FI117442B - Arakidonihappo ja menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö - Google Patents
Arakidonihappo ja menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö Download PDFInfo
- Publication number
- FI117442B FI117442B FI972829A FI972829A FI117442B FI 117442 B FI117442 B FI 117442B FI 972829 A FI972829 A FI 972829A FI 972829 A FI972829 A FI 972829A FI 117442 B FI117442 B FI 117442B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- ara
- oil
- arachidonic acid
- amount
- hours
- Prior art date
Links
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 title claims abstract description 291
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 title claims abstract description 139
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 title claims abstract description 139
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 43
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 12
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims abstract description 101
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims abstract description 63
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 42
- 241000907999 Mortierella alpina Species 0.000 claims abstract description 24
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 claims abstract description 24
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 125000005457 triglyceride group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 63
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 63
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 39
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 39
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N all-cis-5,8,11,14,17-icosapentaenoic acid Chemical group CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N 0.000 claims description 33
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 31
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 31
- JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N eicosapentaenoic acid Natural products CCC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 23
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 23
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 21
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 20
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 claims description 20
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 17
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical group CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 claims description 15
- 239000010779 crude oil Substances 0.000 claims description 14
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 14
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 14
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 9
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 claims description 9
- 239000013589 supplement Substances 0.000 claims description 7
- 230000037213 diet Effects 0.000 claims description 6
- 125000005313 fatty acid group Chemical group 0.000 claims description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 5
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 claims description 4
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 claims description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 3
- 239000012454 non-polar solvent Substances 0.000 claims description 3
- -1 oxygen halide Chemical class 0.000 claims description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 3
- 208000020547 Peroxisomal disease Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011252 Phenylketonuria Diseases 0.000 claims description 2
- 206010043118 Tardive Dyskinesia Diseases 0.000 claims description 2
- 238000005352 clarification Methods 0.000 claims description 2
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 claims description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 4
- 241000235575 Mortierella Species 0.000 claims 2
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 claims 2
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 claims 2
- 229960005135 eicosapentaenoic acid Drugs 0.000 claims 2
- 235000020673 eicosapentaenoic acid Nutrition 0.000 claims 2
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 claims 1
- 239000001188 FEMA 4487 Substances 0.000 claims 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 claims 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims 1
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 claims 1
- 201000000980 schizophrenia Diseases 0.000 claims 1
- 230000000153 supplemental effect Effects 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 10
- 239000000654 additive Substances 0.000 abstract description 9
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 abstract description 8
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 85
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 28
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 25
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 21
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 21
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 16
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 16
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 16
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 16
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 14
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 13
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 13
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 13
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 13
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 12
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 11
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 11
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 241000894007 species Species 0.000 description 10
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 9
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 9
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 7
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 6
- 241000197220 Pythium insidiosum Species 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 6
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 6
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 6
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 5
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 5
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 4
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 4
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000006453 gye - medium Substances 0.000 description 4
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 description 4
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 4
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 4
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 229940013317 fish oils Drugs 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- VOFUROIFQGPCGE-UHFFFAOYSA-N nile red Chemical compound C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N(CC)CC)C=C4OC3=CC(=O)C2=C1 VOFUROIFQGPCGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000020777 polyunsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 241001474374 Blennius Species 0.000 description 2
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 2
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 241000233639 Pythium Species 0.000 description 2
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 2
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 2
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 235000021323 fish oil Nutrition 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 2
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 2
- VZCCETWTMQHEPK-UHFFFAOYSA-N gamma-Linolensaeure Natural products CCCCCC=CCC=CCC=CCCCCC(O)=O VZCCETWTMQHEPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCCETWTMQHEPK-QNEBEIHSSA-N gamma-linolenic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC(O)=O VZCCETWTMQHEPK-QNEBEIHSSA-N 0.000 description 2
- 235000020664 gamma-linolenic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960002733 gamolenic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 2
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 2
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- DSNBHJFQCNUKMA-SCKDECHMSA-N thromboxane A2 Chemical compound OC(=O)CCC\C=C/C[C@@H]1[C@@H](/C=C/[C@@H](O)CCCCC)O[C@@H]2O[C@H]1C2 DSNBHJFQCNUKMA-SCKDECHMSA-N 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- 238000001238 wet grinding Methods 0.000 description 2
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 2
- GHOKWGTUZJEAQD-SSDOTTSWSA-N 3-[[(2s)-2,4-dihydroxy-3,3-dimethylbutanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound OCC(C)(C)[C@H](O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- 208000012657 Atopic disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- 108010082495 Dietary Plant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010013142 Disinhibition Diseases 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 229910015449 FeCU Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241001494715 Porphyridium purpureum Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000533293 Sesbania emerus Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 238000003811 acetone extraction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 230000003254 anti-foaming effect Effects 0.000 description 1
- 230000001153 anti-wrinkle effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 238000012365 batch cultivation Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000035425 carbon utilization Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000366 copper(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 1
- 230000001877 deodorizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000036576 dermal application Effects 0.000 description 1
- 235000018823 dietary intake Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N dinoprostone Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 150000002066 eicosanoids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 235000004626 essential fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 1
- 239000004088 foaming agent Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 description 1
- 230000008604 lipoprotein metabolism Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000037323 metabolic rate Effects 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 235000021049 nutrient content Nutrition 0.000 description 1
- 235000020660 omega-3 fatty acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940012843 omega-3 fatty acid Drugs 0.000 description 1
- 239000006014 omega-3 oil Substances 0.000 description 1
- 210000004789 organ system Anatomy 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 238000005325 percolation Methods 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000010118 platelet activation Effects 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- KAQKFAOMNZTLHT-OZUDYXHBSA-N prostaglandin I2 Chemical compound O1\C(=C/CCCC(O)=O)C[C@@H]2[C@@H](/C=C/[C@@H](O)CCCCC)[C@H](O)C[C@@H]21 KAQKFAOMNZTLHT-OZUDYXHBSA-N 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000007320 rich medium Substances 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012807 shake-flask culturing Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000037393 skin firmness Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000000194 supercritical-fluid extraction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 1
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 125000005314 unsaturated fatty acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 230000006442 vascular tone Effects 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011686 zinc sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000009529 zinc sulphate Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
- C12P7/6445—Glycerides
- C12P7/6472—Glycerides containing polyunsaturated fatty acid [PUFA] residues, i.e. having two or more double bonds in their backbone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C11/00—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions
- A23C11/02—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions containing at least one non-milk component as source of fats or proteins
- A23C11/04—Milk substitutes, e.g. coffee whitener compositions containing at least one non-milk component as source of fats or proteins containing non-milk fats but no non-milk proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23D—EDIBLE OILS OR FATS, e.g. MARGARINES, SHORTENINGS, COOKING OILS
- A23D9/00—Other edible oils or fats, e.g. shortenings, cooking oils
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/115—Fatty acids or derivatives thereof; Fats or oils
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/115—Fatty acids or derivatives thereof; Fats or oils
- A23L33/12—Fatty acids or derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/40—Complete food formulations for specific consumer groups or specific purposes, e.g. infant formula
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/20—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
- A61K31/202—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids having three or more double bonds, e.g. linolenic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
- A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
- A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
- A61K31/23—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin of acids having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms
- A61K31/232—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin of acids having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms having three or more double bonds, e.g. etretinate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/33—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing oxygen
- A61K8/36—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
- A61K8/361—Carboxylic acids having more than seven carbon atoms in an unbroken chain; Salts or anhydrides thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/92—Oils, fats or waxes; Derivatives thereof, e.g. hydrogenation products thereof
- A61K8/922—Oils, fats or waxes; Derivatives thereof, e.g. hydrogenation products thereof of vegetable origin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
- C11B1/00—Production of fats or fatty oils from raw materials
- C11B1/10—Production of fats or fatty oils from raw materials by extracting
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Birds (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pediatric Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Psychology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
Description
117442 :·:·*Ι
Arakidonihappo ja menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö
Keksinnön ala
Keksintö liittyy arakidonihapon valmistamiseen, arakidonihappoa si-5 sältäviin koostumuksiin ja näiden käyttömuotoihin.
Keksinnön tausta
Arakidonihappo (ARA) on pitkäketjuinen omega-6-ryhmään kuuluva ΐ monityydyttymätön rasvahappo (PUFA) (5,8,11,14-eikosatetraeenihappo, toisin sanoen 20:4). ARA on ihmisruumiissa runsaimpana esiintyvä C20-PUFA.
10 Sitä esiintyy erityisen runsaasti elin-, lihas- ja verikudoksissa ja sen pääasiallisena tehtävänä on toimia rakenteellisena lipidinä, joka assosioituu pääasiassa veressä, maksassa, lihaksessa ja muissa tärkeimmissä elinjärjestelmissä esiintyviin fosfolipideihin. Sen lisäksi, että ARAn pääasiallisimpana tehtävänä on toimia rakenteellisena lipidinä, se on myös useiden kiertävässä f 15 veressä esiintyvien eikosenoidien, kuten prostaglandiini E2:n (PGE2), prosta- 1 sykliini l2:n (PGI2), tromboksaani A2:n (TxA2) ja leukotrieenien B4 (LTB4) ja -C4 (LTC4) välitön esiaste. Näillä eikosenoideilla on lipoproteiinimetaboliaan, veren
«M
Teologiaan, verisuonten tonukseen, leukosyyttien toimintaan ja verihiutaleiden • · :.*·· aktivoitumiseen kohdistuvia säätelyvaikutuksia. > 20 Huolimatta siitä, että ARA on tärkeä ihmisen metabolialle, ihmisillä ei ole kykyä syntetoida tätä de novo -reaktiotietä. ARAa syntetoituu välttämät- t tömän rasvahapon, linoleiinihapon (LOA), pidentymisen ja desaturoitumisen kautta. Tämän tapahtumiselle tarvitaan ihmisruumiissa pieninä määrinä esiintyvää entsyymiä, A6-desaturaasia, Burre, et ai., Lipids 25 (1990) 354- 356.
25 Tämän mukaisesti pääosa ARAsta on saatava ruokavaliosta ja tämä on erityi-sen tärkeää ruumiin nopean kasvun vaiheissa, kuten vauvaiässä.
• · *·;·* Pikkuvauvojen paino voi ensimmäisen elinvuoden aikana kaksin- kertaistua tai kolminkertaistua. Tämän johdosta ruokavalion täytyy sisältää ta- :***: vallista runsaammin ARAa. Tämän lisääntyneen tarpeen tyydyttämiseksi ihmi- ··* # 30 sen rintamaidon ARA-pitoisuudet ovat korkeita. Sanders, et ai., Am. J. Clin.
*:!:* Nutr. 31 (1978) 805- 813. Cao-PUFA-molekyyleistä on rintamaidossa eniten
• · V
**··* ARAa. Imettävistä äideistä erityisesti kasvissyöjät voisivat hyötyä ravinnon tarjoamasta ARA-ylimäärästä. Monet äideistä eivät kuitenkaan imetä vauvo-jaan tai lopettavat imetyksen ennen kuin lapsi on ohittanut nopean kasvun vai-35 heen ja turvautuvat mieluummin äidinmaidonvastikkeen käyttöön.
117442 2 Tämän patenttihakemuksen tekijän tiedossa ei ole yhtään kaupallista äidinmaidonvastiketta, joka sisältäisi triglyseridimuodossa olevaa ARAa. US-patenttijulkaisussa nro 4 670 285 (Clandinin, et ai.), joka on liitetty tähän f keksintöön siihen oikeuttavien säännösten nojalla, kuvataan vauvaikäisten 5 rasvahappotarvetta, ARAn tarve mukaan luettuna. Clandinin, et ai. ehdottavat munankeltuaisen, kalaöljyn tai punasolujen fosfolipidien ja kasviöljyjen seoksen käyttöä ehdottamansa äidinmaidonvastikkeen rasvakomponenttina, josta näitä rasvahappoja saataisiin. Kalaöljy sisältää kuitenkin suuria määriä eikosa-pentaanihappoa (EPÄ). EPAn tiedetään heikentävän ARAn synteesiä pikku-10 lapsilla. Carlson, et ai., Inform 1 (1990) 306. Siten olisi haluttua kyetä saamaan käyttöön ARAa ilman ylimääräistä EPAa. Lisäksi kananmunankeltuaisten sisältämä ARA-konsentraatio on suhteellisen pieni, joten Clandinin et al:n seoksella ei ole taloudellista tulevaisuutta.
Koska ARAa esiintyy eläinöljyissä, mutta ei kasvisöljyissä, sen tuo- 15 tanto kaupallisina määrinä on jäänyt tavoiteltavaksi mutta saavuttamattomaksi päämääräksi. Shinmen, et ai., Microbiol. Biotech. 31 (1989) 11 - 16, ovat ra- r' portoineet, että eristetty sieni, Mortierella alpina, tuottaa ARAa käytettäessä tavanomaista fermentointia sekoitettavassa säiliössä. (Tätä kysymystä on myös käsitelty Shinmen, et al:n japanilaisessa patenttijulkaisussa 1 215 245.) .·*·. 20 Organismit otetaan kasvatuksen jälkeen talteen, ne kuivataan ja niiden lipidit • · · *; " eristetään sienen biomassasta orgaanisella liuottimena ja lipidit modifioidaan l • · · *·*·[ kemiallisesti (kovalenttisesti). Esimerkiksi lipidiseos hydrolysoidaan tai muun- > *.*·: netaan etyyliestereiksi ja nämä yhdistetään seuraavaksi syklodekstriiniin, min- f • · ·. it : ’· kä jälkeen niitä käytetään ruokavalion täydentämiseen. Shinmen et ai. eivät |
• · · · · ' -iT
ί#ϊ : 25 kuvaa eivätkä ehdota modifioimattomien mikrobiöljyjen antamista. ?
Punaista mikrolevää, Porphyridium cruentumia, voidaan kasvattaa f : lammikoissa suurina määrinä ja sen lipidikoostumus voi sisältää jopa 40 % .**·. ARAa. Ahern, et ai., Biotech. Bioeng. 25 (1983) 1057- 1070. Valitettavasti ..·* ARA assosioituu pääasiassa galaktolipideihin, jotka ovat monimutkaisia polaa- : ** 30 risia lipidejä, jota ei esiinny rintamaidossa. Levä ei ainoastaan muodosta bio- ? ··* massastaan kokonaisuudessaan enempää kuin yhden prosentin käytettävissä : olevaa ARAa vaan ARA on muodoltaan myös sellaista, ettei se sovellu käy- • · * .···. tettäväksi lisäaineeksi äidinmaidonvastikkeessa ilman jatkomodifiointia.
US-patenttijulkaisussa nro 4 870 011 (Suzuki et ai.) kuvataan me-35 netelmää lipidien, kuten γ-linoleenihapon, saamiseksi käyttöön Mortierella-su- 3 117442
vun sienistä, γ-linoleenihappo puhdistetaan sienten sisältämien lipidien seoksesta. P
Julkaisussa DE 3 603 000 A1 (Milupa) kuvataan erittäin moni- r tyydyttymättömien rasvahappojen seosta ja sen käyttöä äidinmaidonvastik-5 keen rasvakomponenttina. Rasvaseos sisältää runsaasti ARAa ja dokosa-heksaani (DHA) -happoja suhteessa 2,5:1, mainitussa järjestyksessä ilmoitettuna, ja siinä on runsaasti kolesterolia. Rasvahappojen lähtömateriaaleiksi on lueteltu tietyn tyyppiset makrolevät, kalaöljyt, elimistä peräisin olevat rasvat, jotka ovat peräisin naudoista ja sioista, tai kananmunankeltuaisesta saatava 10 erittäin puhdistettu öljy. DHAn ja ARAn lähteiksi mainitaan makrolevät, jotka ovat tyypiltään fekofyyttejä ja rodofyyttejä. Julkaisussa ei ehdoteta minkään mikrobin käyttöä öljyn lähteenä. Levä- ja kalaöljyt sisältävät tyypillisesti myös | EPAa, joka heikentää ARAn synteesiä in vivo -olosuhteissa. Lisäksi kananmunan keltuaisesta saatava erittäin puhdistettu öljy ei ole ARAn lähtömateriaalina 15 taloudellinen. Lisäksi julkaisussa ei kuvata ARAn suhteen konsentroitua lisäainetta olemassa olevia äidinmaidonvastiketta täydentävänä aineena. - Tämän mukaisesti on olemassa tarvetta saada käyttöön taloudellinen, kaupallisesti käytettävissä oleva menetelmä ARAn valmistamiseksi, edul- ... lisesti tuottamatta samanaikaisesti EPAa. Tämän keksinnön tavoitteena on • · *:*·; 20 tämän tarpeen tyydyttäminen. ^ • « · *♦ ” Tämän keksinnön tavoitteena on lisäksi saattaa käyttöön lisäaine, ja *·*.* tämän lisäaineen lähtömateriaali, jotka on tarkoitettu käytettäväksi äidinmai- • ψ **.*·: donvastikkeessa siten, että äidinmaidonvastikkeen ARA-pitoisuudet lähentyvät • · • *·· ihmisen rintamaidon pitoisuuksia.
:T: 25 Tämän keksinnön tavoitteena on lisäksi saattaa käyttöön ARAa si sältävä sieniöljy, joka on tarkoitettu enteraalisiin, parenteraalisiin tai dermaali- . siin tuotteisiin.
• * * ··* * · ·
Keksinnön yhteenveto | ·* .··’"'* • “·· Tämä keksintö liittyy arakidonihappoa sisältävän sieniöljyn 30 (ARASCO) valmistamiseen ja käyttöön, ja näitä öljyjä sisältäviin koostumuk- . I·. siin. Tätä öljyä voidaan nimittää yksisoluöljyksi. Sieniä kasvatetaan olosuh- • · · Y.l teissä, joissa muodostuu öljyä, ne kootaan talteen ja öljy uutetaan ja otetaan ***·’ talteen. Öljyä voidaan käyttää kemiallisesti pidemmälle modifioimatta suoraan siten, että siitä saadaan ARAa täydentävä tuote tämän tarpeessa oleville hen-35 kiloille, mukaan lukien vastasyntyneet, raskaana olevat tai imettävät naiset tai
potilaat, joilla esiintyy ARAn puutoksesta johtuvia patologisia tiloja. Tämän I
4 1 1 7442 keksinnön etuja ovat se, että ARAa on mahdollista tuottaa vaivattomasti, sen puhtausaste on korkea eikä siinä esiinny havaittavia määriä EPAa.
Edullisten sovellutusmuotojen yksityiskohtainen selitys "ARAa" ja "EPAa" käytetään myös tässä keksinnössä tarkoittamaan lf\ 5 arakidonihappo- ja eikosapentaanihapporyhmiä, mainitussa järjestyksessä il- ^ moitettuna, jossa ryhmät on esteröity glyseroliin osana rasva-asyylitriglyseridiä tai -fosfolipidiä. Tässä keksinnössä koostumus on "olennaisesti sellainen, että siinä ei esiinny EPAa" silloin, kun koostumuksen sisältämä jäljellä oleva EPAn määrä on alle se määrä, joka estäisi ARAn synteesiä koostumusta ravinnon li-10 säaineena käytettäessä. Tässä keksinnössä on saatu myönteiset tulokset ara-kidonihapon (ARA) taloudellisen lähtömateriaalin aikaansaamisessa.
