FI120648B - Menetelmä arakidonihapon valmistamiseksi - Google Patents

Menetelmä arakidonihapon valmistamiseksi Download PDF

Info

Publication number
FI120648B
FI120648B FI20060617A FI20060617A FI120648B FI 120648 B FI120648 B FI 120648B FI 20060617 A FI20060617 A FI 20060617A FI 20060617 A FI20060617 A FI 20060617A FI 120648 B FI120648 B FI 120648B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
oil
ara
biomass
hours
medium
Prior art date
Application number
FI20060617A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI20060617A (fi
Inventor
David J Kyle
Original Assignee
Martek Biosciences Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=23449013&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=FI120648(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Martek Biosciences Corp filed Critical Martek Biosciences Corp
Publication of FI20060617A publication Critical patent/FI20060617A/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI120648B publication Critical patent/FI120648B/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6436—Fatty acid esters
    • C12P7/6445—Glycerides
    • C12P7/6472—Glycerides containing polyunsaturated fatty acid [PUFA] residues, i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C11/00—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions
    • A23C11/02—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions containing at least one non-milk component as source of fats or proteins
    • A23C11/04—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions containing at least one non-milk component as source of fats or proteins containing non-milk fats but no non-milk proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23D—EDIBLE OILS OR FATS, e.g. MARGARINES, SHORTENINGS, COOKING OILS
    • A23D9/00—Other edible oils or fats, e.g. shortenings, cooking oils
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/115—Fatty acids or derivatives thereof; Fats or oils
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/115—Fatty acids or derivatives thereof; Fats or oils
    • A23L33/12—Fatty acids or derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/40—Complete food formulations for specific consumer groups or specific purposes, e.g. infant formula
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/20—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
    • A61K31/202—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids having three or more double bonds, e.g. linolenic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
    • A61K31/23—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin of acids having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms
    • A61K31/232—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin of acids having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms having three or more double bonds, e.g. etretinate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/33—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing oxygen
    • A61K8/36—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A61K8/361—Carboxylic acids having more than seven carbon atoms in an unbroken chain; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/92—Oils, fats or waxes; Derivatives thereof, e.g. hydrogenation products thereof
    • A61K8/922—Oils, fats or waxes; Derivatives thereof, e.g. hydrogenation products thereof of vegetable origin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B1/00—Production of fats or fatty oils from raw materials
    • C11B1/10—Production of fats or fatty oils from raw materials by extracting
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Pediatric Medicine (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)

