EA001036B1 - Немодифицированное масло грибов mortierella sp., способ его получения, способ обеспечения детского питания арахидоновой кислотой, детское питание, содержащее арахидоновую кислоту, способ обеспечения человека дополнительным количеством арахидоновой кислоты и косметическая композиция - Google Patents

Немодифицированное масло грибов mortierella sp., способ его получения, способ обеспечения детского питания арахидоновой кислотой, детское питание, содержащее арахидоновую кислоту, способ обеспечения человека дополнительным количеством арахидоновой кислоты и косметическая композиция Download PDF

Info

Publication number
EA001036B1
EA001036B1 EA199700090A EA199700090A EA001036B1 EA 001036 B1 EA001036 B1 EA 001036B1 EA 199700090 A EA199700090 A EA 199700090A EA 199700090 A EA199700090 A EA 199700090A EA 001036 B1 EA001036 B1 EA 001036B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
oil
arachidonic acid
amount
unmodified
composition
Prior art date
Application number
EA199700090A
Other languages
English (en)
Other versions
EA199700090A1 (ru
Inventor
Дэвид Дж. Кайл
Original Assignee
Мартек Биосайнсиз Корпорейшн
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=23449013&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA001036(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Мартек Биосайнсиз Корпорейшн filed Critical Мартек Биосайнсиз Корпорейшн
Publication of EA199700090A1 publication Critical patent/EA199700090A1/ru
Publication of EA001036B1 publication Critical patent/EA001036B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6436—Fatty acid esters
    • C12P7/6445—Glycerides
    • C12P7/6472—Glycerides containing polyunsaturated fatty acid [PUFA] residues, i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C11/00—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions
    • A23C11/02—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions containing at least one non-milk component as source of fats or proteins
    • A23C11/04—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions containing at least one non-milk component as source of fats or proteins containing non-milk fats but no non-milk proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23D—EDIBLE OILS OR FATS, e.g. MARGARINES, SHORTENINGS, COOKING OILS
    • A23D9/00—Other edible oils or fats, e.g. shortenings, cooking oils
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/115—Fatty acids or derivatives thereof; Fats or oils
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/115—Fatty acids or derivatives thereof; Fats or oils
    • A23L33/12—Fatty acids or derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/40—Complete food formulations for specific consumer groups or specific purposes, e.g. infant formula
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/20—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
    • A61K31/202—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids having three or more double bonds, e.g. linolenic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
    • A61K31/23—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin of acids having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms
    • A61K31/232—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin of acids having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms having three or more double bonds, e.g. etretinate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/33—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing oxygen
    • A61K8/36—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A61K8/361—Carboxylic acids having more than seven carbon atoms in an unbroken chain; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/92—Oils, fats or waxes; Derivatives thereof, e.g. hydrogenation products thereof
    • A61K8/922—Oils, fats or waxes; Derivatives thereof, e.g. hydrogenation products thereof of vegetable origin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B1/00—Production of fats or fatty oils from raw materials
    • C11B1/10—Production of fats or fatty oils from raw materials by extracting
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Pediatric Medicine (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Psychology (AREA)

