EA013051B1 - Масло из микробных клеток, композиция, содержащая масло, и способ получения масла - Google Patents

Масло из микробных клеток, композиция, содержащая масло, и способ получения масла Download PDF

Info

Publication number
EA013051B1
EA013051B1 EA200500048A EA200500048A EA013051B1 EA 013051 B1 EA013051 B1 EA 013051B1 EA 200500048 A EA200500048 A EA 200500048A EA 200500048 A EA200500048 A EA 200500048A EA 013051 B1 EA013051 B1 EA 013051B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
oil
fermentation
carbon source
rate
carbon
Prior art date
Application number
EA200500048A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200500048A1 (ru
Inventor
Хюго Стрекстра
Петрус Йозеф Мария Брокен
Original Assignee
ДСМ Ай Пи ЭССЕТС Б.В.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ДСМ Ай Пи ЭССЕТС Б.В. filed Critical ДСМ Ай Пи ЭССЕТС Б.В.
Publication of EA200500048A1 publication Critical patent/EA200500048A1/ru
Publication of EA013051B1 publication Critical patent/EA013051B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6436—Fatty acid esters
    • C12P7/6445—Glycerides
    • C12P7/6472—Glycerides containing polyunsaturated fatty acid [PUFA] residues, i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23D—EDIBLE OILS OR FATS, e.g. MARGARINES, SHORTENINGS, COOKING OILS
    • A23D9/00—Other edible oils or fats, e.g. shortenings, cooking oils
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23D—EDIBLE OILS OR FATS, e.g. MARGARINES, SHORTENINGS, COOKING OILS
    • A23D9/00—Other edible oils or fats, e.g. shortenings, cooking oils
    • A23D9/02—Other edible oils or fats, e.g. shortenings, cooking oils characterised by the production or working-up
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/158—Fatty acids; Fats; Products containing oils or fats
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/115—Fatty acids or derivatives thereof; Fats or oils
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/115—Fatty acids or derivatives thereof; Fats or oils
    • A23L33/12—Fatty acids or derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/67—Vitamins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/92—Oils, fats or waxes; Derivatives thereof, e.g. hydrogenation products thereof
    • A61K8/925—Oils, fats or waxes; Derivatives thereof, e.g. hydrogenation products thereof of animal origin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9728—Fungi, e.g. yeasts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B1/00—Production of fats or fatty oils from raw materials
    • C11B1/10—Production of fats or fatty oils from raw materials by extracting
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/005—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor after treatment of microbial biomass not covered by C12N1/02 - C12N1/08
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C12P7/6431—Linoleic acids [18:2[n-6]]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C12P7/6432—Eicosapentaenoic acids [EPA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C12P7/6434—Docosahexenoic acids [DHA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6436—Fatty acid esters
    • C12P7/6445—Glycerides
    • C12P7/6481—Phosphoglycerides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/85—Products or compounds obtained by fermentation, e.g. yoghurt, beer, wine