Description

Menetelmä arakidonihapon valmistamiseksi
Keksinnön ala
Keksintö liittyy arakidonihapon valmistamiseen.
Keksinnön tausta 5 Arakidonihappo (ARA) on pitkäketjuinen omega-6-ryhmään kuuluva monityydyttymätön rasvahappo (PUFA) (5,8,11,14-eikosatetraeenihappo, toisin sanoen 20:4). ARA on ihmisruumiissa runsaimpana esiintyvä C20-PUFA. Sitä esiintyy erityisen runsaasti elin-, lihas-ja verikudoksissa ja sen pääasiallisena tehtävänä on toimia rakenteellisena lipidinä, joka assosioituu pääasiassa to veressä, maksassa, lihaksessa ja muissa tärkeimmissä elinjärjestelmissä esiintyviin fosföiiptdeihin. Sen lisäksi, että ARAn pääasiallisimpana tehtävänä on toimia rakenteellisena lipidinä, se on myös useiden kiertävässä veressä esiintyvien elkosenoidien, kuten prostaglandiini E2:n (PGE2), prostasykliini bm (PGb), trömboksaani Asin (TxA2) ja ieukotrieenien B4 (LTB4) ja -C4 (LTG4) väli-15 tön esiaste. Näillä eikosenoideiila on lipoproteiinirnetaboiiaan, veren reologi-aan, verisuonten tonukseen, leukosyyttien toimintaan ja verihiutaleiden aktivoitumiseen kohdistuvia sääteiyvaikutuksia.
Huolimatta siitä, että ARA on tärkeä ihmisen metabolialle, ihmisiliä ei ole kykyä syntetoida tätä de novo -reaktiotietä. ARAa syntetoituu väittämät* 20 törnän rasvahapon, jinoleiinihapon (LOA), pidentymisen ja desaturoitumisen kautta. Tämän tapahtumiselle tarvitaan ihmisruumiissa pieninä määrinä esiintyvää entsyymiä, Aö-desaturaasia, Burre, et ai., Lipids 25 (1990) 354- 356. Tämän mukaisesti pääosa ARAsta on saatava ruokavaliosta ja tämä on erityisen tärkeää ruumiin nopean kasvun vaiheissa, kuten vauvaiässä.
25 Pikkuvauvojen paino voi ensimmäisen elinvuoden aikana kaksinker taistua tai kolminkertaistua. Tämän johdosta ruokavalion täytyy sisältää tavallista runsaammin ARAa. Tämän lisääntyneen tarpeen tyydyttämiseksi ihmisen rintamaidon ARA-pitoisuudet ovat korkeita. Sanders, et ai., Am. J. Cfin. Nutr. 31 (1978) 805 - 813. Cao-PUFA-molekyyieistä on rintamaidossa eniten ARAa. 30 Imettävistä äideistä erityisesti kasvissyöjät voisivat hyötyä ravinnon tarjoamasta ARA-yiimäärästä. Monet äideistä eivät kuitenkaan imetä vauvojaan tai lopettavat Imetyksen ennen kuin lapsi on ohittanut nopean kasvun vaiheen ja turvautuvat mieluummin äidinmaidonvastikkeen käyttöön.
Tämän patenttihakemuksen tekijän tiedossa ei ote yhtään kaupallis-35 ta äidinmaidonvastiketta, joka sisältäisi trigtyseridimuodossa olevaa ARAa.
2 US-paterrttljulkaisussa nro 4 670 285 (Ciandinin, et ai.), joka on liitetty tähän keksintöön siihen oikeuttavien säännösten nojalla, kuvataan vauvaikäisten rasvahappotarvetta, ARAn tarve mukaan luettuna. Ciandinin, et ai. ehdottavat munankeltuaisen, kalaöljyn tai punasolujen fösfolipldien ja kasviöljyjen seok-5 sen käyttöä ehdottamansa äidinmaidonvastikkeen rasvakomponenttina, josta näitä rasvahappoja saataisiin. Kalaöljy sisältää kuitenkin suuria määriä ei-kosapentaeenihappoa (EPÄ). EPAn tiedetään heikentävän ARAn synteesiä pikkulapsilla. Carlson, et ai., Inform 1 (1990) 306. Siten olisi haluttua kyetä saamaan käyttöön ARAa ilman ylimääräistä EPAa. Lisäksi kananmunankeltu-10 aisten sisältämä ARA-konsentraatio on suhteellisen pieni, joten Ciandinin et alin seoksella ei ole taloudellista tulevaisuutta.
Koska ARAa esiintyy eläinöljyissä, mutta ei kasvisöljyissä, sen tuotanto kaupallisina määrinä on jäänyt tavoiteltavaksi mutta saavuttamattomaksi päämääräksi. Shinmen, et ai., Microbiol. Biotech. 31 (1989) 11 - 16, ovat rats portoineet, että eristetty sieni, Mortierella aipina, tuottaa ARAa käytettäessä tavanomaista fermentointia sekoitettavassa säiliössä. (Tätä kysymystä on j myös käsitelty Shinmen, et alin japanilaisessa patenttijulkaisussa 1 215 245.) |
Organismit otetaan kasvatuksen jälkeen talteen, ne kuivataan ja niiden lipidit j eristetään sienen biomassasta orgaanisella liuottimena ja lipidit modifioidaan 20 kemiallisesti (kovalenttisesti). Esimerkiksi lipidiseos hydrolysoidaan tai muunnetaan etyyliestereiksi ja nämä yhdistetään seuraavaksi syklodekstriiniin, minkä jälkeen niitä käytetään ruokavalion täydentämiseen. Shinmen et ai. eivät kuvaa eivätkä ehdota modifioimattomien mikrobiöljyjen antamista.
Punaista mikrolevää, Porphyridium cruentumia, voidaan, kasvattaa 25 lammikoissa suurina määrinä ja sen iipidikoostumus voi sisältää jopa 40 % ARAa. Ahern, et ai., Biotech. Bioeng. 25 (1983) 1057 - 1070. Valitettavasti ARA assosioituu pääasiassa gaiaktoiipideihin, jotka ovat monimutkaisia polaarisia lipidejä, jota ei esiinny rintamaidossa. Levä ei ainoastaan muodosta biomassastaan kokonaisuudessaan enempää kuin yhden prosentin käytettävissä 30 olevaa ARAa vaan ARA on muodoltaan myös sellaista, ettei se sovellu käytettäväksi lisäaineeksi äidinmaidonvastikkeessa ilman jatkomodifiointia.
US-patenttiju3kaisussa nro 4 870 011 (Suzuki et ai.) kuvataan menetelmää lipidien, kuten γ-linoleenihapon, saamiseksi käyttöön Mortierella-suvun sienistä, γ-linoleenihappo puhdistetaan sienten sisältämien lipidien se-35 oksesta.
3
Julkaisussa DE 3 603 000 A1 (Milupa) kuvataan erittäin monityydyttymättömien rasvahappojen seosta ja sen käyttöä äidinmaidonvastikkeen ms-vakomponenttina. Rasvaseos sisältää runsaasti ARAa ja dökosaheksaarii (DHA) -happoja suhteessa 2,5:1, mainitussa järjestyksessä ilmoitettuna, ja sii-5 nä on runsaasti kolesterolia. Rasvahappojen lähtömateriaaleiksi on lueteltu tietyn tyyppiset makrolevät, kalaöljyt, elimistä peräisin olevat rasvat, jotka ovat peräisin naudoista ja Sioista, tai kananmunankeltuaisesta saatava erittäin puhdistettu öljy. DHAn ja ARAn lähteiksi mainitaan makrolevät, jotka ovat tyypiltään fekofyyttejä ja rodofyyttejä. Julkaisussa ei ehdoteta minkään mikrobin 10 käyttöä öljyn lähteenä. Levä- ja kalaöljyt sisältävät tyypillisesti myös EPAa, joka heikentää ARAn synteesiä in vivo -olosuhteissa. Lisäksi kananmunan keltuaisesta saatava erittäin puhdistettu öljy ei ole ARAn lähtömateriaalina taloudellinen. Lisäksi julkaisussa ei kuvata ARAn suhteen konsentroitua lisäainetta olemassa olevia äidinmaidonvastiketta täydentävänä aineena.
15 Tämän mukaisesti on olemassa tarvetta saada käyttöön taloudelli nen, kaupallisesti käytettävissä oleva menetelmä ARAn valmistamiseksi, edullisesti tuottamatta samanaikaisesti EPAa. Tämän keksinnön tavoitteena on tämän tarpeen tyydyttäminen.
Keksinnön yhteenveto 20 Keksintö koskee arakidonihappoa sisältävän öljyn valmistusmene telmää, joka öljy sisältää triglyseridejä, jolloin vähintään 25 % rasvahapporyh-mistä on arakidonihappoa (ARA) ja öljyn sisältämien eikosapentaeenihappo-ryhmien (EPÄ) määrä ei ylitä viidesosaa arakidonihapporyhmien määrästä. Menetelmälle on tunnusomaista se, että (a) kasvatetaan Morfierella aipinaa 25 elatusainetta sisältävässä Ilmastetussa fermentorissa kuivan biomassan tiheyteen vähintään 24 g/!; ja (b) kootaan biomassa talteen fermentörista ja otetaan mainittu arakidonihappoa sisältävä öljy taiteen mainitusta biomassasta. Tätä öljyä voidaan nimittää yksisoluöljyksi. Sieniä kasvatetaan olosuhteissa, joissa muodostuu öljyä, ne kootaan talteen ja öljy uutetaan ja otetaan talteen. Öljyä •30 voidaan käyttää kemiallisesti pidemmälle modifioimatta suoraan siten, että siitä saadaan ARAa täydentävä tuote tämän tarpeessa oleville henkilöille, mukaan lukien vastasyntyneet, raskaana olevat tai imettävät naiset tai potilaat, joilla esiintyy ARAn puutoksesta johtuvia patologisia tiloja. Tämän keksinnön etuja ovat se, että ARAa on mahdollista tuottaa vaivattomasti, sen puhtausas-35 te on korkea eikä siinä esiinny havaittavia määriä EPAa.
4
Edullisten soveHutusrmiotojen yksityiskohtainen selitys "ARAa" ja "EPAa" käytetään myös tässä keksinnössä tarkoittamaan arakidonihappo- ja eikosapentaeenihapporyhmiä, mainitussa järjestyksessä ilmoitettuna, jossa ryhmät on esteröity glyseroliin osana rasva-s asyylitriglyseridiä tai -fosfolipidiä. Tässä keksinnössä koostumus on "olennaisesti seliainen, että siinä ei esiinny EPAa" siiloin, kun koostumuksen sisältämä jäljellä oleva EPAn määrä on alle se määrä, joka estäisi ARAn synteesiä koostumusta ravinnon lisäaineena käytettäessä, Tässä keksinnössä on saatu myönteiset tulokset arakidonihapon (ARA) taloudellisen lähtömateriaalin aito kaansaamisessa.
Tämä keksintö liittyy menetelmään arakidonihappoa sisäitävän sle-niöljyn (ARASCO) valmistamiseksi, joka öljy ei olennaisesti sisällä lainkaan et-kosapentaeenihappoa (EPÄ). Tässä keksinnössä "ei olennaisesti sisällä" tarkoittaa sitä, että öljy sisältää EPAa vähemmän kuin noin viidenneksen sisälle tämänsä ARAn määrästä, Tätä öljyä, yksisoiuöijyä, voidaan antaa suoraan modifioimattomassa muodossa. Tässä keksinnössä "modifioimaton" tarkoittaa sitä, että rasvahappojen, tai itse öljyjen, kemiallisia ominaisuuksia ei ole muutettu kovaienttisesti. Siten esimerkiksi ARASCOn tai ARAn väliaikainen modifiointi siten, että nämä palautuisivat ennalleen öljyn nauttimisen jatkeen, ei jää 20 tämän keksinnön suojapiirin ulkopuolelle.
Tämän keksinnön mukaisesti valmistetuista modifioimattomista sie-niöijyistä saadaan trigiyseridejä, joissa suhteellisen suuri osa rasvahapporyh-miä on ARAa {rasvahapporyhmistä on edullisesti vähintään 40 % ARAa, ja ryhmistä on edullisemmin vähintään 50 % ARAa), ja ARA-ryhmien ja EPÄ-· 25 ryhmien välinen suhde on myös suuri (vähintään 5:1, edullisesti vähintään 20:1, w/w), Tällaista luonnollisista materiaalilähteistä peräisin olevaa öljyä ei ole ennen tätä keksintöä kuvattu. Vaikkakin tällaisen koostumuksen mukaisia trigiyseridejä voidaan syntetoida kemiallisesti (esimerkiksi esteröimällä runsaasti ARAa sisältävien vapaiden rasvahappojen seoksia tai transesteröimällä 30 tällainen rasvahapposeos etyytiestereillä), voi rasvahapposeoksen käsittely (esimerkiksi puhdistus, esteröinti täi jokin muu näitä vastaava toimenpide) tuottaa haitallisia sivutuotteita·. Tästä poiketen tämän keksinnön mukaisesta menetelmästä saadaan käyttöön koostumukseltaan haluttuja trigiyseridejä käyttä-mällä uuttoa luonnosta peräisin olevista materiaalilähteistä.
ίΛ ro L_ ω 'ro I o, n
O m o CO C0_ O <N iq CO
%£ > CO rt" ί"- C» LO CM ’Sf T~ T- esi »jo io Cö N t Ö ’"'t o" o" t~ oi ® CM ! CM ί r- r- N ΙΟ f-· CO ‘ M* O CO LO ^ CO CD 03 Ö CO* CO* , C3 CO" Mf C\f O" °~ v" CM t-T- | T T- CM Oi r Ο) Π
CO CO CM LO
6d CO co' °, CM *« “l ® « n T~ CM T— 03 -5— CO CM CO CO 1~ 03 10 c\i o O) T- ιΛ in q co q n i t» CD T-· oo' O CM T-" o" n j r~ f— vflMT-T-r-CSCNOD ; *- li) CO 05 CM N, CO CO t“_ 66 co" co" ίο ^ T-" m·" m" cm" !"·' °- t~ COOIin CDNrrrrr W τ- CO LO y~ 2 cb °1 o" ΓΊ °l o" cm* £ r- j I O T- λ- } CM CO T- T- 3 WOO CM h- M- Γ-~ "M" 2 9-o °i co* to" o> °i °i m* cb V-" J*j! -5- CO r- T- r- :0> 03 O) T- t— ϊ- Ο -C o, ro
g- 5 O O CD N CO
£ $ * t «1 co" M-" o w «! 0 K r | OONCDi-i-fCS Oi > m S ro
e K ® | E
φ JS C £ 2 r m F
f ? ?ϊ , « E S
C '5. o ro S. e £ M 3 g -2 *. .2 ro ro ,ffi « & .2 & ® | «
005 JIJSJScoooj.bö.E
6 § E ϊ ! I E E E E E E
3 "S ®Slo3322,3,2 3 ‘m t t Έ n Γ £ £ Γ Γ £ i « 000%%·^%,·%·^%, H3 j 5 2Σ(θο.ο.ιαα.£ΐ 6
Niistä sienilajeista, joiden rasvahapot on aikaisemmin luonnehdittu, on havaittu, että useimmat eivät muodosta ARAa. Weete, J. D., Fungal Lipid Biochemistry, Plenum Press, N.Y., (1974). Niistä lajeista, jotka muodostavat ARAa, tuottavat monet, mukaan lukien kaikki aikaisemmin luonnehditut Pythi-5 um-lajit, ARAn lisäksi merkittäviä määriä eikosapentaeenihappoa (EPÄ), Taulukossa 1 on esitetty P. ihsidiosumin rasvahappoprofiili sekä muiden sienilajien rasvahappoprofiili. Tässä keksinnössä on tehty yllättävä löytö, että P. insi-diosum tuottaa ARAa muodostamatta samanaikaisesti EPAa. Kuten kalaöijy-jen kyseessä ollessa on asianlaita, johtavat suuret EPA-pitoisuudet ruokavalio-to ta täydentävissä aineissa siihen, että ARAn muodostamiskyky ruokavaliosta peräisin olevasta linoleiinihaposta (LOA) pienenee. Tämän mukaisesti pitää paikkansa, että vaikkakin sekä ARAa että EPAa tuottavia sienilajeja voidaan käyttää tämän keksinnön mukaisessa menetelmässä, on edullista käyttää lajia, joka ei muodosta merkittäviä määriä EPAa. Tällaisia edullisia lajeja ovat 15 Pythium insidiosum ja Mortierella aipina. Molempia lajeja ovat saatavilla kaupallisesti ja ne on talletettu talletuslaitokseen American Type Culture Collective, Rockville, Maryland, ja niiden hakunumerot ovat 28 251 ja 42 340, maini- \ tussä jäijestyksessä ilmoitettuna. P. insidiosumia ja M. alpinaa on käytetty kuvaavina sienilajeja edustavina esimerkkeinä tässä patenttiselityksessä. Tässä 20 keksinnössä ajatellaan myös käytettäväksi luonnollisesti muita sienilajeja, jotka tässä keksinnössä kuvatulla tavalla tuottavat triglyseridiä, joka sisältää ARAa ja normaalia pienempiä määriä EPAa.
Yksi merkittäviä ongelmia, joita tämän keksinnön mukainen soveliu-tusmuoto ratkaisee, on ruokavalion sisältämien normaalia suurempien EPA-25 pitoisuuksien aikaansaama ARAn biosynteesin heikkeneminen pikkuvauvoilla Tämä ongelma voidaan ratkaista saattamalla käyttöön ARAa, jota on tarkoitettu käytettäväksi äidinmaidonvasiikkeessa pitoisuuksissa, jotka ovat huomattavassa määrin samanlaiset kuin ihmisen rintamaidosta havaitut pitoisuudet.
ARAn ja EPAn suhde on rintamaidossa tyypillisesti noin 20:1, mainitussa jär- $
30 jestyksessä ilmoitettuna. Tässä keksinnössä ajatellaan erityisesti käytettäväksi I
mitä tahansa mikrobiöljyä, josta saadaan käyttöön riittävä määrä ARAa ruoka- j valiosta peräisin olevan EPAn negatiivisten vaikutusten voittamiseksi. ARAa j sisältävän öljyn käyttö tuottaa edullisesti ARAn ja EPAn väliseksi suhteeksi vähintään suhteen 5:1. Tämä suhde on edullisemmin noin 10; 1 ja se on eduili- | 35 simmin vähintään noin 20:1. Kuten voidaan havaita, on lopputulos sen halutta- vampi mitä suurempi ARAn määrä lopputuotteessa on EPAn määrän verrattu na.
7 Tämän keksinnön mukaisessa menetelmässä sieniä kasvatetaan sopivissa ARAa sisältävää öljyä tuottavissa kasvatusolosuhteissa. Sienten 5 kasvatusmenetelmät ovat tavallisesti tämän alan ammattikokemuksen perusteella tunnettuja ja näitä menetelmiä voidaan soveltaa tämän keksinnön mukaiseen menetelmään. Esimerkiksi ymppäykseen käytettävä sienimäärä voidaan kasvattaa uposkasvatuksena ravistelupulloissa, Pulloissa käytetään kasvatusmediumia, johon on lisätty kasvatusta varten sienimyseeliä ja tätä kasva-10 tetaan ravistelijassa noin kolmesta neljään päivää.
Kasvatusmediumin koostumus voi vaihdella mutta se sisältää aina hiilen ja typen lähteet Edullinen hiilen lähde on glukoosi ja tämän määrit voivat olla alueella noin 10 -100 grammaa glukoosia litrassa kasvatusmediurnia. Kasvatukseen ravistelupulloissa käytetään tyypillisesti noin 15 grammaa litras-15 sa. Tämä määrä voi olla erilainen sen mukaan, mikä lopullisen viljelmän tiheyden halutaan olevan. Muita hiilen lähteitä, joita voidaan käyttää, ovat melassit, runsaasti fruktoosia sisältävä maissisiirappi, hydrolysoitu tärkkelys tai mikä tahansa muu edullinen fermentaatiomeneteimissä tavanomaisesti käytetty hiilen lähde. Lisäksi P, ihsidiosumiile voidaan hiilen tähteeksi käyttää laktoosia. Siten 20 substraattina voidaan käyttää kuoritusta maidosta valmistettua permeaattia, joka sisältää runsaasti laktoosia ja joka on hyvin edullinen hiilen lähde. Näiden hiilen lähteiden sopivat määrät ovat vaikeuksitta määritettävissä tämän alan \ ammattikokemuksen perusteella. Ylimääräistä hiiltä on tavallisesti tarpeellista | lisätä kasvatuksen kuluessa, Tämä johtuu siitä, että organismit käyttävät niin j 25 paljon hiiltä, että sen koko määrän lisääminen panoskasvatuksessa voisi osoit- j tautua mahdottomaksi. j
Typpeä käytetään tavallisesti hiivauutteen muodossa, ja sen kön- j sentraatio on noin 2- noin 15 grammaa uutetta litrassa kasvatusmediumia.
Edullisesti käytetään noin 4 grammaa litraa kohti. Voidaan käyttää muita typpi-30 lähteitä, ja näitä ovat peptoni, tryptoni, maissin liotusvesi, soijajauho, hydrolysoitu kasviproteiini ja muut näitä vastaavat materiaalit. Näiden lähteiden lisättävät määrät voidaan määrittää vaikeuksitta tämän alan ammattikokemuksen perusteella. Typpi voidaan lisätä panosmuodossa, toisin sanoen kaikki yhdellä kertaa ennen kasvatusta.
35 Kun sieniä on kasvatettu 3 - 4 päivää sopivassa lämpötilassa, tyypil lisesti noin 25 - 30 °G:ssa, on kasvaneen sienen määrä riittävä käytettäväksi 8 ymppinä tavanomaiseen sekoitettavaan säiliöfermentoriin (STF). Tällaiset fer-mentorit ovat alan ammattikokemuksen perusteella tunnettuja ja niitä on saatavilla kaupallisesti. Fermentointi voidaan suorittaa panosfermentointina, jak-sottain syötettävänä panosfermentointina (fed batch) tai jatkuvana ferrnenioin-5 tina. STF on varustettu edullisesti siipi roottori 11 a (marine impeller), vaikkakin voidaan myös käyttää Rushton-tyyppistä turbiinisekoitinta.
Fermentori valmistellaan käyttökuntoon lisäämällä siihen halutut hii li- ja typpilähteet. Esimerkiksi 1,5 litran vetoinen fermentori voidaan valmistella käyttökuntoon lisäämällä litraan talousvettä noin 50 grammaa glukoosia ja 10 noin 15 grammaa hiivauutetta. Kuten aikaisemmin mainittiin, voidaan käyttää muita hiili- tai typpilähteitä.
Ravintoliuosta sisältävä reaktori on steriloitava ennen ymppäystä esimerkiksi kuumentamalla. Kun reaktori on jäähtynyt noin 30 °C:seen, voidaan lisätä yrnppi ja aloittaa kasvatus. Kaasujen vaihdon aikaansaamiseksi 15 käytetään ilman puhaltamista reaktoriin, limaa voidaan puhaltaa eri nopeuksilla mutta nopeus säädetään edullisesti noin Öt5;stä noin 4,Ö;aan WM (ilma-määrä fermentorin tilavuutta kohti minuutissa). Liuenneen hapen pitoisuus pidetään edullisesti noin 10 %:sta noin 50 %:iin ilman suhteen täydellisesti kylläisen liuoksen pitoisuudesta. Tämän mukaisesti voi kasvatuksen aikana olla 20 tarpeellista säätää puhallusnopeutta. On haluttua käyttää sekoitusta. Sekot- j tukseen käytetään sekoitintä. Sekoituspään nopeus säädetään edullisesti alueelle noin 50 cm/s- noin 500 cm/s ja edullisesti noin 100 - 200 cm/s,
Ymppiä voidaan tavallisesti käyttää vaihtelevia määriä. Ymppiä voidaan tyypillisesti käyttää noin 2 tilavuus-%:sta noin 10 tilavuus-%:iin. Fermen-25 toriin yhdistettyä ympin kasvatusta käytettäessä (seed train) voidaan käyttää edullisesti noin 5 tilayuus-% ymppiä.
Ravinnepitoisuuksia on seurattava. Giukoosipitoisuuden laskettua alle 5 g/l on lisättävä uutta glukoosia. Tyypillisessä kasvatussykltssä käytetään noin 100 grammaa glukoosia ja noin 15 grammaa hiivauutetta litraa kohti. On 30 haluttua käyttää typpilähde loppuun kasvatuksen aikana, koska tämä voimistaa sienten öljyntuottoa. Tämä pitää erityisesti paikkansa käytettäessä tuotanto-organismina M, a I piri aa.
Erityisen edullisessa sovellutusrnuodossa voidaan Mortierellä alpi-naa, jonka öljypitoisuus on korkea ja joka öljy sisältää runsaasti ARÄa, kasvat-35 taa fermentorissa erittäin suurissa ravinnepitoisuuksissa. Tässä keksinnössä on tehty se yllättävä löytö, että fermentaation alussa voidaan lisätä sellaista pi- 9 toisuuksia typpipitoisia ravinteita, jotka ylittävät sen ravinnepitoisuuden, joka saadaan käyttämällä 15 grammaa hiivauutetta litraa kohti, sikäli kuin fermen-taation aikana lisätty hiilipitoisen ravinteen kokonaismäärä on verrattain korkea. Hiiiiravinteen kokonaismäärä, jota edullisesti syötetään jatkuvasti tai aika 5 ajoin ensimmäisten 25- 50%:n aikana fermentaatioon käytetystä ajasta, tai erinä useina eri ajankohtina täilä samalia osalla fermentaatioon käytettävästä ajasta, vastaa 75 - 300 grammaa glukoosia litrassa elatusainetta {C:N -suhde ä 5:1, ilmoitettuna glukoosin ja hiivauutteen suhteena, \w/w). Erityisen edullisessa fermeniointitävassa typpiravinne on soijajauho, jota lisätään sellainen to määrä, että pitoisuudeksi saadaan noin 16 grammaa litrassa mediumia, ja hiili-ravinnetta käytetään aluksi pitoisuudessa, joka vastaa noin 80 grammaa glukoosia, tai tätä suuremmassa pitoisuudessa. Käytettäessä suuria hiili- ja typpiravinteiden pitoisuuksia oh edullista steriloida näitä kahta ravinneliuosta sisältävät liuokset erikseen. Tässä keksinnössä on myös tehty se havainto, että 15 biomassan saantoa voidaan parantaa seilaisten fermentaatiöiden kyseessä ollessa, joissa on käytetty suuria hiiiiravinnepitoisuuksia, jättämällä osa typpiravinteesta varalle ja syöttämällä jäljellä olevaa typpiravinnetta jatkuvasti tai yh- i tenä tai useampana eränä fermentaation kuluessa. j
Toisinaan viljelmässä, muodostuu runsaasti vaahtoa. Vaahtoamisen 20 estämiseksi voidaan lisätä mahdollisesti vaahdonestoainetta, kuten jotakin tämän alan ammattikokemuksen perusteella tunnettua vaahdonestoainetta, esimerkiksi Mazu 310®:tä tai kasviöljyä.
Kasvatuslämpötilaa voidaan vaihdella. Sekä ARAa että EPAa muodostavilla sienillä on kuitenkin taipumus muodostaa vähemmän EPAa ja 25 enemmän ARAa kasvatettaessa niitä korkeahkoissa lämpötiloissa. Esimerkiksi
kasvatettaessa Mortiereila aipinaa alle 18 °C:ssa se alkaa tuottaa EPAa. Siten I