Yhdessä sovellutusmuodossa tämä keksintö liittyy menetelmään > arakidonihappoa sisältävän sieniöljyn (ARASCO) valmistamiseksi, joka öljy ei olennaisesti sisällä lainkaan eikosapentaanihappoa (EPÄ). Tässä keksinnössä - 15 "ei olennaisesti sisällä" tarkoittaa sitä, että öljy sisältää EPAa vähemmän kuin noin viidenneksen sisältämänsä ARAn määrästä. Tätä öljyä, yksisoluöljyä, voidaan antaa suoraan modifioimattomassa muodossa. Tässä keksinnössä "mo-difioimaton" tarkoittaa sitä, että rasvahappojen, tai itse öljyjen, kemiallisia omi-*·*·* naisuuksia ei ole muutettu kovalenttisesti. Siten esimerkiksi ARASCOn tai 1 • · r *.*·: 20 ARAn väliaikainen modifiointi siten, että nämä palautuisivat ennalleen öljyn \v nauttimisen jälkeen, ei jää tämän keksinnön suojapiirin ulkopuolelle.
Tämän keksinnön mukaisista modifioimattomista sieniöljyistä saa- > daan triglyseridejä, joissa suhteellisen suuri osa rasvahapporyhmiä on ARAa :*·*. (rasvahapporyhmistä on edullisesti vähintään 40 % ARAa, ja ryhmistä on edul- ^ • 1 '2* 25 lisemmin vähintään 50 % ARAa), ja ARA-ryhmien ja EPA-ryhmien välinen suh- . .·. de on myös suuri (vähintään 5:1, edullisesti vähintään 20:1, w/w). Tällaista * · · y.‘.t luonnollisista materiaalilähteistä peräisin olevaa öljyä ei ole ennen tätä keksin- *"’ töä kuvattu. Vaikkakin tällaisen koostumuksen mukaisia triglyseridejä voidaan • * , 'ί • *·· syntetoida kemiallisesti (esimerkiksi esteröimällä runsaasti ARAa sisältävien : 30 vapaiden rasvahappojen seoksia tai transesteröimällä tällainen rasva- . X happoseos etyyliestereillä), voi rasvahapposeoksen käsittely (esimerkiksi puh- • · · ΪΛ' distus, esteröinti tai jokin muu näitä vastaava toimenpide) tuottaa haitallisia si- **·’ vutuotteita. Tästä poiketen tämän keksinnön mukaisesta menetelmästä saa daan käyttöön koostumukseltaan haluttuja triglyseridejä käyttämällä uuttoa 35 luonnosta peräisin olevista materiaalilähteistä.
t:;| 5 117442 (Ο 'to
£ > 05 CO
o » ° o n o o_ iq ^ n‘ co ^ 2 to" r--" cd in cm" 't 1- v cm" - r·'- ID IT) O S ^ : ö , , ο" o" T-- cm" °l .
CM i (N I T- <- CM Ln T- CD ! rf O 00 lO C*5 T-_ (D 05 ,¾ Ö CO CO , o' 00 Tt cm" CO T-" ΐ CM 1— -r- I t— t— CM CM 05C0 CO CO CM m 66 CO co" o CM w « ® « a: T- CMt-OIt-COCMCOCOt-O) /; CM CO Ο) If) If) 05 CD O Γ"*· 66 co" T-" T-" tT co" o" cm" r-" o
T- -J-T-T— CMt-t-^-CMCMOO
T- ΙΟ CD 00 CM N- 00 CO τ-^ * · 66 rt o in" r-K m- M·" cvi n ··· v~ nCMlOtDOJ^^rrr- • · • · · *·*·* to T— CO lO ·«- : i 66 , , °° °l O , 'H °l o cm" ·. *: E *- ! I o I cm co T- T- • * 3 : *·· K? o co CM S r- M- N- o- S S" 66 ‘H co" io* os" to co" i- * ·.· : 5 ro ^ ooT-^rooo^^r· O -c - o. ro
. 9· M O 0 S CO
: : : J= $ ^ o co ^ io 0- co m ·*· (j D. i- ICMOS-COt-T-T-C3505 ··· ·> : : vt ··· <u _ • l. CO . · ·' ·*· c ro y E 4 : ·· .s | i ΐ 3 j o, % ' *:* Έ -Q. o ro Q. C 2 ·= ^ = g ·*· ^·_ rotu — ro — ro ro -— m
*"’ Ow ® « 5 C (S 8 oi .t 3 .E
Ξ S 2 2 £ S’ E E E E E E
*·· 3 ό ,ω .2? .9? o 2 3 o 3 o o 5 '$ t "t "t n 6 o !c !c 6 x: :-:k
ra « Eö' I
H ID _l 222(00.0.0.10.0.
' 'M
117442 6
Niistä sienilajeista, joiden rasvahapot on aikaisemmin luonnehdittu, on havaittu, että useimmat eivät muodosta ARAa. Weete, J. D., Fungal Lipid f:i
Biochemistry, Plenum Press, N.Y., (1974). Niistä lajeista, jotka muodostavat ARAa, tuottavat monet, mukaan lukien kaikki aikaisemmin luonnehditut Pyt-5 hium-lajit, ARAn lisäksi merkittäviä määriä eikosapentaanihappoa (EPÄ).
Taulukossa 1 on esitetty P. insidiosumin rasvahappoprofiili sekä muiden sieni- f, lajien rasvahappoprofiili. Tässä keksinnössä on tehty yllättävä löytö, että P. in-sidiosum tuottaa ARAa muodostamatta samanaikaisesti EPAa. Kuten kala-öljyjen kyseessä ollessa on asianlaita, johtavat suuret EPA-pitoisuudet ruoka-10 valiota täydentävissä aineissa siihen, että ARAn muodostamiskyky ruokavaliosta peräisin olevasta linoleiinihaposta (LOA) pienenee. Tämän mukaisesti pitää paikkansa, että vaikkakin sekä ARAa että EPAa tuottavia sienilajeja voidaan käyttää tämän keksinnön mukaisessa menetelmässä, on edullista käyttää lajia, joka ei muodosta merkittäviä määriä EPAa. Tällaisia edullisia lajeja 15 ovat Pythium insidiosum ja Mortierella alpina. Molempia lajeja ovat saatavilla kaupallisesti ja ne on talletettu talletuslaitokseen American Type Culture Collective, Rockville, Maryland, ja niiden hakunumerot ovat 28 251 ja 42 340, mainitussa järjestyksessä ilmoitettuna. P. insidiosumia ja M. alpinaa on käy-tetty kuvaavina sienilajeja edustavina esimerkkeinä tässä patenttiselityksessä.
20 Tässä keksinnössä ajatellaan myös käytettäväksi luonnollisesti muita sieni- * I · lajeja, jotka tässä keksinnössä kuvatulla tavalla tuottavat triglyseridiä, joka si-sältää ARAa ja normaalia pienempiä määriä EPAa.
• · ·.**: Yksi merkittäviä ongelmia, joita tämän keksinnön mukainen sovel- \x ·* >4.
: *·· lutusmuoto ratkaisee, on ruokavalion sisältämien normaalia suurempien EPÄ- | ϊ 25 pitoisuuksien aikaansaama ARAn biosynteesin heikkeneminen pikkuvauvoilla :':c Tämä ongelma voidaan ratkaista saattamalla käyttöön ARAa, jota on tarkoi- : ;*· tettu käytettäväksi äidinmaidonvastikkeessa pitoisuuksissa, jotka ovat huo- « · · ' mättävässä määrin samanlaiset kuin ihmisen rintamaidosta havaitut pitoi- ..·* suudet. ARAn ja EPAn suhde on rintamaidossa tyypillisesti noin 20:1, mai- • * *· " 30 nitussa järjestyksessä ilmoitettuna. Tässä keksinnössä ajatellaan erityisesti käytettäväksi mitä tahansa mikrobiöljyä, josta saadaan käyttöön riittävä määrä • ' *' • ·*; ARAa ruokavaliosta peräisin olevan EPAn negatiivisten vaikutusten voitta- .···. miseksi. ARAa sisältävän öljyn käyttö tuottaa edullisesti ARAn ja EPAn vä liseksi suhteeksi vähintään suhteen 5:1. Tämä suhde on edullisemmin noin 35 10:1 ja se on edullisimmin vähintään noin 20:1. Kuten voidaan havaita, on lop- ' 117442 f 7 putulos sen haluttavampi mitä suurempi ARAn määrä lopputuotteessa on EPAn määrän verrattuna. f Tämän keksinnön mukaisessa menetelmässä sieniä kasvatetaan sopivissa ARAa sisältävää öljyä tuottavissa kasvatusolosuhteissa. Sienten 5 kasvatusmenetelmät ovat tavallisesti tämän alan ammattikokemuksen perusteella tunnettuja ja näitä menetelmiä voidaan soveltaa tämän keksinnön f mukaiseen menetelmään. Esimerkiksi ymppäykseen käytettävä sienimäärä voidaan kasvattaa uposkasvatuksena ravistelupulloissa. Pulloissa käytetään kasvatusmediumia, johon on lisätty kasvatusta varten sienimyseeliä ja tätä 10 kasvatetaan ravistelijassa noin kolmesta neljään päivää.
Kasvatusmediumin koostumus voi vaihdella mutta se sisältää aina hiilen ja typen lähteet. Edullinen hiilen lähde on glukoosi ja tämän määrät voivat olla alueella noin 10- 100 grammaa glukoosia litrassa kasvatusmediumia.
Kasvatukseen ravistelupulloissa käytetään tyypillisesti noin 15 grammaa litras-15 sa. Tämä määrä voi olla erilainen sen mukaan, mikä lopullisen viljelmän tiheyden halutaan olevan. Muita hiilen lähteitä, joita voidaan käyttää, ovat melassit, ; runsaasti fruktoosia sisältävä maissisiirappi, hydrolysoitu tärkkelys tai mikä ta- ^ hansa muu edullinen fermentaatiomenetelmissä tavanomaisesti käytetty hiilen lähde. Lisäksi P. insidiosumille voidaan hiilen lähteeksi käyttää laktoosia. Siten 20 substraattina voidaan käyttää kuoritusta maidosta valmistettua permeaattia, i * · « % *; / joka sisältää runsaasti laktoosia ja joka on hyvin edullinen hiilen lähde. Näiden • * · **'·* hiilen lähteiden sopivat määrät ovat vaikeuksitta määritettävissä tämän alan • ·
•V*: ammattikokemuksen perusteella. Ylimääräistä hiiltä on tavallisesti tarpeellista T
: *·· lisätä kasvatuksen kuluessa. Tämä johtuu siitä, että organismit käyttävät niin ·/· i 25 paljon hiiltä, että sen koko määrän lisääminen panoskasvatuksessa voisi osoittautua mahdottomaksi.
: ♦*: Typpeä käytetään tavallisesti hiivauutteen muodossa, ja sen kon- .·*·. sentraatio on noin 2- noin 15 grammaa uutetta litrassa kasvatusmediumia.
Edullisesti käytetään noin 4 grammaa litraa kohti. Voidaan käyttää muita typ- 4 J 30 pilähteitä, ja näitä ovat peptoni, tryptoni, maissin liotusvesi, soijajauho, hydro- % lysoitu kasviproteiini ja muut näitä vastaavat materiaalit. Näiden lähteiden li- : :*· sättävät määrät voidaan määrittää vaikeuksitta tämän alan ammatti- ··· .·*·. kokemuksen perusteella. Typpi voidaan lisätä panosmuodossa, toisin sanoen kaikki yhdellä kertaa ennen kasvatusta. j 35 Kun sieniä on kasvatettu 3 - 4 päivää sopivassa lämpötilassa, tyy- f piliisesti noin 25 - 30 °C:ssa, on kasvaneen sienen määrä riittävä käytettäväksi 117442 8 ymppinä tavanomaiseen sekoitettavaan säiliöfermentoriin (STF). Tällaiset fer-mentorit ovat alan ammattikokemuksen perusteella tunnettuja ja niitä on saa- f tavilla kaupallisesti. Fermentointi voidaan suorittaa panosfermentointina, jak-sottain syötettävänä panosfermentointina (fed batch) tai jatkuvana fermentoin-5 tina. STF on varustettu edullisesti siipiroottorilla (marine impeller), vaikkakin voidaan myös käyttää Rushton-tyyppistä turbiinisekoitinta.
Fermentori valmistellaan käyttökuntoon lisäämällä siihen halutut hiili-ja typpilähteet. Esimerkiksi 1,5 litran vetoinen fermentori voidaan valmistella käyttökuntoon lisäämällä litraan talousvettä noin 50 grammaa glukoosia ja 10 noin 15 grammaa hiivauutetta. Kuten aikaisemmin mainittiin, voidaan käyttää f muita hiili- tai typpilähteitä.
Ravintoliuosta sisältävä reaktori on steriloitava ennen ymppäystä esimerkiksi kuumentamalla. Kun reaktori on jäähtynyt noin 30 °C:seen, voi- f daan lisätä ymppi ja aloittaa kasvatus. Kaasujen vaihdon aikaansaamiseksi 15 käytetään ilman puhaltamista reaktoriin. Ilmaa voidaan puhaltaa eri nopeuk-silla mutta nopeus säädetään edullisesti noin 0,5:stä noin 4,0:aan VVM (ilmamäärä fermentorin tilavuutta kohti minuutissa). Liuenneen hapen pitoisuus pidetään edullisesti noin 10%:sta noin 50 %:iin ilman suhteen täydelli-' sesti kylläisen liuoksen pitoisuudesta. Tämän mukaisesti voi kasvatuksen ai-
V*! 20 kana olla tarpeellista säätää puhallusnopeutta. On haluttua käyttää sekoitusta. I
* · ♦
Sekoitukseen käytetään sekoitinta. Sekoituspään nopeus säädetään edulli- ^ sesti alueelle noin 50 cm/s - noin 500 cm/s ja edullisesti noin 100 - 200 cm/s.
• · ·.**: Ymppiä voidaan tavallisesti käyttää vaihtelevia määriä. Ymppiä voi- | : ·· daan tyypillisesti käyttää noin 2 tilavuus-%:sta noin 10 tilavuus-%:iin. Fermen- ^ :T: 25 toriin yhdistettyä ympin kasvatusta käytettäessä (seed train) voidaan käyttää edullisesti noin 5 tilavuus-% ymppiä. j : Ravinnepitoisuuksia on seurattava. Glukoosipitoisuuden laskettua ··· .···. alle 5 g/l on lisättävä uutta glukoosia. Tyypillisessä kasvatussyklissä käytetään
noin 100 grammaa glukoosia ja noin 15 grammaa hiivauutetta litraa kohti. On J
ί " 30 haluttua käyttää typpilähde loppuun kasvatuksen aikana, koska tämä voimis- • Λ m taa sienten öljyntuottoa. Tämä pitää erityisesti paikkansa käytettäessä tuo- • ·ι:'α . tanto-organismina M. alpinaa. 1 • · · .··*. Erityisen edullisessa sovellutusmuodossa voidaan Mortierella alpinaa, jonka öljypitoisuus on korkea ja joka öljy sisältää runsaasti ARAa, kas- |
35 vattaa fermentorissa erittäin suurissa ravinnepitoisuuksissa. Tässä keksin- A
nössä on tehty se yllättävä löytö, että fermentaation alussa voidaan lisätä sei- 117442 9 laisia pitoisuuksia typpipitoisia ravinteita, jotka ylittävät sen ravinnepitoisuuden, joka saadaan käyttämällä 15 grammaa hiivauutetta litraa kohti, sikäli kuin fer- $ mentaation aikana lisätty hiilipitoisen ravinteen kokonaismäärä on verrattain " korkea. Hiiliravinteen kokonaismäärä, jota edullisesti syötetään jatkuvasti tai 5 aika ajoin ensimmäisten 25 - 50 %:n aikana fermentaatioon käytetystä ajasta, tai erinä useina eri ajankohtina tällä samalla osalla fermentaatioon käytettävästä ajasta, vastaa 75 - 300 grammaa glukoosia litrassa elatusainetta (C:N -suhde >5:1, ilmoitettuna glukoosin ja hiivauutteen suhteena, w/w). Erityisen edullisessa fermentointitavassa typpiravinne on soijajauho, jota lisätään sellai-10 nen määrä, että pitoisuudeksi saadaan noin 16 grammaa litrassa mediumia, ja hiiliravinnetta käytetään aluksi pitoisuudessa, joka vastaa noin 80 grammaa glukoosia, tai tätä suuremmassa pitoisuudessa. Käytettäessä suuria hiili- ja typpiravinteiden pitoisuuksia on edullista steriloida näitä kahta ravinneliuosta sisältävät liuokset erikseen. Tässä keksinnössä on myös tehty se havainto, 15 että biomassan saantoa voidaan parantaa sellaisten fermentaatioiden kyseessä ollessa, joissa on käytetty suuria hiiliravinnepitoisuuksia, jättämällä osa typ- 4 piravinteesta varalle ja syöttämällä jäljellä olevaa typpiravinnetta jatkuvasti tai yhtenä tai useampana eränä fermentaation kuluessa.
#... Toisinaan viljelmässä muodostuu runsaasti vaahtoa. Vaahtoamisen *:·; 20 estämiseksi voidaan lisätä mahdollisesti vaahdonestoainetta, kuten jotakin tä- * · ♦ *; / män alan ammattikokemuksen perusteella tunnettua vaahdonestoainetta, *·1·1 esimerkiksi Mazu 310®:tä tai kasviöljyä.
• ·
Kasvatuslämpötilaa voidaan vaihdella. Sekä ARAa että EPAa muo- 5 • · :···„ : 1·· dostavilla sienillä on kuitenkin taipumus muodostaa vähemmän EPAa ja i : 25 enemmän ARAa kasvatettaessa niitä korkeahkoissa lämpötiloissa. Esimerkiksi
kasvatettaessa Mortierella alpinaa alle 18 °C:ssa se alkaa tuottaa EPAa. Siten I
• on edullista pitää lämpötilaa tasolla, joka indusoi ARAn muodostumista mui-··· .2·. den rasvojen kustannuksella. Sopivat lämpötilat ovat tyypillisesti noin *·1 25 °C:sta noin 30 °C:seen.