Description

Данное изобретение относится к получению арахидоновой кислоты, композициям, содержащим арахидоновую кислоту и к ее применению.
Арахидоновая кислота (АКА) представляет собой полиненасыщенную жирную кислоту с длинной углеродной цепью (РИГА) омега-6класса (5,8,11,14-эйкозотетраеновая кислота, т.е. соотношение количества углеродных атомов в цепи и количества ненасыщенных связей равно 20:4). В организме человека АКА является наиболее распространенной С20РИРА. Она особенно распространена в тканях органов, мышц и крови, играя важную роль в качестве структурного липида, связанного преимущественно с фосфолипидами в крови, печени, мышечной ткани и других важных системах органов. Помимо первичной роли в качестве структурного липида, АКА также является непосредственным предшественником ряда циркулирующих в организме человека эйкозиноидов, таких как простагландин Е2 (РОЕ2), простациклин 12 (РО12), тромбоксан А2 (ТхА2), лейкотриены В4 (ЬТВ4) и С4 (ЬТС4). Эти эйкозиноиды оказывают релуляторное действие на метаболизм липопротеинов, влияют на реологию крови, васкулярный тонус, функцию лейкоцитов и активацию тромбоцитов.
Несмотря на важность АКА для метаболизма, протекающего в организме человека, организм не может синтезировать ее заново (от начала до конца). АКА синтезируется в организме из линолевой кислоты (ЬОА) - жизненноважной жирной кислоты - удлинением цепочки и введением ненасыщенных связей в ее структуру. Для этого процесса необходимо присутствие фермента 6-десатуразы, который присутствует в организме человека в малых количествах (Вигге е! а1., Ыр1б8, 25:354-356 (1990). Соответственно, большее количество АКА должно обеспечиваться введением с пищей, и это особенно важно во время очень быстрого роста организма, такого, который происходит в раннем детском возрасте.
Во время первого года жизни ребенка его вес может увеличиваться в два или три раза. Следовательно, ему необходимо большое количество АКА, поступаемой с пищей. Вот почему женское грудное молоко должно иметь высокое содержание АКА (§аибег8 е! а1., Ат. 1. СПп. Νώτ., 31:805-813 (1978). АКА представляет собой наиболее распространенную РИГА в грудном молоке. Среди матерей, особенно вегетарианок, которые кормят, своих детей грудью, многим необходимо дополнительно принимать АКА с пищей. Однако многие матери не кормят грудью своих детей, или не кормят грудью в период быстрого роста ребенка, предпочитая применять детское питание (детские смеси).
Известно, что производимые ранее детские смеси не содержали АКА в триглицеридной форме. В патенте США №4670285 (С1аибт е!
а1.), введенном в список ссылок данного изобретения, впервые описывается потребность маленького ребенка в жирных кислотах, включая АКА. Для обеспечения этих жирных кислот Оапбийп с соавторами предлагает использовать смесь яичного желтка, рыбьего жира или фосфолипиды эритроцитов и растительные масла, в качестве жирового компонента предложенной детской смеси. Однако рыбий жир содержит высокие количества эйкозопентаеновой кислоты (ЕРА). Известно, что ЕРА подавляет синтез АКА в организме детей. (СаШоп е! а1., ΙΝΡΟΡΜ. 1:306 (1990). Следовательно, существует потребность в обеспечении АКА без введения дополнительного количества ЕРА. Кроме того, яичные желтки содержат относительно низкую концентрацию АКА, таким образом смесь С1апάίη е! а1. является экономически нецелесообразной.
Ввиду того, что АКА присутствует в животных жирах, а не в растительных маслах, получение ее в промышленных масштабах остается необходимым, но пока только желаемым процессом. Известен способ получения АКА, описанный §Ыптеп е! а1., МюгоЫоР Вю1есй., 31:11-16 (1989), из грибов МоШегеПа а1рша с использованием общеизвестной емкостной ферментации с перемешиванием. (См. также патент Японии 1215245, §йит1птеп е! а1.). После выращивания организмы собирают, сушат и их липиды экстрагируют из биомассы грибов органическим растворителем и химически (ковалентно) модифицируют. Например, липидную смесь гидролизуют или превращают в сложные этиловые эфиры и затем перед применением в качестве пищевой добавки соединяют с циклодекстрином. §Ыптеп е! а1. не описал и не предложил введение немодифицированных масел, выработанных микроорганизмами.
РогЬупбшт сгиейит, красные микроводоросли, могут выращиваться в бассейнах в больших количествах и содержат липиды, которые могут содержать до 40% АКА. Айегп, е! а1. Вю1есй. Вюепд. 25:1057-1070 (1983). АКА, к сожалению, является первично связанной с галактолипидами, сложным полярным липидом, не присутствующим в грудном молоке. Таким образом, в данном случае не только налицо то, что общее количество применимой АКА вырабатывается фракцией, составляющей лишь один процент биомассы, но и форма АКА не приемлема для применения в качестве добавки в детское питание без дальнейшей модификации.
Известен способ получения липидов, таких как линолевая кислота из гриба рода МогПегейа, описанный в патенте США № 4870011 (διιζιιΙΠ е! а1.). Линолевую кислоту очищают от смеси липидов, которые содержатся в грибе.
В заявке Германии ΌΕ 3603000А1 (Мйира) впервые описывается смесь жиров высокополиненасыщенных кислот и ее применение в качестве жирового компонента в детском питании.
Смесь жиров имеет высокое содержание АКА и докозагексановых (ΌΗΆ) кислот в соотношении 2,5 : 1, соответственно, а также высокое содержание холестерина. В качестве источников жирных кислот приведены определенные типы микроводорослей, рыбий жир, органические жиры из говядины и свинины или высоко рафинированное масло яичного желтка. Указывается на то, что источником ОНА и ЛКЛ являются микроводоросли факофитного и родофитного типов. Здесь не предлагается использовать микробы в качестве источника масла. Масло, полученное из водорослей, а также рыбий жир обычно содержат ЕРА, которая подавляет синтез АКА ίη νίνο. Помимо этого высокорафинированное масло яичного желтка представляет собой неэкономичный источник АКА. Кроме того, нет описания добавки с высоким содержанием АКА для уже существующей детской смеси.
В \νϋ 92/13086 описано получение и применение масел грибов в качестве добавок для детского питания и косметических композиций. Эти масла содержат 30-35% арахидоновой кислоты и не содержат регистрируемого количества эйкозапентаеновой кислоты.
Задачей настоящего изобретения является разработка способа получения АКА, предпочтительно без сопутствующего образования ЕРА.
Еще одной задачей данного изобретения является разработка добавки и источника этой добавки для применения в детской смеси, такой, что содержание АКА в ней приближается к содержанию АКА в женском грудном молоке.
Дополнительным предметом данного изобретения является получение масла грибов, содержащего АКА, для применения в препаратах, предназначенных для энтерального, парентерального или дермального применения.
Данное изобретение относится к получению из грибов масла, содержащего арахидоновую кислоту (АКА8СО), его применению и к композициям, содержащим такие масла. Это масло можно считать единственным в своем роде клеточным маслом. Грибы выращивают в условиях, при которых они вырабатывают масло, их собирают и масло экстрагируют и выделяют. Масло без дополнительной химической обработки может использоваться непосредственно для обеспечения дополнительной АКА тем, кому она необходима, включая новорожденных детей, беременных и кормящих женщин или людей с проявлением патологий, связанных с недостатком АКА в организме. Преимущества данного изобретения включают легкость получения масла, высокую его чистоту и отсутствие количеств ЕРА, которые могли бы быть обнаружены.
Термины АКА и ЕРА также используются в данном описании для обозначения остатков арахидоновой кислоты и эйкозапентаеновой кислоты, соответственно, в том случае, когда остатки этерифицированы глицерином и представляют собой часть жирного ацилтриглицерида или фосфолипида. В данном описании композицию считают практически свободной от ЕРА, когда остаточное количество ЕРА в композиции меньше количества, которое подавляет синтез АКА при ее использовании в качестве пищевой добавки. Данное изобретение способствует обеспечению экономического источника арахидоновой кислоты (АКА).
В одном воплощении данное изобретение относится к способу получения масла грибов, содержащего арахидоновую кислоту (АКА8СО), которое является по существу свободным от эйкозапентаеновой кислоты (ЕРА). В данном описании термин практически свободно означает, что ЕРА присутствует в количестве, составляющем приблизительно одну пятую часть от количества АКА в масле. Это масло единственное из вырабатываемых клеткой, которое может вводиться прямо в немодифицированном виде. В данном описании термин немодифицированный означает, что химические свойства жирных кислот или самого масла не подвергались ковалентному изменению. Таким образом, например, временное изменение в АКА8СО или АКА, которое могло быть обращено после выделения масла, не должно было бы принадлежать области данного изобретения.
Немодифицированные масла из грибов в соответствии с данным изобретением обеспечивают триглицериды, в которых относительно высокую часть остатков жирных кислот составляет остатки АКА (предпочтительно по меньшей мере 40% остатков жирных кислот представляют собой остатки АКА, более предпочтительно по меньшей мере 50% остатков представляют собой АКА), и соотношение остатков АКА к остаткам ЕРА является также высоким (по меньшей мере 5:1, предпочтительно по меньшей мере 20:1 , мас./мас.). Такое масло, полученное из природных источников, не было описано ранее. Несмотря на то, что триглицериды с такой композицией могут быть химически синтезированы (например, этерификацией смесей свободных жирных кислот в АКА или трансэтерификацией с этиловыми эфирами такой смеси жирных кислот), работа со смесью жирных кислот (например, очистка, этерификация и т.д.) может приводить к получению нежелательных побочных продуктов. Способ данного изобретения, напротив, обеспечивает триглицериды, нужного состава посредством экстракции из натуральных источников.
Таблица 1. Состав жирных кислот некоторых видов грибов
Жирная кислота
Виды 14:0 16:0 16:1 18:1 18:2 18:3 20:4 20:5 Всего жиров
МотйегеПа а1р1па - 8,2 - 33,5 16,3 23,3 13,0 - 3,0
МотйегеПа е1оп-да!а 2,0 13,2 - 26,6 11,9 13,2 13,8 2,4 4,0
Могйегейа 18а-ЬеШпа 0,3 15,7 0,8 55,8 11,1 9,0 - - 7,3
8арто1едша рата-8Шка 7,4 19,1 1,9 6,3 24,5 12,5 10,5 10,5 9,3
РуШшт са1епи-1а1ит 6,5 9,9 10,3 21,2 18,5 3,5 13,4 10,9 5,0
РуШшт со1ога!ит 13,6 9,9 - 14,7 10,9 2,5 24,3 21,7 2,2
РуОинт дгасйе 14,7 9,1 2,2 14,8 12,6 3,6 22,1 5,7 4,5
РуОинт 1ггеди1аге 10,3 15,4 6,9 12,3 21,0 3,9 10,6 12,4 11,9
РуОинт иШтит 9,5 16,7 10,5 17,1 20,7 1,3 9,0 6,9 13,3
РуШшт Ш81бю8ит 9,5 11,4 12,1 1,0 8,3 9,3 31,9 - 2,8
Среди этих видов грибов, характеризованных выше их жирными кислотами, большинство, как было установлено, не производят АКА. \Усс1с. ΤΌ., Рипда1 ЫрЦ В1осЬеш181гу, Р1епит Рте88, Ν.Υ. (1974). Из тех видов, которые производят ЛКЛ, многие, включая все ранее характеризованные виды РуШшт, вместе с АКА производят значительные количества эйкозапентаеновой кислоты (ЕРА). В таблице 1 представлено содержание жирных кислот в грибах вида Р. 1П81Й1О8ит, а также содержание жирных кислот в грибах других видов. Неожиданно было установлено, что Р. 1П81ЙЮ8ит производит АКА без одновременной выработки ЕРА. Как и в случае с рыбьим жиром, высокие уровни ЕРА в пищевых добавках приводят к подавлению способности образовывать АКА из пищевой линолевой кислоты (ЬОА). Соответственно, несмотря на то, что в способе данного изобретения могут использоваться виды грибов, производящие как АКА так и ЕРА, предпочтительно использовать виды, которые не продуцируют в значительных количествах ЕРА. Такими предпочтительными видами являются Ру1йшт Ш81бю8ит и Могйегейа а1рша. Оба этих вида коммерчески доступны и хранятся в Атепсап Туре СиЙите Со11есйуе ίη КоскШе, Мату1апб под инвентарными номерами 28251 и 42430, соответственно. Р. ш81ЙЮ8ит и М. а1рша в данном изобретении используются в качестве типичных видов грибов. Конечно, другие виды грибов, которые производят триглицерид, содержащий АКА и пониженное количество ЕРА, как описано здесь, также охватываются данным изобретением.
Одной из основных проблем, которые решает данное изобретение, является подавление биосинтеза АКА у детей, которое вызывается присутствием повышенных количеств пищевой ЕРА. Эта проблема может быть решена обеспечением АКА для применения в детском питании (детских смесях) в количествах, по существу сходных с количествами, обнаруженными в женском грудном молоке. Обычно в женском грудном молоке соотношение АКА:ЕРА составляет соответственно приблизительно 20:1. Данное изобретение конкретно охватывает любое масло, вырабатываемое микроорганизмами, которое обеспечивает достаточное количество АКА для преодоления негативных влияний пищевой ЕРА. Предпочтительно применение масла, содержащего АКА, будет приводить к соотношению АКА:ЕРА, равному по меньшей мере приблизительно 5:1. Более предпочтительно, соотношение будет составлять по меньшей мере приблизительно 1 0:1 , и наиболее предпочтительно оно будет равно по меньшей мере приблизительно 20:1 . Как можно видеть, более высокое количество АКА относительно количества ЕРА более желаемо в результате.
В способе данного изобретения грибы культивируют в условиях, подходящих для получения масла, содержащего АКА. Обычно методы культивирования грибов хорошо известны, и эти способы могут применяться в способе данного изобретения. Например, культивирование инокулирующего количества грибов может протекать в погруженной культуре в колбах со встряхиванием. В колбы помещают питательную среду, засевают мицелии грибов, и рост на вибрационном возвратно-поступательном шюттель-аппарате (вибраторе) протекает в течение приблизительно от трех до четырех дней.