on edullista pitää lämpötilaa tasolla, joka indusoi ARAn muodostumista muiden rasvojen kustannuksella. Sopivat lämpötilat ovat tyypillisesti noin 25 °C:sta | noin 30 °C:seen. j 30 Kasvatusta jatketaan edullisesti siihen asti, kunnes haluttu biomas- ] san tiheys saavutetaan. Haluttu biomassa on noin 25 grammaa organismia lit- f rassa. Tällainen biomassa saavutetaan tyypillisesti 48 - 72 tunnin kuluessa j ymppäyksestä. Tällä ajankohdalla organismi sisältää tyypillisesti noin 5 - 40 % j monimutkaisia lipidejä, toisin sanoen öljyä, josta noin 10 - 40 % on ARAa tai j 35 edullisesti 40 % ARA-ryhmiä triglyseridifraktiossa, edullisemmin noin 50 % |
ARAa triglyseridifraktiossa ja se voidaan ottaa talteen. I
j 10
Sienen fermentaatiö ARAn muodostamiseksi voidaan suorittaa fer-mentaaiiomediurnissa, jonka pH on noin 5-8. Biomassan, öljyn ja ARAn saantoa M. alpina -viljelmistä voidaan parantaa käyttämällä mediumin pH:n profilointia sen sijaan, että pH:n annettaisiin nousta sitä säätämättä. Saantoja 5 voidaan parantaa myös pitämällä hapen pitoisuus fermentaation aikana korkeana. Nämä fermentaatjomenetelmän modifikaatiot ovat erityisen tehokkaita käytettäessä fermentorissa suuria ravinnepitoisuuksia.
Kun typpiravinteen pitoisuus fermentointia aloitettaessa ylittää pitoisuuden, joka vastaa noin 15 grammaa hiivauutetta litraa kohti, ja/tai hiiliravin-10 teen pitoisuus ylittää pitoisuuden, joka vastaa noin 150 grammaa glukoosia litrassa, voi hiivan kasvu inhiboitua. Tämä kasvun inhibit© voidaan kiertää käyttämällä syöttöpanosfermentaätioia (fed batch), esimerkiksi jakamalla fermen-taatioon käytettävä ravinne eriin, jotka syötetään fermentoriin peräkkäin sen jälkeen kun aikaisemmasta erästä saatu ravinne on metabololtunut osaksi tai 15 kokonaan. Edut, jotka kasvuinhibitiosta vapautuminen tuottaa, voidaan saada syöttämällä ainoastaan hiiliravinnetta (tätä kysymystä on käsitelty julkaisussa Shinmen et ai.). Tässä keksinnössä on tehty se havainto, että tämä hyöty voidaan myös saada jakamalla ravinteet kokonaisuudessaan eriin ja syöttämällä erät fermentaation aikana tai syöttämällä ravinneiiuosta jatkuvasti. Samalla ta-20 voin on tehty se yllättävä löytö, että tämä etu voidaan saada syöttämällä fer-mentaatioon, jossa hiiliravinteen pitoisuus fermentaatiota aloitettaessa on suuri, pelkästään typpiravinnetta. I
Tässä keksinnössä on samoin tehty se havainto, että kun mediumiin liuenneen hapen määrä (D.O.) pidetään korkeana (esimerkiksi > 40 % 25 ilman suhteen kylläisen liuoksen määrästä), tämä johtaa suurien ravinnepitoi-suuksien aikaansaaman kasvun inhibition häviämiseen ja/tai öljyn sisältämien ARA-ryhmien suhteellisen pitoisuuden nousuun. Liuenneen hapen määrä voidaan pitää korkeana lisäämällä kasvatusastian painetta (pakottamalla enemmän Ilmaa fermentorin ilmatilaan), parantamalla sekoitusta (esimerkiksi suu-30 rantamalla sekoittimen kärjen nopeutta), ja lisäämällä ilmastusta (toisin sanoen lisäämällä fermentorin läpi menevän ilman määrää tietyssä ajassa, joka ia- j vallisesti ilmoitetaan WM-yksiköissä, ilman tilavuutena fermentorin tilavuutta kohti minuutissa) ja/tai lisäämällä puhallettavan kaasun (^-pitoisuutta. Näissä j olosuhteissa suoritetun fermentaation on havaittu lisäävän hiilen hyväksikäyt-35 töä, mikä johtaa siihen, että fermentorissa muodostuva biomassan lopullinen konsentraatio suurenee ja runsaasti ÄRAa sisältävän öljyn muodostuminen li- 11 sääniyy. Erityisesti fermentaatiossa, joissa on käytetty yhtä tai useampaa edellä olevaa modifikaatiota, saadaan lopputulos, jonka mukaan fermentaatiossa muodostuu eristettävissä olevaa triglyseridiöljyä, joka sisältää vähintään 40 % ARA-ryhmiä ja edullisesti vähintään 50 % ARA-ryhmiä.
5 Erityisen edullisessa sovellutusmuodossa fermentaatiomediumin si sältämä hiiliravinnepitoisuus vastaa > 80 g/i glukoosia ja typpiravinnepitpisuus vastaa > 16 g/l hiivauutetta.
Tämän soveliutusmuodon kyseessä ollessa liuenneen hapen pitoisuus mediumissa (D.O.) pidetään lähellä 40 % sen pitoisuudesta ilman suh-10 teen kylläisessä liuoksessa, tai tämän yläpuolella, menetellen edullisesti siten, että kasvatusastian painetta lisätään vaiheittain arvoon 77 kPa (11 psi), sekoitusta lisätään arvoon, joka vastaa sekoittimen pään nopeutta 300 cm/s, ja ilmastusta lisätään arvoon 0,5 tilavuutta ilmaa fermentorin tilavuutta kohti minuutissa. Kun fermentaatioseos on ohittanut nopean kasvun ja suuren Osio kulutuksen vaiheen, kasvu (ja 02:n kulutus) pienenee. Tässä vaiheessa voidaan sekoitusta/ilmastusta vähentää sikäli kuin liuenneen hapen määrä säilyy korkeana, tavallisesti yli 40 % sen määrästä ilman suhteen kylläisessä liuoksessa. i
Optimoimalla M. aipinan fermentaatio tässä keksinnössä kuvatulla j 20 tavalla on mahdollista saada erittäin suuria biomassasaantoja, joissa biomassa sisältää 20-60% öljyä, jossa 25-75 paino-% öljystä on trigiyseridimuo-dossa olevia ARA-ryhmiä. Biomassa (ja öljy) voidaan ottaa talteen tässä keksinnössä kuvatulla tavalla. Biomassa otetaan edullisesti talteen fermentorista 48 tunnin kuluessa siitä, kun fermentaatiossa on saavutettu maksimaalinen 25 tuotantotaso, joka on määritetty grammoina ARAa litrassa päivää kohti.
Organismi voidaan ottaa talteen millä tahansa sopivalla menetelmällä, kuten esimerkiksi suodattamana, sentrifugoimalla tai sumutuskuivaa-maiia. Pienehköjen kustannusten vuoksi voi suodatus olla edullista.
Kun organismi on otettu talteen, voidaan myseelikakku uuttaa. My-30 seelikakku tarkoittaa talteenoton jälkeen saatua talteenotettua biomassaa.
Kakku voi olla irtonainen tai puristettu, murennettu tai murentamaton. Kakusta voi olla mahdollisesti poistettu kaikki jäljellä oleva vesi, kuten käyttämällä ennen uuttoa vakuumikuivausta, leijukuivausta, sumutuskuivausta tai kylmä-kuivausta. Jos tätä vaihtoehtoa käytetään, on ARAa sisältävän öljyn uutiami-35: seksi edullista käyttää ei-poiaarisia liuottimia. Vaikkakin mikä tahansa ei- polaarinen uuiioajne on sopiva, on heksaani edullinen. j 12
Edullisessa soveilutusmuodossa öljy uutetaan kuivatusta biomassasta märkäjauhatuksella tai perkoloimaila juuri tislatun heksaanin avulla. Liuotinta lisätään tavallisesti siten, että liuottimen ja biomassan väliseksi suhteeksi saadaan noin 5:1 (w/w). Kiinteät materiaalit erotetaan märkäjauhatuksen 5 jälkeen uutteesta dekantoimalia tai sentrifugoimaila. On edullista pitää liuotinta sisältävä uute (misella) anaerobisena Öljyn sisältämien tyydyttymättömien ras-vahapporyhmien hapettumisen välttämiseksi. Misellasta poistetaan liuotin puhdistamattoman sieniöljyn aikaansaamiseksi.
Sienibiomassasta ei-poiaarisiila liuottimilla uutettu puhdistamaton 10 Öljy voi olla hahtuvamaista, erityisesti silloin, kun biomassa on jauhettua, koska jauhatus voi vapauttaa hienojakoisia partikkeleita, kuten solun seinämän fragmentteja ja liukoisia polysakkarideja, Tällaisen hahtuvamaisen öljyn selkeyttäminen voidaan suorittaa liuottamalla puhdistamaton öljy melko polaarisiin liuottimiin, kuten asetoniin tai alkoholiin. Edullisessa soveilutusmuodossa sieto nimyseelin puhdistamaton öljyuute selkeytetään edelleen käyttämällä asetoni-uuttoa/saostusta. Asetonimiselia valmistetaan lisäämällä asetonia hahtuva-maiseen puhdistamattomaan öljy uutteeseen (edullisesti siten, että öljypitoi-suudeksi saadaan noin 20 %; toisin sanoen noin 4 tilavuusosaa asetonia yhtä puhdistamattoman öljyn tilavuusosaa kohti), sekoittamalla seosta huolellisesti i 20 ja antamalla seoksen jäädä paikoilleen riittävän pitkäksi aikaa, jotta hienot par- \
Ukkelit saostuvat (tavallisesti huoneenlämpötilaa lähellä olevassa lämpötilaa- ! sa). Öijypitoinen asetonimiselia selkeytetään sentrifugoimaila ja/tai suodattamalla ja liuotin poistetaan tämän jälkeen asetonilla selkeytetyn sieniöljyn aikaansaamiseksi. Asetonilla selkeytetty sieniöijy on edullinen käytettäväksi jat-25 komuökkaukseen (esimerkiksi hartsin poistoon, valkaisuun ja hajunpoistoon tavanomaisten menetelmien avulla), koska sienibiomassan uuttamisen aikana i muodostuneet hienojakoiset fraktiot häiritsevät raffinointimenetelmää, jos niitä j ei poisteta asetonivaiheessa.
Vielä yksi edullinen sovellutusmuoto sisältää kuivan biomassan vas-30 tavirtauuton, joka voidaan suorittaa kaupallisesti saatavilla olevissa uuttolait-teissa, esimerkiksi Crown Ironworks -yhtiön valmistamassa laitteessa (Crown Mark IV) tai French, Inc. -yhtiön valmistamassa laiteteessa, joita ei tavallisesti käytetä kasviöljyjen eristämiseen vaan jotka on suunniteltu lian ja mullan erottamiseen. Vaikkakin uuttotehokkuudet eivät biomassan uudelieenjauhatuksen 35 puuttuessa ole kovin suuria, on vastavirtauuttomenetelmällä se etu, että siinä 13 syntyy pienempi määrä "hienojakoisia fraktioita", mikä tämän ansiosta vähentää puhtaan raffinoidun öljyn talteenottamiseen liittyviä teknisiä vaikeuksia.
Vaihtoehtoisesti kostea kakku (joka tyypillisesti sisältää noin 30 -50 % kiintoaineita), voidaan murentaa ja uuttaa suoraan käyttäen polaarisia 5 liuottimia, kuten etanolia tai isopropyyliaikohoiia, tai ylikriittistä nesteuuttoa liuottimilla, C02:lia tai NÖ:ila. Kakut murennetaan edullisesti ennen uuttoa. Tämän keksinnön avulla on mahdollista käyttää edullisesti taloudellisesti ylikriittisen nesteen käyttöön perustuvia uuttomeneteimiä. McHugh, et ai., Supercritical Fluid Extraction, Butterworth (1986). Nämä menetelmät ovat alan ammatti-10 kokemuksen perusteella tunnettuja ja niitä ovat menetelmät, joita nykyisin käytetään esimerkiksi kahvipapujen kofeiinin poistoon.
Edullinen vesipitoinen uuttomenetelmä sisältää sen, että myseeli-biomassa yhdistetään polaariseen isopropyyliaikohDli-iiuottimeen sopivassa reaktioastiassa. Tällaiset astiat ovat tunnettuja. On haluttua käyttää kolmesta 15 kuuteen osaa liuotinta kutakin biomassan osaa kohti. Yhdistäminen suoritetaan edullisesti typen alla tai antioksidanttien läsnä ollessa lipidiuutteen sisältämän ARAn hapettumisen ehkäisemiseksi. Tässä keksinnössä termejä "lipi-diuuie", "öljy", "lipidikompleksi" ja "sieniöljy” käytetään toisiaan vastaavina termeinä, 20 Seos voidaan uutan jälkeen suodattaa biomassan poistamiseksi li- i pldiuutetta sisältävästä liuottlmesta. Tässä vaiheessa biomassa voidaan ottaa j talteen ja käyttää elintarvikkeiden lisäaineena. Tässä keksinnössä "elintarvik- j keiden lisäaine" tarkoittaa rehua tai lisäainetta, joka on määrä yhdistää tyypilii- ] seen rehuun, kuten jyviin ja muihin näitä vastaaviin materiaaleihin, joita voi- j 25 daan antaa eläimille, j
Liuotin erotetaan lipidiuutteesta ja tämä voidaan myös ottaa taiteen | käytettäväksi uudelleen, kuten käyttämällä haihdutusta sopivaan talteenottaas-tiaan, minkä jäljelle jää materiaalia, josta tässä keksinnössä käytetään nimitystä "puhdistamaton öljy". Isopropyylialkoholln käytöllä liuottimena on se haluttu 30 piirre, että se johtaa lopputulokseen, jossa Jäljellä oleva vesi saadaan poistumaan puhdistamattomasta öljystä kokonaan, koska haihtuminen poistaa spontaanisti muodostuneen veden ja tsopropyylialkoholin aseotrooppisen seoksen,
Vaikkakin puhdistamatonta öljyä voidaan käyttää ilman jatkokäsittelyä, se voidaan myös puhdistaa edelleen. Tässä ylimääräisessä puhdistusvai-35 heessa voidaan käyttää menetelmiä, kuten menetelmiä, joita käytetään lesitiinin valmistamisessa kasvistuotteista ja jotka ovat alan ammattikokemuksella 14 tunnettuja. Nämä menetelmät eivät modifioi kemiallisesti eivätkä kovalenttises-ti ARAa sisältäviä lipidejä eivätkä itse ARAa.
Saannot ovat vaihtelevia, mutta ne ovat tyypillisesti noin 5 grammaa ARAa sisältävää fosfoiipidiä 100 grammasta kuivattua myseeliä. M. alpinan 5 kyseessä ollessa voidaan saada ylimääräinen 10-50 gramman määrä tri-glyseridiä sadassa grammassa kuivaa myseeliä. Joko puhdistamatonta öljyä tai puhdistettua tuotetta voidaan käyttää annettavaksi ihmisille. Näiden kummankin on määrä sisältyä tässä keksinnössä käytettyyn termin ARASCO määritelmään.
to Tämän keksinnön avulla voidaan tuottaa lisäainetta, joka on tarkoi tettu käytettäväksi äidinmaidonvastikkeissa siten, että ARAn konsentraätio tällaisessa äidinmaidonvastikkeessa vastaa läheisesti ihmisen rintamaidon ARA-konsentraatiota. Taulukossa 2 on verrattu ARASGOn sisältämien rasvahappojen koostumusta rintamaidon sisältämien rasvahappojen koostumukseen sekä 15 äidinmäidonvastikkeeseen, josta puuttuu ja joka sisältää ARASCOa.
! 15
Taulukko 2
Sieniöijyiuotteiden ja äidinmaidon rasvahappokoostumus
Rasvahappo ARASCO Äidinmaidon- Äidin- Rintamaito vastike1 maidon vasti ke + öljy 8.0 - 24,1 23,8 0,35 10:0 - 17,7 17,3 1,39 12:0 - 14,9 14,6 6,99 14:0 4,6 5,8 5,8 7,96 16:0 16,0 6,8 7,0 19,80 16:1 3,2 0,2 0,3 3,20 18:0 - 2,3 2,3 5,91 18:1 26,4 10,0 10,3 34,82 18:2n8 9,9 17,4 17,3 16,00 18:3n3 4,1 0,9 1,0 0,62 20:1 2,2 0,1 0,14 1,10 20:2n6 - - - 0,61 j 20:3n6 1,4 - 0,03 0,42 2Ö:4n6 32,0 - 0,64 0,59 20:5n3 - - - 0,03 22:1 - - - 0,10 22:4n6 ~ - - 0,21 22:5n6 - - - 0,22 22:6n3 - - - 0,19 ä 1Simopouiis, A., Qmega-3 Fatty acids in Health and Disease pp. 115 - 156 j 5 {1990). j
Kuten voidaan havaita, on ARASCOlia täydennetyssä äidinmaidon- j vastikkeen sisältämän ARÄn määrä hyvin lähellä ihmisen rintamaidon sisältä- | miä ARÄ-pitoisuuksia. Lisäksi ARASOOn lisäys ei ole muuttanut merkittävästi j äidinmäidonvastikkeen kokonaisrasvahappokoostumusta. Voidaan käyttää ] 10 tyypillisesti noin 50-noin 100 mg ARASGOa litrassa äidinmaidonvastiketta.
Vaadittu tietty nimenomainen ARASCOn määrä on riippuvainen ARA-pitoisuudesta. Tämä voi vaihdella noin 1Q:stä noin 70 %:iin öljyn sisältämistä | rasvahapoista, ARA-pitoisuus on tyypillisesti kuitenkin 30 - 50 %. Äidin- 16 maidonvastikkeen täydentämiseen käytetty öljy sisältää edullisesti vähintään 40 % rasvahapporyhmiä ARAn muodossa, edullisemmin vähintään 50 % ARA-ryhminä. Silloin kun ARA-pitoisuus on noin 30 %, on erityisen edullinen täydentämiseen käytettävä määrä noin 6ÖQ - 700 mg ARÄSCOa litrassa äidin-5 maidonvasiiketta. Tällainen määrä laimentaa äidinmaidonvastikkeen, kuten Similac® (Ross Laboratories, Columbus, Ohio) olemassa olevia rasvakom-ponentteja ainoastaan yhdellä osalla ARASCOa viidessäkymmenessä osassa äidinmaidonvastikkeen öljyjä. ARA-pitoisuudeltaan suuremmista öljyistä voidaan laskennallisin keinoin saada selville niittä vastaavat iaimentumissuhteet.
10 ARASCO ei edullisesti sisällä olennaisesti lainkaan EPAa.
Kun edellä kuvatussa menetelmässä käytetään Pythium insi-diosumia, on uutettu ARAa sisältävä öljy pääasiassa fosfoiipidiä. Tässä keksinnössä on kuitenkin tehty se havainto, että tässä keksinnössä kuvatulia tavalla kasvatetusta P. insidiosumista voidaan myös saada talteen merkittävä 15 määrä runsaasti ARA-ryhmiä sisältävää triglyseridiä. Kun tässä menetelmässä käytetään Mortierella alpinaa, on ARAa sisältävä öljy pääasiassa triglyseridiä.
Molemmat ÄRASCÖn muodot ovat käyttökelpoisia äidinmaidonvastikkeeseen lisättävinä', lisäaineina. Edellisestä ei saada äidinmaidonvastikkeeseen ainoastaan ARAa vaan myös emulgointiainetta, toisin sanoen fosfatidyylikoliinia, jota j 20' lisätään tavallisesti kaupallisiin äidinmaidonvastikkeisiin. M. alpinasta peräisin olevan Öljyn valmistus on todennäköisesti taloudellisempaa. i Tämän keksinnön mukaisesti valmistetulla ARAa sisältävällä öljyllä j on monia käyttömuotoja sen lisäksi, että sitä käytetään lisäaineena äidin- j maidonvastikkeessa. Kuten alan ammattikokemuksen perusteella on tunnet-25 tua, liittyy ARAn puutoksiin patologisia tiloja, kuten marasmia [Vajreswari, et ai., Metabolism 39 (1990) 779-782], atooppisia sairauksia [Melnik, B., Mo-natsschr. Kinderhetlta 138 (1990) 162-166], maksasairautta, fenyyliketonuri-aa, tardiivia dyskinesiaa tai useita erilaisia peroksisomaalisia sairauksia. Näitä patologisia tiloja voidaan hoitaa antamalla potilaalle farmaseuttisesti tehokas 30 määrä tämän keksinnön mukaisesti valmistettua öljyä, Farmaseuttisesti tehokas määrä on tyypillisesti se määrä, joka tarvitaan normalisoimaan ARAn pitoisuus potilaan seerumissa. Erityisen edullisia tällaisten patologisten tilojen hoitamiseen tarkoitettaviksi täydennysravinteiksi ovat edellä kuvatut ARA-öljyt, erityisesti öljyt, joissa esiintyy vähintään 40 % ARA-ryhmiä tai edullisemmin 35 50 % ARA-ryhmiä, öljyä voidaan antaa enteraalisesti, paikallisesti tai parente-raaiisesti terveydenhoitopalvelun tuottajan valitsemalla tavalla, 17
Kapselointi;;, sellaisena kuin se on tunnettua tämän alan ammattikokemuksen perusteella, on tehokas enteraalinen annostelumeneteimä, Sieniöl-jyä sisältäviä kapseleita voidaan antaa henkilöille, jotka tarvitsevat tai jotka haluavat ruokavalionsa täydennykseksi ARAa. Tällainen menetelmä on erityisen 5 tehokas ARAn antamiseksi raskaana oleville tai imettäville naisille.
Niissä tapauksissa, joissa ARASCOa annetaan patologisiin tiloihin liittyvän ARAn puutteen torjumiseksi, on annettava farmaseuttisesti tehokas määrä. Tämä määrä on tarpeettomia kokeiluihin turvautumatta mahdollista määrittää alan ammattikokemuksen perusteella. Tämä määrä on tyypillisesti 10 0,5 -2,0 g päivässä, joka määrä normalisoi tavallisesti seerumin ARA-pitoisuuden.
Tämän keksinnön mukaisesti valmistettua ARASCOa, kuten tässä keksinnössä kuvattuja runsaasti ARAa sisältäviä öljyjä, voidaan käyttää kosmeettisissa koostumuksissa. Kosmeettiset koostumukset tarkoittavat näitä yh-15 disteitä, joita käytetään kosmeettisina aineina. Edullinen esimerkki tällaisesta koostumuksesta on ryppyvoide. Tällaiset kosmeettiset koostumukset tarjoavat tehokkaan keinon ARAn levittämiseksi paikallisesti iholle, millä on tarkoitus edistää ihon kiinteyden säilymistä.
Kun tämä keksintö on kuvattu yleisellä tasolla, esitetään seuraavat 20 sitä rajoittamattomat esimerkit sen kuvaamiseksi yksityiskohtaisemmin.
Esimerkki 1 P, insidiosumin lipidin valmistus ja lisääminen äidinmaidoiivastikkee- seen j
80 litran vetoiseen (kokonaistilavuus) fermentoriin yhdistettiin 25 51 litraa talousvettä, 1,2 kg glukoosia, 240 grammaa hiivauutetta ja 15 mi Ma- I
zu 21 OS® -vaahdonestoainetta. Fermehton steriloitiin 121 °C;ssa 45 minuuttia.
Steriloinnin kuluessa lisättiin ylimääräinen 5 litraa kondenssivettä. pH säädettiin arvoon 6,2 ja fermentoriin lisättiin noin 1 litra ymppiä (soiutiheys 5 -10 g/i),
Pythium indisiosumia (ATCC #28 251). Ravistelunopeus säädettiin arvoon 30 125 kierrosta minuutissa (roottorin kärjen nopeus 250 cm/s) ja ilmastuksen määrä asetettiin arvoon 30 litraa minuutissa [1 SCFM (standardi kuutiojalkaa minuutissa)]. Kun reaktori oli ollut käynnissä 24 tuntia, ilmastuksen määrä kohotettiin arvoon 80 litraa minuutissa (3 SCFM). Kun reaktori oli ollut käynnissä 28 tuntia, siihen lisättiin vielä 2 litraa 5ö-%:ista giukoosisiirappia (1 kg glu-35 koosia). Kun reaktori oli ollut käynnissä 50 tuntia, sen sisältö koottiin talteen, 18 mistä saatiin märkäpainoksi noin 2,2 kg (kuivapaino noin 15 g litraa kohti). Taiteen otettu biomassa puristettiin kakuksi, jonka kiintoainepitoisuus oli suuri (50 % kiintoaineita) imusuodattimeila, minkä jälkeen se kyimäkuivattiin. Kuivattu biomassa jauhettiin huhmareella ja männällä ja uutettiin 1 litralla heksaania 5 kutakin kuivan biomassan 200 grammaa kohti huoneenlämmössä seosta jatkuvasti sekoittaen kahden tunnin ajan. Tämän jälkeen seos suodatettiin ja suodos haihdutettiin, mistä saatiin noin 5 - 6 grammaa puhdistamatonta öljyä kutakin kuivan biomassan 100 grammaa kohti. Tämän jälkeen biomassa uutettiin uudelleen 1 litralla etanolia kutakin kuivan biomassan 20 grammaa kohti 10 yhden tunnin ajan huoneenlämmössä, suodatettiin ja liuotin haihdutettiin, mistä saatiin ylimääräinen 22 gramman suuruinen erä puhdistamatonta öljyä kutakin kuivan biomassan 100 grammaa kohti. Toinen fraktio oli pääasiassa fos-foltpidejä, kun taas ensimmäinen fraktio sisälsi fosfolipidien ja iriglyseridien seosta. Yhdistetystä fraktiosta saatiin öljyä, joka sisälsi noin 30 - 35 % aräki-15 donihappoa eikä lainkaan havaittavissa olevaa EPAa. Tätä Öljyä lisättiin pisa-roitiain kaupalliseen äidinmaidonvastike-tuotteeseen, SIMILAC® (Ross Laboratories, Columbus, Ohio) käyttäen täydentämiseen 60 mg:n määrää valmistetun mediumin litraa kohti. j
Esimerkki 2 j 20 M. alpina -lipidin valmistus ja lisääminen äidinmaidonvastikkeeseen j
Mortiereila alpinaa (ATGC #42 430) kasvatettiin kahden iitran ravis- j telupullossa, joka sisälsi 1 litran talousvettä ja 20 grammaa peruna-glukoosi- ! mediumia. Pulloa pidettiin ravistelussa vaakatasossa pyöriväilä liikkeellä ja sitä pidettiin 25 °C:ssa seitsemän päivän ajan. Kun biomassa oli otettu talteen 25 sentrifugoimalia, se kyimäkuivattiin, mistä saatiin noin 8 grammaa runsaasti lipidiä sisältävää myseeliä. Myseeii uutettiin käyttäen heksaania kuten estmer- j kissä 1 ja tässä oli tuloksena noin 2,4 g puhdistamatonta öljyä. Tämä öljy si- j sältää noin 23 % arakidonihappoa ja sitä lisättiin kaupalliseen Similac©- | äidinrriaidonvastikkeeseen pisaroittain konsentraatioissa 1000 mg litraa kohti. j 30 Esimerkki 3 j
Arakidonihapon tuotanto suuressa mittakaavassa M. alpinaa käyttäen j