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение раскрывает способ получения масла из микробных клеток, включающий культивирование микроорганизма в культуральной среде в ферментере, где ферментация разделена по меньшей мере на две стадии, причем на второй или последней стадии источник углерода добавляют со скоростью ≤0,30 М углерода/кг среды в час; и скорость добавления источника углерода находится ниже скорости потребления источника углерода микроорганизмами. Микроорганизмы, таким образом, имеют источник углерода, ограниченный так, что они предпочтительно метаболизируют жиры или липиды иные, чем арахидоновая кислота (ARA), тем самым повышается относительное содержание ARA в клетках. Полученное масло содержит по меньшей мере 50% арахидоновой кислоты (ARA) и обладает по крайней мере одним из следующих свойств: а) имеет содержание триглицеридов по меньшей мере 90%; б) имеет значение перекисного числа (POV) не более 3,0; в) имеет значение анизидинового числа (AnV) не более 1,0; г) имеет содержание фосфолипидов ниже 5%.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к способу получения РИГА, необязательно в масле из микробных клеток, включающему культивирование микроорганизма двухстадийным способом и затем извлечение масла из клеток микроорганизмов. Также изобретение относится к новому (например, из микробных клеток) маслу, полученному данным способом. В масле 50% или более липидов (или РИТА, например, в масле) составляет арахидоновая кислота (АКА). Масло может иметь низкое значение перекисного числа (РОУ) ниже 2,5 или 2,0, и/или низкое значение анизидинового числа (АпУ) ниже 1,0. Также настоящее изобретение относится к продуктам питания или пищевым добавкам, содержащим или полученным с использованием масла из микробных клеток по изобретению.
Уровень техники
Полиненасыщенные жирные кислоты, или РИТА, распространены в природе. Самые разнообразные РИТА продуцируются различными одноклеточными микроорганизмами (водорослями, грибами и т.д.). Одной особенно важной РИТА является арахидоновая кислота (АКА), которая представляет одну из ряда полиненасыщенных кислот с длинной цепью (ЪС-РиТА). В химическом отношении арахидоновая кислота представляет собой цис-5,8,11,14-эйкозатетраеновую кислоту (20:4) и относится к семейству (п-6) ЬСРИТА.
Арахидоновая кислота является одним из основных предшественников самых разнообразных биологически активных веществ, известных под общим названием эйкозаноиды, группы, включающей простагландины, тромбоксаны и лейкотриены. Также арахидоновая кислота является одним из компонентов липидной фракции женского молока, и полагают, что она является необходимой для оптимального развития нервной системы младенцев. Арахидоновая кислота имеет широкий ряд различных применений, включая применение в детских молочных смесях, продуктах питания и кормах для животных.
Арахидоновую кислоту можно получать при использовании микроорганизмов и, в частности, при использовании нитчатого гриба МогйегеИа. Однако процентное содержание арахидоновой кислоты в масле из микробных клеток, как правило, является очень низким. Предпринимались попытки увеличить выход арахидоновой кислоты из МогОсгсПа. но они завершались с различным успехом. Для осуществления многих попыток повысить содержание арахидоновой кислоты требуются стадии, которые с трудом можно применить в промышленном масштабе.
Например, ЕгокЫп е! а1., Ргосекк Вюсйет1к!гу: (35) 2000, рр. 1171-1175 выдерживают культуру в течение примерно недели после окончания ферментации. Количества АКА оценивалось по отношению к биомассе (а не по отношению к маслу, экстрагированному из нее), поскольку в данном документе не описывается экстракция какого-либо масла. То!аш е! а1., 1пбик1па1 АррНсайопк о! 81пд1е се11 ойк, Ашепсап Ой Сйет1к!к' 8ос1е!у Сатра1дп, 1992, Сйар!ег 4, рр. 52-60 и Ырйк, уо1. 22, № 12 (1987), радек 1060-1062 предлагают применять необычно низкую температуру ферментации, что означает значительное замедление ферментации. В данном случае содержание АКА основано на экстракции смесью растворителей хлороформ/метанол. Другим документом в области получения АКА является заявка АО 96/21037.
В заявке на Европейский патент А-1035211 (8ип!огу) описывается способ получения АКА и липидов ПНОЬА из М. а1рша. Однако оценка содержания АКА проводится либо по отношению к биомассе (а не по отношению к экстрагированному из нее маслу), либо на основе результатов аналитического метода, где полиненасыщенные кислоты вначале этерифицируют, и затем экстрагируют с использованием растворителя (а не проводят вначале экстракцию с получением масла с последующим определением содержания АКА по отношению к данному маслу).
В одном сообщении приводятся данные о более высоком выходе АКА, где ее концентрация в собранном мицелии составляет примерно 70% при использовании штамма М. а1рша 18-4 (81ιίιηίζι.ι 8., О11кТа!к-Ыр1бк 1995, Ргос. Аог1б Сопдг. 1п!. 8ос. Та! Кек., 21к! (1996), Меейпд Эа1е 1995, Уо1ите 1, радек ЮЗ109 и Вюсйет1са1 апб Вюрйук1са1 Кекеагсй Соттишсайопк, Уо1. 150 (1), 1988, р. 335-441). Однако данное процентное содержание выражено по отношению к клеткам, и не является таким же, как процент АКА в масле из микробных клеток. Фактически в полученном масле содержание АКА составляет только 39,0% (табл. 27.2, с. 105). (Необходимо отметить, что в данной области используются самые различные методы определения содержания АКА, результаты которых необязательно выражаются в тех же единицах, или основаны на том же аналитическом методе, что цифры, приведенные в данном описании ниже). Кроме того, ее получают при выдерживании клеток М. а1рша при комнатной температуре в течение еще 6 суток после ферментации, что явно не является жизнеспособным выбором для производства в промышленном масштабе.
Следовательно, имеется потребность в изыскании способов повышения относительного содержания (и таким образом выхода) арахидоновой кислоты в маслах из микробных клеток и, в частности, способом, который можно было бы использовать в промышленном масштабе.
Раскрытие изобретения
Настоящее изобретение обеспечивает новые способы получения масла (из микробных клеток) с повышенным относительным содержанием арахидоновой кислоты. Это означает, что арахидоновую кислоту можно получать при низких затратах и с повышенной скоростью. Кроме того, поскольку настоящее изобретение не основывается на генетической модификации используемых микроорганизмов для повы
- 1 013051 шения продукции арахидоновой кислоты, изобретение отвечает возрастающему спросу на естественные, генетически не модифицированные пищевые ингредиенты. Дополнительно, масло обладает низкой способностью к окислению и таким образом пригодно для включения в состав продуктов питания для человека, для которых токсичность имеет особое значение, например, таких как детские молочные смеси.
Масло из микробных клеток, согласно изобретению содержит по меньшей мере 50% арахидоновой кислоты (АВА) и обладает по крайней мере одним из следующих свойств:
а) имеет содержание триглицеридов по меньшей мере 90%;
б) имеет значение перекисного числа (РОУ) не более 3,0;
в) имеет значение анизидинового числа (АпУ) не более 1,0;
г) имеет содержание фосфолипидов ниже 5%.
Предпочтительно масло имеет содержание свободных жирных кислот <0,4%. Содержание арахидоновой кислоты (АВА), таким образом, может быть по меньшей мере 50,5, 51 или 52%. Оно может содержать до 55, 57 или 60% АВА. Масло может быть получено нижеописанным способом. Его можно экстрагировать гексаном.
Согласно изобретению способ получения масла из микробных клеток включает культивирование микроорганизма в культуральной среде в ферментере, где ферментация разделена по меньшей мере на две стадии, причем на второй или последней стадии источник углерода добавляют со скоростью <0,30 М углерода/кг среды в час; и скорость добавления источника углерода находится ниже скорости потребления источника углерода микроорганизмами.
Предпочтительно, если на второй или последней стадии источник углерода добавляют со скоростью по меньшей мере 0,01 М углерода/кг среды в час.
Предпочтительно, если концентрация источника углерода на указанной второй или последней стадии составляет в среднем <10 г/кг среды или содержания углерода на этих стадиях составляет <0,17 М углерода/кг среды.
Предпочтительно, если источником углерода является глюкоза, причем скорость добавления глюкозы в течение второй или последней стадии составляет менее 1,0 г глюкозы/кг среды в час.
Предпочтительно, если ферментацию проводят при температуре 22-30°С.
Предпочтительно, если микроорганизм представляет собой МогбегеПа, в частности Могбегеба а1р1па.
Способ согласно изобретению, как правило, представляет собой процесс глубинной ферментации.
Предпочтительно, если во время более ранней стадии ферментации скорость добавления источника углерода превышает скорость его потребления микроорганизмами.
Способ согласно изобретению также включает извлечение масла из ферментированных микроорганизмов экстракцией растворителем, в частности гексаном.
Как правило, полученное масло подвергают рафинации и очистке.
На основе масла из микробных клеток получают композицию, которая представляет собой продукт питания (такой, как детская молочная смесь), продукт питания для людей, корм или кормовую добавку, фармацевтическую, ветеринарную или косметическую композицию. Предпочтительно композиция представляет собой детскую молочную смесь.
Согласно настоящему изобретению источник углерода является фактором, ограничивающим рост микроорганизмов, или он ограничивает таким образом, что микроорганизмы метаболизируют (свой собственный) жир(ы) и/или липид(ы), источник углерода используется весь, или его концентрация в среде равняется примерно нулю в или перед концом ферментации; добавление источника углерода останавливают, но ферментацию продолжают и/или микроорганизмы подвергаются таким условиям, что клетки, в первую очередь, потребляют иные жиры, чем АВА. В результате относительное содержание АВА в жирах или липидах в клетках возрастает. Таким образом, способ по первому аспекту может приводить к повышенному содержанию АВА в масле по второму аспекту.
Подробное описание изобретения
Микроорганизмы.
