remanensen behandles med ethylacetat.

Det resulterende pulver filtreres fra, vaskes med ethylacetat og tørres. Proceduren giver 7P-[D-5-phthalimido-5-carboxyvaleramido]—3—(2— carbamoylmethylthio-1,3,4-thiadiazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (5,83 g) (udbytte 84,2$).

IR (KBr): 3430, 3340, 1776, 1717, 1680, 1535 cm-1.

NMR (dg-dimethylsulfoxid) δ 1,30-2,40 (6H,m), 3,57 (2H,br), 4,40 (2H,s), 4,32 (2H,ABq,J=12Hz), 4,70 (lH,t,j=8Hz), 5,0 (lH,d,J=5Hz), 5,55 (lH,dd,J=5 og 8Hz), 7,20 (IH,bred), 7,60 (IH,bred), 7,86 (4H,s), 8,74 (lH,d,J=8Hz).

Eksempel 2.

I dichlormethan (50 ml) opløses 7{3-[D-5-benzamido-5-carboxyvaler-amido]-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-ditriethylaminsalt (6,69 g). Ved stuetemperatur tilsættes triethylamin (1,01 g) og di-keten (1,68 g), og reaktionen udføres i 3,0 timer. Efter at reaktionen er afsluttet, behandles reaktionsblandingen på samme måde som i eksempel 1. Proceduren giver 7β-[D-5-benzamido-5-carboxyvaleramido]-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (5,12 g) (udbytte 91,3$).

IR (KBr): 3350, 1780, 1735, 1720, 1640, 1530 cm-1.

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,45-2,40 (6H,m), 2,18 (3H,s), 3,50 (2H,ABq,J=19Hz), 4,34 (lH,m), 4,88 (2H,ABq,J=13Hz), 5,05 (lH,d,J=5Hz), 5,65 (lH,dd,J=5 og 9Hz), 7,27-8,0 (5H,m), 8,46 (IH,d,J=8Hz), 8,75 (lH,d,J=9Hz).

Referenceeksempel 2 (1) I vand (20 ml) opløses 7-[D-5-benzamido-5-earboxyvaleramido]-3-(3-oxobutyryloxy)~methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (561 mg) sammen med kaliumiodid (400 mg) og pyridin (212 mg). Opløsningen indstilles på pH 6,5 og omsættes så ved 60°C i 50 minutter. Efter tilsætning af vand (10 ml) indstilles den vandige opløsning på pH 7,0, vaskes to gange med dichlormethan (5,0 ml), indstilles igen på pH 6,0 og koncentreres under reduceret tryk. Remanensen underkastes søjlekromatografi på Amberlite XAD-2, og der elueres med vand og derpå med en blanding af vand og methanol. Eluatet koncentreres og lyofiliseres.

10 DK 161201 B

Proceduren giver N-{7β -[ D - 5 -b enzamido-5-carboxyvaler ami do ] - 3-cephem-3-ylmethyl j-pyridinium—4—carboxylat—mononatriumsalt (352 mg).

IR (EBr): 3360, 3250, 1765, 1645, 1630, 1605, 1575, 1530 cm"1.

RIR (DgO): δ 1,50-2,60 (6H,m), 3,14 (2H,ABq,J=19Hz), 4,36 (lH,m), 5,05 (lH,d,J=5Hz), 5,32 (2H, ABq., J=15Hz), 5,60 (lH,dd, J=5Hz), 7,0-9,0 (l0H,m).

(2) i vand (6,0 ml) opløses 7-[ D-5 -b enz ami do -5 -c arb o xyval er ami do ] - 3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (561 mg) sammen med thiourinstof (100 mg) og natriumhydrogencarbonat (253 mg). Opløsningen indstilles på pH 6,5 og omsættes ved 60°C i 50 minutter. Efter afkøling underkastes reaktionsblandingen søjlekromatografi på Amber-lite XAD-2, og der elueres med vand og vand-methanol. ELuatet koncentreres og lyofiliseres. Proceduren giver S-{7-[D-5-benzamido-5-carb- 0 xyval eramido ]-3-c ephem-3-ylmethyl} -thiouronium-4-carboxylat-mono-natriumsalt (464 mg).

IR (KBr): 3350, 3230, 1762, 1645, 1630, 1600, 1580, 1535 cm"1.

MR (D20): δ 1,50-2,50 (6H,m), 3,20-3,80 (3H,m), 4,40 (2H,m), 5,05 (lH,d,J=5Hz), 5,53 (lH,dd,J=5Hz), 7,30-7,90 (5H,m).

i

Eksempel 3.

1 dichlormethan (50 ml) opløses 7-[D-5-(p-toluensulfonamido)-5-carb- 0 xyvaleramido ] -3-hydro xyme thyl-3-c epbem-4-carboxylsyre-ditri ethyl-aminsalt (7,29 g), og ved stuetemperatur tilsættes triethylamin (0,51 g) og diketen (1,26 g). Reaktionen udføres i 4,0 timer, hvorefter reaktionsblandingen behandles som i eksempel 1. Proceduren giver 7-[D-5-(p-toluensulfonamido)-5-carboxyvaleramido]-3-(3-oxobutyryl- - oxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (5,64 g) (udbytte 92,3$)· IR (KBr): 3275, 1780, 1740, 1730, 1715, 1640, 1535 cm"1.

MR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,30-1,80 (4H,m), 2,0-2,4 (2H,m), 2,16 (3H,s), 2,33 (3H,s), 3,45 (2H,ABq,J=19Hz), 4,91 (2H,ABq,J=12Hz), 5,0 (lH,d,J=5Hz), 5,57 (lH,dd,J=5 og 8Hz), 7,40 (4H,m), 7,81 (lH,d, J=9Hz), 8,64 (lH,d,J=8Hz).

Eksempel 4.

1 dichlormethan (50 ml) opløses 7-[D-5-(p-tert.butylbenzamido)-5- carboxyval eramido]-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-ditri-ethylaminsalt (7,35 g), og ved stuetemperatur tilsættes triethylamin (1,01 g) og diketen (1,68 g). Reaktionen udføres i 2 timer, hvorefter reaktionsblandingen behandles som i eksempel 1. Proceduren giver

11 DK 161201 B

7-[ D -5 - (p - t er t.butylb enzami do)-5-c arbo xyvalerami do]-3-(3-oxobutyryl-oxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (5,78 g) (udbytte 93,8$).

IR (KBr): 3280, 1780, 1740, 1725, 1710, 1640, 1530 cm-1.

MR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,32 (9H,s), 1,50-2,40 (6H,m), 2,18 (3H,s), 3,48 (2H,br), 3,57 (2H,s), 4,35 (lH,m), 4,94 (2H,ABq,J=13Hz), 5,06 (lH,d,j=5Hz), 5,62 (lH,dd,J= 5 og 8Hz), 7,46 (2H,d,J=8Hz), 7,85 (2H,d,J=8Hz), 8,35 (lH,d,J=8Hz), 8,78 (lH,d,J=8Hz).

Eksempel 5.

I dichlormethan (50 ml) opløses 7-[D-5-caprylamido-5-carboxyvaler-amido]-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-ditriethylaminsalt (6,01 g), hvorpå der tilsættes tri ethylamin (1,01 g) og diketen (1,68 g). Reaktionen udføres ved stuetemperatur i 3 timer, hvorefter reaktionsblandingen behandles som i eksempel 1. Proceduren giver 7-[D-5-c aprylamido-5-c arbo xyvalerami do]-3-(3-o xobutyrylo xy)-methy1-3-cephem-4-carboxylsyre (4,36 g) (udbytte 90,3$)· IR (KBr): 3320, 1780, 1745, 1725, 1715, 1645, 1535 cm”1.

MR (δ i dg-dimethylsulfoxid); 0,70-2,40 (2 lH,m), 2,22 (3H,s), 3,53 (2H,bred), 3,60 (2H,s), 4,18 (lH,m), 4,91 (2H,ABq,J=12Hz), 5,04 (IH,d,J=5Hz), 5,65 (lH,dd,J=5 og 8Hz), 7,87 (IH,d,J=8Hz), 8,70 (lH,d,J=8Hz).

Eksempel 6.

I dichlormethan (50 ml) opløses 7-phenylacetamido-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-triethylaminsalt (4,49 g), og ved stuetemperatur tilsættes triethylamin (0,51 g) og diketen (1,26 g). Reaktionen udføres i 2 timer, hvorefter opløsningsmidlet afdestilleres under reduceret tryk. Remanensen fortyndes med vand og indstilles på pH 6,0. Denne vandige opløsning ekstraheres to gange med ethylacetat, bringes ned på pH 2,0 med 4NHC1 og ekstraheres tre gange med ethylacetat. Ethylacetatopløsningen vaskes med en mættet vandig opløsning af na-triumchlorid, behandles med magnesiumsulfat og filtreres. Opløsningsmidlet afdestilleres under reduceret tryk, og remanensen omkrystalliseres af ethylacetat-ether. Proceduren giver 7-phenylacetamido-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (4,16 g) (udbytte 96,3$)· IR (KBr): 3270, 1785, 1745, 1715, 1655, 1540 cm-1.