** " 30 Kasvatusta jatketaan edullisesti siihen asti, kunnes haluttu biomas- ·1♦ san tiheys saavutetaan. Haluttu biomassa on noin 25 grammaa organismia lit- 2 . rassa. Tällainen biomassa saavutetaan tyypillisesti 48- 72 tunnin kuluessa |; · · .1··. ymppäyksestä. Tällä ajankohdalla organismi sisältää tyypillisesti noin 5 - 40 % monimutkaisia lipidejä, toisin sanoen öljyä, josta noin 10-40 % on ARAa tai 35 edullisesti 40 % ARA-ryhmiä triglyseridifraktiossa, edullisemmin noin 50 % ARAa triglyseridifraktiossa ja se voidaan ottaa talteen.
10 117442
Sienen fermentaatio ARAn muodostamiseksi tämän keksinnön mukaisesti voidaan suorittaa fermentaatiomediumissa, jonka pH on noin 5-8.
• s*
Biomassan, öljyn ja ARAn saantoa M. alpina -viljelmistä voidaan parantaa ^ käyttämällä mediumin pH:n profilointia sen sijaan, että pH:n annettaisiin nous-5 ta sitä säätämättä. Saantoja voidaan parantaa myös pitämällä hapen pitoisuus fermentaation aikana korkeana. Nämä fermentaatiomenetelmän modifikaatiot * ovat erityisen tehokkaita käytettäessä fermentorissa suuria ravinnepitoisuuk- sia.
Kun typpiravinteen pitoisuus fermentointia aloitettaessa ylittää pi- ;; 10 toisuuden, joka vastaa noin 15 grammaa hiivauutetta litraa kohti, ja/tai hiili- ravinteen pitoisuus ylittää pitoisuuden, joka vastaa noin 150 grammaa glu- .
koosia litrassa, voi hiivan kasvu inhiboitua. Tämä kasvun inhibitio voidaan f kiertää käyttämällä syöttöpanosfermentaatiota (fed batch), esimerkiksi jaka- f maila fermentaatioon käytettävä ravinne eriin, jotka syötetään fermentoriin pe- 15 räkkäin sen jälkeen kun aikaisemmasta erästä saatu ravinne on metaboloi- tunut osaksi tai kokonaan. Edut, jotka kasvuinhibitiosta vapautuminen tuottaa, i voidaan saada syöttämällä ainoastaan hiiliravinnetta (tätä kysymystä on käsi- i telty julkaisussa Shinmen et ai.). Tässä keksinnössä on tehty se havainto, että ... tämä hyöty voidaan myös saada jakamalla ravinteet kokonaisuudessaan eriin • · *;**! 20 ja syöttämällä erät fermentaation aikana tai syöttämällä ravinneliuosta jatku- • · · *; vasti. Samalla tavoin on tehty se yllättävä löytö, että tämä etu voidaan saada | syöttämällä fermentaatioon, jossa hiili ravinteen pitoisuus fermentaatiota aloi- § • · "ΐί ·Υ·: tettaessa on suuri, pelkästään typpiravinnetta.
• *·· Tässä keksinnössä on myös tehty se hämmästyttävä havainto, että f
:T: 25 kasvun inhibitiota voidaan lieventää käyttämällä fermentaation pH:n profiloin- I
tia, pitämällä fermentorissa yllä suurta hapen osapainetta tai käyttämällä näitä ^ . molempia. Tässä keksinnössä on tehty se havainto, että fermentoitaessa M.
• · * .·*·. alpinaa runsaasti ravinteita sisältävässä mediumissa, jonka pH on matala (pH =5-6), tämä johtaa biomassan kasvun tehostumiseen (ja myöskin öl- • “ 30 jysaannon suurentumiseen). Näissä olosuhteissa muodostuneessa öljyssä oli- ;...: vat kuitenkin öljyn sisältämien ARA-ryhmien määrät melko pienet. Tästä poi- . .*. keten fermentaatio korkeassa pH-arvossa (pH = 7 - 7,5) johtaa siihen, että öljy .···. sisältää suurehkoja määriä ARAa mutta kasvu on heikompaa. Edullisessa fer- • · mentaatiotavassa tämän keksinnön mukainen fermentaatiomenetelmä sisältää 35 sen, että pH profiloidaan sellaiseksi, että se on fermentaation varhaisissa vai- :"·Λ heissä matala ja myöhäisemmissä vaiheissa korkea. Varhaiset vaiheet si- . 4 117442 11 sältävät nopean (eksponentiaalisen) kasvun vaiheet, jona aikana ravinteet metaboloituvat nopeasti; myöhempiä vaiheita ovat stationaarivaihe, jossa solun jakautuminen pysähtyy, mikä johtuu tavallisesti siitä, että yhtä tai useampaa ravinnetta ei ole riittäviä määriä, ja runsaasti ARAa sisältävän öljyn muo-5 dostuminen tehostuu. Profilointi voidaan suorittaa säätämällä fermentorin pH-arvoja tasoille, jotka säädetään kahdessa tai useammassa vaiheessa fermen-taation kuluessa.
Tässä keksinnössä on samoin tehty se havainto, että kun mediumiin liuenneen hapen määrä (D.O.) pidetään korkeana (esimerkiksi >40 % il- ^ 10 man suhteen kylläisen liuoksen määrästä), tämä johtaa suurien ravinne-pitoisuuksien aikaansaaman kasvun inhibition häviämiseen ja/tai öljyn sisältämien ARA-ryhmien suhteellisen pitoisuuden nousuun. Liuenneen hapen määrä voidaan pitää korkeana lisäämällä kasvatusastian painetta (pakottamalla enemmän ilmaa fermentorin ilmatilaan), parantamalla sekoitusta (esi-15 merkiksi suurentamalla sekoittimen kärjen nopeutta), ja lisäämällä ilmastusta (toisin sanoen lisäämällä fermentorin läpi menevän ilman määrää tietyssä 4 ajassa, joka tavallisesti ilmoitetaan VVM-yksiköissä, ilman tilavuutena fer- '% mentorin tilavuutta kohti minuutissa) ja/tai lisäämällä puhallettavan kaasun 02-... pitoisuutta. Näissä olosuhteissa suoritetun fermentaation on havaittu lisäävän • w ';··] 20 hiilen hyväksikäyttöä, mikä johtaa siihen, että fermentorissa muodostuva bio- V*: massan lopullinen konsentraatio suurenee ja runsaasti ARAa sisältävän öljyn • · ;.v muodostuminen lisääntyy. Erityisesti fermentaatiossa, joissa on käytetty yhtä ϊ.*·| tai useampaa edellä olevaa modifikaatiota, saadaan lopputulos, jonka mukaan fermentaatiossa muodostuu eristettävissä olevaa triglyseridiöljyä, joka sisältää f 25 vähintään 40 % ARA-ryhmiä ja edullisesti vähintään 50 % ARA-ryhmiä.
Erityisen edullisessa sovellutusmuodossa fermentaatiomediumin si- . sältämä hiiliravinnepitoisuus vastaa > 80 g/l glukoosia ja typpiravinnepitoisuus ,··«, vastaa > 16 g/l hiivauutetta, ja mediumin pH säädetään steriloinnin jälkeen ar- • · "* vojen 5 ja 6 välille. Kun ymppäys on suoritettu, mediumin pH pidetään sää- ·· : *·· 30 dettynä fermentaatiota alussa vallinneeseen arvoonsa tai hieman tämän ylä- puolelle. Sitten kun hiiliravinnepitoisuus on laskenut arvoon, joka on <60 . !\ grammaa glukoosiekvivalenttia litrassa (tavallisesti noin 48 tuntia), pH-säädön f .*·*. asetusarvo muutetaan arvoon, joka on likipitäen pH > 6. Ajankohtana, jolloin • * **' hapenottonopeus Oa/tai hiilidioksidin kehittymisnopeus, CER) saavuttaa mak- | 35 simiarvonsa (tavallisesti noin 72 tunnin kuluttua), tai tämän ajankohdan lähei- 4 syydessä, asetusarvo nostetaan pH-arvojen 6,5 ja 7 väliin (tämä tehdään ta 117442 12 vallisesti vähitellen, esimerkiksi nopeudella noin 0,1 pH-yksikköä tunnissa).
Tämän jälkeen pH:ta säädetään sen pitämiseksi fermentoinnin loppuvaiheiden I
aikana suunnilleen pH-arvojen 7 - 7,5 alapuolella.
Tämän sovellutusmuodon kyseessä ollessa liuenneen hapen pitoi-5 suus mediumissa (D.O.) pidetään lähellä 40% sen pitoisuudesta ilman suh- , -.) *4 teen kylläisessä liuoksessa, tai tämän yläpuolella, menetellen edullisesti siten, että kasvatusastian painetta lisätään vaiheittain arvoon 77 kPa (11 psi), sekoitusta lisätään arvoon, joka vastaa sekoittimen pään nopeutta 300 cm/s, ja ilmastusta lisätään arvoon 0,5 tilavuutta ilmaa fermentorin tilavuutta kohti mi-10 nuutissa. Kun fermentaatioseos on ohittanut nopean kasvun ja suuren 02-kulutuksen vaiheen, kasvu (ja 02:n kulutus) pienenee. Tässä vaiheessa voidaan sekoitusta/ilmastusta vähentää sikäli kuin liuenneen hapen määrä säilyy korkeana, tavallisesti yli 40 % sen määrästä ilman suhteen kylläisessä liuoksessa.
15 Optimoimalla M. alpinan fermentaatio tässä keksinnössä kuvatulla ^ tavalla on mahdollista saada erittäin suuria biomassasaantoja, joissa biomas-sa sisältää 20 - 60 % öljyä, jossa 25 - 75 paino-% öljystä on triglyseridimuo-dossa olevia ARA-ryhmiä. Biomassa Qa öljy) voidaan ottaa talteen tässä keksinnössä kuvatulla tavalla. Biomassa otetaan edullisesti talteen fermentorista ... 20 48 tunnin kuluessa siitä, kun fermentaatiossa on saavutettu maksimaalinen • · ··' ri *;··[ tuotantotaso, joka on määritetty grammoina ARAa litrassa päivää kohti. i *· " Organismi voidaan ottaa talteen millä tahansa sopivalla menetel- • · *’.·*.* mällä, kuten esimerkiksi suodattamalla, sentrifugoimalla tai sumutuskuivaa- Λ • · 1 j· maila. Pienehköjen kustannusten vuoksi voi suodatus olla edullista. >
f*.. 25 Kun organismi on otettu talteen, voidaan myseelikakku uuttaa. My- I
:T: seelikakku tarkoittaa talteenoton jälkeen saatua talteenotettua biomassaa.
Kakku voi olla irtonainen tai puristettu, murennettu tai murentamaton. Kakusta . .·. voi olla mahdollisesti poistettu kaikki jäljellä oleva vesi, kuten käyttämällä en- .···. nen uuttoa vakuumikuivausta, leijukuivausta, sumutuskuivausta tai kylmä- , 30 kuivausta. Jos tätä vaihtoehtoa käytetään, on ARAa sisältävän öljyn uuttami- : **· seksi edullista käyttää ei-polaarisia liuottimia. Vaikkakin mikä tahansa ei- * · · **..,·* polaarinen uuttoaine on sopiva, on heksaani edullinen. s . .·. Edullisessa sovellutusmuodossa öljy uutetaan kuivatusta biomas- sasta märkäjauhatuksella tai perkoloimalla juuri tislatun heksaanin avulla. Liu- i • · - £ 35 otinta lisätään tavallisesti siten, että liuottimen ja biomassan väliseksi suhteek- f si saadaan noin 5:1 (w/w). Kiinteät materiaalit erotetaan märkäjauhatuksen 117442 13 jälkeen uutteesta dekantoimalla tai sentrifugoimalla. On edullista pitää liuotinta sisältävä uute (misella) anaerobisena öljyn sisältämien tyydyttymättömien ras- ..¾ vahapporyhmien hapettumisen välttämiseksi. Misellasta poistetaan liuotin ^ puhdistamattoman sieniöljyn aikaansaamiseksi.
5 Sienibiomassasta ei-polaarisilla liuottimilla uutettu puhdistamaton öljy voi olla hahtuvamaista, erityisesti silloin, kun biomassa on jauhettua, koska ? jauhatus voi vapauttaa hienojakoisia partikkeleita, kuten solun seinämän fragmentteja ja liukoisia polysakkarideja. Tällaisen hahtuvamaisen öljyn selkeyttäminen voidaan suorittaa liuottamalla puhdistamaton öljy melko polaarisiin liuot- £ 10 timiin, kuten asetoniin tai alkoholiin. Edullisessa sovellutusmuodossa sienimy-seelin puhdistamaton öljyuute selkeytetään edelleen käyttämällä asetoniuut-toa/saostusta. Asetonimisella valmistetaan lisäämällä asetonia hahtuvamai-seen puhdistamattomaan öljyuutteeseen (edullisesti siten, että öljypitoisuu-deksi saadaan noin 20 %; toisin sanoen noin 4 tilavuusosaa asetonia yhtä 15 puhdistamattoman öljyn tilavuusosaa kohti), sekoittamalla seosta huolellisesti ja antamalla seoksen jäädä paikoilleen riittävän pitkäksi aikaa, jotta hienot j partikkelit saostuvat (tavallisesti huoneenlämpötilaa lähellä olevassa lämpötilassa). Öljypitoinen asetonimisella selkeytetään sentrifugoimalla ja/tai suodattamalla ja liuotin poistetaan tämän jälkeen asetonilla selkeytetyn sieniöljyn ai- ... 20 kaansaamiseksi. Asetonilla selkeytetty sieniöljy on edullinen käytettäväksi jät- • · V?' *;··* komuokkaukseen (esimerkiksi hartsin poistoon, valkaisuun ja hajunpoistoon *·’*:* tavanomaisten menetelmien avulla), koska sienibiomassan uuttamisen aikana j • * ~ *\v muodostuneet hienojakoiset fraktiot häiritsevät raffinointimenetelmää, jos niitä • · ·’.*·· ei poisteta asetonivaiheessa.
25 Vielä yksi edullinen sovellutusmuoto sisältää kuivan biomassan f
vastavirtauuton, joka voidaan suorittaa kaupallisesti saatavilla olevissa uutto- I
laitteissa, esimerkiksi Crown Ironworks -yhtiön valmistamassa laitteessa . .·. (Crown Mark IV ) tai French, Inc. -yhtiön valmistamassa laiteteessa, joita ei ta-
vallisesti käytetä kasviöljyjen eristämiseen vaan jotka on suunniteltu lian ja H
• · ^ 30 mullan erottamiseen. Vaikkakin uuttotehokkuudet eivät biomassan uudelleen- » * : ’·* jauhatuksen puuttuessa ole kovin suuria, on vastavirtauuttomenetelmällä se ·*..*·* etu, että siinä syntyy pienempi määrä "hienojakoisia fraktioita", mikä tämän . !*. ansiosta vähentää puhtaan raffinoidun öljyn talteenottamiseen liittyviä teknisiä • · · *" vaikeuksia. j 35 Vaihtoehtoisesti kostea kakku (joka tyypillisesti sisältää noin 30- 50 % kiintoaineita), voidaan murentaa ja uuttaa suoraan käyttäen polaarisia 117442 14 liuottimia, kuten etanolia tai isopropyylialkoholia, tai ylikriittistä nesteuuttoa liuottimilla, C02:lla tai NO:lla. Kakut murennetaan edullisesti ennen uuttoa. Tä- | män keksinnön avulla on mahdollista käyttää edullisesti taloudellisesti yli- - kriittisen nesteen käyttöön perustuvia uuttomenetelmiä. McHugh, et ai., Su-5 percritical Fluid Extraction, Butterworth (1986). Nämä menetelmät ovat alan ammattikokemuksen perusteella tunnettuja ja niitä ovat menetelmät, joita ny- f kyisin käytetään esimerkiksi kahvipapujen kofeiinin poistoon.
Edullinen vesipitoinen uuttomenetelmä sisältää sen, että myseeli-biomassa yhdistetään polaariseen isopropyylialkoholi-liuottimeen sopivassa 10 reaktioastiassa. Tällaiset astiat ovat tunnettuja. On haluttua käyttää kolmesta kuuteen osaa liuotinta kutakin biomassan osaa kohti. Yhdistäminen suoritetaan edullisesti typen alla tai antioksidanttien läsnä ollessa lipidiuutteen sisältämän ARAn hapettumisen ehkäisemiseksi. Tässä keksinnössä termejä "lipidiuute", "öljy”, "lipidikompleksi" ja "sieniöljy" käytetään toisiaan vastaavina 15 termeinä.
Seos voidaan uuton jälkeen suodattaa biomassan poistamiseksi li-pidiuutetta sisältävästä liuottimesta. Tässä vaiheessa biomassa voidaan ottaa talteen ja käyttää elintarvikkeiden lisäaineena. Tässä keksinnössä "elintarvikkeiden lisäaine" tarkoittaa rehua tai lisäainetta, joka on määrä yhdistää ... 20 tyypilliseen rehuun, kuten jyviin ja muihin näitä vastaaviin materiaaleihin, joita | • · ' >! *···* voidaan antaa eläimille. έ • · · ·:.> :.’*i Liuotin erotetaan lipidiuutteesta ja tämä voidaan myös ottaa talteen • · . * v.; käytettäväksi uudelleen, kuten käyttämällä haihdutusta sopivaan talteenottoas- ·*.*.: tiaan, minkä jäljelle jää materiaalia, josta tässä keksinnössä käytetään nimitys- ί 25 tä "puhdistamaton öljy". Isopropyylialkoholin käytöllä liuottimena on se haluttu * · : % piirre, että se johtaa lopputulokseen, jossa jäljellä oleva vesi saadaan poistu- -¾ maan puhdistamattomasta öljystä kokonaan, koska haihtuminen poistaa spon- . taanisti muodostuneen veden ja isopropyylialkoholin aseotrooppisen seoksen.
Vaikkakin puhdistamatonta öljyä voidaan käyttää ilman jatkokäsitte- | • · «Λ? 30 lyä, se voidaan myös puhdistaa edelleen. Tässä ylimääräisessä puhdistus- -¾ • · : ’·· vaiheessa voidaan käyttää menetelmiä, kuten menetelmiä, joita käytetään le- ' ·**."*: sitiinin valmistamisessa kasvistuotteista ja jotka ovat alan ammattikoke- . ]·. muksella tunnettuja. Nämä menetelmät eivät modifioi kemiallisesti eivätkä ko- • · · \\\ valenttisesti ARAa sisältäviä lipidejä eivätkä itse ARAa.
“** 35 Saannot ovat vaihtelevia, mutta ne ovat tyypillisesti noin 5 grammaa f ARAa sisältävää fosfolipidiä 100 grammasta kuivattua myseeliä. M. alpinan '{.
15 1 1 7442 kyseessä ollessa voidaan saada ylimääräinen 10-50 gramman määrä trigly-seridiä sadassa grammassa kuivaa myseeliä. Joko puhdistamatonta öljyä tai ί puhdistettua tuotetta voidaan käyttää annettavaksi ihmisille. Näiden kummankin on määrä sisältyä tässä keksinnössä käytettyyn termin ARASCO mää-5 ritelmään.