Используемые микроорганизмы могут быть бактериями, дрожжами, водорослями или грибами. Предпочтительно используют гриб, в частности нитчатый гриб. Предпочтительными грибами являются относящиеся к отряду Мисога1е§. Гриб может быть из родов Могбегеба, Рбусотусек, ЕЩоторйбюга. Ру1Ыит, Тбгаийосйубшт, В1аке§1еа, ВЫхотисог или АкрегдШик. Предпочтительными грибами могут быть таковые вида Могбегеба а1рта. Предпочтительными дрожжами являются относящиеся к родам РюЫа или Зассйаготусек, например РюЫа сгТеггб. Бактерии могут быть представителями рода РгорюшЬас1епиш. Подходящими водорослями являются динофлагеллаты и/или относящиеся к родам СгурЛесобшшт, Рогрбуйбшт или ИШсЫа, например вид СгурЛесобшшт собпб.
Штаммы микроорганизмов, используемых по настоящему изобретению, могут представлять собой распространенные в природе или обычно используемые промышленные штаммы. Штамм может представлять собой не измененный генетически, например, он может быть не трансформирован вектором, или он может не включать гетерологичный ген(ы). С учетом предпочтений в некоторых группах населе
- 2 013051 ния в отношении продуктов питания, которые не содержат генно-инженерных ингредиентов, используемый микроорганизм может представлять собой штамм, который не является модифицированным таким образом.
Полинасыщенные жирные кислоты (РИГА).
РИГА может представлять собой одну РИГА, две или более различных РИГА.
Каждая РИГА может быть из семейства п-3 или п-6. Предпочтительно это С18, С20 или С22 РИГА. Она может представлять собой РИГА по меньшей мере с 18 атомами углерода и/или по меньшей мере с 3 или 4 двойными связями. РИГА можно выделить в виде свободной жирной кислоты, соли, в виде эфира жирной кислоты (например, метилового или этилового эфира), в виде фосфолипида и/или в виде моно-, ди- или триглицерида.
Подходящие (п-3 и п-6) РИГА включают докозагексаеновую кислоту (ЭНЛ. 22:6 Ω 3), соответственно из водорослей или грибов таких, как (динофлагеллаты) СтурШесоФшиш или (гриба)1Ъгаи81осйу!гшт;
γ-линоленовую кислоту (СЬА, 18:3 Ω 6);
α-линоленовую кислоту (АЕА, 18:3 Ω 3); конъюгированную линоленовую кислоту (октадекадиеновую кислоту, СЬА); дигомо^-линоленовую кислоту (ПОЬА, 20:3 Ω 6);
арахидоновую кислоту (АКА, 20:4 Ω 6) и эйкозапентаеновую кислоту (ЕКА, 20:5 Ω 3).
Предпочтительные РИГА включают арахидоновую кислоту (АКА), докозагексаеновую кислоту (ОНА), эйкозапентаеновую кислоту (ЕРА) и/или γ-линоленовую кислоту (ОЬА). В частности, АКА является предпочтительной.
Ферментация.
Ферментацию/культивирование, как правило, проводят в подходящем ферментере (или сосуде для ферментации), содержащем (жидкую, обычно водную) культуральную среду. В основной ферментер в асептических условиях вносят посевной материал из небольшого питательного ферментера. Как правило, используют глубинную и/или аэробную ферментацию. Ее можно проводить в глубоком ферментеретанке. Ферментер может быть снабжен устройством для мониторинга и/или изменения рН и температуры. Резервуар может быть дополнительно адаптирован для проведения, или возможности проведения, аэрации и/или смешивания клеток и жидкости, например, в виде перемешивания раствора. Это может быть перемешиванием, например, с помощью механических устройств.
Преимущественно емкость ферментера составляет по меньшей мере 10, 20, 40 или даже 60 м3. Можно использовать ферментеры емкостью 100 или даже 150 м3.
Как правило, ферментацию проводят в течение 10 суток или менее, предпочтительно 9 или менее суток, более предпочтительно 8 или менее суток. Продолжительность ферментации может составить 4, 5, 6 или 7 суток.
Необязательно ферментацию можно проводить в течение периода времени от 150 до 120 ч, например от 160 до 190 ч, например от 170 до 180 ч. Окончанием ферментации обычно является точка, когда прекращают перемешивание и/или аэрацию. Это может быть моментом, когда ферментер и/или вспомогательное оборудование отключают (исключают их функции). Затем микроорганизмы можно удалить из ферментера.
Ферментацию можно проводить при температуре в пределах от 20 до 40°С.
Источники углерода и азота.
При ферментации можно использовать любую подходящую среду, например среду, подходящую для используемого микроорганизма. Источник углерода может включать (как комплексные источники) мальтодекстрин, овсяную муку, овсяную муку грубого помола, мелассу, растительное (например, соевое) масло, солодовый экстракт, крахмал, этанол или соевое масло. Предпочтительные (некомплексные) источники углерода включают углеводы и сахара, такие как фруктоза, мальтоза, сахароза, ксилоза, маннит, глюкоза или лактоза либо глицерин (например, из растительного источника), цитрат, ацетат, глицерин, этанол или аскорбат (например, натрия). В предпочтительном воплощении изобретения источник углерода представляет или включает глюкозу и, в частности, глюкозный сироп.
Подходящие источники азота включают дрожжевой экстракт, мочевину и пептон. В среде может отсутствовать агар.
Предпочтительные источники азота и/или углерода являются водорастворимыми или смешивающимися с водой.
Отдельные (все) компоненты среды (такие как источники азота и/или углерода) могут присутствовать либо в начале ферментации, либо их постепенно добавляют во время ферментации, либо добавляют порциями или партиями. В частности, количество источника углерода, находящегося в среде, как правило, будет контролироваться, как описано ниже, предпочтительно при контроле скорости добавления источника углерода.
Источники азота и/или углерода можно вносить (или добавлять) по отдельности или вносить одно
- 3 013051 временно, или вносить в виде комбинированного препарата. Таким образом, они могут находиться в одной композиции (если полагается, что это необходимо), которая предпочтительно представляет собой жидкость. Источники азота и/или углерода можно добавлять (в ферментер) либо до внесения клеток грибов (в резервуар), другими словами до внесения посевного материала, либо во время ферментации, альтернативно их можно вносить до ферментации и во время нее.
Культуральная среда.
Предпочтительно культуральная среда представляет собой водную жидкость. Она может дополнительно включать другие соединения, которые способствуют ферментации, например, хелатообразователи (например, лимонную кислоту), противовспенивающее вещество (например, соевое масло), витамин (например, тиамин и/или рибофлавин), любые необходимые каталитические металлы (например, щелочноземельные металлы, такие как магний или кальций, или цинк или железо, и/или другие металлы такие, как кобальт и медь), фосфор (например, фосфат) и/или серу (например, сульфат). Среда может, если необходимо, содержать дополнительное масло такое, как оливковое или соевое масло, однако среда предпочтительно не должна содержать подобного масла.
Температура (оптимальная) культивирования (или ферментации) может варьировать в зависимости от используемого микроорганизма. Однако ее значение предпочтительно находится в пределах от 20 до 40°С и более предпочтительно от 22 до 30°С или 32°С. В частности, температура, при которой проводят ферментацию, составляет >22 или <25°С, например от 22 до 30°С, например в пределах 23-28°С. Значение рН водной жидкости во время ферментации может быть от 4 до 10, например от 5 до 8, оптимально от 6 до 7.
Как правило, среду смешивают или перемешивают во время ферментации для облегчения аэрации. Водную жидкость и клетки соответственно смешивают или перемешивают. Этого можно достичь, если аэрации обеспечивается пропусканием газа, например, воздуха в водную жидкость. Это может служить для дополнительной цели обеспечения кислородом клеток грибов: поскольку предпочтительно ферментация является аэробной. Другие способы перемешивания или смешивания включают перемешивание, например, с использованием мешалки. Она может быть типа гидрокрыльевой с осевым потоком или такого типа, в котором водная среда принудительно направляется от мешалки (например, турбина). Если даже перемешивание не проводится, то предпочтительно, что микробные клетки были обеспечены во время ферментации кислородом и, таким образом, аэрация (например, пропусканием воздуха, кислорода или другого содержащего кислород газа) является преимущественной. Аэрация может находиться в пределах от 0,1 до 2,0, например от 0,5 до 1,0 об/об/мин.
Предпочтительно емкость ферментера составляет по меньшей мере 2 или 5 л, предпочтительно по меньшей мере 10 л. Однако для ферментеров, используемых в промышленности или в промышленном масштабе, емкость резервуара предпочтительно составляет по меньшей мере 50, 100, 500 или 1000 л.
Последняя (или вторая) стадия ферментации.
Процесс ферментации можно разделить по меньшей мере на две стадии. Вторую или последнюю стадию, которая может непосредственно предшествовать окончанию ферментации, можно охарактеризовать снижением количества источника углерода, доступного для микроорганизма, или любым из признаков, представленных для первого аспекта. Как правило, данная стадия может начинаться за от 15 до 2 ч до окончания ферментации, предпочтительно менее чем за 10 ч до окончания ферментации, более предпочтительно за 3-5 ч до окончания ферментации. Предпочтительно данная стадия начинается, как правило, менее чем через 10 суток после начала ферментации, более предпочтительно она будет начинаться менее чем через 9 суток после, еще более предпочтительно менее чем через 8 суток после начала ферментации.
Во время первой или более ранней стадии ферментации источник углерода может находиться в избытке. Таким образом, количество доступного источника углерода может быть не ограничивающим фактором в отношении роста микроорганизмов. Скорость добавления источника углерода может превышать скорость его потребления микроорганизмами. На второй или последней стадии ферментации количество добавляемого источника углерода можно снизить, или совсем прекратить его внесение. Это означает, что количество источника углерода, доступного для микроорганизмов, будет снижаться во время второй или последней стадии ферментации. Как правило, на второй, конечной или последней стадии или к концу ферментации источник углерода может потребляться микроорганизмами со скоростью выше, чем его вносят в среду (например, скорость внесения меньше, чем скорость потребления);
вноситься со скоростью <0,30 М углерода/кг среды в час, например <0,25 или <0,20, и по меньшей мере составляет 0,01, 0,02 или 0,05 М углерода/кг среды/ч (единицы в данном случае выражаются в молях или молярном количестве углерода в источнике углерода, а не в массе или молях самого источника углерода);
быть фактором, ограничивающим рост и/или продукцию (ΡϋΕΑ) микроорганизмами.
Как правило, концентрация источника углерода во время второй стадии составляет <10 г источника углерода/кг среды, предпочтительно находится в пределах от 0,01 или 0,1 до 8 или 10 г/кг, более пред