Состав питательной среды может изменяться, но всегда содержит источники углерода и азота. Предпочтительным источником углерода является глюкоза, количества которой могут находиться в интервале от приблизительно 1 01 00 г глюкозы на литр питательной среды. Обычно используется приблизительно 15 г/л для культуры во встряхиваемых колбах. Количество может изменяться в зависимости от нужной плотности конечной культуры. Могут использоваться и другие источники углерода, которые включают мелассу, концентрированную фруктозную кукурузную патоку, гидролизированный крахмал или любой другой недорогой общеизвестный источник углерода, используемый в процессах ферментации. Кроме того, в качестве источника углерода для Р. ш8Шю8ит может использоваться лактоза. Следовательно, пермеат сыворотки, который богат лактозой и является очень недорогим источником углерода, может использоваться в качестве субстрата. Подходящие количества этих источников углерода могут быть без труда определены квалифицированным специалистом. Обычно в процессе культивирования требуется добавление дополнительных количеств углерода. Это обуславливается тем, что микроорганизмы потребляют большое количество углерода, но добавление всего его количества сразу оказывает отрицательное действие на их рост. Источником азота обычно является дрожжевой экстракт в концентрации от приблизительно 2 до приблизительно 15 г на литр питательной среды. Предпочтительно добавляют приблизительно четыре грамма на литр. Могут использоваться и другие источники азота, которые включают пептон, триптон, жидкий кукурузный экстракт, соевую муку, гидролизованный растительный белок и т.д. Количество этих источников, которое следует добавлять, может легко определяться квалифицированным специалистом. Азот может добавляться весь сразу, т. е. весь в одно время перед культивированием.
После выращивания в течение 3-4 дней при подходящей температуре, обычно 25 - 30°С, получают количество грибов, которое достаточно для применения в качестве инокулята в общеизвестном бродильном аппарате с мешалкой (ЗТР). Такие ферментеры хорошо известны квалифицированным специалистам и коммерчески доступны. Ферментация может протекать периодическим, полупериодическим или непрерывным способом. Предпочтительно ЗТР оснащают морским гонком (мешалкой), хотя может использоваться также турбинная мешалка раштонова типа (РшЫопЭуре 1игЪше 1шре11ег).
Сначала в ферментер добавляют нужные источники углерода и азота. Например, бродильный аппарат объемом 1,5 л можно подготовить к ферментации смешением приблизительно 50 г глюкозы и приблизительно 1 5 г экстрата на литр воды. Как обсуждено выше, могут использо -ваться и другие источники углерода и азота или их смеси.
Реактор, содержащий питательный раствор, необходимо простериллизовать, например выдерживанием при высокой температуре перед инокулированием. После охлаждения до приблизительно 30°С можно добавлять инокулят и начинать культивирование. Газовый обмен обеспечивается барботированием воздуха. Скорость барботирования воздуха можно изменять, но предпочтительно ее устанавливают в интервале от приблизительно 0,5 до приблизительно 4,0 УУМ (объем воздуха на объем бродильного аппарата в минуту). Предпочтительно содержание растворенного кислорода поддерживают в интервале от приблизительно 10% до приблизительно 50% относительно величины насыщения раствора воздухом. Соответственно в процессе культивирования может потребоваться регулировка скорости барботажа воздуха. Необходимым является перемешивание. Перемешивание обеспечивается при помощи гонка (мешалки). Скорость перемешивания - скорость движения кончика мешалки - предпочтительно заключается в интервале от приблизительно 50 см/с до приблизительно 500 см/с, предпочтительно от приблизительно 1 00 до 200 см/с.
В общем случае количество инокулята может изменяться. Обычно может использоваться от приблизительно 2% до приблизительно 10% (объемн.) инокулята, предпочтительно приблизительно 5% (объем.).
Содержание питательных веществ должно контролироваться. В том случае, когда содержание глюкозы падает ниже 5 г/л, необходимо добавлять дополнительное количество глюкозы. Обычно в цикле культивирования используется приблизительно 1 00 г глюкозы и приблизительно 15 г дрожжевого экстракта на литр. Желательно полное потребление азота в процессе брожения, так как это повышает выработку масла грибами. Это особенно важно, когда в качестве продуцирующего организма используется М. а1р1па.
В наиболее предпочтительном варианте Могйеге11а а1рта с высоким содержанием масла, включающим высокие уровни содержания АРА, может выращиваться в ферментере с использованием высоких уровней содержания питательных веществ. Было неожиданно установлено, что азотосодержащие питательные вещества в количестве сверх того, что обеспечивается дрожжевым экстрактом при содержании его 1 5 г/л, могут добавляться в начале ферментации до тех пор, пока общее количество углеродсодержащего питательного вещества, добавленного в процессе ферментации, является сравнительно высоким. Общее количество углеродсодержащего питательного вещества, предпочтительно подаваемого непрерывно или периодически на начальной стадии ферментации, составляющей первые 25-30% от общей продолжительности процесса, или в аликвотах, многократно добавляемых через равные промежутки времени, будет предпочтительно эквивалентно 75-300 граммам глюкозы на литр культуральной среды (соотношение Ο:Ν, выраженное в виде мас./мас. глюкозы: дрожжевой экстракт, >5:1). В особенно предпочтительном воплощении, азотсодержащее питательное вещество представляет собой соевую муку, добавленную в количестве приблизительно 16 г на литр среды, и углеродсодержащее питательное вещество присутствует первоначально в количестве, эквивалентном приблизительно 80 г глюкозы или более. При использовании более высокого содержания углерод- и азотсодержащих питательных веществ, предпочтительно стериллизовать растворы, содержащие два питательных вещества, отдельно. Было также установлено, что выход биомассы может повышаться для процессов брожения с высоким содержанием углеродсодержащих пи9 тательных веществ приостановкой подачи части азотсодержащего питательного вещества и подачей этой оставшейся части азотсодержащего итательного вещества непрерывно и в одной или больше аликвот в процессе брожения.
Время от времени культура будет производить избыточное количество пены. Для предотвращения пенообразования необязательно может добавляться антипенная добавка, из числа хорошо известных квалифицированным специалистам, например Ма/и 310 или растительное масло.
Температура культивирования может меняться. Однако для грибов, которые продуцируют как АРА, так и ЕРА, создают условия, при которых они производят меньшее количество ЕРА и большее количество АРА, при этом культивирование ведут при более высоких температурах. Например, когда МогйегеИа а1р1иа выращивают при температуре ниже 18°С, он начинает продуцировать ЕРА. Таким образом, предпочтительно поддерживать температуру на уровне, который обуславливает предпочтительное получение АРА. Подходящие температуры обычно заключаются в интервале от приблизительно 25°С до приблизительно 30°С.
Предпочтительно культивирование продолжают до тех пор, пока не будет достигнута нужная плотность биомассы. Необходимая плотность биомассы составляет приблизительно 25 г организмов на литр. Такую биомассу обычно получают через 48-72 ч после инокуляции. В это время организмы обычно содержат приблизительно 5-40% сложных липидов, т.е. масел, из которых приблизительно 1 0-40% составляет АРА или предпочтительно, по меньшей мере, 40% остатков АРА в триглицеридной фракции, более предпочтительно, по меньшей мере, 50% остатков АРА в триглицеридной фракции, и они могут быть собраны.
Ферментацию с использованием культуры грибов для получения АРА в соответствии с данным изобретением можно проводить в среде с рН в интервале приблизительно от 5 до 8. Однако выходы биомассы, масла и АРА из культур М. а1р1иа могут повышаться регулированием рН среды, предупреждая неконтролированное повышение рН. Выходы можно повышать при помощи поддерживания высоких уровней содержания кислорода во время ферментации. Эти изменения в методике ферментации особенно эффективны при использовании высоких уровней содержания питательных веществ в бродильном аппарате.
В том случае, когда начальное содержание азотсодержащего питательного вещества превышает количество, эквивалентное приблизительно 1 5 г дрожжевого экстракта на литр, и/или уровень содержания углеродсодержащего питательного вещества превышает количество, эквивалентное приблизительно 150 г глюкозы на литр, рост грибов может быть ингибирован. Ингибирование роста можно избежать, проводя ферментацию с периодической подпиткой, например, делением питательных веществ для ферментации на аликвоты, которые последовательно подают в ферментер, эта часть или все питательное вещество, доставленное предыдущей аликвотой, метаболизируется. Ингибирование роста можно также предотвратить посредством подачи только углеродсодержащего питательного вещества (см. §Ыитеп е! а1.), а также путем разделения всего количества питательных веществ на аликвоты и подачей аликвот в процессе ферментации или подачей питательного раствора непрерывно. Было обнаружено, что результат возможен при подаче только азотсодержащего питательного вещества в ферментационную среду, в которой содержание углеродсодержащего питательного вещества является высоким.
Было неожиданно обнаружено, что ингибирование роста может смягчаться регулированием рН среды ферментации, поддерживанием высокого давления кислорода в ферментационном аппарате или обоими этими способами. Было установлено, что ферментация М. а1р1па в среде с высоким содержанием питательного вещества при низкой рН (рН = 5-6) приводит к повышению роста биомассы (а также к повышению выхода масла). Однако масло, полученное в таких условиях, имеет более низкие уровни содержания АРА-остатков в масле. Ферментация при высоких рН (рН = 7-7,5), напротив, приводит к повышенным уровням содержания АРА в масле, но к замедленному росту биомассы. В предпочтительном варианте ферментацию данного изобретения осуществляют при регулированном рН, при этом рН является низкой на начальных стадиях ферментации и высокой на поздних стадиях. Начальные стадии включают периоды быстрого (экспоненциального) роста, в процессе которого происходит активное потребление питательных веществ, поздние стадии включают стационарную фазу, когда деление клеток приостанавливается, обычно вследствие недостатка одного или более питательных веществ, при этом наблюдается максимальный выход продукта, т.е. масла, обогащенного АРА. Анализ может осуществляться контролированием рН ферментационной среды на уровнях, которые достигаются в двух или более стадиях, охватывающих весь период ферментации.
Аналогично было установлено, что сохранение высоких уровней содержания в среде растворенного кислорода (И.О.) (например, более 40% относительно насыщения раствора воздухом) будет приводить к снижению ингибирования роста благодаря высоким уровням содержания азотсодержащего питательного вещества и/или вследствие повышения относительного уровня содержания остатков АРА в масле. Можно поддерживать высокий уровень содержания И.О. повышением давления в емкости (нагнетанием большего количества воздуха в пространстве под верхней крышкой бродильного аппарата), повышением скорости перемешивания (например, повышением скорости вращения гонка), увеличением аэрации (т.е. повышением количества воздуха, проходящего через объем бродильного аппарата в определенное время, обычно выражаемую в виде повышения УУМ, объемов воздуха на объем бродильного аппарата в минуту) и/или повышением содержания О2 в барботируемом газе. Установлено, что ферментация в этих условиях проходит с повышенным использованием углерода, приводя к большей конечной концентрации биомассы и большей выработки в среде масла, обогащенного АКА. В частности, ферментации, в которых используются одна или большее количество указанных выше модификаций, приводят к выработке экстрагируемого триглицеридного масла, содержащего, по меньшей мере, 40% остатков ЛКЛ, и предпочтительно, по меньшей мере, 50% остатков АКА.
В особенно предпочтительном воплощении среда ферментации включает углеродсодержащее питательное вещество в количестве, не менее 80 г/л глюкозы, и азотсодержащее питательное вещество в количестве не менее 16 г/л дрожжевого экстракта, и после стериллизации рН среды доводится до значения от 5 до 6. После инокуляции рН среды контролируется и поддерживается на первоначальном уровне или немного выше. Когда уровень содержания углеродсодержащего питательного вещества падает до уровня менее или равного 60 г глюкозного эквивалента/литр (обычно приблизительно через 48 ч), выбранную точку для контроля рН меняют до ее значения более или равного 6. В это время или приблизительно в то время, когда скорость поглощения кислорода (и/или скорость выделения диоксида углерода, СЕК) достигает максимума (обычно спустя приблизительно 72 ч), выбранную точку для контроля рН повышают до значения 6,5-7 (обычно, постепенно, например, со скоростью приблизительно 0,1 единиц значения рН в час). Затем на конечных стадиях процесса ферментации рН контролируют для поддержания ее на уровне ниже приблизительно рН = 7-7,5.
Для этого воплощения уровень содержания растворенного кислорода в среде (Ό.Ο.) сохраняется около или выше 40% от уровня насыщения раствора воздухом, предпочтительно посредством последовательного повышения емкостного давления до 75,8 кПа, повышением скорости перемешивания до эквивалентного приблизительно движению кончика мешалки со скоростью 300 см/с, повышением аэрации до приблизительно 0,5 объемов воздуха на объем ферментера в минуту. После периода экспоненциального роста и высокой скорости потребления О2 рост (и поглощение О2) будет снижаться. Перемешивание/аэрацию можно снизить в этой точке, в то время как Ό.Ο. сохраняют на высоком уровне, обычно выше приблизительно 40% от насыщения воздухом.
Оптимизацией условий ферментации М. а1р1па, как описано выше, можно получить очень высокие выходы биомассы, содержащей, 20-60% масла в биомассе, где 25-70% (мас.) составляют остатки АКА в триглицеридной форме. Биомасса (и масло) могут собираться как описано. Предпочтительно биомасса будет собираться из среды ферментации в пределах 48 ч после достижения максимальной продуктивности, измеренной в виде АКА/д/день.
Сбор может выполняться любым подходящим способом, таким как, например, фильтрование, центрифугирование или распылительной сушкой. Ввиду низкой стоимости фильтрование может быть предпочтительным.