MR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 2,14 (3H,s), 3,52 (6H,bred), 4,86 (2H,ABq,J=13Hz), 5,00 (IH,d,J=5Hz), 5,63 (lH,dd,J=5 og9Hz), 7,22 (5H,s), 8,93 (lH,d,J=9Hz).

12 DK 161201 B

Eksempel 7.

I dichlormethan (30 ml) opløses 7p-(2-tMenylacetamido)-3-hydroxy-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre-triethylaminsalt (4,55 g), hvorpå der tilsættes r avsyr eanhydrid (1,50 g). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer. Dichlo rmethan et aides till er es, og efter tilsætning af s vandig phosphorsyreopløsning (100 ml) ekstraheres remanensen med ethyl acetat (150 ml). Ethyl acetatlaget vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid (100 ml x 2), tørres over magnesiumsulfat og koncentreres under reduceret tryk. Remanensen behandles med ether, og det resulterende pulver filtreres fra, vaskes med ether og tørres under reduceret tryk over phosphorpentoxid. Proceduren giver 7β-(2-thienylac etamido)-3-(3-carboxypropionyloxy)-methyl-3-c ephem-4-carboxylsyre (4,00 g).

IR (KBr): 1782 (β-lactam), 1733 (-COgH) cm-1.

HMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 2,50 (4H,-C0(CH2)2-), 3,40 og 3,63 (2H,lBq,J=l8Hz,2-CH2), 3,75 (2H,s,-Ci^COHH-), 4,71 og 5,07 (2H,ABq, J=13Hz,3-CH2), 5,07 (IH, d, J=5Hz, 6-H), 5,68 (lH,dd,J=5 og 8Hz,7-H), 6,90 og 7,30 (3H, lTpL.)> 9,10 (lH,d,J=8Hz,-C0HH-).

Eksempel 8 I dimethylformamid (40 ml) opløses natrium-7β-mandelamido-3-hydroxy-methyl-3-cephem-4-carboxylat (3,86 g), hvorpå der tilsættes 0-carb-oxymandelsyreanhydrid (2,67 g)· Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 30 minutter, hvorefter der tilsættes 2$'s H^PO^ (150 ml). Blandingen ekstraheres med ethylacetat (250 ml), og ethylacetatlaget vaskes med vand (150 ml x 2), tørres over magnesiumsulfat og koncentreres under reduceret tryk. Efter tilsætning af ether fås et pulver. Dette pulver filtreres fra, vaskes med ether og tørres under reduceret tryk over phosphorpentoxid. Proceduren giver 7β-ιιΐ8η1βΐ3ΐιιϊ1ο-3-mandelyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (3,68 g).

IR (KBr): 1777, 1745, 1669 cm-1.

Em (δ i d6-dimethylsulfoxid): 3,2-3,7 (2H,2-0H2), 4,7-5,2 (5H,3-CH2, 6-H og -CH-x2), 5,69 (1H,7-H), 1,2-7,6 (10H, <ZT>" x2 ), 8,67 (IH, -C0HH-).

DK 161201B

13

Eksempel 9 I dimethylformamid (50 ml) opløses 7p-[D-5-(p-t-butylbenzamido)-5-carboxyvaleramido]-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-ditri-ethylaminsalt (7,35 g), hvorpå der tilsættes O-carboxymandelsyre-anhydrid (2,67 g). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 30 minutter, hvorefter der tilsættes 3%'s vandig phosphorsyre (250 ml) og ekstraheres med ethylacetat (500 ml). Ethylacetatlaget vaskes med vand (250 ml x 2), tørres over magnesiumsulfat og koncentreres under reduceret tryk. Efter tilsætning af ether fås et pulver. Dette pulver filtreres fra, vaskes med ether og tørres under reduceret tryk over phosphorpentoxid. Proceduren giver 7p-[D-5-(p-t-butylbenzamido)- 5-carboxyvaleramido]-3-mandelyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (6,30 g).

IR (KBr): 1778, 1736, 1642 cm"1.

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,29 (9Hfsf-C(CH^)^)f 1,73 og 2,23 (6H,-(CH2)3-), 3,2-3,6 (2H,2-CH2), 4,38 (IH,-CH-HH-), 4,75 og 5,04 (2H,ABq,J=13Hz,3-CH2), 5,02 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,16 (IH,s, <Z>-CH-), 5,66 (lH,dd,J=5 og 8Hz,7-H), 7,2-7,5 (5H, <Z>- ), 7,43 og 7,81 (4H, ), S,43 (1Η,d, J=8Hz,-CH—NH- ), 8,80 (IH, d, J=8Hz,-C0NH-).

Eksempel 10 I dichlormethan (50 ml) opløses 7P~(D-5-phthalimido-5-carboxyvaler-amido-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-ditriethylaminsalt (7,05 g), hvorpå der tilsættes O-carboxymandelsyreanhydrid (2,38 g). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 1 time, hvorefter den behandles som i eksempel 23. Proceduren giver 7p-(D-5-phthalimido-5-carb-oxyvaleramido)-3-mandelyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (6,25 g).

IR (KBr): 1773, 1715, 1647 (skulder) cm"1.

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,54 og 2,22 (6H,-(CH2)y), 3,27 og 3,49 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH2), 4,73 (lH,t,J=7Hz, -CH-E< ), 4,74 og 5,03 (2H,ABq,J=13Hz,3-CH2), 4,98 (IH,d, J=5Hz, 6-H), 5^16 (IH,s, <f3>-CH-), 5,61 (lH,dd,J=5 og 8Hz,7-H), 7,2-7,5 (5H, J), 7,86 (4H,s, 0 ti ), 8,77 (IH,d,J=8Hz,-C0NH-).

»1 0 14

DK 161201B

Referenceeksempel 3 I dichlormethan (70 ml) suspenderes 7β-[D-5-phthalimido-5-carboxy-valeramido]-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (5,88 g). Ved en temperatur, der ikke overstiger 10°C, tilsættes så tri ethyl amin (2,80 ml), hvorpå der tilsættes ΓΓ,Ν-dim ethyl anil in (10,0 ml) og dimethyldichlorsilan (3,13 ml). Blandingen omrøres ved 20-25°C i 30 minutter, hvorefter der tilsættes phosphorpentachlorid (4,20 g) ved -30°C. Blandingen omsættes ved -25 ± 2°C i 30 minutter, hvorefter der dråbevis tilsættes methanol (25 ml) ved en temperatur, der ikke overstiger -20°C. Reaktionen får lov at forløbe ved -15 til -10°C i 20 minutter, hvorpå der tilsættes vand (50 ml) ved -15 til -10°C og omrøres kraftigt i 5 minutter. Vandlaget tages, vaskes med diehlormethan og indstilles på pH 3,5 med en 40$'s vandig opløsning af kaliumcarbonat. De resulterende krystaller filtreres fra, vaskes med vand, 50$' s vandigt methanol og acetone og tørres til slut. Proceduren giver 7p-amino-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carb-oxylsyre (2,84 g).

IR (KBr): 3200, 1800, 1745, 1720, 1622 cm-1.

mm. (6 i D20+TTa0D): 2,27 (3H,s), 3,48 (2H,ABq,J=l8Hz), 4,6-5,6 (4H,m).

Referenceeksempel 4 I vand (48 ml) suspenderes 7β-amino-3-(3-0xobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (6,09 g), og ved 0-3°C tilsættes 2 H natriumhydroxid (10,4 ml) i små portioner, idet man sørger for, at pH-vær-dien ikke overstiger 8,5. Efter'tilsætning af natriumhydrogencarbonat (3,65 g) tilsættes en opløsning af D-oc-sulfophenylacetylchlorid (5,0 g) i ethylacetat (8,8 ml) dråbevis ved 0-5°C over et tidsrum på 1 time. Efter at den dråbevise tilsætning er afsluttet, udføres reaktionen ved 0-5°C i 20 minutter. Derpå indstilles reaktionsblandingen på pH 5,5 og adskilles. Vandlaget tages, afgasses, og efter at have fået bekræftet, at pH-værdien ligger i området på 5,-5 til 6,5, sættes ethanol (800 ml) til denne vandige opløsning (ca. 80 ml). Derefter omrøres blandingen i 30 minutter, hvorefter den afkøles til en temperatur, der ikke overstiger 5°C. De resulterende krystaller filtreres fra, vaskes med ethanol-vand (10:1) og ethanol og tørres. Proceduren giver 7β-(ΰ-α-3υ1ίορ1ιβ^1ηο etami do) -3~( 3-oxobutyryloxy) -me-thyl-3-cephem-4-carboxylsyre-dinatriumsalt (8,8 g).