- 4 013051 почтительно от 0,5 до 5 г/кг и еще более предпочтительно от 1 или 2 до 4 или 5 г/кг. Это означает, что в среднем во время проведения последней стадии ферментации будет находиться <0,30 М углерода на кг среды, предпочтительно от 0,03 до 0,3 М углерода на кг. Преимущественно это составляет от 0,015 до 0,17 М на кг и еще более предпочтительно от 0,03 до 0,17 М углерода на кг среды.
Когда источник углерода включает глюкозу, то, как правило, концентрация глюкозы (на последней стадии) будет в среднем составлять <10 г/кг среды, предпочтительно от 0,01 или 0,1 до 8 или 10 г/кг. Преимущественно она находится на уровне от 0,5 до 5 г/кг и еще более предпочтительно от 1 или 2 до 4 или 5 г/кг среды. В данном смысле среда включает клетки и водную культуральную среду, т.е. это и есть «бульон» (клетки и окружающая жидкость).
Скорость добавления источника углерода на последней стадии предпочтительно составляет не более 0,03 М углерода на кг, предпочтительно не более 0,025 или 0,02 М углерода/кг (среды). Предпочтительно скорость добавления равняется примерно 0,015 М углерода/кг. Если источником углерода является глюкоза, то предпочтительно скорость добавления глюкозы находится на уровне менее 1,0, например, менее 0,8, например, менее 0,5 г глюкозы/кг среды в час.
Предпочтительно скорость добавления источника углерода на последней стадии составляет примерно половину от скорости потребления источника углерода микроорганизмами. Однако соотношение скорость добавления:скорость потребления может варьировать от 1:1-3, например 1:1,5 до 2,5, оптимально от 1:1,8 до 2,2. Альтернативно скорость добавления может составлять от 30-70%, например от 40 до 60%, оптимально от 45 до 55% от скорости потребления.
Подходящую концентрацию источника углерода во время проведения второй стадии ферментации можно получить при тщательном контроле скорости добавления источника углерода. Как правило, она будет соответствующим образом снижаться во время или в начале последней стадии. Можно периодически проводить отбор проб и анализ культуры для определения концентрации источника углерода и при необходимости корректировать скорость внесения источника углерода. Это можно осуществлять автоматически при использовании компьютерной системы.
Способ пастеризации.
Как правило, пастеризацию проводят после окончания ферментации. В предпочтительном воплощении пастеризация будет завершать ферментацию, поскольку тепло во время пастеризации будет приводить к гибели клеток. Следовательно, пастеризовать можно ферментационный бульон (или клетки в жидкой (водной) среде), хотя, можно пастеризовать микробную биомассу, полученную из бульона. В последнем случае пастеризация может иметь место, пока еще микробные клетки находятся в ферментере. Предпочтительно пастеризация имеет место перед любой последующей обработкой микробных клеток, например, грануляционным измельчением (например, экструзией) или замешиванием.
Предпочтительно протокол пастеризации является достаточным для ингибирования или инактивации одного или более ферментов, которые могут оказывать отрицательное влияние или разрушать РИГА или масло из микробных клеток, например, липазы.
По окончании ферментации ферментационный бульон можно профильтровать или обработать иначе для удаления воды или водной жидкости. После удаления воды можно получить «плотный осадок» из биомассы. Если пастеризация не имела место, то затем обезвоженные клетки (или «плотный осадок» биомассы) можно подвергнуть пастеризации.
Экстракция масла.
Если желательно и, например, после окончания ферментации, микроорганизмы можно убить или пастеризовать. Это может представлять собой инактивацию любых нежелательных ферментов, например, ферментов, которые могут приводить к разрушению масла или снижению выхода РИГА.
После окончания культивирования или ферментации ферментационный бульон (клетки и водную жидкость) можно удалить из ферментера и, если необходимо, можно удалить из него жидкость (обычно воду). Можно использовать любой подходящий метод разделения твердой и жидкой фаз. Это (обезвоживание) может представлять собой центрифугирование и/или фильтрование. Клетки можно промыть, например, при использовании водного раствора (такого как вода), например, для удаления любых внеклеточных растворимых в воде или диспергируемых в воде соединений. Затем из микробных клеток можно извлечь масло, например, с использование растворителя, так, чтобы масло представляло собой экстрагированное растворителем масло, предпочтительно экстрагированное гексаном.
Масло не содержит (или в нем в основном отсутствуют) ОЬА и/или ΌΟΕΑ.
Способ экстракции РИГА.
Затем можно экстрагировать РИГА (или масло, как правило, содержащее РИГА) из (например, высушенных) гранул (например, экструдатов), содержащих клетки. Экстракцию можно проводить с использованием растворителя. Предпочтительно используют неполярный растворитель, например С1-8, предпочтительно С2-6алкан, например гексан. Можно применять двуокись углерода (в жидкой форме, например, в суперкритическом состоянии).
Таким образом, клетки можно подвергнуть экстракции, например, органическим растворителем, предпочтительно в атмосфере азота. Другие подходящие органические растворители включают эфир,
- 5 013051 метанол, этанол, хлороформ, дихлорметан и/или петролейный эфир. Также можно использовать экстракцию метанолом и петролейным эфиром и/или экстракцию однофазовой системой растворителей, состоящей из хлороформа, метанола и воды. При выпаривании органического растворителя(ей) из экстракта при пониженном давлении можно получить масло из микробных клеток, содержащее арахидоновую кислоту в высокой концентрации.
Растворителю предпочтительно дают просочиться через высушенные гранулы. Подходящие методы грануляции и экструзии микроорганизмов и последующая экстракция масла из микробных клеток, содержащего РИГА, описана в заявке \УО-А-97/37032.
Неочищенное масло, содержащее РИГА, извлекают растворителем. Данное масло можно использовать в таком состоянии без дополнительной обработки, или его можно подвергнуть одной или более стадиям рафинирования. Подходящие методы рафинирования описаны в заявке на международный патент № РСТ/ЕР01/08902 (содержание данного документа и всех других, представленных здесь, включено здесь в виде ссылки). Например, масло можно подвергнуть обработке кислотой или удалению высокомолекулярных соединений, обработке щелочью или удалению свободных жирных кислот, отбеливанию или удалению пигментов, фильтрации, фракционированию охлаждением (или охлаждению, например, для удаления насыщенных триглицеридов), дезодорации (или удалению свободных жирных кислот) и/или осветлению фильтрованием (или удалению нерастворимых в масле веществ).
Полученное масло особенно подходит для пищевых целей, и его можно добавлять к продуктам питания (для человека) или кормам (для животных). Примеры включают молоко, детские молочные смеси, лечебные напитки, хлеб и корм для животных.
Очистка/рафинирование.
Масло из микробных клеток можно рафинировать или очистить. Это может включать удаление одного или более из следующих компонентов: фосфолипида, следов металлов, пигмента, углевода, белка, свободной жирной кислоты (РРА), нерастворимого в масле соединения, нерастворимого в воде соединения, мыла или омыляемого вещества, продукта окисления, серы, моно- или диглицерида, продукта разложения пигмента, растворителя и/или стерина. Очистка может приводить к уменьшению или удалению «привкуса» и/или повышению стабильности масла.
Проведение данного способа (например, очистки) может включать удаление высокомолекулярных соединений (или обработку кислотой), нейтрализацию (или обработку щелочью), промывание водой, отбеливание, фильтрование, дезодорирование, осветление фильтрованием и/или охлаждение (или фракционирование охлаждением). Предпочтительно очистка включает обработку кислотой и/или обработку щелочью (удаление высокомолекулярных соединений и нейтрализация). Альтернативно способы очистки могут включать отбеливание и/или дезодорацию. Предпочтительно, однако, если очистка будет включать отбеливание и/или дезодорацию и оптимально дополнительно кислотную и/или щелочную обработку.
Масла.
Второй аспект настоящего изобретения обеспечивает масло из микробных клеток, которое содержит 35 или 40% по меньшей мере одной РИГА, такой как АРА. Масло может содержать по меньшей мере 50, 55 или 60% или более данной РИГА, такой как АРА. Содержание триглицеридов в нем может находиться на уровне по меньшей мере 90%. Предпочтительно масло из микробных клеток содержит 50, 55 или 60-90% арахидоновой кислоты, более предпочтительно 60-80% и еще более предпочтительно от 60 до 70% арахидоновой кислоты.
В масле из микробных клеток предпочтительно содержание триглицеридов составляет от 90 до 100%, например по меньшей мере 90 или 96%, предпочтительно по меньшей мере 98, более предпочтительно 99% и оптимально выше 99,5%. Как правило, масло из микробных клеток будет иметь содержание эйкозапентаеновой кислоты (ЕРА) ниже 5%, предпочтительно ниже 1% и наиболее предпочтительно ниже 0,5%. Масло может содержать менее 5, менее 2, менее 1% каждой из СО20, СО20:3, СО22:0 и/или СО24:0 полинасыщенных жирных кислот (РИГА). Содержание свободных жирных кислот (ГГА) может составлять <0,4, 0,2 и 0,1%.
Из триглицеридов предпочтительно, чтобы по меньшей мере 40%, например, 50% и более предпочтительно по меньшей мере 60% присутствующих РИГА находилось в α-положении глицерина (находящегося в скелете триглицерида), также известном как 1- или 3-положение. Предпочтительно, чтобы по меньшей мере 20%, например по меньшей мере 30%, более предпочтительно по меньшей мере 40% РИГА находилось в в(2)-положении.
Максимальное содержание фосфолипидов в масле соответственно составляет 5, 3 или 2%, и/или минимальное - 0,1, 0,5 или 1,0%.
Как правило, масло из микробных клеток будет представлять таковое, получаемое способом по первому аспекту изобретения. Предпочтительно масло выделяют из гриба, более предпочтительно масло выделяют из МогФегеИа и, в частности, из М. а1р1иа. Масло преимущественно экстрагируют гексаном.
Содержание АРА.
Для получения ясности будет пояснен расчет процентного содержания АРА, особенно с учетом то