Ymppifermentoriin, joka sisältää GYE-mediumia (50 g/i glukoosia ja j
6 g/l Tastone 154:ää) ympätään M. alpinaa. Fermentaatiölämpötila asetetaan J
arvoon 28 °C, alkuvaiheessa käytettävä ravistelu arvoon 130 - 160 cm/s, alku- j 19 vaiheessa käytettävä fermentoriastian paine 40 kParksi (6 psi:ksi) ja alkuvaiheessa käytettävä ilmastuksen määrä arvoon 0,25 WM. pH säädetään ennen sterilointia arvoon 5,0 ja fermentaatioseoksen pH säädetään fermentaation aloittamiseksi steriloinnin jälkeen arvoon 5*5. Mediumin pH pidetään arvossa 5 > 5*5 käyttämällä 8 H NaQHita. Happipitoisuus pidetään liuenneen hapen määrässä, joka on > 40 %, säätämällä ravistelua/ilmastusta seuraavassa järjestyksessä: fermentoriastian paine nostetaan arvoon 77 kPa (11 psi), raviste-lunopeutta lisätään arvoon 175 cm/s roottorin kärjen nopeutena ilmoitettuna; ja ilmastus nostetaan arvoon 0,5 WM, Vaahdon muodostuminen estetään ii-10 säämällä tarvittaessa Dow 152G-US -vaahdonestoainetta, (Mediumiin on lisättävä ennen sterilointia vaahtoamisen estämiseksi noin 0,1 ml/i vaahdohesto-ainetta).
Ymppi siirretään ymppäysfermentorista pääfermentoriin 12 tunnin kuluessa sen jälkeen kun pH on noussut arvoon 6,0 yläpuolelle.
15 Pääfermentori sisältää GYE-mediumia (50 g/l glukoosia ja 6 g/l Tas- tone 154:ää); glukoosi steriloidaan erikseen ja lisätään pääfermentoriin steriloinnin jälkeen, Fermentorin lämpötila asetetaan arvoon 28 °C, aloitettaessa käytettävä ravistelu arvoon 160 cm/s, aloitettaessa käytettävä fermentoriastian paine 40 kPa:ksi (6 psirksi) ja aloitettaessa käytettävä ilmastuksen määrä ar-20 voört 0,15 WM. Aloitettaessa käytettävä pH säädetään steriloinnin jälkeen arvoon 5,5 ja mediumin pH pidetään arvossa > 5,5 käyttämällä 8 N NaOH.ta. pH:n annetaan kohota statiönaarivaiheen aikana (tämä alkaa noin 24 tuntia ymppäyksestä) mutta se pidetään arvon 6,8 alapuolella lisäämällä H2S04:ää. Happipitoisuus pidetään liuenneen hapen arvossa, joka on > 40 %, lisäämällä 25 fermentoriastian paine vaiheittain arvoon 77 kPa (11 psi) lisäämällä sekoitus-nopeutta arvoon 175 cm/s ilmoitettuna roottorin kärjen nopeutena, ja lisäämällä ilmastusta arvoon 0,5 WM. Vaahtoaminen estetään lisäämällä tarvittaessa Dow-1520-US -vaahdonestoainetta. (Vaahdonestoainetta on lisättävä, vaahtoamisen estämiseksi mediumiin noin 0,1 ml/l).
30 Viljelmästä otetaan näytteitä joka 12. tunti biomassan ja rasvahap pojen analysoimiseksi ja talteenotto aloitetaan 3-4 päivää siitä, kun pH on noussut arvoon 6,5. Kuivan biomassan tiheyden on oltava > 8,5 g/l. Eiatusai-neen glukoosikonsentraation on pitänyt pudota arvosta 50 g/l arvoon > 25 g/l. Elatusalne käsitellään soluja taiteenotettaessa kokonaisuudessaan kuppisent-35 rifugiila myseelin erottamiseksi käytetystä mediumista ja biomassa kuivataan.
20
Esimerkki 4 M. alpinasta saatavat biomassan saannon parantaminen - ensimmäinen ajo M. alpinaa kasvatettiin sekoitettavissa 20 i säiliöfermentoreissa, jot-5 ka oli ympätty esimerkissä 3 kuvatun menetelmän mukaisesta ravistelupuifovil-jelmästä. Kun M. alpinaa kasvatettiin mediumissa joka sisälsi 65 g/1 glukoosia (Staleydex) ja 6 g/l hiivauutetta (Tastone 154), saatiin biomassaa muodostumaan 12 g/i. Kun 16 tunnin kohdalla lisättiin vielä 6 g/l Tastonel 54:ää, saatiin biomassaa muodostumaan 18 g/l.
to Esimerkki 5 M. alpinasta saatavan biomassan saannon parantaminen - toinen ajo
Suoritettiin kokeita, joilla tähdättiin biomassan lisäämiseen vielä tästäkin lisäämällä uutta Tastonel 54:ää. Nämä kokeet koostuivat 2 x 20" I fermen- \ taaiioseoksista, joissa sieniä pidettiin 168 tuntia. Molempien näiden fermen- j 15 taatioiden kyseessä ollessa oli giukoosikonsenfraatio fermentaatiota aloitetta- j essa 100 g/i (verrattuna esimerkin 4 mukaiseen konsentraatioon 65 g/i). Yhteen fermentoriin lisättiin Tastonel 54:ää lisäyksinä, joiden määrä oli 3 x 6 g/i ja toiseen lisättiin lisäyksiä, joiden määrä oli 4x6 g/i. Hiivauutteesta valmistettiin konsentroitu liuos, tämä autoklavoitiin ja lisättiin fermentoriin useina eri 20 ajankohtina steriloinnin jälkeen.
Ympirr valmistamiseksi ympättiin käyttöymppejä (working seeds) j (1 ml maseroituä myseeliä) kahteen pulloon, joista kumpikin sisälsi 50 ml \ GYE-mediumia (100 g/l Staleydexia ja 6 g/l Tastonel 54:ää) ja viljelmiä kasva- j tettiin 4 päivän ajan 28 °G:ssa ja nopeudella 150 kierrosta minuutissa. |
25 4 päivän kasvatuksen jälkeen eiatusaine sisälsi rakeistunutta biomassaa; rakeet olivat iäpimitaitaan 2 - 5 mm. Kasvu oli näissä pulloissa oletettua hitaam- I
paa mahdollisesti siitä syystä, että glukoosin konsentraatio ofi suurempi. Biomassaa maseroitiin 2 x 3 sekunnin ajan Waring-sekoittimessa ja kumpaankin kahdesta 2,8 l:n Fehrnbach-ymppäyspuliosta, joiden nettotilavuus oli 800 ml, 30 lisättiin 25 m! maseraattia. pikaisemmissa kokeissa oli käytetty 10 ml mase- ij raattia. Ympin määrää suurennettiin, koska ymppäyspuliossa käytettiin pie- j nempää biomassan tiheyttä ja koska suuremman glukoosikonsentraation | vuoksi kasvun Fehrnbaeh-pulloissa odotettiin olevan hitaampaa). Fehrnbaeh- ] pullojen medium oli glukoosi (Staleydex) 100 g/l ja hiivauute (Tastone154), 35 8 g/l. Glukoosi ja hiivauute autoklavoitiin erikseen 40 minuutin ajan. Ymppifer-
S
j 21 mentaation lämpötila pidettiin 28°C:ssa ja ravisteiunopeus oli 1ÖÖ-150 kierrosta minuutissa.
Fehrnbach-puiioissa suoritetun 44 tunnin kasvatuksen jälkeen ymp-pi siirrettiin kahteen 20 litran fermentoriin. Ymppi oli erittäin irtonaisten hyyfiag-5 gregaattien muodossa ja biomassan tiheys oli noin 5,2 g/f.
Asemissa 14 ja 15 sijaitsevat fermentorit, jotka sisälsivät 1,6 kg (10 %) glukoosia (StaJeydex), ja Mazu 204 -vaahdonestoainetta (1,6 g liuotettuna 12,5 litraan RO-HsOda), steriloitiin 45 minuuttia 122 °C:ssa. Tämän jälkeen kumpaankin fermentoriin lisättiin (tunnin 0 kohdalla) 800 ml ymppiä 10 (5 %). Fermentörin käyttömuuttujat olivat: Lämpötila 28 °C,
pH; tämä oli säädetty arvoon 5,5 käyttäen 2 N NaOH:ta ja 2 N
HaSQ^ää,
Ilmastus: 0,5 VVM, 15 Vastapaihe: 20 kPa (0,2 baaria)
Ravisteiunopeus (aluksi): 80 cm/s, ja liuenneen hapen määrä: tämä säädeltiin arvoon, joka oli yli 40 %.
Asema 14: 3 x 6 g/! Tastone 154:ää
HiivauUtetta (Tastone 154:ää) liuotettiin konsentfaatioon 96g/l ja 20 tämä autoklavoitiin 1 tunnin ajan. Hiivauutesyötteet, joita käytettiin 3 X 1 I suuruisia määriä (1,8 %), lisättiin 0., 20. ja 26. tunnin kohdalla. \ 15. tunnin kohdalla liuenneen hapen määrä laski alle 40 %:iin ja ra- j visteiunopeutta lisättiin vähitellen arvoon 175 cm/s aikavälillä 15 - 22 tuntia. \ Tämän jälkeen liuenneen hapen määrää säädettiin lisäämällä ilmavirtaan hap- \ 25 pea; happea lisättiin ilmavirtaan aikavälillä 23 - 72 tuntia. Ravistelunopeutta li- j sättiin vielä 36 tunnin kohdalta alkaen sen varmistamiseksi, että sisältö sekoittui kUnnollä. 48 tuntiin mennessä oli ravistelunopeutta lisätty arvoon 200 cm/s; | 72 tuntiin mennessä arvoon 250 cm/s ja 80 tuntiin mennessä arvoon i 280 cm/s. 120. tunnin kohdalla ravisteiunopeus nostettiin arvoon 290 cm/s, jot- | 30 ta lämpötilaa olisi saatu säädettyä kunnollisesti. 144. tunnin kohdalla ravistelu- j nopeus laskettiin arvoon 280 cm/s. j
Asema 15:4 x 6 g/l Tastone 154:ää
Hiivauutetta (Tastone 154), jota käytettiin 384 g, liuotettiin konsent-raatioon 96 g/i ja tätä autoklavoitiin 1 tunnin ajan. Hiivauutteen lisäykset, joiden 35 määrät olivat 4.x 11, (2,4 %), tehtiin 0., 20., 26. ja 32. tunnin kohdalla.
22
Liuenneen hapen määrä laski 16 tunnin kohdalla alle 40 %:iin ja ra-vistelunopeus nostettiin 23. tuntiin mennessä vähitellen arvoon 175 cm/s. Tämän jälkeen liuenneen hapen määrää säädettiin yli 40 %:ksi lisäämällä ilmavirtaan happea; happea lisättiin ilmavirtaan aikavälillä 23 - 72 tuntia. Ravistelu-5 nopeutta lisättiin vielä 36 tunnin kohdalta alkaen sen varmistamiseksi, että sisältö sekoittui kunnolla. 48 tuntiin mennessä oli ravistelunopeus nostettu arvoon 210 cm/s; 72 tuntiin mennessä arvoon 260 cm/s ja 80 tuntiin mennessä arvoon 290 cm/s. 90 tunnin kohdalla ravistelunopeus laskettiin arvoon 280 cm/s ja 144 tunnin kohdalla ravistelunopeus laskettiin arvoon 260 cm/s.
10 Havainnot:
Molemmissa fermentoreissa oleva biomassa oli ympättäessä erittäin irtonaisten hahtuvaisten hyyfiaggregaattien muodossa. Rakeita alkoi muodostua 24 tuntiin mennessä. Rakeet olivat pieniä (1-3 mm) ja ne sisälsivät pienen keskusytimen ja suuren irtonaisen ääriosan. 48 tunnin kohdalla rakeet 15 olivat suurempia ja ne olivat tarkkarajaisempia. 72 tunnin kohdalla ääriosat olivat kapeampia ja monet irralliset hyyfifragmentit osoittivat, että rakeet olivat fragmentoitumassa. 168 tuntiin mennessä olivat rakeiden ytimet läpimitaltaan 0,5 - 2 mm, ääriosat olivat kaventuneet ja hyyfit aggregoitumassa paksuiksi i säikeiksi, ja esiintyi monia kondensoituneita hyyfiaggfegaatteja. j 20 Fermentoreissa esiintyi erittäin vähäistä vaahtoamista ensimmäis ten 24 tunnin aikana. Tämän jälkeen vaahtoaminen lisääntyi ja se estettiin lisää m ällä käsin vaahdonestoainetta yaahtokerroksen korkeuden noustessa yli 2 - 4 cm. Vaahtoaminen heikkeni jonkin verran 48 tuntiin mennessä vaikkakin Sitä esiintyi ajoittain. Vaahtoamista ulostulosuodattimiin esiintyi kummassakin 25 fermentorissa ainoastaan kerran näiden fermentaatioiden aikana. Fermentaa-tioihin tarvittiin noin 150 ml vaahdonestoainetta.
Molempien fermentorien nestepatsaan päälle kertyi huomattava määrä yhteen tarttunutta biomassaa. Tämä ei ole harvinainen ongelma fer-mentoitaessa myseefejä pienissä fermentoreissa, joiden pinta-alan ja iilavuu-30 den suhde on suuri. Yhteen tarttuneen biomassan määrä asemassa 15 näytti lisääntyvän ensimmäisten 24 tunnin aikana, kun pienestä tilavuudesta oli seurauksena huomattavaa räiskymistä (nestepinta laski lähelle ylintä roottoria).
Lopullinen tilavuus fermentorissa 168 tunnin jälkeen oli noin 13 litraa.
Mikroskoopilla tarkasteltaessa elätusaineessa osoittautui esiintyvän 35 72 tuntiin mennessä paljon jätettä ja jonkin verran merkkejä vaurioituneista ja atrofioituneista sienten kärjistä oli havaittavissa. Sytoplasman osoitettiin sisäl- 23 tävän öljypisaroita 168 tunnin kohdalla suoritettua niilinpunavärjäystä käyttämällä. Öijypisarat olivat erittäin pieniä ja lukuisia, mistä poiketen havaittiin toisinaan suuria öljypisaroita, Biomassan ja öljyn saanto sekä hiilen ja typen hyväksikäyttö on esitetty taulukossa 3.
5 Taulukko 3
Fermentaation eteneminen ajan suhteen Asema 14 3 X 6 g/l hiiva uutetta
Loki- Glukoosi NHs Kuiva- Öijypitoi- ARA- Tuotanto- tunti paino suus pitoisuus kyky (g/l) (mM) (g/l) (kuivapa]- (% öljyä) (g öljyä/i no-%) päivässä) 0 105,0 3,0 0,4 24 97,4 5,9 3,3 4,8 % 23,5 % 0,16 48 73,7 0 18,3% 7,9% 23,4% 0,72 72 60,3 0 21,0 14,4% 25,4 % 1,01 96 48,0 0 22,3 18,3% 27,5% 1,02 120 40,0 25,2 21,1 % 29,4 % 1,06 | 144 34,7 26,6 21,8 % 30,9 % 0,97 168 29,0 27,5 26,1 % 31,3% 1,03
Asema 15 4 x 6 g/l hiivauutetta
Loki- Glukoosi NH3 Kuiva- Öijypitoi- ARA- Tuotanto- tunti paino suus pitoisuus kyky (g/l) (mM) (g/l) (kuivapai- (% öljyä) (göljyä/l no-%) päivässä) 0 109,0 2,9,1 0,4 24 103,0 5,1 3,4 4,3 % 21,9 % 0,15 48 74,1 0,3 23,6 6,8% 23,1% 0,80 72 51,4 0 29,8 10,3% 23,9% 1,02 96 40,0 0 32,7 120 27,9 31,7 18,2% 26,6% 1,15 144 19,8 33,5 20,7% 28,1% 1,16 168 11,0 29,9 21,7% 29,9% 0,93 24
Esimerkki 8 M. alpinasta peräisin olevan biomassan saannon parantaminen - kolmas ajo Tällä koesarjalla yritettiin lisätä edelleen muodostuneen tuotteen 5 määrää lisäämällä fosfaatin ja mineraalien pitoisuuksia. Menettely oli olennaisesti samanlaista kuin mitä käytettiin esimerkissä 5, lukuunottamatta sitä, että glukoosi ja Mazu 204 -vaahdonestoaine liuotettiin 12,5 i:n sijaan 11,5 l:aan R0-H20:ta tilan jättämiseksi suolaliuoksille, jotka lisättiin 30. tunnin kohdalla.
Asemaan 14 lisättiin ylimääräinen määrä Fe:tä, Zn:ää ja Cu:ta; asemaan 15 10 lisättiin ylimääräinen määrä fosfaattia sekä Fe:tä, Zn:ää ja Cu:ta.
Asema 14: 3 x 6 g/l TastQne154:ää
Hiivauute liuotettiin 3 x 1 i:n suuruisissa erissä konsentraatioon 96 g/l ja äuiokiavöitiin 1 tunnin ajan. Yhden litran eriä hiivauuteliuosta lisättiin 0., 22. ja 28. tunnin kohdalla. Hiilidioksidin muodostumisnopeus (CER, fermen-15 torissa olevaa metabolianopeutta osoittava suure) lisääntyi eksponentiaalisesti 22. ja 28. tunnin kohdalla ja fermentaatioseos oli juuri alkanut tarvita emästä.
Syötteenä käytetyt suolat sisälsivät:
FeCI?, 6 H20:ia 480 mg
ZnS04 7H2Ö:ta 240 mg
20 CuS04 5 H20:ta 16 mg I
FeC!3 liuotettiin 1 litraan sitruunahappoa, jonka konsentraatio oli j 5 g/l. Jäljellä olevat suolat lisättiin ja pH säädettiin arvoon 4,5 NaÖHJIa. Syöt- j teenä käytetyt suolat lisättiin 30. tunnin kohdalla.
Fermentorin ravrstelunopeus oli alussa 50 em/s alun perin suunhi-25 teliun arvon 80 cm/s sijaan, koska fermentorin sisältämän nesteen lähtötaso (131) johti siihen, että ylin roottori oli juuri ja juuri pinnan alla, ja suuremmasta ravistelunopeudesta oli tuloksena merkittävästi enemmän räiskymistä. Liuenneen hapen pitoisuus laski 16. tunnin kohdalla alle 40 %:iin ja ravistelu nopeutta lisättiin vähitellen arvoon 175 cm/s 28. tuntiin mennessä* Tämän jälkeen 30 liuenneen hapen määrää säädettiin yli 40 %:ksi lisäämällä ilmavirtaan happea. Ravistelunopeutta lisättiin vielä 48 tunnin kohdalla sen mahdollistamiseksi, että sisältö sekoittui. 48 tuntiin mennessä oli ravisielunopeus nostettu arvoon 200 cm/s; 51 tuntiin mennessä arvoon 220 cm/s ; 53 tuntiin mennessä arvoon 235 cm/s ; 56 tuntiin mennessä arvoon 250 cm/s ; 57 tuntiin mennessä arvoon 35 260 cm/s ja 70 tuntiin mennessä arvoon 280 cm/s. Sekoittuminen oli heikkoa 25 vieläpä tällä sekoitusnopeudella (450 kierrosta minuutissa). Vaikkakin oli mahdollista pitää yllä mimmikriteeriä "jonkin verran liikettä", oli biomassan kiertyminen erittäin hidasta, ja jotkin alueet olivat lähellä pysähtymistä. Muutaman vaahdonestoainepisaran lisääminen pienensi liuoksen päällä olevan vaahdon 5 määrää ja poisti paikallaan pysyvät taskut. Ravistelunopes alennettin 116. tunnin kohdalla arvoon 265 cm/s ja se alennettiin edelleen 120. tunnin kohdalla arvoon 250 cm/s.
Fermentori alkoi vaahdota noin 18. tunnin kohdalla. Vaahtöaminen estettiin lisäämällä vaahdonestoainetta käsin. Vaahdonestoainetta lisättiin en-10 sin 20. tunnin kohdalla. Fermentaatioseos vaahtosi merkittävästi 24. tuntiin mennessä ja siihen oli tarpeellista lisätä säännöllisesti vaahdonestoainetta. Vaahtöaminen oli suurimmaksi osaksi lakannut 72. tuntiin mennessä. Fermen-täatio vaati kuitenkin ajoittaista vaahdönestoaineen lisäämistä.
Biomassa oli 24. tuntiin mennessä erittäin irtonaisten rakeiden (1 -15 2 mm) ja irtonaisten hyyfiaggregaattien muodossa. Esiintyy huomattavasti so- lujätettä. Biomassa oli 48. tuntiin mennessä erittäin irtonaisien hyyfiaggregaattien muodossa, ytimiitään hyvin pienten ja ääriosiltaan irtonaisten erittäin pienten rakeiden (1 - 2 mm) ja sellaisten pienten kompaktien rakeiden (1 - 3) muodossa, joissa ei esiintynyt irtonaisia ääriosia. 96. tuntiin mennessä biomassa 20 oli kompaktien pyöreiden rakeiden (1 - 2 mm), neulämaisten rakeiden (alle 0,5 mm) ja irtonaisten hyyfiaggregaattien muodossa. 144. tunnin kohdalla suoritettu niilinpunavärjäys osoitti, että myseeleissä esiintyi erittäin pieniä öljy-pisaroita.
Asema 15: 3x6 g/iTastone154:ää 25 Hiivauute liuotettiin konsentraatioon 96 g/l ja tätä autoklavoitiin 1 tunnin ajan. Hiivauuteliuosta lisättiin 3 x 1 l:n suuruisina määrinä 0., 22. ja 26. tunnin kohdalla. CER lisääntyi eksponentiaalisesti 22- 26 tunnin kohdalla ja fermentaatioseos alkoi juuri vaatia emäslisäystä,
Valmistettiin syötettävä suolaseos, joka sisälsi: 30 KH2P04:ää 77 g
FeCta 6H2Ö:ta 480 mg
ZhS04 7Η20:Ι3 240 mg
GuS04 5 H2G:ta 16 mg
FeCI3 liuotettiin 1 l.aan sitruunahappoa, jonka konsentraatio oli 5 g/l. 35 KH2P04 liuotettiin 500 ml:aan RÖ-vettä. Molempia liuoksia autoklavoitiin 26 1 tunnin ajan, minkä jälkeen ne jäähdytettiin 23 °C:seen, ja ne yhdistettiin.
Tämän jälkeen ne lisättiin fermentoriin 30. tunnin kohdalla.
Fermentorin ravistelunopeus oli alussa 50 cm/s alun perin suunnitellun arvon 80 cm/s sijaan, koska fermentorin sisältämän nesteen lähtötaso 5 (131) johti siihen, että ylin roottori oli juuri ja juuri pinnan alla ja suurempi ravis-telunopeus olisi johtanut merkittävästi voimakkaampaan räiskymiseen. Liuenneen hapen pitoisuus laski 16, tunnin kohdalla 40 % alapuolelle ja ravistelunopeus nostettiin 27 tuntiin mennessä vähitellen arvoon 175 cm/s. Tämän jälkeen liuenneen hapen määrää säädettiin yli 40 %;ksi lisäämällä ilmavirtaan 10 happea. Ravistelunopeutta lisättiin 41 tunnin kohdalla sen mahdollistamiseksi, että sisältö sekoittui vähintään minimaalisesti, 42 tuntiin mennessä oli ravistelunopeutta nostettu vielä arvoon 220 cm/s; 46 tuntiin mennessä arvoon 230 cm/s ; 51 tuntiin mennessä arvoon 235 cm/s ja 70 tuntiin mennessä arvoon 240 cm/s. Sekoittuminen oli tältä sekoitusnopeudella (410 kierrosta mi-15 nuutissa) heikosta kohtalaiseen. Sekoitus piti yllä ainoastaan mahdollisimman | pientä biomassan liikettä. Sekoitusnopeus laskettiin 80. tunnin kohdalla arvoon j 205 cm/s.
Fermentori alkoi vaahdota noin 18 tunnin kohdalla. Vaahtoaminen estettiin lisäämällä vaahdonestoainetta käsin. Vaahdonestoainetta lisättiin ensi 20 17 tunnin kohdalla. Fermentaatioseos vaahtosi merkittävästi 20. tuntiin men nessä ja siihen oli tarpeellista lisätä vaahdonestoainetta säännöllisesti. Vaahtoaminen oli lakannut suurimmaksi osaksi 72. tuntiin mennessä. Fermentaatioseos vaati silti ajoittaista vaahdonestoaineen lisäämistä. \
Biomassa oli 24. tuntiin mennessä erittäin irtonaisten rakeiden (1 - j 25 2 mm) muodossa ja irtonaisten hyyfiaggregaattien muodossa. Esiintyi huomattava määrä solujätettä. Biomassa 48. tuntiin mennessä muodossa, joka sisälsi erittäin irtonaisia hyyfien aggregaatteja, ytimiitään hyvin pieniä ja ääriosiltaan irtonaisia erittäin pieniä rakeita (1 - 2 mm) sekä pieniä kompakteja rakeita (1 - f 3), joissa ei ollut irtonaisia ääriosia. 96. tuntiin mennessä biomassa oli muö- f 30 dossa, jossa esiintyi pyöreitä rakeita, joiden läpimitta oli 1 - 2 mm ja joista mo- j nissa esiintyi irtonaisia karvamaisia ääriosia, sekä monia irtonaisia hyyfien | fragmentteja. 144. tunnin kohdalla suoritettu niilinpunavärjäys osoitti, että jois- ] sakin myseeleissä esiintyi monia hyvin pieniä öijypisaroita ja muissa mysee- j ieissä esiintyi kauttaaltaan myöskin hyvin suuria öijypisaroita. ] 35 Asemassa 15, joka poikkesi asemasta 14 ainoastaan sen perus teella, että tähän oli lisätty fosfaattia, havaittiin sekoittumisen olevan parempaa 27 koko fermentaation ajan, tavallisesti pienemmillä sekoitusnopeuksilla. Aseman 15 biomassan morfologia oli myös "irtonaisempaa". Biomassa-ja öljysaanto sekä hiilen hyväksikäyttö on esitetty taulukossa 4. Suuremman fösfaattipitoi-suuden sisältävälle fermentorille oli luonteenomaista, että glukoosin hyväksi-5 käyttö oli suurempaa (aseman 15 kyseessä ollessa; 82 g/l verrattuna aseman 14 kyseessä ollessa saatuun arvoon 64 g/l), suurempi biomassan kerääntyminen ja suurien öijypisaroiden esiintyminen osissa myseelejä.
Taulukko 4
Fermeniaation eteneminen ajan suhteen
Asema 14 + suolat
Lokitunti Glukoosi Kuivapa t- Öijypitoi- ARA- Tuotanto- no suus pitoisuus kyky (g/!) (g/i) (kuivapai- (öfjy-%) (g öljyä/l no-%) päivässä) 0 116,0 1,1 24 101,0 1,8 1,2 % 22,2 % 0,02 48 84,0 14,3 6,2 % 24,7% 0,44 72 60,0 24,5 10,6 % 24,2 % G,87 96 45,0 28,2 15,5% 25,3% 1,09 120 34,0 28,9 18,1 % 26,6% 1,05 144 27,0 30,8 20,8 % 27,2 % 1,07
Asema 15 + suolat + fosfaatit
Lokitunti Glukoosi Kuivapai- Öijypitoi- ARA- Tuotanto- j no suus pitoisuus kyky j (g/i) (g/l) (kuivapa!- (öljy- %) (g öljyä/l | no-%) päivässä) j 0 113,0 0,4 | 24 101,0 2,1 1,1 % 24,0% 0,02 | 48 74,0 21,7 8,1 % 24,7 % 0,88 72 51,0 26,2 19,9% 26,5% 1,74 96 31,0 30,1 25,5 % 28,6 % 120 18,0 33,8 31,7% 31,4% 2,14 144 6,0 34,5 36,0 % 32,9 % 2,07 28
Taulukko 5 M, aipina -fermentaation eteneminen
Kasvatusmediumit = glukoosi (80 g/l) + soijajauho (16 g/l) + suolat + vitamiinit iökiiunti Glukoosi NH3 Kuivapai- Öljypitoi- ARA- Tuotanto- (g/l) (mM) no suus pitoisuus kyky (g/l) (kuivapai- (öljy-%) g öijyä/l no-%) päivässä 0 58,0 66 43,0 12,6 14,9 % 33,7 % 0,68 94 33,0 17,0 27,0 % 40,0 % 1,17 118 23,0 20,6 28,2 % 42,6 % 1,18 142 16,0 17,1 39,2% 44,2 % 1,13 165 9,6 21,5 41,5% 45,5% 1,30 188 5,2 19,8 41,7% 47,3 % 1,05 215 1,7 23,2 46,0% 48,9% 1,19 237 0,2 23,1 44,8% 51,2% 1,05
Taulukko 6 5 AIE» aipina -fermentaation eteneminen
Kasvatusmediumit - glukoosi (65 g/L) + soijajauho (16 g/!) + suolat + vitamiinit + antibiootit
Glukoosi NH3 Kuivapai- Öljypitoi- ARA- Tuotanto- (g/i) (mM) no suus pitoisuus kyky (g/l) (kuivapai- (öijy-%) g öljyä/i no-%) päivässä 0 65 36,0 13,0 8,2 % 29,0% 0,39 90 23,0 12,0 18,0 % 42,0% 0,58 115 15,0 14,0 30,0% 47,0% 0,88 139 9,0 15,0 32,0 % 51,0% 0,83 171 4,0 17,0 36,0% 55,0% 0,86 209 1,4 12,0 36,0% 57,0% 0,50 243 0 14 37,0% 60,0 % 0,51 187 0 13 34,0 % 64,0% 0,57