Tämän keksinnön edullisin kohde on saattaa käyttöön lisäaine, joka on tarkoitettu käytettäväksi äidinmaidonvastikkeissa siten, että ARAn konsent-raatio tällaisessa äidinmaidonvastikkeessa vastaa läheisesti ihmisen rintamaidon ARA-konsentraatiota. Taulukossa 2 on verrattu ARASCOn sisältämien 4 10 rasvahappojen koostumusta rintamaidon sisältämien rasvahappojen koostumukseen sekä äidinmaidonvastikkeeseen, josta puuttuu ja joka sisältää ARASCOa.
_itl • · 1 2 3 · ·' 4 • « ·.·;»; *·..· . "s * · · ·..'·? • · 1·’ • · • 1 · • · · * « • · • · · • · ! ! • · * 1 ··· • 1 · • · · · .· • · · • 1 1 • · · * · ♦ - • · * · 1 ···...
• · • ·
♦ M
* 1 « • · - 1' * · • · 1 · · 2 • · ·
(M
3
· S
: : :? • 1 · 117442 16
Taulukko 2 , • · At
Sieniöljytuotteiden ja äidinmaidon rasvahappokoostumus
Rasvahappo ARASCO Äidinmaidon- Äidinmaidon- Rintamaito vastike vastike + öljy 8.0 - 24,1 23,6 0,35 10:0 - 17,7 17,3 1,39 12:0 -- 14,9 14,6 6,99 14:0 4,6 5,8 5,8 7,96 . * 16:0 16,0 6,8 7,0 19,80 16:1 3,2 0,2 0,3 3,20 .
18:0 - 2,3 2,3 5,91 18:1 26,4 10,0 10,3 34,82 ί 18:2n6 9,9 17,4 17,3 16,00 18:3n3 4,1 0,9 1,0 0,62 20:1 2,2 0,1 0,14 1,10 20:2n6 - - - 0,61 v 20:3n6 1,4 - 0,03 0,42 20:4n6 32,0 - 0,64 0,59 20:5n3 - - -- 0,03 ,··*.
22:1 .. .. .. 0,10 * 22:4n6 - - 0,21 ·*.*·.*·· 22:5n6 - — - 0,22 22:6n3 -- - - 0,19 ·· • · * ·· ...
1Simopoulis, A., Omega-3 Fatty acids in Health and Disease pp. 115- 156 4 5 (1990).
• · · *“·* Kuten voidaan havaita, on ARASCOIIa täydennetyssä äidinmaidon- ^ vastikkeen sisältämän ARAn määrä hyvin lähellä ihmisen rintamaidon sisältä- ·*·.. miä ARA-pitoisuuksia. Lisäksi ARASCOn lisäys ei ole muuttanut merkittävästi .*··. äidinmaidonvastikkeen kokonaisrasvahappokoostumusta. Voidaan käyttää ·* 10 tyypillisesti noin 50- noin 100 mg ARASCOa litrassa äidinmaidonvastiketta.
· · *»·* Vaadittu tietty nimenomainen ARASCOn määrä on riippuvainen ARA- pitoisuudesta. Tämä voi vaihdella noin 10:stä noin 70 %:iin öljyn sisältämistä f rasvahapoista. ARA-pitoisuus on tyypillisesti kuitenkin 30 - 50 %. Äidinmaidonvastikkeen täydentämiseen käytetty öljy sisältää edullisesti vähintään 40 % - 117442 17 rasvahapporyhmiä ARAn muodossa, edullisemmin vähintään 50 % ARA-ryhminä. Silloin kun ARA-pitoisuus on noin 30 %, on erityisen edullinen täy- : dentämiseen käytettävä määrä noin 600 - 700 mg ARASCOa litrassa äidin- k maidonvastiketta. Tällainen määrä laimentaa äidinmaidonvastikkeen, kuten 5 Similac® (Ross Laboratories, Columbus, Ohio) olemassa olevia rasvakompo-nentteja ainoastaan yhdellä osalla ARASCOa viidessäkymmenessä osassa äidinmaidonvastikkeen öljyjä. ARA-pitoisuudeltaan suuremmista öljyistä voidaan laskennallisin keinoin saada selville niittä vastaavat laimentumissuhteet.
ARASCO ei edullisesti sisällä olennaisesti lainkaan EPAa. » 10 Kun edellä kuvatussa menetelmässä käytetään Pythium insi- !
diosumia, on uutettu ARAa sisältävä öljy pääasiassa fosfolipidiä. Tässä kek- J
sinnössä on kuitenkin tehty se havainto, että tässä keksinnössä kuvatulla tavalla kasvatetusta P. insidiosumista voidaan myös saada talteen merkittävä määrä runsaasti ARA-ryhmiä sisältävää triglyseridiä. Kun tässä menetelmässä 15 käytetään Mortierella alpinaa, on ARAa sisältävä öljy pääasiassa triglyseridiä.
Molemmat ARASCOn muodot ovat käyttökelpoisia äidinmaidonvastikkeeseen lisättävinä lisäaineina. Edellisestä ei saada äidinmaidonvastikkeeseen ainoas- 1 taan ARAa vaan myös emulgointiainetta, toisin sanoen fosfatidyylikoliinia, jota lisätään tavallisesti kaupallisiin äidinmaidonvastikkeisiin. M. alpinasta peräisin 20 olevan öljyn valmistus on todennäköisesti taloudellisempaa.
• · · Tämän keksinnön mukaisella ARAa sisältävällä öljyllä on monia -jj •V·: käyttömuotoja sen lisäksi, että sitä käytetään lisäaineena äidinmaidonvastik- · ·**:*: keessa. Kuten alan ammattikokemuksen perusteella on tunnettua, liittyy ARAn puutoksiin patologisia tiloja, kuten marasmia [Vajreswari, et ai., Metabolism 39 ·*·„ 25 (1990) 779 - 782], atooppisia sairauksia [Melnik, B., Monatsschr. Kinderheilta • 138 (1990) 162 - 166], maksasairautta, fenyyliketonuriaa, tardiivia dyskinesiaa tai useita erilaisia peroksisomaalisia sairauksia. Yhdessä tämän keksinnön so- . .. vellutusmuodossa näitä patologisia tiloja hoidetaan antamalla potilaalle farma- • · · ; seuttisesti tehokas määrä tämän keksinnön mukaista öljyä. Farmaseuttisesti r; **;·* 30 tehokas määrä on tyypillisesti se määrä, joka tarvitaan normalisoimaan ARAn • *·. pitoisuus potilaan seerumissa. Erityisen edullisia tällaisten patologisten tilojen :***: hoitamiseen tarkoitettaviksi täydennysravinteiksi ovat edellä kuvatut ARA-öljyt, erityisesti öljyt, joissa esiintyy vähintään 40 % ARA-ryhmiä tai edullisemmin :!.** 50 % ARA-ryhmiä. Öljyä voidaan antaa enteraalisesti, paikallisesti tai parente- • *
*···' 35 raalisesti terveydenhoitopalvelun tuottajan valitsemalla tavalla. J
'18' 117442
Kapselointi, sellaisena kuin se on tunnettua tämän alan ammattikokemuksen perusteella, on tehokas enteraalinen annostelumenetelmä. Sieni-öljyä sisältäviä kapseleita voidaan antaa henkilöille, jotka tarvitsevat tai jotka haluavat ruokavalionsa täydennykseksi ARAa. Tällainen menetelmä on erityi-5 sen tehokas ARAn antamiseksi raskaana oleville tai imettäville naisille.
Niissä tapauksissa, joissa ARASCOa annetaan patologisiin tiloihin liittyvän ARAn puutteen torjumiseksi, on annettava farmaseuttisesti tehokas määrä. Tämä määrä on tarpeettomia kokeiluihin turvautumatta mahdollista määrittää alan ammattikokemuksen perusteella. Tämä määrä on tyypillisesti ξ 10 0,5- 2,0 g päivässä, joka määrä normalisoi tavallisesti seerumin ARA- pitoisuuden.
Vielä yksi tämän keksinnön sovellutusmuoto koskee kosmeettisia koostumuksia, jotka sisältävät ARASCOa, kuten tässä keksinnössä kuvattuja runsaasti ARAa sisältäviä öljyjä. Kosmeettiset koostumukset tarkoittavat näitä 15 yhdisteitä, joita käytetään kosmeettisina aineina. Edullinen esimerkki tällaisesta koostumuksesta on ryppyvoide. Tällaiset kosmeettiset koostumukset tarjoavat tehokkaan keinon ARAn levittämiseksi paikallisesti iholle, millä on tarkoitus edistää ihon kiinteyden säilymistä.
Kun tämä keksintö on kuvattu yleisellä tasolla, esitetään seuraavat 20 sitä rajoittamattomat esimerkit sen kuvaamiseksi yksityiskohtaisemmin. / • · · Λ
· -’V
• # • · · : Esimerkki 1 • *· *: * · P. insidiosumin lipidin valmistus ja lisääminen äidinmaidonvastikkee- ^ * · seen > • * · .· ϋ * » ·’· 80 litran vetoiseen (kokonaistilavuus) fermentoriin yhdistettiin 51 lit- ; |, .*:*. 25 raa talousvettä, 1,2 kg glukoosia, 240 grammaa hiivauutetta ja 15 ml Mazu 210S® -vaahdonestoainetta. Fermentori steriloitiin 121 °C:ssa 45 minuuttia.
. Steriloinnin kuluessa lisättiin ylimääräinen 5 litraa kondenssivettä. pH säädet- • I » tiin arvoon 6,2 ja fermentoriin lisättiin noin 1 litra ymppiä (solutiheys 5-10 g/l), • · *·;·* Pythium indisiosumia (ATCC #28 251). Ravistelunopeus säädettiin arvoon • *.. 30 125 kierrosta minuutissa (roottorin kärjen nopeus 250 cm/s) ja ilmastuksen määrä asetettiin arvoon 30 litraa minuutissa [1 SCFM (standardi kuutiojalkaa , \ minuutissa)]. Kun reaktori oli ollut käynnissä 24 tuntia, ilmastuksen määrä ko- • · · .
“I liotettiin arvoon 80 litraa minuutissa (3 SCFM). Kun reaktori oli ollut käynnissä , ***** 28 tuntia, siihen lisättiin vielä 2 litraa 50-%:ista glukoosisiirappia (1 kg glukoo- a 35 siä). Kun reaktori oli ollut käynnissä 50 tuntia, sen sisältö koottiin talteen, mistä ^ Λ 19 117442 saatiin märkäpainoksi noin 2,2 kg (kuivapaino noin 15 g litraa kohti). Talteen otettu biomassa puristettiin kakuksi, jonka kiintoainepitoisuus oli suuri (50 % kiintoaineita) imusuodattimella, minkä jälkeen se kylmäkuivattiin. Kuivattu bio- if massa jauhettiin huhmareella ja männällä ja uutettiin 1 litralla heksaania kuta-5 kin kuivan biomassan 200 grammaa kohti huoneenlämmössä seosta jatkuvasti sekoittaen kahden tunnin ajan. Tämän jälkeen seos suodatettiin ja suodos ! haihdutettiin, mistä saatiin noin 5-6 grammaa puhdistamatonta öljyä kutakin f kuivan biomassan 100 grammaa kohti. Tämän jälkeen biomassa uutettiin uudelleen 1 litralla etanolia kutakin kuivan biomassan 20 grammaa kohti yhden i 10 tunnin ajan huoneenlämmössä, suodatettiin ja liuotin haihdutettiin, mistä saa- § tiin ylimääräinen 22 gramman suuruinen erä puhdistamatonta öljyä kutakin kuivan biomassan 100 grammaa kohti. Toinen fraktio oli pääasiassa fosfolipi- -¾ dejä, kun taas ensimmäinen fraktio sisälsi fosfolipidien ja triglyseridien seosta.
Yhdistetystä fraktiosta saatiin öljyä, joka sisälsi noin 30 -35 % arakidonihappoa 15 eikä lainkaan havaittavissa olevaa EPAa. Tätä öljyä lisättiin pisaroittain kau- | palliseen äidinmaidonvastike-tuotteeseen, SIMILAC® (Ross Laboratories, s
Columbus, Ohio) käyttäen täydentämiseen 60 mg:n määrää valmistetun mediumin litraa kohti.
Esimerkki 2 ϊ ·'*'*: 20 M. alpina -lipidin valmistus ja lisääminen äidinmaidonvastikkeeseen • .
•V·· Mortierella alpinaa (ATCC #42 430) kasvatettiin kahden litran ra-
:Y; vistelupullossa, joka sisälsi 1 litran talousvettä ja 20 grammaa peruna-glu- Y
:*\j koosi-mediumia. Pulloa pidettiin ravistelussa vaakatasossa pyörivällä liikkeellä * ja sitä pidettiin 25 °C:ssa seitsemän päivän ajan. Kun biomassa oli otettu tai- - 25 teen sentrifugoimalla, se kylmäkuivattiin, mistä saatiin noin 8 grammaa run- | • * 'f- säästi lipidiä sisältävää myseeliä. Myseeli uutettiin käyttäen heksaania kuten , esimerkissä 1 ja tässä oli tuloksena noin 2,4 g puhdistamatonta öljyä. Tämä f i .*.*.* öljy sisältää noin 23 % arakidonihappoa ja sitä lisättiin kaupalliseen Similac®- • · *·;** äidinmaidonvastikkeeseen pisaroittain konsentraatioissa 1000 mg litraa kohti.
• · • ·
• M
,*··· 30 Esimerkki 3 • Ϊ *, Arakidonihapon tuotanto suuressa mittakaavassa M. alpinaa käyttäen • « · ."Y Ymppifermentoriin, joka sisältää GYE-mediumia (50 g/l glukoosia ja -¾ '···' 6 g/l Tastone 154:ää) ympätään M. alpinaa. Fermentaatiolämpötila asetetaan arvoon 28 °C, alkuvaiheessa käytettävä ravistelu arvoon 130 - 160 cm/s, alku- i f 117442 20 vaiheessa käytettävä fermentoriastian paine 40 kPa:ksi (6 psi:ksi) ja alkuvai- 1 heessa käytettävä ilmastuksen määrä arvoon 0,25 WM. pH säädetään ennen sterilointia arvoon 5,0 ja fermentaatioseoksen pH säädetään fermentaation aloittamiseksi steriloinnin jälkeen arvoon 5,5. Mediumin pH pidetään arvossa 5 > 5,5 käyttämällä 8 N NaOH:ta. Happipitoisuus pidetään liuenneen hapen määrässä, joka on >40 %, säätämällä ravistelua/ilmastusta seuraavassa järjestyksessä: fermentoriastian paine nostetaan arvoon 77 kPa (11 psi), ravis-telunopeutta lisätään arvoon 175 cm/s roottorin kärjen nopeutena ilmoitettuna; ja ilmastus nostetaan arvoon 0,5 WM. Vaahdon muodostuminen estetään li-10 säämällä tarvittaessa Dow 1520-US -vaahdonestoainetta. (Mediumiin on lisättävä ennen sterilointia vaahtoamisen estämiseksi noin 0,1 ml/l vaahdones- · toainetta). .
Ymppi siirretään ymppäysfermentorista pääfermentoriin 12 tunnin > kuluessa sen jälkeen kun pH on noussut arvoon 6,0 yläpuolelle.
15 Pääfermentori sisältää GYE-mediumia (50 g/l glukoosia ja 6g/l
Tastone 154:ää); glukoosi steriloidaan erikseen ja lisätään pääfermentoriin steriloinnin jälkeen. Fermentorin lämpötila asetetaan arvoon 28 °C, aloitettaessa käytettävä ravistelu arvoon 160 cm/s, aloitettaessa käytettävä fermentoriastian paine 40 kPa:ksi (6 psi:ksi) ja aloitettaessa käytettävä ilmastuksen mää-20 rä arvoon 0,15 VVM. Aloitettaessa käytettävä pH säädetään steriloinnin jäi- I
• · · keen arvoon 5,5 ja mediumin pH pidetään arvossa > 5,5 käyttämällä 8 N Na- * · \*·: OH:ta. pH:n annetaan kohota stationaarivaiheen aikana (tämä alkaa noin f ϊV: 24 tuntia ymppäyksestä) mutta se pidetään arvon 6,8 alapuolella lisäämällä H2S04:ää. Happipitoisuus pidetään liuenneen hapen arvossa, joka on > 40 %, f • · ·*· 25 lisäämällä fermentoriastian paine vaiheittain arvoon 77 kPa (11 psi) lisäämällä :;i • · .r sekoitusnopeutta arvoon 175 cm/s ilmoitettuna roottorin kärjen nopeutena, ja * lisäämällä ilmastusta arvoon 0,5 VVM. Vaahtoaminen estetään lisäämällä tarvittaessa Dow-1520-US -vaahdonestoainetta. (Vaahdonestoainetta on lisät-tävä vaahtoamisen estämiseksi mediumiin noin 0,1 ml/l).
**;·* 30 Viljelmästä otetaan näytteitä joka 12. tunti biomassan ja rasva- j**.. happojen analysoimiseksi ja talteenotto aloitetaan 3 - 4 päivää siitä, kun pH on noussut arvoon 6,5. Kuivan biomassan tiheyden on oltava > 8,5 g/l. Elatus- ? aineen glukoosikonsentraation on pitänyt pudota arvosta 50 g/l arvoon >25 g/l. Elatusaine käsitellään soluja talteenotettaessa kokonaisuudessaan 1, • · ''-'f **··* 35 kuppisentrifugilla myseelin erottamiseksi käytetystä mediumista ja biomassa ? kuivataan.
117442 21
Esimerkki 4 M. alpinasta saatavat biomassan saannon parantaminen - ensimmäinen ^ ajo M. alpinaa kasvatettiin sekoitettavissa 201 säiliöfermentoreissa, jot-5 ka oli ympätty esimerkissä 3 kuvatun menetelmän mukaisesta ravistelu-pulloviljelmästä. Kun M. alpinaa kasvatettiin mediumissa joka sisälsi 65 g/l glukoosia (Staleydex) ja 6 g/l hiivauutetta (Tastone 154), saatiin biomassaa muodostumaan 12 g/l. Kun 16 tunnin kohdalla lisättiin vielä 6 g/l Tastone154:ää, saatiin biomassaa muodostumaan 18 g/l. 1 10 Esimerkki 5 M. alpinasta saatavan biomassan saannon parantaminen - toinen ajo : . 3
Suoritettiin kokeita, joilla tähdättiin biomassan lisäämiseen vielä tästäkin lisäämällä uutta Tastone154:ää. Nämä kokeet koostuivat 2 x 20 I fer- mentaatioseoksista, joissa sieniä pidettiin 168 tuntia. Molempien näiden fer- 15 mentaatioiden kyseessä ollessa oli glukoosikonsentraatio fermentaatiota aloi- y tettaessa 100 g/l (verrattuna esimerkin 4 mukaiseen konsentraatioon 65 g/l).