- 6 013051 го, что в литературе в некоторых случаях расчет количества АКА проводится на различной основе. Процентное содержание АКА рассчитывают по отношению к маслу (которое экстрагировано из биомассы), а не по отношению к самой биомассе. Оно выражено отношением массы к массе. Оно рассчитывается по отношению к маслу, экстрагированному гексаном и, следовательно, по отношению к экстрагируемым гексаном липидам (НЕЬ). Расчет проводят по отношению к общему количеству масла, а не к общему количеству жирных кислот (что в некоторых случаях может дать ошибочные, завышенные значения). Содержание ЛКЛ определяют хорошо известным аналитическим методом ЕЛМЕ (с использованием метиловых эфиров жирных кислот), он подробно описан в АОС8 Се1Ь89. Различные растворители будут экстрагировать различные липиды. Необходимо отметить, что в данном случае масло вначале экстрагируют гексаном и затем определяют содержание АКА методом анализа ЕАМЕ. Это будет давать другие результаты по сравнению с методом, который включает вначале этерификацию арахидоновой кислоты (например, находящейся еще в клетках) и затем экстракцию полученных метиловых эфиров для дальнейшего анализа.
Перекисное число (РОУ).
Предпочтительно значение РОУ масла из микробных клеток составляет не более чем 3,0, 2,5 или 2,0. Однако можно получить значительно более низкие значения РОУ при использовании способа по изобретению, и данные значения могут быть ниже 1,5 или ниже 1,0. Можно получить значения ниже 0,8 и даже ниже 0,4.
Анизидиновое число (АпУ).
Предпочтительно анизидиновое число масла из микробных клеток составляет не более 1,0, например, не более 0,6, 0,3 и даже не более 0,1.
Применения и продукты.
Третий аспект изобретения относится к композиции, содержащей масло по второму аспекту, и где является целесообразным, одно или более других (дополнительных) веществ. Композиция может представлять собой продукт питания и/или пищевую добавку для животных или людей. В воплощениях изобретения, которые предназначены для потребления человеком, масла могут быть подвергнуты обработке подходящей для потребления человеком, как правило, рафинированием или очисткой масла, полученного из микробных клеток.
Композиция может представлять собой детскую молочную смесь или продукт питания (для человека). В данном случае состав молочной смеси можно скорректировать таким образом, что она будет включать аналогичные количества липидов или РИЕА, которые имеются в обычном женском молоке. Это может включать смешивание масла из микробных клеток по изобретению с другими маслами для получения соответствующей композиции.
Композиция может представлять собой корм или добавку для животных и рыб. Подобные корма и добавки можно скармливать любым сельскохозяйственным животным, в частности овцам, крупному рогатому скоту и птице. Кроме того, корма или добавки можно скармливать водным организмам, предназначенным для разведения, например рыбам и панцирным водным животным. Композиция может содержать одно или более кормовых веществ или ингредиентов для подобных животных.
Масло по изобретению можно непосредственно продавать в виде масла и оно может находиться в соответствующей упаковке, как правило, в разовых алюминиевых бутылях, покрытых изнутри эпоксифенольным лаком, и продутых азотом. Масло может содержать один или более антиоксидантов (например, токоферол, витамин Е, пальмитат), каждый, например, в концентрации от 50 до 800 млн-1, например от 100 до 700 млн-1.
Подходящие композиции могут включать фармацевтическую или ветеринарную композиции, например, для перорального введения, или косметические композиции. Масло можно принимать как таковое или можно инкапсулировать, например, в оболочку и, таким образом, оно может быть в виде капсул. Оболочка или капсулы могут содержать желатин и/или глицерин. Композиция может включать другие ингредиенты, например, флаворанты (например, флаворанты с запахом и вкусом лимона и лайма) или фармацевтически приемлемый или приемлемый для ветеринарии носитель или наполнитель.
Предпочтительные признаки и характеристики одного аспекта изобретения в равной степени применимы к другому аспекту с соответствующими необходимыми изменениями.
Последующие примеры представлены только для иллюстрации и не предназначены для ограничения объема изобретения.
Сравнительные примеры 1 и 2 и примеры 3 и 4.
Получение арахидоновой кислоты (АКА).
ампулу емкостью 1 мл с суспензией штамма Могбеге11а а1рша СВ8 168.95 (депонирован в Ό8Μ Ы.У., 2600 МА Эе1Г1. Нидерланды (депонированный биологический материал был предоставлен заявителю) в Сеп!гаа1 Вигеаи уоог 8сЫтте1си11иге5 (СВ8), Р.О. Вох 85167, 3508 АО ШгесНк Нидерланды, 20 февраля 1995 г. под инвентарным номером Ώ8 30340) хранили при -80°С и вскрывали в асептических условиях. Содержимое использовали для посева в емкости на 500 мл с 100 мл среды, содержащей (г/л): глюкозу, 29%
- 7 013051 дрожжевой экстракт (паста СШех® сухой остаток, 80%, белок (Νχ6,25), 46%, №1С1. 16%, рН (2% раствор) 5,6, зола, 22%, общее количество на чашке, Еп1егоЬас1епасеае <10/г, Е. сой <1/г, дрожжи и грибы <100/г, производства Ό8Μ Ν.ν., 8ауоту 1пдте61еп15 РО Вох 1,2600 МА Эе1й), 12,5;
противовспенивающее вещество (Базилдон 8 6/013К кремний содержащее/не содержащее кремний противовспенивающее вещество, использованное согласно рекомендациям изготовителя, Вакйбоп Сйеш1са1 Сотрапу, КттЬет Воаб, АЬшдбоп, ОхГогб, Англия ОХ14 ΙΒΖ), 0,2.
рН среды доводили до 7,0 перед автоклавированием.
Культуру выращивали при 25°С в течение 48 ч при встряхивании на 250 об/мин, и ее использовали для посева в четыре емкости на 2000 мл с 500 мл среды, содержащей (г/л):
глюкозу, 20;
дрожжевой экстракт (паста СШех®) 25;
противовспенивающее вещество (Вакйбоп 86/013К), 0,2.
Значение рН перед стерилизацией равнялось 7,0.
Данные культуры выращивали при 25°С в течение 24 ч и использовали для посева в инокуляционный ферментер емкостью 5 м3, содержащий 2400 л среды того же состава, что использовали для матрасов емкостью 2000 мл (рН перед стерилизацией равнялось 6,0).
Температуру ферментации устанавливали на 25°С, перемешивание - на 150 об/мин, давление в резервуаре составляло 0,5 бар и скорость аэрации - 0,5 об/об/мин.
Культуру из инокуляционного ферментера переносили в основной ферментер примерно через 36 ч (скорость поглощения кислорода равнялась >3 ммоль/кг/ч).
В основном ферментере находилось (г/л):
глюкоза, 35;
дрожжевой экстракт (порошок Ехртека 2200®, пивные дрожжи с низким содержание натрия, пептон (экстракт), сухое вещество > 96%, общий N>10%, аминный N 6-7%, №С1<1%, рН (2% раствор 5,3-6,3), зола <12,5%, гомогенный порошок производства Ό8Μ Ν.ν., 8ауоту 1пдте61ей5), 5,0;
NаН2РО4·2Н2О, 1,0;
КН2РО4, 2,0;
Мд8О4-7Н2О, 0,5;
Базилдон 86/013К, 0,3;
лимонная кислота· 1Н2О, 0,6;
2пС12, 0,010;
Ее2(8О4) 20% Н2О, 0,025;
Мп8О44Н2О, 0,010;
(рН до стерилизации 5,0).
Глюкозу стерилизовали отдельно и добавляли в основной ферментер после стерилизации.
Ферментацию проводили в течение 175 ч. Значение рН среды поддерживалось примерно на 6 (±0,1) при аэрации (поток воздуха) 0,5 об/об/мин, давление воздуха составляло 0,8 бар и перемешивание 70 об/мин. Концентрация кислорода поддерживалась на Э.О.>30% при последовательном повышении скорости перемешивания до 100 об/мин и потока воздуха до 0,9 об/об/мин.
В ферментер подавали стерильный раствор глюкозы примерно 50% (мас./мас.) для поддержания концентрации глюкозы выше 10 г/л, и примерно через 30-78 ч в ферментер подавали 625 кг 25% раствора дрожжевого экстракта со скоростью подачи, контролируемой таким образом, что концентрация аммиака составляла <30 мг/л.
Опыт повторяли четыре раза (примеры 1-4), и контролировали в течение времени концентрацию глюкозы в культуральной среде. График зависимости концентрации глюкозы в г/кг от продолжительности ферментации в часах представлен на фиг. 1. Он показывает, что последнее значение в примере 4 составляло 2,2 г/кг на время 172 ч. Это время соответствовало 3 ч до окончания ферментации (ЕоЕ). Концентрация глюкозы была на 0 примерно за 1 ч перед ЕоЕ.
В сравнительных примерах 1 и 2 концентрация источника углерода (глюкозы) была существенно выше 5 г/кг к концу ферментации. Фактически за 10 ч до ЕоЕ концентрация глюкозы составляла примерно 20 г/кг. Таким образом, в примерах 1 и 2 концентрация глюкозы была таковой, что она не являлась фактором, ограничивающим рост микроорганизмов или продукцию АВА.
В примерах 3 и 4 концентрация глюкозы на последней стадии ферментации, непосредственно перед ЕоЕ, контролировалась таким образом, что примерно за 10 ч до ЕоЕ уровень глюкозы составлял примерно 5 г/кг. Во время данной последней стадии, в течение 10 ч, глюкозу вносили со скоростью внесения 0,5 г/кг/ч. Концентрация глюкозы была практически нулевой при ЕоЕ. В данный период скорость потребления глюкозы была примерно в 2 раза выше по сравнению со скоростью внесения, а именно составляла 1 г/кг/ч.
Концентрация глюкозы (г/кг) в культуральной среде в течение времени во время ферментации представлена в табл. 1-4 (которые соответствуют примерам 1-4).
- 8 013051
Таблица 1
- 9 013051
В конце ферментации микроорганизмы и окружающую водную жидкость (ферментационный бульон) удаляли из ферментера. Бульон подвергали разделению на твердую и жидкую фазы для удаления воды. Затем оставшиеся клетки экструдировали и подвергали экстракции гексаном. Таким образом, получали содержащее АВА масло (экстрагируемые гексаном липиды) из микробных клеток, прошедших каждую из четырех различных режимов ферментации.
Затем определяли процентное содержание АВА в масле (по массе по отношению к массе) с использование хорошо известного аналитического метода РАМЕ (подробно описан в АОС8 Се1Ь89). В примере 3 концентрация АВА в масле из микробных клеток составляла 508 г/кг (50,8%). Аналогичное значение в примере 4 составляло 545 г/кг (54,5% АВА). При сравнении данные показатели в масле, экстрагированном из микробных клеток в сравнительных примерах 1 и 2, были значительно ниже соответственно 36,8% и 36,7%.
Справка о депонировании микроорганизма
Й8М Ν.Υ.
РО51Ьи5 1
2600 МА ЙЕЬРТ
Нидерланды
Утрехт, 12 мая 2003 г.
СеШгааЬшсаи уоог 8сЫтше1си1иге5 (СВ8), Утрехт, Нидерланды настоящим подтверждает, что следующий микроорганизм:
СВ8 168.95 МогйегеИа а1рша Ό830340 депозирован в СеийааЬигеаи уоог 8сЫтше1си1иге5 20 февраля 1995 г. и будет храниться конфиденциально как безопасный депозит в коллекции СВ8 в условиях, необходимых для поддержания его жизнеспособности и чистоты в течение 1 года после последней оплаты ежегодного взноса.
В течение времени, пока он будет храниться в виде безопасного депозита, указанный микроорганизм будет выдаваться только депозитору или лицам, уполномоченным депозитором.
Как только депозитор проинформирует СВ8 о том, что депонированный штамм больше не нужно сохранять, СВ8 - по требованию депозитора - уничтожит штамм. Данное требование СВ8 должна получить до конца текущего года.