Claims (8)

29
1. Arakidonihappoa sisältävän öljyn valmistusmenetelmä, joka mainittu öljy sisältää triglyseridejä, jolloin vähintään 25 % rasvahapporyhmistä on 5 arakidonihappoa (ARA) ja öljyn sisältämien eikosapentaeenihapporyhmien (EPÄ) määrä ei ylitä viidesosaa arakidonihapporyhmien määrästä, tunnet-t u siitä, että menetelmä käsittää sen, että (a) kasvatetaan Mortierelia alpinaa elatusainetta sisältävässä ilmastetussa fermentorissa kuivan biomassan tiheyteen vähintään 24 g/i; ja 10 (b) kootaan biomassa talteen fermentorista ja otetaan mainittu ara kidonihappoa sisältävä öljy taiteen mainitusta biomassasta.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu kasvatusvaihe käsittää lisäksi elatusaineen sisältämän liuenneen hapen pitoisuuden pitämisen biomassan kasvatuksen aikana 40 %:ssa tai 15 suurempana ilman kyliäisyystasoon verrattuna.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu kasvatusvaihe käsittää lisäksi sen, että elatusaine sisältää hiilen lähdettä määrän, joka vastaa 80 g/i tai enemmän glukoosia, ja typen lähdettä määrän, joka vastaa 16 g/l tai enemmän hiivauutetta.
4. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kasvatusvaihe käsittää kasvattamisen elatusaineessa, joka sisältää typen lähteenä soijajauhoa.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että elatusaineeseen lisätään soijajauhoa määrä, jolla aikaansaadaan korke- 25 ampi typpitaso kuin 15 g/l hiivauutteelia aikaansaatu typpitaso.
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että elatusaine sisältää lisäksi hiiiipitoista ravinneita määrän, jolla aikaansaadaan elatusaineeseen hiilen ja typen suhde > 5:1.
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, 30 että elatusaineeseen lisätään soijajauhoa noin 16 g/l.
8. Patenttivaatimuksen 7 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että elatusaine sisältää lisäksi vähintään 80 g/l glukoosia. 30
FI20060617A 1995-01-03 2006-06-26 Menetelmä arakidonihapon valmistamiseksi FI120648B (fi)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/367,881 US5658767A (en) 1991-01-24 1995-01-03 Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
US36788195 1995-01-03
PCT/US1996/000182 WO1996021037A1 (en) 1995-01-03 1996-01-03 Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
US9600182 1996-01-03