IR (KBr): 3300, 1763, 1740, 1680, 1610, 1215, 1047 cm-1.

15

DK 161201B

NMR (δ i D20): 2,27 (3H,s,_gCH ), 3,29 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH2), 4,84 (2H,ABq,J=13Hz,3-CH2), 5,00 (l^,d,J=5Hz,6-H), 5,07 (1H,S,-CH- ), SO^Na 5,70 (lH,d,J=5Hz,7-H), 7,25-7,80 (5H,m).

Eksempel 11 I chloroform (5 ml) opløses 7P-(D-oc-sulfophenylacetamido)-3-hydroxy-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre-ditriethylaminsalt (480 mg), hvorpå der tilsættes diketen (300 mg). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer, hvorefter opløsningsmidlet afdestilleres. Remanensen fortyndes med vand og afsaltes med Amberlite IR-120(H). Den afsaltede opløsning indstilles på pH 5,7 med 1 N natriumhydroxidopløsning og lyo-filiseres. Udbytte 400 mg. Lyofilisatet renses ved søjlekromatografi på Amberlite XAD-2. Proceduren giver 7p-(D-cc-sulfophenylacetamido)-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre-dinatriumsalt.

Referenceeksempel 5 I dichlormethan (80 ml) suspenderes 7P-amino-3-(3-oxobuturyloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (15,7 g)- Ved -10°C tilsættes tri-ethylamin (10,1 g). Til den resulterende opløsning sættes en opløsning af 4-chlor-3-oxobutyrylchlorid (1,41 mmol/g) (44,9 g) dråbevis ved -20 til -15°C over et tidsrum på 20 minutter. Efter at den dråbevise tilsætning er afsluttet, udføres reaktionen ved en temperatur, der ikke overstiger -5°C, i 1 time. Efter reaktionen afdestilleres dichlormethanet, og remanensen opløses ved tilsætning af tetrahydro-furan (50 ml), ethylacetat (100 ml) og 10$'s vandig phosphorsyre. Den resulterende opløsning adskilles, og det organiske lag tages. Det vandige lag ekstraheres med en opløsningsmiddelblanding af ethylacetatte trahydrof uran (5il)· Ekstrakterne forenes, vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, tørres over magnesiumsulfat og filtreres. Opløsningsmidlet afdestilleres, og remanensen behandles med ethylacetat-ether. Det resulterende pulver filtreres fra, vaskes med ether og tørres. Proceduren giver 7p-(4-chlor-3-oxobutylamido)-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (20,4 g).

IR (KBr): 3325, 1782, 1740, 1732, 1715, 1685, 1650 cm"1.

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 2,14 (3H,s), 3,55 (4H,s), 3,54 (2H,br), 4,44 (2H,s), 4,90 (2H,ABq,J=13Hz), 5,05 (lH,d,J=5Hz), 5,54 (lH,q, J=5 og 8Hz), 8,96 (lH,d,J=8Hz).

16 DK 161201 B

Dichlormethanopløsningen af 4-chlor-3-oxobutyrylchlorid, der anvendes ved denne reaktion, fremstilles ved at opløse diketen (84,0 g) i di-chl orm ethan (420 ml) og indføre chlorgas (78,1 g) ved -30 til -35°C i 1 time.

Referenceeksempel 6

Medens en opløsning af diketen (0,91 g) i dichlormethan (2 ml), omrøres ved -40 til -30°C, tilsættes brom (1,82 g) dråbevis. Separat opløses 7β-amino-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-c ephem-4-carbo xylsyre (2,6 g) og triethylamin (1,7 g) i dichlormethan (20 ml) og afkøles til -40°C. Denne opløsning sættes til ovennævnte reaktionsblanding. Efter omrøring i 20 minutter omrøres blandingen yderligere under køling med is. Efter tilsætning af vand (7 ml), phosphorsyre og ethyl-acetat omrøres blandingen kraftigt, og det organiske lag vaskes med en vandig opløsning af natriumchlorid, tørres og affarves med aktiveret kul. Derpå afdestilleres opløsningsmidlet, og der tilsættes ether. Proceduren giver 7p-(4-brom-3-oxobutylamido)-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-eephem-4-carboxylsyre (2,4 g).

IR (KBr): 1790, 1730, 1645, 1545 cm-1.

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 2,17 (3H,s,C0CH3), 3,60 (2H,s,-C0CH2C0-) 3,3-3,8 (2H,bred,2-CH2), 4,36 (2H,s,BrCH2C0-), 4,76 og 5,06 (2H, ABq, J=12Hz,3-CH2), 5,07 (lH,d,J=4,5Hz,6-H), 5,68 (lH,dd,J=4,5 og 8Hz,7-H), 9,04 (lH,d, J=8Hz, -C0NH-).

Referenceeksempel 7 I acetone (10 ml) opløses 7P-(4-chlor-3-oxobutylamido)-3-(3-oxobuty-ryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (4,33 g), og under køling med is tilsættes vand (10 ml) og thiourinstof (0,84 g). Derpå tilsættes natriumhydrogenearbonat (0,84 g) og vand (10 ml). Blandingen omsættes ved stuetemperatur i 5 timer, hvorefter den afkøles med is. De resulterende krystaller filtreres fra, vaskes med vand, acetone og ether og tørres. Proceduren giver 7β-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-acetami do] -3-( 3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (4,22 g).

IR (KBr): 1775, 1740, 1710, 1661 cm-1. Q

OTR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 2,17 (3H,s,_gøjj ), 3,38 (2H,s, 0 0 -CH2C0]ffi-), 3,51 (2H,2-CH2), 3,59 (2H,s,_gCH g_), 4,77 og 5,06 (2H, ABq,J=13Hz,S-CH2), 5,05 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,69 (lH,dd,J=5 og9Hz,7-H), 6,23 (IH,s,thiazolin-H), 8,82 (lH,d,J=9Hz,-C0HH-).

17 DK 161201 B

Eksempel 12 I dimethylformamid (3,5 ml) opløses 7β-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-acetamido]-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-natriumsait (1,37 g) hvorpå der tilsættes O-carboxymandelsyreanhydrid (0,90 g). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 1 time, hvorefter det meste af dimethyl-formamidet afdestilleres under reduceret tryk. Til remanensen sættes ethylåeetat (50 ml), hvorpå der omrøres kraftigt. Det resulterende pulver filtreres fra, vaskes med ethylacetat (20 ml), dichlormethan (20 ml) og ether (20 ml) i den nævnte rækkefølge. Proceduren giver 7β-[2-(2-iminO“4~thiazolin-4-yl)-acetamido]-3-mandelyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (1,60 g).

IR (KBr): 1780, 1743, 1665, 1643, 1537 cm-1.

HMR (δ i dg-dimethylsulfoxid+D20): 3,33 og 3,65 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH2), 3,37 (2H,s,-CH2C0-), 4,8-5,3 (2H,3-CH2), 4,97 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,21 (IH,s, <£Z>-CH-), 5,64 (lH,d, J=5Hz,7-H), 6,25 (IH,s,thiazolin-H), 7,2-7,6 (5H, -<^> ).

Eksempel 13 I N,N-dimethylformamid (20 ml) opløses 73-(2-thienylacetamido)-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-natriumsalt (3,86 g), og ved -5°C tilsættes triethylamin (1,40 ml) og diketen (1,50 ml). Reaktionen udføres ved -5 til 0°C i 1 time, hvorefter reaktionsblandingen hældes i is-vand (200 ml). Blandingen indstilles på pH 2,0 med 4 N saltsyre og ekstraheres med ethylacetat. Ethylacetatlaget vaskes med vand, fortyndes med vand, bringes på pH 7,0 med 5$'s vandig natriumhydrogen-carbonatopløsning og adskilles. Vandlaget tages, koncentreres og underkastes søjlekromatografi på Amberlite XAD-2, idet der elueres med vand-methanol. Eluatet lyofiliseres. Proceduren giver 7p-(2-thienyl-ac etamido)-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre-natrium-salt (4,48 g).

IR (KBr): 3300, 1765, 1745, 1670, 1613 cm-1.

MR (δ i D20): 2,31 (3H,s), 3,47 (2H,ABq,J=l8Hz), 3,85 (2H,s), 4,88 (2H,ABq,J=13Hz), 5,08 (IH,d,J=5Hz), 5,60 (lH,d,J=5Hz), 6,9-7,5 (3H,m).