Claims (22)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Масло из микробных клеток, которое содержит по меньшей мере 50% арахидоновой кислоты (АВА) и обладает по крайней мере одним из следующих свойств:
    а) имеет содержание триглицеридов по меньшей мере 90%;
    б) имеет значение перекисного числа (РОУ) не более 3,0;
    в) имеет значение анизидинового числа (АпУ) не более 1,0;
    г) имеет содержание фосфолипидов ниже 5%.
  2. 2. Масло по п.1, которое получено при экстракции гексаном.
  3. 3. Масло по п.1 или 2, в котором содержание триглицеридов составляет по меньшей мере 90%.
  4. 4. Масло по любому из пп.1-3, которое имеет значение перекисного числа (РОУ) не более 3,0.
  5. 5. Масло по п.4, которое имеет значение перекисного числа (РОУ) не более 1,0.
  6. 6. Масло по любому из пп.1-5, которое имеет значение анизидинового числа (АпУ) не более 1,0.
  7. 7. Масло по любому из пп.1-6, где содержание свободных жирных кислот составляет <0,4%.
  8. 8. Композиция, содержащая масло из микробных клеток по любому из пп.1-7.
  9. 9. Композиция по п.8, которая представляет собой продукт питания (такой, как детская молочная смесь), продукт питания для людей, корм или кормовую добавку, фармацевтическую, ветеринарную или косметическую композицию.
  10. 10. Композиция по п.8, которая представляет собой детскую молочную смесь.
  11. 11. Способ получения масла из микробных клеток по любому из пп.1-7, включающий культивирование микроорганизма в культуральной среде в ферментере, где ферментация разделена по меньшей мере на две стадии, причем на второй или последней стадии источник углерода добавляют со скоростью <0,30 М углерода/кг среды в час; и скорость добавления источника углерода находится ниже скорости потребления источника углерода микроорганизмами.
  12. 12. Способ по п.11, где на указанной второй или последней стадии источник углерода добавляют со скоростью по меньшей мере 0,01 М углерода/кг среды в час.
  13. 13. Способ по п.11 или 12, где концентрация источника углерода на указанной второй или последней стадии составляет в среднем <10 г/кг среды или содержание углерода на этих стадиях составляет <0,17 М углерода/кг среды.
  14. 14. Способ по п.11, где источником углерода является глюкоза, причем скорость добавления глюкозы в течение второй или последней стадии составляет менее 1,0 г глюкозы/кг среды в час.
  15. 15. Способ по любому из пп.11-14, где ферментацию проводят при температуре 22-30°С.
    - 10 013051
  16. 16. Способ по любому из пп.11-15, где микроорганизм представляет собой Могйеге11а.
  17. 17. Способ по п.16, где микроорганизм представляет собой Могйеге11а а1рша.
  18. 18. Способ по любому из пп.11-17, который представляет собой процесс глубинной ферментации.
  19. 19. Способ по любому из пп.11-18, где во время более ранней стадии ферментации скорость добавления источника углерода превышает скорость его потребления микроорганизмами.
  20. 20. Способ по любому из пп.11-19, который включает извлечение масла из ферментированных микроорганизмов экстракцией растворителем.
  21. 21. Способ по п.20, где растворителем является гексан.
  22. 22. Способ по любому из пп.11-21, где масло подвергают рафинации и очистке.
EA200500048A 2002-06-19 2003-06-20 Масло из микробных клеток, композиция, содержащая масло, и способ получения масла EA013051B1 (ru)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP02254262 2002-06-19
EP02258713 2002-12-18
EP03251169 2003-02-26
PCT/EP2003/006552 WO2004009827A2 (en) 2002-06-19 2003-06-20 Preparation of microbial oil containing polyunsaturated fatty acids