Yhteen fermentoriin lisättiin Tastone154:ää lisäyksinä, joiden määrä oli 3 x ;·** 6 g/l ja toiseen lisättiin lisäyksiä, joiden määrä oli 4 x 6 g/l. Hiivauutteesta vai- • * * ^ ; / niistettiin konsentroitu liuos, tämä autoklavoitiin ja lisättiin fermentoriin useina ϊ *·*.·* 20 eri ajankohtina steriloinnin jälkeen. ! • * · h-
Ympin valmistamiseksi ympättiin käyttöymppejä (working seeds) f ·· If : *·· (1 ml maseroitua myseeliä) kahteen pulloon, joista kumpikin sisälsi 50 ml GYE-mediumia (100 g/l Staleydexia ja 6 g/l Tastone154:ää) ja viljelmiä kasvatettiin 4 päivän ajan 28 °C:ssa ja nopeudella 150 kierrosta minuutissa. ΐ ; 25 4 päivän kasvatuksen jälkeen elatusaine sisälsi rakeistunutta biomassaa; ra- • · * * .···. keet olivat läpimitaltaan 2 - 5 mm. Kasvu oli näissä pulloissa oletettua hitaam-
..·* paa mahdollisesti siitä syystä, että glukoosin konsentraatio oli suurempi. Bio- J
* a : t" massaa maseroitiin 2x 3 sekunnin ajan Waring-sekoittimessa ja kumpaankin *...·* kahdesta 2,8 l:n Fehrnbach-ymppäyspullosta, joiden nettotilavuus oli 800 ml, * ; 30 lisättiin 25 ml maseraattia. (Aikaisemmissa kokeissa oli käytetty 10 ml mase- • * · * ί ;·**: raattia. Ympin määrää suurennettiin, koska ymppäyspullossa käytettiin pie-
nempää biomassan tiheyttä ja koska suuremman glukoosikonsentraation vuoksi kasvun Fehrnbach-pulloissa odotettiin olevan hitaampaa). Fehrnbach- J
pullojen medium oli glukoosi (Staleydex) 100 g/l ja hiivauute (Tastone154), f 35 8 g/l. Glukoosi ja hiivauute autoklavoitiin erikseen 40 minuutin ajan. Ymppifer- ; \ : 22 117442 mentaation lämpötila pidettiin 28 °C:ssa ja ravistelunopeus oli 100-150 kierrosta minuutissa.
Fehrnbach-pulloissa suoritetun 44 tunnin kasvatuksen jälkeen ymp-pi siirrettiin kahteen 20 litran fermentoriin. Ymppi oli erittäin irtonaisten hyyfi-5 aggregaattien muodossa ja biomassan tiheys oli noin 5,2 g/l.
Asemissa 14 ja 15 sijaitsevat fermentorit, jotka sisälsivät 1,6 kg (10 %) glukoosia (Staleydex), ja Mazu 204 -vaahdonestoainetta (1,6 g liuotet- -i tuna 12,5 litraan R0-H20:ta), steriloitiin 45 minuuttia 122°C:ssa. Tämän jälkeen kumpaankin fermentoriin lisättiin (tunnin 0 kohdalla) 800 ml ymppiä 10 (5 %). Fermentorin käyttömuuttujat olivat: Lämpötila 28 °C,
pH: tämä oli säädetty arvoon 5,5 käyttäen 2 N NaOH:ta ja 2 N
H2S04:ää,
Ilmastus: 0,5 WM, 15 Vastapaine: 20 kPa (0,2 baaria)
Ravistelunopeus (aluksi): 80 cm/s, ja liuenneen hapen määrä: tämä säädeltiin arvoon, joka oli yli 40 %.
Asema 14: 3 x 6 g/l Tastone 154:ää ·...·* Hiivauutetta (Tastone 154:ää) liuotettiin konsentraatioon 96 g/l ja ·*.'·/ 20 tämä autoklavoitiin 1 tunnin ajan. Hiivauutesyötteet, joita käytettiin 3X11 suu- ruisia määriä (1,8 %), lisättiin 0., 20. ja 26. tunnin kohdalla. > 15. tunnin kohdalla liuenneen hapen määrä laski alle 40 %:iin ja ra- r * · ·*. vistelunopeutta lisättiin vähitellen arvoon 175 cm/s aikavälillä 15- 22 tuntia. ^ • Tämän jälkeen liuenneen hapen määrää säädettiin lisäämällä ilmavirtaan hap- • · · 25 pea; happea lisättiin ilmavirtaan aikavälillä 23 - 72 tuntia. Ravistelunopeutta li- ? . sättiin vielä 36 tunnin kohdalta alkaen sen varmistamiseksi, että sisältö se- koittui kunnolla. 48 tuntiin mennessä oli ravistelunopeutta lisätty arvoon ϊ · *;** 200 cm/s; 72 tuntiin mennessä arvoon 250 cm/s ja 80 tuntiin mennessä ar- • ·.. voon 280 cm/s. 120. tunnin kohdalla ravistelunopeus nostettiin arvoon f :*··. 30 290 cm/s, jotta lämpötilaa olisi saatu säädettyä kunnollisesti. 144. tunnin koh- * 4 \ dalla ravistelunopeus laskettiin arvoon 280 cm/s. Γ *.*;* Asema 15: 4 x 6 g/l Tastone 154:ää ' i · ···* Hiivauutetta (Tastone 154), jota käytettiin 384 g, liuotettiin konsent raatioon 96 g/l ja tätä autoklavoitiin 1 tunnin ajan. Hiivauutteen lisäykset, joi-35 den määrät olivat 4x11, (2,4 %), tehtiin 0., 20., 26. ja 32. tunnin kohdalla. * 117442 23 •w
Liuenneen hapen määrä laski 16 tunnin kohdalla alle 40 %:iin ja ra-vistelunopeus nostettiin 23. tuntiin mennessä vähitellen arvoon 175 cm/s. Tämän jälkeen liuenneen hapen määrää säädettiin yli 40 %:ksi lisäämällä ilmavirtaan happea; happea lisättiin ilmavirtaan aikavälillä 23 - 72 tuntia. Ravistelu-5 nopeutta lisättiin vielä 36 tunnin kohdalta alkaen sen varmistamiseksi, että sisältö sekoittui kunnolla. 48 tuntiin mennessä oli ravistelunopeus nostettu arvoon 210 cm/s; 72 tuntiin mennessä arvoon 260 cm/s ja 80 tuntiin mennessä arvoon 290 cm/s. 90 tunnin kohdalla ravistelunopeus laskettiin arvoon 280 cm/s ja 144 tunnin kohdalla ravistelunopeus laskettiin arvoon 260 cm/s.
10 Havainnot:
Molemmissa fermentoreissa oleva biomassa oli ympättäessä erittäin irtonaisten hahtuvaisten hyyfiaggregaattien muodossa. Rakeita alkoi muodostua 24 tuntiin mennessä. Rakeet olivat pieniä (1-3 mm) ja ne sisälsivät pienen keskusytimen ja suuren irtonaisen ääriosan. 48 tunnin kohdalla rakeet 15 olivat suurempia ja ne olivat tarkkarajaisempia. 72 tunnin kohdalla ääriosat olivat kapeampia ja monet irralliset hyyfifragmentit osoittivat, että rakeet olivat fragmentoitumassa. 168 tuntiin mennessä olivat rakeiden ytimet läpimitaltaan 0,5-2 mm, ääriosat olivat kaventuneet ja hyyfit aggregoitumassa paksuiksi säikeiksi, ja esiintyi monia kondensoituneita hyyfiaggregaatteja.
20 Fermentoreissa esiintyi erittäin vähäistä vaahtoamista ensimmäis- ten 24 tunnin aikana. Tämän jälkeen vaahtoaminen lisääntyi ja se estettiin li- f : säämällä käsin vaahdonestoainetta vaahtokerroksen korkeuden noustessa yli :·. 2-4 cm. Vaahtoaminen heikkeni jonkin verran 48 tuntiin mennessä vaikkakin - *·;. sitä esiintyi ajoittain. Vaahtoamista ulostulosuodattimiin esiintyi kummassakin 7
» · I
25 fermentorissa ainoastaan kerran näiden fermentaatioiden aikana. Fermentaa- ; . ‘.:ä . tioihin tarvittiin noin 150 ml vaahdonestoainetta, -f j · » ΐ ;;;* Molempien fermentorien nestepatsaan päälle kertyi huomattava *··.·’ määrä yhteen tarttunutta biomassaa. Tämä ei ole harvinainen ongelma fer- • * f mentoitaessa myseelejä pienissä fermentoreissa, joiden pinta-alan ja tilavuu- | ·***. 30 den suhde on suuri. Yhteen tarttuneen biomassan määrä asemassa 15 näytti • · · * *. lisääntyvän ensimmäisten 24 tunnin aikana, kun pienestä tilavuudesta oli seu- ; · · ;;;* rauksena huomattavaa räiskymistä (nestepinta laski lähelle ylintä roottoria).
Lopullinen tilavuus fermentorissa 168 tunnin jälkeen oli noin 13 litraa.
Mikroskoopilla tarkasteltaessa elatusaineessa osoittautui esiintyvän 35 72 tuntiin mennessä paljon jätettä ja jonkin verran merkkejä vaurioituneista ja atrofioituneista sienten kärjistä oli havaittavissa. Sytoplasman osoitettiin sisäl- 117442 24 tavan öljypisaroita 168 tunnin kohdalla suoritettua niilinpunavärjäystä käyttämällä. öljypisarat olivat erittäin pieniä ja lukuisia, mistä poiketen havaittiin toisinaan suuria öljypisaroita. Biomassan ja Öljyn saanto sekä hiilen ja typen hy- 1 väksikäyttö on esitetty taulukossa 3.
5 Taulukko 3
Fermentaation eteneminen ajan suhteen
Asema 14 3 x 6 g/l hiivauutetta
Loki- Glukoosi NH3 Kuiva- öljy- ARA- Tuotanto- tunti paino pitoisuus pitoisuus kyky (g/l) (mM) (g/l) (kuiva- (% öljyä) (g öljyä/l paino-%) päivässä) - 0 105,0 3,0 0,4 24 97,4 5,9 3,3 4,8% 23,5% 0,16 48 73,7 0 18,3% 7,9% 23,4% 0,72 72 60,3 0 21,0 14,4% 25,4% 1,01 96 48,0 0 22,3 18,3% 27,5% 1,02 120 40,0 25,2 21,1 % 29,4% 1,06 144 34,7 26,6 21,8% 30,9% 0,97 | 168 29,0 27,5 26,1 % 31,3% 1,03 -
♦ · V
:’· : Asema 15 • *: > .*·. 4x6 g/l hiivauutetta .·;· Loki- Glukoosi NH3 Kuiva- Öljy- ARA- Tuotanto- '· *.· : . ' tunti paino pitoisuus pitoisuus kyky .·’ . (g/l) (mM) (g/l) (kuiva- (% öljyä) (g öljyä/l • ♦ · ;;;* paino-%) päivässä) ·’·;··* 0 109,0 2,9,1 0,4 24 103,0 5,1 3,4 4,3% 21,9% 0,15
48 74,1 0,3 23,6 6,8% 23,1% 0,80 I
. \ 72 51,4 0 29,8 10,3% 23,9% 1,02 96 40,0 0 32,7 120 27,9 31,7 18,2% 26,6% 1,15 144 19,8 33,5 20,7% 28,1% 1,16 168 11,0 29,9 21,7% 29,9% 0,93 j 117442 25
Esimerkki 6 M. alpinasta peräisin olevan biomassan saannon parantaminen - kolmas ajo Tällä koesarjalla yritettiin lisätä edelleen muodostuneen tuotteen 5 määrää lisäämällä fosfaatin ja mineraalien pitoisuuksia. Menettely oli olennaisesti samanlaista kuin mitä käytettiin esimerkissä 5, lukuunottamatta sitä, että glukoosi ja Mazu 204 -vaahdonestoaine liuotettiin 12,5 l:n sijaan 11,5l:aan R0-H20:ta tilan jättämiseksi suolaliuoksille, jotka lisättiin 30. tunnin kohdalla.
Asemaan 14 lisättiin ylimääräinen määrä Fe:tä, Zn:ää ja Cu.ta; asemaan 15 li-10 sättiin ylimääräinen määrä fosfaattia sekä Fe:tä, Zn:ää ja Cu:ta.
Asema 14: 3 x 6 g/l Tastone154:ää |
Hiivauute liuotettiin 3 x 1 l:n suuruisissa erissä konsentraatioon 1 96 g/l ja autoklavoitiin 1 tunnin ajan. Yhden litran eriä hiivauuteliuosta lisättiin 0., 22. ja 28. tunnin kohdalla. Hiilidioksidin muodostumisnopeus (CER, fermen- -Λ 15 torissa olevaa metabolianopeutta osoittava suure) lisääntyi eksponentiaalisesti -* 22. ja 28. tunnin kohdalla ja fermentaatioseos oli juuri alkanut tarvita emästä.
Syötteenä käytetyt suolat sisälsivät: O FeCI36H20:ta 480 mg 7 ¾
ZnS04 7H20:ta 240 mg J
20 CuS04 5 H20:ta 16 mg . 7 * : FeCU liuotettiin 1 litraan sitruunahappoa, jonka konsentraatio oli . *; :·, 5 g/l. Jäljellä olevat suolat lisättiin ja pH säädettiin arvoon 4,5 NaOHdla. Syöt- £ : ·· ,...t teenä käytetyt suolat lisättiin 30. tunnin kohdalla.
* * Fermentorin ravistelunopeus oli alussa 50 cm/s alun perin suun- 25 nitellun arvon 80 cm/s sijaan, koska fermentorin sisältämän nesteen lähtötaso • * * . ;;;* (13 I) johti siihen, että ylin roottori oli juuri ja juuri pinnan alla, ja suuremmasta ? *··.** ravistelunopeudesta oli tuloksena merkittävästi enemmän räiskymistä. Liuen- neen hapen pitoisuus laski 16. tunnin kohdalla alle 40 %:iin ja ravistelu- ;***. nopeutta lisättiin vähitellen arvoon 175 cm/s 28. tuntiin mennessä. Tämän jäi- ·. 30 keen liuenneen hapen määrää säädettiin yli 40 %:ksi lisäämällä ilmavirtaan J * · ;;;* happea. Ravistelu nopeutta lisättiin vielä 46 tunnin kohdalla sen mahdollista- *···* miseksi, että sisältö sekoittui. 48 tuntiin mennessä oli ravistelunopeus nostettu arvoon 200 cm/s; 51 tuntiin mennessä arvoon 220 cm/s ; 53 tuntiin mennessä arvoon 235 cm/s ; 56 tuntiin mennessä arvoon 250 cm/s ; 57 tuntiin mennessä 35 arvoon 260 cm/s ja 70 tuntiin mennessä arvoon 280 cm/s. Sekoittuminen oli 26 117442 heikkoa vieläpä tällä sekoitusnopeudella (450 kierrosta minuutissa). Vaikkakin oli mahdollista pitää yllä minimikriteeriä "jonkin verran liikettä", oli biomassan kiertyminen erittäin hidasta, ja jotkin alueet olivat lähellä pysähtymistä. Muuta- ;i man vaahdonestoainepisaran lisääminen pienensi liuoksen päällä olevan 5 vaahdon määrää ja poisti paikallaan pysyvät taskut. Ravistelunopes alennettin 116. tunnin kohdalla arvoon 265 cm/s ja se alennettiin edelleen 120, tunnin kohdalla arvoon 250 cm/s. -
Fermentori alkoi vaahdota noin 18. tunnin kohdalla. Vaahtoaminen estettiin lisäämällä vaahdonestoainetta käsin. Vaahdonestoainetta lisättiin en-10 sin 20. tunnin kohdalla. Fermentaatioseos vaahtosi merkittävästi 24. tuntiin mennessä ja siihen oli tarpeellista lisätä säännöllisesti vaahdonestoainetta. Vaahtoaminen oli suurimmaksi osaksi lakannut 72. tuntiin mennessä. Fermen-taatio vaati kuitenkin ajoittaista vaahdonestoaineen lisäämistä.
Biomassa oli 24. tuntiin mennessä erittäin irtonaisten rakeiden (1 -15 2 mm) ja irtonaisten hyyfiaggregaattien muodossa. Esiintyy huomattavasti so- lujätettä. Biomassa oli 48. tuntiin mennessä erittäin irtonaisten hyyfiaggre- « gaattien muodossa, ytimiltään hyvin pienten ja ääriosiltaan irtonaisten erittäin pienten rakeiden (1 - 2 mm) ja sellaisten pienten kompaktien rakeiden (1-3) ·*,’*,'·· muodossa, joissa ei esiintynyt irtonaisia ääriosia. 96. tuntiin mennessä bio- .**·.: 20 massa oli kompaktien pyöreiden rakeiden (1 - 2 mm), neulamaisten rakeiden • · i (alle 0,5 mm) ja irtonaisten hyyfiaggregaattien muodossa. 144. tunnin kohdalla f • · suoritettu niilinpunavärjäys osoitti, että myseeleissä esiintyi erittäin pieniä öljy- ^ .*·. * pisaroita. ! { *t ,...t Asema 15: 3 x 6 g/l Tastone154:ää 25 Hiivauute liuotettiin konsentraatioon 96 g/l ja tätä autoklavoitiin , 1 tunnin ajan. Hiivauuteliuosta lisättiin 3x1 l:n suuruisina määrinä 0., 22. ja 26. tunnin kohdalla. CER lisääntyi eksponentiaalisesti 22 - 26 tunnin kohdalla *·..·* ja fermentaatioseos alkoi juuri vaatia emäslisäystä.
Valmistettiin syötettävä suolaseos, joka sisälsi: j—. 30 KH2P04:ää 77 g :ί ·’ FeCI36H20:ta 480 mg **;/;·* ZnS04 7H20:ta 240 mg *··.** CuS04 5 H20:ta 16 mg
FeCI3 liuotettiin 1 l:aan sitruunahappoa, jonka konsentraatio oli 5 g/l.
35 KH2P04 liuotettiin 500 ml:aan RO-vettä. Molempia liuoksia autoklavoitiin i!
' . . . L
117442 27 :';ί 1 tunnin ajan, minkä jälkeen ne jäähdytettiin 23 °C:seen, ja ne yhdistettiin.
Tämän jälkeen ne lisättiin fermentoriin 30. tunnin kohdalla.