DK 161201 B

Referenceeksempel 8 18

Dichlormethan (20 ml) sættes til en blanding af 7β-£ΰηΐιιο-3-(3-οχο-butyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (3,14 g) og dimetbylacetami d (1,8 g). Under iskøling og omrøring tilsættes derpå phenoxyace-tylchlorid (1,8 g). Blandingen omrøres i 1 time, hvorefter det uopløselige filtreres fra, og filtratet vaskes med en vandig opløsning af natriumchlorid. Det organiske lag ekstraheres med en vandig na-triumhydrogencarbonatopløsning. Vandlaget gøres surt med phosphorsyre og ekstraheres med ethylacetat. Ekstrakten vaskes med vandig natri um-chloridopløsning, tørres og destilleres for at fjerne opløsningsmidlet. Til remanensen sættes ether, og det resulterende pulver filtreres fra og vaskes med ether. Proceduren giver 7 β -pheno xy ac e t ami do - 3-(3-o xobutyryloxy) -methyl-3-c ephem-4-carboxylsyre.

IR (EBr): 1788, 1722 cm-1. Q

MR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 2,l8 (3H,s, CCH^), 3,60 (2Η,2-0Η2), 3,66 (2H,s, -CCHpC- ), 4,67 (2H,s,-0CHo-), 4,99 (2H,3-CEU), 5,18 0 0 (IH,d,J=5Hz,6-H), 5,78 (lH,dd,J=5 og 8Hz,7-H), 6,8-7,7 (5H,m), 9,07 (lH,d,J=8Hz).

Referenceeksempel 9 I dichlormethan (5 ml) suspenderes 7β-amino-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (314 mg), og ved -10°C tilsættes triethylamin (0,28 ml). Til den resulterende opløsning sættes diketen (0,2 ml), og reaktionen udføres ved en temperatur, der ikke overstiger 0°C, i 2 timer. Efter denne reaktion af destilleres dichlormetha-net, og remanensen opløses i vand-ethylacetat, indstilles på pH 2,0 med 4 N saltsyre og adskilles. Ethylacetatlaget tages, fortyndes med vand, indstilles på pH 7,0 med 5$' s vandig natriumhydrogencarbonat-opløsning og adskilles. Vandlaget tages, koncentreres og underkastes søjlekromatografi på Amberlite XAD-2, idet der elueres med vand-me-thanol. Eluatet lyofiliseres. Proceduren giver 7β-(3-oxobutylamido)-3-( 3-0xobutyryloxy) -methyl-3-cephem-4-carboxylsyre-natriumsa!t ( 375 mg).

IR (KBr): 3320, 1770, 1745, 1660, 1610 cm-1.

MR (δ i D20): 2,27 (6H, s), 3,55 (2H,ABq,I=l8Hz), 4,93 (2H,ABq, J=13Hz), 5,15 (IH,d,J=5Hz), 5,70 (lH,d,J=5Hz).

19 DK 161201B

Referenceeksempel 10 I acetonitril (5 ml) opløses 7β-(4~brom-3-oxobutylamido)-3-(3-oxo-butyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (2,4 g), hvorpå der tilsættes thiocarbaminsyre-O-methylester (0,6 g). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i ca. 16 timer, og de resulterende krystaller filtreres fra. Proceduren giver 7p-[2-(2-oxo-4-thiazolin-4-yl)-acetamido]-3-(3-0 xobutyrylo xy)-me thyl-3-cephem-4-c arb oxylsyr e.

IR (KBr): 1780, 1722, 1675, 1629 cm-1.

NMR ( δ i dg-dimethylsulfoxid): 2,17 (3H,s,-C0CH3), 3,32 (2H,s,-CH2-C0NH), 3,41 og 3,64 (2H,ABq,J=l8Hz,2-H), 3,58 (2H,s,-C0CH2C0-), 4,75 og 5,06 (2H,ABq,J=13Hz), 5,06 (IH,d,J=4,5Hz,6-H), 5,68 (lH,dd,J=4,5 og 8Hz, 7-H), 5,99 (lH,s,thiazolin-H), 8,94 (lH,d,J=8Hz,-C0NH-), 11,06 (IH, thiazolin-NH).

Eksempel 11 I dichlormethan (10 ml) suspenderes 7p-amino-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (942 mg), hvorpå der tilsættes N,N-dimethylacetamid (1 ml). Under iskøling og omrøring tilsættes derpå en opløsning af (IH-tetrazol-l-yl)-acetylchlorid (441 mg) i dichlormethan (3 ml). Blandingen omrøres yderligere ved stuetemperatur i 30 minutter, hvorefter den hældes i en vandig opløsning af natrium-hydrogencarbonat. Vandlaget, dvs. den vandige ekstrakt, renses ved søjlekromatografi på Sephadex LH-20. Fraktionerne, der er rige på det ønskede produkt, forenes, koncentreres, gøres sure med phosphorsyre og ekstraheres med ethylacetat. Ekstrakten tørres, koncentreres og behandles med ether. Proceduren giver 7p-[2~(lH-tetrazol-l-yl)-acet-araido]-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre.

IR (KBr): 1782, 1707 cm"1.

NMR (δ i d,--dimethylsulfoxid): 2,17 (3H,s,-CH-J , 3,55 (2H,bred, b 0 0 3 2-CH2), 3,59 (2H,s,_gCH^g_ ), 4,78 og 5,08 (2H, ABq, J=13Hz, 3-0¾), 5,09 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,34 (2H,s,NCH2C0-), 5,71 (lH,dd,J=5 og 8Hz, 7-H), 9,28 (IH,s,tetrazol-H), 9,46 (lH,d,J=8Hz,-C0NH-).

Referenceeksempel 12 20

DK 161201B

I tørt tetrahydrofuran (30 ml) opløses D-a-t-butoxycarbonylamino-a-(p-hydroxyphenyl)-eddikesyre (2,68 g), hvorpå der tilsættes 2,6-luti-din (1,08 g). Under køling ved -10°C og omrøring tilsættes forsigtigt ethylchlorformiat (1,08 g), og blandingen omrøres ved -10°C i 20 minutter. En isafkølet opløsning af 7p-amino-3-(3-oxobutyryloxy)-inethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (3,14 g) og natriumhydrogenearbonat (1,0 g) i vand (30 ml) sættes på en gang til ovennævnte blanding. Hele blandingen omrøres ved -3°C i 10 minutter og derpå under køling med is-vand i 2 timer. Efter tilsætning af vand (60 ml) vaskes blandingen med ethylacetat (50 ml), og under omrøring i nærværelse af ethylacetat (100 ml) tilsættes forsigtigt 50$'s phosphorsyre, så at pH-værdien bringes på 3,0. Ethyl acetatlaget tages, skylles med vand (100 ml), tørres over vandfrit natriumsulfat og behandles med en 2 I opløsning af natrium-2-ethylhexanoat i isopropylalkohol (6 ml). Det resulterende bundfald tages ved dekantering, løsnes med ethylacetat, filtreres fra og tørres under reduceret tryk over phosphorpentoxid. Det således opnåede brune pulver renses ved søjlekromatografi på Amberlite XAD-2. Proceduren giver 7P-[D-a-t-butoxycarbonylamino-a-(p-hydroxyphenyl)-ac e t ami do ] - 3 - (3 -o xobut y ryl o xy) -m e thyl -3-c eph em-4-c arb o xyl syr e -natriumsalt.

IR (KBr): 3400, 1770, 1680, 1610 cm-1.

MR (δ i D20): 1,45 (9H,s), 2,30 (3H,s), 3,43 (2H,bred), 5,65 (lH,d, J=5Hz,7-H), 6,76-7,40 (4H,m).

Referenceeksempel 13 I vand (0,3 ml) opløses 7P-(D-a-sulfophenylacetamido)-3-(3-oxobuty-ryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre-dinatriumsalt (278 mg) sammen med pyridin (60 mg) og KSCTT (1,2 g). Blandingen opvarmes ved 60°C i 1 time, hvorefter den underkastes søjlekromatografi på Amberlite XAD-2, idet der elueres med vand. Fraktionerne, der er rige på det ønskede produkt, forenes, lyofiliseres og omkrystalliseres af methanol. Proceduren giver 7-(D-a-sulfophenylacetamido)-3-cephem-3-pyridi-niummethyl-4-carbo xylat-natriumsalt.

IR (KBr): 1760, 1665, 1610 cm-1.

MR (δχΰ20): 2,97, 3,35 (2H,ABq, J=l8Hz, 2-0¾), 5,27, 5,40 (2H,3-CH2), 5,07 (lH,d,J=5,2Hz,6-H), 5,71 (lH,d,p,J=5,2Hz,7-H), 5,10 (IH,s, ^3-CH- ), 7,47 (5H,m), 8,04, 8,55, 8,90 (5H, ).

SO^Na

21 DK 161201 B

Referenceeksempel 14

Reaktionsproceduren i eksempel 51 gentages under anvendelse af iso-nicotinamid (90 mg) i stedet for pyridin, og reaktionsproduktet behandles på samme måde som i eksempel 51. Proceduren giver 7-(D-a-sulfophenylacetamido)-3-cephem-3-(4-carbamoylpyridinium)-methyl-4-carboxylat-natriumsalt. Det renses ved omkrystallisation af ethanol-vand. Smp. 175°C (dekomp.).