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200500048A1 EA200500048A1 (ru) 2005-06-30
EA013051B1 true EA013051B1 (ru) 2010-02-26

Family

ID=30773251

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200901291A EA200901291A1 (ru) 2002-06-19 2003-06-20 Получение масла из микробных клеток
EA200500048A EA013051B1 (ru) 2002-06-19 2003-06-20 Масло из микробных клеток, композиция, содержащая масло, и способ получения масла

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200901291A EA200901291A1 (ru) 2002-06-19 2003-06-20 Получение масла из микробных клеток

Country Status (14)

Country Link
US (3) US7470527B2 (ru)
EP (1) EP2333093B1 (ru)
JP (5) JP2005530519A (ru)
KR (4) KR20140023448A (ru)
CN (3) CN101787379A (ru)
AU (1) AU2003281542A1 (ru)
BR (2) BR0311916A (ru)
CA (1) CA2489982C (ru)
DK (1) DK1513941T3 (ru)
EA (2) EA200901291A1 (ru)
ES (2) ES2567569T3 (ru)
IL (1) IL165529A (ru)
MX (2) MXPA04012915A (ru)
WO (1) WO2004009827A2 (ru)

Families Citing this family (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101787379A (zh) 2002-06-19 2010-07-28 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 包含多不饱和脂肪酸的微生物油的制备
EP1656449B1 (en) 2003-08-21 2009-05-06 Monsanto Technology LLC Fatty acid desaturases from primula
PL1756292T3 (pl) 2004-03-31 2015-03-31 Cargill Inc Sposób fermentacji cukrów zawierających oligomeryczne sacharydy
BRPI0509944A (pt) 2004-04-16 2007-09-25 Monsanto Technology Llc expressão de dessaturases de ácido graxo em milho
US7550286B2 (en) * 2004-11-04 2009-06-23 E. I. Du Pont De Nemours And Company Docosahexaenoic acid producing strains of Yarrowia lipolytica
ATE469957T1 (de) * 2004-11-04 2010-06-15 Monsanto Technology Llc Verfahren zur herstellung von ölzusammensetzungen
CA2988226C (en) 2006-03-10 2022-04-26 Monsanto Technology Llc Soybean seed and oil compositions and methods of making same
WO2007121273A2 (en) * 2006-04-11 2007-10-25 Martek Biosciences Corporation Food products comprising long chain polyunsaturated fatty acids and methods for preparing the same
US8652814B2 (en) 2007-06-04 2014-02-18 National University Corporation Hokkaido University Method for production of DHA-containing phospholipid through microbial fermentation
NZ584460A (en) 2007-09-12 2012-10-26 Martek Biosciences Corp Biological oil produced by a microorganism of the kingdom Stramenopil by heterotropic fermentation
US9441257B2 (en) * 2008-08-29 2016-09-13 Pharvis R&D Korea Co., Ltd. Method for producing fermented edible plants or edible animal/plants, fermented edible plants or edible animal/plants produced by same, and foods containing same
US8207363B2 (en) 2009-03-19 2012-06-26 Martek Biosciences Corporation Thraustochytrids, fatty acid compositions, and methods of making and uses thereof
US9480271B2 (en) 2009-09-15 2016-11-01 Monsanto Technology Llc Soybean seed and oil compositions and methods of making same
EA031136B1 (ru) 2010-01-19 2018-11-30 ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. Микроорганизмы, продуцирующие эйкозапентаеновую кислоту, композиции жирных кислот и способы их получения и применения
CN103210080B (zh) * 2010-03-11 2017-10-27 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 酵母菌株及其在脂类产生中的用途
US20110263709A1 (en) * 2010-04-22 2011-10-27 E. I. Du Pont De Nemours And Company Method for obtaining polyunsaturated fatty acid-containing compositions from microbial biomass
KR20140057394A (ko) * 2010-06-30 2014-05-12 닛폰 스이산 가부시키가이샤 유용 물질의 제조 방법
US8999663B2 (en) * 2011-02-11 2015-04-07 E L Du Pont De Nemours And Company Method for obtaining a lipid-containing composition from microbial biomass
BR112013033455B1 (pt) 2011-06-27 2019-10-15 Dow Global Technologies Llc Fluido dielétrico e dispositivo
BR122015020126B1 (pt) 2011-07-21 2022-03-03 Dsm Ip Assets B.V Composição contendo óleo microbiano diluído
CN103131529B (zh) * 2011-11-23 2016-02-24 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 一种提取微生物油脂的方法
WO2013101414A1 (en) 2011-12-30 2013-07-04 Dow Global Technologies Llc Dielectric fluid with farnesene-based oligomer
EP2929039B9 (en) * 2012-12-10 2019-12-11 Cargill, Incorporated Batch feed process for fermenting sugars
JP2016526590A (ja) * 2013-06-25 2016-09-05 シエル・インターナシヨネイル・リサーチ・マーチヤツピイ・ベー・ウイＳｈｅｌｌ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｍａａｔｓｃｈａｐｐｉｊ Ｂｅｓｌｏｔｅｎ Ｖｅｎｎｏｏｔｓｈａｐ 微生物バイオマスから脂肪酸エステルの直接製造法
EP2826384A1 (de) 2013-07-16 2015-01-21 Evonik Industries AG Verfahren zur Trocknung von Biomasse
WO2015083806A1 (ja) * 2013-12-04 2015-06-11 日本水産株式会社 微生物油、微生物油の製造方法、濃縮微生物油及び濃縮微生物油の製造方法
DK3200606T3 (da) * 2014-10-02 2021-06-21 Evonik Operations Gmbh Fremgangsmåde til fremstilling af et fodermiddel, der indeholder pufa'er, ved ekstrusion af en biomasse, der indeholder pufa'er, af typen labyrinthulomycetes
US11464244B2 (en) 2014-10-02 2022-10-11 Evonik Operations Gmbh Feedstuff of high abrasion resistance and good stability in water, containing PUFAs
US20170295824A1 (en) 2014-10-02 2017-10-19 Evonik Degussa Gmbh Process for producing a pufa-containing biomass which has high cell stability
US11324234B2 (en) 2014-10-02 2022-05-10 Evonik Operations Gmbh Method for raising animals
SG10202001800WA (en) * 2015-08-25 2020-04-29 Dsm Ip Assets Bv Refined oil compositions and methods for making
CN109563527A (zh) 2016-07-13 2019-04-02 赢创德固赛有限公司 将脂质与裂解的含脂质生物质分开的方法
RU2744913C2 (ru) 2016-12-27 2021-03-17 Эвоник Оперейшенс ГмбХ Способ выделения липидов из липидсодержащей биомассы
EP3665149A1 (en) * 2017-08-07 2020-06-17 DSM IP Assets B.V. Proces for production of concentrated polyunsaturated fatty acid oils
EP3470502A1 (en) 2017-10-13 2019-04-17 Evonik Degussa GmbH Method of separating lipids from a lysed lipids containing biomass
EP3527664A1 (en) 2018-02-15 2019-08-21 Evonik Degussa GmbH Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
US20210024966A1 (en) * 2018-03-30 2021-01-28 Dsm Ip Assets B.V. Method of obtaining a microbial oil and a method of reducing emulsion by maintaining a low concentration of carbohydrate
US11414621B2 (en) 2018-05-15 2022-08-16 Evonik Operations Gmbh Method of isolating lipids from a lipids containing biomass with aid of hydrophobic silica
BR112020023222A2 (pt) 2018-05-15 2021-03-23 Evonik Operations Gmbh método de isolamento de lipídios a partir de uma biomassa contendo lipídios lisados por inversão por emulsão
CN108902364A (zh) * 2018-08-04 2018-11-30 望江县振兴植物油厂（普通合伙） 一种儿童专用调和油及其制备方法
CN113301812A (zh) * 2018-10-17 2021-08-24 完美日股份有限公司 用于食物产品的重组组分和组合物
CN110747239B (zh) * 2019-11-26 2021-06-22 瞿瀚鹏 富含Sn-2位ARA的微生物油脂及其制备方法和应用
CN111575110A (zh) * 2020-05-27 2020-08-25 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 一种含有多不饱和脂肪酸的微生物油脂的纯化方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992013086A1 (en) * 1991-01-24 1992-08-06 Martek Corporation Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
WO1996021037A1 (en) * 1995-01-03 1996-07-11 Martek Biosciences Corporation Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
WO1997037032A2 (en) * 1996-03-28 1997-10-09 Gist-Brocades B.V. Preparation of microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass
EP1035211A1 (en) * 1998-08-28 2000-09-13 Suntory Limited PROCESS FOR PRODUCING ARACHIDONIC ACID-CONTAINING LIPID AND DIHOMO-gamma-LINOLENIC ACID-CONTAINING LIPID