Fermentorin ravistelunopeus oli alussa 50 cm/s alun perin suunnitellun arvon 80 cm/s sijaan, koska fermentorin sisältämän nesteen lähtötaso 5 (13 1) johti siihen, että ylin roottori oli juuri ja juuri pinnan alla ja suurempi ra vistelunopeus olisi johtanut merkittävästi voimakkaampaan räiskymiseen. Liuenneen hapen pitoisuus laski 16. tunnin kohdalla 40 % alapuolelle ja ravistelunopeus nostettiin 27 tuntiin mennessä vähitellen arvoon 175 cm/s. Tämän jälkeen liuenneen hapen määrää säädettiin yli 40 %:ksi lisäämällä ilmavirtaan 10 happea. Ravistelunopeutta lisättiin 41 tunnin kohdalla sen mahdollistamiseksi, että sisältö sekoittui vähintään minimaalisesti. 42 tuntiin mennessä oli ravistelunopeutta nostettu vielä arvoon 220 cm/s; 46 tuntiin mennessä arvoon 230 cm/s ; 51 tuntiin mennessä arvoon 235 cm/s ja 70 tuntiin mennessä arvoon 240 cm/s. Sekoittuminen oli tällä sekoitusnopeudella (410 kierrosta mi-15 nuutissa) heikosta kohtalaiseen. Sekoitus piti yllä ainoastaan mahdollisimman pientä biomassan liikettä. Sekoitusnopeus laskettiin 80. tunnin kohdalla arvoon ; 205 cm/s.
Fermentori alkoi vaahdota noin 18 tunnin kohdalla. Vaahtoaminen estettiin lisäämällä vaahdonestoainetta käsin. Vaahdonestoainetta lisättiin ensi :*·.· 20 17 tunnin kohdalla. Fermentaatioseos vaahtosi merkittävästi 20. tuntiin men- • · £
:*·*. nessä ja siihen oli tarpeellista lisätä vaahdonestoainetta säännöllisesti. Vaah- I
• «* > .·. i toaminen oli lakannut suurimmaksi osaksi 72. tuntiin mennessä. Fermen- *. *: :·. taatioseos vaati silti ajoittaista vaahdonestoaineen lisäämistä. * i ·· ... Biomassa oli 24. tuntiin mennessä erittäin irtonaisten rakeiden (1 - < 25 2 mm) muodossa ja irtonaisten hyyfiaggregaattien muodossa. Esiintyi huo- , mättävä määrä solujätettä. Biomassa 48. tuntiin mennessä muodossa, joka si- • * * ;;;* sälsi erittäin irtonaisia hyyfien aggregaatteja, ytimiltään hyvin pieniä ja äärio- **·.** siltaan irtonaisia erittäin pieniä rakeita (1 - 2 mm) sekä pieniä kompakteja ra- keitä (1 - 3), joissa ei ollut irtonaisia ääriosia. 96. tuntiin mennessä biomassa :***. 30 oli muodossa, jossa esiintyi pyöreitä rakeita, joiden läpimitta oli 1 - 2 mm ja 1 • · · *. joista monissa esiintyi irtonaisia karvamaisia ääriosia, sekä monia irtonaisia ♦ * * ;f;* hyyfien fragmentteja. 144. tunnin kohdalla suoritettu niilinpunavärjäys osoitti, • « *.··* että joissakin myseeleissä esiintyi monia hyvin pieniä öljypisaroita ja muissa myseeleissä esiintyi kauttaaltaan myöskin hyvin suuria öljypisaroita.
35 Asemassa 15, joka poikkesi asemasta 14 ainoastaan sen perusteella, että tähän oli lisätty fosfaattia, havaittiin sekoittumisen olevan parempaa | ' -¾ 117442 28 koko fermentaation ajan, tavallisesti pienemmillä sekoitusnopeuksilla. Aseman 15 biomassan morfologia oli myös "irtonaisempaa". Biomassa- ja öljysaanto * sekä hiilen hyväksikäyttö on esitetty taulukossa 4. Suuremman fosfaattipitoi-suuden sisältävälle fermentorille oli luonteenomaista, että glukoosin hyväksi-5 käyttö oli suurempaa (aseman 15 kyseessä ollessa 82 g/l verrattuna aseman 14 kyseessä ollessa saatuun arvoon 64 g/l), suurempi biomassan kerääntymi-nen ja suurien öljypisaroiden esiintyminen osissa myseelejä.
Taulukko 4
Fermentaation eteneminen ajan suhteen *
Asema 14 + suolat :
Lokitunti Glukoosi Kuiva- öljy- ARA- Tuotanto- paino pitoisuus pitoisuus kyky (g/l) (g/l) (kuiva- (öljy-%) (g öljyä/l paino-%) päivässä) ^ 0 116,0 1,1 24 101,0 1,8 1,2% 22,2% 0,02 48 84,0 14,3 6,2% 24,7% 0,44 72 60,0 24,5 10,6% 24,2% 0,87 i 96 45,0 28,2 15,5% 25,3% 1,09 | 120 34,0 28,9 18,1 % 26,6% 1,05 - ‘ 144 27,0 30,8 20,8% 27,2% 1,07 ··. Asema 15 ·,··* + suolat + fosfaatit , Lokitunti Glukoosi Kuiva- öljy- ARA- Tuotanto- *:: “ paino pitoisuus pitoisuus kyky '*;** (g/l) (g/l) (kuiva- (öljy-%) (g öljyä/l ·· • *.. paino-%) päivässä) | :**·: 0 113,0 0,4 ^ . 24 101,0 2,1 1,1 % 24,0% 0,02
48 74,0 21,7 8,1% 24,7% 0,88 I
: 72 51,0 26,2 19,9% 26,5% 1,74 * 96 31,0 30,1 25,5% 28,6% ? 120 18,0 33,8 31,7% 31,4% 2,14 144 6,0 34,5 36,0% 32,9% 2,07 117442 29
Esimerkki 7
Arakidonihappoa sisältävän M. alpina -biomassan tuotanto suuressa mittakaavassa 5 Ymppifermentori, joka sisälsi GYE-mediumia (50 g/l glukoosia ja
6 g/l Tastone154:ää) ympätään kasvatusfermentorista. Lämpötilana pidetään L
28 °C ja ravistelunopeus asetetaan aluksi arvoon 130- 160cm/s (noin 43 kierrosta minuutissa). Fermentoriastian paine on aluksi 40 kPa (6 psi) ja ilmastuksen määrä asetetaan aluksi arvoon 0,25 VVM. pH säädetään ennen 10 sterilointia arvoon 5,0, ja fermentorin pH säädetään steriloinnin jälkeen fer-mentoinnin aluksi arvoon 5,5. Mediumin happipitoisuus pidetään liuenneen hapen arvossa, joka on > 40 % käyttämällä peräkkäisiä vaiheita, jotka olivat: (i) fermentointiastian paine nostetaan arvoon 77 kPa (11 psi) (ii) ravistelunopeus nostetaan arvosta 156 arvoon 175cm/s roottorin kärjen nopeutena ilmoitet-15 tuna, ja (iii) ilmastus lisätään arvoon 0,5 WM. Vaahtoaminen estetään lisäämällä tarvittaessa vaahdonestoainetta Dow1520-US. (Noin 0,1 ml/l vaahdon-estoainetta on lisättävä mediumiin ennen sterilointia vaahtoamiseneston helpottamiseksi). Viljelmää pidetään ymppäyksen jälkeen pH-arvossa > 5,5 käyt- ***"; tämällä 8 N NaOH.’ta.
··· .·’·.· 20 Ymppifermentorin sisältö siirretään pääfermentoriin 12 tunnin ku-
• · -V
luessa siitä, kun pH on noussut arvon 6,0 yläpuolelle. Pääfermentorimedium ·..* .*. : sisältää: *· ·: :·. 80 g/l glukoosia (ADM) i · · 16 g/l soijajauhoa (ADM nutrisoy) 25 30 mg/l FeCI3*6 H20 (Sigma/AIdrich) 1,5 mg/l ZnSO„»7 HzO (Sigma/AIdrich) .
0,1 mg/l CuS04«5 H20 (Sigma/AIdrich) *·..** 1 mg/l biotiiniiä (Sigma/AIdrich) 2 mg/l tiamiini»HCI:ää (Sigma/AIdrich) f 30 2 mg/l pantoteenihappoa (hemikalsiumsuola) (Sigma/AIdrich).
• · · ·. (pH säädetään ennen sterilointia arvoon 4,8 - 5,0).
• * « O Syöttöfermentori ympätään pääfermentoriin (11,8 %). Fermentorin lämpötilaa pidetään arvossa 28 °C. Ravistelunopeus asetetaan aluksi arvoon 162 cm/s (noin 23 kierrosta minuutissa), fermentointiastian paineeksi asete- i . · ' i, 35 taan aluksi 40 kPa.ksi (6 psi.ksi) ja ilmastuksen määräksi aluksi arvo 0,15 > WM [noin 8,5 m3 tunnissa (300 SCFH)].
117442 ' ' 30 ' ; :'t
Mediumin happipitoisuus pidetään liuenneen hapen arvossa > 40 % käyttämällä i) fermentointiastian paineen kohottamista arvoon 77 kPa (11 psi), ii) ravistelunopeuden lisäämistä arvoon 300 cm/s, roottorin kärjen nopeuden : perusteella ilmoitettuna (käyttäen lisäyksiä jotka ovat noin 30 cm/s) in) ilmas-5 tuksen kohottamista arvoon 0,5 WM.
pH profiloidaan seuraavan pH:n säätöohjelman mukaisesti: • pH asetetaan aluksi arvoon 5,5 steriloinnin jälkeen. pH pidetään arvossa > 5,5 käyttämällä 8 N NaOH:ta.
• 24 - 36 tunnin kuluttua ymppäyksestä tehdään lisäys, joka on:
10 2 g/l KH2P04:ää (110 kg noin 700 l:ssa H20:ta). J
• 48 tunnin kohdalla pH:n säätöpiste asetetaan arvoon > 6,1, jos I
glukoosikonsentraatio on < 60 g/l.
• 72 tunnin kohdalla pH:n asetuspistettä ryhdytään hitaasti kohottamaan arvoon > 6,6 nopeudella noin 0,1 pH-yksikköä tunnissa.
15 «pH pidetään arvon 7,3 alapuolella lisäämällä tarvittaessa H2S04:ää. ·.
Fermentorista otetaan näytteitä biomassa- ja rasvahappoanalyysiä varten joka 12. tunti ja talteenotto aloitetaan noin 3 päivää sen jälkeen, kun pH on kohotettu arvoon >6,6 (noin 6 päivää ymppäyksestä). Kuivan biomassan :**.· 20 tiheyden on oltava > 24 g/l. Elatusaineen glukoosikonsentraation on oltava .4 laskenut arvosta 80 g/l arvoon < 14 g/l.
· : Materiaali kootaan talteen johtamalla koko elatusaine pyörivän va- :·. * kuumisuodattimen läpi myseelin erottamiseksi käytetystä mediumista.
,· ·· t .•..t Tulokset tämän esimerkin mukaisen menettelytavan mukaisesta * * 25 kahdesta tyypillisestä fermentaatioajosta on esitetty taulukoissa 5 ja 6.
' .7Γ 1 · Ί' • ^ • · · • * ♦ • · · ··* * · ' • # ··· • ♦ : ·· ·5· : : λ *·· • s • *·· * · · ··# ··· 117442 31 1
Taulukko 5 M. alpina -fermentaation eteneminen
Kasvatusmediumit = glukoosi (80 g/l) + soijajauho (16 g/l) + suolat + vitamiinit lokitunti Glukoosi NH3 Kuiva- Öljy- ARA- Tuotanto ni) (mM) paino pitoisuus pitoisuus kyky (g/l) (kuiva- (öljy-%) g öljyä/l paino-%) päivässä 0 58,0 66 43,0 : 12,6 14,9 % 33,7% 0,68 94 33,0 17,0 27,0% 40,0% 1,17 f 118 23,0 20,6 28,2% 42,6% 1,18 142 16,0 17,1 39,2% 44,2% 1,13 165 9,6 21,5 41,5% 45,5% 1,30 188 5,2 19,8 41,7% 47,3% 1,05 215 1,7 23,2 46,0% 48,9% 1,19 237 0,2 23,1 44,8% 51,2% 1,05
O
.·.. Taulukko 6 ;; *, · ·.'?? 5 M. alpina -fermentaation eteneminen f ·*** :‘,m: Kasvatusmediumit = glukoosi (65 g/L) + soijajauho (16 g/l) + suolat + vitamiinit + an- ;·. * tibiootit ·*
Glukoosi NH3 Kuiva- öljy- ARA- Tuotanto- • · (g/l) (mM) paino pitoisuus pitoisuus kyky - , (g/l) (kuiva- (öljy-%) g öljyä/l • · · ;;;* paino-%) päivässä 65 36,0 13,0 8,2 % 29,0% 0,39 | :**·; 90 23,0 12,0 18,0% 42,0% 0,58 t *; * 115 15,0 14,0 30,0% 47,0% 0,88 ] 139 9,0 15,0 32,0% 51,0% 0,83 f *’···*’ 171 4,0 17,0 36,0% 55,0% 0,86 209 1,4 12,0 36,0% 57,0% 0,50 - 243 0 14 37,0% 60,0% 0,51 ^ 187 0 13 34,0% 64,0% 0,57 f
Claims (22)
1. Arakidonihappoa sisältävän öljyn valmistusmenetelmä, joka mainittu öljy sisältää triglyseridejä, joissa vähintään 25% rasvahapporyhmistä 5 ovat arakidonihappoa (ARA) ja öljyn sisältämien eikosapentaeenihapporyhmi-en (EPÄ) määrä ei ylitä viidesosaa arakidonihapporyhmien (ARA) määrästä, t u n n e 11 u siitä, että menetelmä käsittää sen, että (a) kasvatetaan Mortierella sp:tä elatusainetta sisältävässä ilmastetussa fermentorissa, 10 (b) pidetään pH kasvatuksen alkuvaiheessa pH-arvojen 5 ja 6 väli sellä alueella; (c) pidetään pH kasvatuksen lopussa pH-arvojen 7 ja 7,5 välisellä alueella; v (d) kootaan biomassa talteen fermentorista ja otetaan mainittu ara- 15 kidonihappoa sisältävä öljy talteen mainitusta biomassasta. -’(i
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n n e 11 u siitä, ..* että fermentoinnin kuluessa elatusaineeseen lisätään hiilen lähdettä määrä, joka vastaa yli 80 g/l glukoosia, ja typen lähdettä määrä, joka vastaa yli 15 g/l ... hiivauutetta. • · s· ;·'! 20
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu * i · / siitä, että elatusaineen sisältämä liuenneen hapen pitoisuus on vähintään 35. ilman kylläisyystasosta.
• · *.**: 4. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 1 - 3 mukainen menetelmä, f • · : *·· tunnettu siitä, että typpilähde jaetaan kahteen tai useampaan erään, jot- f, :V: 25 ka syötetään fermentoriin eri aikoina siten, että vähintään yksi erä syötetään ; fermentoriin ajankohtana, joka poikkeaa siitä ajankohdasta, jolloin hiilen läh- . dettä lisätään fermentoriin.
' • · ♦ *·· : .-·*. 5. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-4 mukainen menetelmä, 'y tunnettu siitä, että Mortierellaspon Mortierellaalpina. • ** 30
6. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 1 - 5 mukainen menetelmä, • · · tunnettu siitä, että se lisäksi käsittää sen, että puhdistamaton arakidoni- ; happoa sisältävä öljy otetaan talteen biomassasta uuttamalla ei-polaarisella * · · .·*·. liuottimena ja puhdistamaton öljy selkeytetään uuttamalla polaarisella orgaani sella liuottimena.
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, .: „ että ei-polaarinen liuotin on heksaani. ; 33 1 1 7 4 4 2
8. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, t u n n e tt u siitä, f että polaarinen liuos on asetoni, etanoli tai isopropyylialkoholi.
9. Modifioimaton triglyseridisieniöljy, tunnettu siitä, että yli 50 : % rasvahapporyhmistä on arakidonihapporyhmiä (ARA) triglyseridimuodossa 5 ja että öljy käsittää eikosapentaeenihappoa (EPÄ) korkeintaan kymmenesosan arakidonihapon (ARA) määrästä.
10. Patenttivaatimuksen 9 mukainen modifioimaton triglyseridisieniöljy, tunnettu siitä, että öljyn triglyseridit käsittävät vähintään 50 % arakidonihappoa (ARA) mutta eivät olennaisesti lainkaan eikosapentaeeni- 10 happoa (EPÄ).
11. Menetelmä arakidonihappoa (ARA) sisältävän triglyseridin käyt- ; tämiseksi äidinmaidonvastikkeessa, t u n n e tt u siitä, että menetelmä sisältää sen, että patenttivaatimuksen 9 tai 10 mukaista modifioimatonta triglyseri-disieniöljyä lisätään äidinmaidonvastikkeeseen määrä, joka riittää saamaan ai- 15 kaan ihmisen rintamaidon sisältämää arakidonihappomäärää vastaavan araki-donihappopitoisuuden.
12. Äidinmaidonvastike, joka sisältää triglyseridiä, joka sisältää ihmisen rintamaidossa esiintyvää määrää vastaavan määrän arakidonihappoa (ARA), t u n n e tt u siitä, että arakidonihappo (ARA) on saatu lisäämällä äi- 20 dinmaidonvastikkeeseen riittävä määrä patenttivaatimuksen 9 tai 10 mukaista • · * *; / modifioimatonta sieniöljyä.
*·*·* 13. Menetelmä sellaisen farmaseuttisen valmisteen valmistamisek- • * 'lii. •V*: si, joka on tarkoitettu arakidonihapon (ARA) antamiseksi ruokavalion täyden- | • · X • '·· tämiseksi sitä tarvitsevalle ihmiselle, tunnettu siitä, että menetelmä käsit- | 25 tää patenttivaatimuksen 9 tai 10 mukaisen modifioimattoman sieniöljyn formu- | loimisen farmaseuttisesti hyväksyttävään annosmuotoon, jolloin mainittu far- 1 : ;*· maseuttinen valmiste on formuloitu antamaan sellaisen määrän arakidonihap- • · · .**·. poa (ARA), joka on riittävä antamaan ruokavaliota täydentävän määrän araki- ..· donihappoa (ARA) ihmiselle. a • · : 30
14. Patenttivaatimuksen 13 mukainen menetelmä, tunnettu sii- I • · · tä, että mainittu farmaseuttinen koostumus on formuloitu antamaan 0,2 - 0,8 g * : arakidonihappoa (ARA) päivässä. * ♦ · ... f .**·.
15. Patenttivaatimuksen 13 tai 14 mukainen menetelmä, tun- n e 11 u siitä, että mainittu farmaseuttinen koostumus on farmaseuttisesti hy- 35 väksyttävä enteraalisesti annettavaksi. ' *4 117442
16. Patenttivaatimuksen 13 tai 14 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että mainittu farmaseuttinen koostumus on farmaseuttisesti hyväksyttävä parenteraalisesti annettavaksi. i
17. Patenttivaatimuksen 13 tai 14 mukainen menetelmä, tun-5 n e 11 u siitä, että mainittu farmaseuttinen koostumus on farmaseuttisesti hyväksyttävä paikallisesti annettavaksi.
18. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 13-17 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu ihminen on raskaana oleva nainen tai " imettävä äiti.
19. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 13 -17 mukainen menetel- „ mä, tunnettu siitä, että mainittu arakidonihapon (ARA)täydennystä tarvitseva ihminen sairastaa neurologista tautia.
20. Patenttivaatimuksen 19 mukainen menetelmä, t u n n e tt u siitä, että neurologinen tauti on tardiivi dyskinesia, skitsofrenia tai peroksisomaa- 15 linen tauti.
21. Patenttivaatimuksen 13 tai 14 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu arakidonihapon (ARA) täydennystä tarvitseva ihminen sairastaa tautia, joka liittyy seerumin arakidonihappopitoisuuden piene- ... nemiseen. ';**! 20
22. Patenttivaatimuksen 21 mukainen menetelmä, tu n nettu sii- > * f · *; " tä, että sairaus on maksasairaus, fenyyliketonuria tai kystinen fibroosi. 1 • » · • · · • t • » * · · . · . r»1. • · 1 ·" 1 • · Φ 1 : ·· * · · • · 1 • 1 · * •·φ· • φ · * 1 1 • · · • · • · · 1 i • · • φ Φ ΦΦ Sl • , iTV ! ΦΦΦ Φ Φ Φ · Φ Φ · • Φ Φ Φ Φ Φ Φ · Φ t · Φ Φ Φ · • t Φ · · 117442
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US08/367,881 US5658767A (en) | 1991-01-24 | 1995-01-03 | Arachidonic acid and methods for the production and use thereof |
US36788195 | 1995-01-03 | ||
US9600182 | 1996-01-03 | ||
PCT/US1996/000182 WO1996021037A1 (en) | 1995-01-03 | 1996-01-03 | Arachidonic acid and methods for the production and use thereof |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI972829A0 FI972829A0 (fi) | 1997-07-01 |
FI972829A FI972829A (fi) | 1997-09-02 |
FI117442B true FI117442B (fi) | 2006-10-13 |
Family
ID=23449013
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI972829A FI117442B (fi) | 1995-01-03 | 1997-07-01 | Arakidonihappo ja menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö |
FI20060617A FI120648B (fi) | 1995-01-03 | 2006-06-26 | Menetelmä arakidonihapon valmistamiseksi |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI20060617A FI120648B (fi) | 1995-01-03 | 2006-06-26 | Menetelmä arakidonihapon valmistamiseksi |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5658767A (fi) |
EP (5) | EP1342787A3 (fi) |
JP (6) | JP4014219B2 (fi) |
KR (6) | KR20110111327A (fi) |
CN (4) | CN1696300B (fi) |
AT (1) | ATE239088T1 (fi) |
AU (1) | AU713567B2 (fi) |
BR (1) | BR9607179B1 (fi) |
CA (1) | CA2209513C (fi) |
DE (2) | DE69627816T2 (fi) |
DK (1) | DK0800584T3 (fi) |
EA (1) | EA001036B1 (fi) |
ES (1) | ES2197233T3 (fi) |
FI (2) | FI117442B (fi) |
HK (1) | HK1085768A1 (fi) |
NO (1) | NO320117B1 (fi) |
PL (1) | PL187694B1 (fi) |
PT (1) | PT800584E (fi) |
WO (1) | WO1996021037A1 (fi) |
Families Citing this family (177)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060094089A1 (en) * | 1988-09-07 | 2006-05-04 | Martek Biosciences Corporation | Process for the heterotrophic production of microbial products with high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids |
US5340742A (en) * | 1988-09-07 | 1994-08-23 | Omegatech Inc. | Process for growing thraustochytrium and schizochytrium using non-chloride salts to produce a microfloral biomass having omega-3-highly unsaturated fatty acids |
US5583019A (en) | 1995-01-24 | 1996-12-10 | Omegatech Inc. | Method for production of arachidonic acid |
WO1996040106A2 (en) * | 1995-06-07 | 1996-12-19 | Martek Biosciences Corporation | Methods for controlling highly unsaturated fatty acid content in various tissues |
US6428832B2 (en) * | 1996-03-26 | 2002-08-06 | Dsm N.V. | Late addition of PUFA in infant formula preparation process |
WO1997035488A1 (en) † | 1996-03-26 | 1997-10-02 | Gist-Brocades B.V. | Late addition of pufa in infant formula preparation process |
US20030143659A1 (en) * | 1996-03-28 | 2003-07-31 | Hendrik Louis Bijl | Process for the preparation of a granular microbial biomass and isolation of a compound thereform |
JP3995290B2 (ja) | 1996-08-23 | 2007-10-24 | サントリー株式会社 | オメガ9系高度不飽和脂肪酸及びそれを含有する脂質の製造方法 |
JP3792309B2 (ja) † | 1996-08-30 | 2006-07-05 | サントリー株式会社 | 不飽和脂肪酸含有油脂の製造方法 |
JP4633204B2 (ja) * | 1996-10-11 | 2011-02-16 | サントリーホールディングス株式会社 | アラキドン酸含有食用油脂およびそれを含有する食品 |
EP2308988A1 (en) | 1996-12-27 | 2011-04-13 | Suntory Holdings Limited | Media for culturing microorganisms and process for producing unsaturated fatty acids or lipids containing the same |
CN100351386C (zh) * | 1997-02-20 | 2007-11-28 | Dsm公司 | 用化学上确定的培养基以工业规模发酵生产有价值的化合物 |
US6080787A (en) * | 1997-02-21 | 2000-06-27 | Abbott Laboratories | Methods for reducing the incidence of necrotizing enterocolitis |
PL343902A1 (en) | 1997-02-21 | 2001-09-10 | Abbott Lab | Methods of and compositions for reducing enteritis and colitis morbidity rate |
EP0972844B1 (en) * | 1997-03-04 | 2008-09-17 | Suntory Limited | Process for preparing highly unsaturated fatty acid and lipid containing highly unsaturated fatty acid |
US5972664A (en) | 1997-04-11 | 1999-10-26 | Abbott Laboratories | Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids |
US7745694B1 (en) | 1997-04-11 | 2010-06-29 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for synthesis of long chain polyunsaturated fatty acids in plants |
US5968809A (en) * | 1997-04-11 | 1999-10-19 | Abbot Laboratories | Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids |
US5948413A (en) * | 1997-07-17 | 1999-09-07 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Method and vaccine for treatment of pythiosis insidiosi in humans and lower animals |
ATE230935T1 (de) * | 1997-07-22 | 2003-02-15 | Nestle Sa | Lipidzusammensetzung für säuglingsnährpräparat und herstellungsverfahren |
GB9802561D0 (en) * | 1998-02-07 | 1998-04-01 | Zeneca Ltd | Mortierella |
US20070141181A1 (en) | 1998-02-13 | 2007-06-21 | Nutramax Laboratories, Inc. | Use of anabolic agents, anti-catabolic agents, antioxidant agents, and analgesics for protection, treatment and repair of connective tissues in humans and animals |
US6797289B2 (en) | 1998-02-13 | 2004-09-28 | Nutramax Laboratories, Inc. | Use of anabolic agents, anti-catabolic agents, antioxidant agents, and analgesics for protection, treatment and repair of connective tissues in humans and animals |
US6451771B1 (en) | 1999-02-12 | 2002-09-17 | Nutramax Laboratories, Inc. | Use of anabolic agents anti-catabolic agents and antioxidant agents for protection treatment and repair of connective tissues in humans and animals |
EP1087669B2 (en) † | 1998-06-17 | 2010-09-22 | DSM IP Assets B.V. | Marine feed composition comprising microbially derived arachidonic acid |
JP2000069987A (ja) * | 1998-08-28 | 2000-03-07 | Suntory Ltd | アラキドン酸含有脂質並びにジホモ−γ−リノレン酸含有脂質の製造方法 |
WO2000020603A1 (en) * | 1998-10-05 | 2000-04-13 | Abbott Laboratories | Altered fatty acid biosynthesis in insect cells using delta five desaturase |
WO2000021524A1 (en) † | 1998-10-15 | 2000-04-20 | Dsm N.V. | Pufa supplements |
US6166231A (en) * | 1998-12-15 | 2000-12-26 | Martek Biosciences Corporation | Two phase extraction of oil from biomass |
GB9901808D0 (en) * | 1999-01-27 | 1999-03-17 | Scarista Limited | Drugs for treatment of psychiatric and brain disorders |
GB9916537D0 (en) * | 1999-07-14 | 1999-09-15 | Univ Hull | Culture of microorganisms for the synthesis of a polyunsaturated fatty acid |
ES2675517T3 (es) | 2000-01-19 | 2018-07-11 | Dsm Ip Assets B.V. | Proceso de extracción sin solvente |
KR20090064603A (ko) * | 2000-01-28 | 2009-06-19 | 마텍 바이오싸이언스스 코포레이션 | 발효기 내에서 진핵 미생물의 고밀도 배양에 의한 고도불포화 지방산을 함유하는 지질의 증진된 생산 방법 |
US6495599B2 (en) | 2000-04-13 | 2002-12-17 | Abbott Laboratories | Infant formulas containing long-chain polyunsaturated fatty acids and uses therof |
ATE373098T1 (de) | 2000-04-21 | 2007-09-15 | Martek Biosciences Corp | Trophische umwandlung von obligat phototropischen algen durch metabolische manipulation |
EP1780283A1 (en) | 2000-04-21 | 2007-05-02 | Martek Biosciences Corporation | Trophic conversion of obligate photographic algae through metabolic engineering |
GB0016045D0 (en) * | 2000-06-29 | 2000-08-23 | Laxdale Limited | Therapeutic combinations of fatty acids |
EP1178103A1 (en) * | 2000-08-02 | 2002-02-06 | Dsm N.V. | Purifying crude pufa oils |
EP1178118A1 (en) * | 2000-08-02 | 2002-02-06 | Dsm N.V. | Isolation of microbial oils |
GB2377455A (en) * | 2001-02-09 | 2003-01-15 | Univ Hull | Method of culturing crypthecodinium cohnii |
US7538238B2 (en) * | 2001-07-02 | 2009-05-26 | Suntory Limited | Production method of oil or fat containing polyunsaturated fatty acid-containing triglyceride |
JP2003048831A (ja) * | 2001-08-02 | 2003-02-21 | Suntory Ltd | 脳機能の低下に起因する症状あるいは疾患の予防又は改善作用を有する組成物 |
ES2258159T3 (es) * | 2001-10-19 | 2006-08-16 | Vita Power Limited | Procedimiento para producir un complemento de producto alimenticio. |
DK1446210T3 (da) | 2001-11-13 | 2007-06-04 | Metanomics Gmbh | Fremgangsmåde til ekstraktion og analyse af indholdsstoffer fra organisk materiale |
CA2469647C (en) | 2001-12-12 | 2011-02-15 | Daniel G. Dueppen | Extraction and winterization of lipids from oilseed and microbial sources |
AU2002358164A1 (en) | 2001-12-19 | 2003-06-30 | Dsm Ip Assets B.V. | Compositions with a chicken flavour, use and production thereof |
US7211656B2 (en) * | 2002-01-30 | 2007-05-01 | Abbott Laboratories | Desaturase genes, enzymes encoded thereby, and uses thereof |
JP4088097B2 (ja) * | 2002-04-26 | 2008-05-21 | サントリー株式会社 | 高度不飽和脂肪酸含有脂質の製造方法 |
EP2368445A1 (en) | 2002-06-18 | 2011-09-28 | Martek Biosciences Corporation | Stable Emulsions of Oils in Aqueous Solutions and Methods for Producing Same |
WO2004009827A2 (en) * | 2002-06-19 | 2004-01-29 | Dsm Ip Assets B.V. | Preparation of microbial oil containing polyunsaturated fatty acids |
CN101837138B (zh) | 2002-06-19 | 2014-05-28 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 微生物油 |
EP1540009B1 (en) * | 2002-08-05 | 2011-09-28 | Quanta Biosciences, Inc. | Improved compositions for in vitro amplification of nucleic acids |
ATE407190T1 (de) * | 2002-09-04 | 2008-09-15 | Nestec Sa | Verfahren zur herstellung von einem öl, das langkettige, mehrfach ungesättigte fettsäuren aus biomassen enthält, lebensmittel, nahrungsmittelzusammensetzung, kosmetische oder pharmazeutische zusammensetzung, die dieses ölenthält |
AU2003260967B2 (en) * | 2002-09-13 | 2009-12-10 | Suntory Holdings Limited | Process for production of transesterified oils/fats or triglycerides |
EP1542670B2 (en) * | 2002-09-24 | 2023-07-05 | Suntory Holdings Limited | Composition containing arachidonic acid alone or in combination with docosahexaenoic acid for enhancing cognitive abilities in adults |
US20040209953A1 (en) * | 2002-12-06 | 2004-10-21 | Wai Lee Theresa Siu-Ling | Glyceride compositions and methods of making and using same |
WO2004084882A1 (en) * | 2003-03-27 | 2004-10-07 | Suntory Limited | Use of arachidonic acid for normalization of infradian rhythm |
US20040219188A1 (en) * | 2003-05-02 | 2004-11-04 | Comer Gail M. | Composition and methods for nutritional management of patients with hepatic disease |
US7238482B2 (en) * | 2003-05-07 | 2007-07-03 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Production of polyunsaturated fatty acids in oleaginous yeasts |
GB0311081D0 (en) * | 2003-05-14 | 2003-06-18 | Btg Internat Limted | Treatment of neurodegenerative conditions |
EP1643862A1 (en) * | 2003-06-24 | 2006-04-12 | University of Kansas Medical Center | Infant formula |
WO2005018632A1 (en) * | 2003-08-18 | 2005-03-03 | Btg International Limited | Treatment of neurodegenerative conditions |
PT1656449E (pt) | 2003-08-21 | 2009-07-27 | Monsanto Technology Llc | Dessaturases dos ácidos gordos a partir de prímulas |
ES2563649T3 (es) * | 2003-12-30 | 2016-03-15 | Dsm Ip Assets B.V. | Proceso de desaireación |
EP1731616A4 (en) * | 2004-03-01 | 2011-08-17 | Suntory Holdings Ltd | PROCESS FOR THE PRODUCTION OF PHOSPHOLIPID CONTAINING LONG CHAIN POLYUNSATURATED FATTY ACID AS A COMPONENT AND USE THEREOF |
EP1734947B1 (en) | 2004-04-16 | 2015-04-15 | Monsanto Technology, LLC | Expression of fatty acid desaturases in corn |
CN102559364B (zh) * | 2004-04-22 | 2016-08-17 | 联邦科学技术研究组织 | 用重组细胞合成长链多不饱和脂肪酸 |
JP2006083136A (ja) * | 2004-09-17 | 2006-03-30 | Suntory Ltd | ストレスに起因する脳機能の低下およびそれに伴う症状あるいは疾患の予防又は改善作用を有する組成物 |
JP4993852B2 (ja) | 2004-09-17 | 2012-08-08 | サントリーホールディングス株式会社 | ストレスに起因する行動異常を伴う症状あるいは疾患の予防又は改善作用を有する組成物 |
WO2006047445A2 (en) * | 2004-10-22 | 2006-05-04 | Martek Biosciences Corporation | Process for preparing materials for extraction |
US7198937B2 (en) * | 2004-11-04 | 2007-04-03 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Mortierella alpina diacylglycerol acyltransferase for alteration of polyunsaturated fatty acids and oil content in oleaginous organisms |
CA2847960C (en) * | 2004-11-04 | 2015-02-10 | Monsanto Technology Llc | Processes for preparation of oil compositions |
US7550286B2 (en) * | 2004-11-04 | 2009-06-23 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Docosahexaenoic acid producing strains of Yarrowia lipolytica |
GB0425932D0 (en) * | 2004-11-25 | 2004-12-29 | Btg Int Ltd | Structured phospholipids |
GB0504362D0 (en) * | 2005-03-02 | 2005-04-06 | Btg Int Ltd | Cytokine modulators |
GB0504333D0 (en) * | 2005-03-02 | 2005-04-06 | Btg Int Ltd | Treatment of cytokine dysregulation |
ES2576986T3 (es) | 2005-06-07 | 2016-07-12 | Dsm Nutritional Products Ag | Microorganismos eucariotas para la producción de lípidos y antioxidantes |
JP5967855B2 (ja) | 2005-06-30 | 2016-08-10 | サントリーホールディングス株式会社 | 日中活動量の低下および/又はうつ症状の改善作用を有する組成物 |
US20070082063A1 (en) * | 2005-10-11 | 2007-04-12 | Douglas Bibus | Risk assessment and correction of membrane damage of the upper GI tract |
US8968721B2 (en) | 2005-12-28 | 2015-03-03 | Advanced Bionutrition Corporation | Delivery vehicle for probiotic bacteria comprising a dry matrix of polysaccharides, saccharides and polyols in a glass form and methods of making same |
ES2470340T3 (es) | 2005-12-28 | 2014-06-23 | Advanced Bionutrition Corporation | Vehículo de administración para bacterias probi�ticas que comprende una matriz seca de polisac�ridos, sac�ridos y polioles en forma vítrea |
US20070191303A1 (en) * | 2006-01-19 | 2007-08-16 | Solazyme, Inc. | Polysaccharide compositions and methods of producing, screening, and formulating polysaccharide compositions |
US20070166266A1 (en) * | 2006-01-19 | 2007-07-19 | Solazyme, Inc. | Methods and compositions for improving the health and appearance of skin |
US20070167396A1 (en) * | 2006-01-19 | 2007-07-19 | Solazyme, Inc. | Methods and compositions for cholesterol reduction in mammals |
US8277849B2 (en) * | 2006-01-19 | 2012-10-02 | Solazyme, Inc. | Microalgae-derived compositions for improving the health and appearance of skin |
US20090274736A1 (en) * | 2006-01-19 | 2009-11-05 | Solazyme Inc. | Nutraceutical Compositions From Microalgae And Related Methods of Production And Administration |
US8298548B2 (en) | 2007-07-18 | 2012-10-30 | Solazyme, Inc. | Compositions for improving the health and appearance of skin |
CN101500403A (zh) | 2006-03-10 | 2009-08-05 | 孟山都技术有限责任公司 | 大豆种子和油的组成以及产生所述种子的方法 |
AU2007235419A1 (en) * | 2006-04-03 | 2007-10-18 | Advanced Bionutrition Corporation | Feed formulations containing docosahexaenoic acid |
KR20090007407A (ko) * | 2006-04-11 | 2009-01-16 | 마텍 바이오싸이언스스 코포레이션 | 장쇄 다중불포화 지방산을 포함하는 식품 제품 및 그의 제조 방법 |
US9023616B2 (en) * | 2006-08-01 | 2015-05-05 | Dsm Nutritional Products Ag | Oil producing microbes and method of modification thereof |
WO2008060571A2 (en) * | 2006-11-13 | 2008-05-22 | Aurora Biofuels, Inc. | Methods and compositions for production and purification of biofuel from plants and microalgae |
CA2673120C (en) * | 2006-12-18 | 2012-08-07 | Advanced Bionutrition Corporation | A dry food product containing live probiotic |