IR (KBr): 1765, 1692, 1645, 1615, 1029 cm-1.

RIR (δ i D20): 2,99, 3,56 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH2), 5,40, 5,51 (2H, 3-CH2), 5,13 (lH,d,J=4,8Hz,6-H), 5,73 (IH,d,J=4,8Hz,7-H), 5,10 (lH,s, -CH- ), 7,40 (5H,m), 8,31, 9,07 (4H).

SO^Ra

Referenceeksempel 15 I 50$'s vandigt acetone (8 ml) opløses 7p-(2-thienylacetamido)-3-mandelyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (0,49 g) sammen med acetylacetone (0,50 g) og natriumhydrogencarbonat (0,17 g), og opløsningen omrøres ved 60°C i 1 time. Reaktionsblandingen bringes på stuetemperatur, og det meste af acetonet afdestilleres under reduceret tryk. Til remanensen sættes 5$'s vandig phsophorsyreopløsning (10 ml) sammen med ethylacetat (20 ml). Ethylacetatlaget vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid (20 ml), tørres over magnesiumsulfat og koncentreres under reduceret tryk. Efter tilsætning af ether fås der et pulver. Dette pulver suspenderes i vand (3 ml) og opløses ved tilsætning af natriumhydrogencarbonat. Opløsningen underkastes søjlekromatografi på Sephadex LH-20, idet der elueres med vand. De ønskede fraktioner forenes og lyofiliseres. Proceduren giver 7β-(2-thienylacetamido)-3-(2-acetyl-3-oxo)-butyl-3-cephem-4-carboxylsyrenatriumsalt (0,28 g). Dette produkt opløses i vand (10 ml), hvorpå der tilsættes 10^'s vandig phosphorsyre (2 ml) og ethylacetat (20 ml). Ethylacetatlaget vaskes med vand, tørres over magnesiumsulfat og koncentreres under reduceret tryk. Efter tilsætning af ether fås der et pulver. Dette pulver filtreres fra, vaskes med ether og tørres under reduceret tryk over phosphorpentoxid. Proceduren giver 7p-(2-thienyl-aeetamido)-3-(2-acetyl-3-oxo)-butyl-3-cephem-4-carboxylsyre (0,23 g). IR (KBr): 1765, 1718 cm-1.

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 2,13 og 2,18 (6h,s,(C0CH^)2), 2,6-3,1 (2H,m,3-CH2), 3,31 og 3,56 (2H,ABq,2-CH2), 3,75 (2H,s,-CH2C0-), 4,14 (IH,-CH-), 5,01 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,58 (lH,dd,J=5 og8Hz,7-H), 6,92 og 7,30 (3H, |j I ), 9,04 (IH,d,J=8Hz,-C0NH-).

*s.S^

DK 161201B

22

Referenceeksempel 16 I 50$'s vandigt acetone (8 ml) opløses 70-[D-5-(p-t-butylbenzamido)- 5-carboxyvaleramido]-3-mandelyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (0,67 g) sammen med acetylacetone (0,50 g) og natriumhydrogencarbo-nat (0,25 g). Blandingen omrøres ved 60°C i 1,5 timer, hvorefter den behandles ved en lignende procedure som den, der er beskrevet i referenceeksempel 15. Proceduren giver 70- [D-5- (p-t-butylbenzaxnido) -5-carboxy-valeramido]-3-(2-acetyl-3-oxo)-bu.tyl-3-cephem-4-carboxylsyre (0, 33 g)·

Referenceeksempel 17 I 50$'s vandigt acetone (12 ml) opløses 70-(D-5-phthalimido-5-carb-oxyvaleramido)-3-mandelyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (0,64 g) sammen med indol (0,35 g) og natriumhydrogenearbonat (0,17 g). Blandingen omrøres ved 60°C i 1 time. Efter reaktionens afslutning oparhejdes blandingen, og der fås 70-(D-5-phthalimido-5-carboxy-valeramido)-3-(3-indolyl)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre-dinatrium-salt (0,24 g).

IR (KBr): 1758, 1702, 1600 cm-1.

MR (δ i D20): 1,68 og 2,26 (6Η,-(0Η2)3~), 2,45 og 2,82 (2H,ABq, J=18Hz,2-CH2), 3,61 og 3,86 (2H,ABq, J=15Hz, 3-0¾), 4,6-4,9 (2H, -CH- og 6-H), 5,46 (lH,d, J=5Hz,7-H), 7,0-7,8 (10H, 0 VNW/

. " λ H

øV· ff 0

Referenceeksempel 18 I phosphatpuffer (40 ml) med pH 6,4 opløses 7-[2-(2-imino-4-thiazolin- 4-yl) -acetamido] -3-( 3-oxobutyryloxy) -methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (908 mg) sammen med en nitrogenholdig heterocyclisk thiol (2,2 mmol) og natriumhydrogencarbonat (336 mg). Opløsningen omrøres ved 60°C i 1 time, hvorefter den koncentreres under reduceret tryk til ca. 20 ml. Koncentratet underkastes søjlekromatografi på Amberlite XAD-2, idet

23 DK 161201 B

der elueres med vand, 5$'s ethanol og 10$'s ethanol i den nævnte rækkefølge. Fraktionerne, der indeholder det ønskede produkt, forenes og lyofiliseres, og man får en af følgende forbindelser. Tallet for reaktionsudbyttet er den værdi, der bestemmes ved væskekromatografi umiddelbart efter reaktionen.

(1) 7-[2-(2-imino-4-thi azo1in-4-yl)-ac etami do]-3-(2-carb o xymethyl- 1,3, 4-thiadiazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-dinatrium-salt; udbytte 85$.

IR (KBr): 1761 cm"1.

NIR (δ i D20): 3,56 og 3,92 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH2), 3,76 (2H,s,-CH2CO), 4,16 (2H,s,-CH2C0), 4,20 og 4,62 (2H,ABq, J=13Hz, 3-0¾), 5,24 (lH,d, J=5Hz,6-H), 5,79 (lH,d,j=5Hz,7-H), 6,65 (IH,s,thiazolin-5-H).

(2) 7-[2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-acetamido]-3-(3-hydroxymethyl)- 4-methyl-l,2,4-triazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-natriumsalt; udbytte 82$.

IR (KBR): 1760 cm"1.

NMR (δ i D20): 3,40 og 3,82 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH2), 3,62 (2H,s,-CH2C0), 3,74 (3H,s,-CH3), 3,72 og 4,34 (2H, ABq,J=13Hz,3-CH2), 4,82 (2H,s, CHgOH), 5,08 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,64 (lH,d,J=5Hz,7-H), 6,52 (IH,s, thiazolin-5-H).

Referenceeksempel· 19 I 50 ml vand opløses 5,61 g 7-[D-5-(benzamido)-adipinamido]-3-(3- 0 xobut y rylo xy) -methyl - 3-c eph em-4-c arb o xyl syre sammen med 1,50 g 5-mercapto-1-methyl-IH-tetrazol og 2,20 g natriumhydrogencarbonat.

Efter at pH-værdien er indstillet på 5,2, udføres reaktionen ved 60°C

1 50 minutter. Efter afkøling tilsættes 100 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, og pH-værdien indstilles på 1,5 med 4 N HC1. Det faste bundfald filtreres fra, vaskes med 20 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid og opløses i 100 ml ethylacetat-tetrahydrofuran (2:1) og 20 ml vand. Det organiske lag tørres, og opløsningsmidlet afdestilleres under reduceret tryk. Til remanensen sættes ether-ethylacetat, og det resulterende pulver filtreres fra, vaskes méd ether og tørres. Proceduren giver 5,45 g (udbytte 94,8$)

DK 161201B

24 7-[D-5-(benz amido) -5-carboxyvaleramido] -3-(l-methyl-lH-tetrazol-5 -yl) -thiomethyl-3-c ephem-4-carboxylsyre.

IR (KBr): 3340, 1783, 1730, 1645, 1535 cm-1.

MR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,50-2,0 (4H,m), 2,05-2,45 (2H,m), 3,70 (2H,bred), 3,93 (3H,s,ITCH3), 4,15-4,55 (3H,m), 5,10 (lH,d, J=5Hz,6-H), 5,66 (lH,dd,J=5 og9Hz,7-H), 7,32-7,97 (5H,m, -<3> ), 8,43 (lH,d,J=8Hz,-C0NH-), 8,73 (lH,d,J=9Hz,-C0RH-).