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0716424B2 (ja) 1985-10-01 1995-03-01 ライオン株式会社 アラキドン酸含有脂質の製造方法
JPS6438007A (en) * 1987-04-28 1989-02-08 Lion Corp Skin external preparation
JP2723243B2 (ja) * 1988-02-25 1998-03-09 サントリー株式会社 高度不飽和脂肪酸添加動物飼料
JPH01228486A (ja) * 1988-03-09 1989-09-12 Suntory Ltd 奇数鎖高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法
JPH0213388A (ja) * 1988-06-30 1990-01-17 Lion Corp 不飽和脂肪酸含有脂質の製造方法
JPH02142486A (ja) * 1988-11-25 1990-05-31 Lion Corp 不飽和脂肪酸含有脂質の製造方法
JP3354582B2 (ja) * 1991-09-30 2002-12-09 サントリー株式会社 オメガ９系高度不飽和脂肪酸およびこれを含有する脂質の製造方法
US5583019A (en) * 1995-01-24 1996-12-10 Omegatech Inc. Method for production of arachidonic acid
ES2446982T3 (es) * 1996-12-27 2014-03-11 Suntory Holdings Limited Medios para cultivar microorganismos y método para producir ácidos grasos insaturados o lípidos que los contienen
EP1178103A1 (en) 2000-08-02 2002-02-06 Dsm N.V. Purifying crude pufa oils
DE50113264D1 (de) * 2001-03-08 2007-12-27 Enthone System zur elektrodialytischen Regeneration eines stromlosen Badelektrolyten
CN1362522A (zh) 2001-12-26 2002-08-07 武汉烯王生物工程有限公司 用离子束生物工程诱变菌生产含花生四烯酸油脂的方法
CN101787379A (zh) * 2002-06-19 2010-07-28 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 包含多不饱和脂肪酸的微生物油的制备

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992013086A1 (en) * 1991-01-24 1992-08-06 Martek Corporation Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
WO1996021037A1 (en) * 1995-01-03 1996-07-11 Martek Biosciences Corporation Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
WO1997037032A2 (en) * 1996-03-28 1997-10-09 Gist-Brocades B.V. Preparation of microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass
EP1035211A1 (en) * 1998-08-28 2000-09-13 Suntory Limited PROCESS FOR PRODUCING ARACHIDONIC ACID-CONTAINING LIPID AND DIHOMO-gamma-LINOLENIC ACID-CONTAINING LIPID

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JANG HUNG-DER ET AL.: "Polyunsaturated fatty acid production with Mortierella alpina by solid substrate fermentation", BOTANICAL BULLETIN OF ACADEMIA SINICA (TAIPEI), vol. 41, no. 1, January 2000 (2000-01), pages 41-48, XP002270666, ISSN: 0006-8063, page 41, right-hand column, last paragraph, page 42, right-hand column, paragraph 2 *
LINDBERG A. ET AL.: "EFFECT OF TEMPERATURE AND GLUCOSE SUPPLY ON THE PRODUCTION OF POLYUNSATURATED FATTY ACIDS BY THE FUNGUS MORTIERELLA ALPINA CBC 343.66 IN FERMENTOR CULTURES", APPLIED MICROBIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY, SPRINGER VERLAG, BERLIN, DE, vol. 39, 1993, pages 450-455, XP002924350, ISSN: 0175-7598, the whole document *
YAMADA H. ET AL.: "PRODUCTION OF DIHOMO-GAMMA-LINOLENIC ACID, ARACHIDONIC ACID AND EICOSAPENTAENOIC ACID BY FILAMENTOUS FUNGI", INDUSTRIAL APPLICATIONS OF SINGLE CELL OILS, XX, XX, PAGE(S) 118-138, XP001000789, page 120, last paragraph, page 126, line 6 page 12 *

Also Published As

Publication number Publication date
US20050202148A1 (en) 2005-09-15
WO2004009827A2 (en) 2004-01-29
AU2003281542A8 (en) 2004-02-09
EA200500048A1 (ru) 2005-06-30
AU2003281542A1 (en) 2004-02-09
US10633678B2 (en) 2020-04-28
JP2009261397A (ja) 2009-11-12
JP2005530519A (ja) 2005-10-13
ES2567569T3 (es) 2016-04-25
KR20140023448A (ko) 2014-02-26
ES2812475T3 (es) 2021-03-17
BRPI0311916B1 (pt) 2020-01-28
BR0311916A (pt) 2005-03-29
EP2333093B1 (en) 2020-06-10
KR20110039504A (ko) 2011-04-18
JP2011024582A (ja) 2011-02-10
JP6226601B2 (ja) 2017-11-08
JP2014039540A (ja) 2014-03-06
US20090053342A1 (en) 2009-02-26
JP2016127837A (ja) 2016-07-14
IL165529A0 (en) 2006-01-15
DK1513941T3 (en) 2016-04-18
MX337781B (es) 2016-03-16
IL165529A (en) 2010-05-31
US7470527B2 (en) 2008-12-30
CN101787379A (zh) 2010-07-28
CA2489982A1 (en) 2004-01-29
EA200901291A1 (ru) 2010-02-26
CN112280807A (zh) 2021-01-29
CN100575497C (zh) 2009-12-30
KR101288258B1 (ko) 2013-07-26
CN1662654A (zh) 2005-08-31
KR20050021984A (ko) 2005-03-07
EP2333093A1 (en) 2011-06-15
CA2489982C (en) 2019-09-10
KR101208304B1 (ko) 2012-12-05
MXPA04012915A (es) 2005-03-31
KR20120134152A (ko) 2012-12-11
WO2004009827A3 (en) 2004-04-15
US20140017742A1 (en) 2014-01-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA013051B1 (ru) Масло из микробных клеток, композиция, содержащая масло, и способ получения масла
US11083808B2 (en) Pasteurisation process for microbial cells and microbial oil
TWI352122B (en) A crude oil, a refined oil, and a general food and
CN101006181A (zh) 含有任意含量的甘油二酯的微生物油脂的制造方法及该油脂
CN105925627A (zh) 微生物油及其制备方法
EP0522470B1 (en) Triglyceride-containing dry cell fragments and method of preparing them
KR20140146156A (ko) 다가불포화 지방산을 함유하는 미생물 오일의 제조방법
JP2002335951A (ja) 脂質含有酵母の製造方法
EA039406B1 (ru) Способ пастеризации микробных клеток и масла из микробных клеток

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): RU