После сбора мицельный корж можно подвергать экстрагированию. Мицельный корж представляет собой биомассу, полученную в результате сбора клеток, выросших в культуре, он может быть рыхлым или спрессованным, в виде порошка или в виде сгустка. Необязательно корж может содержать некоторое количество остаточной воды, удаляемой перед экстракцией вакуумной сушкой, сушкой в псевдоожиженном слое, распылительной сушкой или лиофилизацией. В этом случае для экстракции масла, содержащего АКА, предпочтительно применять неполярные растворители. Хотя подходящим является любой неполярный растворитель, предпочтительным является гексан.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения масло экстрагируют из высушенной биомассы мокрым дроблением или перколяцией свежеперегнанным гексаном. Растворитель обычно добавляют при соотношении растворитель:биомасса, равном приблизительно 5:1 (мас./мас.). После мокрого дробления частицы твердого вещества отделяют от растворителя декантированием или центрифугированием. Преимущественно сохранять экстракт, содержащий растворитель (мисцеллу), анаэробно во избежании окисления остатков ненасыщенных жирных кислот в масле. Для получения технического (сырца) масла грибов из мисцеллы удаляют растворитель.
Техническое масло грибов, экстрагированное из биомассы грибов неполярными растворителями, может быть мутным, особенно в том случае, когда биомассу измельчают. Это объясняется образованием микрочастиц в ходе измельчения, таких как фрагменты клеточной стенки и растворимые полисахариды. Осветление такого мутного масла может выполняться растворением технического масла в более полярных растворителях, таких как ацетон или спирт. В предпочтительном воплощении технический масляный экстракт грибных мицелий дополнительно осветляют экстракцией/осаждением в ацетоне. Ацетоновую мисцеллу получа13 ют добавлением ацетона к мутному экстракту технического масла (предпочтительно до получения содержания приблизительно 20% масла; т.е. приблизительно 4 объема ацетона на объем технического масла), тщательным перемешиванием и оставляя смесь стоять в течение периода времени, достаточного для осаждения тонкоизмельченных частиц (обычно приблизительно в течение одного часа при комнатной температуре). Ацетоновую мисцеллу, содержащую масло, осветляют центрифугированием и/или фильтрованием, и затем удалением растворителя для получения масла грибов, осветленного ацетоном. Масло грибов, осветленное ацетоном, является предпочтительным для дальнейшей технологической переработки (например, рафинирования, отбеливания и устранения запаха общеизвестными способами), ввиду того, что мелкие частицы, полученные в процессе экстракции грибной биомассы, будут препятствовать процессам очистки, если они не удалены на стадии применения ацетона.
Другое предпочтительное воплощение включает экстракцию сухой биомассы противотоком, которую можно проводить например, в аппарате для экстракции, выпускаемом Сго\уп 1гоп№огк (Сго\уп Магк ΙΥ) или Ргепсй, 1пс., который обычно не применяется для экстракции растительных масел, но разработан для экстракции грязи и почвы. Хотя эффективность экстракции не является столь высокой без повторного размола биомассы, методика противоточной экстракции имеет преимущество, которое заключается в получении менее мелких частиц, посредством чего снижается техническая трудность выделения чистого рафинированного масла.
В соответствии с другим способом, влажный корж, который обычно содержит приблизительно 30-50% твердых веществ, можно измельчать и экстрагировать непосредственно с использованием полярных растворителей, таких как этанол или изопропиловый спирт, или с помощью жидкостной экстракции в сверхкритических условиях такими растворителями, как СО2 или N0. Предпочтительно коржи перед экстракцией дробят. Преимущественно данное изобретение дает возможность экономически использовать методы суперкритической экстракции. МсНцдй, е1 а1., 8ирегсгйюа1 Ρΐιιίύ ЕХтасИоп, ВШепуоПк (1986). Такие способы известны квалифицированным специалистам и применяются в настоящее время, например, для декофеинирования зерен кофе.
Предпочтительный способ водной экстракции включает смешение мицельной биомассы с полярным растворителем изопропиловым спиртом в подходящем реакторе. Такие реакторы известны. Необходимо применение от трех до шести частей растворителя на часть биомассы. Более предпочтительно смешение проводят в атмосфере азота или в присутствии антиоксидантов для предупреждения окисления АКА в липидном экстракте. В данном описании термины липидный экстракт, масло, липидный комплекс и грибное масло используются взаимозаменяемо.
После экстракции смесь может быть отфильтрована для удаления биомассы из растворителя, содержащего липидный экстракт. На этой стадии биомассу можно выделять и использовать в качестве пищевой добавки. В данном описании термин пищевая добавка относится к пище или добавке, предназначенной для смешения с обычной пищей, такой как злаки и т.д., и которая может предназначаться для животных.
Растворитель отделяют от липидного экстракта, и он также может быть извлечен методом испарения в подходящий коллектор для повторного применения, оставляя экстракт, который в данном описании называется техническим маслом. Применение изопропилового спирта в качестве растворителя приводит к удалению любой остаточной воды из технического масла, так как при испарении удаляется аэротропная вода/изопропиловый спирт, которая образуется самопроизвольно.
Несмотря на то, что техническое масло может использоваться без дальнейшей обработки, оно также может подвергаться дополнительной очистке. На этой стадии дополнительной очистки могут использоваться процессы, которые используются для приготовления лицитина из растительных продуктов и которые хорошо известны квалифицированным специалистам. Такие процессы не изменяют химически или ковалентно липиды, содержащие АКА, или саму АКА.
Выходы изменяются, но обычно составляют приблизительно 5 г фосфолипида, содержащего АКА, на 1 00 г высушенных мицелий. В случае применения М. а1рша дополнительно можно получать 10-50 г триглицерида на 100 г сухих мицелий. Для введения людям может использоваться либо техническое масло, либо очищенный продукт. Оба эти продукта включаются в определенное АКА8С0. используемое в данном описании.
Наиболее предпочтительным предметом данного изобретения является обеспечение таких добавок для применения в детских смесях, что концентрация АКА в такой смеси близко приближается к концентрации АКА в женском грудном молоке. В таблице 2 представлено сравнение состава жирных кислот в АКА8С0, в женском грудном молоке и в детской смеси, не содержащей и содержащей АКА8С0.
Таблица 2. Состав жирных кислот полученного масла грибов и женского грудного молока.
Жирная кислота АКА8СО Рецептура детского питания Детское питание + Масло Женское грудное молоко
8:0 - 24,1 23,6 0,35
10:0 - 17,7 17,3 1,39
12:0 - 14,9 14,6 6,99
14:0 4,6 5,8 5,8 7,96
16:0 16,0 6,8 7,0 19,80
16:1 3,2 0,2 0,3 3,20
18:0 - 2,3 2,3 5,91
18:1 26,4 10,0 10,3 34,82
18:2п6 9,9 17,4 17,3 16,00
18:3п3 4,1 0,9 1,0 0,62
20:1 2,2 0,1 0,14 1,10
20:2п6 - - - 0,61
20:3п6 1,4 - 0,03 0,42
20:4п6 32,0 - 0,64 0,59
20:5п3 - - - 0,03
22:1 - - - 0,10
22:4п6 - - - 0,21
22:5п6 - - - 0,22
22:6п3 - - - 0,19
Из таблицы видно, что количество АКА, присутствующей в детской смеси с добавлением АКА8СО близко приближается к содержанию ЛКЛ в женском грудном молоке. Кроме того, общий состав жирных кислот в детской смеси не значительно изменяется при добавлении АКА8СО. Обычно можно применять от приблизительно 50 до приблизительно 1000 мг АКА8СО на литр детской смеси. Конкретное нужное количество АКА8СО будет зависеть от содержания АКА. Оно может изменяться от приблизительно 10 до приблизительно 70% жирных кислот в масле. Однако обычно содержание АКА составляет приблизительно 30-50%. Предпочтительно масло, используемое для добавления в детскую смесь, содержит по меньшей мере 40% остатков жирных кислот в виде остатков АКА, более предпочтительно по меньшей мере 50% в виде остатков АКА. В том случае, когда содержание АКА составляет приблизительно 30%, особенно предпочтительная доза для добавления составляет приблизительно от 600 до 700 мг АКА8СО на литр детского питания. При такой дозе добавления предварительно приготовленные жировые компоненты детской смеси, такой как §1т11ас (Кокк ЬаЬога1опс5. Со1итЬик, ОЫо), разбавляются только одной частью АКА8СО на пять частей жировых компонентов смеси. Аналогично дозы разбавления можно вычислить для масел с более высоким содержанием АКА. Предпочтительно, АКА8СО практически не содержит ЕРА.
Когда в описанном процессе используется Ру1Ыит шкМюкит, экстрагированное масло, содержащее АКА, преимущественно представляет собой фосфолипид. Однако было установлено, что значительное количество триглицерида с высоким содержанием остатков АКА может также выделяться из выращенного Р. шкШокит, как описано выше. Когда в данном процессе используется МоШегеИа а1р1иа, масло, содержащее АКА, преимущественно представляет собой триглицерид. Обе формы АКА8СО полезны в качестве добавок в детскую смесь. Первый обеспечивает в смеси наличие не только АКА, но и эмульгатора, например, фосфатидилхолина, который обычно добавляют в коммерческие смеси. Масло из М. а1р1иа, вероятно, является более экономичным для получения.
Масло, полученное в соответствии с данным изобретением, содержащее АКА, имеет разнообразное применение в дополнение к его применению в качестве добавки для детской смеси. Специалистам хорошо известно множество разных патологий, связанных с недостатком АКА, таких как маразм (Уа.)гекмщт, е! а1.. Ме1аЬойкт 39:779-782 (1990), аллергические расстройства (Ме1шк, В., Мапа1кксйт. КшбегйеШа, 138: 162-166 (1990), заболевание печени, фенильная кетонурия (рйеиу1 ке1оишга), шизофрения, поздняя дискинезия или различные перокисомальные заболевания. В одном воплощении данного изобретения эти патологии лечат введением фармацевтически эффективного количества масла данного изобретения. Обычно фармацевтически эффективное количество представляет собой количество, которое необходимо для нормализации содержания АКА в сыворотке крови. Особенно предпочтительным для дополнения к лечению таких патологий является описанное выше масло с высоким содержанием АКА, в частности, масла, содержащие, по меньшей мере, 40% остатков АКА, или, более предпочтительно 50% остатков АКА. Масло можно применять энтерально, локально или парентерально, в зависимости от выбора лечащего врача.
Инкапсулирование, как известно, представляет собой эффективный способ энтерального введения. Капсулы, содержащие масло грибов, могут вводиться тем пациентам, которым требуется или необходимо добавление АКА в пищу. Такой способ особенно эффективен для введения ЛКЛ беременным или кормящим женщинам.
В тех случаях, когда АКА8СО вводится для борьбы с патологиями, вызванными недостатком АКА, должно вводиться фармацевтически эффективное количество. Это количество может определяться без проведения эксперимента. Обычно количество, которое будет нормализовать содержание АКА в сыворотке крови, составляет 0,5 - 2,0 г/день.
В другом воплощении данного изобретения предлагаются косметические композиции, содержащие АКА8СО, такие как описанные выше масла с высоким содержанием АКА. Косметические композиции относятся к продуктам, применяемым в качестве косметических средств. Предпочтительный пример такой композиции представляет собой крем от морщин. Такие косметические композиции обеспечивают эффективные средства местного применения АКА на коже для сохранения цвета кожи.
Изобретение, описанное в общих чертах, иллюстрируется далее при помощи конкретных примеров, не ограничивающих его область.
Пример 1. Получение липида Р. иМбюкит и добавление его в детское питание (детскую смесь)
В бродильный аппарат объемом 80 л (аппарат большого объема) помещают 51 л водопроводной воды, 1,2 кг глюкозы, 240 г дрожжевого экстракта и 1 5 мл антипенной добавки МА2И 2108. Аппарат стериллизуют при температуре 121°С в течение 45 мин. В процессе стериллизации добавляют дополнительные 5 л конденсата. рН смеси доводят до 6,2 и затем добавляют приблизительно 1 л инокулята ( с плотностью клеток 5-10 г/л) РуШшт ткИюкит (АТСС#28251). Скорость перемешивания доводят до 125 об/мин (линейная скорость кончика мешалки - 250 см/с) и устанавливают скорость аэрации на уровне 1 8 СЕМ (стандартный кубический фут в минуту - 0,471947 дм3/с = 471,947 10-6м3/с). Спустя 24 ч скорость аэрации повышают до 3 8 СЕМ (3 стандартных кубических фута в минуту = 1,415841 дм3/с = 1,415841 10-3 м3/с). На 28 часу добавляют дополнительные 2 л 50%-ного сиропа глюкозы (1 кг глюкозы). На 50 часу собирают полученный продукт, выход составляет приблизительно 2,2 кг влажного продукта (приблизительно 15 г сухого веса) на литр. Перед сушкой вымораживанием собранную биомассу отжимают на вакуумном фильтре для получения брикета с высоким содержанием твердого вещества (50% твердого вещества).
Высушенную биомассу измельчают с помощью ступки и пестика и экстрагируют гексаном из расчета 1 л гексана на 200 г сухой биомассы при комнатной температуре и при непрерывном перемешивании в течение 2 ч. Затем смесь фильтруют и фильтрат упаривают с получением приблизительно 5-6 г технического масла на 100 г сухой биомассы. После этого биомассу повторно экстрагируют этанолом из расчета 1 л этанола на 20 г сухой биомассы в течение 1 ч при комнатной температуре, фильтруют и растворитель упаривают с получением дополнительных 22 г технического масла из расчета на 1 00 г сухой биомассы. Вторая фракция представляет собой главным образом фосфолипиды, в то время как первая фракция содержит смесь фосфолипидов и триглицеридов. Соединенные фракции полученного масла содержат приблизительно 30-35% арахидоновой кислоты, и ЕРА не обнаруживается. Это масло по каплям добавляют в коммерческое детское питание 81тЛас (Кокк ЬаЪогаЮпек, Со1итЪик, ОЫо) в дозе 60 мг на литр приготовленной среды.
Пример 2. Получение липида М. а1р1па и добавление его в детское питание.
МогЦегс11а а1р1па (АТСС #42430) выращивают в качалочной колбе объемом 2 л, содержащей 1 л водопроводной воды и 20 г среды картофельной декстрозы. Культивирование проводят в течение 7 дней в колбе при постоянном перемешивании на качалке при температуре 25°С. После сбора культуры центрифугированием биомассу сушат вымораживанием, в результате получают приблизительно 8 г липидосодержащих мицелий. Мицелии экстрагируют, используя гексан, как в примере 1 , в результате получают 2,4 г технического масла. Это масло содержит приблизительно 23% арахидоновой кислоты, и его по каплям добавляют в коммерческое детское питание 8иш1ас в концентрации 1 000 мг/л.
Пример 3. Получение большого количества арахидоновой кислоты с использованием М. а1р1па.