Referenceeksempel 20 I 50 ml vand opløses 6,11 g 7-[D-5-(p-toruensulfonamido)-adipin-amido]-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephera-4-carboxylsyre sammen med 1,50 g 5-mercapto-l-methyl ^-lH-tetrazol og 2,20 g natriumhydro-gencarbonat. Efter at opløsningen er indstillet på pH 5,0, udføres reaktionen ved 60°C i 50 minutter. Efter reaktionen behandles reaktionsblandingen på samme måde som i referenceeksempel 19. Proceduren giver 5,96 g'(udbytte 95,1$) 7-[D-5-(p-toluensulfonamido)-5-carboxyvaleramido ]-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl) -thi omethyl-3-cephem-4-carboxylsyre.

IR (KBr): 3275, 1780, 1727, 1635, 1535 cm-1.

MR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,45-1,78 (4H,m), 2,0-2,3 (2H,m), 2,41 (3H,s,-CH3), 3,71 (2H,bred,2-CH2), 3,95 (3H,s,-RCH3), 4,28 (2H,bred), 5,06 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,62 (lH,dd,J=5,0 og 9,0Hz,7-H), 7,47 (4H,m, -<fn>- ), 7,91 (lH,d,J=9,0Hz), 8,68 (lH,d,J=9,0Hz).

Referenceeksempel 21 I 50 ml vand opløses 6,17 g 7-[D-5-(p-tert.butylbenzamido)-5-carboxy-valeramido] -3-( 3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre sammen med 1,74 g 5-mercapto-l-methyl-lH-tetrazol og 2,50 g natriumhydrogen-carbonat. Efter at opløsningen er indstillet på pH 5,0, udføres reaktionen ved 60°C i 50 minutter. Efter reaktionen behandles blandingen på sairme måde son i referenceeksempel 19, og man får 6,02 g (udbytte 95,3%) 7 -[ D-5 - ( p -t ert. butylb enz ami do) -5 -c arb o xy val erami do ] -3- (1-methyl -1H-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre.

IR (KBr): 3350, 1780, 1725, 1643, 1532, 1504 cm-1.

MR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,30 (9H, s,-C(CH3) 3), 1,50-2,45 (6H,m, -(CH2)3-), 3,64 (2H,bred,2-CH2), 3,93 (3H,s,-NCH3), 4,27 (2H,bred, 3-CH2), 4,36 (lH,m,-CH-), 5,0 (lH,'d, J=5Hz, 6-H), 5,62 (lH,dd,J=5,0 og 8,0Hz,7-H), 7,35 (2H!d,J=8,0Hz), 7,70 (2H,d,J=8Hz), 8,36 (lH,d,J= 8,0Hz,-C0NH-), 8,76 (lH,d,J=8,0Hz,-C0HH-).

DK 161201B

Referenceeksempel 22 25 I 50 ml vand opløses 4,83 g 7-[D-5-(eaprylamido)-5-carboxyvaleramido]-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl~3-cephem-4-carboxylsyre sammen med 1,74 g 5- mercapto-l-methyl-lH-tetrazol og 2,50 g natriumhydrogencarbonat. Efter at opløsningen er indstillet på pH 5,0, og 35,0 g natriumbromid er tilsat, udføres reaktionen ved 60°C i 45 minutter.

Efter denne reaktionsperiode behandles reaktionsblandingen på samme måde som i referenceeksempel 19. Proceduren giver 4,78 g (udbytte 96,3%) 7- [D-5-(caprylamido)-5-carboxyvaleramido]-3-(1-methyl-ΙΗ-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-c ephem-4-carboxylsyre.

IR (KBr): 3300, 1775, 1725, 1655, 1640, 1545, 1533 cm-1.

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 0,60-2,40 (21H,m), 3,70 (2H,bred, 2-CH2), 3,95 (3H,s,NCH3), 4,15 (lH,m), 4,27 (2H,bred,3-CH2), 5,03 (lH,d,J=5Hz,6-H), 5,65 (lH,dd,J=5,0 og 8,0Hz,7-H), 7,97 (lH,d,J=8,0Hz, -C0NH-), 8,76 (lH,d,J=8,0Hz,-C0NH-).

Referenceeksempel 23 I 50 ml vand opløses 4,32 g 7-phenylacetamido-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre sammen med 1,50 g 5-mercapto-l-methyl-ΙΗ-tetrazol og 1,68 g natriumhydrogencarbonat, og reaktionen udføres ved 60°C i 50 minutter. Efter afkøling indstilles reaktionsblandingen på pH 5,0 og vaskes med ethylacetat. Den bringes så ned på pH 2,0 og ekstraheres tre gange med ethylacetat. Ethylacetatopløsningen vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, behandles med magnesiumsulfat, filtreres og destilleres under reduceret tryk for at fjerne opløsningsmidlet. Remanensen omkrystalliseres af ethylacetat-ether. Proceduren giver 4,29 g (udbytte 96,2$) 7-phenylacetamido-3-(1 -m ethyl -1 H-t e t razol -5 -yl) -thi omethyl - 3-c ephem-4 -carb o xyl syre.

IR (KBr): 3270, 1785, 1733, 1662, 1628, 1542 cm-1.

NMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 3,55 (2H,s,-CH2C0-), 3,60 (2H,bred, 2-CH2), 3,92 (3H,s,NCH3), 4,26 (2H,bred-3-CH2), 5,00 (lH,d,J=5,0Hz, 6- H), 5,60 (lH,dd, J=5,0 og 8,0Hz,7-H), 7,23 (5H,s, <ξ“Γ>- ), 8,98 (IH,d,J=8Hz,-C0NH-).

DK 161201 B

26

Referenceeksempel 24 I 10 ml vand opløses 561 mg 7 -[ D-5-benzamido-5-oarboxyvaleramido]-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre sammen med 252 mg nat riumhydr o gene arb onat og 212 mg 2-methyl thio-5-mer c apt o-1,3,4-thiadiazol. Reaktionen udføres ved 60°C i 50 minutter, og efter afkøling vaskes reaktionsblandingen med ethyl acetat og frysetørres.

Det resulterende faste stof opløses i en lille mængde methanol og behandles med acetone. De dannede krystaller filtreres fra og vaskes med ether. Proceduren giver 614 mg 7-[D-5-benzamido-5-carboxyvaler-amido ] -3-( 2-methylthio-l, 3,4-thiadiazo 1 -5 -yl) -thiomethyl-3-c ephem-4-carboxylsyre-dinatriumsalt.

IR (KBr): 3400, 1766, 1640, 1600, 1530 cm-1.

RMR (δ i D20): 1,40-2,55 (6H,m,-(CH2)3~), 2,68 (3H,s,SCH3), 3,33 (2H,ABq,J=l8Hz,2-CH2), 4,14 (2H,ABq, J=14Hz, 3-0¾), 4,30 (lH,m,-CH-), 5,01 (lH,d,J=4,5Hz,6-H), 5,58 (lH,d,J=4,5Hz,7-H), 7,25-7,95 (5Hjm, -<r>. )·

Referenceeksempel 25 I 10 ml vand opløses 561 mg 7-[D-5-benzamido-5-carboxyvaleramido]-5-(3-o xobut y ryl o xy) -m ethyl - 3-c eph em-4 -c arb o xyl syre sammen med 252 mg natriumcarbonat og 224 mg 5-mercapto-2-ethoxycarbonylmethyl-lH-l, 3,4-triazol. Reaktionen udføres ved 60°C i 50 minutter, og efter afkøling T-icO-ianrn ps re^ktionsblandingen på samme måde sem i referenceeksempel 24. Proceduren giver 642 mg 7-[D-5-benzamido-5-carboxyvaleramido]-3-(2-ethoxy-carbonylmethyl-lH-1, 3,4-triazol-5-yl) -thiomethyl-3-c ephem-4-carboxyl-syre-dinatriumsalt.

IR (KBr): 3400, 3280, 1765, 1745, 1640, 1603, 1535 cm-1. mm (δ i D20): 1,20 (3H,t,J=8,0Hz,-CH2CH3), 1,50-2,50 (6H,m,-(CH2)3-).

3,32 (2H,ABq,J=19Hz,2-CH2), 3,80-4,50 (7H,m), 4,95 (lH,d,J=4,5Hz,6-H).

5,52 (lH,d, J=4,5Hz,7-H), 7,20-7,90 (5H,m, -<fI3 ).

Referenceeksempel 26 I 12 ml vand opløses 1,27 g 7P-[D-5-(p-t-butylbenzamido) -5-carboxy-valeramido] -3-( 3-carboxypropionyloxy)-methyl-3-c ephem-4-carboxylsyre sammen med 0,25 g 5-mercapto-l-methyl-lH-tetrazol og 0,68 g natrium-hydro g ene arb onat, hvorpå der omrøres i 1-g- time ved 60°C. Reaktionsopløsningen får lov at køle af’til stuetemperatur, og der tilsættes 30 ml af en 4fo' s vandig opløsning af phosphorsyre, hvorpå der ekstra-heres med 60 ml ethylacetat. Ethyl acetatlaget vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid (40 ml x 2) og tørres over magne- 27

DK 161201 B

siumsulfat, hvorpå der koncentreres under reduceret tryk. Til koncentratet sættes ether, og det resulterende pulver filtreres fra, vaskes med ether og tørres over phosphorpentoxid under reduceret tryk, hvorved der fås 1,02 g 7P-[D-5-(p-t-butylbenzamido)-5-carboxyvaleramido]- 3- (l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-eephem-4-carboxylsyre.