EP2098229A4 (en) * | 2006-12-28 | 2010-03-10 | Suntory Holdings Ltd | NERVE REGENERATION AGENT |
JP5101894B2 (ja) * | 2007-01-15 | 2012-12-19 | サントリーホールディングス株式会社 | 高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法 |
CA2675207A1 (en) * | 2007-02-12 | 2008-07-21 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Production of arachidonic acid in oilseed plants |
JP2010532418A (ja) * | 2007-06-29 | 2010-10-07 | マーテック バイオサイエンシーズ コーポレーション | 多価不飽和脂肪酸のエステルの製造方法および精製方法 |
CN101113410B (zh) * | 2007-07-09 | 2010-05-19 | 南京工业大学 | 一种高山被孢霉及其应用 |
CN101109015B (zh) * | 2007-07-09 | 2011-05-04 | 南京工业大学 | 花生四烯酸油脂的制备方法 |
CN101153298B (zh) * | 2007-09-07 | 2010-11-24 | 武汉麦可得生物技术有限公司 | 发酵生产低神经酸、epa含量的花生四烯酸油脂的方法 |
WO2009143007A2 (en) * | 2008-05-19 | 2009-11-26 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Producing eicosapentaenoic acid (epa) from biodiesel-derived crude glycerol |
US8927522B2 (en) | 2008-10-14 | 2015-01-06 | Solazyme, Inc. | Microalgal polysaccharide compositions |
WO2010054322A1 (en) | 2008-11-07 | 2010-05-14 | Solazyme, Inc. | Cosmetic compositions comprising microalgal components |
US8940340B2 (en) * | 2009-01-22 | 2015-01-27 | Aurora Algae, Inc. | Systems and methods for maintaining the dominance of Nannochloropsis in an algae cultivation system |
US8143051B2 (en) * | 2009-02-04 | 2012-03-27 | Aurora Algae, Inc. | Systems and methods for maintaining the dominance and increasing the biomass production of nannochloropsis in an algae cultivation system |
US20110306102A1 (en) * | 2009-02-25 | 2011-12-15 | V. B. Medicare Pvt. Ltd. | Improved methods for fermentative production of docosahexaenoic acid |
ES2908047T3 (es) | 2009-03-27 | 2022-04-27 | Intervet Int Bv | Vacunas en micropartículas para la vacunación oral o nasal y el refuerzo de animales incluidos los peces |
US9187778B2 (en) | 2009-05-04 | 2015-11-17 | Aurora Algae, Inc. | Efficient light harvesting |
NZ597053A (en) | 2009-05-26 | 2014-02-28 | Advanced Bionutrition Corp | Stable dry powder composition comprising biologically active microorganisms and/or bioactive materials and methods of making |
US8865452B2 (en) * | 2009-06-15 | 2014-10-21 | Aurora Algae, Inc. | Systems and methods for extracting lipids from wet algal biomass |
US9101942B2 (en) * | 2009-06-16 | 2015-08-11 | Aurora Algae, Inc. | Clarification of suspensions |
US8769867B2 (en) * | 2009-06-16 | 2014-07-08 | Aurora Algae, Inc. | Systems, methods, and media for circulating fluid in an algae cultivation pond |
EP2272383A1 (en) | 2009-06-22 | 2011-01-12 | SBAE Industries NV | Composition Comprising Omega-7 and/or Omega-4 Fatty Acids |
US8747930B2 (en) * | 2009-06-29 | 2014-06-10 | Aurora Algae, Inc. | Siliceous particles |
US20100325948A1 (en) * | 2009-06-29 | 2010-12-30 | Mehran Parsheh | Systems, methods, and media for circulating and carbonating fluid in an algae cultivation pond |
US9480271B2 (en) | 2009-09-15 | 2016-11-01 | Monsanto Technology Llc | Soybean seed and oil compositions and methods of making same |
US8765983B2 (en) * | 2009-10-30 | 2014-07-01 | Aurora Algae, Inc. | Systems and methods for extracting lipids from and dehydrating wet algal biomass |
US8748160B2 (en) * | 2009-12-04 | 2014-06-10 | Aurora Alage, Inc. | Backward-facing step |
US9504750B2 (en) | 2010-01-28 | 2016-11-29 | Advanced Bionutrition Corporation | Stabilizing composition for biological materials |
EP2529004B1 (en) | 2010-01-28 | 2017-06-07 | Advanced Bionutrition Corporation | Dry glassy composition comprising a bioactive material |
EP2555633B1 (en) | 2010-04-06 | 2014-06-11 | Heliae Development LLC | Selective extraction of proteins from freshwater or saltwater algae |
US8202425B2 (en) | 2010-04-06 | 2012-06-19 | Heliae Development, Llc | Extraction of neutral lipids by a two solvent method |
WO2011127127A2 (en) | 2010-04-06 | 2011-10-13 | Arizona Board Of Regents For And On Behalf Of Arizona State University | Extraction with fractionation of oil and co-products from oleaginous material |
US8475660B2 (en) | 2010-04-06 | 2013-07-02 | Heliae Development, Llc | Extraction of polar lipids by a two solvent method |
US8115022B2 (en) | 2010-04-06 | 2012-02-14 | Heliae Development, Llc | Methods of producing biofuels, chlorophylls and carotenoids |
US8211309B2 (en) | 2010-04-06 | 2012-07-03 | Heliae Development, Llc | Extraction of proteins by a two solvent method |
US8273248B1 (en) | 2010-04-06 | 2012-09-25 | Heliae Development, Llc | Extraction of neutral lipids by a two solvent method |
US8308951B1 (en) | 2010-04-06 | 2012-11-13 | Heliae Development, Llc | Extraction of proteins by a two solvent method |
US8313648B2 (en) | 2010-04-06 | 2012-11-20 | Heliae Development, Llc | Methods of and systems for producing biofuels from algal oil |
US8211308B2 (en) | 2010-04-06 | 2012-07-03 | Heliae Development, Llc | Extraction of polar lipids by a two solvent method |
EP2561050A1 (en) | 2010-04-22 | 2013-02-27 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Method for obtaining polyunsaturated fatty acid-containing compositions from microbial biomass |
EP3617318A1 (en) | 2010-06-01 | 2020-03-04 | DSM IP Assets B.V. | Extraction of lipid from cells and products therefrom |
MY163938A (en) | 2010-06-14 | 2017-11-15 | Io-Mega Holding Corp | Method for the production of algae derived oils |
CN101870915B (zh) * | 2010-06-30 | 2012-07-04 | 南京工业大学 | 水酶法提取花生四烯酸油脂的工艺 |
CN103140145B (zh) | 2010-08-13 | 2014-08-20 | 高级生物营养公司 | 用于生物材料的干的贮存稳定用组合物 |
CN103026187B (zh) | 2010-10-29 | 2014-09-17 | 大和制衡株式会社 | 组合秤 |
US9375028B2 (en) * | 2010-12-09 | 2016-06-28 | Mead Johnson Nutrition Company | Compositions and methods for nutrient delivery |
MX2013008062A (es) * | 2011-01-28 | 2013-08-09 | Amyris Inc | Seleccion de microcolonias encapsuladas en gel. |
EP2682453B2 (en) * | 2011-03-03 | 2023-03-22 | Nissui Corporation | Method of producing oil/fat comprising highly-unsaturated fatty acids by means of lipase |
US8926844B2 (en) | 2011-03-29 | 2015-01-06 | Aurora Algae, Inc. | Systems and methods for processing algae cultivation fluid |
US8569530B2 (en) | 2011-04-01 | 2013-10-29 | Aurora Algae, Inc. | Conversion of saponifiable lipids into fatty esters |
US8752329B2 (en) | 2011-04-29 | 2014-06-17 | Aurora Algae, Inc. | Optimization of circulation of fluid in an algae cultivation pond |
US8365462B2 (en) | 2011-05-31 | 2013-02-05 | Heliae Development, Llc | V-Trough photobioreactor systems |
USD682637S1 (en) | 2011-06-10 | 2013-05-21 | Heliae Development, Llc | Aquaculture vessel |
USD661164S1 (en) | 2011-06-10 | 2012-06-05 | Heliae Development, Llc | Aquaculture vessel |
USD679965S1 (en) | 2011-06-10 | 2013-04-16 | Heliae Development, Llc | Aquaculture vessel |
CN102925502A (zh) * | 2011-08-10 | 2013-02-13 | 嘉必优生物工程(湖北)有限公司 | 利用高山被孢霉生产花生四烯酸油脂的工业方法 |
WO2013075116A2 (en) | 2011-11-17 | 2013-05-23 | Heliae Development, Llc | Omega 7 rich compositions and methods of isolating omega 7 fatty acids |
CN102703332B (zh) * | 2012-06-19 | 2013-08-07 | 南京工业大学 | 一株产花生四烯酸油脂的菌株及其应用 |
CN103667068A (zh) * | 2012-09-14 | 2014-03-26 | 罗盖特兄弟公司 | 一种由微生物(单细胞真菌高山被孢霉)产生的富含花生四烯酸的油及其制备工艺 |
CN102925503B (zh) * | 2012-09-26 | 2014-08-06 | 内蒙古金达威药业有限公司 | 利用固料培养基培养高山被孢霉制备花生四烯酸的方法 |
CN103805517B (zh) * | 2012-11-14 | 2019-03-08 | 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 | 高山被孢霉的分离的新菌株及其应用 |
AU2014229307B2 (en) | 2013-03-13 | 2017-08-31 | Dsm Nutritional Products Ag | Engineering microorganisms |
US9651304B1 (en) | 2013-03-14 | 2017-05-16 | Green Recovery Technologies, LLC | Pretreatment of biomass prior to separation of saturated biomass |
US9266973B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-02-23 | Aurora Algae, Inc. | Systems and methods for utilizing and recovering chitosan to process biological material |
WO2014186395A1 (en) | 2013-05-15 | 2014-11-20 | Solazyme, Inc. | Cosmetic compositions comprising microalgal oil |
JP6619229B2 (ja) * | 2013-08-22 | 2019-12-11 | 協和発酵バイオ株式会社 | アラキドン酸生産ポリケチドシンターゼ及びその利用 |
CN103602648B (zh) * | 2013-12-04 | 2016-03-02 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一种提高纤维素酶生产水平的发酵工艺 |
SG11201605009RA (en) | 2013-12-20 | 2016-07-28 | Dsm Ip Assets Bv | Processes for obtaining microbial oil from microbial cells |
KR102426987B1 (ko) | 2013-12-20 | 2022-07-28 | 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. | 미생물 세포로부터의 미생물 오일의 수득 방법 |
CN105829539B (zh) | 2013-12-20 | 2023-11-10 | 帝斯曼营养品股份公司 | 从微生物中回收油的方法 |
AU2014369042B2 (en) | 2013-12-20 | 2020-04-30 | Dsm Ip Assets B.V. | Processes for obtaining microbial oil from microbial cells |
ES2749002T3 (es) | 2013-12-20 | 2020-03-18 | Mara Renewables Corp | Métodos de recuperación de aceite sobre microorganismos |
AU2014369045B2 (en) | 2013-12-20 | 2020-02-27 | Dsm Ip Assets B.V. | Processes for obtaining microbial oil from microbial cells |
CA2961699C (en) | 2014-09-23 | 2022-10-11 | Jost Chemical Co. | Fatty acid composition and method for fortifying nutritional products with fatty acids |
AR104042A1 (es) | 2015-03-26 | 2017-06-21 | Mara Renewables Corp | Producción de alta densidad de biomasa y aceite utilizando glicerol en bruto |
BR112018000690A2 (pt) | 2015-07-13 | 2018-09-18 | MARA Renewables Corporation | micro-organismo recombinante, e, métodos para preparar um micro-organismo de metabolização de xilose e para produzir óleo. |
CA2994112C (en) | 2015-07-29 | 2023-08-08 | Advanced Bionutrition Corp. | Stable dry probiotic compositions for special dietary uses |
US10851395B2 (en) | 2016-06-10 | 2020-12-01 | MARA Renewables Corporation | Method of making lipids with improved cold flow properties |
KR102145032B1 (ko) * | 2017-04-26 | 2020-08-14 | 주식회사 엘지생활건강 | 모르티에렐라 오일을 포함하는 화장료 조성물 |
US10513718B2 (en) | 2017-06-06 | 2019-12-24 | City University Of Hong Kong | Method of producing polyunsaturated fatty acid |
CN107418982B (zh) * | 2017-09-25 | 2020-05-08 | 嘉必优生物技术(武汉)股份有限公司 | 一种低氯丙醇微生物油脂及其制备方法 |
CN112004935B (zh) * | 2018-03-30 | 2024-05-14 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 获得微生物油的方法和通过维持低的碳水化合物浓度来减少乳液的方法 |
CN109266698B (zh) * | 2018-05-17 | 2022-10-28 | 梁云 | 被孢霉属微生物油脂中脂肪酸组合物成分调整的方法 |
CN108410916A (zh) * | 2018-05-30 | 2018-08-17 | 湖北福星生物科技有限公司 | 花生四烯酸油脂的生产方法 |
CN110747239B (zh) * | 2019-11-26 | 2021-06-22 | 瞿瀚鹏 | 富含Sn-2位ARA的微生物油脂及其制备方法和应用 |
CN117730810A (zh) * | 2024-01-24 | 2024-03-22 | 广东海洋大学 | 橄榄油在提高东风螺幼虫变态率和/或存活率中的应用 |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4280379A (en) * | 1980-01-11 | 1981-07-28 | Chow Kirk K | Reversihble ratchet drive |
US4670285A (en) | 1982-08-06 | 1987-06-02 | The University Of Toronto Innovations Foundation | Infant formula |
US4870011A (en) | 1985-01-22 | 1989-09-26 | Director General Of Agency Of Industrial Science And Technology | Method for obtaining lipids from fungus bodies |
DE3603000A1 (de) * | 1986-01-31 | 1987-08-06 | Milupa Ag | Neue polyensaeure-reiche fettmischung und deren verwendung bei der herstellung von saeuglingsnahrungen |
JPS6438007A (en) * | 1987-04-28 | 1989-02-08 | Lion Corp | Skin external preparation |
JP2697834B2 (ja) * | 1988-02-02 | 1998-01-14 | サントリー株式会社 | 高度不飽和脂肪酸成分添加人工乳 |
JP2723243B2 (ja) * | 1988-02-25 | 1998-03-09 | サントリー株式会社 | 高度不飽和脂肪酸添加動物飼料 |
JPH01228486A (ja) * | 1988-03-09 | 1989-09-12 | Suntory Ltd | 奇数鎖高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法 |
PH11992043811B1 (en) * | 1991-01-24 | 2002-08-22 | Martek Corp | Arachidonic acid and methods for the production and use thereof |
JPH05163142A (ja) * | 1991-12-17 | 1993-06-29 | Tokiwa Yakuhin Kogyo Kk | 肝障害の予防または治療用アラキドン酸含有組成物 |
JP3354608B2 (ja) * | 1992-11-16 | 2002-12-09 | サントリー株式会社 | 高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法 |
JPH08511533A (ja) * | 1993-06-09 | 1996-12-03 | マーテック・バイオサイエンスィズ・コーポレーション | 神経学的障害の治療に有用な方法および医薬用組成物 |
-
1995
- 1995-01-03 US US08/367,881 patent/US5658767A/en not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-01-03 EP EP03076254A patent/EP1342787A3/en not_active Withdrawn
- 1996-01-03 AT AT96904435T patent/ATE239088T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-01-03 CA CA002209513A patent/CA2209513C/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-01-03 CN CN2005100712952A patent/CN1696300B/zh not_active Expired - Lifetime
- 1996-01-03 KR KR1020117022075A patent/KR20110111327A/ko not_active Application Discontinuation
- 1996-01-03 KR KR1020127013351A patent/KR20120073363A/ko not_active Application Discontinuation
- 1996-01-03 PT PT96904435T patent/PT800584E/pt unknown
- 1996-01-03 CN CN200910006766.XA patent/CN101560529B/zh not_active Expired - Lifetime
- 1996-01-03 EA EA199700090A patent/EA001036B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1996-01-03 WO PCT/US1996/000182 patent/WO1996021037A1/en active IP Right Grant
- 1996-01-03 AU AU48542/96A patent/AU713567B2/en not_active Expired
- 1996-01-03 KR KR1020147023757A patent/KR20140114068A/ko not_active Application Discontinuation
- 1996-01-03 BR BRPI9607179-6A patent/BR9607179B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1996-01-03 DE DE69627816T patent/DE69627816T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-01-03 KR KR1020067015060A patent/KR101033741B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1996-01-03 PL PL96321208A patent/PL187694B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1996-01-03 EP EP20100179714 patent/EP2322640A3/en not_active Withdrawn
- 1996-01-03 JP JP52123196A patent/JP4014219B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1996-01-03 DE DE0800584T patent/DE800584T1/de active Pending
- 1996-01-03 EP EP20100179715 patent/EP2322641A3/en not_active Withdrawn
- 1996-01-03 CN CN2011102827937A patent/CN102399831A/zh active Pending
- 1996-01-03 KR KR1020087015041A patent/KR20080068761A/ko not_active Application Discontinuation
- 1996-01-03 KR KR1020107003392A patent/KR101163298B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1996-01-03 ES ES96904435T patent/ES2197233T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-01-03 EP EP96904435A patent/EP0800584B1/en not_active Revoked
- 1996-01-03 CN CN961920025A patent/CN1175976B/zh not_active Expired - Lifetime
- 1996-01-03 DK DK96904435T patent/DK0800584T3/da active
- 1996-01-03 EP EP20100179716 patent/EP2322642A3/en not_active Withdrawn
-
1997
- 1997-07-01 FI FI972829A patent/FI117442B/fi not_active IP Right Cessation
- 1997-07-02 NO NO19973085A patent/NO320117B1/no not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-12-21 JP JP2005368593A patent/JP2006180877A/ja not_active Withdrawn
-
2006
- 2006-05-16 HK HK06105700.4A patent/HK1085768A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2006-06-26 FI FI20060617A patent/FI120648B/fi not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-06-15 JP JP2007158505A patent/JP2007319161A/ja not_active Withdrawn
-
2009
- 2009-03-30 JP JP2009080997A patent/JP2009149910A/ja not_active Withdrawn
-
2010
- 2010-03-11 JP JP2010053924A patent/JP5281026B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2013
- 2013-02-26 JP JP2013035462A patent/JP2013116123A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI117442B (fi) | Arakidonihappo ja menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö | |
CA2101273C (en) | Arachidonic acid and methods for the production and use thereof | |
MXPA97005078A (en) | Araquidonic acid and methods for the production and use of my |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
FG | Patent granted |
Ref document number: 117442 Country of ref document: FI |
|
PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: DSM IP ASSETS B.V. |
|
MM | Patent lapsed |