В ферментер для инокулирования, содержащий среду ΟΥΕ (50 г/л декстрозы и 6 г/л ТакЮпе 154), вносят инокулят М. а1рша. Температуру ферментации поддерживают на уровне 28°С, начальная скорость перемешивания 130160 см/с, начальное давление в аппарате 41,4 кПа и начальная скорость аэрации 0,25 УУМ (объем воздуха на объем ферментера в минуту). Перед стериллизацией рН среды доводят до 5,0, а после стериллизации на начальной стадии ферментации рН доводят до 5,5. Кислотность среды поддерживают на уровне рН не менее 5,5 с помощью 8Н ЫаОН. Содержание кислорода поддерживают на уровне И.О. не менее 40% регулировкой перемешивание/аэрация в следующей последовательности: повышают емкостное давление до 75,8 кПа, повышают скорость перемешивания до скорости движения кончика мешалки до 175 см/с, и повышают аэрацию до 0,5 УУМ. Пенообразование контролируют добавлением при необходимости антипенной добавки Эо\у 1520-И8 (приблизительно 0,1 мл/л антипенной добавки следует вводить в среду перед стериллизацией для предотвращения ценообразования).
Перенос инокулята из бродильного аппарата для получения посевного инокулята в основной бродильный аппарат осуществляют в пределах 12 ч после возрастания рН до значения более 6,0.
Основной бродильный аппарат содержит СУЕ среду ( 50 г/л декстрозы и 6 г/л Талоне 154), глюкозу стериллизуют отдельно и добавляют в главный бродильный аппарат после стериллизации. Температуру ферментации поддерживают на уровне 28°С, начальная скорость перемешивания равна 1 60 см/с, начальное емкостное давление - 41,4 кПа и начальная скорость аэрации - 0,5 УУМ. После стериллизации на начальной стадии ферментации рН устанавливают на уровне 5,5 и поддерживают рН на уровне >5,5 при помощи 8Н ΝαΟΗ. рН дают возможность возрасти в процессе стационарной фазы (начиная приблизительно с 24 ч после инокуляции), но поддерживают рН ниже 6,8 при помощи добавления Н28О4. Содержание кислорода сохраняют на уровне Ό.Ο. не менее 40% последовательно повышая емкостное давление до 75,8 кПа, повышая скорость перемешивания до получения скорости движения конца гонка, равной 1 75 см/с, и повышая скорость аэрации до 0,5 УУМ. Пенообразование контролируют добавлением при необходимости антипенной добавки Όθ№ 1520-И8. (Приблизительно 0,1 мл/л антипенной добавки следует вводить в среду перед стериллизацией для предотвращения ценообразования).
Каждые 12 ч отбирают образцы культуры для анализа биомассы и жирных кислот, и сбор начинают через 3-4 дня после возрастания рН до 6,5. Плотность сухой биомассы должна составлять не менее 8,5 г/л. Концентрация глюкозы в бульоне должна снижаться с 50 г/л до не более 25 г/л. При сборе весь бульон с культурой центрифугируют на роторной центрифуге для отделения мицелий от маточной среды, и биомассу сушат.
Пример 4. Повышение выхода биомассы из М. а1рша - первая серия опытов.
М. а1р1па выращивают в бродильном чане с перемешиванием объемом 20 л, инокулируя культурой, выращенной в качалочной колбе в соответствии с методикой примера 3. Культура М. а1р1па в 65 г/л глюкозы (81а1еубех) и 6 г/л дрожжевого экстракта (Талоне 154) приводит к получению биомассы с плотностью 12 г/л. Добавление дополнительно 6 г/л Талоне 154 через 16 ч приводит к получению биомассы с плотностью 1 8 г/л биомассы.
Пример 5. Повышение выхода биомассы из М. а1р1па - вторая серия опытов.
Эксперименты проводят с целью дальнейшего увеличения количества биомассы дополнительным добавлением Талоне 154. Эти эксперименты проводят в аппаратах для ферментации 2х20 л в течение 168 ч. В обоих аппаратах начальная концентрация глюкозы составляет 100 г/л (а не 65 г/л как в примере 4). В один ферментер добавляют 3х6 г/л Талоне 154, а в другой добавляют 4х6 г/л. Дрожжевой экстракт приготавливают в виде концентрированного раствора, выдерживают в автоклаве и добавляют в ферментер в разное время после стериллизации.
Для приготовления инокулята рабочие семена (1 мл мацерированных мицелий) инокулируют в 2 колбы, каждая из которых содержит 50 мл среды СУЕ (100 г/л 81а1еубе.х. 6 г/л Талоне 1 54) и выращивают в течение 4 дней при температуре 28°С при перемешивании со скоростью 1 50 оборотов в минуту. Спустя 4 дня бульон содержит биомассу в виде пеллет (гранулированные частицы), с диаметром 2-5 мм. Рост в этих колбах происходит медленнее, чем ожидалось, возможно вследствие более высокой концентрации глюкозы. Биомассу мацерируют в течение 2х3 с в смесителе Варинга и 25 мл мацерированной культуры используют для инокуляции каждой из 2х2,8 л колб Варинга, чистый объем которых составляет 800 мл (в более ранних экспериментах использовали 1 0 мл мацерата). Количество инокулята повышают, ввиду меньшей плотности биомассы в колбе с посевным материалом, поэтому ожидается, что рост в колбах Фернбаха может протекать медленнее, вследствие более высокой концентрации глюкозы. Среда в колбах Фернбаха представляет собой декстрозу (81а1еубех) 100 г/л и дрожжевой экстракт (Талоне 154) - 8 г/л. Декстрозу и дрожжевой экстракт отдельно автоклавируют в течение 40 мин. Температуру ферментации посевного материала поддерживают на уровне 28°С, скорость перемешивания - на уровне 100150 об/мин.
Спустя 44 ч культуру в колбах Фернбаха инокулят - переносят в бродильные аппараты (2х20 л). Инокулят находится в форме очень рыхлых гифальных агрегатов, и плотность биомассы составляет приблизительно 5,2 г/л.
Бродильные аппараты на станциях 14 и 15, содержащие 1,6 кг (10%) декстрозы (81а1еубех) и антипенную добавку Ма/и 204 (1,6 г растворяют в 12,5 л КО. Н2О) стериллизуют в течение 45 мин при 122°С. 800 мл инокулята (5%) затем добавляют в каждый аппарат (0 ч). Параметры работы аппаратов:
температура: 28°С;
рН контролируется на уровне 5,5 с помощью 2Н №ЮН и 2Н Н28О4;
аэрация: 0,5 УУМ; противодавление: 0,2 бар;
перемешивание (начальное) 80 см/с и
Ό.Θ. : контролируется выше 40%.
Станция 14 : 3 х 6 г/л Талоне 154.
Дрожжевой экстракт (Талоне 154) растворяют до получения концентрации 96 г/л и выдерживают в автоклаве в течение 1 ч. Дрожжевой экстракт подают в количествах 3х1 л (1,8%) на 0, 20 и 26 ч. Через 15 ч после добавления первой порции дрожжевого экстракта ΌΟ снижают до значения ниже 40%, а скорость перемешивания увеличивают до 175 см/с постепенно с 15 до 22 ч. ΌΘ затем контролируют, обогащая поток воздуха кислородом: кислород добавляют в поток воздуха с 23 до 72 ч. Начиная с 36 ч скорость перемешивания дополнительно повышают для обеспечения надлежащего смешения. К 48 ч перемешивание повышают до 200 см/сек, на 72 часу - до 250 см/с, и на 80 часу - до 280 см/с. К 1 20 часу перемешивание повышают до 290 см/с для ускорения адекватного температурного контроля. На 1 44 часу перемешивание снижают до 280 см/с.
Станция 15: 4х6 г/л Талоне 154.
Дрожжевой экстракт (Талоне 154) 384 г растворяют до получения концентрации 96 г/л, выдерживают в автоклаве в течение 1 ч. Дополнительное добавление дрожжевого экстракта производят в количестве 4 х 1 л (2,4%) на 0, 20, 26 и 32 ч.
Через 16 ч ΌΘ снижают до значения ниже 40%, а скорость перемешивания повышают до 175 см/с к 23 ч. Затем контролируют ΌΘ до более 40%, обогащая поток воздуха кислородом, кислород добавляют в поток воздуха в течение периода с 23 до 72 ч. Начиная с 36 ч скорость перемешивания дополнительно повышают для обеспечения надлежащего смешения. К 48 часам скорость перемешивания увеличивают до 210 см/с, к 72 часам - до 260 см/с, к 80 часам до 290 см/с. С 90 часа скорость перемешивания уменьшают до 280 см/с, и к 144 часу снижают до 260 см/с.
Наблюдения.
При инокулировании биомасса в обоих аппаратах находится в форме очень рыхлых гифальных агрегатов. К истечению примерно 24 ч начинают образовываться гранулы. Гранулы имеют небольшой размер (1-3 мм) с небольшиТаблица 3. Изменение состава в ми расположенными в центре ядрами и широкими рыхлыми перифериями. К 72 ч периферии становятся более узкими, и присутствие большого количества рыхлых гифальных фрагментов указывает на то, что гранулы фрагментируются. К 168 часу ядра гранул достигают от 0,5 до 2 мм в диаметре, периферии уменьшаются с объединением гиф в толстые цепи, и присутствует большое количество концентрированных гифальных агрегатов.
В течение первых 24 ч в аппаратах происходит очень слабое пенообразование. Количество пены затем возрастает и контролируется добавлением антипенной добавки, когда величина пены становится более чем 2-4 см. Пенообразование несколько спадает к 48 ч, хотя спорадически вспыхивает. Оба аппарата пенообразуют в выходящие фильтры один раз во время процесса ферментации. Необходимо добавление в аппараты приблизительно 150 мл антипенной добавки.
В обоих аппаратах накапливается значительное количество биомассы в головном пространстве. Это явление является обычным для мицельной ферментации в небольших аппаратах с большим соотношением площадь поверхности/объем. Оказалось, что количество полученной биомассы на станции 15 возрастает в течение последних 24 ч, когда понижение объема и уровня жидкости в аппарате приводит к значительному разбрызгиванию (уровень жидкости достигает верха гонка). Конечный объем в аппаратах после 1 68 ч составляет приблизительно 1 3 л.
Исследования под микроскопом показывают, что к 72 ч большое количество остатков присутствует в культуральном бульоне, и в некоторых случаях просматриваются поврежденные и атрофированные верхушки грибов. Присутствие маслянистых капель в ципоплазме демонстрируется наличием красноватых пятен спустя 168 ч. Масляные капли очень маленького размера присутствуют в большом количестве в отличие от масляных капель большого размера, которые встречаются лишь иногда. Выход биомассы и масла, а также потребление источников углерода и азота представлен в таблице 3. мости от времени ферментации
Станция 14 3 х 6 г/л дрожжевого эстракта
Час Глюкоза (г/л) ΝΗ3(ΜΜ) Сухой вес (г/л) Содержание масла (% сух. вес) Содержание ЛКЛ (% от масла) Производительность (г масла/ л/д)
0 105,0 3,0 0,4
24 97,4 5,9 3,3 4,8% 23,5% 0,16
48 73,7 0 18,3 7,9% 23,4% 0,72
72 60,3 0 21,0 14,4% 25,4% 1,01
96 48,0 0 22,3 18,3% 27,5% 1,02
120 40,0 25,2 21,1% 29,4% 1,06
144 34,7 26,6 21,8% 30,9% 0,97
168 29,0 27,5 26,1% 31,3% 1,03
Станция 15 3 х6 г/л дрожжевого эстракта
Час Глюкоза (г/л) ΝΗ3 (мМ) Сухой вес (г/л) Содержание масла (% сух,вес) Содержание АКА (% от масла) Производительность (г масла/л/д)
0 109,0 2,9 0,4
24 103,0 5,1 3,4 4,3% 21,9% 0,15
48 74,1 0,3 23,6 6,8% 23,1% 0,80
72 51,4 0 29,8 10,3% 23,9% 1,02
96 40,0 0 32,7
120 27,9 31,7 18,2% 26,6% 1,15
144 19,8 33,5 20,7% 28,1% 1,16
168 11,0 29,9 21,7% 29,9% 0,93
Пример 6. Повышение выхода биомассы из М. а1рша - третья серия опытов.
В этой серии опытов предпринимается попытка дальнейшего повышения количества продукта повышением содержания фосфата и минеральных веществ. Методика опытов по существу повторяет методику примера 5 за исключением того, что декстрозу и антипенную добавку Ма/и 204 растворяют в 11,5 л водопроводной воды, а не в 12,5 л, оставшийся объем оставляют для растворов солей, которые добавляют через 30 ч. На станции 14 добавляют Ре, Ζη и Си, на станции 15 добавляют фосфат, а также Ре, Ζη и Си.
Станция 14: 3х6 г/л ТаЧопе 154.
Дрожжевой экстракт растворяют до концентрации 96 г/л в количестве 3 х 1 л и выдерживают в автоклаве 1 ч. Аликвоты в объеме 1 л раствора дрожжевого экстракта добавляют на 0,22 и 28 ч процесса ферментации. На 22 и 28 ч скорость выделения диоксида углерода (СЕК, показывает скорость метаболизма в бродильном аппарате) возрастает экспоненциально, и в среду ферментации необходимо добавлять основание.
Солевой исходный материал содержит:
РеС13 6Η2Ο 4 8 0 мг
Ζηδθ4 7Η2Ο 2 4 0 мг
СиЮд 5Н2Ο 1 6 мг
РеС1 растворяют в 1 л 5 г/л раствора лимонной кислоты. Остальные соли добавляют, рН раствора доводят с помощью ΝαΟΗ до 4,5. Соли добавляют на 30 часу.
Начальная скорость перемешивания для аппарата ферментирования составляет 50 см/с, а не 80 см/с, как планировалось вначале, ввиду того, что исходный уровень жидкости в аппарате (13 л) лишь частично закрывает верхнюю часть мешалки (гонка), и при более высокой скорости перемешивания разбрызгивание происходит в значительной степени. Через 16 ч после начала ферментации Ό.Ο. снижают до уровня менее 40%, скорость перемешивания увеличивают постепенно до 175 см/с к 28 часам. Затем Ό.Ο. поднимают и поддерживают на уровне выше 40%, добавляя в поток воздуха кислород. К 46 часу скорость перемешивания увеличивают до 190 см/с для получения хорошего смешения. Скорость перемешивания повышают далее до 200 см/с к 48 часам, до 220 см/с к 51 часу, до 235 см/с к 53 часу, до 250 см/с к 56 часу, до 260 см/сек к 57 часам и до 280 см/с к 70 часам. Даже при такой скорости перемешивания (450 об/мин) смешение является слабым. Несмотря на поддерживание минимального критерия некоторое движение, оборот биомассы происходит очень медленно, и некоторые зоны застаиваются. Добавление нескольких капель антипенной добавки снижает высоту пены и удаляет застойные зоны. На 116 часу скорость перемешивания снижают до 265 см/с, и на 1 20 часу ее продолжают снижать до 250 см/с.
Пенообразование начинается в аппарате ферментации приблизительно на 1 8 часу. Пенообразование контролируют добавлением антипенной добавки. Первый раз антипенную добавку вносят на 20 часу. К 24 часам пенообразование является значительным и требуется регулярное добавление антипенной добавки. К 72 часам пенообразование по большей части спадает. Однако все еще необходимо редкое добавление антипенной добавки.
К 24 часу биомасса имеет форму очень рыхлых гранул (1-2 мм) и рыхлых гифальных агрегатов. Наблюдается значительное количество клеточных остатков. К 48 часу биомасса имеет форму очень рыхлых гифальных агрегатов, очень маленьких гранул (1-2 мм) с очень небольшими ядрами и рыхлыми перифериями, и небольших компактных гранул (1-3 мм) без рыхлых периферий. К 96 часам биомасса имеет форму компактных округлых гранул (1-2 мм), иглообразных гранул (менее чем 0,5 мм) и рыхлых гифальных агрегатов. Красноватые пятна на 1 44 часу показывают присутствие множества очень маленьких капель масла в мицелиях.
Станция 15: 3х6 г/л ТаЧопе 154.
Дрожжевой экстракт растворяют до концентрации 96 г/л и выдерживают в автоклаве в течение 1 ч. Раствор дрожжевого экстракта добавляют на 0, 22 и 26 часу. На 22 и 26 часу СЕК возрастает экспоненциально, в среду ферментации необходимо добавлять основание.
Готовят солевые растворы, КН2РО4 7
РеС13 6Н2О 4 8
Ζηδθ4 7Н2О 2 4
Си8О4 5Н2О 1 содержащие: 7 г 0 мг 0 мг 6 мг
РеС13 растворяют в 500 мл раствора лимонной кислоты с концентрацией 5 г/л. Добавляют остальные соли, доводят рН до значения 4,5 с помощью ЫаОН. КН2РО4 растворяют в 500 мл водопроводной воды. Оба раствора выдерживают в автоклаве в течение 1 ч. Затем охлаждают до 23 °С, объединяют и добавляют в бродильный аппарат на 30 часу.