Med hensyn til IR- og NMR-spektre er dette produkt i god overensstemmelse med produktet opnået i referneceeksempel 21.

Referenceeksempel 27 I vand (12 ml) opløses 7p-(D-5-phthalimido-5-carboxyvaleramido)-3-mandelyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (1,27 g) sammen med 5-mer-capto-1-methyl-lH-tetrazol (0,25 g) og natriumhydrogencarbonat (0,51 g). Opløsningen omrøres ved 60°C i 30 minutter. Efter at reaktionen er afsluttet, behandles reaktionsblandingen på samme måde som i referenceeksempel 26. Proceduren giver 7β- (D-5-phthalimido-5-carboxyvaler-amido)-3-(l-methyl-lH-t etrazol-5-yl)-thiomethyl-3-c ephem-4-carboxylsyre (1,12 g). Med hensyn til IR (KBr)- og NMR (d^-dimethylsulfoxid)-spektre er denne forbindelse i god overensstemmelse med produktet i referenceeksempel 1 (2).

Referenceeksempel 28 I vand (5 ml) opløses 7β-(D-mandelamido)-3-mandelyloxymethyl-3-cephem- 4- carboxylsyre (0,50 g) sammen med 5-mercapto-1-methyl-lH-tetrazol (0,12 g) og natriumhydrogencarbonat (0,17 g). Opløsningen omrøres ved 60°C i 30 minutter. Efter afkøling i luften underkastes reaktionsblandingen søjlekromatografi på Amberlite XAD-2, idet der elueres med vand og en opløsningsmiddelblanding af vand og methanol. Fraktionerne, der indeholder det ønskede produkt, forenes, koncentreres og lyofili-seres. Proceduren giver 73-(D-mand.elamido)-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-natriumsalt (0,34 g).

28 DK 161201 B

Referenceeksempel 29 I vand (5 na) opløses 7p-(2-thienylacetamido)-3-mandelyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (488 mg) sammen med natriumhydrogencarbonat' (84 mg), kaliumiodid (400 mg) og pyridin (212 mg). Opløsningen indstilles på pH 6,5 og omsættes ved 60°C i 45 minutter. Efter afkøling underkastes reaktionsblandingen søjlekromatografi på Amberlite XAD-2, idet der elueres med vand og derpå med en opløsningsmiddelblanding af vand og methanol. fraktionerne, der indeholder det ønskede produkt, forenes, koncentreres og lyofiliseres. Proceduren giver 7p-(2-thienyl-acetamido)-3-(l-pyridylmethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre-betain (250 mg)

Referenceeksempel 30 I vand (4 ml) opløses 7β-(2-thienylacet amido)-3-mandelyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (0,49 g) sammen med 5-mercapto-1-methyl-1H-tetrazol (0,12 g) og natriumhydrogenearbonat (0,17 g). Opløsningen omrøres ved 60°C i 30 minutter. Efter at reaktionen er afsluttet, behandles reaktionsblandingen ved en lignende procedure som den, der er beskrevet i referenceékssnpel 26. Proceduren giver 7β-(2-thkenylacetamido)- 3- (l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (0,40 g).

Referenceeksempel 31 I vand (30 ml) opløses 7P-amino-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl_3-cephem-

4- carboxylsyre (3,14 g), natriumhydro gene arb onat (1,84 g) og 5-mer-capto-l-methyl-lH-tetrazol (1,4 g), og opløsningen indstilles på pH

5,5, hvorpå der omrøres og opvarmes ved 60°C i 1 time. Efter afkøling vaskes reaktionsopløsningen med dichlormethan (20 ml), og det vandige lag indstilles på pH 3,3, hvorefter der omrøres i 1 time under iskøling. Det resulterende bundfald filtreres fra, vaskes med vand, methanol og acetone i denne rækkefølge og tørres, hvorved man får 7P-amino-3-(l-methyl-lH-t etrazol-5 -yl) -thiomethyl-3-c ephem-4-carboxylsyre (2,7 g).

IR (KBr): 1795 cm-1.

MR (δ i D20+HaH003): 3,61 og 3,98 (2H,ABq, J=18Hz,2-CH2) , 4,21 (s, -HCH3), 5,21 (d, J=4,5Hz,6-H), 5,60 (d,J=4,5Hz,7-H).

29 DK 161201 B

Referenceeksempel 32 I vand (30 ml) opløses 7P~amino-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem- 4-carboxylsyre (3,14 g), natriumhydrogencarbonat (0,84 g) og 5-mer-capto-l-[2-(N,N-dimethylamino)-ethyl]-lH-tetrazol (2,60 g), og den resulterende opløsning omrøres i 60 minutter ved 55°C. Efter afkøling sættes acetone (15 ml) til reaktionsopløsningen, og blandingen ledes gennem en søjle af aktivt aluminiumoxid (10 g). Søjlen vaskes med vandacetone (1:1) (30ml), og vaske væsken forenes med eluatet, hvorpå man afdestillerer acetonet under reduceret tryk. Til den resterende opløsning sættes Amberlite IR-120 (syreform) (6,0 ml), og blandingen omrøres i 30 minutter under iskøling. Det uopløselige filtreres fra, og filtratet koncentreres. Koncentratet sættes dråbevis til ethanol i en mængde på ca. 30 gange rumfanget af koncentratet, og det udfældede faste stof filtreres fra, vaskes med ethanol og tørres, hvorved man får 7β-amino—3~ίΐ—[ 2-(N,N-dimethylamino)-ethyl]-lH-tetrazol-5-yl|-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (3,28 g).

IR (KBr): 3450, 1780, 1620, 1540 cm”1.

NMR (δ i D20): 3,07 (6H,s), 3,70 (2H,ABq,J=17Hz), 3,85 (2H,t,J=6Hz), 4,25 (2H,ABq,J=l2Hz), 4,8-5,2 (4H,m).

Referenceeksempel 33 I vand (30 ml) opløses 7p-amino-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem- 4-carboxylsyre (3,14 g) sammen med natriumhydrogencarbonat (1,84 g) og 2-mercapto-5-methyl-l,3,4-thiadiazol (1,6 g), og den resulterende opløsning indstilles på pH 6,4, hvorpå der omrøres i 1 time ved 60°C. Efter afkøling vaskes reaktionsopløsningen med dichlormethan, og pH-værdien af det vandige lag indstilles på 3,5 under iskøling, hvorpå der omrøres i 1 time. Det udfældede materiale filtreres fra, vaskes med vand, methanol og acetone i denne rækkefølge og tørres, hvorved man får 7P-amino-3-(2-methyl-l,3,4-thiadiazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (2,9 g).

IR (KBr): 1795 cm-1.

NMR (δ i D20+NaHC03): 2,87 (3H,s,thiadiazol-CH3), 3,53 og 3,95 (2H, ABq,J=l8Hz,2-CH2), 4,10 og 4,46 (2H, ABq, J=13Hz, 3-0¾), 5,17 (lH,d, J=4,5Hz,6-H), 5,58 (lH,d,j=4,5Hz,7-H).

30 DK 161201 B

Referenceeksempel 34 I vand (1 ml), der indeholder natriumsalt e t af 5-mercapto-lH-l,2,3-triazol (120 mg) og natriumhydroxid (40 mg), opløses tinder iskøling 7 β -amino -3-(3-0 xohut y ryl o xy) -methyl- 3-c ephem-4 -c arh o xyl syre (282 mg), og til den restilterende opløsning sættes 1 ΓΓ HC1 for at indstille dens pH-værdi på 5,5 tinder omrøring, hvorpå der omrøres yderligere i 1 time ved 55°C. Til reaktionsopløsningen sættes methanol (5 ml), og blandingen får lov at køle af til stuetemperatur. Den afkølede blanding indstilles på pH 3,9 ved tilsætning af 1 I HC1 tinder omrøring, og den resulterende blanding omrøres yderligere i 1 time under, iskøling. Det udfældede uopløselige stof filtreres fra og vaskes med vand og methanol i denne rækkefølge. Det uopløselige stof tørres naturligt og derpå over phorphorpentoxid, og man får 7P-amino-3-(lH-l,2,3-triazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (190 mg).

IR (KBr): l800, 1525 cm”1.