Publications (2)

Publication Number Publication Date
FI20060617A FI20060617A (fi) 2006-06-26
FI120648B true FI120648B (fi) 2010-01-15

Family

ID=23449013

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI972829A FI117442B (fi) 1995-01-03 1997-07-01 Arakidonihappo ja menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö
FI20060617A FI120648B (fi) 1995-01-03 2006-06-26 Menetelmä arakidonihapon valmistamiseksi

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI972829A FI117442B (fi) 1995-01-03 1997-07-01 Arakidonihappo ja menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö

Country Status (19)

Country Link
US (1) US5658767A (fi)
EP (5) EP0800584B1 (fi)
JP (6) JP4014219B2 (fi)
KR (6) KR20080068761A (fi)
CN (4) CN102399831A (fi)
AT (1) ATE239088T1 (fi)
AU (1) AU713567B2 (fi)
BR (1) BR9607179B1 (fi)
CA (1) CA2209513C (fi)
DE (2) DE69627816T2 (fi)
DK (1) DK0800584T3 (fi)
EA (1) EA001036B1 (fi)
ES (1) ES2197233T3 (fi)
FI (2) FI117442B (fi)
HK (1) HK1085768A1 (fi)
NO (1) NO320117B1 (fi)
PL (1) PL187694B1 (fi)
PT (1) PT800584E (fi)
WO (1) WO1996021037A1 (fi)