Начальная скорость перемешивания в ферментере составляет 50 см/с, а не 80 см/с, как планировалось сначала, так как начальный уровень жидкости в нем (13 л) лишь частично покрывает верхнюю часть мешалки, и большие скорости перемешивания приводят к значительно большему разбрызгиванию. На 16 часу ΌΌ. снижают до значения ниже 40%, скорость перемешивания постепенно повышают до 1 75 см/с на 27 часу. Затем Э.О. повышают до более 40%, добавляя кислород в поток воздуха. На 41 часу скорость перемешивания повышают до 200 см/с, т. е. до скорости, обеспечивающей перемешивание по крайней мере минимального количества. Далее скорость перемешивания повышают до 220 см/с на 42, до 230 см/с на 46 часу, до 235 см/с на 51 часу и до 240 см/с на 70 часу. При этой скорости перемешивания (41 0 об/мин) имеет место смешение от слабого до среднего. Поддерживают минимальный уровень движения биомассы. На 80 часу скорость перемешивания снижают до 205 см/с.
Пенообразование начинается в аппарате приблизительно на 1 8 часу. Пенообразование контролируют добавлением антипенной добавТаблица 4. Изменение состава ки. Первый раз антипенную добавку вносят на 17 часу процесса ферментации. На 20 часу происходит значительное образование пены в процессе ферментации, и оно требует регулярного добавления антипенной добавки. Пенообразование по большей части снижается на 72 часу. Однако эпизодическое внесение антипенной добавки все же необходимо.
К 24 часам биомасса имеет форму очень рыхлых гранул (1-2 мм) и рыхлых гифальных агрегатов. Наблюдается значительное количество клеточных остатков. К 48 часам биомасса имеет форму очень рыхлых гифальных агрегатов, очень небольших гранул (1-2 мм) с очень маленькими ядрами и рыхлыми перифериями, и небольших компактных гранул (1-3 мм) без рыхлых периферии. К 96 часам биомасса имеет форму округлых гранул (1-2 мм в диаметре), многие из которых имеют рыхлые ворсистые периферий, и имеет место множество рыхлых гифальных фрагментов. Красноватые пятна на 1 44 часу показывают присутствие множества очень маленьких капель масла в мицелиях, а также присутствие очень больших капель масла по всем другим мицелиям.
Процесс на станции 15, отличающийся от процесса на станции 1 4 только добавлением фосфата, показывает лучшее смешение по всему объему ферментации в общем случае при более низких скоростях. На станции 1 5 наблюдается также более рыхлая морфология биомасс. Выход биомассы и масла, а также потребление источника углерода приведены в таблице 4. Большее применение глюкозы (82 г/л для станции 15 по сравнению с 64 г/л для станции 1 4), большее накопление биомассы и присутствие больших капель масла в части мицелий характеризуют процесс ферментации, в котором присутствует большее количество фосфата.
ы в процессе ферментации
Станция 14 + соли
Час Глюкоза (г/л) Сухой вес (г/л) Содержание масла (% сух. вес) Содержание АКА (% от масла) Производительность (г масла/л/д)
0 116,0 1,1
24 101,0 1,8 1,2% 22,2% 0,02
48 84,0 14,3 6,2% 24,7% 0,44
72 60,0 24,5 10,6% 24,2% 0,87
96 45,0 28,2 15,5% 25,3% 1,09
120 34,0 28,9 18,1% 26,6% 1,05
144 27,0 30,8 20,8% 27,2% 1,07
Станция15 + соли + фосфаты
Час Глюкоза (г/л) Сухой вес (г/л) Содержание масла (% сух. вес) Содержание ЛКЛ (%от масла) Производительность (г масла/л/д)
0 113,0 0,4
24 101,0 2,1 1,1% 24,0% 0,02
48 74,0 21,7 8,1% 24,7% 0,88
72 51,0 26,2 19,9% 26,5% 1,74
96 31,0 30,1 25,5% 28,6%
120 18,0 33,8 31,7% 31,4% 2,14
144 6,0 34,5 36,0% 32,9% 2,07
Пример 7. Получение биомассы М. а1рша, содержащей арахидоновую кислоту, в большом количестве.
Бродильный аппарат для получения инокулята, содержащий СУЕ среду (50 г/л декстрозы и 6 г/л Талоне 154), инокулируют из культиватора. Температуру поддерживают на уровне 28°С и начальное перемешивание проводят со скоростью 130-160 см/с (приблизительно 43 об/мин). Начальное давление в аппарате 41,4 кПа и начальная скорость аэрации 0,25 УУМ. Перед стериллизацией рН среды доводят до 5,0, затем после стериллизации начальную рН среды в аппарате устанавливают на уровне 5,5. Содержание кислорода в среде поддерживают на уровне Ό.Ο. не менее 40% при помощи следующей последовательности операций: (ί) повышение давления в аппарате до 75,8 кПа, (ίί) повышение скорости перемешивания с 156 до 1 75 см/сек из расчета на скорость движения кончика мешалки, и (ίίί) повышение скорости аэрации до 0,5 УУМ. Пенообразование контролируют добавлением антипенной добавки Эо\у 1520-И8 при необходимости (приблизительно 0,1 мл/л антипенной добавки следует вводить в среду перед стериллизацией для предотвращения ценообразования). После инокуляции сохраняют рН среды на уровне не менее 5,5 с помощью 8Н ΝαΟΗ.
В течение 12 ч после возрастания рН до величины выше 6,0, содержание семенного ферментера переносят в главный ферментер. Среда основного ферментера содержит:
г/л декстрозы (ЛОМ);
г/л соевой муки (ΛΌΜ иийткоу);
г/л РеС13 6Н2О (31дта/А1бгюй);
1,5 мг/л ΖηδΟ4 7Н2О (31дта/А1бгюй);
мг/л биотина (81дта/А1бгюЬ)
0,1 мг/л СиЗО4 5Н2О (81дта/А1бг1сЬ);
мг/л тиамин НС1 (31дта/А1бгюй) мг/л пантотеновой кислоты (полукальциевая соль) (31дта/А1бгюй) (доводят рН до 4,85,0 перед стериллизацией).
Основной ферментер инокулируют средой из аппарата для получения инокулята (11,8%). Температуру в ферментере поддерживают на уровне 28°С. Начальная скорость перемешивания 162 см/с (примерно 23 об/мин), начальное давление в аппарате 41,4 кПа, начальная скорость аэрации 0,15 УУМ (300 5сГН стандартных кубических футов в час - 2,359735 дм3/с = 2,359735 10-3 м3/с).
Содержание кислорода в среде поддерживают на уровне Ό.Ο. не менее 40% ί) повышением давления в аппарате до 75,8 кПа, ίί) повышением скорости перемешивания до значения, при котором скорость движения кончика-мешалки равна 300 см/с (постепенно до около 30 см/с) и ίίί) увеличением скорости аэрации до 0,5 УУМ.
рН изменяют в соответствии со следующим протоколом:
- Начальную рН после стериллизации устанавливают на уровне 5,5. Поддерживание рН на уровне не менее 5,5 осуществляют с помощью 8Н ΝηΟΗ.
- Спустя 24-26 ч после инокулирования добавляют 2 г/л КН2РО4 (110 кг в приблизительно 700 л воды).
- Спустя 48 ч после инокулирования, если концентрация дестрозы составляет не более 60 г/л, изменяют рН, доводя ее значение до не менее 6,1.
- Спустя 72 ч после инокулирования начинают медленно со скоростью приблизительно 0,1 единиц рН в час повышать значение рН и доводят его до 6,6.
- Поддерживают значение рН ниже 7,3, добавляя при необходимости Η2δΟ4.
Каждые 1 2 ч отбирают образцы для анализа биомассы и содержания жирных кислот, и отбор начинают приблизительно через 3 дня после возрастания рН до значения не менее 6,6 (приблизительно через 6 дней после инокуляции). Плотность сухой биомассы должна составлять не менее 24 г/л. Концентрация декстрозы в бульоне должна падать с 80 г/л до не более 14 г/л. Сбор выполняют, пропуская цельный бульон культуры через барабанный вакуумфильтр для отделения мицелий от среды, содержащей небольшое количество оставшихся питательных веществ.
Результаты опытов в двух типичных ферментерах в соответствии с методикой данного примера приведены в таблицах 5 и 6.
Таблица 5. Процесс ферментации М. а1р1па
Культуральная среда = Глюкоза (80 г/л + Соевая мука (16 г/л) + Соли + Витамины
Час Глюкоза (г/л) ΝΗ3 (мМ) Сухой вес (г/л) Содержание масла (% сух. вес) Содержание АКА (% от масла) Производительность (г масла/л/д)
0 58,0
66 43,0 12,6 14,9% 33,7% 0,68
94 33,0 17,0 27,0% 40,0% 1,17
118 23,0 20,6 28,2% 42,6% 1,18
142 16,0 17,1 39,2% 44,2% 1,13
165 9,6 21,5 41,5% 45,5% 1,30
188 5,2 19,8 41,7% 47,3% 1,05
215 1,7 23,2 46,0% 48,9% 1,19
237 0,2 23,1 44,8% 51,2% 1,05
Таблица 6. Ферментация М.а1р1па
Культуральная среда = Глюкоза (65 г/л + Соевая Мука (16 г/л) + Соли + Витамины + Антибиотики
Час Глюкоза (г/л) ИН3 (мМ) Сухой вес (г/л) Содержание масла (% сух. вес) Содержание АКА (% от масла) Производи тельность (г масла/л/д)
0
65 36,0 13,0 8,2% 29,0% 0,39
90 23,0 12,0 18,0% 42,0% 0,58
115 15,0 14,0 30,0% 47,0% 0,88
139 9,0 15,0 32,0% 51,0% 0,83
171 4,0 17,0 36,0% 55,0% 0,86
209 1,4 12,0 36,0% 57,0% 0,50
243 0 14 37,0% 60,0% 0,51
187 0 13 34,0% 64,0% 0,57
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims (23)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Немодифицированное масло грибов Мотйетейа 8р., в котором не менее 40% остатков жирных кислот в составе триглицеридной фракции представляют собой остатки арахидоновой кислоты и общее количество остатков эйкозапентаеновой кислоты составляет не более одной пятой от общего количества остатков арахидоновой кислоты.
  2. 2. Немодифицированное масло грибов по п. 1, в котором не менее 50% остатков жирных кислот в составе триглицеридной фракции представляют собой остатки арахидоновой кислоты.
  3. 3. Немодифицированное масло грибов по любому из пп. 1-2, в котором общее количество остатков эйкозапентаеновой кислоты составляет не более одной десятой от общего количества остатков арахидоновой кислоты.
  4. 4. Способ получения немодифицированного масла грибов, содержащего арахидоновую кислоту, по любому из пп.1-3, включающий в себя осуществление следующих стадий:
    - культивирование грибов Мотйетейа 8р. в ферментере с культуральной средой в условиях аэрации при добавлении в культуральную среду в процессе ферментации источника углерода в количестве, эквивалентном, по меньшей мере, 80 г/л глюкозы, и источника азота в количестве, эквивалентном, по меньшей мере, 15 г/л дрожжевого экстракта, и поддержания рН среды в интервале между 5 и 6 на начальном этапе культивирования и в интервале между 7 и 7,5 - на конечном этапе культивирования;
    - сбор полученной биомассы и
    - выделение указанного масла, содержащего арахидоновую кислоту, из указанной биомассы.
  5. 5. Способ по п.4, отличающийся тем, что содержание растворенного кислорода в культуральной среде составляет, по меньшей мере, 35% от величины насыщения воздухом.
  6. 6. Способ по п.4, отличающийся тем, что источник азота делят на две или более аликвот, которые добавляют в ферментер в различное время культивирования, причем, по меньшей мере, одну аликвоту вносят в среду не одновременно с добавлением источника углерода.
  7. 7. Способ по любому из пп.4-6, отличающийся тем, что грибы Мотйетейа 8р. представляют собой грибы Могйегейа а1рша.
  8. 8. Способ по любому из пп.4-7, отличающийся тем, что неочищенное масло, содержащее арахидоновую кислоту, выделяют из биомассы экстрагированием неполярным растворителем и далее осветляют экстрагированием полярным органическим растворителем.
  9. 9. Способ по п.8, отличающийся тем, что неполярный растворитель представляет собой гексан.
  10. 10. Способ по п.8, отличающийся тем, что полярный растворитель представляет собой ацетон, или этанол, или изопропиловый спирт.
  11. 11. Способ обеспечения детского питания арахидоновой кислотой, предусматривающий добавление в него немодифицированного масла грибов в количестве, достаточном для обеспечения такого содержания арахидоновой кислоты, которое соответствует ее содержанию в женском грудном молоке, отличающийся тем, что в качестве немодифицированного масла грибов в детское питание добавляют масло по любому из пп.1-3.
  12. 12. Детское питание, включающее в себя арахидоновую кислоту в количестве, соответствующем содержанию арахидоновой кислоты в женском грудном молоке, причем указанное количество арахидоновой кислоты обеспечивается добавлением в детское питание немодифицированного масла грибов, отличающееся тем, что в детское питание добавлено немодифицированное масло грибов по любому из пп. 1-3.
  13. 1 3. Способ обеспечения человека дополнительным количеством арахидоновой кислоты, заключающийся во введении человеку, нуждающемуся в дополнительном количестве арахидоновой кислоты, композиции, содержащей немодифицированное масло грибов по любому из пп. 1 -3, в количестве, эффективном для обеспечения указанного человека дополнительным количеством арахидоновой кислоты.
  14. 14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что человеку, нуждающемуся в дополнительном количестве арахидоновой кислоты, вводят композицию, содержащую указанное масло в количестве, эффективном для обеспечения 0,2-0,8 арахидоновой кислоты в день.
  15. 15. Способ по любому из пп. 13-14, отличающийся тем, что указанную композицию вводят энтерально.
  16. 16. Способ по любому из пп. 13-14, отличающийся тем, что указанную композицию вводят парэнтерально.
  17. 17. Способ по любому из пп. 13-14, отличающийся тем, что указанную композицию вводят локально.
  18. 18. Способ по любому из пп. 13-14, отличающийся тем, что указанную композицию вводят беременной или кормящей женщине.
  19. 19. Способ по любому из пп. 13-14, отличающийся тем, что указанную композицию вводят человеку, страдающему неврологическим расстройством.
  20. 20. Способ по п.19, отличающийся тем, что неврологическое расстройство представляет собой отложенную дискинезию, шизофрению или пероксисомное расстройство.
  21. 21. Способ по любому из пп. 13-14, отличающийся тем, что указанную композицию вводят человеку, страдающему от заболевания, связанного с пониженным уровнем арахидоновой кислоты в сыворотке крови.
  22. 22. Способ по п.21 , отличающийся тем, что указанное заболевание представляет собой заболевание печени, фенилкетонурию или кистозный фиброз.
  23. 23. Косметическая композиция, включающая в себя немодифицированное масло грибов, отличающаяся тем, что в качестве указанного масла она содержит масло по любому из пп. 1 -2, причем указанное масло входит в состав косметической композиции в количестве, эффективном для содействия поддержания тонуса кожи, в том случае, когда она используется локально.
    Евразийский патент действует на территории всех Договаривающихся государств, кроме АМ, КС, ΜΌ.
EA199700090A 1995-01-03 1996-01-03 Немодифицированное масло грибов mortierella sp., способ его получения, способ обеспечения детского питания арахидоновой кислотой, детское питание, содержащее арахидоновую кислоту, способ обеспечения человека дополнительным количеством арахидоновой кислоты и косметическая композиция EA001036B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/367,881 US5658767A (en) 1991-01-24 1995-01-03 Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
PCT/US1996/000182 WO1996021037A1 (en) 1995-01-03 1996-01-03 Arachidonic acid and methods for the production and use thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA199700090A1 EA199700090A1 (ru) 1997-12-30
EA001036B1 true EA001036B1 (ru) 2000-08-28