Referenceeksempel 35 I vand (1 ml), der indeholder natriumhydrogenearbonat (84 mg), opløses 7P-amino-3-( 3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (314 mg), og til den resulterende opløsning sættes isonicotinamid (185 mg) og kaliumiodid (1,0 g), hvorpå der omrøres i 1 time ved 55°C. Til reaktionsblandingen sættes ethanol (20 ml) under omrøring, og det resulterende bundfald filtreres fra og vaskes med ethanol. Efter naturlig tørring opløses det brune pulver i vand (3 ml), og opløsningen kromatograferes på en søjle pakket med Amberlite XAD-2. Eluatet frysetørres, og man får 7 β -amino - 3- (4-c arb amoylpyri dinium) -me thyl-4-e arb -oxylat (150 mg).

IR (KBr): 3500, 1760, 1600 cm-1.

Referenceeksempel 36 I en blanding af tetrahydrofuran (5 ml) og vand (10 ml) opløses 7β-(2-thienylacetamido) -3-( 3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxyl-syre (876 mg) og natriumsulfit (504 mg), og den resulterende opløsning omrøres i 120 minutter ved 60°C. Til reaktionsblandingen sættes vand (10 ml), og blandingen indstilles på en pH-værdi på 7,2 med 2 N HC1, hvorpå der koncentreres under reduceret tryk. Remanensen underkastes

31 DK 161201 B

søjlekromatografi på silicagel og elueres med acetonitril-vand (7:1-5:1). Fraktionerne, der indeholder den ønskede forbindelse, forenes, og acetonitrilet afdestilleres. Remanensen kromatograferes på en søjle pakket med Amberlite XAD-2, og der elueres med vand og derpå vand-methanol. Fraktionerne, der indeholder den ønskede forbindelse, forenes, og blandingen koncentreres under reduceret tryk, hvorefter der frysetørres, og man får dinatriumsaltet af 7β-(2-thienylacetamido)-3-sulfomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre (310 mg).

IR (KBr): 3450, 1760, 1665, 1605, 1190, 1055 cm-1.

NMR (δ i D20): 3,67 (2H, ABq,J=17Hz), 3,92 (2H,s), 4,16 (2H, ABq, J=l6Hz), 5,20 (lH,d,J=5Hz), 5,64 (IH,d,J=5Hz), 7,05 og 7,40 (3H,m).

Eksempel 14 I 50 ml dichlormethan opløses 7,05 g 7-[D-phthalimido-5-carboxyvaler-amido] -3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-ditriethylaminsalt, og ved 0°C sættes triethylamin (1,5 ml) til opløsningen, hvorpå der tildryppes diketen (2,0 ml) i løbet af 10 minutter ved -5 til 0°C. Blandingen omrøres yderligere i 50 minutter ved -5 til 0°C, og der tilsættes 40 ml vand, hvorpå dens pH-værdi indstilles på 6,0 med 2 N HC1. Det vandige lag vaskes med dichlormethan (10 ml), og der tilsættes 2,25 g 5-mercapto-l-[ 2-(N,N-dimethylamino)-ethyl]-lH-tetrazol, hvorpå pH-værdien indstilles på 5,5· Opløsningen omrøres ved 60°C i 40 minutter, og derpå filtreres det uopløselige fra. Til filtratet sættes natriumchlorid (15,0 g) og en mættet vandig opløsning af natriumchlorid (50 ml), og blandingen indstilles på pH 2,0 med 4 N HC1. Det udfældede faste materiale filtreres fra, vaskes med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid og vand i denne rækkefølge og tørres, hvorved man får 6,75 g 7β-(D-5-phthalimido-5-carboxyvaleramido)-3- i 1 -[ 2- (N, N -dim ethyl amino) -ethyl ] -ΙΗ-t e t razol -5 -yl} -thi omethyl -3-c ephem-4 -c arbo xyl syr e-hydro chi ori d.

IR (KBr): 3370, 1775, 1715, 1640 cm-1.

HMR (δ i dg-dimethylsulfoxid): 1,30-2,40 (6H,m), 3,5-4,8 (9H,m), 5,04 (lH,d,J=5Hz), 5,60 (lH,q,J=5,8Hz), 7,90 (4H,s), 8,86 (lH,d, J=8Hz).

DK 161201B

32

Referenceeksempel 37 I en phosphatpuffer på pH 6,4 (3 ml) opløses natrium-7P -[D-a-t-but-oxycarbonyl amino -oc-(p-hydroxylphenyl) -ac etami do] -3- (3-oxobutyryloxy) -metliyl-3-cepliem-4-carboxylat (280 mg) og natriumsaltet af 5-mercapto-1H-1,2,3-triazol (120 mg), og den resulterende opløsning opvarmes ved 60°C i 60 minutter. Efter afkøling til stuetemperatur kromato grafer es reaktionsopløsningen på en søjle pakket med Amberlite XAD-2, og de forenede eluater, der indeholder det ønskede produkt, frysetørres, og man får nat r ium-7P -[ D-α -t -but o xy c arb onyl amino -a - (p -hydro xyphenyl) -ac etami do] -3-(lH-l, 2,3-triazol-5-yl) -thiomethyl-3-c ephem-4-earboxylat. IR (KBr): 3400, 1762, 1678 cm-1.

MR (D20): δ 1,46 (9H, s,-C(CH3)3), 3,00-4,12 (4H,m, 2-CH2, 3-CH2), 5,00 (lH,d,J=4,5Hz,6-H), 5,60 (lH,d,J=4,5Hz,7-H), 6,78-7,42 (4H,m, -<f3^>-), 7,71 (lH,s,triazol-4-H).

Det således opnåede natrium-7P-[D-a-t-butoxycarbonylamino-a-(p-hydr-oxyphenyl) -ac etami do] -3-(lH-l ,2,3-triazol-5-yl) -thiomethyl-3-cephem- 4-carboxylat (175 mg) opløses i myresyre (4 ml), og den resulterende opløsning omrøres i 2 timer ved stuetemperatur. Reaktionsopløsningen underkastes destillation under reduceret tryk og derpå azeotrop destillation (3 gange) med toluen for at fjerne myresyre, hvorpå der tørres over phosphorpentoxid i ca. 16 timer. Det således opnåede skumagtige materiale omrøres med vand-methanol (8:2) (15 ml), og blandingen underkastes filtrering, behandling med aktiveret kul og derpå filtrering under anvendelse af Celite. Eiltratet frysetørres, og man får 7-[D-a-amino-a-(p-hydroxyphenyl)-acetamido]-3-(lH-l,2,3-triazo 1-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre. Dette produkt er i god overensstemmelse med standarden med hensyn til tyndtlagskromato-grafi og væskekromatografi.

Referenceeksempel 38 I vand (10 ml) opløses 7β-[ 2-(2-imino-4-thiazolin-4-yl)-acetamido]-3-(3-oxobutyryloxy)-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (908 mg), 5-mer-capto-l-[ 2-(H,N-dimethylamino)-ethyl]-lH-tetrazol (450 mg) og natrium-hydro gencarbonat (168 mg), og den resulterende opløsning opvarmes ved 55°G i 60 minutter. Reaktionsopløsningen viser sig at indeholde 7β-[ 2-( 2-imino-4-thiazolin-4-yl) -acetamido] -3-|l-[ 2-(N,H-dimethylamino) -

DK 161201B

33 ethyl] -lH-tetrazol-5-yl I -thiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre i Qlfo' s udbytte i forhold til udgangscephalosporinen ved væskekromatografi. Reaktionsopløsningen indstilles på pH 5,8 og renses ved søglekroma-tografi under anvendelse af Åmberlite XAD-2.

IR (KBr): 1765 cm-1.

HMR (D20): δ 3,06 (6h,s,-N(CH3)2), 3,5-4,8 (10H,m), 5,12 (lH,d,J=5Hz, 6-H), 5,65 (lH,d,J=5Hz,7-H), 6,62 (IH,s,thiazolin-H).

Claims

34 DK 161201 B Forbindelse til anvendelse som mellemprodukt til fremstilling af en forbindelse med formlen COOH i hvilken R1 er en acylgruppe med formlen R4 CHCO- R5^ hvor R^ betyder acetyl, halogenacetyl, phenyl, p-hydroxyphenyl, thienyl, 2-imino-4-thiazolin-4-yl, 2-oxo-4-thiazolin-4-yl, tetra-zolyl, phenoxy eller 3-amino-3-carboxypropyl, og R^ betyder hydrogen, sulfo, amino eller hydroxy, og amino- og aminocarboxyl-gruppen i R4 og r5 kan være beskyttet, og R^ er en rest af en nucleofil forbindelse, kendetegnet ved, at den har formlen eV -p"*} ^—N^i-CH2OCOW έθΟΗ i hvilken R^ har den ovenfor angivne betydning, og W betyder acetonyl (-CH2COCH3) eller -X-OH, hvor X betyder Oh- - og salte deraf.