Families Citing this family (177)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5340742A (en) * 1988-09-07 1994-08-23 Omegatech Inc. Process for growing thraustochytrium and schizochytrium using non-chloride salts to produce a microfloral biomass having omega-3-highly unsaturated fatty acids
US20060094089A1 (en) * 1988-09-07 2006-05-04 Martek Biosciences Corporation Process for the heterotrophic production of microbial products with high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US5583019A (en) 1995-01-24 1996-12-10 Omegatech Inc. Method for production of arachidonic acid
EP0831805A1 (en) * 1995-06-07 1998-04-01 Martek Biosciences Corporation Methods for controlling highly unsaturated fatty acid content in various tissues
DK2260716T3 (da) † 1996-03-26 2014-05-12 Dsm Ip Assets Bv Sen tilsætning af PUFA ved fremstillingsproces for formulering til spædbørn
US6428832B2 (en) * 1996-03-26 2002-08-06 Dsm N.V. Late addition of PUFA in infant formula preparation process
US20030143659A1 (en) * 1996-03-28 2003-07-31 Hendrik Louis Bijl Process for the preparation of a granular microbial biomass and isolation of a compound thereform
JP3995290B2 (ja) * 1996-08-23 2007-10-24 サントリー株式会社 オメガ９系高度不飽和脂肪酸及びそれを含有する脂質の製造方法
JP3792309B2 (ja) 1996-08-30 2006-07-05 サントリー株式会社 不飽和脂肪酸含有油脂の製造方法
JP4633204B2 (ja) * 1996-10-11 2011-02-16 サントリーホールディングス株式会社 アラキドン酸含有食用油脂およびそれを含有する食品
ES2446982T3 (es) 1996-12-27 2014-03-11 Suntory Holdings Limited Medios para cultivar microorganismos y método para producir ácidos grasos insaturados o lípidos que los contienen
PT970236E (pt) * 1997-02-20 2006-08-31 Dsm Ip Assets Bv Producao fermentativa de compostos valiosos a escala industrial utilizando meios quimicamente definidos
US6080787A (en) * 1997-02-21 2000-06-27 Abbott Laboratories Methods for reducing the incidence of necrotizing enterocolitis
CN1200701C (zh) 1997-02-21 2005-05-11 艾博特公司 降低坏死性小肠结肠炎发生率的组合物
EP2175031A3 (en) * 1997-03-04 2010-07-07 Suntory Holdings Limited Process for preparing highly unsaturated fatty acid and lipid containing highly unsaturated fatty acid
US5972664A (en) 1997-04-11 1999-10-26 Abbott Laboratories Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids
US7745694B1 (en) 1997-04-11 2010-06-29 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for synthesis of long chain polyunsaturated fatty acids in plants
US5968809A (en) 1997-04-11 1999-10-19 Abbot Laboratories Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids
US5948413A (en) * 1997-07-17 1999-09-07 Board Of Trustees Operating Michigan State University Method and vaccine for treatment of pythiosis insidiosi in humans and lower animals
ATE230935T1 (de) * 1997-07-22 2003-02-15 Nestle Sa Lipidzusammensetzung für säuglingsnährpräparat und herstellungsverfahren
GB9802561D0 (en) * 1998-02-07 1998-04-01 Zeneca Ltd Mortierella
US20070141181A1 (en) 1998-02-13 2007-06-21 Nutramax Laboratories, Inc. Use of anabolic agents, anti-catabolic agents, antioxidant agents, and analgesics for protection, treatment and repair of connective tissues in humans and animals
US6797289B2 (en) 1998-02-13 2004-09-28 Nutramax Laboratories, Inc. Use of anabolic agents, anti-catabolic agents, antioxidant agents, and analgesics for protection, treatment and repair of connective tissues in humans and animals
US6451771B1 (en) 1999-02-12 2002-09-17 Nutramax Laboratories, Inc. Use of anabolic agents anti-catabolic agents and antioxidant agents for protection treatment and repair of connective tissues in humans and animals
KR20010052854A (ko) † 1998-06-17 2001-06-25 윌리암 로엘프 드 보에르 해사료용 미생물유래 아라키돈산(ａｒａ)
JP2000069987A (ja) * 1998-08-28 2000-03-07 Suntory Ltd アラキドン酸含有脂質並びにジホモ−γ−リノレン酸含有脂質の製造方法
WO2000020603A1 (en) * 1998-10-05 2000-04-13 Abbott Laboratories Altered fatty acid biosynthesis in insect cells using delta five desaturase
JP2002527387A (ja) † 1998-10-15 2002-08-27 デーエスエム・ナムローゼ・フェンノートシャップ Ｐｕｆａサプリメント
US6166231A (en) * 1998-12-15 2000-12-26 Martek Biosciences Corporation Two phase extraction of oil from biomass
GB9901808D0 (en) * 1999-01-27 1999-03-17 Scarista Limited Drugs for treatment of psychiatric and brain disorders
GB9916537D0 (en) 1999-07-14 1999-09-15 Univ Hull Culture of microorganisms for the synthesis of a polyunsaturated fatty acid
EP2302065A1 (en) 2000-01-19 2011-03-30 Martek Biosciences Corporation Solventless extraction process
EP2341127B1 (en) * 2000-01-28 2015-05-27 DSM IP Assets B.V. Enhanced production of lipids containing polyenoic fatty acids by high density cultures of eukaryotic microbes in fermentors
US6495599B2 (en) 2000-04-13 2002-12-17 Abbott Laboratories Infant formulas containing long-chain polyunsaturated fatty acids and uses therof
EP1780283A1 (en) 2000-04-21 2007-05-02 Martek Biosciences Corporation Trophic conversion of obligate photographic algae through metabolic engineering
DK1276885T3 (da) 2000-04-21 2007-10-15 Martek Biosciences Corp Trofisk omdannelse af obligate fototrofe alger ved metabolisk teknik
GB0016045D0 (en) * 2000-06-29 2000-08-23 Laxdale Limited Therapeutic combinations of fatty acids
EP1178103A1 (en) * 2000-08-02 2002-02-06 Dsm N.V. Purifying crude pufa oils
EP1178118A1 (en) * 2000-08-02 2002-02-06 Dsm N.V. Isolation of microbial oils
GB2377455A (en) * 2001-02-09 2003-01-15 Univ Hull Method of culturing crypthecodinium cohnii
CN101037641B (zh) 2001-07-02 2011-07-27 三得利控股株式会社 含有含多不饱和脂肪酸的甘油三酯的油或脂肪的生产方法
JP2003048831A (ja) * 2001-08-02 2003-02-21 Suntory Ltd 脳機能の低下に起因する症状あるいは疾患の予防又は改善作用を有する組成物
AU2002341453B2 (en) * 2001-10-19 2006-11-30 Vita Power Limited A foodstuff supplement and method of producing same
US7311838B2 (en) 2001-11-13 2007-12-25 Metanomics Gmbh & Co. Kgaa Method for the extraction and analysis of contents made from organic material
JP4647212B2 (ja) 2001-12-12 2011-03-09 マーテック バイオサイエンシーズ コーポレーション 脂肪種子および微生物供給源からの脂質の抽出および脱ろう
JP4330997B2 (ja) 2001-12-19 2009-09-16 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． チキン風味を有する組成物、その使用及び製造
US7211656B2 (en) * 2002-01-30 2007-05-01 Abbott Laboratories Desaturase genes, enzymes encoded thereby, and uses thereof
JP4088097B2 (ja) * 2002-04-26 2008-05-21 サントリー株式会社 高度不飽和脂肪酸含有脂質の製造方法
EP2368445A1 (en) 2002-06-18 2011-09-28 Martek Biosciences Corporation Stable Emulsions of Oils in Aqueous Solutions and Methods for Producing Same
DE60325590D1 (de) * 2002-06-19 2009-02-12 Dsm Ip Assets Bv Pasteurisationsverfahren für mikrobielle zellen und mikrobielles öl
ES2812475T3 (es) * 2002-06-19 2021-03-17 Dsm Ip Assets Bv Preparación de aceite microbiano que contiene ácidos grasos poliinsaturados
EP2345738A1 (en) * 2002-08-05 2011-07-20 Quanta Biosciences, Inc. Improved compositions for in vitro amplification of nucleic acids
ATE407190T1 (de) * 2002-09-04 2008-09-15 Nestec Sa Verfahren zur herstellung von einem öl, das langkettige, mehrfach ungesättigte fettsäuren aus biomassen enthält, lebensmittel, nahrungsmittelzusammensetzung, kosmetische oder pharmazeutische zusammensetzung, die dieses ölenthält
TWI343418B (en) * 2002-09-13 2011-06-11 Suntory Holdings Ltd Process for production of transesterified oils/fats or triglycerides
PT1542670E (pt) * 2002-09-24 2013-07-11 Suntory Holdings Ltd Composição com efeitos na prevenção do declínio, melhoramento ou aumento de respostas normais de aptidões cognitivas de uma pessoa saudável
US20040209953A1 (en) * 2002-12-06 2004-10-21 Wai Lee Theresa Siu-Ling Glyceride compositions and methods of making and using same
CN101843610A (zh) * 2003-03-27 2010-09-29 三得利控股株式会社 花生四烯酸在制备具有使超昼夜节律正常化作用的组合物中的用途
US20040219188A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Comer Gail M. Composition and methods for nutritional management of patients with hepatic disease
US7238482B2 (en) * 2003-05-07 2007-07-03 E. I. Du Pont De Nemours And Company Production of polyunsaturated fatty acids in oleaginous yeasts
GB0311081D0 (en) * 2003-05-14 2003-06-18 Btg Internat Limted Treatment of neurodegenerative conditions
EP1643862A1 (en) * 2003-06-24 2006-04-12 University of Kansas Medical Center Infant formula
DE112004001520B4 (de) * 2003-08-18 2008-04-10 Btg International Ltd. Verwendung eines Lipidglyzerids festgelegter Struktur zur Herstellung eines Medikamentes zur Behandlung der multiplen Sklerose
ES2323644T3 (es) 2003-08-21 2009-07-22 Monsanto Technology Llc Desaturasas de acidos grasos procedentes de primula.
EP2251429B1 (en) * 2003-12-30 2017-03-01 DSM IP Assets B.V. Deaeration process
JP4850060B2 (ja) * 2004-03-01 2012-01-11 サントリーホールディングス株式会社 長鎖高度不飽和脂肪酸を構成要素として含むリン脂質の製造方法、およびその利用
ES2541537T3 (es) 2004-04-16 2015-07-21 Monsanto Technology, Llc Expresión de desaturasas de ácido graso en maíz
US7807849B2 (en) * 2004-04-22 2010-10-05 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Synthesis of long-chain polyunsaturated fatty acids by recombinant cells
JP4993852B2 (ja) 2004-09-17 2012-08-08 サントリーホールディングス株式会社 ストレスに起因する行動異常を伴う症状あるいは疾患の予防又は改善作用を有する組成物
JP2006083136A (ja) * 2004-09-17 2006-03-30 Suntory Ltd ストレスに起因する脳機能の低下およびそれに伴う症状あるいは疾患の予防又は改善作用を有する組成物
US7678931B2 (en) 2004-10-22 2010-03-16 Martek Biosciences Corporation Process for preparing materials for extraction
US7198937B2 (en) * 2004-11-04 2007-04-03 E. I. Du Pont De Nemours And Company Mortierella alpina diacylglycerol acyltransferase for alteration of polyunsaturated fatty acids and oil content in oleaginous organisms
US7588931B2 (en) * 2004-11-04 2009-09-15 E. I. Du Pont De Nemours And Company High arachidonic acid producing strains of Yarrowia lipolytica
EP1827123B1 (en) 2004-11-04 2015-07-22 Monsanto Technology, LLC High pufa oil compositions
GB0425932D0 (en) * 2004-11-25 2004-12-29 Btg Int Ltd Structured phospholipids
GB0504333D0 (en) * 2005-03-02 2005-04-06 Btg Int Ltd Treatment of cytokine dysregulation
GB0504362D0 (en) * 2005-03-02 2005-04-06 Btg Int Ltd Cytokine modulators
JP5886511B2 (ja) 2005-06-07 2016-03-16 ディーエスエム ニュートリショナル プロダクツ アーゲーＤＳＭ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ＡＧ 脂質および抗酸化剤の製造のための真核微生物
JP5967855B2 (ja) 2005-06-30 2016-08-10 サントリーホールディングス株式会社 日中活動量の低下および／又はうつ症状の改善作用を有する組成物
US20070082063A1 (en) * 2005-10-11 2007-04-12 Douglas Bibus Risk assessment and correction of membrane damage of the upper GI tract
JP5214464B2 (ja) 2005-12-28 2013-06-19 アドバンスド バイオニュートリション コーポレーション 多糖類、糖類およびポリオール類の乾燥マトリックスを含む、ガラス形態の、プロバイオティクス細菌用送達媒体およびその製造方法
US8968721B2 (en) 2005-12-28 2015-03-03 Advanced Bionutrition Corporation Delivery vehicle for probiotic bacteria comprising a dry matrix of polysaccharides, saccharides and polyols in a glass form and methods of making same
US20090274736A1 (en) * 2006-01-19 2009-11-05 Solazyme Inc. Nutraceutical Compositions From Microalgae And Related Methods of Production And Administration
US20070167396A1 (en) * 2006-01-19 2007-07-19 Solazyme, Inc. Methods and compositions for cholesterol reduction in mammals
US20070191303A1 (en) * 2006-01-19 2007-08-16 Solazyme, Inc. Polysaccharide compositions and methods of producing, screening, and formulating polysaccharide compositions
US8298548B2 (en) 2007-07-18 2012-10-30 Solazyme, Inc. Compositions for improving the health and appearance of skin
US8277849B2 (en) 2006-01-19 2012-10-02 Solazyme, Inc. Microalgae-derived compositions for improving the health and appearance of skin
US20070166266A1 (en) * 2006-01-19 2007-07-19 Solazyme, Inc. Methods and compositions for improving the health and appearance of skin
MX2008011625A (es) * 2006-03-10 2008-11-14 Monsanto Technology Llc Semilla y composiciones de aceite de soya y metodos para hacer los mismos.
CN101460141A (zh) * 2006-04-03 2009-06-17 先进生物营养公司 包含二十二碳六烯酸的饲料制剂
MX295615B (es) * 2006-04-11 2012-02-07 Market Biosciences Corp Productos alimenticios que comprenden acidos grasos poliinsaturados de cadena largay metodos para preparar los mismos.
WO2008129358A2 (en) * 2006-08-01 2008-10-30 Ocean Nutrition Canada Ltd. Oil producing microbes and methods of modification thereof
WO2008060571A2 (en) * 2006-11-13 2008-05-22 Aurora Biofuels, Inc. Methods and compositions for production and purification of biofuel from plants and microalgae
WO2008076975A1 (en) 2006-12-18 2008-06-26 Advanced Bionutrition Corporation A dry food product containing live probiotic
EP3593797A1 (en) * 2006-12-28 2020-01-15 Suntory Holdings Limited Nerve-regenerating agent
JP5101894B2 (ja) * 2007-01-15 2012-12-19 サントリーホールディングス株式会社 高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法
WO2008100545A2 (en) 2007-02-12 2008-08-21 E. I. Du Pont De Nemours And Company Production of arachidonic acid in oilseed plants
EP2173699A4 (en) * 2007-06-29 2014-04-16 Dsm Ip Assets Bv PRODUCTION AND PURIFICATION OF POLYUNSATURATED FATTY ACID ESTERS
CN101109015B (zh) * 2007-07-09 2011-05-04 南京工业大学 花生四烯酸油脂的制备方法
CN101113410B (zh) * 2007-07-09 2010-05-19 南京工业大学 一种高山被孢霉及其应用
CN101153298B (zh) * 2007-09-07 2010-11-24 武汉麦可得生物技术有限公司 发酵生产低神经酸、epa含量的花生四烯酸油脂的方法
US8202713B2 (en) * 2008-05-19 2012-06-19 Zhiyou Wen Producing eicosapentaenoic acid (EPA) from biodiesel-derived crude glycerol
US8927522B2 (en) 2008-10-14 2015-01-06 Solazyme, Inc. Microalgal polysaccharide compositions
WO2010054322A1 (en) 2008-11-07 2010-05-14 Solazyme, Inc. Cosmetic compositions comprising microalgal components
US8940340B2 (en) * 2009-01-22 2015-01-27 Aurora Algae, Inc. Systems and methods for maintaining the dominance of Nannochloropsis in an algae cultivation system
US8143051B2 (en) * 2009-02-04 2012-03-27 Aurora Algae, Inc. Systems and methods for maintaining the dominance and increasing the biomass production of nannochloropsis in an algae cultivation system
WO2010097809A2 (en) * 2009-02-25 2010-09-02 V.B. Medicare Pvt. Ltd. Improved methods for fermentative production of docosahexaenoic acid
CA2986751A1 (en) 2009-03-27 2010-09-30 Intervet International B.V. Microparticulated vaccines for the oral or nasal vaccination and boostering of animals including fish
US9187778B2 (en) 2009-05-04 2015-11-17 Aurora Algae, Inc. Efficient light harvesting
JP5841527B2 (ja) 2009-05-26 2016-01-13 アドバンスド バイオニュートリション コーポレーション 生物学的に活性な微生物および／または生物活性材料を含む安定な乾燥粉末組成物およびその製造方法
US8865452B2 (en) * 2009-06-15 2014-10-21 Aurora Algae, Inc. Systems and methods for extracting lipids from wet algal biomass
US8769867B2 (en) * 2009-06-16 2014-07-08 Aurora Algae, Inc. Systems, methods, and media for circulating fluid in an algae cultivation pond
US9101942B2 (en) * 2009-06-16 2015-08-11 Aurora Algae, Inc. Clarification of suspensions
EP2272383A1 (en) 2009-06-22 2011-01-12 SBAE Industries NV Composition Comprising Omega-7 and/or Omega-4 Fatty Acids
US8747930B2 (en) * 2009-06-29 2014-06-10 Aurora Algae, Inc. Siliceous particles
US20100325948A1 (en) * 2009-06-29 2010-12-30 Mehran Parsheh Systems, methods, and media for circulating and carbonating fluid in an algae cultivation pond
US9480271B2 (en) 2009-09-15 2016-11-01 Monsanto Technology Llc Soybean seed and oil compositions and methods of making same
US8765983B2 (en) * 2009-10-30 2014-07-01 Aurora Algae, Inc. Systems and methods for extracting lipids from and dehydrating wet algal biomass
US8748160B2 (en) * 2009-12-04 2014-06-10 Aurora Alage, Inc. Backward-facing step
CN102725393B (zh) 2010-01-28 2015-12-02 先进生物营养公司 包含生物活性材料的干燥玻璃质组合物
US9504750B2 (en) 2010-01-28 2016-11-29 Advanced Bionutrition Corporation Stabilizing composition for biological materials
US8308951B1 (en) 2010-04-06 2012-11-13 Heliae Development, Llc Extraction of proteins by a two solvent method
US8211308B2 (en) 2010-04-06 2012-07-03 Heliae Development, Llc Extraction of polar lipids by a two solvent method
US8115022B2 (en) 2010-04-06 2012-02-14 Heliae Development, Llc Methods of producing biofuels, chlorophylls and carotenoids
US8211309B2 (en) 2010-04-06 2012-07-03 Heliae Development, Llc Extraction of proteins by a two solvent method
US8475660B2 (en) 2010-04-06 2013-07-02 Heliae Development, Llc Extraction of polar lipids by a two solvent method
US8273248B1 (en) 2010-04-06 2012-09-25 Heliae Development, Llc Extraction of neutral lipids by a two solvent method
US8313648B2 (en) 2010-04-06 2012-11-20 Heliae Development, Llc Methods of and systems for producing biofuels from algal oil
MX2012011558A (es) 2010-04-06 2013-02-21 Heliae Dev Llc Metodos y sistemas para producir biocombustible.
US8202425B2 (en) 2010-04-06 2012-06-19 Heliae Development, Llc Extraction of neutral lipids by a two solvent method
WO2011127127A2 (en) 2010-04-06 2011-10-13 Arizona Board Of Regents For And On Behalf Of Arizona State University Extraction with fractionation of oil and co-products from oleaginous material
JP2013525549A (ja) 2010-04-22 2013-06-20 イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニー 微生物バイオマスから多価不飽和脂肪酸含有組成物を得る方法
AU2011261455B2 (en) 2010-06-01 2016-03-24 Dsm Ip Assets B.V. Extraction of lipid from cells and products therefrom
MY163938A (en) 2010-06-14 2017-11-15 Io-Mega Holding Corp Method for the production of algae derived oils
CN101870915B (zh) * 2010-06-30 2012-07-04 南京工业大学 水酶法提取花生四烯酸油脂的工艺
SG187250A1 (en) 2010-08-13 2013-03-28 Advanced Bionutrition Corp Dry storage stabilizing composition for biological materials
EP2634546B1 (en) 2010-10-29 2019-05-08 Yamato Scale Co., Ltd. Combination scale
US9375028B2 (en) * 2010-12-09 2016-06-28 Mead Johnson Nutrition Company Compositions and methods for nutrient delivery
US20120196770A1 (en) * 2011-01-28 2012-08-02 Amyris, Inc. Gel-encapsulated microcolony screening
JP5416861B2 (ja) * 2011-03-03 2014-02-12 日本水産株式会社 リパーゼによる高度不飽和脂肪酸含有油脂の製造方法
US8926844B2 (en) 2011-03-29 2015-01-06 Aurora Algae, Inc. Systems and methods for processing algae cultivation fluid
US8569530B2 (en) 2011-04-01 2013-10-29 Aurora Algae, Inc. Conversion of saponifiable lipids into fatty esters
US8752329B2 (en) 2011-04-29 2014-06-17 Aurora Algae, Inc. Optimization of circulation of fluid in an algae cultivation pond
US8365462B2 (en) 2011-05-31 2013-02-05 Heliae Development, Llc V-Trough photobioreactor systems
USD679965S1 (en) 2011-06-10 2013-04-16 Heliae Development, Llc Aquaculture vessel
USD682637S1 (en) 2011-06-10 2013-05-21 Heliae Development, Llc Aquaculture vessel
USD661164S1 (en) 2011-06-10 2012-06-05 Heliae Development, Llc Aquaculture vessel
CN102925502A (zh) * 2011-08-10 2013-02-13 嘉必优生物工程（湖北）有限公司 利用高山被孢霉生产花生四烯酸油脂的工业方法
WO2013075116A2 (en) 2011-11-17 2013-05-23 Heliae Development, Llc Omega 7 rich compositions and methods of isolating omega 7 fatty acids
CN102703332B (zh) * 2012-06-19 2013-08-07 南京工业大学 一株产花生四烯酸油脂的菌株及其应用
CN103667068A (zh) * 2012-09-14 2014-03-26 罗盖特兄弟公司 一种由微生物（单细胞真菌高山被孢霉）产生的富含花生四烯酸的油及其制备工艺
CN102925503B (zh) * 2012-09-26 2014-08-06 内蒙古金达威药业有限公司 利用固料培养基培养高山被孢霉制备花生四烯酸的方法
CN103805517B (zh) * 2012-11-14 2019-03-08 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 高山被孢霉的分离的新菌株及其应用
CN105189740B (zh) 2013-03-13 2019-01-15 帝斯曼营养品股份公司 工程化微生物
US9651304B1 (en) 2013-03-14 2017-05-16 Green Recovery Technologies, LLC Pretreatment of biomass prior to separation of saturated biomass
US9266973B2 (en) 2013-03-15 2016-02-23 Aurora Algae, Inc. Systems and methods for utilizing and recovering chitosan to process biological material
WO2014186395A1 (en) 2013-05-15 2014-11-20 Solazyme, Inc. Cosmetic compositions comprising microalgal oil
JP6619229B2 (ja) * 2013-08-22 2019-12-11 協和発酵バイオ株式会社 アラキドン酸生産ポリケチドシンターゼ及びその利用
CN103602648B (zh) * 2013-12-04 2016-03-02 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种提高纤维素酶生产水平的发酵工艺
CN105960235B (zh) 2013-12-20 2021-01-08 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 用于从微生物细胞获得微生物油的方法
SG11201605052XA (en) 2013-12-20 2016-07-28 Dsm Ip Assets Bv Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
US11124736B2 (en) 2013-12-20 2021-09-21 Dsm Ip Assets B.V. Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
MX370606B (es) 2013-12-20 2019-12-18 Dsm Ip Assets Bv Procedimientos para obtener aceite microbiano a partir de células microbianas.
KR102435268B1 (ko) 2013-12-20 2022-08-22 디에스엠 뉴트리셔널 프라덕츠 아게 미생물로부터 오일을 회수하는 방법
EP2958982B1 (en) 2013-12-20 2019-10-02 Mara Renewables Corporation Methods of recovering oil from microorganisms
US10888104B2 (en) 2014-09-23 2021-01-12 Jost Chemical Co. Fatty acid composition and method for fortifying nutritional products with fatty acids
AR104042A1 (es) 2015-03-26 2017-06-21 Mara Renewables Corp Producción de alta densidad de biomasa y aceite utilizando glicerol en bruto
MX2018000502A (es) 2015-07-13 2018-09-07 Mara Renewables Corp Mejora del metabolismo de microalga de xilosa.
DK3328215T3 (da) 2015-07-29 2021-09-13 Advanced Bionutrition Corp Stabilt tørre probiotiske sammensætninger til særlige kostanvendelser
US10851395B2 (en) 2016-06-10 2020-12-01 MARA Renewables Corporation Method of making lipids with improved cold flow properties
KR102145032B1 (ko) * 2017-04-26 2020-08-14 주식회사 엘지생활건강 모르티에렐라 오일을 포함하는 화장료 조성물
US10513718B2 (en) 2017-06-06 2019-12-24 City University Of Hong Kong Method of producing polyunsaturated fatty acid
CN107418982B (zh) * 2017-09-25 2020-05-08 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 一种低氯丙醇微生物油脂及其制备方法
CA3094477A1 (en) * 2018-03-30 2019-10-03 Dsm Ip Assets B.V. Method of obtaining a microbial oil and a method of reducing emulsion by maintaining a low concentration of carbohydrate
CN109266698B (zh) * 2018-05-17 2022-10-28 梁云 被孢霉属微生物油脂中脂肪酸组合物成分调整的方法
CN108410916A (zh) * 2018-05-30 2018-08-17 湖北福星生物科技有限公司 花生四烯酸油脂的生产方法
CN110747239B (zh) * 2019-11-26 2021-06-22 瞿瀚鹏 富含Sn-2位ARA的微生物油脂及其制备方法和应用
CN117730810A (zh) * 2024-01-24 2024-03-22 广东海洋大学 橄榄油在提高东风螺幼虫变态率和/或存活率中的应用