Family

ID=23449013

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA199700090A EA001036B1 (ru) 1995-01-03 1996-01-03 Немодифицированное масло грибов mortierella sp., способ его получения, способ обеспечения детского питания арахидоновой кислотой, детское питание, содержащее арахидоновую кислоту, способ обеспечения человека дополнительным количеством арахидоновой кислоты и косметическая композиция

Country Status (19)

Country Link
US (1) US5658767A (ru)
EP (5) EP0800584B1 (ru)
JP (6) JP4014219B2 (ru)
KR (6) KR101033741B1 (ru)
CN (4) CN1175976B (ru)
AT (1) ATE239088T1 (ru)
AU (1) AU713567B2 (ru)
BR (1) BR9607179B1 (ru)
CA (1) CA2209513C (ru)
DE (2) DE800584T1 (ru)
DK (1) DK0800584T3 (ru)
EA (1) EA001036B1 (ru)
ES (1) ES2197233T3 (ru)
FI (2) FI117442B (ru)
HK (1) HK1085768A1 (ru)
NO (1) NO320117B1 (ru)
PL (1) PL187694B1 (ru)
PT (1) PT800584E (ru)
WO (1) WO1996021037A1 (ru)

Families Citing this family (178)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5340742A (en) * 1988-09-07 1994-08-23 Omegatech Inc. Process for growing thraustochytrium and schizochytrium using non-chloride salts to produce a microfloral biomass having omega-3-highly unsaturated fatty acids
US20060094089A1 (en) * 1988-09-07 2006-05-04 Martek Biosciences Corporation Process for the heterotrophic production of microbial products with high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US5583019A (en) * 1995-01-24 1996-12-10 Omegatech Inc. Method for production of arachidonic acid
EP1886679A3 (en) * 1995-06-07 2008-05-28 Martek Biosciences Corporation Methods for controlling highly unsaturated fatty acid content in various tissues
ATE315339T1 (de) † 1996-03-26 2006-02-15 Dsm Ip Assets Bv Späte zugabe von polyungesättigten fettsäuren in einem herstellungsverfahren von säuglingsnahrung
US6428832B2 (en) * 1996-03-26 2002-08-06 Dsm N.V. Late addition of PUFA in infant formula preparation process
US20030143659A1 (en) * 1996-03-28 2003-07-31 Hendrik Louis Bijl Process for the preparation of a granular microbial biomass and isolation of a compound thereform
JP3995290B2 (ja) 1996-08-23 2007-10-24 サントリー株式会社 オメガ９系高度不飽和脂肪酸及びそれを含有する脂質の製造方法
JP3792309B2 (ja) 1996-08-30 2006-07-05 サントリー株式会社 不飽和脂肪酸含有油脂の製造方法
JP4633204B2 (ja) * 1996-10-11 2011-02-16 サントリーホールディングス株式会社 アラキドン酸含有食用油脂およびそれを含有する食品
DK0960943T3 (en) * 1996-12-27 2014-02-24 Suntory Holdings Ltd MEDIA FOR CULTIVATION OF MICRO-ORGANISMS AND METHOD FOR PRODUCING unsaturated fatty acids or lipids containing DEM
AU6400098A (en) * 1997-02-20 1998-09-09 Gist-Brocades B.V. Fermentative production of valuable compounds on an industrial scale using chemically defined media
US6080787A (en) * 1997-02-21 2000-06-27 Abbott Laboratories Methods for reducing the incidence of necrotizing enterocolitis
RU2199317C2 (ru) 1997-02-21 2003-02-27 Абботт Лаборэтриз Способ снижения заболеваемости некротическим энтероколитом у детей (варианты)
WO1998039468A1 (fr) * 1997-03-04 1998-09-11 Suntory Limited Procede pour preparer un acide gras hautement insature (aghi) et lipide contenant cet aghi
US5968809A (en) 1997-04-11 1999-10-19 Abbot Laboratories Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids
US7745694B1 (en) 1997-04-11 2010-06-29 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for synthesis of long chain polyunsaturated fatty acids in plants
US5972664A (en) 1997-04-11 1999-10-26 Abbott Laboratories Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids
US5948413A (en) * 1997-07-17 1999-09-07 Board Of Trustees Operating Michigan State University Method and vaccine for treatment of pythiosis insidiosi in humans and lower animals
DE69718455T2 (de) * 1997-07-22 2003-04-30 Societe Des Produits Nestle S.A., Vevey Lipidzusammensetzung für Säuglingsnährpräparat und Herstellungsverfahren
GB9802561D0 (en) * 1998-02-07 1998-04-01 Zeneca Ltd Mortierella
US20070141181A1 (en) * 1998-02-13 2007-06-21 Nutramax Laboratories, Inc. Use of anabolic agents, anti-catabolic agents, antioxidant agents, and analgesics for protection, treatment and repair of connective tissues in humans and animals
US6451771B1 (en) 1999-02-12 2002-09-17 Nutramax Laboratories, Inc. Use of anabolic agents anti-catabolic agents and antioxidant agents for protection treatment and repair of connective tissues in humans and animals
US6797289B2 (en) 1998-02-13 2004-09-28 Nutramax Laboratories, Inc. Use of anabolic agents, anti-catabolic agents, antioxidant agents, and analgesics for protection, treatment and repair of connective tissues in humans and animals
CN1324981C (zh) † 1998-06-17 2007-07-11 Dsm公司 微生物花生四烯酸在海洋饲料中的应用
JP2000069987A (ja) * 1998-08-28 2000-03-07 Suntory Ltd アラキドン酸含有脂質並びにジホモ−γ−リノレン酸含有脂質の製造方法
WO2000020603A1 (en) * 1998-10-05 2000-04-13 Abbott Laboratories Altered fatty acid biosynthesis in insect cells using delta five desaturase
AU775421B2 (en) * 1998-10-15 2004-07-29 Dsm Ip Assets B.V. Pufa supplements
US6166231A (en) * 1998-12-15 2000-12-26 Martek Biosciences Corporation Two phase extraction of oil from biomass
GB9901808D0 (en) * 1999-01-27 1999-03-17 Scarista Limited Drugs for treatment of psychiatric and brain disorders
GB9916537D0 (en) * 1999-07-14 1999-09-15 Univ Hull Culture of microorganisms for the synthesis of a polyunsaturated fatty acid
RU2336307C2 (ru) * 2000-01-19 2008-10-20 Мартек Биосайнсис Корпорейшн Способ получения липидов (варианты) и липиды, полученные этим способом
KR101293135B1 (ko) 2000-01-28 2013-09-12 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. 발효기 내에서 진핵 미생물의 고밀도 배양에 의한 고도불포화 지방산을 함유하는 지질의 증진된 생산 방법
US6596302B2 (en) 2000-04-13 2003-07-22 Abbott Laboratories Infant formulas containing long-chain polyunsaturated fatty acids and uses thereof
AU2001253699B2 (en) * 2000-04-21 2006-04-27 Martek Biosciences Corporation Trophic conversion of obligate phototrophic algae through metabolic engineering
EP1780283A1 (en) 2000-04-21 2007-05-02 Martek Biosciences Corporation Trophic conversion of obligate photographic algae through metabolic engineering
GB0016045D0 (en) * 2000-06-29 2000-08-23 Laxdale Limited Therapeutic combinations of fatty acids
EP1178118A1 (en) * 2000-08-02 2002-02-06 Dsm N.V. Isolation of microbial oils
EP1178103A1 (en) * 2000-08-02 2002-02-06 Dsm N.V. Purifying crude pufa oils
GB2377455A (en) * 2001-02-09 2003-01-15 Univ Hull Method of culturing crypthecodinium cohnii
ATE457357T1 (de) 2001-07-02 2010-02-15 Suntory Holdings Ltd Verfahren zur herstellung von fett mit triglyceridhaltiger hochungesättigter fettsäure
JP2003048831A (ja) 2001-08-02 2003-02-21 Suntory Ltd 脳機能の低下に起因する症状あるいは疾患の予防又は改善作用を有する組成物
KR100853899B1 (ko) * 2001-10-19 2008-08-25 비타 파워 리미티드 식품 보조제 및 이를 생산하는 방법
EP1446210B1 (de) 2001-11-13 2007-02-14 Metanomics GmbH Verfahren zur extraktion und analyse von inhaltsstoffen aus organischem material
EP1453583B1 (en) * 2001-12-12 2011-08-31 Martek Biosciences Corporation Extraction and winterization of lipids from biomass
AU2002358164A1 (en) 2001-12-19 2003-06-30 Dsm Ip Assets B.V. Compositions with a chicken flavour, use and production thereof
US7211656B2 (en) * 2002-01-30 2007-05-01 Abbott Laboratories Desaturase genes, enzymes encoded thereby, and uses thereof
JP4088097B2 (ja) * 2002-04-26 2008-05-21 サントリー株式会社 高度不飽和脂肪酸含有脂質の製造方法
AU2003238264B2 (en) 2002-06-18 2009-05-21 Dsm Ip Assets B.V. Stable emulsions of oils in aqueous solutions and methods for producing same
DE60325590D1 (de) 2002-06-19 2009-02-12 Dsm Ip Assets Bv Pasteurisationsverfahren für mikrobielle zellen und mikrobielles öl
BRPI0311916B1 (pt) * 2002-06-19 2020-01-28 Dsm Ip Assets Bv processo para a produção de um óleo microbiano compreendendo ácido araquidônico
AU2003257177A1 (en) * 2002-08-05 2004-02-23 Quanta Biosciences Improved compositions for in vitro amplification of nucleic acids
ES2312513T3 (es) * 2002-09-04 2009-03-01 Nestec S.A. Procedimiento para la preparacion de un aceite conteniendo uno o unos acidos grasos poliinsaturados de cadena larga proviniendo de biomasa, alimento, composicion nutricional, cosmetica o farmaceutica conteniendo dicho aceite.
CA2498569C (en) * 2002-09-13 2016-11-29 Suntory Limited Process for production of transesterified oils/fats or triglycerides
EP1542670B2 (en) * 2002-09-24 2023-07-05 Suntory Holdings Limited Composition containing arachidonic acid alone or in combination with docosahexaenoic acid for enhancing cognitive abilities in adults
US20040209953A1 (en) * 2002-12-06 2004-10-21 Wai Lee Theresa Siu-Ling Glyceride compositions and methods of making and using same
US9782377B2 (en) 2003-03-27 2017-10-10 Suntory Holdings Limited Composition for normalization of infradian rhythm
US20040219188A1 (en) * 2003-05-02 2004-11-04 Comer Gail M. Composition and methods for nutritional management of patients with hepatic disease
US7238482B2 (en) 2003-05-07 2007-07-03 E. I. Du Pont De Nemours And Company Production of polyunsaturated fatty acids in oleaginous yeasts
GB0311081D0 (en) * 2003-05-14 2003-06-18 Btg Internat Limted Treatment of neurodegenerative conditions
CA2530170A1 (en) * 2003-06-24 2005-01-06 University Of Kansas Medical Center Infant formula
CH698539A8 (de) 2003-08-18 2009-10-15 Btg Int Ltd Verbindungen mit ungesättigten Fettsäureresten zur Herstellung von Medikamenten zur Behandlung von multipler Sklerose.
DE602004021001D1 (de) 2003-08-21 2009-06-18 Monsanto Technology Llc Fettsäuredesaturasen aus primula
EP2251430B1 (en) * 2003-12-30 2015-11-25 DSM IP Assets B.V. Deaeration process
US7847113B2 (en) * 2004-03-01 2010-12-07 Suntory Holdings Limited Phospholipids including long-chain polyunsaturated fatty acids as constituents, and use of such phospholipids
CA2562548C (en) 2004-04-16 2019-08-20 Monsanto Technology Llc Expression of fatty acid desaturases in corn
ES2529572T3 (es) * 2004-04-22 2015-02-23 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Síntesis de ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga por células recombinantes
JP2006083136A (ja) * 2004-09-17 2006-03-30 Suntory Ltd ストレスに起因する脳機能の低下およびそれに伴う症状あるいは疾患の予防又は改善作用を有する組成物
JP4993852B2 (ja) 2004-09-17 2012-08-08 サントリーホールディングス株式会社 ストレスに起因する行動異常を伴う症状あるいは疾患の予防又は改善作用を有する組成物
US7678931B2 (en) 2004-10-22 2010-03-16 Martek Biosciences Corporation Process for preparing materials for extraction
MX293887B (es) 2004-11-04 2011-12-15 Monsanto Technology Llc Composiciones de aceites ricos en acidos grasos poliinsaturados.
US7550286B2 (en) * 2004-11-04 2009-06-23 E. I. Du Pont De Nemours And Company Docosahexaenoic acid producing strains of Yarrowia lipolytica
US7198937B2 (en) * 2004-11-04 2007-04-03 E. I. Du Pont De Nemours And Company Mortierella alpina diacylglycerol acyltransferase for alteration of polyunsaturated fatty acids and oil content in oleaginous organisms
GB0425932D0 (en) * 2004-11-25 2004-12-29 Btg Int Ltd Structured phospholipids
GB0504362D0 (en) * 2005-03-02 2005-04-06 Btg Int Ltd Cytokine modulators
GB0504333D0 (en) * 2005-03-02 2005-04-06 Btg Int Ltd Treatment of cytokine dysregulation
CA2611324C (en) 2005-06-07 2017-02-14 Ocean Nutrition Canada Limited Eukaryotic microorganisms for producing lipids and antioxidants
JP5967855B2 (ja) 2005-06-30 2016-08-10 サントリーホールディングス株式会社 日中活動量の低下および／又はうつ症状の改善作用を有する組成物
US20070082063A1 (en) * 2005-10-11 2007-04-12 Douglas Bibus Risk assessment and correction of membrane damage of the upper GI tract
US8968721B2 (en) 2005-12-28 2015-03-03 Advanced Bionutrition Corporation Delivery vehicle for probiotic bacteria comprising a dry matrix of polysaccharides, saccharides and polyols in a glass form and methods of making same
DK1973406T3 (da) 2005-12-28 2014-06-23 Advanced Bionutrition Corp Fremføringsmiddel til probiotiske bakerier omfattende en tør blanding af polysaccharider, saccharider, polyoler i glasform
US8277849B2 (en) 2006-01-19 2012-10-02 Solazyme, Inc. Microalgae-derived compositions for improving the health and appearance of skin
US8298548B2 (en) 2007-07-18 2012-10-30 Solazyme, Inc. Compositions for improving the health and appearance of skin
US20090274736A1 (en) * 2006-01-19 2009-11-05 Solazyme Inc. Nutraceutical Compositions From Microalgae And Related Methods of Production And Administration
US20070167396A1 (en) * 2006-01-19 2007-07-19 Solazyme, Inc. Methods and compositions for cholesterol reduction in mammals
US20070191303A1 (en) * 2006-01-19 2007-08-16 Solazyme, Inc. Polysaccharide compositions and methods of producing, screening, and formulating polysaccharide compositions
US20070166266A1 (en) * 2006-01-19 2007-07-19 Solazyme, Inc. Methods and compositions for improving the health and appearance of skin
BRPI0708748B1 (pt) 2006-03-10 2023-09-26 Monsanto Technology Llc Métodos de produzir uma planta de soja com teor de ácidos graxos de semente alterados
EP2010140A2 (en) * 2006-04-03 2009-01-07 Advanced Bionutrition Corporation Feed formulations containing docosahexaenoic acid
JP2009533064A (ja) * 2006-04-11 2009-09-17 マーテック バイオサイエンシーズ コーポレーション 長鎖多価不飽和脂肪酸を含む食品製品、およびそれらを調製するための方法
WO2008129358A2 (en) * 2006-08-01 2008-10-30 Ocean Nutrition Canada Ltd. Oil producing microbes and methods of modification thereof
WO2008060571A2 (en) * 2006-11-13 2008-05-22 Aurora Biofuels, Inc. Methods and compositions for production and purification of biofuel from plants and microalgae
WO2008076975A1 (en) 2006-12-18 2008-06-26 Advanced Bionutrition Corporation A dry food product containing live probiotic
WO2008081989A1 (ja) * 2006-12-28 2008-07-10 Suntory Holdings Limited 神経再生剤
JP5101894B2 (ja) * 2007-01-15 2012-12-19 サントリーホールディングス株式会社 高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法
UA102063C2 (ru) * 2007-02-12 2013-06-10 Е. І. Дю Пон Де Немур Енд Компані Трансгенное соевое растение, продуцирующее арахидоновую кислоту
US20090023808A1 (en) * 2007-06-29 2009-01-22 Martek Biosciences Corporation Production and Purification of Esters of Polyunsaturated Fatty Acids
CN101109015B (zh) * 2007-07-09 2011-05-04 南京工业大学 花生四烯酸油脂的制备方法
CN101113410B (zh) * 2007-07-09 2010-05-19 南京工业大学 一种高山被孢霉及其应用
CN101153298B (zh) * 2007-09-07 2010-11-24 武汉麦可得生物技术有限公司 发酵生产低神经酸、epa含量的花生四烯酸油脂的方法
WO2009143007A2 (en) * 2008-05-19 2009-11-26 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Producing eicosapentaenoic acid (epa) from biodiesel-derived crude glycerol
US8927522B2 (en) 2008-10-14 2015-01-06 Solazyme, Inc. Microalgal polysaccharide compositions
US8557249B2 (en) 2008-11-07 2013-10-15 Solazyme, Inc. Cosmetic compositions comprising microalgal components
US8940340B2 (en) * 2009-01-22 2015-01-27 Aurora Algae, Inc. Systems and methods for maintaining the dominance of Nannochloropsis in an algae cultivation system
US8143051B2 (en) * 2009-02-04 2012-03-27 Aurora Algae, Inc. Systems and methods for maintaining the dominance and increasing the biomass production of nannochloropsis in an algae cultivation system
EP2883958B1 (en) * 2009-02-25 2018-04-11 V.B.Medicare Pvt. Ltd. Improved methods for fermentative production of docosahexaenoic acid
WO2010111565A2 (en) 2009-03-27 2010-09-30 Advanced Bionutrition Corporation Microparticulated vaccines for the oral or nasal vaccination and boostering of animals including fish
US9187778B2 (en) 2009-05-04 2015-11-17 Aurora Algae, Inc. Efficient light harvesting
CN106987525B (zh) 2009-05-26 2020-10-27 先进生物营养公司 包含生物活性微生物和/或生物活性材料的稳定干粉组合物及其制造方法
US8865452B2 (en) * 2009-06-15 2014-10-21 Aurora Algae, Inc. Systems and methods for extracting lipids from wet algal biomass
US9101942B2 (en) * 2009-06-16 2015-08-11 Aurora Algae, Inc. Clarification of suspensions
US8769867B2 (en) * 2009-06-16 2014-07-08 Aurora Algae, Inc. Systems, methods, and media for circulating fluid in an algae cultivation pond
EP2272383A1 (en) 2009-06-22 2011-01-12 SBAE Industries NV Composition Comprising Omega-7 and/or Omega-4 Fatty Acids
US20100325948A1 (en) * 2009-06-29 2010-12-30 Mehran Parsheh Systems, methods, and media for circulating and carbonating fluid in an algae cultivation pond
US8747930B2 (en) * 2009-06-29 2014-06-10 Aurora Algae, Inc. Siliceous particles
US9480271B2 (en) * 2009-09-15 2016-11-01 Monsanto Technology Llc Soybean seed and oil compositions and methods of making same
US8765983B2 (en) * 2009-10-30 2014-07-01 Aurora Algae, Inc. Systems and methods for extracting lipids from and dehydrating wet algal biomass
US8748160B2 (en) * 2009-12-04 2014-06-10 Aurora Alage, Inc. Backward-facing step
US9504750B2 (en) 2010-01-28 2016-11-29 Advanced Bionutrition Corporation Stabilizing composition for biological materials
WO2011094469A2 (en) 2010-01-28 2011-08-04 Advanced Bionutrition Corporation Dry glassy composition comprising a bioactive material
US8115022B2 (en) 2010-04-06 2012-02-14 Heliae Development, Llc Methods of producing biofuels, chlorophylls and carotenoids
US8211308B2 (en) 2010-04-06 2012-07-03 Heliae Development, Llc Extraction of polar lipids by a two solvent method
US8313648B2 (en) 2010-04-06 2012-11-20 Heliae Development, Llc Methods of and systems for producing biofuels from algal oil
US8475660B2 (en) 2010-04-06 2013-07-02 Heliae Development, Llc Extraction of polar lipids by a two solvent method
JP2013523158A (ja) 2010-04-06 2013-06-17 ヘリアエ デベロップメント、 エルエルシー 淡水または塩水藻類からのタンパク質の選択的抽出
US8308951B1 (en) 2010-04-06 2012-11-13 Heliae Development, Llc Extraction of proteins by a two solvent method
US8211309B2 (en) 2010-04-06 2012-07-03 Heliae Development, Llc Extraction of proteins by a two solvent method
US8273248B1 (en) 2010-04-06 2012-09-25 Heliae Development, Llc Extraction of neutral lipids by a two solvent method
WO2011127127A2 (en) 2010-04-06 2011-10-13 Arizona Board Of Regents For And On Behalf Of Arizona State University Extraction with fractionation of oil and co-products from oleaginous material
US8202425B2 (en) 2010-04-06 2012-06-19 Heliae Development, Llc Extraction of neutral lipids by a two solvent method
AU2011242843A1 (en) 2010-04-22 2012-09-27 E. I. Du Pont De Nemours And Company Method for obtaining polyunsaturated fatty acid-containing compositions from microbial biomass
AR081558A1 (es) 2010-06-01 2012-10-03 Martek Biosciences Corp Extraccion de lipidos de celulas y productos provenientes de ellos
US9023625B2 (en) 2010-06-14 2015-05-05 Io-Mega Holding Corporation Methods for production of algae derived oils
CN101870915B (zh) * 2010-06-30 2012-07-04 南京工业大学 水酶法提取花生四烯酸油脂的工艺
JP5727611B2 (ja) 2010-08-13 2015-06-03 アドバンスド バイオニュートリション コーポレイション 生体物質用の乾燥貯蔵安定化組成物
JP5406381B2 (ja) 2010-10-29 2014-02-05 大和製衡株式会社 組合せ秤
US9375028B2 (en) 2010-12-09 2016-06-28 Mead Johnson Nutrition Company Compositions and methods for nutrient delivery
WO2012103516A1 (en) * 2011-01-28 2012-08-02 Amyris, Inc. Gel-encapsulated microcolony screening
JP5416861B2 (ja) * 2011-03-03 2014-02-12 日本水産株式会社 リパーゼによる高度不飽和脂肪酸含有油脂の製造方法
US8926844B2 (en) 2011-03-29 2015-01-06 Aurora Algae, Inc. Systems and methods for processing algae cultivation fluid
US8569530B2 (en) 2011-04-01 2013-10-29 Aurora Algae, Inc. Conversion of saponifiable lipids into fatty esters
US8752329B2 (en) 2011-04-29 2014-06-17 Aurora Algae, Inc. Optimization of circulation of fluid in an algae cultivation pond
US8365462B2 (en) 2011-05-31 2013-02-05 Heliae Development, Llc V-Trough photobioreactor systems
USD661164S1 (en) 2011-06-10 2012-06-05 Heliae Development, Llc Aquaculture vessel
USD682637S1 (en) 2011-06-10 2013-05-21 Heliae Development, Llc Aquaculture vessel
USD679965S1 (en) 2011-06-10 2013-04-16 Heliae Development, Llc Aquaculture vessel
CN102925502A (zh) * 2011-08-10 2013-02-13 嘉必优生物工程（湖北）有限公司 利用高山被孢霉生产花生四烯酸油脂的工业方法
US9200236B2 (en) 2011-11-17 2015-12-01 Heliae Development, Llc Omega 7 rich compositions and methods of isolating omega 7 fatty acids
CN102703332B (zh) * 2012-06-19 2013-08-07 南京工业大学 一株产花生四烯酸油脂的菌株及其应用
CN103667068A (zh) * 2012-09-14 2014-03-26 罗盖特兄弟公司 一种由微生物（单细胞真菌高山被孢霉）产生的富含花生四烯酸的油及其制备工艺
CN102925503B (zh) * 2012-09-26 2014-08-06 内蒙古金达威药业有限公司 利用固料培养基培养高山被孢霉制备花生四烯酸的方法
CN103805517B (zh) * 2012-11-14 2019-03-08 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 高山被孢霉的分离的新菌株及其应用
AU2014229307B2 (en) 2013-03-13 2017-08-31 Dsm Nutritional Products Ag Engineering microorganisms
US9651304B1 (en) 2013-03-14 2017-05-16 Green Recovery Technologies, LLC Pretreatment of biomass prior to separation of saturated biomass
US9266973B2 (en) 2013-03-15 2016-02-23 Aurora Algae, Inc. Systems and methods for utilizing and recovering chitosan to process biological material
EP2996672A4 (en) 2013-05-15 2016-11-02 Terravia Holdings Inc COSMETIC COMPOSITIONS WITH MICROALGEN OIL
WO2015025920A1 (ja) * 2013-08-22 2015-02-26 協和発酵バイオ株式会社 アラキドン酸生産ポリケチドシンターゼ及びその利用
CN103602648B (zh) * 2013-12-04 2016-03-02 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种提高纤维素酶生产水平的发酵工艺
PL3082793T3 (pl) 2013-12-20 2020-10-05 Dsm Ip Assets B.V. Sposoby otrzymywania oleju drobnoustrojowego z komórek drobnoustrojowych
WO2015095693A2 (en) 2013-12-20 2015-06-25 Dsm Ip Assets B.V. Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
PT2958982T (pt) 2013-12-20 2019-12-19 Mara Renewables Corp Métodos de recuperação de óleo a partir de microrganismos
KR102426987B1 (ko) 2013-12-20 2022-07-28 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. 미생물 세포로부터의 미생물 오일의 수득 방법
EP3082792A4 (en) 2013-12-20 2017-08-16 DSM IP Assets B.V. Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
JP6919827B2 (ja) 2013-12-20 2021-08-18 ディーエスエム ニュートリショナル プロダクツ アーゲーＤＳＭ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ＡＧ 微生物から油を回収する方法
AU2015321444B2 (en) 2014-09-23 2020-10-01 Jost Chemical Co. Fatty acid composition and method for fortifying nutritional products with fatty acids
AR104042A1 (es) 2015-03-26 2017-06-21 Mara Renewables Corp Producción de alta densidad de biomasa y aceite utilizando glicerol en bruto
US9951326B2 (en) 2015-07-13 2018-04-24 MARA Renewables Corporation Enhancing microbial metabolism of C5 organic carbon
CN108347982A (zh) 2015-07-29 2018-07-31 高级生物营养公司 用于特殊饮食用途的稳定的干燥益生菌组合物
US10851395B2 (en) 2016-06-10 2020-12-01 MARA Renewables Corporation Method of making lipids with improved cold flow properties
KR102145032B1 (ko) * 2017-04-26 2020-08-14 주식회사 엘지생활건강 모르티에렐라 오일을 포함하는 화장료 조성물
US10513718B2 (en) 2017-06-06 2019-12-24 City University Of Hong Kong Method of producing polyunsaturated fatty acid
CN107418982B (zh) * 2017-09-25 2020-05-08 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 一种低氯丙醇微生物油脂及其制备方法
US20210024966A1 (en) * 2018-03-30 2021-01-28 Dsm Ip Assets B.V. Method of obtaining a microbial oil and a method of reducing emulsion by maintaining a low concentration of carbohydrate
CN109266698B (zh) * 2018-05-17 2022-10-28 梁云 被孢霉属微生物油脂中脂肪酸组合物成分调整的方法
CN108410916A (zh) * 2018-05-30 2018-08-17 湖北福星生物科技有限公司 花生四烯酸油脂的生产方法
CN110747239B (zh) * 2019-11-26 2021-06-22 瞿瀚鹏 富含Sn-2位ARA的微生物油脂及其制备方法和应用
CN115948484A (zh) * 2022-12-19 2023-04-11 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 一种降低花生四烯酸油脂中氯丙醇含量的方法
CN117730810A (zh) * 2024-01-24 2024-03-22 广东海洋大学 橄榄油在提高东风螺幼虫变态率和/或存活率中的应用

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4280379A (en) * 1980-01-11 1981-07-28 Chow Kirk K Reversihble ratchet drive
US4670285A (en) 1982-08-06 1987-06-02 The University Of Toronto Innovations Foundation Infant formula
US4870011A (en) 1985-01-22 1989-09-26 Director General Of Agency Of Industrial Science And Technology Method for obtaining lipids from fungus bodies
DE3603000A1 (de) * 1986-01-31 1987-08-06 Milupa Ag Neue polyensaeure-reiche fettmischung und deren verwendung bei der herstellung von saeuglingsnahrungen
JPS6438007A (en) * 1987-04-28 1989-02-08 Lion Corp Skin external preparation
JP2697834B2 (ja) * 1988-02-02 1998-01-14 サントリー株式会社 高度不飽和脂肪酸成分添加人工乳
JP2723243B2 (ja) * 1988-02-25 1998-03-09 サントリー株式会社 高度不飽和脂肪酸添加動物飼料
JPH01228486A (ja) * 1988-03-09 1989-09-12 Suntory Ltd 奇数鎖高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法
PH11992043811B1 (en) * 1991-01-24 2002-08-22 Martek Corp Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
JPH05163142A (ja) * 1991-12-17 1993-06-29 Tokiwa Yakuhin Kogyo Kk 肝障害の予防または治療用アラキドン酸含有組成物
JP3354608B2 (ja) * 1992-11-16 2002-12-09 サントリー株式会社 高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法
ATE264099T1 (de) * 1993-06-09 2004-04-15 Martek Biosciences Corp Für die behandlung neurologischer erkrankungen nützliche methoden und pharmazeutische zusammensetzungen

Also Published As

Publication number Publication date
CN1696300A (zh) 2005-11-16
KR20110111327A (ko) 2011-10-10
CN1175976A (zh) 1998-03-11
KR20120073363A (ko) 2012-07-04
JP2013116123A (ja) 2013-06-13
CA2209513A1 (en) 1996-07-11
KR20140114068A (ko) 2014-09-25
EP2322640A2 (en) 2011-05-18
CN102399831A (zh) 2012-04-04
JP2009149910A (ja) 2009-07-09
DE69627816D1 (de) 2003-06-05
AU713567B2 (en) 1999-12-02
JP2006180877A (ja) 2006-07-13
BR9607179B1 (pt) 2009-01-13
PT800584E (pt) 2003-09-30
JP2010178745A (ja) 2010-08-19
JP4014219B2 (ja) 2007-11-28
KR101163298B1 (ko) 2012-07-05
JP5281026B2 (ja) 2013-09-04
EP0800584B1 (en) 2003-05-02
US5658767A (en) 1997-08-19
CN101560529A (zh) 2009-10-21
FI117442B (fi) 2006-10-13
EP1342787A3 (en) 2003-10-08
NO973085L (no) 1997-09-03
EP2322640A3 (en) 2011-05-25
KR101033741B1 (ko) 2011-05-09
KR20100023977A (ko) 2010-03-04
CN101560529B (zh) 2015-02-04
BR9607179A (pt) 1997-11-11
NO973085D0 (no) 1997-07-02
FI972829A0 (fi) 1997-07-01
ES2197233T3 (es) 2004-01-01
DE800584T1 (de) 1999-05-06
PL187694B1 (pl) 2004-09-30
FI972829A (fi) 1997-09-02
EP1342787A2 (en) 2003-09-10
EA199700090A1 (ru) 1997-12-30
ATE239088T1 (de) 2003-05-15
KR20080068761A (ko) 2008-07-23
FI120648B (fi) 2010-01-15
JPH10512444A (ja) 1998-12-02
FI20060617A (fi) 2006-06-26
CN1696300B (zh) 2011-11-09
WO1996021037A1 (en) 1996-07-11
EP0800584A1 (en) 1997-10-15
EP2322641A2 (en) 2011-05-18
EP2322641A3 (en) 2011-05-25
HK1085768A1 (en) 2006-09-01
EP2322642A2 (en) 2011-05-18
DK0800584T3 (da) 2003-08-04
MX9705078A (es) 1997-10-31
PL321208A1 (en) 1997-11-24
CN1175976B (zh) 2011-07-13
KR20060096168A (ko) 2006-09-07
CA2209513C (en) 2002-05-28
EP2322642A3 (en) 2011-05-25
DE69627816T2 (de) 2004-01-22
AU4854296A (en) 1996-07-24
NO320117B1 (no) 2005-10-31
JP2007319161A (ja) 2007-12-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA001036B1 (ru) Немодифицированное масло грибов mortierella sp., способ его получения, способ обеспечения детского питания арахидоновой кислотой, детское питание, содержащее арахидоновую кислоту, способ обеспечения человека дополнительным количеством арахидоновой кислоты и косметическая композиция
CA2101273C (en) Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
US5374657A (en) Microbial oil mixtures and uses thereof
JPH08214893A (ja) アラキドン酸の生成方法
MXPA97005078A (en) Araquidonic acid and methods for the production and use of my

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AZ BY KZ TJ TM

PC4A Registration of transfer of a eurasian patent by assignment
MK4A Patent expired

Designated state(s): RU