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4280379A (en) * 1980-01-11 1981-07-28 Chow Kirk K Reversihble ratchet drive
US4670285A (en) 1982-08-06 1987-06-02 The University Of Toronto Innovations Foundation Infant formula
US4870011A (en) 1985-01-22 1989-09-26 Director General Of Agency Of Industrial Science And Technology Method for obtaining lipids from fungus bodies
DE3603000A1 (de) * 1986-01-31 1987-08-06 Milupa Ag Neue polyensaeure-reiche fettmischung und deren verwendung bei der herstellung von saeuglingsnahrungen
JPS6438007A (en) 1987-04-28 1989-02-08 Lion Corp Skin external preparation
JP2697834B2 (ja) * 1988-02-02 1998-01-14 サントリー株式会社 高度不飽和脂肪酸成分添加人工乳
JP2723243B2 (ja) * 1988-02-25 1998-03-09 サントリー株式会社 高度不飽和脂肪酸添加動物飼料
JPH01228486A (ja) * 1988-03-09 1989-09-12 Suntory Ltd 奇数鎖高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法
PH11992043811B1 (en) * 1991-01-24 2002-08-22 Martek Corp Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
JPH05163142A (ja) * 1991-12-17 1993-06-29 Tokiwa Yakuhin Kogyo Kk 肝障害の予防または治療用アラキドン酸含有組成物
JP3354608B2 (ja) * 1992-11-16 2002-12-09 サントリー株式会社 高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法
CA2164291C (en) * 1993-06-09 2007-10-30 David John Kyle Methods and pharmaceutical compositions useful for treating neurological disorders

Also Published As

Publication number Publication date
ATE239088T1 (de) 2003-05-15
US5658767A (en) 1997-08-19
CN1696300B (zh) 2011-11-09
PL187694B1 (pl) 2004-09-30
CA2209513A1 (en) 1996-07-11
KR101163298B1 (ko) 2012-07-05
EA199700090A1 (ru) 1997-12-30
EP0800584A1 (en) 1997-10-15
FI972829A (fi) 1997-09-02
KR20110111327A (ko) 2011-10-10
MX9705078A (es) 1997-10-31
EP2322640A3 (en) 2011-05-25
PL321208A1 (en) 1997-11-24
CN101560529B (zh) 2015-02-04
FI117442B (fi) 2006-10-13
EP2322642A2 (en) 2011-05-18
JPH10512444A (ja) 1998-12-02
CN1175976A (zh) 1998-03-11
KR20060096168A (ko) 2006-09-07
KR101033741B1 (ko) 2011-05-09
EP1342787A3 (en) 2003-10-08
FI20060617A (fi) 2006-06-26
HK1085768A1 (en) 2006-09-01
JP2010178745A (ja) 2010-08-19
JP4014219B2 (ja) 2007-11-28
NO973085D0 (no) 1997-07-02
EP2322641A3 (en) 2011-05-25
NO973085L (no) 1997-09-03
AU4854296A (en) 1996-07-24
KR20100023977A (ko) 2010-03-04
JP2007319161A (ja) 2007-12-13
KR20140114068A (ko) 2014-09-25
NO320117B1 (no) 2005-10-31
JP2013116123A (ja) 2013-06-13
KR20120073363A (ko) 2012-07-04
AU713567B2 (en) 1999-12-02
EP2322641A2 (en) 2011-05-18
JP2006180877A (ja) 2006-07-13
CN1175976B (zh) 2011-07-13
EP1342787A2 (en) 2003-09-10
BR9607179A (pt) 1997-11-11
DE800584T1 (de) 1999-05-06
EP2322642A3 (en) 2011-05-25
FI972829A0 (fi) 1997-07-01
CN102399831A (zh) 2012-04-04
BR9607179B1 (pt) 2009-01-13
JP5281026B2 (ja) 2013-09-04
EP2322640A2 (en) 2011-05-18
DE69627816D1 (de) 2003-06-05
DK0800584T3 (da) 2003-08-04
ES2197233T3 (es) 2004-01-01
CN1696300A (zh) 2005-11-16
KR20080068761A (ko) 2008-07-23
CA2209513C (en) 2002-05-28
PT800584E (pt) 2003-09-30
WO1996021037A1 (en) 1996-07-11
EA001036B1 (ru) 2000-08-28
JP2009149910A (ja) 2009-07-09
DE69627816T2 (de) 2004-01-22
CN101560529A (zh) 2009-10-21
EP0800584B1 (en) 2003-05-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI120648B (fi) Menetelmä arakidonihapon valmistamiseksi
RU2120998C1 (ru) Способ получения масла, содержащего арахидоновую кислоту, немодифицированное микробное масло, способ обеспечения арахидоновой кислотой смеси для детского питания, косметическая композиция, питание или питательная добавка, способ лечения людей и смесь для детского питания
MXPA97005078A (en) Araquidonic acid and methods for the production and use of my

Legal Events

Date Code Title Description
FG Patent granted

Ref document number: 120648

Country of ref document: FI

PC Transfer of assignment of patent

Owner name: DSM IP ASSETS B.V.

MM Patent lapsed